HRP970083A2 - Polysaccharide precipitation process - Google Patents
Polysaccharide precipitation processInfo
- Publication number
- HRP970083A2 HRP970083A2 HR9608546.9A HRP970083A HRP970083A2 HR P970083 A2 HRP970083 A2 HR P970083A2 HR P970083 A HRP970083 A HR P970083A HR P970083 A2 HRP970083 A2 HR P970083A2
- Authority
- HR
- Croatia
- Prior art keywords
- polysaccharides
- polysaccharide
- process according
- salt
- pneumococcus
- Prior art date
Links
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims description 77
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 30
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 title claims description 9
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 claims description 70
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 11
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 claims description 8
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 7
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 7
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- -1 Polysaccharide salt Chemical class 0.000 claims description 4
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims description 4
- RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N cetyltrimethylammonium ion Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- 229920001586 anionic polysaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 150000004836 anionic polysaccharides Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 101000597577 Gluconacetobacter diazotrophicus (strain ATCC 49037 / DSM 5601 / CCUG 37298 / CIP 103539 / LMG 7603 / PAl5) Outer membrane protein Proteins 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N cetylpyridinium Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 NEUSVAOJNUQRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- FUKOTTQGWQVMQB-UHFFFAOYSA-N (2-bromoacetyl) 2-bromoacetate Chemical compound BrCC(=O)OC(=O)CBr FUKOTTQGWQVMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 238000005137 deposition process Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- BWLMCOKQHQOEEE-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-amino-4-(carboxymethylsulfanyl)butanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCSCC(O)=O BWLMCOKQHQOEEE-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101150044960 PSPN gene Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 229940049548 pneumovax Drugs 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012042 active reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000005864 bromoacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- QVYARBLCAHCSFJ-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-diamine Chemical compound CCCC(N)N QVYARBLCAHCSFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L calcium oxalate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C([O-])=O QXDMQSPYEZFLGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004830 cetylpyridinium Drugs 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 229940099500 cystamine Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 238000005649 metathesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012806 monitoring device Methods 0.000 description 1
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229940031999 pneumococcal conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical class CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Područje tehnike
Ovaj izum odnosi se na proces pripravljanja bakterijskih polisaharida za cjepivo. Točnije, odnosi se na proces taloženja (precipitacije) bakterijskih polisaharida u otopini.
Stanje tehnike
U ovoj struci (području tehnike) poznato je da su bakterijski polisaharidi sastojak različitih cjepiva (vakcina), uključujući PNEUMOVAX® (pneumokokno konjugirano cjepivo) i PedVax HIP® ( konjugirano cjepivo H. influenzae), oba u prodaji od strane Merck & Co., Inc.
Pročišćeni bakterijski kapsularni polisaharidi, uključujući one iz Haemophilis influenzae tipa b i Streptococcus pneumoniae, u načelu nisu dovoljno imunogeni da bi ih se moglo koristiti kao cjepivo. Kako bi se riješilo ovaj problem, kapsularni polisaharidi su konjugirani sa proteinskim nosačem, poput imunogenih membranskih proteina, podjedinica virusnih proteina, sintetskih polipeptida, bakterijskih toksoida i drugih odgovarajućih imunogenih proteina. Primjeri procesa (postupaka) za dobivanje odgovarajućih imunogenih konjugata dobro su poznati u ovoj struci (području tehnike) te obuhvaćaju one iznesene u U.S. Patentima 4,695,624 i 4,882,317.
U načelu, kako bi se dobilo imunogeni konjugat, prvo se bakterijski polisaharid izodvoji (izolira) i pročisti (purificira) od izvorne bakterije. Takvi polisaharidi također su dostupni na tržištu. Polisaharid zatim može biti podvrgnut slijedu daljnjeg pročišćavanja i/ili koracima u smjeru smanjenja njegove veličine. Zatim se podvrgava nizu kemijskih reakcija kojima se dodaju funkcionalne grupe kako bi se mogao vezati (spojiti) sa imunogeni m proteinskim nosačem. Nakon vezivanja (spajanja), konjugat se dalje pročišćava te se može dodati adjuvans poput aluminijevog hidroksida, kako bi se dobilo konačno cjepivo (vakcinu).
Jedan od problema s kojim se susrelo tijekom sinteze konjugata jest da su sami polisaharidi topljivi u vodi, no kasniji postupci (faze) derivatizacije najbolje se izvode u nekom organskom otapalu. U prošlosti su zbog toga bile potrebne dvije faze u procesu proizvodnje, obje prilično teške (složene): 1) konverzija polisaharida ( u obliku kalcijeve soli) u oblik tetrabutilamonijeve soli (tBuAM) korištenjem metateze kalcijevog oksalata ili izmjenom iona na stupcu (kolumni); 2) i naknadno odstranjivanje vode bilo vakuumskom destilacijom ili prskanjem sa dimetil formamidom (DMF) ili liofilizacijom.
Međutim, nije se sva kalcijeva sol prevela (konvertirala) u tBuAM oblik, što je imalo za posljedicu nastanak uljne emulzije. Neke od vrsta polisaharida nisu dovoljno topljive u DMF-u, tako da nije moguće ostvariti fazu destilacije, a primjena nekog drugog otapala, poput DMSO, nije praktična zbog toga što DMSO ima znatno višu točku vrelišta. Nadalje, liofilizacija nije bila ostvariva u razmjerima dostatnim za proizvodnju.
Bilo bi poželjno razviti proces (postupak) koji bi mogao prilagoditi prijelaz (tranziciju) iz vodenog u organsko otapalo bez da se gubi na prinosu, čistoći i lakoći proizvodnje.
Detaljan opis izuma
Ovaj izum odnosi se na postupak taloženja (precipitacije) bakterijskih kapsularnih polisaharida iz vodene (akvozne) otopine koji obuhvaća dodavanje precipitirajuće količine dugolančanog detergenta otopini. U jednoj izbornoj fazi, izum također obuhvaća odvajanje smjese istaloženog polisaharida od vodene otopine te ekstrahiranje vode iz smjese kako bi se dobilo suhi praškasti polisaharid. Zatim se prašak može nadalje obrađivati kako bi se dobilo cjepiva, poput pneumokonjugatnih cjepiva.
Ovaj izum je prikladan za primjenu na polisaharide iz bilo kojeg bakterijskog izvora. Poželjni polisaharidi su iz Pneumococcus i Haemopilis influenzae, posebice negativno nabijeni polisaharidi. Posebno su poželjni anionski Pneumococcus polisaharidi. Takvi polisaharidi su poznati u ovom području tehnike (struke) i uključuju one koji su označeni kao 3, 4, 5, 6b, 9V, 18C, 19f i 23f. Poznata su 84 serotipa Pneumococcus-a, a u ovom izumu mogu se koristiti anionski polisaharidi iz bilo kojeg od ovih serotipova. Ovi polisaharidi su topljivi u vodi, ali nisu topljivi u organskim otopinama. U načelu, polisaharidi se tijekom postupka proizvodnje cjepiva rastapaju u vodi bez pirogena (PFW od eng. izraza "pvrogen free water") te, iako se koncentracije mogu tijekom obrade razlikovati, obično su prisutni u količinama od oko 0,2% do 1% težinski u PFW-u.
Dugolančani detergent može biti doslovno bilo koji dugolančani detergent. Posebno su poželjni oni koji uključuju cetilpiridinijev klorid (CPC) i ctiltrimetilamonijev bromid (CETAB).U načelu, bilo koja količina dugolančanog detergenta može biti dodana kako bi se istaložilo (precipitiralo) polisaharid iz vodene otopine, no u većini primjena, za taloženje (precipitiranje) praktički svih polisaharida dovoljna je dodavanje 1-10% otopine detergenta u molarni omjer od oko 1:1. Detergenti reagiraju sa negativno nabijenim polisaharidom stvarajući sol polisaharida koja nije topljiva u vodi i koja se istaloži (precipitira) iz otopine.
Ovaj netopljivi solni oblik polisaharida, posebice cetilpiridinijeva sol i cetiltrimetilamonijeva sol polisaharida, čine još jedan aspekt ovog izuma. Točnije, ovaj izum također obuhvaća oblik cetilpiridinijeve soli Pneumococcus polisaharida 3, 4, 5, 6b, 9V, 19f i 23f, kao i oblik cetiltrimetilamonijeve soli od 3, 4, 5, 6b, 9V, 19f i 23f.
Talog je pastozne konzistencije. Može biti odstranjen iz vodene otopine odgovarajućim postupcima, poput centrifugiranja ili sličnog. Nadalje, suši se odgovarajućim postupcima, poput miješanja sa acetonom ili eterom kako bi se ekstrahirala svaka količina vode koja je možda prisutna (trituriranje). Stoga, poželjni postupci ovog izuma obuhvaćaju taloženje (precipitaciju) vodene otopine bakterijskih polisaharida dodavanjem učinkovite količine dugolančanog detergenta, te zatim sušenje taloga (precipitata) pomoću trituracije acetonom kako bi se dobilo gustu otopinu.
Gusta otopina također se može filtrirati i osušiti vakuumom kako bi se dobilo cetilpiridinijevu sol ili cetiltrimetilamonijeve soli u obliku suhog praha. Suhi prašak je topljiv u otapalima koja se uobičajeno koriste u derivatizacijskoj kemiji, poput dimetilsulfoksida (DMSO) i diemtilformamida (DMF).
Daljnja prednost ovog izuma jest da ovaj postupak (metoda) osigurava daljnju razinu pročišćavanja polisaharida tijekom faze vodene precipitacije, posebice s obzirom na onečišćenja koja imaju neto pozitivan naboj, poput nekih ne-kapsularnih membranskih proteina i C-Polisaharida.
Još jedna prednost jest da, osiguravajući suhi, praškasti oblik polisaharidne soli, može biti izmjerena točna količina polisaharida i iskorištena u početnim reakcijama derivatizacije, kod kojih je točnost iznimno poželjna.
Proces taloženja (precipitacije) i polisaharidne soli ovog izuma u biti su intermedijerni procesi i produkti u dugim postupcima (metodama) za dobivanje cjepiva koji se sastoje od sljedećih faza: 1) priprava početnog polisaharida; 2) proces taloženja iz ovog izuma; 3) derivatizacija polisaharida; 4) konjugacija derivatiziranog polisaharida sa proteinom; i 5) alauna formulacija. Svaka od faza procesa 1, 3, 4 i 5 koje ne čine dio ovog izuma niže su sažete.
Priprava početnih polisaharida. Početna točka u čitavom procesu proizvodnje cjepiva je izdvajanje (izolacija) bakterijskih kapsularnih polisaharida iz fermantacijskog bujona. Alternativno, ovi polisaharidi dostupni su i na tržištu te se mogu koristiti kao početni materijal. Pojedinačni nativni polisaharidi (u obliku praha) otapaju se u vodi i inkubiraju natrijevim kloridom kako bi se disocirala ostatna onečišćenja koja se zatim odstranjuju membranskom diafiltracijom. Svaka PsPn otopina zatim se diafiltrira (dijalizira) nasuprot vodi kako bi se postigli točno definirani uvjeti za smanjenje (redukciju) veličine prolaskom kroz usta cijevi (orificij) s visokim tlakom koji se izvodi pomoću mehaničkog homogenizatora. Ova faza (postupak) i olakšava tijek tehničkog postupka i osigurava produkt ujednačene veličine. Topljivost u organskim otapalima poput DMSO također se povećava smanjivanjem (reduciranjem) polisaharidne molarne težine polisaharida. Monodispergirajući polisaharid, smanjene veličine poželjan je početni materijal za proces taloženja ovog izuma.
Derivatizacija. Nakon istaloživanja (precipitacije) pomoću prije opisanih postupaka (metoda) ovog izuma, praškasti polisaharidi ovog izuma modificirani su sa reaktivnim postraničnim lancem putem niza kemijskih reakcija sa bifunkcionalnim reagensima, a zatim konjugirani sa proteinskim nosačem OMPC. Posebne pojedinosti o ovim procesima nalaze se u U.S. Patentima 4,695,624 i 4,882,317, ali se mogu sažeti kako slijedi. Pojedinačne faze su identificirane aktivnim reagensima: karbonildiimidazolom (CDI), butandiaminom (BuA2) te bromacetatnim anhidridom (BrOAcAn).
Reakcija sa CDI stvara reaktivnu osnovu (reaktivno sidro) na kojoj se grade postranični lanci. Budući da su i količina i homogenost punjenja postraničnog lanca u potpunosti određeni ovom reakcijom, od ključne važnosti je reakcijska kemija i miješanje. Miješanje se treba odvijati dosta brzo, a posuda za miješanje treba biti tako konstruirana da to i osigurava. Poželjno je da punjenje postraničnog lanca bude između 8 i 16% kako bi se sačuvala antigenost i imunogenost te se dobilo stabilan produkt.
U sljedećoj reakciji, BuA2, dodaje se bifunkcionalan reagens kako bi se proširilo krak razmaknice reakcijom sa CDI osnovom stvorenom u prvoj fazi (etapi) . Ovi uvjeti reakcije istodobno istiskuju i kristaliziraju CPC ili CETAB detergent iz otopine za daljnje odstranjivanje konačnom filtracijom. Diafiltracija filtratne i membranske koncentracije daje bistrenje (čišćenje) viška topljivog reagensa te vrši izmjenu PnPs u pufer koji je prikladan za daljnju reakciju bromacetilacije.
U trećoj fazi (etapi) reakcije poprečnom lancu dodaje se reaktivni bromid putem reakcije sa BrOAcAn kako bi se polisaharid mogao nadalje konjugirati u tiolirani proteinski nosač (OMPC). Višak reagnesa i popratni produkti (nus-produkti) odstranjuju se membranskom diafiltracijom, a PnPs bromacetilirani derivat se sterilno filtrira kako bi se mogao pohraniti kao intermedijer (međuproizvod).
Konjugacija. U reakciji konjugacije, stvara se kovalentna veza između derivatiziranog polisaharida i proteinskog nosača (OMPC). OMPC se aktivira dodavanjem reaktivnih tiolnih grupa, a između polisaharidnih krakova razmaknice i proteina stvara se tioeterska veza. Višestruke kovalentne veze između svakog protein-polisaharidnog para daju dodatnu stabilnost konjugatu. Budući da reakcija proteina i polisaharida dovodi do stvaranja jedinstvene amino kiseline, S-karboksimetil homocisteina (SCMHC), broj kovalentnih veza može biti kvantificiran. Koristeći optimalne parametre procesa, prinos konjugacije s obzirom na polisaharid karakteristično iznosi 30%, a može imati raspon od oko 20-60%, ovisno o serotipu. Dobiveni Ps/Pr odnos nalazit će se u željenom rasponu od 0,1-0,3.
Nakon reakcije konjugacije, sve preostale aktivne tiolne grupe na OMPC pokrivene su sa N-cetil cistaminom. Popratni produkti (nus-produkti), svaki derivatizirani polisaharid koji nije ušao u reakciju te višak reagensa odstranjuju se diafiltracijom nasuprot natrijevog fosfatnog pufera. Produkt se zatim diafiltrira nasuprot 20 volumena TED pufera (TRIS, EDTA, deoksikolat) kako bi se odstranilo lipopolisaharide koji mogu biti oslobođeni nakon konjugacije. Konačna faza (etapa) je izmjena pufera u otopinu soli i vode, a zatim vodu, u pripravi za alaunu apsorpciju.
Formulacija. Nakon pročišćavanja (purifikacije), obujam vodenog konjugata se razrijeđuje u sterilnoj vodi do 100 ug/ml te se kombinira sa jednakim volumenom alaunog (stipsnog) diluensa (900 mcg Al/ml, 1,8% otopine soli i vode te 100 mcg timerozal/ml) kako bi se dobilo alaun-apsorbirani monovalentni koncentrirani obujam cjepiva kod 50 ug/ml polisaharidne koncentracije.
Sljedeći primjeri, koji ne predstavljaju ograničenje, iznose se radi bolje ilustracije izuma.
Primjeri
Primjer 1
Priprava PNEUMOVAX® - 23 prašaka
Polisaharidni prašci mogu se dobiti na tržištu (komercijalno) iz ATCC-a (Kataloga posebnih produkata, odn. engleski "Special Products Catalogue"), Rockville, MD, ili od Merck and Co., Inc., ili mogu biti ekstrahirani iz odgovarajuće bakterije (također dostupne iz ATCC). Nativni anionski polisaharidi (PnPs) otapaju se u vodi bez pirogena (PFW) do konačne koncentracije od oko 7-10 g/l. Natrijev klorid se dodaje kako bi se postiglo konačnu koncentraciju od 0,5 M.
Polisaharidna otopina (Ps - od eng. "polvsaccharide solution") diafiltrira se pomoću 200,000 MWCO Millipore ultrafiltracijske membrane nasuprot pufera koji sadrži smjesu 0,1 M fosfatno puferirane otopine soli i vode/0,5 M NaCI, a zatim se diafiltrira nasuprot PFW. Ps otopina se zatim razrijeđuje sa PFW do koncentracije od 2,5 g/l. Otopina se podvrgava visokotlačnoj homogenizaciji pomoću Gaulin homogenizatora sa rasponom tlakova od 3,000 do 14,000 psi. Ova faza (etapa) učinkovito smanjuje veličinu Ps-a. Rezultat ove faze (etape) je vodena otopina PsPn svedena na odgovarajuću veličinu, stoje početni materijal za proces taloženja.
Primjer 2
Taloženje
650 ml vodene polisaharidne otopine iz Primjera 1 dodaje se u posudu za miješanje podešenu sa turbinom sa spuštenom oštricom. Posuda je također opremljena "on-line" uređajem za praćenje kako bi se mjerio prinos taloženja mjerenjem nestanka UV-apsorpcije molekule cetilpihdinija. Temperatura dobivene količine podešena je na 25°C, a sadržaj posude je miješan na 400 RPM.
Otopina 2% cetilpiridinijevog klorida (CPC) kontinuirano se unosi u posudu sve dok taloženje nije završeno u skladu sa mjerenjima "on-line" uređaja za praćenje. Brzina dodavanja (adicije) podijeljena je u nekoliko faza (etapa), tako daje prvih 75% teoretske količine CPC-a dodano tijekom prvih 30 minuta, a preostala količina tijekom razdoblja od šezdeset minuta.
Istaloženi polisaharid odstranjuje se centrifugiranjem, a kuglica se resuspendirana u acetonu na 2,5 g/l. Suspenzija se usitnjava u sitan prah i promiješa kako bi se krutine dehidrirale sa rotor stator miješalicom (OMNI) tijekom nekoliko minuta. Gusta otopina filtrira se metalom ojačanoj ("sintered") staklenoj cjevčici te se ispire sa nekoliko volumena filtrata svježeg acetona. Vlažni filtrat se preko noći suši vakuumom na 45°C i 50 mm Hg kako bi se dobilo suhi prah. Prinos u obliku polisaharidnog praška iznosi 85-90%.
Primjer 3
Faza (etapa) taloženja iz Primjera 2 ponavlja se na opisani način, s razlikom da se umjesto cetilpiridinijevog klorida koristi cetiltrimetilamonijev bromid (CETAB).
Claims (12)
1. Proces za taloženje bakterijskih polisaharida, naznačen time da se otopini koja sadrži dotične polisaharide dodaje dugolančani detergent.
2. Proces prema zahtjevu 1 naznačen time da obuhvaća fazu (etapu) sušenja taloga tako dobivenog u acetonu kako bi se dobilo suhi polisaharidni talog.
3. Proces prema zahtjevu l, naznačen time da su polisaharidi Pneumococcus ili Haemophilus polisaharidi.
4. Proces prema zahtjevu 2, naznačen time da je dugolančani detergent izabran iz grupe koja obuhvaća cetilpiridinijev klorid i cetiltrimetilamonijev bromid.
5. Proces prema zahtjevu 4, naznačen time da su polisaharidi Pneumococcus polisaharidi.
6. Proces prema zahtjevu 5, naznačen time da su polisaharidi anionski polisaharidi.
7. Proces prema zahtjevu 6, naznačen time da su polisaharidi izabrani iz grupe koja obuhvaća 3, 4, 5, 6b, 9V, 18C, 19f i 23f.
8. U procesu dobivanja cjepiva obuhvaćene su faze da je za faze (etape) izdvajanja (izoliranja) polisaharida, derivatizacije polisaharida, konjugacije polisaharida sa proteinom te alaune formulacije, poboljšanje naznačeno time da se:
izdvojeni (izolirani) polisaharid istaloži se (precipitira) pomoću dugolančanog detergenta, i
istaloženi (precipitirani) polisaharid koristi kao početni materijal za fazu (etapu) derivatizacije.
9. Pneumococcus polisaharida naznačen time da stvara cetilpirinijevu sol.
10. Polisaharidna sol prema zahtjevu 9, izabrana iz grupe naznačene time da sadrži 3, 4, 5, 6b, 9V, 18C, 19f i 23f.
11. Pneumococcus polisaharida naznačen time da stvara cetiltrimetilamonijevu sol.
12. Polisaharidna sol prema zahtjevu 11, izabrana iz grupe naznačene time da sadrži 3, 4, 5, 6b, 9V, 18C, 19f i 23f.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US1163196P | 1996-02-14 | 1996-02-14 | |
| GB9608546A GB9608546D0 (en) | 1996-04-25 | 1996-04-25 | Polysaccharide precipitation process |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HRP970083A2 true HRP970083A2 (en) | 1998-04-30 |
Family
ID=26309205
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HR9608546.9A HRP970083A2 (en) | 1996-02-14 | 1997-02-13 | Polysaccharide precipitation process |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0897427B1 (hr) |
| JP (1) | JP3990455B2 (hr) |
| AR (1) | AR005869A1 (hr) |
| AT (1) | ATE280834T1 (hr) |
| AU (1) | AU724862B2 (hr) |
| CA (1) | CA2245588C (hr) |
| DE (1) | DE69731380T2 (hr) |
| DK (1) | DK0897427T3 (hr) |
| ES (1) | ES2229336T3 (hr) |
| HR (1) | HRP970083A2 (hr) |
| PT (1) | PT897427E (hr) |
| TW (1) | TW411344B (hr) |
| WO (1) | WO1997030171A1 (hr) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0115176D0 (en) * | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| US20070184072A1 (en) * | 2005-04-08 | 2007-08-09 | Wyeth | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2388563A1 (fr) * | 1977-04-29 | 1978-11-24 | Fabre Sa Pierre | Vaccins acellulaires perfectionnes contenant des polysaccharides capsulaires |
| BE889979A (fr) * | 1981-08-14 | 1982-02-15 | Smith Kline Rit | Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation |
| US4686102A (en) * | 1984-04-12 | 1987-08-11 | American Cyanamid Company | Multivalent pneumococcal vaccine and preparation thereof |
| US4695624A (en) * | 1984-05-10 | 1987-09-22 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency |
| US4877613A (en) * | 1987-08-05 | 1989-10-31 | Biotech Connections, Inc. | Process for preparing veterinary acellular vaccines against gram-negative nonenteric pathogenic bacilli |
| US5192540A (en) * | 1988-04-19 | 1993-03-09 | American Cyanamid Company | Haemophilus influenzae type b oxidized polysaccharide-outer membrane protein conjugate vaccine |
| SK18594A3 (en) * | 1991-08-16 | 1994-08-10 | Merck & Co Inc | Method of production of capsular polysacharide without lipid and endotoxine |
| US5371197A (en) * | 1991-09-24 | 1994-12-06 | Merck & Co., Inc. | Protein-dimeric polysaccharide conjugate vaccine |
| US5445817A (en) * | 1992-08-21 | 1995-08-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Pertussis toxin used as a carrier protein with non-charged saccharides in conjugate vaccines |
-
1997
- 1997-02-10 PT PT97906903T patent/PT897427E/pt unknown
- 1997-02-10 JP JP52943597A patent/JP3990455B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-10 DK DK97906903T patent/DK0897427T3/da active
- 1997-02-10 EP EP97906903A patent/EP0897427B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-10 AU AU22677/97A patent/AU724862B2/en not_active Ceased
- 1997-02-10 CA CA002245588A patent/CA2245588C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-02-10 ES ES97906903T patent/ES2229336T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-10 DE DE69731380T patent/DE69731380T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-10 WO PCT/US1997/002124 patent/WO1997030171A1/en active IP Right Grant
- 1997-02-10 AT AT97906903T patent/ATE280834T1/de active
- 1997-02-12 AR ARP970100560A patent/AR005869A1/es active IP Right Grant
- 1997-02-13 HR HR9608546.9A patent/HRP970083A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1997-02-13 TW TW086101813A patent/TW411344B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69731380T2 (de) | 2006-02-23 |
| DK0897427T3 (da) | 2005-02-14 |
| EP0897427B1 (en) | 2004-10-27 |
| CA2245588C (en) | 2006-05-09 |
| JP2000506383A (ja) | 2000-05-30 |
| CA2245588A1 (en) | 1997-08-21 |
| AR005869A1 (es) | 1999-07-21 |
| JP3990455B2 (ja) | 2007-10-10 |
| PT897427E (pt) | 2005-01-31 |
| AU2267797A (en) | 1997-09-02 |
| AU724862B2 (en) | 2000-10-05 |
| EP0897427A1 (en) | 1999-02-24 |
| DE69731380D1 (de) | 2004-12-02 |
| ES2229336T3 (es) | 2005-04-16 |
| WO1997030171A1 (en) | 1997-08-21 |
| ATE280834T1 (de) | 2004-11-15 |
| TW411344B (en) | 2000-11-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK171951B1 (da) | Fremgangsmaade til solubilisering af ikke-polyanioniske polysaccharider og fremgangsmaade til modificering af de solubiliserede neutrale polysaccharider | |
| CA1259450A (en) | Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency | |
| DE69226668T3 (de) | Imfpstoff, enthaltend ein Pneumokokkenpolysaccharid-Konjugat | |
| EP0971945B1 (en) | Method for preparation of conjugate vaccines using uronium salt | |
| JP7506605B2 (ja) | 肺炎球菌莢膜多糖類担体タンパク質複合体の製造方法 | |
| US4882317A (en) | Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency | |
| AU661071B2 (en) | Oligoside derived from an antigen polyoside obtained from a pathogenic agent | |
| CN101583629B (zh) | 修饰的糖类 | |
| CA2223080C (en) | Antigenic group b streptococcus type ii and type iii polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-d-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof | |
| JP2021522285A (ja) | リオスフィアから肺炎連鎖球菌莢膜多糖類キャリアタンパク質コンジュゲートを生産する方法 | |
| US6410025B1 (en) | Polysaccharide precipitation process | |
| JPH05279399A (ja) | タンパク質−ダイマー多糖結合体ワクチン | |
| KR102428253B1 (ko) | 신규한 다당류-단백질 접합체 및 이의 제조방법 | |
| US20210252126A1 (en) | Methods for providing a homogenous solution of lyophilized mutant diptheria toxin in dimethylsulfoxide | |
| EP2513056A2 (en) | Chemical reagents for the activation of polysaccharides in the preparation of conjugate vaccines | |
| HRP970083A2 (en) | Polysaccharide precipitation process | |
| WO2017036141A1 (zh) | 一种a群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法及应用 | |
| RU2765951C1 (ru) | Способ очистки гиалуроната от эндотоксинов |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1OB | Publication of a patent application | ||
| AIPI | Request for the grant of a patent on the basis of a substantive examination of a patent application | ||
| ODBC | Application rejected |