HRP20000735A2 - Human bmp-4 promotor and method for exploring bone-related substance by using the same - Google Patents

Human bmp-4 promotor and method for exploring bone-related substance by using the same Download PDF

Info

Publication number
HRP20000735A2
HRP20000735A2 HR20000735A HRP20000735A HRP20000735A2 HR P20000735 A2 HRP20000735 A2 HR P20000735A2 HR 20000735 A HR20000735 A HR 20000735A HR P20000735 A HRP20000735 A HR P20000735A HR P20000735 A2 HRP20000735 A2 HR P20000735A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
bone
vector
human
dna
substances
Prior art date
Application number
HR20000735A
Other languages
English (en)
Inventor
Shinji Kawai
Takeyuki Sugiura
Original Assignee
Hoechst Marion Roussel Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Marion Roussel Inc filed Critical Hoechst Marion Roussel Inc
Publication of HRP20000735A2 publication Critical patent/HRP20000735A2/hr

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/51Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Pozadina izuma
Polje izuma
Ovaj izum se odnosi na 5’ područje DNA koje u smjeru suprotnom od transkripcije (upstream) sadrži promotor proteina morfogeneze ljudskih kostiju (odavde na dalje navođen kao BMP-4). Pored toga, ovaj izum se odnosi na postupak istraživanja spojeva male molekularne težine, koji pozitivno ili negativno reguliraju ekspresiju ljudskog BMP-4, korištenjem mase životinjskih stanica ili stanica kvasca s 5’ područjem DNA koje u smjeru suprotnom od transkripcije posjeduje promotor ljudskog BMP-4 i vektor rekombinantne ekspresije integriran u pogodni reporterski gen, te korištenjem reporterske aktivnost koja iz nje proizlazi kao indikator.
Prijašnje stanje tehnike
Morfogenetska aktivnost kostiju se prikazuje preko faktora morfogeneze kostiju, BMP, koji pripada TGF-u (faktor promjene rasta) –� superobitelji (Science 150, 893-897, 1965; Science 242: 1528-1534, 1988). Poznate su grupe BMP-a od BMP-1 do BMP-14. Zna se da među njima, članovi od BMP-2 do BMP-14 pokazuju morfogenetsku aktivnost kostiju. Smatra se da su BMP-ovi razvrstani od BMP-2 do BMP-14 efektivni u terapeutskom i preventivnom tretmanu različitih poremećaja i bolesti kostiju, međutim, oni se u prirodi javljaju u vrlo malim količinama. Zbog toga potrebne velike količine BMP-2 do BMP-14, koji se koriste za te tretmane, zahtijevaju proizvodnju rekombinantnih proteina. Proizvodnja rekombinantnih proteina je općenito vrlo skupa u usporedbi sa spojevima male molekularne težine. S druge strane, kod izrade medicinskih lijekova postoje brojna ograničenja fizičkih svojstava i postupaka davanja u odnosu na proteinske karakteristike. Uzevši u obzir te činjenice, male organske molekule s aktivnošću jednakom onoj kod navedenih BMP proteina, kada bi postojale, bile bi vrlo obećavajući medicinski lijekovi. Tvari koje se mogu dobiti istraživačkim postupcima danim u ovom izumu su aktivne u pobuđivanju ekspresije ljudskog BMP-4, morfogenetskog proteina kostiju, a također posjeduju i efikasnost jednaku onoj ljudskog BMP-4, što ih čini vrlo korisnim. Nasuprot tome, postoji izvještaj (New Engl. J. Med., Vol. 335, p. 555-561, 1996) koji sugerira da ljudski BMP-4 uzrokuje hiperplaziju kostiju i hrskavice. U tom slučaju inhibiranje ekspresije ljudskog BMP-4 može spriječiti osteohiperplaziju. Ovaj izum je u stanju detektirati inhibiciju ekspresije ljudskog BMP-4 i daje postupak ispitivanja tvari koja sprječava takvu hiperplaziju.
Za takve postupke ispitivanja su do sada dani primjeri samo uz korištenje mišjeg BMP-2 promotora (WO97/15308); nema niti jednog primjera korištenja ljudskog BMP-4 promotora. Područje mišjeg BMP-4 promotora je već bilo klonirano (Biochem. Biophys. Acta, Vol. 1218, p. 221-224, 1994), ali detaljni podaci sekvence promotora ljudske BMP-4 nisu razjašnjeni. Ovaj izum prvi obuhvaća sekvencu promotora ljudskog BMP-4. Homologija između cjelokupnih sekvenci 5’ područja DNA, u smjeru suprotnom od transkripcije, promotora ljudskog i mišjeg BMP-4 (J. Biol. Chem., Vol. 270, p. 28364-28373, 1995) je 52,2%. Svi materijali potrebni kod istraživačkog postupka iz ovog izuma su dobiveni iz ljudskih izvora, tako da su tvari dobivene istraživanjem praktično klinički primijenjene. Može se očekivati da se dobije tvar sa sposobnošću točnije regulacije ekspresije ljudskog BMP-4 preko odvojene ili simultane transfekcije dva promotora (promotor 1 i promotor 2) u vektor rekombinantne ekspresije unutar stanice domaćina.
Bit izuma
Ovaj izum se odnosi na 5’ područje DNA koje u smjeru suprotnom od transkripcije sadrži promotor ljudskog BMP-4. Upotrebom gena iz 5’ područja DNA koje u smjeru suprotnom od transkripcije sadrži promotor ljudskog BMP-4 i životinjske stanice s vektorom rekombinantne ekspresije povezanim s odgovarajućim reporterskim genom, spojevi male molekularne težine koji, pozitivno ili negativno reguliraju ekspresiju ljudske BMP-4, mogu biti ispitani preko dobivene aktivnosti. Spojevi male molekularne težine i njihovi derivati posjeduju morfogenetsku i inhibitorsku aktivnost kostiju i hrskavice preko ekspresije ljudskog BMP-4, te su korisne kao preventivna ili terapeutska sredstva kod bolesti hrskavice ili kostiju, lijekovi za osteometastasis ili terapeutska i preventivna sredstva kod osteohiperplazije.
Kratak opis slika
Slika 1 je struktura ekson-intron od 6,7 kb 5’ područja u smjeru suprotnom od transkripcije gena ljudskog BMP-4 i mapa restrikcijskog enzima.
Slika 2 se odnosi na vektor rekombinantne ekspresije (pMSS116) koji sadrži promotor 1 iz 5’ područja u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena. Područje promotora 1 (baze s brojevima od 1 do 3361 prikazane u SEQ ID NO. 1 sekvencijske liste, navedenih od 5’ kraja do XhoI prikazanog na slici 1) je unijeto u NheI i XhoI područje restrikcijskog enzima bazičnog pGL3.
Slika 3 je vektor rekombinantne ekspresije (pMSS118) koji sadrži promotor 2 iz 5’ područja u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena. Područje promotora 2 (2,3 kb) (baze s brojevima od 3361 do 5645 prikazane u SEQ ID NO. 1 sekvencijske liste, navedenih od XhoI do Bg1II eksona 2 prikazanog na slici 1) je unijeto u XhoI i Bg1II područje restrikcijskog enzima bazičnog pGL3.
Slika 5 prikazuje rezultat mjerenja aktivnosti promotora ljudskog BMP-4 (kratkotrajna ekspresija).
Opis poželjnog ostvarenja
Ovaj izum se odnosi na DNA čija je nukleotidna sekvenca predstavljena nizom baza od broja 1 do 6774, prikazanih u SEQ ID NO. 1 sekvencijske liste, koje kodiraju područje promotora proteina-4 morfogeneze ljudskih kostiju ili njegov fragment. SEQ ID NO. 1 iz sekvencijske liste prikazuje 5’ područje u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena.
Ovaj izum se odnosi na postupak priprave DNA prikazane u SEQ ID NO. 1 sekvencijske liste, koji se provodi pomoću slijedećih koraka:
(1) digestija genomske DNA ljudske placente pomoću EcoRI restrikcijskog enzima,
(2) izolacija pomoću elektroforeze na agaroznom gelu,
(3) kloniranje izoliranog DNA fragmenta digestiranog pomoću EcoRI u lambda fag vektor λDASH II, tretiran pomoću istog enzima,
(4) pakiranje navedenog vektora u fagu,
(5) uspostavljanje genomske DNA biblioteke, inficiranjem Escherichia coli s fagom,
(6) selektiranje pomoću PCR-a i
(7) subkloniranje u plazmidni vektor.
Plazmidni vektor korišten u prilogu nije ograničen i može se koristi i nekih od komercijalno dostupnih. Vektor pUC18 je preferirani primjer.
Ovaj izum se odnosi na vektor rekombinantne ekspresije karakteriziran uključivanjem u reporterski gen pune duljine ili dijelova DNA prikazane u SEQ ID NO. 1. U detaljima, vektor rekombinantne ekspresije je konstruiran da bi locirao pogodan dio 5’ područja u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena, reprezentiran sa SEQ ID NO. 1 iz sekvencijske liste, ispred reporterskog gena. Reporterski geni kao što su geni luciferaze ili β-galaktozidaze pokazuju status ekspresije na polovici originalnih produkata. Odabir vektora kao originala za vektor rekombinantne ekspresije nije naročito ograničen što dozvoljava upotrebu komercijalnog plazmidnog vektora. U ovom izumu se koristi bazični pGL3 kao preferirani primjer. Upotreba bazičnog pGL3 daje pMSS116 (8,2 kb), pMSS118 (7,1 kb) i pMSS119 (10,5 kb), koji predstavljaju vektore rekombinantne ekspresije s promotorom ljudskog BMP-4 i reporterskim genom luciferaze. Ovaj izum ih dodjeljuje vektoru rekombinantne ekspresije. Nužno je uvesti vektor rekombinantne ekspresije u stanice sisavaca, preferirano ljudske stanice nalik na osteoblaste, kao što su stanice SaOS-2, s liposomima. Životinjske stanice podvrgnute transfekciji pomoću vektora rekombinantne ekspresije odabrane su pomoću rezistentnog markera.
Ovaj izum se odnosi na postupke ispitivanja tvari povezanih s kostima, karakteriziranih pomoću vektora rekombinantne ekspresije uključivanjem cjelokupne duljine ili dijela DNA, prikazanog u SEQ ID NO. 1 sekvencijske liste, u reporterski gen. On se odnosi na postupak ispitivanja tvari povezanih s kostima kod kojih su tvari povezane s kostima tvari koje pobuđuju osteogenezu ili kod kojih su tvari povezane s kostima tvari koje inhibiraju osteogenezu. Spojevi male molekularne težine koji pobuđuju ili inhibiraju ekspresiju ljudskog BMP-4 mogu se dobiti izoliranjem promotora koji regulira ekspresiju gena, njihovim povezivanjem s pogodnim reporterskim genom, te uvođenjem genske strukture u pogodnu životinjsku stanicu, čime se dobiva sustav za ispitivanje. Tvar koja regulira ekspresiju ljudske BMP-4 u ispitivanom sustavu utječe na promotor koji povećava ili smanjuje nivo ekspresije reporterskog gena. Zbog toga, jednostavna i laka mjerenja dobivene aktivnosti omogućavaju ispitivanje ciljane tvari.
Životinjska stanica podvrgnuta transfekciji pomoću navedenog vektora može biti korištena u postupku ispitivanja biblioteke kemijskih spojeva uz veliku brzinu selektiranja (Nature, Vol. 384, Suppl., p. 14-16, (1996)), te ispitivanje aktivnih sastojaka iz prirodnih tvari. Tvar koja povećava ili smanjuje aktivnost je istraživana tretiranjem stanice s tom tvari u odgovarajućim vremenskim periodima, te mjerenjem aktivnosti dobivene nakon toga. Time dobivene tvari mogu regulirati ekspresiju direktno, djelovanjem na faktor transkripcije, ili indirektno, djelovanjem na promotor ljudskog BMP-7 kroz reguliranje sustava preoblikovanja signala. Zbog toga su ti spojevi efektivni kao terapeutska sredstva za osteokartilaginozne bolesti, metastaze raka kostiju ili osteohiperplaziju.
Tvari dobivene u ovom izumu posjeduju morfogenetsku aktivnost kostiju ili hrskavice i efektivne su kao sredstva za terapeutski i preventivni tretman u području ortopedske kirurgije (fraktura, osteoartritis kao što je osteoartritis zgloba i osteoartritis kukova, artrosteitis, oštećenja hrskavice kao što su oštećenja meniskusa, regeneriranje manjka kostiju i hrskavice uzrokovanog ranama i uklanjanjem tumora, rekonstrukcija kostiju kao što je spinalna fuzija i povećanje kralježničnog kanala, te kongenitalne bolesti hrskavce i kosti kao što su disoteogeneza i ahondroplazija), ili na dentalnom području (rekonstrukcija kostiju kao što je palantoschisis, rekonstrukcija donje čeljusti, te konstrukcija ostataka desni), te osteoporoze. Osim toga, tvari iz ovog izuma se mogu koristiti kod transplatacije kostiju u estetskoj kirurgiji. Ti terapeutski tretmani su efektivni kod terapija primijenjenih na polju veterinarske kirurgije. S druge strane, ovaj izum daje tvari koje inhibiraju morfogenezu kostiju ili hrskavice. U tom slučaju, tvari se primjenjuju kao sredstva za prevenciju i terapiju hiperplazije kosti i hrskavice.
PRIMJERI
Ovaj izum će biti više ilustrativno objašnjen pomoću slijedećih primjera. Slijedeći primjeri se u svakom pogledu moraju razmatrati kao ilustrativni, ali ne i kao restriktivni.
Primjer 1 Izoliranje 5’ područja u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena
Genomska DNA ljudske posteljice (produkt CloneTech) je digestirana pomoću različitih vrsta restrikcijskih enzima (BamHI, Bg1II, EcoRI, HindIII, PstI, SacI, Sa1I, SmaI, SphI i XbaI), odijeljena elektroforezom na agaroznom gelu, prenijeta u najlonsku membranu i podvrgnuta Southern hibridizaciji pod standardnim uvjetima uz upotrebu BMP-4 cDNA (Science 242, 1528-1534, 1988) kao probe. Kao rezultat, nađeno je da od svih upotrijebljenih restrikcijskih enzima digestija pomoću restrikcijskog enzima EcoRI daje DNA fragment od približno 7 kb koji sadrži najdulji gen ljudskog BMP-4. Nakon toga je genomska DNA ljudske posteljice digestirana restrikcijskim enzimom EcoRI i odijeljena elektroforezom na agaroznom gelu, da bi se iz agaroznog gela izlučio DNA fragment od približno 7 kb. Dobiveni DNA fragment je kloniran u lambda fag vektor λDASH II (Stratagene Ltd.) i digestiran pomoću restrikcijskog enzima EcoRI. Vektor je in vitro pakiran pomoću Gigapack III XL Extract (Stratage Ltd.), inficiran u Escherichia coli XL1-Blue MRA (Stratage Ltd.) da bi dao genomsku biblioteku DNA. Biblioteka je podijeljena u više skupova. Svaki skup je pojačan selektiranjem (Nucleic Acids Res. 21: 2627-2631, 1993) pomoću PCR-a; naime, PCR postupak korištenjem PCR prajmera, (SEQ ID NO. 2 i SEQ ID NO. 3 iz sekvencijeke liste) koji odgovaraju području eksona 1, selektira objektivne skupove da bi se konačno dobilo 5’ područje (6,8 kb) u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena. Pored toga, 6,8 kb 5’ fragment u smjeru suprotnom od transkripcije je subkloniran u pUC18 vektor (produkt Amersham Pharmacia Biotech). Vektor je nazvan E. coli pKOT 312. E. coli pKOT 312 je pohranjen 30. ožujka 1998. u Nacionalnom institutu bioloških znanosti i humane tehnologije, Agenciji industrijske znanosti i tehnologije, Ministarstvu međunarodne trgovine i industrije 1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken 305-8566 Japan s brojem mjesta pohrane FERM P-16736 i prenijet u Međunarodnu upravu za pologe (International Depository Authority) ugovorom iz Budimpešte od 17. veljače 1999. (broj pologa FERM BP-6650).
Primjer 2 Određivanje DNA sekvence 5’ područja u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena
Dobivena sekvenca 5’ područja u smjeru suprotnom od transkripcije ljudskog BMP-4 gena je određena pomoću Amersham Pharmacia Biotechovog ALF DNA sekvenatora, prema postupku koji su razvili Sangar i suradnici (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 5463-5467, 1977). Tako analizirana sekvenca je opisana u SEQ ID NO. 1 iz sekvencijske liste.
Primjer 3 Konstrukcija vektora rekombinantne ekspresije koji sadrži promotor ljudskog BMP-4 i reporterski gen luciferazu
Kao što je prikazano na slici 1, ljudski BMP-4 posjeduje dva promotora, prije eksona 1 (promotor 1) i iza eksona 2 (promotor 2), slična promotorskoj strukturi mišjeg BMP-4. Područje koje sadrži promotor 1 (od 5’ kraja do Xho1 opisanog na slici 1) je uvedeno na položaj restrikcijskog enzima u smjeru suprotnom od transkripcije, NheI i XhoI, reporterskog gena od reporterskog vektora bazičnog pGL3 luciferaze (produkt Pro Mega Ltd.) upotrebom položaja restrikcijskog enzima XbaI dobivenim od pUC18 vektora koji se javlja kod 5’ kraja, čime je dobiven vektor rekombinantne ekspresije pMSS116 (8,2 kb). To je prezentirano na slici 2. Pored toga, vektor rekombinantne ekspresije pMSS118 (7,1 kb) je dobiven uvođenjem područja (od Xho1 do Bg1II u eksonu 2 opisanom na slici 1) koje sadrži promotor 2 u područje restrikcijskog enzima, XhoI i Bg1II, bazičnog PGL3. To je prikazano na slici 3. Pored toga, područje (od 5’ kraja do Bg1II u eksonu 2, opisanom na slici 1) koje sadrži i promotor 1 i promotor 2 je uvedeno u područje rekstrikcijskog enzima, NheI i Bg1II, bazičnog pGL3 korištenjem područja XbaI dobivenog od pUC18 vektora, kao u slučaju pMSS119 (10,5 kb). To je prikazano na slici 4.
Primjer 4 Mjerenje aktivnosti promotora ljudskog BMP-7 (uvođenje vektora rekombinantne ekspresije u ljudsku stanicu i kratkotrajna ekspresija)
Da bi došlo do kratkotrajne ekspresije vektora rekombinantne ekspresije ljudskog BMP-4, ranije opisani vektori rekombinantne ekspresije (pMSS116, pMSS118, pMSS119)) su pomiješani s vektorom pRL-SV40 (produkt Pro Mega Co.) koji je sadržavao gen luciferaze iz morske maćuhice kao unutarnju kontrolu kod mjerenja efikasnosti gena danog u jednakoj količini. Nakon toga, kationski liposom lipofektamin (produkt Lifetech Oriental Co.) je pomiješan sa smjesom u svrhu transfekcije ljudskih osteosarkoma stanica HOS, MG63 i SaOS-2. Aktivnost luciferaze iz krijesnice, te aktivnost luciferaze iz morske maćuhice je mjerena pomoću Pikka Gene Dual opreme (produkt Toyo Ink Co.). Rezultat je prikazan na slici 5. Aktivnost promotora je prikazana kao omjer aktivnosti luciferaze krijesnice i aktivnosti luciferaze morske maćuhice. Iz dobivenih rezultata se vidjelo da DNA od SEQ ID NO. 1 iz sekvencijske liste posjeduje promotorsku aktivnost.
Primjer 5 Uvođenje ljudskog BMP-4 vektora rekombinantne ekspresije u ljudsku stanicu i stabilizirana ekspresija
Da bi došlo do ekspresije ljudskog BMP-4 vektora rekombinantne ekspresije, ranije opisani vektori su pomiješani s vektorom pPUR, (produkt CloneTech Ltd.) koji sadrži puromicinski rezistentni gen u proporciji od 10 : 1, i također s kationskim liposom lipofektaminom (produkt Lifetech Oriental Co.) u svrhu transfekcije stanice ljudskog osteosakroma HOS. Stanice u koje su ciljani geni bili uvedeni selektirane su iz kulture koja je sadržavala puromicin (produkt od Sigma Ltd.).
Primjer 6 Odabir aktivnih spojeva male molekularne težine
Odabirom utvrđene stanice su inokulirane pomoću ploče s 96 rupa, tretirane s tvarima iz različitih biblioteka kemijskih spojeva u trajanju od 1 do 3 dana, rastvorene pomoću citolitičkog sredstva (produkt Pro Mega Ltd.), te im je mjerena enzimska aktivnost primjenom opreme za ispitivanje luciferaze (produkt od Pro Mega Ltd.). Primjenom takvih procesa mogu se istraživati različite tvari koje uzrokuju pobuđivanje ili inhibirajnje ekspresije ljudskog BMP-4.

Claims (6)

1. DNA čija je nukleotidna sekvenca prezentirana nizom baza od broja 1 do 6774 prikazanih u SEQ ID NO. 1 sekvencijske liste, naznačenu time, da kodira promotorsko područje proteina-4 morfogeneze ljudskih kostiju ili neki njegov dio.
2. Postupak dobivanja DNA prikazane u SEQ ID NO. 1 iz sekvencijske liste, naznačen time, da obuhvaća slijedeće korake: (1) digestija genomske DNA ljudske posteljice pomoću EcoRI restrikcijskog enzima, (2) izoliranje elektroforezom na agaroznom gelu, (3) kloniranje izoliranog fragmenta DNA, digestiranog pomoću EcoRI u lambda fag vektor λDASH II tretiran s istim enzimom, (4) pakiranje navedenog vektora u fag, (5) uspostavljanje genomske DNA biblioteke inficiranjem Escherichia coli s fagom, (6) selektiranje pomoću PCR-a i (7) subkloniranje u plazmidni vektor.
3. Vektor rekombinantne ekspresije, naznačen time, da uključuje punu duljinu ili dio DNA prikazan u seq id no. 1 iz sekvencijske liste u reporterski gen.
4. Postupak ispitivanja tvari povezanih s kostima, naznačen time, da koristi vektor rekombinantne ekspresije prema zahtjevu 3.
5. Postupak ispitivanja tvari povezanih s kostima iz zahtjeva 4, naznačen time, da su tvari povezane s kostima tvari koje pobuđuju osteogenezu.
6. Postupak ispitivanja tvari povezanih s kostima prema zahtjevu 4, naznačen time, da su tvari povezane s kostima tvari koje inhibiraju osteogenezu.
HR20000735A 1998-04-30 2000-10-30 Human bmp-4 promotor and method for exploring bone-related substance by using the same HRP20000735A2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP10120173A JPH11313674A (ja) 1998-04-30 1998-04-30 ヒトbmp−4プロモーターおよびこれを用いた骨関連物質の探索法
PCT/IB1999/000732 WO1999057145A2 (en) 1998-04-30 1999-04-22 Human bmp-4 promoter and method for exploring bone-related substance by using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP20000735A2 true HRP20000735A2 (en) 2001-10-31

Family

ID=14779737

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HR20000735A HRP20000735A2 (en) 1998-04-30 2000-10-30 Human bmp-4 promotor and method for exploring bone-related substance by using the same

Country Status (24)

Country Link
US (1) US6458944B1 (hr)
EP (1) EP1076664A2 (hr)
JP (1) JPH11313674A (hr)
KR (1) KR20010043135A (hr)
CN (1) CN1307587A (hr)
AP (1) AP2000001974A0 (hr)
AU (1) AU759569B2 (hr)
BG (1) BG104884A (hr)
BR (1) BR9910086A (hr)
CA (1) CA2326956A1 (hr)
EA (1) EA200001131A1 (hr)
EE (1) EE200000631A (hr)
HR (1) HRP20000735A2 (hr)
HU (1) HUP0102336A2 (hr)
ID (1) ID26413A (hr)
IL (1) IL139101A0 (hr)
NO (1) NO20005432L (hr)
NZ (1) NZ507622A (hr)
PL (1) PL344526A1 (hr)
SK (1) SK15992000A3 (hr)
TR (1) TR200003165T2 (hr)
WO (1) WO1999057145A2 (hr)
YU (1) YU66200A (hr)
ZA (1) ZA200006079B (hr)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006902A (en) * 2000-10-24 2002-05-06 Sdgi Holdings Inc Methods and instruments for treating pseudoarthrosis
US7427677B2 (en) * 2003-07-01 2008-09-23 Academia Sinica Expression of zebrafish bone morphogenetic protein 4

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6083690A (en) 1995-06-02 2000-07-04 Osteoscreen, Inc. Methods and compositions for identifying osteogenic agents
CA2272345A1 (en) 1996-11-22 1998-06-04 Akzo Nobel Nv Bmp-4 promoter and use thereof in screening of therapeutic agents for the prevention and/or treatment of osteoporosis

Also Published As

Publication number Publication date
AU3163399A (en) 1999-11-23
ID26413A (id) 2000-12-21
CA2326956A1 (en) 1999-11-11
EE200000631A (et) 2002-02-15
BG104884A (en) 2001-05-31
BR9910086A (pt) 2000-12-26
PL344526A1 (en) 2001-11-05
WO1999057145A2 (en) 1999-11-11
AU759569B2 (en) 2003-04-17
EP1076664A2 (en) 2001-02-21
TR200003165T2 (tr) 2001-03-21
US6458944B1 (en) 2002-10-01
SK15992000A3 (sk) 2001-05-10
ZA200006079B (en) 2001-10-29
WO1999057145A3 (en) 2000-01-20
HUP0102336A2 (hu) 2001-10-28
AP2000001974A0 (en) 2000-12-31
JPH11313674A (ja) 1999-11-16
EA200001131A1 (ru) 2001-06-25
KR20010043135A (ko) 2001-05-25
NO20005432D0 (no) 2000-10-27
NO20005432L (no) 2000-10-27
IL139101A0 (en) 2001-11-25
NZ507622A (en) 2003-03-28
CN1307587A (zh) 2001-08-08
YU66200A (sh) 2003-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0853668B1 (en) Regulated genes and uses thereof
HRP20000736A2 (en) Human bmp-7 promotor and method for exploring bone-related substance by using the same
Yang et al. Structural analysis and characterization of tissue and hormonal responsive expression of the avian bone sialoprotein (BSP) gene
HRP20000735A2 (en) Human bmp-4 promotor and method for exploring bone-related substance by using the same
US6475735B1 (en) Human BMP-2 promoter and method for exploring bone-related substance by using the same
JP2000004882A (ja) ヒトmp52遺伝子プロモーターおよびこれを用いた有用物質の探索法
US20100209400A1 (en) TAK1-Mediated Regulation of Osteogenesis
US20190134223A1 (en) Methods and compositions for treating heart failure
KR19980701695A (ko) 미오신 중쇄 sm1 이소폼 단백질을 암호화하는 dna를 벡터 dna에 삽입시킨 재조합 dna, 전기 재조합 dna가 도입된 미생물 및 재조합 dna를 포함하는 동맥경화증 치료제
CZ20004016A3 (cs) Lidský BMP-4 promotor a způsob pro výzkum substancí ovlivňujících kosti za použití tohoto promotoru
MXPA00010405A (en) Human bmp-4 promoter and method for exploring bone-related substance by using the same
TW202221119A (zh) Dna結合域轉活化子及其用途
Laskowski Axon regeneration following peripheral nerve lesion is driven by cofilin mediated actin turnover
WO1998048830A1 (en) Method for promoting myogenesis using osteogenic proteins
HASLER et al. land zyxwvutsrqponmlkjih
WO2003006621A2 (en) Super osteocalcin promoter for the treatment of calcified tumors and tissues

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
ARAI Request for the grant of a patent on the basis of the submitted results of a substantive examination of a patent application
PNAN Change of the applicant name, address/residence

Owner name: AVENTIS PHARMA S.A., FR

ODRP Renewal fee for the maintenance of a patent

Payment date: 20030321

Year of fee payment: 5

OBST Application withdrawn