HK40108321A - 用於治疗hpv感染和hpv诱发的瘤变的组合物和剂型 - Google Patents

Description

用于治疗HPV感染和HPV诱发的瘤变的组合物和剂型

相关申请的交叉引用

本申请要求于2022年7月21日提交的美国临时申请第63/391,283号；2022年8月24日提交的美国临时申请第63/400,661号；2022年9月30日提交的中国专利申请第202211206517.7号；以及2022年9月30日提交的美国临时申请第63/412,143号的权益。这些申请出于所有目的通过引用并入本文。

技术领域

本发明提供了在有需要的宿主中治疗人乳头瘤病毒(HPV)感染或相关障碍(如HPV诱发的瘤变)的组合物、有利的盐、前药、立体异构体、晶型形式、剂型及其用途。

背景技术

根据美国疾病控制中心的说法，尚无直接治愈人乳头瘤病毒的方法。2018年，受感染者超过4300万，并且新增感染者超过1300万。

目前针对HPV感染的治疗选择只是辅助性的并且是有限的。它们都存在明显的缺点。常用的药物疗法包括水杨酸、三氯乙酸、咪喹莫特和普达非洛。三氯乙酸和水杨酸都会以化学方式灼烧疣组织，作为去除病毒的一种手段，在此过程中经常会引起皮肤刺激、溃疡和疼痛。此外，水杨酸不用于治疗肛门生殖器区域的HPV感染。咪喹莫特(Aldara^TM，Zyclara^TM)通过toll样受体信号传导刺激免疫系统清除感染并引起发红和肿胀。普达非洛(Condylox^TM)通过微管去稳定来破坏组织以阻止宿主细胞复制。

更成问题的是HPV感染已引起人类患者的细胞转化，这些细胞尚未发展为癌症，但已达到瘤变阶段。HPV诱发的瘤变形式包括宫颈上皮内瘤变(“CIN”)、肛门上皮内瘤变(“AIN”)、肛周上皮内瘤变(“PAIN”)、外阴上皮内瘤变(“VIN”)、阴茎上皮内瘤变(“PIN”)和阴道上皮内瘤变(“VAIN”)。由HPV引起的癌症包括宫颈癌、肛门癌、肛周癌、阴茎癌、阴道癌、外阴癌和口咽癌。

在HPV诱发的瘤变发展为可能无法治疗的癌症之前，识别和治疗它是至关重要的。几乎所有的宫颈癌病例都是由性传播的HPV致癌类型感染引起的。早期筛查(例如，巴氏测试(子宫颈抹片检查))的主要目标是识别具有严重细胞变化的异常宫颈细胞，以便将其去除或破坏。

宫颈上皮内瘤变最常通过观察(等待和观望的方法)或通过切除或消融宫颈转化区来治疗。技术包括冷冻疗法、激光疗法、环形电切除术(LEEP)和锥形活组织检查。所有这些外科手术都会损坏受累区域并可能导致疤痕。最常见的干预措施LEEP对60％-90％的病例有效，然而它与流产、异位妊娠和负面心理结果的显著增加的风险相关联。尽管进行了广泛的研究，但尚未批准任何药物来替代或与这些手术方法联用。

乳头瘤病毒是一组无包膜的DNA病毒，在人类中感染皮肤和粘膜的角质形成细胞，包括肛门生殖器区域。众所周知，它们会导致皮肤疣、生殖器疣、呼吸道乳头状瘤病和癌症。α-乳头瘤病毒属的若干种类含有HPV的高危型类型，它们更可能导致人中瘤变，然后是癌症。大多数致癌HPV类型来自α-7和α-9种类，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82类型。最常见的致癌HPV类型是16和18。HPV-16和-18是大多数宫颈癌的病因。大多数性病疣是由低危型HPV类型6和11引起的。已经开发了针对HPV 6、11、16和18的疫苗，如果在首次性行为之前施用可能是有效的。然而，HPV疫苗对已经感染HPV的性活跃女性可能提供极少益处。

可用的特定预防性疫苗包括加德西(Gardasil)9(HPV 9价疫苗；HPV 6、11、16、18、31、33、45、52和58)、加德西4(四价)和希瑞适(Cervarix)(二价)。如果该人在病毒接触之前(这通常意味着在性活动之前)接种疫苗，这些是有用的。预防性疫苗旨在产生中和抗体，这些抗体在病毒感染细胞之前清除病毒。相比之下，治疗性疫苗是设计用于对清除HPV感染细胞产生基于CD4+和/或CD8+ T细胞应答的疫苗。用于治疗性疫苗的示例性抗原包括E6和E7。目前还没有获得批准的治疗性疫苗。在临床试验中正在研究的治疗性疫苗的非限制性实例包括VGX-3100(INOVIO)、GGX-188E(Genexine,Inc.)和ADXS11-001(Advaxis,Inc.)。

宫颈上皮内瘤变(CIN)是宫颈癌的前兆。多达20％感染HPV的女性患有CIN(Rozendaal,L.等人.“PCR-based high-risk HPV test in cervical cancer screeninggives objective risk assessment of women with cytomorphologically normalcervical smears”1996,Int J Cancer,68,766-769)。CIN在贝塞斯达(Bethesda)量表上从轻度1级到严重3级分级。当女性被诊断为患有1级CIN时，通常会采取“等待和观望”的方法。由于手术方法的不良副作用，仅当CIN为2-3级时才推荐治疗。

宫颈上皮由几层组织构成，并且被称为复层鳞状上皮。这些层是表层细胞层、中间细胞层、副基底细胞层和基底细胞层。用于治疗宫颈上皮内瘤变的局部药物必须能够穿透这些组织多层以充分到达和治疗转化细胞。这是一项艰巨的任务，因为细胞紧密结合且没有血管。

在1996年，美国国家癌症研究所共识小组确定需要对宫颈上皮内瘤变进行非手术干预(National Institutes of Health Consensus Development Conference statementon cervical cancer.April 1-3,1996.J Women’s Health,1996,1,1-38)。自该指南发布以来，已经探索了许多治疗HPV和CIN的不同方法，包括免疫调节剂、抗增殖药物、抗病毒药物和激素。然而，仍然没有经FDA批准的在针对HPV感染或CIN的临床试验中证明有效的治疗方案(Desravines,N.等人.“Topical therapies for the treatment of cervicalintraepithelial neoplasia(CIN)2-3:A narrative review”Gynecol Oncol Rep.2020,33,100608)。

加利福尼亚大学董事会与Karl Hostetler等人，作为指定的发明人，已就多种无环核苷酸衍生物申请了一系列专利，以治疗乳头状瘤感染，包括(i)美国专利号8,835,603；9,629,860；9,156,867；10,449,207；10,195,222；10,076,533；10,076,532；9,775,852；9,387,217，优先权日为2013年3月15日；(ii)美国专利号10,702,532；10,213,430；9,493,493；和9,801,884，优先权日为2014年9月15日；和(iii)美国专利号11,014,950和10,377,782，优先权日为2015年9月15日。这些专利中的一些专利已授权给安蒂瓦生物科学(AntivaBiosciences)公司，该公司正在开发新疗法来治疗由HPV引起的癌前病变。

安蒂瓦生物科学公司用膦酸酯ABI-1968进行人类临床试验，以评估其充分穿透宫颈上皮各层并释放抗病毒剂PMEG((9-[2-膦酰甲氧基)乙基)鸟嘌呤])的能力。然后将PMEG磷酸化为活性化合物PMEGpp(PMEG聚磷酸酯)。已确定，当使用高达3％的剂量时，ABI-1968未达到ABI-1968的15ng/mg组织浓度(参见图116中柱F和柱G)，因此不适合作为治疗宫颈上皮内瘤变的局部药物。以有效的方式对感染HPV的上皮分层组织局部给药，以破坏多个上皮层中的瘤变细胞是一项艰巨的挑战。药物必须具有足够的亲脂性以穿过组织层，并在需要时代谢成足够浓度的活性剂以杀死病原细胞。

已发表文章讨论各种局部药物递送策略，包括半固体剂型、凝胶、片剂、薄膜和阴道药栓。参见，例如，Keshari Sahoo,C.等人.“Intra vaginal Drug Delivery System:AnOverview”,2013,American Journal of Advanced Drug Delivery,1,43-55；da Neves,J.等人“Gels as vaginal drug delivery systems”,2006,International Journal ofPharmaceutics,318(2)1-14；Cencia Rohan,L.等人.“Vaginal Drug Delivery Systemsfor HIV Prevention”,2009,AAPS,11(78)；Kast,C.E.等人.“Design and in vitroevaluation of a novel bioadhesive vaginal drug delivery system forclotrimazole”Journal of Controlled Release,2002,81(3)347-354；Acarturk,F.“Mucoadhesive vaginal drug delivery systems”,Recent Pat Drug Deliv Formul.,2009,3(3)193-205；以及Sonal,G.等人.“Exploring Novel Approaches to Vaginal DrugDelivery”,Recent Patents on Drug Delivery and Formulation,2011,5(2)82-94。

本发明的目的是在有需要的宿主中提供有效的药物组合物和针对HPV感染以及相关病症的治疗，相关病症是例如HPV诱发的瘤变，包括但不限于宫颈上皮内瘤变(CIN)、肛门上皮内瘤变(AIN)、外阴上皮内瘤变(VIN)、阴茎上皮内瘤变(PIN)、肛周上皮内瘤变(PAIN)和阴道上皮内瘤变(VAIN)。

发明内容

已发现用于治疗HPV感染和相关疾病(包括HPV诱发的瘤变，例如宫颈上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变和阴道上皮内瘤变)的有效组合物需要与多个方面选择组合才能共同作用以达到所希望的结果。有必要选择具有有利的亲脂性和组织穿透特性的、与所选药学上可接受的盐(任选地以有利的晶型形式)组合的合适化合物，以实现长期寻求的以有效量穿透(penetrate)上皮分层组织以递送活性剂的能力。已经历过多次失败，需要数年研究来解决这个问题，从而造福全球患有可能癌变的上皮间瘤变的患者。

特别地，发现关键的化合物是以下的具体盐：

化合物I是(乙基(((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)-磷酰基)-L-丙氨酸酯)。转让给加利福尼亚大学董事会的美国专利号9,801,884和11,344,555总体上要求保护化合物I和药学上可接受的盐以及使用所述化合物和盐用于治疗乳头瘤病毒感染的方法。化合物I是无环核苷酸膦酸酯，可代谢为已知的强效抗病毒化合物(PMEG；((9-[2-膦酰甲氧基)乙基)鸟嘌呤]))，但PMEG具有较差的细胞渗透性和使用受限的全身毒性。受让人发现了如何改进局部递送的前药，使其迅速被上皮细胞吸收，这是迄今为止一项具有挑战性的任务，而ABI-1968未能成功。

化合物I(乙基(-((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)-(苄氧基)磷酰基)-L-丙氨酸酯)具有两个手性中心，一个在磷原子上，并且一个在氨基酸部分，其中任何一个都可以是R或S立体构型。因此，化合物I以四种立体异构体或两个非对映异构体对：(R_P,S_C)/(S_P,S_C)和(R_P,R_C)/(S_P,R_C)的形式存在。虽然美国专利号9,801,884和11,344,555总体上描述了化合物I，但这些专利并未涉及磷原子的潜在立体化学。如本文进一步讨论的，已发现在磷上具有R-立体化学并且在氨基酸碳上具有S-立体化学的化合物I的立体异构体具有优于其他三种立体异构体的特性。

在非限制性实施例中，化合物I的有利的盐(例如富马酸盐)作为(R,S)和(S,S)非对映异构体的混合物使用，其中第一个R/S指定磷原子处的立体化学，并且第二个S是氨基酸部分(对应于具有S-构型的L-丙氨酸残基)中碳的立体化学。虽然可以使用提供所需结果的任何比例的非对映异构体，但(R,S)非对映异构体最为突出。在其他实施例中，磷原子处的R与S对映异构体的比率为约1:1。在一些方面，所述化合物在磷原子处呈R手性对映异构体富集的，其中按重量计R的量例如高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％，或甚至85％或更高。

对应于天然氨基酸构型，手性碳上的S-立体构型在本发明中是有利的。在某些方面，按重量计S的量例如高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％、或甚至85％或更高。在替代实施例中，所述化合物与手性碳处的R-立体构型一起使用，并且其中R-立体构型高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％、或甚至85％或更高。

化合物I的对映异构体纯的(R_p,S_c或简称为“R,S”)形式是主要实施例。除非另有说明，对映异构体纯的化合物II至少90％不含相反的对映异构体。令人惊讶的是，所述化合物是油而不是固体，并且因此不会被选作局部制剂的活性成分。尤其如此，因为外消旋混合物或对映异构体富集的R,S与S,S作为游离碱的是固体。此外，如图120所示，所述S,S异构体具有中等结晶度。然而，当形成富马酸盐时，所述R,S对映异构体纯的化合物I成为高度结晶材料，并且对于上皮内局部施用最有利。因此，化合物I的单富马酸盐具有意想不到的稳定性和可加工性，因此与游离碱化合物I相比具有治疗优势。

R,S异构体的单富马酸盐可以容易地从异丙醇和庚烷中结晶出来。这种晶型形式是熔点约为140℃的无水化合物(实施例15)。这种晶型形式形态不仅在毫克级而且在多克级上都得到了重现。

虽然S,S异构体更容易作为游离碱处理，但所述S,S异构体的单富马酸盐具有多态性，熔点较低，约为105℃。鉴定了所述S,S单富马酸盐的四种晶型形式(实施例15)。在某些实验中，观察到S,S单富马酸盐解离成半富马酸盐。当在较大规模上进行时，这种模式的合成是不可重现的。

令人惊讶地发现，由化合物I单富马酸盐及其晶型模式1制备的某些药物组合物剂型具有有利的性质。由化合物I游离碱制备的片剂在40℃和75％ RH下在一个月内显著降解，但相比之下，由化合物I单富马酸盐制备的片降解程度低得多(实施例25)，显著延长了保质期。

本文提及并在下文中说明的化合物II是主要在磷原子处具有R-立体化学和在氨基酸碳原子处具有S-立体化学的对映异构体富集的或纯的实施例。在对映异构体纯的形式下，化合物II表现出优于其立体异构体乙基((S)-((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)磷酰基)-L-丙氨酸酯单富马酸盐(化合物III)的稳定性。这对于宫颈、阴道、外阴、肛周区域、肛门或阴茎的局部应用的成功至关重要。

已发现的化合物I的其他有利的盐包括半富马酸盐：乙基((R)-((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)磷酰基)-L-丙氨酸酯半富马酸盐(化合物IV)和乙基((S)-((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)磷酰基)-L-丙氨酸酯半富马酸盐(化合物V)。

已经发现化合物II具有高组织穿透性并且出人意料地稳定、结晶和不吸湿。化合物II及其有利的晶型形式模式1可用于治疗HPV感染或与HPV感染相关的疾病，例如上皮内瘤变，包括但不限于宫颈上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变和阴道上皮内瘤变，以防止向癌症的转变。

HPV有许多毒株，其中一些与癌症的发展密切相关，被称为高危型毒株。化合物I富马酸盐或化合物II可用于治疗高危型HPV，包括HPV-16和HPV-18。因此，在某些方面，本发明提供了化合物II和分离的晶型形式化合物II模式1；含有这种化合物的药物组合物；使用本文所述的所选晶型形式治疗HPV感染或与HPV感染相关的上皮内瘤变的方法；以及制备这种化合物和晶型形式的方法。

特别是，令人惊讶地发现，在局部施用至目标组织时，乙基((R)-((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)磷酰基)-L-丙氨酸的单富马酸盐(化合物II)具有非常高的组织穿透性。局部给药避免了与药物全身给药相关的毒性。由于感染了HPV的癌前细胞和/或癌细胞在上皮中有好几层，因此该化合物必须具有很高的穿透性，才能到达并治疗这些受影响的细胞。

与ABI-1968相比，化合物I单富马酸盐在猪和人阴道组织中具有更好的组织渗透性和穿透性，尽管ABI-1968也是无环嘌呤核苷的磷酸酯，但在临床试验中失败。对于0.1％的剂量，化合物I单富马酸盐在阴道组织中达到40-85ng/mL的浓度。ABI-1968，即使以3％的剂量使用，浓度甚至达不到15ng/mL(参见图116)。组织穿透性的显著改善，特别是考虑到剂量的减少，是无法提前预期的。

与其相应的S_P异构体(化合物III)相比，化合物II令人惊讶地稳定。如实施例7、表9所示，化合物II的熔点为约140℃+10℃，例如在141.5℃，而化合物III的熔点为约100℃+10℃，例如106.4℃。从比较两种化合物的单富马酸盐的XRPD数据中可以看出，化合物II也比化合物III更多结晶(参见实施例13、表37和图71，对比实施例15、表40和图77)。

仔细选择本发明的各个方面对于实现所需结果至关重要。一个重要方面是制剂。如本文所用的局部制剂包括半固体剂型，例如凝胶、乳膏、软膏、液体或固体剂型。固体剂型的非限制性实例包括可插入受累区域的片剂。

已经发现化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可以制备成用于局部给药的固体剂型。在一些实施例中，所述片剂制剂提供与凝胶制剂类似的组织穿透性(凝胶为55-85ng/mg，片剂为44-79ng/mg，图121)。

高结晶度可以促进药物化合物的分离和加工。与化合物III相比，化合物II显示出令人惊讶的低吸湿性。当暴露于40％-0-95％-0-45％相对湿度的循环时，化合物II保留约0.25％的水含量，并且XRPD模式不变(实施例21，表46)。暴露于相同条件下，化合物III保留约10％的水含量，增加了40倍。这些条件还导致XRPD模式失去其中一个峰，表明化合物III随着湿度变化而改变形态。化合物II相对于化合物III的吸湿性和稳定性优势令人惊讶，并且是无法提前预期的。

例如，可通过使化合物II重结晶(实施例13，表37)并且在合适的溶剂中平衡(实施例22)来制备化合物II模式1。在某些实施例中，可以将化合物II溶解于醇溶剂(例如，异丙醇)中，并且通过添加脂肪族溶剂(例如，庚烷)结晶为模式1。在某些实施例中，可以将化合物II溶解于醇溶剂(例如，乙醇)中，并且通过添加脂肪族溶剂(例如，庚烷)结晶为模式1。还可以通过在异丙醇、庚烷、水、丙酮、异丙醇:庚烷(3:10)、异丙醇:MTBE(1:3)和乙酸乙酯:甲苯(1:3)中平衡来制备化合物II模式I。

以多个步骤可以制备化合物III模式I(参见实施例15)。首先，将化合物III游离碱溶解于异丙醇。添加一当量的富马酸，引起沉淀。在添加庚烷之后，将混合物在升高的温度(例如，50℃)下搅拌20小时，然后冷却。将另外0.2当量的富马酸与庚烷一起添加，并且将所述混合物在升高的温度下搅拌至少约13小时。然后缓慢冷却所述悬浮液，直到达到低于约5℃，并且在该温度下搅拌至少约2天。通过过滤收集所得固体化合物III模式I。

可以通过重结晶化合物I单富马酸盐(实施例12，表31)、在合适的溶剂中平衡化合物I单富马酸盐或通过缓慢蒸发溶剂结晶来制备(实施例12、表32)化合物I(即，磷原子处的R和S对映异构体和氨基酸碳处的S立体异构体的混合物)单富马酸盐模式1。在某些实施例中，可以将化合物I单富马酸盐溶解于醇溶剂(例如，异丙醇)中，并通过添加脂肪族溶剂(例如，庚烷)结晶为模式1。在某些实施例中，可以将化合物I单富马酸盐溶解于醇溶剂(例如，异丙醇)中，并通过添加醚类溶剂(例如，甲基叔丁醚)结晶为模式1。在某些实施例中，可以通过在醚类溶剂(例如，四氢呋喃)和脂肪族溶剂(例如，庚烷)的混合物中平衡来产生化合物I单富马酸盐模式1。在某些实施例中，可以通过在室温下通过缓慢蒸发溶剂而结晶，来产生化合物I单富马酸盐模式1。用于对化合物I单富马酸盐模式1进行缓慢蒸发结晶的合适的溶剂包括但不限于丙酮、甲基乙基酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、异丙醇和四氢呋喃。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少3个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.6±0.2°、11.1±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、15.3±0.2°、18.1±0.2°、20.2±0.2°、23.1±0.2°、25.2±0.2°和27.0±0.2°(参见，实施例7)。

制备化合物I单富马酸盐的其他晶型形式，包括模式2、模式3和模式4。然而，这些晶型形式有时是不稳定的，并且甚至当从单富马酸盐制备时，形成半富马酸盐(化合物IV和化合物V的混合物)。

化合物I单富马酸盐在甲基乙基酮；丙酮；丙酮和庚烷；甲基乙基酮和庚烷；和乙醇和甲基叔丁基醚中的重结晶均产生半富马酸盐模式2。通过¹H NMR测量的化合物I作为游离碱与富马酸盐的比率为约1:0.5，例如1:0.52。在一个实施例中，模式2的特征在于包含至少3个选自以下的2θ值的XRPD图谱：4.3±0.2°、6.2±0.2°、9.0±0.2°、13.0±0.2°、17.7±0.2°、18.7±0.2°和25.3±0.2°(参见，实施例12)。

化合物I单富马酸盐在乙腈或乙腈和水中的重结晶提供了半富马酸盐模式3。过滤分离后通过¹H NMR测量的化合物I作为游离碱与富马酸盐的比率为约1:0.95，但在用水洗涤后，该比率降低至约1:0.76。在一个实施例中，模式3的特征在于包含至少3个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.5±0.2°、5.1±0.2°、6.2±0.2°、6.9±0.2°、10.2±0.2°、15.3±0.2°、17.6±0.2°、21.2±0.2°和28.9±0.2°(参见，实施例12)。化合物I单富马酸盐在丙酮和甲苯中的重结晶提供半富马酸盐模式4。通过¹H NMR测量的化合物I作为游离碱与富马酸盐的比率为约1:0.7，例如1:0.69。在一个实施例中，模式4的特征在于包含至少3个选自以下的2θ值的XRPD图谱：4.0±0.2°、6.0±0.2°、11.8±0.2°、13.2±0.2°、14.8±0.2°、17.7±0.2°、20.4±0.2°和25.2±0.2°(参见，实施例12)。由于单富马酸盐优于半富马酸盐的特性，选择化合物I单富马酸盐模式1进行进一步研究，因为它具有令人惊讶的稳定性和结晶度。

在示例性非限制性实施例中，提供了用于治疗HPV诱发的上皮内瘤变的方法，所述方法包括施用足以治疗瘤变的、有效量的、在局部制剂中的如本文所述的一种活性化合物或多种活性化合物的组合。

在示例性实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是含有从0.005mg至50mg、从0.05mg至40mg、从0.1mg至30mg、从0.5mg至20mg、从1mg至20mg、从1mg至15mg、从1mg至10mg的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的剂型。

在某些实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是含有从约0.001至约20mg、从约0.005至约10mg、从约0.01mg至约5mg、从约0.03mg至约1mg、从约0.05mg至约0.3mg、从约0.03mg至约0.07mg、从约0.05mg至约0.15mg或从约0.15mg至约0.45mg的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的剂型。

在某些实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是含有从约0.001毫克至约0.005毫克、从约0.005毫克至约0.01毫克、从约0.01毫克至约0.03毫克、从约0.03毫克至约0.25毫克、从约0.20毫克至约0.5毫克、从约0.4毫克至约1毫克、从约0.75毫克至约3毫克、从约1毫克至约10毫克、从约5毫克至约20毫克的剂型。在某些实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是包含约或至少0.005、0.01、0.03、0.05、0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.7mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的剂型。

特定剂量是0.05mg、0.1mg、0.2mg或0.3mg的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。在某些实施例中，0.05mg、0.1mg、0.2mg或0.3mg剂量的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，根据需要每周一次、两次或三次施用。在某些实施例中，0.05mg剂量的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III被施用由医疗保健提供者指定的时间，其中包括每日给药。

在某些实施例中，局部制剂每天施用两次、每天施用一次或每周施用几天(例如每周施用2或3天)，只要是实现所需结果所必需的。在某些实施例中，局部制剂以每周的时间表施用一、二、三、四、五、六或更多周。在某些方面，局部制剂以每周三个剂量的时间表施用两周、三周、四周、五周或六周。

在某些实施例中，可以在一个或多个治疗周期中施用化合物，所述治疗周期包括治疗期和停药期，其中治疗期包括施用如本文所述的化合物，随后是停药期(包括无治疗的时间段)，然后进行下一个治疗周期。在某些实施例中，停药期为从约一天至约六个月。在某些实施例中，停药期是在下一个治疗期之前的一周、二周、三周、四周、五周、六周、七周、八周或更长时间。在某些实施例中，施用多个治疗周期，例如一个、两个、三个、四个、五个或六个治疗周期。

不能很好地粘附到目标部位的剂型可能会脱落，从而干扰治疗。已发现粘附于目标部位并在低流体体积中迅速溶解的剂型。粘附到目标部位还可以防止暴露于非目标组织，后者可能会限制毒性、产生不希望的全身暴露和副作用。在低流体体积中快速软化、分解和/或崩解的剂型有利于使活性化合物快速释放到目标组织。在例如，小于约50μL、小于约100μL、小于约125μL、小于约150μL、小于约175μL、小于约200μL、小于约250μL、小于约500μL、小于约1mL或小于约2mL流体中崩解的剂型有助于药物穿透进目标部位。

在某些实施例中，剂型是半固体，例如凝胶或乳膏剂。在某些实施例中，剂型是片剂。在某些实施例中，剂型在约一至约十秒内崩解。在某些实施例中，剂型在约十秒至一分钟内崩解，在某些实施例中，剂型在约一分钟至约一小时内崩解。在某些实施例中，剂型在一至六小时内崩解。

剂型的物理尺寸会影响剂型的有效性。更薄的片剂提供更大的表面积与体积比，并且可以更快地降解并更好地覆盖目标区域。在某些实施例中，剂型的最小尺寸是厚度小于3毫米。

剂型的制剂对于将活性剂充分施用到上皮内组织中是非常重要的。例如，制剂可以制备成片剂、重构粉末、干粉剂、半固体剂型、薄膜或阴道药栓(即阴道栓剂)使用。

片剂制剂应显示粘膜粘着性和亲和性(substantivity)，并包括具有增溶、产生侵蚀(用于崩解)、多孔性(用于吸水)和增粘(以使药物保持在目标部位)特性的赋形剂。

引起固体剂型快速崩解以覆盖宫颈、肛门、阴茎、肛周、外阴、或阴道区域的赋形剂的实例包括但不限于甘露醇、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、磷酸钙、磷酸钠、碳酸氢钠、柠檬酸、马来酸、己二酸或富马酸。可增强崩解和覆盖受累区域的赋形剂的实例包括但不限于乙醇酸淀粉钠、预胶凝淀粉、交聚维酮和交联羧甲基纤维素钠。可用于本发明的粘膜粘着赋形剂包括但不限于微晶纤维素、聚卡波非、羟甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素和PVP。

片剂制剂的非限制性实例包括但不限于微晶纤维素、交聚维酮、硬脂酸镁、二氧化硅、聚氧化乙烯和甘露醇。片剂制剂的另一个非限制性实例具有微晶纤维素、硬脂酸镁和甘露醇。

替代性制剂是重构粉末或干粉剂。这些制剂可以包括上述赋形剂，并且在某些实施例中可以加入黄原胶。作为非限制性实例，干粉剂制剂可以包括但不限于黄原胶、甘露醇、二氧化硅和苯甲酸钠。

半固体剂型可以包括，例如，粘膜粘着聚合物、溶解度/穿透增强剂、亲脂性增溶剂和穿透增强剂。粘膜粘着聚合物，例如可以是但不限于卡波姆、聚乙二醇、交聚维酮、羟丙甲纤维素、聚卡波非和/或羟乙基纤维素。溶解度/穿透增强剂可以是例如但不限于，聚乙二醇6硬脂酸酯I型、硬脂酸乙二醇酯和聚乙二醇32硬脂酸酯I型的混合物、鲸蜡醇、硬脂醇、聚山梨醇酯80、月桂基硫酸钠、甘油单酯和甘油二酯、山梨醇酐单硬脂酸酯、甘油异硬脂酸酯、聚乙二醇15羟基硬脂酸酯、聚15羟基硬脂酸酯、聚乙二醇40氢化蓖麻油、辛基十二烷醇和/或大豆卵磷脂。亲脂性增溶剂包括但不限于轻质矿物油、矿物油、白蜡和硅流体(siliconefluid)。穿透增强剂包括但不限于丙二醇、二乙二醇单乙基醚(transcutol)、油酸、肉豆蔻酸异丙酯、丙二醇甘油单油酸酯、丙二醇单辛酸酯、PEG-8蜂蜡、鲸蜡醇、硬脂酸、鲸蜡醇棕榈酸酯和/或鲸蜡硬脂醇。

半固体制剂的非限制性实例包括例如，卡波姆、丙二醇、山梨酸、EDTA和水。半固体制剂的另一个非限制性实例包括卡波姆；矿物油；聚乙二醇6硬脂酸酯I型、硬脂酸乙二醇酯、聚乙二醇32硬脂酸酯I型的混合物；对羟基苯甲酸酯；丙二醇、EDTA和/或水。

可以用例如但不限于羟丙甲纤维素、聚乙二醇、聚甲基丙烯酸酯、微晶纤维素、黄原胶、瓜尔胶和/或聚乙烯吡咯烷酮生产薄膜。

可以用例如但不限于硬化脂(例如，Ovucire、Witepsol、Supposi-Base)、聚乙二醇(polyethylene glycol或macrogol)、可可油和甘油配制阴道药栓(阴道栓剂)。阴道药栓的非限制性实例可以从Witepsol H 15或Ovucire WL 3264制备。

因此，本发明包括至少以下的特征：

(i)化合物I单富马酸盐；

(ii)化合物II；

(iii)化合物III；

(iv)化合物IV；

(v)化合物V；

(vi)如(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)所述的化合物，呈对映异构体富集的或对映体纯的形式；

(vii)如(ii)所述的化合物，其中按重量计R的量例如高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％，或甚至85％或更高；

(viii)如(vii)所述的化合物，其中在手性碳处S-立体构型的量高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％、或甚至85％或更高；

(ix)对映体纯的(R,S)化合物I；

(x)对映体纯的(S,S)化合物I；

(xi)R,S对映体纯的化合物II，呈高度结晶形式；

(xii)化合物II模式1；

(xiii)在第III部分更详细描述的晶型形式。

(xiv)包含有效量的如本文所述的活性化合物的局部药物组合物或其晶型形式和药学上可接受的载剂；

(xv)如(xiv)所述的局部制剂，所述制剂呈片剂形式；

(xvi)如(xv)所述的片剂剂型，所述剂型包含化合物I单富马酸盐、甘露醇、多晶纤维素和硬脂酸镁；

(xvii)如(xv)所述的片剂剂型，所述剂型包含化合物II、甘露醇、多晶纤维素和硬脂酸镁；

(xviii)如(xiv)所述的局部制剂，所述制剂呈半固体剂型的形式；

(xix)如(xviii)所述的半固体剂型，所述半固体剂型包含化合物I单富马酸盐、轻质矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、63、水、EDTA、对羟基苯甲酸甲酯和974P；

(xx)如(xviii)所述的半固体剂型，所述半固体剂型包含化合物I单富马酸盐、水、EDTA、苯甲酸甲酯、974P、丙二醇和任选地山梨酸；

(xxi)如(xviii)所述的半固体剂型，所述半固体剂型包含化合物II、轻质矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、63、水、EDTA、对羟基苯甲酸甲酯和974P；

(xxii)如(xviii)所述的半固体剂型，所述半固体剂型包含化合物II、水、EDTA、苯甲酸甲酯、974P、丙二醇和任选地山梨酸；

(xxiii)如(xiv)所述的局部制剂，所述制剂为重构粉末形式；

(xxiv)如(xiv)所述的局部制剂，所述制剂为干粉剂型形式；

(xxv)如(xiv)所述的局部制剂，所述制剂为薄膜形式；

(xxvi)如(xiv)所述的局部制剂，所述制剂为阴道药栓形式；

(xxvii)如(xv)-(xxvi)所述用于递送至宫颈、阴道、外阴、阴茎、肛周区和/或肛门的有利剂型；

(xxviii)一种治疗HPV诱发的感染或相关联病症，包括但不限于上皮内瘤变，如宫颈上皮内瘤变、阴道上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变或阴茎上皮内瘤变的方法，所述方法包括向有需要的宿主施用有效量的化合物晶型形式或向有需要的宿主施用如以上实施例中任一项所述的药物组合物；

(xxix)以上任一项中所述的实施例在制备用于在有需要的宿主中治疗HPV感染或相关联病症的药物中的用途，所述病症包括但不限于上皮内瘤变，例如宫颈上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变或阴道上皮内瘤变；

(xxx)实施例(i)-(xxvii)用于在有需要的宿主中治疗HPV感染或相关联病症，所述病症包括但不限于上皮内瘤变，例如宫颈上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变或阴道上皮内瘤变；

(xxxi)以上实施例中任一项，其中宿主是人类；

(xxxii)以上所述的用于治疗上皮内瘤变的任何局部制剂提供了含有以下的剂型：从0.005mg至50mg、从0.05mg至40mg、从0.1mg至30mg、从0.05mg至0.3mg、从0.5mg至20mg、从1mg至20mg、从1mg至15mg、从1mg至10mg如实施例(i)-(v)所述的化合物和在某些实施例中约或至少0.005、0.01、0.03、0.05、0.1mg、0.3mg.0.5mg、0.7mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg。

(xxxiii)以上所述的用于治疗上皮内瘤变的任何局部制剂提供了含有以下的剂型：从约0.001至约20mg、从约0.005至约10mg、从约0.01mg至约5mg、从约0.03mg至约1mg、从约0.05mg至约0.3mg、从约0.03mg至约0.07mg、从约0.05至约0.15mg或从约0.15mg至约0.45mg的如实施例(i)-(v)所述的化合物。

(xxxiv)如实施例(xiv)至(xxvii)所述的局部制剂，每天施用两次、每天施用一次或每周施用几天(例如每周施用2或3天)，只要是实现所需结果所必需的；

(xxxv)如实施例(xiv)至(xxvii)所述的局部制剂，以每周的时间表施用一、二、三、四、五、六或更多周。

(xxxvi)如(xxviii)所述的方法，其进一步包括在将所述剂型插入受累区域之前，向所述剂型应用润滑方式；

(xxxvii)如(xxxvi)所述的方法，其中所述润滑剂选自水、基于甘油的润滑剂和基于羟乙基纤维素的润滑剂；和

(xxxviii)制备如实施例(xiv)至(xxviii)所述的局部制剂的方法；

(xxxix)一种治疗HPV诱发的感染或相关联病症的方法，所述病症包括但不限于上皮内瘤变，例如宫颈上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变或阴道上皮内瘤变，所述方法包括向有需要的宿主施用有效量的如实施例(i)-(xxii)所述的化合物，在施用所述化合物之前、期间或之后与对所述目标组织进行的外科手术治疗组合；

(xl)如(xxxix)所述的方法，其包括对所述目标组织进行外科手术治疗，随后向有需要的宿主施用有效量的如实施例(i)-(xxii)所述的化合物；

(xli)如(xxxiv)所述的方法，其包括向有需要的宿主施用有效量的如实施例(i)-(xxii)所述的化合物，随后对所述目标组织进行外科手术治疗；

(xlii)如(xxxiv)所述的方法，其包括在与对所述目标组织进行外科手术治疗的时间临近时或与在大约相同的时间向有需要的宿主施用有效量的如实施例(i)-(xxii)所述的化合物；

(xliii)如实施例(xxxiv)-(xxxvii)所述的方法，其中对所述目标组织的所述外科手术治疗是切除；

(xliv)如实施例(xxxiv)-(xxxvii)所述的方法，其中对所述目标组织的所述外科手术治疗是消融；

(xlv)如(xliii)所述的方法，其中所述切除是环形电切除术(LEEP)；

(xlvi)如(xliii)所述的方法，其中所述切除是转化区大环切除术(LLETZ)；

(xlvii)如(xliii)所述的方法，其中所述切除是刀锥活组织检查；

(xlviii)如(xliii)所述的方法，其中所述切除是激光锥形切除术；

(xlix)如(xliv)所述的方法，其中所述消融是激光消融；和

(l)如(xliv)所述的方法，其中所述消融是冷冻消融。

(li)用于制备如本文所述的化合物II的方法；和

(lii)用于制备如本文所述的晶型形式的方法。

附图说明

图1是在庚烷中的平衡实验(实施例2，表2，实验EQ10)、在丙酮/甲基叔丁基醚(MTBE)系统中抗溶剂沉淀(实施例2，表3，实验AS3)、及在实施例3中所述的化合物I模式1的扩大制备中获得的化合物I模式1的XRPD衍射图的比较。

图2是在庚烷中的平衡实验(实施例2，表2，实验EQ10)中获得的化合物I模式1的DSC热谱图。

图3是在庚烷中的平衡实验(实施例2，表2，实验EQ10)中获得的化合物I模式1的TGA热谱图。

图4是实施例3中制备的化合物I模式1的XRPD衍射图。

图5是实施例3中制备的化合物I模式1的DSC热谱图。

图6是实施例3中制备的化合物I模式1的TGA热谱图。

图7是富马酸模式、化合物IV模式1(在实施例7中获得)、化合物IV模式1与富马酸模式的混合物(样品RC2-EA，在实施例5中获得，实验RC2)和化合物IV模式1(实施例5，样品RC3-EA)的XRPD衍射图的比较。

图8是化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例5，样品RC7-IPA)和琥珀酸模式的XRPD衍射图的比较。

图9是样品RC7-EA的化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例5，表5)和样品AS7-B的化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例5，表6)的XRPD衍射图的比较。

图10是富马酸模式、化合物I单富马酸盐模式1(实施例5，表6，样品AS2-B)和化合物IV模式1(实施例5，样品AS3-B)的XRPD衍射图的比较。

图11是化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例5，样品AS7-B)和游离琥珀酸模式的XRPD衍射图的比较。

图12是化合物I半富马酸盐模式1(实施例6，样品RC13)的XRPD衍射图。

图13是化合物I半富马酸盐模式1(实施例6，样品RC13)的DSC热谱图。

图14是化合物I半富马酸盐模式1(实施例6，样品RC13)的TGA热谱图。

图15是化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例6，样品RC14)的XRPD衍射图。

图16是化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例6，样品RC14)的DSC热谱图。

图17是化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例6，样品RC14)的TGA热谱图。

图18是化合物I单富马酸盐模式1(实施例6，样品RC16)和化合物I半富马酸盐模式1(实施例6，样品RC-13)的XRPD衍射图的比较。

图19是化合物I半琥珀酸盐模式1(实施例6，样品RC17)和化合物I单琥珀酸盐模式1(实施例6，样品RC-14)的XRPD衍射图的比较。

图20是化合物I半琥珀酸盐模式1(实施例6，样品RC17)的DSC热谱图。

图21是化合物I半琥珀酸盐模式1(实施例6，样品RC17)的TGA热谱图。

图22是化合物I单富马酸盐模式1(实施例6，样品RC18)和化合物I单富马酸盐模式1(实施例6，样品RC-16)的XRPD衍射图的比较。

图23是化合物I半富马酸盐模式1和实施例7中获得的化合物I单富马酸盐模式1(小规模制备)的XRPD衍射图的比较。

图24是实施例7中获得的化合物I半富马酸盐模式1的DSC热谱图。

图25是实施例7中获得的化合物I半富马酸盐模式1的TGA热谱图。

图26A是化合物I单富马酸盐模式1(小规模制备，实施例7)的DSC热谱图，记录仪以加热速率为10℃/min进行。

图26B是化合物I单富马酸盐模式1(小规模制备，实施例7)的DSC热谱图，记录仪以加热速率为2℃/min进行。

图26C是用于小规模制备样品(实施例7)的化合物I单富马酸盐模式1的DSC循环(DSC循环，0-150℃、150-0℃、0-250℃，10℃/min)。

图27是用于小规模制备样品(实施例7)的化合物I单富马酸盐模式1的TGA热谱图。

图28是在测试之前用化合物I单富马酸盐模式1的原始样品，在如实施例8中所述的25℃/84％RH(2天，敞式容器)、25℃/92％RH(1周，敞式容器)、40℃/75％RH(1周，敞式容器)和60℃(1周，密封容器)下的稳定性测试实验中获得的化合物I单富马酸盐模式1的XRPD衍射图的比较。

图29是针对化合物I模式1(实施例10)的动态气相吸附(DVS)图和质量图(massplot)中的DVS变化。

图30是在DVS研究之前和之后(实施例10)，化合物I模式1(在实施例3中获得)的XRPD衍射图的比较。

图31是针对化合物I半富马酸盐模式1(实施例10)的动态气相吸附(DVS)图和质量图中的DVS变化。

图32是在DVS研究之前和之后(实施例10)，化合物I半富马酸盐模式1(在实施例7中获得)的XRPD衍射图的比较。

图33是针对化合物I单富马酸盐模式1(实施例10)的动态气相吸附(DVS)图和质量图中的DVS变化。

图34是在DVS研究之前和之后(实施例10)，化合物I单富马酸盐模式1(在实施例7中获得)的XRPD衍射图的比较。

图35是在加热至106℃之前和之后，在实施例11(大规模)中获得的化合物I单富马酸盐模式1的XRPD衍射图的比较。

图36A是化合物I单富马酸盐模式1(实施例11)的DSC热谱图，以加热速率为10℃/min记录。

图36B是化合物I单富马酸盐模式1(大规模制备，实施例11)的DSC热谱图，以加热速率为2℃/min记录。

图36C是化合物I单富马酸盐模式1(在实施例11中获得)的DSC热谱图。

图37是化合物I单富马酸盐模式1(在实施例11中获得)的TGA热谱图。

图38是化合物I单富马酸盐模式1、半富马酸盐模式2、半富马酸盐模式3、从在25℃下的水中持续2周的平衡实验中获得的模式4以及富马酸模式的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图39是从在25℃下的水中持续2周和3周的平衡实验中获得的化合物I模式4的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图40是在25℃下的水中持续2周的平衡实验中获得的化合物I模式4的DSC热谱图(在实施例12中获得)。

图41是在25℃下的水中持续3周的平衡实验中获得的化合物I模式4的DSC热谱图(在实施例12中获得)。

图42是在25℃下的水中持续2周的平衡实验中获得的化合物I模式4的TGA热谱图(在实施例12中获得)。

图43是在25℃下的水中持续3周的平衡实验中获得的化合物I模式4的TGA热谱图(在实施例12中获得)。

图44是在25℃下持续3周的平衡实验EQ2(在乙腈中)和EQ15(在2.9:97.1v/v水/乙腈中)中获得的富马酸模式和化合物I半富马酸盐模式C的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图45是在25℃下在乙腈中持续2周的平衡实验中获得的化合物I半富马酸盐模式C的DSC热谱图(在实施例12中获得)。

图46是在25℃下的乙腈中持续2周的平衡实验中获得的化合物I半富马酸盐模式C的TGA热谱图(在实施例12中获得)。

图47是在25℃下持续3周的平衡实验EQ3(在甲基乙基酮中)、EQ4(在丙酮中)和EQ7(在1:1v/v丙酮/庚烷中)中获得的化合物I半富马酸盐模式2的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图48是在25℃下的甲基乙基酮中持续2周的平衡实验中获得的化合物I半富马酸盐模式2的DSC热谱图(在实施例12中获得)。

图49是在25℃下的甲基乙基酮中持续2周的平衡实验中获得的化合物I半富马酸盐模式3的TGA热谱图(在实施例12中获得)。

图50是富马酸和化合物I单富马酸盐模式1与在25℃下持续3周的平衡实验EQ5(在异丙醇中)、EQ8(在1:1v/v异丙醇/庚烷中)、EQ9(在1:1v/v异丙醇/甲苯中)、EQ10(在1:3v/v异丙醇/甲基叔丁基醚中)和EQ12(在1:3v/v乙醇/庚烷中)获得的未知模式的混合物的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图51是化合物I单富马酸盐模式1与在25℃下的异丙醇中持续2周的平衡实验EQ5中获得的未知模式的混合物的DSC热谱图(在实施例12中获得)。

图52是化合物I单富马酸盐模式1与在25℃下的异丙醇中持续2周的平衡实验EQ5中获得的未知模式的混合物的TGA热谱图(在实施例12中获得)。

图53是在25℃下持续2周和3周的平衡实验EQ6(在1:1v/v丙酮/甲苯中)中获得的化合物I半富马酸盐模式5的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图54是在25℃下持续2周的平衡实验EQ6(在1:1v/v丙酮/甲苯中)中获得的化合物I半富马酸盐模式5的DSC热谱图(在实施例12中获得)。

图55是在25℃下持续3周的平衡实验EQ6(在1:1v/v丙酮/甲苯中)中获得的化合物I半富马酸盐模式5的DSC热谱图(在实施例12中获得)。

图56是在25℃下持续2周的平衡实验EQ6(在1:1v/v丙酮/甲苯中)中获得的化合物I半富马酸盐模式5的TGA热谱图(在实施例12中获得)。

图57是在25℃下持续3周的平衡实验EQ6(在1:1v/v丙酮/甲苯中)中获得的化合物I半富马酸盐模式5的TGA热谱图(在实施例12中获得)。

图58是在25℃下持续2周的平衡实验(实施例12中的程序)EQ11(在1:3v/v四氢呋喃/庚烷中)、EQ13(在1:3v/v乙酸乙酯/甲苯中)、EQ14(在1:3v/v乙醇/甲苯中)中获得的化合物I单富马酸盐模式1与化合物I单富马酸盐模式1(材料在实施例7中获得)的XRPD衍射图的比较。

图59是在25℃下持续3周的平衡实验s EQ11(在1:3v/v四氢呋喃/庚烷中)、EQ13(在1:3v/v EA/甲苯中)、EQ14(在1:3v/v乙醇/甲苯中)中获得的化合物I单富马酸盐模式1的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图60是化合物I单富马酸盐模式1和EQ16(在1:4v/v异丙醇/庚烷中)、EQ5(在异丙醇中)在25℃下持续2周的平衡实验中获得的未知模式以及在实施例7中获得的化合物I单富马酸盐模式1的混合物的XRPD衍射图(在实施例12中获得)的比较。

图61是参考富马酸模式、化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)、化合物I单富马酸盐模式2(在实验AS1、实施例12中通过用庚烷抗溶剂从丙酮溶液中沉淀获得)、化合物I单富马酸盐模式2(在实验AS4、实施例12中通过用庚烷抗溶剂从甲基乙基酮溶液中沉淀获得)以及在实验AS2、实施例12中获得的富马酸模式的XRPD衍射图的比较。

图62是化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)、化合物I单富马酸盐模式2(在实验AS6、实施例12中用庚烷抗溶剂从乙醇溶液沉淀获得)和化合物I单富马酸盐模式2(在实验AS7、实施例12中用庚烷抗溶剂从四氢呋喃溶液沉淀获得)的XRPD衍射图的比较。

图63是化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)与如在实施例12，表32中所述，通过在室温下结晶，通过从丙酮、甲基乙基酮和乙酸乙酯缓慢蒸发获得的化合物I单富马酸盐模式1的XRPD衍射图的比较。

图64是化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)与如在实施例12，表32中所述，通过在室温下结晶，通过从甲醇、乙醇、异丙醇和四氢呋喃缓慢蒸发获得的化合物I单富马酸盐模式1的XRPD衍射图的比较。

图65是参考富马酸模式；化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)；和通过从热的甲基乙基酮饱和溶液结合，通过缓慢冷却获得的化合物I单富马酸盐模式2；通过从丙酮热饱和的溶液结晶，通过缓慢冷却获得的化合物I单富马酸盐模式2；和通过从乙腈热饱和的溶液结晶，通过缓慢冷却获得的化合物I单富马酸盐模式3的XRPD衍射图的比较。

图66是化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)；通过从热的水饱和溶液结晶，通过缓慢冷却获得的化合物I单富马酸盐模式1；和通过从在乙醇/甲苯(1/1v/v)中的热饱和的溶液结晶，通过缓慢冷却获得的化合物I单富马酸盐模式1的XRPD衍射图的比较(实施例12，表33)。

图67是化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)；通过快速冷却从热的丙酮饱和溶液结晶获得的化合物I单富马酸盐模式2；和通过快速冷却从在甲基乙基酮中的热饱和的溶液结晶获得的化合物I单富马酸盐模式2的XRPD衍射图的比较(实施例12，表34)。

图68是参考富马酸模式；化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)；通过快速冷却从热的水饱和溶液结晶获得的化合物I单富马酸盐模式1；通过快速冷却从在乙腈中的热饱和的溶液结晶获得的化合物I单富马酸盐模式3；和通过快速冷却从在乙醇/甲苯(1/1v/v)中的热饱和的溶液结晶获得的化合物I单富马酸盐模式1的XRPD衍射图的比较(实施例12)。

图69是化合物I单富马酸盐模式1(加热至106℃)的加热-冷却-加热DSC热谱图(实施例12，表35)。

图70是化合物I单富马酸盐模式1(加热至130℃)的加热-冷却-加热DSC热谱图(实施例12，表35)。

图71是化合物II模式1的XRPD衍射图(实施例13)。

图72是化合物II模式1的DSC热谱图(实施例13)。

图73是化合物II模式1的TGA热谱图(实施例13)。

图74是化合物IV模式1的XRPD衍射图(实施例14)。

图75是化合物IV模式1的DSC热谱图(实施例14)。

图76是化合物IV模式1的TGA热谱图(实施例14)。

图77是化合物III模式1的XRPD衍射图(实施例15)。

图78是化合物III模式1的DSC热谱图(实施例15)。

图79是化合物III模式1的TGA热谱图(实施例15)。

图80是化合物III模式2的XRPD衍射图(实施例16)。

图81是化合物III模式2的DSC热谱图(实施例16)。

图82是化合物III模式2的TGA热谱图(实施例16)。

图83是化合物V模式1的XRPD衍射图(实施例17)。

图84是化合物V模式1的DSC热谱图(实施例17)。

图85是化合物V模式1的TGA热谱图(实施例17)。

图86是化合物V模式2的XRPD衍射图(实施例18)。

图87是化合物V模式2的DSC热谱图(实施例18)。

图88是化合物V模式2的TGA热谱图(实施例18)。

图89是从容积稳定性研究(bulk stability study)获得的化合物II模式1的XRPD衍射图(实施例19)的比较。

图90是从容积稳定性研究获得的化合物III模式2的XRPD衍射图(实施例19)的比较。

图91是针对化合物II模式1的动态气相吸附(DVS)图和质量图中的DVS变化(实施例21)。

图92是在DVS研究之前和之后化合物II模式1的XRPD衍射图的比较(实施例21)。

图93是针对化合物III模式2的动态气相吸附(DVS)图和质量图中的DVS变化(实施例21)。

图94是在DVS研究之前和之后化合物III模式2的XRPD衍射图的比较(实施例21)。

图95是在实施例22、实验PS4中从化合物II模式1获得的化合物IV模式1的XRPD衍射图。

图96是在实施例22、实验PS4中从化合物II模式1获得的化合物IV模式1的DSC热谱图。

图97是在实施例22、实验PS4中从化合物II模式1获得的化合物IV模式1的TGA热谱图。

图98是在实施例22、实验PS5中从化合物II模式1获得的化合物IV模式2的XRPD衍射图。

图99是在实施例22、实验PS5中从化合物II模式1获得的化合物IV模式2的DSC热谱图。

图100是在实施例22、实验PS5中从化合物II模式1获得的化合物IV模式2的TGA热谱图。

图101是在实施例22、实验PS3中从化合物III模式2获得的化合物III模式3的XRPD衍射图。

图102是在实施例22、实验PS3中从化合物III模式2获得的化合物III模式3的DSC热谱图。

图103是在实施例22、实验PS3中从化合物III模式2获得的化合物III模式3的TGA热谱图。

图104是在实施例22、实验PS4中从化合物III模式2获得的化合物III模式4的XRPD衍射图。

图105是在实施例22、实验PS4中从化合物III模式2获得的化合物III模式4的DSC热谱图。

图106是在实施例22、实验PS4中从化合物III模式2获得的化合物III模式4的TGA热谱图。

图107是在实施例22、实验PS5中从化合物III模式2获得的化合物III模式5的XRPD衍射图。

图108是在实施例22、实验PS5中从化合物III模式2获得的化合物III模式5的DSC热谱图。

图109是在实施例22、实验PS5中从化合物III模式2获得的化合物III模式5的TGA热谱图。

图110是在实施例22、实验PS9中从化合物III模式2获得的化合物III模式6的XRPD衍射图。

图111是在实施例22、实验PS9中从化合物III模式2获得的化合物III模式6的DSC热谱图。

图112是在实施例22、实验PS8中从化合物II模式1获得的化合物IV模式1的XRPD衍射图。

图113是在实施例22、实验PS1中从化合物III模式2获得的化合物V模式1与在实施例18中获得的化合物V模式1的XRPD衍射图的比较。

图114是通过实施例25的单晶X射线衍射分析测定的化合物II模式1的分子结构。

图115是通过实施例25的单晶X射线衍射分析测定的化合物II模式1的分子结构。在模式1的单晶形式中，游离碱的质子化N5-原子与富马酸阴离子的O7-原子之间存在分子间相互作用(N(5)–H(5)···O(7))。

图116是一种阴道组织体外渗透(permeation)试验，将化合物II与ABI-1968进行比较。柱A显示0.1％化合物II凝胶在猪阴道组织中的组织穿透性。柱B和C显示在人类宫颈组织中0.1％化合物II凝胶的组织穿透。柱D显示6％ NMP中1％ ABI-1968制剂在猪阴道组织中的组织穿透性。柱E显示1％ ABI-1968纳米悬浮液在猪阴道组织中的组织穿透性。柱F显示6％ NMP中3％ ABI-1968制剂在猪阴道组织中的组织穿透性。柱G显示20％ NMP中3％ABI-1968制剂在猪阴道组织中的组织穿透性。ABI-1968穿透组织的程度要小得多，这阻碍了化合物到达感染HPV的细胞的能力。这可能是ABI-1968在临床研究中表现的一个促成因素。令人惊讶的是，化合物II在猪和人组织中均显示出高组织穿透性。高组织穿透性可能导致抗HPV的高活性。这描述于实施例41中。

图117显示制备实施例29中所述的局部用乳膏制剂的工艺的流程图。

图118显示制备实施例29中所述的局部用凝胶制剂的工艺的流程图。

图119显示制备实施例30中所述的片剂制剂的工艺的流程图。

图120是如实施例12中所述的具有中等结晶度的(S,S)-化合物I的XRPD衍射图。

图121是比较如实施例41所述的局部用凝胶和局部用片剂剂型的组织穿透性的柱状图。所述片剂剂型产生的组织穿透性与所述局部用凝胶相似，组织中的化合物平均为58ng/mg。

图122描绘了化合物I单富马酸盐、化合物II和化合物III的结构。这些化合物的合成参见实施例26-28。

具体实施方式

已发现用于治疗HPV感染或与HPV感染相关的疾病或病症(例如HPV诱发的瘤变，包括但不限于宫颈上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变和阴道上皮内瘤变)的有效组合物需要与选择多个方面共同作用的组合才能达到所希望的结果。有必要选择具有有利的亲脂性和组织穿透特性的、与所选药学上可接受的盐(任选地以有利的晶型形式)组合的合适化合物，以实现长期寻求的以有效量穿透上皮分层组织以递送活性剂的能力。在多次失败后，需要多年的研究来解决这个问题，以造福全球患有可能癌变的上皮间瘤变的患者.

特别地，发现递送活性剂的关键的化合物是以下的具体盐：

化合物I是(乙基(((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)-磷酰基)-L-丙氨酸酯)。转让给加利福尼亚大学董事会的美国专利号9,801,884和11,344,555总体上要求保护化合物I和药学上可接受的盐以及使用所述化合物和盐用于治疗乳头瘤病毒感染的方法。化合物I是无环核苷酸膦酸酯，可代谢为已知的强效抗病毒化合物(PMEG；((9-[2-膦酰甲氧基)乙基)鸟嘌呤]))，但具有较差的细胞渗透性和使用受限的全身毒性。受让人发现了如何改进前药的局部递送方式，使其迅速进入上皮细胞，这是一项迄今为止具有挑战性的任务，也是ABI-1968失败的任务。

化合物I(乙基(-((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)-(苄氧基)磷酰基)-L-丙氨酸酯)具有两个手性中心，一个在磷原子处，并且一个在氨基酸部分，其中任何一个都可以是R或S立体构型。因此，化合物I具有四个立体异构体。虽然美国专利号9,801,884和11,344,555总体上描述了化合物I，但这些专利并未涉及磷原子的潜在立体化学。如本文进一步讨论的，已发现在磷上具有R-立体化学并且在氨基酸碳上具有S-立体化学的化合物I的立体异构体具有优于其他三种立体异构体的特性。

在非限制性实施例中，化合物I的有利的盐(例如富马酸盐)用作(R,S)和(S,S)非对映异构体的混合物，其中第一个R/S指定磷原子处的立体化学，并且第二个S是氨基酸部分(对应于具有S-构型的L-丙氨酸残基)中碳的立体化学。虽然可以使用提供所需结果的任何比例的非对映异构体，但(R,S)非对映异构体最为突出。在其他实施例中，磷原子处的R与S对映异构体的比率为约1:1。在某些方面，所述化合物在磷原子处呈R对映异构体富集的，其中按重量计R的量例如高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％，或甚至85％或更高。

对应于天然氨基酸构型的手性碳上的S-立体构型在本发明中是有利的。在其他方面，按重量计S的量例如高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％，或甚至85％或更高。在替代实施例中，所述手性碳的R立体构型占主导地位，并且高于约50％，或等于或高于约60％、70％、75％、80％，或甚至85％或更高。

因此，在主要方面，本发明包括任选地在药学上可接受的载剂中施用如本文所述的有效量的(R_P,S_C)乙基(((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)-磷酰基)-L-丙氨酸的富马酸盐(化合物II)。本发明提供一种用于治疗与人乳头瘤病毒(HPV)相关的疾病的无环核苷酸药物盐、方法、组合物和剂型。

所述化合物、组合物和剂型也可用于治疗与HPV病毒暴露或感染相关或因其发生的病症。例如，活性化合物可用于治疗宫颈癌前病变、宫颈上皮内瘤变、阴道癌、外阴癌、阴茎癌、肛周癌、和肛门上皮内瘤变、宫颈癌、直肠癌、阴茎癌、阴道癌和口咽癌。

所述活性化合物和组合物还可用于治疗由一系列HPV类型引起的感染。大多数致癌HPV类型来自α-7和α-9种类，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82类型。最常见的致癌HPV类型是16和18。HPV-16和HPV-18被报道为是50％宫颈癌的原因；并且90％性病疣由HPV-6和HPV-11引起(World Health Organization,“Cervical Cancer”https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cervical-cancer)。感染一种基因型并不排除以后感染不同基因型。

在一个实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗HPV-16。在一个实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗HPV-18。在一个实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗高危型HPV感染。在一个实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗HPV类型31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73或82。

在一个实施例中，还可以预防性地使用包含该化合物的化合物、制剂或固体剂型，以预防或延缓HPV阳性或已暴露于HPV的个体的临床疾病进展。

特别是，已发现化合物II具有优越的类药物和药理特性。

化合物II在磷原子处具有R-立体化学，其已通过X-射线晶体学证实(实施例25，参见图114和图121)。在替代实施例中，化合物II可以以任何所需比例的磷R-和S-对映异构体的形式使用，包括高达纯的对映异构体。在一些实施例中，化合物II以至少90％不含相反的对映异构体的形式使用，并且可以至少98％、99％甚至100％不含相反的对映异构体。除非另有说明，对映异构体纯的化合物II至少90％不含相反的对映异构体。在某些实施例中，化合物II用作异构体的外消旋混合物。此外，在一个替代实施例中，磷酰亚胺酸盐的氨基酸可以是D-或L-构型，或其混合物，包括外消旋混合物。

如果磷酰胺具有手性，则可以提供R或S手性磷衍生物或其混合物，包括对映异构体富集形式(包括外消旋混合物在内)。这些立体构型的所有组合都是本文所述发明的替代实施例。在另一个实施例中，化合物I、化合物II或化合物III的至少一个氢原子可以被氘代替。

在某些实施例中，化合物I可以是：

或其药学上可接受的盐。在某些实施例中，化合物II可以是

在某些实施例中，化合物III可以是

I.(R_P,S_C)乙基(((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)乙氧基)甲基)(苄氧基)磷酰基)-L-丙氨酸酯(化合物II)的富马酸盐

在某些实施例中，本发明的活性化合物为化合物II，其可以以药学上可接受的组合物或其固体剂型提供。在一个实施例中，化合物II是非晶态固体。在另一个实施例中，化合物II是结晶固体。

化合物II的合成

本发明还包括用于制备化合物I的富马酸盐(例如化合物II)的非限制性说明性方法，其包括

(i)将化合物I R_P,S_C异构体溶解在含有机溶剂(例如，丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、四氢呋喃或乙腈等)的烧瓶或容器中的第一步；

(ii)在环境温度或稍微升高或降低的温度(例如23℃-55℃)下，以特定摩尔比(例如0.5:1.0、1.0:1.0或1.5:1)将富马酸添加到步骤(i)的R_P,S_C化合物I的溶液中；

(iii)在环境温度或稍微升高或降低的温度下搅拌步骤(ii)的反应；

(iv)任选地用化合物II的晶体接种步骤(iii)的溶液；

(v)添加第二有机溶剂以诱导结晶，例如，戊烷、正己烷、庚烷、石油醚、甲基叔丁基醚、乙醚或水；

(vi)任选地在环境温度或稍微升高或降低的温度下搅拌所得溶液；

(vii)将所得溶液冷却至降低的温度，例如约0℃-10℃，然后在该温度下搅拌溶液；

(viii)过滤所得固体；和

(ix)任选地在减压和升温下干燥固体，例如在或至少在30℃、35℃、40℃、45℃或50℃下。

在某些实施例中，以上步骤(i)在异丙醇中进行。此外，步骤(v)中的第二有机溶剂可以是例如庚烷。

在一个实施例中，将化合物I R_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的乙醇中。在一个实施例中，将化合物I R_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的甲醇中。在一个实施例中，将化合物I R_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的乙腈中。在另外的实施例中，将化合物I R_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的四氢呋喃中。

在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是戊烷。在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是己烷。在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是甲基叔丁醚。在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是水。

本发明进一步包括用于制备化合物III的非限制性说明性方法，其包括

(x)将化合物I S_P,S_C异构体溶解在含有机溶剂(例如，丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、四氢呋喃或乙腈等)的烧瓶或容器中的第一步；

(xi)在环境温度或稍微升高或降低的温度(例如约23℃-55℃)下，以特定摩尔比(例如0.5:1.0、1.0:1.0或1.5:1)将富马酸添加到步骤(i)的化合物I的溶液中；

(xii)在环境温度或稍微升高或降低的温度下搅拌步骤(ii)的反应；

(xiii)任选地用化合物II的晶体接种步骤(iii)的溶液；

(xiv)添加第二有机溶剂以诱导结晶，例如，戊烷、正己烷、庚烷、石油醚、甲基叔丁基醚、乙醚或水；

(xv)任选地在环境温度或稍微升高或降低的温度下搅拌所得溶液；

(xvi)将所得溶液冷却至降低的温度，例如约0℃-10℃，然后在该温度下搅拌溶液

(xvii)过滤所得固体；和

(xviii)任选地在减压和升温下干燥固体，例如在或至少在30℃、35℃、40℃、45℃或50℃下。

在某些实施例中，以上步骤(i)在异丙醇中进行。此外，步骤(v)中的第二有机溶剂可以是例如庚烷。

在一个实施例中，将化合物I S_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的乙醇中。在一个实施例中，将化合物I S_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的甲醇中。在一个实施例中，将化合物I S_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的乙腈中。在另外的实施例中，将化合物I S_P,S_C异构体溶解于步骤(i)的四氢呋喃中。

在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是戊烷。在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是己烷。在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是甲基叔丁醚。在一个实施例中，步骤(v)中的第二有机溶剂是水。

在某些实施例中，单富马酸盐从倍半富马酸盐(1.5当量的富马酸)合成。倍半富马酸盐可以用溶剂(例如，甲基叔丁醚)洗涤以除去过量的富马酸，从而提供单富马酸盐。

II.化合物I的盐

在某些实施例中，本发明提供了作为单富马酸盐的化合物I、R_P化合物I和S_P化合物I。在某些实施例中，本发明提供了作为半富马酸盐的化合物I、R_P化合物I和S_P化合物I。在某些实施例中，本发明提供了作为倍半富马酸盐的化合物I、R_P化合物I和S_P化合物I。在某些实施例中，本发明提供了作为硫酸盐的R_P化合物I和S_P化合物I。在某些实施例中，本发明提供了作为盐酸盐的R_P化合物I和S_P化合物I。在某些实施例中，本发明提供了作为苯磺酸盐的化合物I、R_P化合物I和S_P化合物I。在某些实施例中，本发明提供了作为甲苯磺酸盐的R_P化合物I和S_P化合物I。在某些实施例中，本发明提供了作为琥珀酸盐的R_P化合物I和S_P化合物I。

化合物I的R_P盐

化合物I的S_P盐

半富马酸盐和单琥珀酸盐形成具有作为固体剂型的有利特性的固体，用于治疗患有HPV感染或HPV相关疾病(例如，宫颈上皮内瘤变、肛门上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变或阴道上皮内瘤变)的宿主(如人)。然而，单富马酸盐显示出优于半富马酸盐和单琥珀酸盐的性能。因此，单富马酸盐仍然是化合物I的希望的盐形式。

本发明的另外的实施例

在某些实施例中，本发明至少包括：

1.一种化合物，具有下式：

2.一种化合物，具有下式：

或其药学上可接受的盐。

3.一种化合物，具有下式：

或其药学上可接受的盐。

4.如实施例2所述的化合物，具有下式：

5.如实施例3所述的化合物，具有下式：

6.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中分离的晶型形式的特征在于包含以下峰的XRPD图谱，这些峰独立地选自以下2θ值中的至少3、4、5或6个：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

7.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中分离的晶型形式的特征在于包含以下峰的XRPD图谱，这些峰独立地选自以下2θ值中的至少3、4、5、6、7、8或9个：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

8.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中分离的晶型形式的特征在于包含以下峰的XRPD图谱，这些峰独立地选自以下2θ值中的至少3、4、5、6、7、8或9个：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、20.38±0.2°、22.94±0.2°、25.09±0.2°、26.54±0.2°、26.90±0.2°、27.38±0.2°、28.28±0.2°、28.95±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

9.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中分离的晶型形式的特征在于包含以下峰的XRPD图谱，这些峰独立地选自以下2θ值中的至少3、4、5或6个：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

10.一种药物组合物，其包含如实施例1-5中任一项所述的化合物和药学上可接受的载剂。

11.一种药物组合物，其包含在药学上可接受的载剂中的如实施例6-9中任一项所述的晶型形式。

12.如实施例10-11所述的药物组合物，其为固体剂型。

13.如实施例10-11所述的药物组合物，其为半固体剂型。

14.如实施例10-11所述的药物组合物，其为重构粉末形式。

15.如实施例10-11所述的药物组合物，其为干粉剂型形式。

16.如实施例10-11所述的药物组合物，其为薄膜形式。

17.如实施例10-11所述的药物组合物，其为阴道药栓形式。

18.如实施例12所述的药物组合物，其为片剂形式。

19.如实施例13所述的药物组合物，其为乳膏剂形式。

20.如实施例13所述的药物组合物，其为凝胶形式。

21.如实施例10-20中任一项所述的药物组合物，配制用于局部施用。

22.如实施例10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至宫颈。

23.如实施例10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至阴道。

24.如实施例10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至外阴。

25.如实施例10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至肛周区。

26.如实施例10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至肛门。

27.如实施例10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至阴茎。

28.如实施例18所述的药物组合物，其中所述片剂是双层片剂。

29.如实施例18所述的药物组合物，其中所述片剂在小于约250μL流体中崩解。

30.如实施例18所述的药物组合物，其中所述片剂在小于约150μL流体中崩解。

31.如实施例10-30中任一项所述的药物组合物，其包含从约0.001至约20mg、从约0.005至约10mg、从约0.01mg至约5mg、从约0.03mg至约1mg或从约0.05mg至约0.3mg的化合物。

32.如实施例10-30中任一项所述的药物组合物，其包含从约0.005mg至约50mg的所述化合物。

33.如实施例32所述的药物组合物，其包含从约0.05mg至约40mg的所述化合物。

34.如实施例32所述的药物组合物，其包含从约0.1mg至约30mg的所述化合物。

35.如实施例32所述的药物组合物，其包含至少约0.1mg的所述化合物。

36.如实施例32所述的药物组合物，其包含至少约0.3mg的所述化合物。

37.如实施例32所述的药物组合物，其包含至少约1mg的所述化合物。

38.如实施例32所述的药物组合物，其包含至少1.5mg的所述化合物。

39.如实施例32所述的药物组合物，其包含至少约2mg的所述化合物。

40.如实施例19-29中任一项所述的药物组合物，其包含从约0.001％至约10％的所述化合物。

41.如实施例40所述的药物组合物，其包含从约0.01％至0.5％的所述化合物。

42.如实施例40所述的药物组合物，其包含从约0.1％至5％的所述化合物。

43.如实施例10-42中任一项所述的药物组合物，其包含粘膜粘着聚合物。

44.如实施例43所述的药物组合物，其包含从约5％至约20％的粘膜粘着聚合物。

45.如实施例43所述的药物组合物，其包含从约10％至约50％的粘膜粘着聚合物。

46.如实施例43所述的药物组合物，其包含从约50％至约90％的粘膜粘着聚合物。

47.如实施例10-42中任一项所述的药物组合物，其包含崩解增强赋形剂。

48.如实施例10-42中任一项所述的药物组合物，其包含穿透增强赋形剂。

49.如实施例10-42中任一项所述的药物组合物，其包含允许活性化合物的受控释放的赋形剂。

50.如实施例19所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载剂由以下构成：轻质矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、Tefose 63、水、EDTA、对羟基苯甲酸甲酯和Carbopol 974P。

51.如实施例20所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载剂由以下构成：水、EDTA、苯甲酸甲酯、Carbopol 974P、丙二醇和山梨酸。

52.如实施例所述的药物组合物18，其中所述片剂由以下构成：甘露醇、多晶纤维素和硬脂酸镁。

53.一种治疗人乳头瘤病毒感染的方法，所述方法包括向有需要的宿主施用有效量的如实施例1-5中任一项所述的化合物，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

54.一种治疗由人乳头瘤病毒感染引起的病症的方法，所述方法包括向有需要的宿主施用有效量的如实施例1-5中任一项所述的化合物，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

55.如实施例54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒感染引起的病症是上皮内瘤变。

56.如实施例55所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是意义不明的非典型鳞状细胞(ASC-US)。

57.如实施例55所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是非典型腺细胞(AGC)。

58.如实施例55所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是低度鳞状上皮内病变(LSIL)。

59.如实施例55所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是非典型鳞状细胞，不能排除高度鳞状上皮内病变(ASC-H)。

60.如实施例55所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是高度鳞状上皮内病变(HSIL)。

61.如实施例54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是原位腺癌(AIS)。

62.如实施例55所述的方法，其中所述上皮内瘤变是宫颈上皮内瘤变。

63.如实施例62所述的方法，其中所述宫颈上皮内瘤变是1级宫颈上皮内瘤变。

64.如实施例62所述的方法，其中所述宫颈上皮内瘤变是2级宫颈上皮内瘤变。

65.如实施例62所述的方法，其中所述宫颈上皮内瘤变是3级宫颈上皮内瘤变。

66.如实施例55所述的方法，其中所述上皮内瘤变是阴道上皮内瘤变。

67.如实施例55所述的方法，其中所述上皮内瘤变是外阴上皮内瘤变。

68.如实施例55所述的方法，其中所述上皮内瘤变是肛门上皮内瘤变。

69.如实施例55所述的方法，其中所述上皮内瘤变是肛周上皮内瘤变。

70.如实施例55所述的方法，其中所述上皮内瘤变是阴茎上皮内瘤变。

71.如实施例53-70中任一项所述的方法，其中所述宿主是人。

72.如实施例53-71中任一项所述的方法，其中所述化合物是局部施用。

73.如实施例52-71中任一项所述的方法，其中施用从约0.05毫克至约40毫克的化合物。

74.如实施例52-71中任一项所述的方法，其中施用从约0.1毫克至约30毫克。

75.如实施例52-71中任一项所述的方法，其中施用从约0.001至约20mg、从约0.005至约10mg、从约0.01mg至约5mg、从约0.03mg至约1mg、从约0.05mg至约0.3mg、从约0.03mg至约0.07mg、从约0.05mg至约0.15mg或从约0.15mg至约0.45mg的所述化合物。

76.如实施例75所述的方法，其中施用从约0.05mg至约0.3mg的所述化合物。

77.如实施例52-76中任一项所述的方法，进一步包括在将所述剂型插入受累区域之前，向所述上皮组织应用润滑方式。

78.如实施例52-76中任一项所述的方法，进一步包括在将所述剂型插入受累区域之前，向所述剂型应用润滑方式。

79.如实施例77或78所述的方法，其中所述润滑方式选自水、基于甘油的润滑剂和基于羟乙基纤维素的润滑剂。

80.如实施例52-79中任一项所述的方法，其中每天一次施用所述化合物。

81.如实施例52-79中任一项所述的方法，每天两次施用。

82.如实施例52-79中任一项所述的方法，每周两次施用。

83.如实施例52-79中任一项所述的方法，每周三次或更多次施用。

84.如实施例52-83中任一项所述的方法，施用约一周。

85.如实施例52-83中任一项所述的方法，施用约两周。

86.如实施例52-83中任一项所述的方法，施用约三周。

87.如实施例52-83中任一项所述的方法，施用约四周。

88.如实施例52-83中任一项所述的方法，施用约五周。

89.如实施例52-83中任一项所述的方法，施用约六周。

90.如实施例52-89中任一项所述的方法，其中将所述化合物以治疗周期施用，所述治疗周期包括：

a.治疗期，其包括施用所述化合物，和

b.停药期，其包括无治疗的时间段。

91.如实施例90所述的方法，其中所述停药期为约一周。

92.如实施例90所述的方法，其中所述停药期为约两周。

93.如实施例90所述的方法，其中所述停药期为约三周。

94.如实施例52-79中任一项所述的方法，其中所述化合物被每天施用。

95.如实施例94所述的方法，其中施用从约0.01mg至约0.5mg。

96.如实施例95所述的方法，其中施用从约0.05mg至约0.3mg。

97.如实施例90-93中任一项所述的方法，其中施用两个治疗周期。

98.如实施例90-93中任一项所述的方法，其中施用三个治疗周期。

99.如实施例90-93中任一项所述的方法，其中施用四个治疗周期。

100.如实施例90-93中任一项所述的方法，其中施用五个治疗周期。

101.如实施例90-93中任一项所述的方法，其中施用六个治疗周期。

102.如实施例52-101中任一项所述的方法，其中人乳头瘤病毒是HPV-16。

103.如实施例52-101中任一项所述的方法，其中所述人乳头瘤病毒是HPV-18。

104.如实施例52-103中任一项所述的方法，其中所述化合物与另一种抗病毒化合物组合施用。

105.如实施例104所述的方法，其中所述抗病毒化合物选自下组，该组由以下组成：蛋白酶抑制剂、另一种DNA聚合酶抑制剂、E6或E6AP的抑制剂、E7的抑制剂、E1的抑制剂、E2的抑制剂、E1-E2蛋白质相互作用的抑制剂、L2脂肽、L1的抑制剂、L2的抑制剂、L1的降解剂和L2的降解剂。

106.如实施例52-103中任一项所述的方法，其中所述化合物与抗癌化合物组合施用。

107.如实施例106所述的方法，其中所述抗癌化合物选自下组，该组由以下组成：HDAC抑制剂、四跨膜蛋白(tetraspanin)的降解剂、免疫检查点抑制剂、T细胞疗法和抗增殖药物。

108.如实施例52-103中任一项所述的方法，其中所述化合物与外科手术组合施用。

109.如实施例108所述的方法，其中在所述外科手术之前施用所述化合物。

110.如实施例108所述的方法，其中在所述外科手术之后施用所述化合物。

111.如实施例108所述的方法，其中所述外科手术在施用所述化合物期间进行。

112.如实施例108-111中任一项所述的方法，其中所述外科手术是切除患病组织。

113.如实施例112所述的方法，其中所述切除是环形电切除术(LEEP)。

114.如实施例112所述的方法，其中所述切除是转化区大环切除术(LLETZ)。

115.如实施例112所述的方法，其中所述切除是刀锥切除术。

116.如实施例112所述的方法，其中所述切除是激光锥形切除术。

117.如实施例108-111中任一项所述的方法，其中所述外科手术是对所述患病组织的消融。

118.如实施例117所述的方法，其中所述消融是激光消融。

119.如实施例117所述的方法，其中所述消融是冷冻消融。

120.如实施例1-5所述的化合物在制备用于在有需要的宿主中治疗人乳头瘤病毒感染的药物中的用途，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

121.如实施例1-5所述的化合物在制备用于在有需要的宿主中治疗由人乳头瘤病毒感染引起的病症的药物中的用途，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

122.如实施例121所述的用途，其中所述由人乳头瘤病毒感染引起的病症是上皮内瘤变。

123.如实施例122所述的用途，其中所述上皮内瘤变是阴道上皮内瘤变。

124.如实施例122所述的用途，其中所述上皮内瘤变是外阴上皮内瘤变。

125.如实施例122所述的用途，其中所述上皮内瘤变是宫颈上皮内瘤变。

126.如实施例122所述的用途，其中所述上皮内瘤变是肛门上皮内瘤变。

127.如实施例122所述的用途，其中所述上皮内瘤变是肛周上皮内瘤变。

128.如实施例122所述的用途，其中所述上皮内瘤变是阴茎上皮内瘤变。

129.如实施例120-128所述的用途，其中所述宿主是人。

130.如实施例120-129所述的用途，用于局部施用。

131.如实施例1-5中任一项所述的化合物，用于在有需要的宿主中治疗人乳头瘤病毒感染，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

132.如实施例1-5中任一项所述的化合物，用于在有需要的宿主中治疗由人乳头瘤病毒感染引起的病症，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

133.如实施例132所述用途的化合物，其中所述由人乳头瘤病毒感染引起的病症是上皮内瘤变。

134.如实施例133所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是阴道上皮内瘤变。

135.如实施例133所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是外阴上皮内瘤变。

136.如实施例133所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是宫颈上皮内瘤变。

137.如实施例133所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是肛门上皮内瘤变。

138.如实施例133所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是肛周上皮内瘤变。

139.如实施例133所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是阴茎上皮内瘤变。

140.如实施例131-139所述用途的化合物，其中所述宿主是人。

141.如实施例131-140所述用途的化合物，其中局部施用所述化合物。

142.一种用于制备如实施例4所述的晶型形式的方法，所述方法包括：

a.将R_P化合物I溶解于醇溶剂中；

b.在从约20℃至约70℃的温度下搅拌；

c.添加1.0当量的富马酸；

d.添加脂肪族溶剂；

e.将所述混合物冷却；

f.搅拌所述冷却的溶液；并且

g.分离和干燥固体。

143.如实施例142所述的方法，其中步骤(a)的所述醇溶剂是乙醇或异丙醇。

144.如实施例142-143所述的方法，其中步骤(a)的所述醇溶剂是异丙醇。

145.如实施例142所述的方法，其中将步骤(b)的所述溶液在约45℃至约55℃下进行搅拌。

146.如实施例142所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是己烷或庚烷。

147.如实施例142和146所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是庚烷。

148.如实施例142所述的方法，其中将所述混合物冷却至低于约20℃。

149.如实施例142所述的方法，其中将所述混合物冷却至低于约10℃。

150.如实施例142所述的方法，其中将所述混合物冷却至低于约5℃。

151.如实施例142所述的方法，其中将所述混合物冷却至约5℃至0℃。

III.晶型形式

本发明中提供了化合物I单富马酸盐的分离的晶型形式模式1。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于图23中的XRPD图谱或与其基本上相似的XRPD图谱。

1.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少约3、4或5个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

2.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少12个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

3.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少11个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

4.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少10个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

5.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少9个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

6.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少8个选自以下的2θ值的XRPD图谱6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

7.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少7个选自以下的2θ值的XRPD图谱6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

8.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少6个选自以下的2θ值的XRPD图谱6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

9.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少5个选自以下的2θ值的XRPD图谱6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

10.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少4个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

11.在一个实施例中，化合物I单富马酸盐模式1的特征在于包含至少3个选自以下的2θ值的XRPD图谱：6.0±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、9.7±0.2°、11.9±0.2°、14.8±0.2°、18.0±0.2°、20.0±0.2°、23.4±0.2°、25.2±0.2°、25.9±0.2°、26.8±0.2°和28.0±0.2°。

化合物I单富马酸盐模式1可例如通过从异丙醇和庚烷中结晶来产生，如实施例7中所述。化合物I游离碱和约1.0当量的富马酸可以例如以约25％至约40％w/v的浓度溶于异丙醇中并在升高的温度例如约45℃、约50℃、约55℃下搅拌。在该温度下搅拌溶液直至形成一些固体，然后任选地用化合物I单富马酸盐模式1结晶固体接种。将混合物搅拌并冷却至较低温度以促进结晶，例如小于约40℃、小于约30℃、小于约25℃、小于约20℃或小于约15℃。然后搅拌混合物，同时以约1mL/mL异丙醇至约5mL/mL异丙醇(如约4mL/mL异丙醇)的量加入庚烷。搅拌所得悬浮液，同时产物结晶，例如在25℃下搅拌至少约24小时。接着，冷却悬浮液以进一步促进结晶。可将溶液冷却至低于约10℃、低于约5℃、低于约0℃或低于约-5℃。将溶液在降低的温度下搅拌以允许额外产物结晶的时间，如至少约一天，然后通过过滤收集固体。在减压下且任选地在升高的温度下干燥收集的固体以提供化合物I单富马酸盐模式1。

本发明中提供了化合物II的分离的晶型形式模式1。在一个实施例中，模式1的特征在于图71中的XRPD图谱或与其基本上相似的XRPD图谱。

1.在一个实施例中，化合物II模式1的特征在于包含至少3、4或5个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

2.如实施例1所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少7个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

3.如实施例1所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少6个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

4.如实施例1所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少5个选自以下的2θ值的XRPD图谱3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

5.如实施例1所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少4个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

6.如实施例1所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少3个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

7.如实施例1所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少2个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

8.如实施例1所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少1个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

9.在一个实施例中，化合物II模式1的特征在于包含至少3、4或5个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

10.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少15个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

11.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少14个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

12.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少13个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

13.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少12个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

14.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少11个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

15.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少10个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

16.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少9个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

17.如实施例9所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少8个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、18.13±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.99±0.2°和28.82±0.2°。

18.在某些实施例中，化合物II模式1的特征在于包含至少3、4或5个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

19.如实施例18所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少45个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

20.如实施例18所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少40个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

21.如实施例18所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少35个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

22.如实施例18所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少30个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

23.如实施例18所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少25个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

24.如实施例18所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少20个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

25.如实施例18所述的化合物II模式1，其特征在于包含至少15个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、6.07±0.2°、8.80±0.2°、9.30±0.2°、10.66±0.2°、12.08±0.2°、12.60±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、17.45±0.2°、17.838±0.2°、18.13±0.2°、18.63±0.2°、18.89±0.2°、19.78±0.2°、20.14±0.2°、20.81±0.2°、21.24±0.2°、21.59±0.2°、21.89±0.2°、22.91±0.2°、23.34±0.2°、24.23±0.2°、25.14±0.2°、25.33±0.2°、25.86±0.2°、26.78±0.2°、27.13±0.2°、27.59±0.2°、27.99±0.2°、28.82±0.2°、29.23±0.2°、29.45±0.2°、30.39±0.2°、31.18±0.2°、31.66±0.2°、32.27±0.2°、32.69±0.2°、33.43±0.2°、34.06±0.2°、34.34±0.2°、34.69±0.2°、35.58±0.2°、36.19±0.2°、36.62±0.2°、37.41±0.2°、38.30±0.2°、38.77±0.2°和39.24±0.2°。

26.如实施例1-25中任一项所述的化合物II模式1，其中通过¹H NMR，化合物II与富马酸的比率为大约1:1。

化合物II模式1可以例如通过重结晶化合物II(实施例12，表31)、在合适的溶剂中平衡化合物II、或通过缓慢蒸发溶剂进行结晶(实施例12，表32)来制备。因此本发明包括至少以下的特征：

1.在某些实施例中，通过重结晶化合物II制备化合物II模式1。

2.在某些实施例中，通过在溶剂中平衡化合物II制备化合物II模式1。

3.在某些实施例中，通过从化合物II的溶液中缓慢蒸发溶剂制备化合物II模式1。

4.如实施例1所述的方法，其中将化合物II溶解于醇溶剂中，并通过添加醚类溶剂结晶为模式1。

5.如实施例1所述的方法，其中将化合物II溶解于醇溶剂中，并通过添加脂肪族溶剂结晶为模式1。

6.如实施例1所述的方法，其中将化合物II溶解于醚类溶剂，并通过添加脂肪族溶剂结晶为模式1。

7.如实施例4或5所述的方法，其中所述醇溶剂是或包含甲醇。

8.如实施例4或5所述的方法，其中所述醇溶剂是或包含乙醇。

9.如实施例4或5所述的方法，其中所述醇溶剂是或包含异丙醇。

10.如实施例4或5所述的方法，其中所述醇溶剂是或包含正丙醇。

11.如实施例4或5所述的方法，其中所述醇溶剂是或包含正丁醇。

12.如实施例4或5所述的方法，其中所述醇溶剂是或包含异戊基醇。

13.如实施例4或5所述的方法，其中所述醇溶剂是或包含环己醇。

14.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是或包含二乙醚。

15.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是或包含二丁醚。

16.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是或包含甲基叔丁醚。

17.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是或包含环丙基甲基醚。

18.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是或包含甘醇二甲醚(glyme)。

19.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是或包含四氢呋喃。

20.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是2-甲基四氢呋喃。

21.如实施例4或6所述的方法，其中所述醚类溶剂是或包含二噁烷。

22.如实施例5-21中任一项所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是或包含戊烷。

23.如实施例5-21中任一项所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是或包含正己烷。

24.如实施例5-21中任一项所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是或包含庚烷。

25.如实施例5-21中任一项所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是或包含石油醚。

26.如实施例5-21中任一项所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是或包含辛烷。

27.如实施例5-21中任一项所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是或包含环己烷。

28.如实施例5-21中任一项所述的方法，其中所述脂肪族溶剂是或包含己烷异构体的混合物。

29.如实施例4-28中任一项所述的方法，其中所述固体通过过滤收集。

30.如实施例4-28中任一项所述的方法，其中在添加所述脂肪族溶剂之后将所述溶液冷却。

31.如实施例30所述的方法，其中将所述溶液冷却至低于约10℃。

32.如实施例30所述的方法，其中将所述溶液冷却至约为或小于约5℃。

33.如实施例4-32中任一项所述的方法，其中将所述溶液、悬浮液或浆液进行搅拌直到发生结晶。

34.如实施例33所述的方法，其中将所述溶液、悬浮液或浆液搅拌至少约一天。

35.如实施例33所述的方法，其中将所述溶液、悬浮液或浆液搅拌至少约一周。

36.如实施例33所述的方法，其中将所述溶液、悬浮液或浆液搅拌至少约两周。

37.如实施例33所述的方法，其中将所述溶液、悬浮液或浆液搅拌至少约三周。

38.如实施例2所述的方法，其中在25℃下将化合物II溶解于平衡溶剂中，并且进行搅拌，持续从约2周至约3周的时间段。

39.如实施例2所述的方法，其中所述平衡溶剂是溶剂的二元混合物。

40.如实施例2所述的方法，其中所述平衡溶剂是异丙醇。

41.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分四氢呋喃至约三部分庚烷。

42.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分乙醇至约三部分庚烷。

43.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分乙酸乙酯至约三部分甲苯。

44.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分异丙醇至约一部分庚烷。

45.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分异丙醇至约一部分甲苯。

46.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分异丙醇至约三部分甲基叔丁醚。

47.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分异丙醇至约四部分庚烷。

48.如实施例39所述的方法，其中所述平衡溶剂是约一部分乙醇至约一部分甲苯。

49.如实施例3所述的方法，其中将化合物II溶解于合适的溶剂中，通过0.45μM过滤器过滤，然后维持在23℃下和一个大气压下直到所述溶剂蒸发。

50.如实施例49所述的方法，其中所述溶剂是或包含丙酮。

51.如实施例49所述的方法，其中所述溶剂是或包含甲基乙基酮。

52.如实施例49所述的方法，其中所述溶剂是或包含乙酸乙酯。

53.如实施例49所述的方法，其中所述溶剂是或包含甲醇。

54.如实施例49所述的方法，其中所述溶剂是或包含乙醇。

55.如实施例49所述的方法，其中所述溶剂是或包含异丙醇。

56.如实施例49所述的方法，其中所述溶剂是或包含四氢呋喃。

本发明中提供了化合物III的分离的晶型形式模式1和模式2。在一个实施例中，模式1的特征在于图77中的XRPD图谱或与其基本上相似的XRPD图谱。

1.在一个实施例中、化合物III模式1的特征在于独立地包含至少2、3、4、5或6个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

2.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少12个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

3.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少11个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

4.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少10个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

5.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少9个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

6.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少8个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

7.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少7个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

8.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少6个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

9.如实施例1所述的化合物III模式1，其特征在于包含至少5个选自以下的2θ值的XRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

10.在一个实施例中，化合物III模式2的特征在于独立地包含至少3、4、5或6个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、20.38±0.2°、22.94±0.2°、25.09±0.2°、26.54±0.2°、26.90±0.2°、27.38±0.2°、28.28±0.2°、28.95±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

11.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少12个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、20.38±0.2°、22.94±0.2°、25.09±0.2°、26.54±0.2°、26.90±0.2°、27.38±0.2°、28.28±0.2°、28.95±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

12.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于独立地包含至少3、4、5或6个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

13.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少11个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

14.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少10个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

15.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少9个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

16.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少8个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

17.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少7个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

18.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少6个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

19.如实施例10所述的化合物III模式2，其特征在于包含至少5个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、25.09±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

例如，可以通过异丙醇和庚烷的沉淀来产生化合物III模式1(实施例15，表40)。在某些非限制性实施例中，化合物III模式1是通过将S_P-化合物I游离碱溶于异丙醇(例如，约100mg S_p-化合物I溶于约0.25mL至约0.5mL异丙醇)来制备的。向该溶液中添加约1.0eq富马酸，并在环境温度或升高的温度(例如约25℃至约60℃)下搅拌混合物。接下来，添加的庚烷约是异丙醇的两倍到五倍。在环境温度或升高的温度(例如约25℃至约60℃)下搅拌所得混合物，然后逐渐冷却(例如约0.01℃/min至1℃/min)，通过过滤分离的固体，然后在环境压力或减压下干燥。

IV.定义

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。除非另有说明，否则本文引用的所有专利、申请和已发布的申请均以引用方式全部并入。如果本文中有多个术语定义，除非另有说明，否则以本节中的定义为准。

如本文所用，除非另有说明，否则任何保护基团、氨基酸和其他化合物的缩写均符合其常用用法、公认缩写或IUPAC-IUB生化命名委员会(参见，Biochem.11:942-944(1972))。

本文所用术语“醇溶剂”是指具有游离羟基的溶剂，该溶剂在室温或使用温度下为液体。醇溶剂的非限制性实例包括甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇、正丙醇、甘油、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-丁醇、正戊醇(正戊醇)、异戊醇(异戊醇)、新戊醇、己醇、环己醇、环己烷二醇、苯酚、苯甲醇、丙炔醇、二甘醇、1,2-丙二醇、庚醇、辛醇、壬醇、和癸醇。

本文所用术语“脂肪族溶剂”是指在室温或使用温度下为液体的烃类溶剂。脂肪族溶剂的非限制性实例包括戊烷、异戊烷、环戊烷、正己烷、己烷(异构体的混合物)、环己烷、2-己烯、3-己烯、甲基环己烷，庚烷、辛烷、异辛烷、石油醚、石脑油、矿物油、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷。

本文中使用的术语“醚类溶剂(ethereal solvent)”是指含有至少一个醚键的溶剂，并且在室温或使用温度下是液体。醚类溶剂的实例包括但不限于二乙醚、二异丙醚、甲基叔丁醚、二丁醚、叔戊基乙基醚、环戊基甲基醚、二叔丁基醚、乙基叔丁基醚、丙二醇甲基醚、乙二醇乙醚、甘醇二甲醚、二甘醇二甲醚、乙二醇醚、二噁烷、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢呋喃和四氢吡喃。

在提供值范围的情况下，可以理解，范围的上限和下限以及范围上限和下限之间的每个中间值都包含在实施例中。

如本文所用，“约”指的是一个范围，其中包括小于所述值最多10％，大于所述值最高10％。例如，“约100毫克”包括从90毫克至110毫克的所有数值。

术语“治疗有效量”和“有效量”用于表示产生预期治疗效果的活性化合物、药剂或其代谢物的量。例如，有效量的化合物可以是预防、减轻或改善疾病症状或延长受试者(例如人)生存所需的量。这种反应可能发生在组织、系统、动物或人类中，包括缓解正在治疗的疾病的症状或体征。

同位素取代

本发明包括但不限于本文所述的化合物、药物组合物和任何活性化合物的用途，包括但不局限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，它们原子的期望同位素取代量高于同位素的自然丰度，即富集。同位素是具有相同原子序数但不同质量数的原子，即相同质子数但不同中子数的原子。作为一般示例且不受限制，氢同位素，例如，氘(²H)和氚(³H)可用于所述结构中的任何位置。或者，也可以使用碳同位素，例如¹³C和¹⁴C。首选的同位素取代是在分子上的一个或多个位置用氘代替氢，以提高药物的性能。在新陈代谢过程中，氘可以结合在键断裂的位置(α-氘动力同位素效应)或靠近键断裂位置(β-氘动力学同位素效应)。Achillion Pharmaceuticals,Inc.(WO/2014/169278和WO/2014/169280)描述了核苷酸的氘化以改善其药代动力学或药效学，包括分子的5位。

用同位素(例如氘)替代可以提供某些治疗优势，这是由于更大的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或减少剂量要求。在代谢分解部位用氘代替氢可以降低或消除该键的代谢速率。在化合物中可能存在氢原子的任何位置，氢原子可以是氢的任何同位素，包括质子(¹H)、氘(²H)和氚(³H)。因此，除非上下文另有明确规定，否则此处提及的化合物包含所有潜在同位素形式。

术语“同位素标记”模拟物是指“氘化模拟物”、“¹³C标记模拟物”或“氘化/¹³C标记模拟物”。术语“氘化类似物”是指本文所述的化合物，其中氢同位素，即氢/质子(¹H)被氢同位素，例如氘(²H)取代。氘取代可以是部分的，也可以是完全的。部分氘取代意味着至少一个氢被至少一个氘取代。在某些实施例中，同位素是在任何感兴趣位置处80％、85％、90％、95％或99％或更多富集的同位素。在一些实施例中，氘在所需位置富集90％、95％或99％。除非另有说明，否则所选位置的氘化率至少为80％。核苷的氘化可以发生在任何提供所需结果的可替换氢上。

V.HPV诱发的上皮内瘤变的治疗或预防

在示例性非限制性实施例中，提供了用于治疗HPV感染或HPV诱发的上皮内瘤变的方法，所述方法包括施用足以治疗瘤变或产生本文进一步描述的效果的、有效量的、在局部制剂中的如本文所述的一种活性化合物或多种活性化合物的组合。HPV诱发的上皮内瘤变的类型包括但不限于宫颈上皮内瘤变、阴道上皮内瘤变、外阴上皮内瘤变、阴茎上皮内瘤变、肛周上皮内瘤变和肛门上皮内瘤变。

在示例性实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是含有从约0.005mg至约50mg、从约0.05mg至约40mg、从约0.1mg至约30mg、从约0.5mg至约20mg、从约1mg至约20mg、从约1mg至约15mg、或从约1mg至约10mg本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的剂型。在某些实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是包含从约0.01mg至约10mg、从约0.05至约5mg、从约0.05至约0.15mg、从约0.15mg至约0.45mg、或从约0.5至约1.5mg本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的剂型。在某些实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是包含约或至少0.005、0.01、0.03、0.05、0.1mg、0.3mg.0.5mg、0.7mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg或50mg化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的剂型。

在某些实施例中，用于治疗上皮内瘤变的制剂是含有从约0.001至约20mg、从约0.005至约10mg、从约0.01mg至约5mg、从约0.03mg至约1mg或从约0.05mg至约0.3mg化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的剂型。

在某些实施例中，局部制剂每天施用两次、每天施用一次或每周施用几天(例如每周施用2或3天)，只要是实现所需结果所必需的。在某些实施例中，局部制剂以每周的时间表施用一、二、三、四、五、六或更多周。在某些方面，局部制剂以每周三个剂量的时间表施用两周、三周、四周、五周或六周。

在某些实施例中，可以在一个或多个治疗周期中施用化合物，所述治疗周期包括治疗期和停药期，其中治疗期包括施用如本文所述的化合物，随后是停药期(包括无治疗的时间段)，然后进行下一个治疗周期。在某些实施例中，停药期为从约一天至约六个月。在某些实施例中，停药期是在下一个治疗期之前的一周、二周、三周、四周、五周、六周、七周、八周或更长时间。在某些实施例中，施用多个治疗周期，例如一个、两个、三个、四个、五个或六个治疗周期。

不能很好地粘附到目标部位的剂型可能会脱落，从而干扰治疗。已发现粘附于目标部位并在低流体体积中迅速溶解的剂型。粘附到目标部位还可以防止暴露于健康组织，后者可能会限制毒性及产生副作用。在低流体体积中快速软化、分解和/或崩解的剂型有利于使活性化合物快速释放到目标组织。在例如，小于约50μL、小于约100μL、小于约125μL、小于约150μL、小于约175μL、小于约200μL、或小于约250μL流体中崩解的剂型特别有助于药物穿透进目标部位。

在某些实施例中，剂型是凝胶。在某些实施例中，剂型是乳膏剂。在某些实施例中，剂型是片剂。在某些实施例中，剂型在约一至约十秒崩解。在某些实施例中，剂型在约十秒至一分钟崩解。在某些实施例中，剂型在约一分钟至约一小时崩解。在某些实施例中，剂型在约一至六小时崩解。

剂型的物理尺寸可以影响剂型的有效性。更薄的片剂提供更大的表面积与体积比，并且可以更快地降解并更好地覆盖目标区域。在某些实施例中，剂型的最小尺寸是厚度小于约6、5、4、3或2毫米。

剂型的制剂对于将活性剂充分施用到上皮内组织中很重要。例如，制剂可以制备成片剂、重构粉末、干粉剂、半固体剂型、薄膜或阴道药栓(即阴道栓剂)。

本文披露的一些实施例包括有效量的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III在制备用于改善或治疗人乳头瘤病毒感染的药物中的用途，其中可以凭借抑制病毒DNA的合成通过抑制病毒复制来改善或治疗所述感染。本文披露的其他实施例包括有效量的本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)用于改善或治疗人乳头瘤病毒感染的用途，其中可以凭借抑制病毒DNA的合成通过抑制病毒复制来改善或治疗人乳头瘤病毒感染。

本文披露的某些非限制性实施例包括用于改善或治疗人乳头瘤病毒感染的方法，所述方法可以包括使受试者中用人乳头瘤病毒感染的细胞与有效量的本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)接触，其中通过抑制病毒DNA的合成来改善或治疗所述感染。本文披露的又仍其他实施例包括用于改善或治疗人乳头瘤病毒感染的方法，所述方法可以包括向感染人乳头瘤病毒的受试者施用有效量的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，其中可以凭借抑制病毒DNA的合成通过抑制病毒复制来改善或治疗人乳头瘤病毒感染。本文披露的一些实施例涉及用于在改善或治疗人乳头瘤病毒感染中使用的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，其中可以凭借抑制病毒DNA的合成通过抑制病毒复制来改善或治疗人乳头瘤病毒感染。

在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是高危型人乳头瘤病毒，例如本文所述的那些。例如，高危型人乳头瘤病毒可以选自HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-68、HPV-73和HPV-82。在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是HPV-16。在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是HPV-11。在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是HPV-18。在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是以下高危型类型中的一种或多种：HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-68、HPV-73和HPV-82。如本文所述，可以使用巴氏测试(子宫颈抹片检查)和/或DNA探针测试(例如，针对一种或多种高危型HPV类型的HPV DNA探针测试)检测HPV感染的存在。因此，在一些实施例中，可向通过DNA测试被诊断为患有HPV感染，例如高危型HPV感染的受试者提供有效量的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。在一些实施例中，可向通过巴氏测试鉴别的被诊断为患有HPV感染或与HPV感染相关的疾病的受试者提供有效量的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。

在某些实施例中，可以向受试者提供有效量的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，其中巴氏测试结果不表明疾病已发展为宫颈癌。贝塞斯达系统是用于报告巴氏抹片测试结果的标准化评分系统，并将结果根据严重程度指定为1-3级。1级CIN(CIN 1)示轻度异型增生。2级和3级CIN(CIN2，CIN3)更严重，通常需要干预。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗CIN 1(1级宫颈上皮内瘤变)。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗CIN 2(2级宫颈上皮内瘤变)。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗CIN 3(3级宫颈上皮内瘤变)。

在某些实施例中，包含化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的药物组合物在在制备用于治疗CIN 1(1级宫颈上皮内瘤变)的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的药物组合物在在制备用于治疗CIN 2(2级宫颈上皮内瘤变)的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的药物组合物在在制备用于治疗CIN 3(3级宫颈上皮内瘤变)的药物中使用。

在某些实施例中，任选地在药学上可接受的载剂中的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗选自下组的病症，该组由以下组成：意义不明的非典型鳞状细胞(ASC-US)、非典型腺细胞(AGC)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、非典型鳞状细胞(不能排除高度鳞状上皮内病变)(ASC-H)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、原位腺癌(AIS)和宫颈癌(例如，鳞状细胞癌或腺癌)。

在某些实施例中，可以向受试者提供有效量的化合物II，其中巴氏测试结果不表明疾病已发展为宫颈癌。在某些实施例中，化合物II用于治疗CIN 1(1级宫颈上皮内瘤变)。在某些实施例中，化合物II用于治疗CIN 2(2级宫颈上皮内瘤变)。在某些实施例中，化合物II用于治疗CIN 3(3级宫颈上皮内瘤变)。

在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗CIN 1(1级宫颈上皮内瘤变)的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗CIN 2(2级宫颈上皮内瘤变)的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗CIN 3(3级宫颈上皮内瘤变)的药物中使用。

在某些实施例中，任选地在药学上可接受的载剂中的化合物II用于治疗选自下组的病症，该组由以下组成：意义不明的非典型鳞状细胞(ASC-US)、非典型腺细胞(AGC)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、非典型鳞状细胞(不能排除高度鳞状上皮内病变)(ASC-H)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、原位腺癌(AIS)和宫颈癌(例如，鳞状细胞癌或腺癌)。

在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III在制备用于治疗肛门上皮内瘤变的药物中使用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III在制备用于治疗肛周上皮内瘤变的药物中使用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III在制备用于治疗外阴上皮内瘤变的药物中使用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III在制备用于治疗阴茎上皮内瘤变的药物中使用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III在制备用于治疗阴道上皮内瘤变的药物中使用。

在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗肛门上皮内瘤变。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗肛周上皮内瘤变。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗外阴上皮内瘤变。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗阴茎上皮内瘤变。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III用于治疗阴道上皮内瘤变。

在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是低危型人乳头瘤病毒，包括本文中所述的那些。在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是HPV-6。在一些实施例中，人乳头瘤病毒可以是HPV-11。

化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可用于改善和/或治疗由一种或多种类型的人乳头瘤病毒引起的感染。例如，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可用于改善和/或治疗HPV-16和/或HPV-18的感染。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可用于治疗高危型HPV感染。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可用于治疗作为高危型HPV感染的结果发生的相关疾病或病症。在一些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可用于改善和/或治疗包括高危型和低危型HPV的感染。

化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可以在用于制造用于改善和/或治疗由一种或多种类型的人乳头瘤病毒引起的感染而使用的药物中使用。例如，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可以在制备用于改善和/或治疗HPV-16和/或HPV-18的感染的药物中使用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可以在制备用于治疗高危型HPV感染的药物中使用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可以在制备用于治疗作为高危型HPV感染的结果发生的相关疾病或病症的药物中使用。在一些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可以在制备用于改善和/或治疗包括高危型和低危型HPV的感染的药物中使用。

对于本领域技术人员显而易见的是，待施用的有用的体内剂量和具体的施用模式将根据年龄、体重、病痛的严重程度、所使用的具体化合物和使用这些化合物的具体用途而变化。有效剂量水平的确定，即实现所需结果所必需的剂量水平，可由本领域技术人员使用常规方法，例如人临床试验和体外研究来完成。

在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗与HPV的暴露或感染有关的病症或作为其结果发生的病症。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗宫颈癌前病变。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗宫颈上皮内瘤变。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗阴道和肛门上皮内瘤变。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗宫颈癌。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗直肠癌。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗阴茎癌症。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗阴道癌。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物用于治疗口咽癌。

在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗与HPV的暴露或感染有关的病症或作为其结果发生的病症的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗宫颈癌前病变的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗宫颈上皮内瘤变的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗阴道和肛门上皮内瘤变的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗宫颈癌的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗直肠癌的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗阴茎癌的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗阴道癌的药物中使用。在某些实施例中，包含化合物II的药物组合物在制备用于治疗口咽癌的药物中使用。

有利的是，剂型易于施用到目标部位。直接应用于目标部位可防止全身暴露和毒性。为了将剂型置于目标部位，可以用施药器施用剂型。在某些实施例中，用阴道施药器施用剂型。在某些实施例中，在没有施药器的情况下施用剂型。在某些实施例中，另外的液体(例如润滑剂)与剂型一起递送、施用于剂型，或施用于目标部位或周围组织。

在某些实施例中，润滑液与剂型组合施用以增强对宫颈、阴道、外阴、肛门、肛周区或阴茎的覆盖。在某些实施例中，水用作与剂型一起施用的液体。在某些实施例中，润滑型的基于甘油或羟乙基纤维素的水溶性液体与剂型一起施用。在某些实施例中，无需额外的液体即可施用剂型。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约5毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约4毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约3毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约2毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约1毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约0.75毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约0.5毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约0.25毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约0.2毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约0.15毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约0.125毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于小于约0.1毫升液体。

在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约10微升至约100微升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约75微升至约250微升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约200微升至约500微升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约400微升至约750微升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约700微升至约1,000微升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约1毫升至约2毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约2毫升至约3毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约3毫升至约4毫升液体。在某些实施例中，剂型将软化、崩解和/或溶解于从约4毫升至约5毫升液体。

在某些实施例中，将化合物II在至少1、2、3、4、5或6天的连续或不连续的天内施用。

在某些实施例中，将化合物II每周一次施用。在某些实施例中，将化合物II每周一次施用长达12周。在某些实施例中，将化合物II每周一次施用长达10周。在某些实施例中，将化合物II每周一次施用长达8周。在某些实施例中，将化合物II每周一次施用长达6周。在某些实施例中，将化合物II每周一次施用长达4周。在某些实施例中，将化合物II每周一次施用长达2周。在某些实施例中，将化合物II每周一次施用长达1周。

在某些实施例中，将化合物II每周两次施用。在某些实施例中，将化合物II每周两次施用长达12周。在某些实施例中，将化合物II每周两次施用长达10周。在某些实施例中，将化合物II每周两次施用长达8周。在某些实施例中，将化合物II每周两次施用长达6周。在某些实施例中，将化合物II每周两次施用长达4周。在某些实施例中，将化合物II每周两次施用长达2周。在某些实施例中，将化合物II每周两次施用长达1周。

在某些实施例中，将化合物II每周三次施用。在某些实施例中，将化合物II每周三次施用长达12周。在某些实施例中，将化合物II每周三次施用长达10周。在某些实施例中，将化合物II每周三次施用长达8周。在某些实施例中，将化合物II每周三次施用长达6周。在某些实施例中，将化合物II每周三次施用长达4周。在某些实施例中，将化合物II每周三次施用长达2周。在某些实施例中，将化合物II每周三次施用长达1周。

在某些实施例中，化合物II被每天施用。在某些实施例中，化合物II被每天施用长达12周或由医疗保健提供者指定的时间。在某些实施例中，化合物II被每天施用长达10周。在某些实施例中，化合物II被每天施用长达8周。在某些实施例中，化合物II被每天施用长达6周。在某些实施例中，化合物II被每天施用长达4周。在某些实施例中，化合物II被每天施用长达2周。在某些实施例中，化合物II被每天施用长达1周。在某些实施例中，从约0.05mg至约0.3mg的化合物II被每天施用，持续一、二、三、四、五、六或更多周，如由医疗保健提供者指定的。

在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用。在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用长达12周。在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用长达10周。在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用长达8周。在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用长达6周。在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用长达4周。在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用长达2周。在某些实施例中，将化合物I单富马酸盐每周三次施用长达1周。

在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用长达12周或由医疗保健提供者指定的时间。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用长达10周。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用长达8周。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用长达6周。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用长达4周。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用长达2周。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐被每天施用长达1周。

在某些实施例中，可以将化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III每周三次、四次、五次或六次施用。在某些实施例中，可以将化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III每天一次施用。在某些实施例中，可以将化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III每天两次施用。在某些实施例中，可以将化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III每天三次、四次或更多次施用。在某些实施例中，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III被每天施用。

在某些实施例中，可以在一个或多个治疗周期中施用化合物，所述治疗周期包括治疗期和停药期，其中治疗期包括施用如本文所述的化合物，随后是停药期(包括无治疗的时间段)，然后进行下一个治疗周期。在某些实施例中，停药期为从约一天至约六个月。在某些实施例中，停药期是在下一个治疗期之前的一周、二周、三周、四周、五周、六周、七周、八周或更长时间。在某些实施例中，施用多个治疗周期，例如一个、两个、三个、四个、五个或六个治疗周期。

如上所述，已经研究了许多用于治疗HPV诱发的瘤变的化合物，但是还没有一种化合物被批准。对于所研究方法的非限制性实例，参见，Ahn W.S.,等人.Protective effectsof green tea extracts(polyphenon E and EGCG)on human cervicallesions.Eur.J.Cancer Prev.2003；12:383-390；Ashrafian L,等人Double-blindrandomized placebo-controlled multicenter clinical trial(phase IIa)ondiindolymethane’s efficacy and safety in the treatment of CIN:implicationsfor cervical cancer prevention.EPMA J.2015；6:doi:10.1186/s13167-13015-10048-13169；Bossens M.,等人.Safety and tolerance of cidofovir as a 2％gel for localapplication in high-grade cervical intraepithelial neoplasia:A phase 1investigation.Int.J.Clin.Pharmacol.2018；56:134-141；Chen F.P.Efficacy of imiquimod5％cream for persistent human papillomavirus in genital intraepithelialneoplasm.Taiwanese J.Obstetrics Gynecol.2013；52(4):475-478；Choo Y.,等人.Intravaginal application of leukocyte interferon gel in the treatment ofcervical intraepithelial neoplasia(CIN)Arch Gynecol.1985；237:51-54；de WitteC.J等人.Imiquimod in cervical,vaginal and vulvar intraepithelial neoplasia:areview.Gynecol.Oncol.2015；139:377-384；Desravines N,等人Low dose 5-fluorouracil intravaginal therapy for the treatment of cervicalintraepithelial neoplasia 2/3:A case series.J.Gynecol.Surg.2020；36；DiSilvestro P.A.,等人Treatment of cervical intraepithelial neoplasia levels2and 3with adapalene,a retinoid-related molecule.J.Low Genit Tract.Dis.2001；5:33-37；Graham V.,等人.PhaseIItrial of beta-all-transretinoic acid forcervical intraepithelial neoplasia via a collagen sponge and cervicalcap.West.J.Med.1986；145:192-195；Grimm C.,等人.Treatment of cervicalintraepithelial neoplasia with topical imiquimod:arandomized controlledtrial.Obstet.Gynecol.2012；120(1):152-159；Hampson L.,等人A single-arm,proof-of-concept trial of lopimune(lopinavir/ritonavir)as treatment for HPV-relatedpre-invasive cervical disease.PLoS ONE.2016；11；Helm C.W.等人Retinoids forpreventing the progression of cervical intra-epithelial neoplasia.CochraneSystematic Review.2013；Hubert P.,等人.Local applications of GM-CSF induce therecruitment of immune cells in cervical low-grade squamous intraepithelial lesions.Am.J.Reprod.Immunol.2010；64:126-136；Koeneman MM,等人Topical Imiquimodtreatment of high-grade Cervical intraepithelial neoplasia(TOPIC trial):studyprotocol for a randomized controlled trial.BMC Cancer.2016:doi:10.1186/s12885-12016-12187-12883；Krause S.,等人Interferon and cervical dysplasia:CINIIItreated with local interferon application.Colposcopy Gynecologic LaserSurgery.1987；3:195-198；Krebs H.B.,等人Chronic ulcerations following topicaltherapy with 5-fluorouracil for vaginal human papillomavirus-associatedlesions.Obstet.Gynecol.1991；78(2):205-208；Laccetta G.等人Effect of thetreatment with beta-glucan in women with cervical cytologic report ofatypical squamous cells of undetermined significance(ASCUS)and low-gradeintraepithelial lesions(L-SIL)Minerva Ginecol.2015；67:113-120；Meyskens F.L.,等人A phaseItrial of beta-all-transretinoic acid delivered via a collagensponge and a cervical cap for mild or moderate intraepithelial cervicalneoplasia.J.Natl Cancer Inst.1983；71:921-925；Niwa K.,等人Topical vidarabineof 5-fluoruracil treatment against persistent HPV in genital(pre)cancerouslesions.Oncol Reports.2003；10:1437-1441；Pachman DR,等人Randomized clinicaltrial of imiquimod:an adjunct to treating cervical dysplasia.Am.J.Obstet.Gynecol.2012；206(1):42e41-47；Rahangdale L等人Topical 5-fluorouracil fortreatment of Cervical Intraepithelial Neoplasia 2:a randomized controlledtrial.Am.J.Obstet.Gynecol.2014；210:e1-e8；Schneider A.,等人Efficacy trial oftopically administered Interferon gamma-1beta gel in comparison to lasertreatment in cervical intraepithelial neoplasia.Arch.Gynecol Obste.1995；256:75-83；Silman F.H.,等人5-fluorouracil/chemosurgery for intraepithelialneoplasia of the lower genital tract.Obstet.Gynecol.1981；58:356-360；SnoeckR.,Noel J.C.,Muller C.,Clercq De,Bossens M.Cidofovir,a new approach for thetreatment of cervix intraepithelial neoplasiaIII(CIN III)J.Med.Virol.2000；60:205–209；Stentella P.,Biamonti A.,Carraro C.Efficacy of carboxymethyl beta-glucan in cervical intraepithelial neoplasia:a retrospective,case-controlstudy.Minerva Ginecol.2017；69:425-430；Suh-Burgmann E.,Sivret J.,Duska L.R.,Del Carmen M.,Seiden M.V.Long-term administration of intravaginaldehydroepiandrosterone on regression of low-grade cervical dysplasia-a pilotstudy.Gynecol.Obstet.Invest.2003；55:25-31；Valencia M.H.,Pacheco A.C.,QuijanoT.H.,Giron A.V.,Lopez C.V.Clinical response to glycyrrhizinic acid in genitalinfection due to human papillomavirus and low-grade squamous intraepitheliallesion.Clin.Pract.2011 1(e93)；van de Sande A.,Koeneman M.,Gerestein C.,KruseA.,van Kemenade F.,van Beekhuizen H.Topical Imiquimod treatment of residualor recurrent cervical intraepithelial neoplasia(TOPIC-2 trial):a studyprotocol for a randomized controlled trial.BMC Cancer.2018；18:4510-4517；以及Van Pachterbeke C.,Bucella D.,Rozenberg S.Topical treatment of CIN 2+ bycidofovir:Results of a phase II,double-blind,prospective,placebo-controlledstudy.Gynecol Onc.2009；115:69-74。

VI.药物组合物和剂型

在本发明的一个方面中，根据本发明的药物组合物包含本文所述的任何活性化合物的抗HPV有效量，包括但不限于本文所述化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，任选地与药学上可接受的载剂、添加剂或赋形剂组合，和/或与至少一种其他活性化合物组合或交替。在一个实施例中，本发明包括药物上可接受的载体中的化合物II的固体剂型。在某些实施例中，所述药物组合物直接施用至宫颈、阴道、外阴、肛周区、肛门或阴茎。在某些实施例中，所述剂型粘附于宫颈、阴道、外阴、肛门周围区域、肛门或阴茎。

在本发明的一个方面中，根据本发明的药物组合物包含本文所述的有效量的抗HPV化合物II，任选地与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂组合，进一步任选地与至少一种其他抗肿瘤剂或抗病毒剂(例如抗HPV剂)组合。在某些实施例中，所述药物组合物包含与第二抗病毒药物组合的化合物II。在某些实施例中，所述药物组合物包含与抗癌药物组合的化合物II。

本发明包括药物组合物，其包含有效量以治疗本文所述的任何活性化合物(包括但不限于本发明的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)在药学上可接受的载体或赋形剂中的HPV感染。在一个替代实施例中，本发明包括药物组合物，其包含有效量以预防在药学上可接受的载体或赋形剂中本发明化合物I单富马酸盐或化合物II或前药的HPV感染。

本领域的普通技术人员将认识到，治疗有效量将随待治疗的感染或病情、其严重程度、拟采用的治疗方案、所用药物的药代动力学以及待治疗的患者或受试者(动物或人)而变化，且该治疗量可由主治医生或专家确定。

根据本发明在此描述的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III或任何活性化合物可在具有药学上可接受的载体的混合物中配制。为了治疗HPV感染，优选将药物组合物直接施用于宫颈、阴道、外阴、肛门周围区域、肛门或阴茎。

在某些药物剂型中，化合物的前药形式，特别是包括酰化(乙酰化或其他)和醚(烷基和相关)衍生物、磷酸酯、硫代磷酰亚胺酯、磷酰亚胺酸酯和本发明化合物的各种盐形式，可用于实现所需效果。本领域普通技术人员将认识到如何容易地将本发明化合物改性为前药形式，以便于将活性化合物传递到宿主生物体或患者内的目标部位。本领域普通技术人员还将利用前药形式的良好药代动力学参数，在适用的情况下，将本发明化合物递送到宿主生物体或患者内的目标部位，以最大限度地发挥化合物的预期效果。

根据本发明的治疗活性制剂中包含的包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的本文所述的任何活性化合物的量是实现根据本发明所期望的结果的有效量，例如，用于治疗HPV感染，降低HCV感染的可能性或抑制、减少和/或消灭HPV或其副作用(包括HPV感染后出现的疾病状态、病症和/或并发症)。

通常，为了治疗、预防或延迟这些感染的发生和/或降低HPV感染的可能性，或HPV的继发性疾病状态、病症或并发症，含有包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II、或化合物III的本文所述的任何活性化合物的剂型，以约0.001毫克至约100毫克的量施用。在某些实施例中，固体剂型包含从约0.001毫克至约0.005毫克、从约0.005毫克至约0.01毫克、从约0.01毫克至约0.03毫克、从约0.03毫克至约0.25毫克、从约0.20毫克至约0.5毫克、从约0.4毫克至约1毫克、从约0.75毫克至约3毫克、从约1毫克至约10毫克、从约或5毫克至约20毫克。在某些实施例中，固体剂型包含至少约0.001、0.003、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3、4、5、10、20、30、40或50毫克或更多的本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。

在某些实施例中，为了治疗或延迟这些感染的发生和/或降低HPV感染的可能性，或HPV的继发性疾病状态、病症或并发症，含有本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II、或化合物III)的剂型以从约0.001至约20mg、从约0.005至约10mg、从约0.01mg至约5mg、从约0.03mg至约1mg或从约0.05mg至约0.3mg的化合物I单富马酸盐、化合物II、或化合物III的量施用。通常，剂量为0.05mg至0.3mg的化合物I单富马酸盐、化合物II、或化合物III的剂型每周施用1、2、3或更多次，直至每天施用。

在某些实施例中，为了治疗HPV的高危毒株的感染，含有本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II、或化合物III)的剂型以从约0.001至约20mg、从约0.005至约10mg、从约0.01mg至约5mg、从约0.03mg至约1mg或从约0.05mg至约0.3mg的化合物I单富马酸盐、化合物II、或化合物III的量施用。通常，剂量为0.05mg至0.3mg的化合物I单富马酸盐、化合物II、或化合物III的治疗HPV的高危毒株的剂型可被每周施用1、2、3或更多次，直至每天施用。

在某些实施例中，可以按凝胶施用化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。在某些实施例中，凝胶包含从约0.001％至约10％、从约0.01％至约10％、从约0.05％至约5％、从约0.1至约3％、从约0.1至约2％化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III(重量/重量)。在某些实施例中，凝胶包含从约0.001％至约0.05％化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。在某些实施例中，凝胶包含从约0.01％至约0.5％化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。在某些实施例中，凝胶包含从约0.1％至约5％化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III。

在某些非限制性实施例中，将包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的本文所述的任何活性化合物局部施用。更一般地，化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III可以片剂、胶囊、悬浮液、液体、乳剂、植入物、颗粒、球体、乳膏、软膏、栓剂、药栓、透皮形式、凝胶、粘膜剂等形式施用。剂型也可以是双层片剂，其中全剂量的活性化合物沿一个方向(例如朝向目标组织)释放。

在某些实施例中，剂型可以软化、崩解和/或释放于低液体体积中。在某些实施例中，剂型软化并开始立即释放药物。在某些实施例中，剂型软化并开始逐渐释放药物。在某些实施例中，剂型软化并开始在一小时内释放药物。在某些实施例中，剂型软化并开始在两小时内释放药物。可以制备剂型以最大化表面积，促进崩解。在某些实施例中，剂型是圆形片剂。在某些实施例中，剂型是椭圆形片剂。在某些实施例中，剂型是囊片。片剂宽度具有最大尺寸，片剂厚度具有较小尺寸。在某些实施例中，剂型的宽度是厚度的两倍。在某些实施例中，剂型的宽度是厚度的三倍。在某些实施例中，剂型的宽度是厚度的四倍或更多倍。在某些实施例中，剂型为约0.1mm厚至约5mm厚。在某些实施例中，剂型为约1mm至约2mm厚。在某些实施例中，剂型为约2mm至约3mm厚。在某些实施例中，剂型为约3mm至约4mm厚。在某些实施例中，剂型为约4mm至约5mm厚。在某些实施例中，片剂为约5mm至约15mm厚。在某些实施例中，剂型少于5克。在某些实施例中，剂型为约0.05克至约0.15克。在某些实施例中，剂型为约0.1至约1克。在某些实施例中，剂型为约0.75克至约2克。在某些实施例中，剂型为从约1克至约5克。

在某些实施例中，剂型不容易从目标部位取出、移出或移动。这些所希望的特性可以通过将粘膜粘着聚合物包含在药物组合物中来实现。在某些实施例中，药物组合物包含粘膜粘着聚合物或粘膜粘着赋形剂。粘膜粘着聚合物和赋形剂的非限制性实例包括：羟丙甲纤维素、凝集素、硫醇化聚合物(例如，壳聚糖-亚氨基硫杂环戊烷、聚(丙烯酸)-半胱氨酸、聚(丙烯酸)-同型半胱氨酸、壳聚糖–巯基乙醇酸、壳聚糖-巯基乙基脒、藻酸盐-半胱氨酸、聚(甲基丙烯酸)-半胱氨酸和羧甲基纤维素钠-半胱氨酸)、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸聚羟乙基甲基丙烯酸酯、壳聚糖、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、胺化玉米淀粉、纤维素衍生物、聚(丙烯酸)聚合物、聚(羟乙基甲基丙烯酸酯)、聚(环氧乙烷)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、黄芪胶、藻酸钠、卡拉亚胶、瓜尔胶、黄原胶、可溶性淀粉、明胶、果胶、壳聚糖、甲基纤维素、透明质酸、羟丙基甲基纤维素、羟基丙基纤维素、吉兰糖胶(gellan gum)、角叉菜胶、阳离子羟乙基纤维素、水凝胶、二羟基苯丙氨酸和藻酸盐-聚乙二醇丙烯酸酯。在某些实施例中，药物组合物包含从约0％至约10％选自下组的粘膜粘着聚合物赋形剂，该组由以下组成：卡波姆、聚乙二醇、交聚维酮、聚卡波非、羟丙甲纤维素和羟乙基纤维素。

在某些实施例中，药物组合物包含从至少约0.1％至约90、约92％、约93％、约95％、约98％、约97％、约98％或约99％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约0.1％至约1％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约0.5％至约5％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约1％至约10％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约5％至约20％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约10％至约50％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约20％至约75％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约50％至约90％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含从约75％至约99％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含至少约0.1％、0.25％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含不超过约0.1％、0.25％、0.5％、0.75％、1％、2％、3％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的粘膜粘着聚合物。在某些实施例中，药物组合物包含0％的粘膜粘着聚合物。在这种情况下，通过使用其他药学上可接受的赋形剂实现对目标部位的粘附。

为了制备本发明的药物组合物，通常根据常规药物配混技术将治疗有效量的本文所述的任何活性化合物(包括但不限于本发明的化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)与药学上可接受的载体混合以产生剂量。载体可以采取多种形式，这取决于施用所需的制剂形式，例如局部、口服或肠胃外施用。在制备局部剂型的药物组合物时，可以使用任何常用的药物介质。因此，对于液体或半固体局部制剂例如凝胶、乳膏剂、软膏剂、悬浮液、酏剂和溶液，可以使用合适的载剂和添加剂，包括水、二醇、油、醇、防腐剂等。在某些实施例中，药物组合物包含丙二醇。在某些实施例中，药物组合物包含羧基聚亚甲基。在某些实施例中，药物组合物包含乙二胺四乙酸(EDTA)。在某些实施例中，药物组合物包含山梨酸。在某些实施例中，药物组合物包含卡波姆。在某些实施例中，药物组合物包含羟乙基纤维素。在某些实施例中，药物组合物包含聚乙二醇。

对于固体局部制剂如粉末、片剂、胶囊和对于固体制剂如栓剂，可以使用合适的载剂和添加剂，包括淀粉、糖载剂(如右旋糖、甘露醇、乳糖和相关载剂)、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、粘膜粘着聚合物、崩解剂等。如果需要，片剂或胶囊可以通过标准技术包衣或缓释。这些剂型的使用可显著增强化合物在患者中的生物利用度。在某些实施例中，药物组合物包含甘露醇。在某些实施例中，药物组合物包含硬脂酸镁。在某些实施例中，药物组合物包含微晶纤维素。在某些实施例中，药物组合物包含聚卡波非。在某些实施例中，药物组合物包含聚氧化乙烯。在某些实施例中，药物组合物包含胶体二氧化硅。在某些实施例中，药物组合物包含聚维酮。在某些实施例中，药物组合物包含异丙基醇。在某些实施例中，药物组合物包含羧甲淀粉钠。在某些实施例中，药物组合物包含交联羧甲基纤维素钠。在某些实施例中，药物组合物包含交聚维酮。在某些实施例中，药物组合物包含羟丙基甲基纤维素。在某些实施例中，药物组合物包含乳糖。在某些实施例中，粉剂药物组合物包含一种或多种选自下组的赋形剂，该组由以下组成：黄原胶、微晶纤维素、聚氧化乙烯、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚维酮、甘露醇、胶体二氧化硅、苯甲酸钠、羧甲淀粉钠、月桂基硫酸钠、泊咯沙姆407、聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物等。

在某些实施例中，包含有效量的本文所述的任何活性化合物的富马酸盐的药物组合物包括但不限于化合物I，进一步包含选自以下列表的药学上可接受的赋形剂，该列表由以下组成：阿拉伯树胶、琼脂、海藻酸、抗坏血酸棕榈酸酯、膨润土、苯甲酸、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、丁二醇、乙酸钙、氢氧化钙、菜籽油、角豆胶、角叉菜胶、蓖麻油、纤维素、玉米淀粉、依地酸二钠、异抗坏血酸、乳酸乙酯、乙基纤维素、甘油、山嵛酸甘油酯、甘油基单油酸酯、单硬脂酸甘油酯、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、乳酸、月桂酸、卵磷脂、亚油酸、中链甘油三酯、苯甲酸甲酯、甲基纤维素、微晶纤维素、微晶蜡、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸、花生油、果胶、磷酸、聚卡波非、藻酸钾、丙酸、没食子酸丙酯、对羟基苯甲酸丙酯、丙二醇、藻酸丙二醇酯、二氧化硅、二甲基硅油、藻酸钠、苯甲酸钠、碳酸氢钠、羧甲基纤维素钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、月桂基硫酸钠、焦亚硫酸钠、磷酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、山梨酸、硬脂酸、滑石、木薯淀粉、酒石酸、百里香酚、尿素、维生素E聚乙烯琥珀酸酯、蜂蜡、黄原胶和乙酸锌。

在某些实施例中，药物组合物包含用作阴道药栓的药学上可接受的赋形剂。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含高达99.9％选自下组的阴道药栓赋形剂，该组由以下组成：硬化脂、PEG、聚乙二醇(macrogols)、可可油和甘油。硬化脂的非限制性实例包括(脂肪酸(C₁₀至C₁₈)的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯，主要是三酯部分和乙氧基化脂肪醇)、(植物饱和脂肪酸的甘油酯，例如月桂酸)以及Supposi-base^TM(饱和聚乙二醇化甘油酯的混合物)。

在某些实施例中，包含有效量的本文所述的任何活性化合物的药物组合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)进一步包含药学上可接受的增强穿透、崩解、成膜和/或控制组合物释放特性的赋形剂。

在某个实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含穿透增强赋形剂。在某些实施例中，穿透增强赋形剂选自下组，该组由以下组成：油酸；桉油精；辛酰醇；Labrafil；Labrasol；月桂醇；二乙二醇单甲基醚；丙二醇；月桂酸钠；月桂基硫酸钠；鲸蜡基三甲基溴化铵；泊咯沙姆(231、182、184)；Tween 20、40、60、80；脂肪酸和脂肪酸酯；异硬脂酸；甘油；和壳聚糖。在某些实施例中，包含化合物I的富马酸盐的药物组合物含有从0％至约20％选自下组的穿透增强赋形剂，该组由以下组成：鲸蜡醇、丙二醇、transcutol P、油酸、肉豆蔻酸异丙酯、丙二醇二辛酸酯、甘油基单油酸酯、单辛酸丙二酯、PEG-8蜂蜡、鲸蜡醇、硬脂酸、鲸蜡醇棕榈酸酯和鲸蜡醇甾醇。在某些实施例中，药物组合物包含约从0％至约25％选自以下列表的穿透增强赋形剂，该列表由以下组成：硬脂醇、聚山梨醇酯80、月桂基硫酸钠、甘油单酯和甘油二酯、山梨醇酐单硬脂酸酯、甘油异硬脂酸酯、聚乙二醇15羟基硬脂酸酯、聚乙二醇40氢化蓖麻油、辛基十二烷醇和大豆卵磷脂。

在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含成膜赋形剂。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物含有从0％至约99％选自下组的成膜赋形剂，该组由以下组成：羟丙甲纤维素、聚乙二醇、聚甲基丙烯酸酯、微晶纤维素、瓜尔胶、黄原胶和聚乙烯吡咯烷酮。

在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含允许活性化合物的受控释放的赋形剂。在某些实施例中，受控释放的药物组合物包含乙基纤维素、羟丙甲纤维素、微晶蜡、聚卡波非、蜂蜡。

除非另有说明，药物组合物的赋形剂和其他组分的百分比范围以重量百分比表示。

在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的药物组合物进一步包含崩解增强赋形剂。在某些实施例中，崩解增强赋形剂选自下组，该组由以下组成：纤维素、瓜尔胶、交聚维酮、交联聚维酮、大豆多糖、硅酸钙、明胶、阳离子交换树脂、膨润土、柑橘浆、海藻酸、海藻酸钙、甲基纤维素、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、交联甲羧纤维素、过滤渣、玉米淀粉、羧甲淀粉钠(Explotab、Primojel)、甘氨酸、羟丙基淀粉和淀粉1500。在某些实施例中，药物组合物包含高达约99％崩解增强赋形剂，例如甘露醇和/或微晶纤维素。在某些实施例中，药物组合物包含从约0％至约70％选自下列表的崩解增强赋形剂，该列表由以下组成：乳糖、蔗糖和磷酸钙。在某些实施例中，药物组合物包含从约0％至约50％选自下列表的崩解增强赋形剂，该列表由以下组成：碳酸氢钠、柠檬酸、马来酸、己二酸和富马酸。在某些实施例中，药物组合物包含从约0％至约20％选自下列表的崩解增强赋形剂，该列表由以下组成：乙醇酸淀粉钠、预胶凝淀粉、交聚维酮和交联羧甲基纤维素钠。

在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III的药物组合物进一步包含从0％至约70％甘露醇，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％或约70％。在某些实施例中，包含化合物I的富马酸盐的药物组合物进一步包含从0％至约70％乳糖，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％或约70％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从约0％至约70％蔗糖，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％或约70％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从约0％至约70％微晶纤维素，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％或约70％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约20％羧甲淀粉钠，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约1％、约2％、约3％、约5％、约7％、约10％、约12％、约15％或约20％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从约0％至约20％预胶凝淀粉，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约1％、约2％、约3％、约5％、约7％、约10％、约12％、约15％或约20％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从约0％至约20％交聚维酮，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约1％、约2％、约3％、约5％、约7％、约10％、约12％、约15％或约20％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从约0％至约20％交联羧甲基纤维素钠，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约1％、约2％、约3％、约5％、约7％、约10％、约12％、约15％或约20％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％黄原胶，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％聚卡波非，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％聚氧化乙烯，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％羟乙基甲基纤维素，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％羟乙基纤维素，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％羟丙甲纤维素，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％羟丙基纤维素，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％ PVP，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。在某些实施例中，包含本文所述的任何活性化合物(包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III)的药物组合物进一步包含从0％至约50％微晶纤维素，包括但不限于达到所希望的结合的任何量，例如高达约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％或约45％。

在根据本发明的典型的实施例中，本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，并且所述组合物用于治疗、预防或延缓HPV感染或继发性疾病状态、病症或HPV的并发症。

在某些实施例中，用于治疗、预防或延缓HPV感染或继发性疾病状态、病症或HPV的并发症的片剂包含本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，进一步包含约250mg微晶纤维素、约20mg交聚维酮、约5mg硬脂酸镁、约5mg二氧化硅、约5mg聚氧化乙烯和约100mg甘露醇。在某些实施例中，用于治疗、预防或延缓HPV感染或继发性疾病状态、病症或HPV的并发症的片剂进一步包含约155mg微晶纤维素、约1.75mg硬脂酸镁和约17.5mg甘露醇。

在某些实施例中，用于治疗、预防或延缓HPV感染或继发性疾病状态、病症或HPV的并发症的半固体制剂包含本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，进一步包含约15mg卡波姆、约50mg丙二醇、约10mg山梨酸、约5mgEDTA和约920mg水。在某些实施例中，用于治疗、预防或延缓HPV感染或继发性疾病状态、病症或HPV的并发症的半固体制剂包含本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，进一步包含约20mg卡波姆；约70mg矿物油；约80mg聚乙二醇6硬脂酸酯I型、硬脂酸乙二醇酯和聚乙二醇32硬脂酸酯1型的混合物；约5mg对羟基苯甲酸酯；约60mg丙二醇；约5mg EDTA；和约760mg水。

在某些实施例中，用于治疗、预防或延缓HPV感染或继发性疾病状态、病症或HPV的并发症的用于重构的干粉剂包含本文所述的任何活性化合物，包括但不限于化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III，进一步包含约15.5mg黄原胶、约19.8mg甘露醇、约5mg二氧化硅和约0.5mg苯甲酸钠。

VII.组合及交替疗法

本文所述的针对上皮内瘤变的治疗可以与常规方法(例如但不限于，对转化区的切除或消融)组合。技术包括冷冻疗法、激光疗法、环形电切除术(LEEP)和锥形活组织检查。所有这些外科手术都会损坏受累区域并可能导致疤痕。对宫颈上皮内瘤变最常见的干预措施LEEP在60％-90％的病例中有效，然而它与流产、异位妊娠和负面心理结果的显著增加的风险相关联。在某些实施例中，本文所述的治疗用于减少、改善或替代这些常规操作的使用。

在某些实施例中，本文所述的治疗可以与外科手术技术组合使用。在某些实施例中，有需要的患者可以在施用有效量的本文所述化合物之前、期间和/或之后接受外科手术。在某些实施例中，外科手术可以是对目标组织和/或患病组织的切除，包括但不限于环形电切除术(LEEP)、转化区大环切除术(LLETZ)、刀锥切除术、冷刀锥切除术、刀锥活组织检查或激光锥形切除术。在某些实施例中，外科手术可以是消融，包括但不限于激光消融或冷冻消融。

药物对抗HPV感染的功效可以通过组合或交替使用另一种、甚至可能是两种或三种其他抗病毒化合物来延长、增强或恢复，这些抗病毒化合物会诱导不同于主要药物的突变或通过不同的途径发挥作用。或者，药物的药代动力学、生物分布、半衰期或其他参数可以通过这种组合疗法(如果考虑协调性，可以包括交替疗法)来改变。此外，由于HPV与几种类型的癌症有关，与抗癌治疗药一起施用的组合疗法可以为患者提供更好的结果。由于所披露的化合物II是DNA聚合酶抑制剂，因此向有需要的宿主施用与以下药物组合的化合物可能是有用的，这些药物是例如：

a)蛋白酶抑制剂；

b)另一种DNA聚合酶抑制剂；

c)E6或E6AP的抑制剂，如MEDI0457、木樨草素、CAF-24或棉花皮素；

d)E7抑制剂；

e)E1或E2抑制剂，包括E1-E2蛋白质相互作用的抑制剂；

f)L2脂肽；

g)L1或L2抑制剂或降解剂；

h)HDAC抑制剂(如伏立诺他)；

i)四跨膜蛋白的降解剂，如CD9、CD63或CD151；

j)免疫疗法，如T细胞疗法(包括过继性T细胞疗法)和检查点抑制剂；

k)抗增殖药物；

l)治疗性疫苗；

m)预防性疫苗；

n)三氯乙酸；

o)水杨酸；

p)咪喹莫特；

q)普达非洛；

r)9；

s)4；

t)Cervarix；

u)VGX-3100；

v)GGX-188E；和/或

w)ADXS11-001。

实施例

一般注解

以下仪器分析方法用于表征本发明的晶型形式。

X-射线粉末衍射(XRPD)

差示扫描量热法(DSC)

热重量分析(TGA)

动态气相吸附(DVS)

Karl Fischer水测定法

仪器：Mettler Toledo Coulometric KF Titrator C30

方法：库伦法

偏振光显微术(PLM)

核磁共振(NMR)

仪器	Bruker Avance-AV 400M
		频率	400MHz
探针	5mm PABBO BB-1H/D
		扫描次数	8
温度	297.6K
		弛豫延迟	1秒

傅里叶变换红外光谱(FT-IR)

高效液相色谱法(HPLC)

1.稳定性研究

梯度程序：

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	95	5
0.01	95	5
			9.0	5	95
13.0	5	95
			13.1	95	5
17.0	95	5

2.手性纯度

梯度程序：

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	95	5
35.0	60	40
			45.0	55	45
50.0	10	90
			55.0	10	90
55.5	95	5
			60.0	95	5

缩略语：

DMF：N,N-二甲基甲酰胺；

DCM：二氯甲烷，亚甲基二氯；

MeOH：甲醇，甲基醇；

ACN：乙腈；

EtOH：乙醇；乙基醇；

IPAc：异丙基乙酸酯；

IPA：异丙基醇，异丙醇；

THF：四氢呋喃；

MEK:甲基乙基酮；

DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯；

DEAD：偶氮二甲酸二乙酯；

MTBE：甲基叔丁醚；

DMSO-d6：氘化二甲亚砜；

Cs₂CO₃:碳酸铯；

TMSBr：三甲基甲硅烷基溴化物；

NaOMe：甲氧基钠；

TEA：三乙基胺；

Ph₃P：三苯基膦；

Na₂SO₄:硫酸钠；

NaOH：氢氧化钠；

HCl：盐酸；

H₂SO₄：硫酸；

BsOH：苯磺酸；

p-TsOH：对甲苯磺酸；

MsOH：甲磺酸；

¹H NMR：质子核磁共振；

LCMS：液相色谱质谱分光光度计；

HPLC：高压液相色谱法；

¹H NMR部分：s＝单峰；bs＝宽单峰；d＝双重峰；dd＝双双重峰；t＝三重峰；m＝多重峰；J＝自旋偶合常数。

实施例1：化合物I游离碱在25℃下的近似溶解度

将约2mg化合物I游离形式称重于2mL玻璃小瓶中，并添加等分试样的20μL的每种溶剂(表1)，以确定在25℃下的溶解度。在第二组实验中，将约10mg化合物I游离形式添加至2mL玻璃小瓶，并添加等分试样的20μL的每种溶剂，以确定在50℃下的溶解度。所添加的每种溶剂的最大体积为1mL。通过视觉观察确定近似溶解度。结果呈现在表1中。

表1.在25℃和50℃下化合物I游离形式的近似溶解度

实施例2：对化合物I游离碱形式的结晶筛选

在25℃下用溶剂平衡

如表2中所示，在25℃下，将约30mg化合物I游离碱在合适量的溶剂中在搅拌盘上搅拌平衡持续1周。在研究的第八天，没有观察到沉淀的固体，并且将所有十个样品在5℃下搅拌约3天。在实验10中，将庚烷中的悬浮液过滤。通过XRPD、DSC、TGA和NMR对实验10中获得的固体材料(湿饼)进行了研究。

表2.用溶剂在25℃下平衡持续1周

根据XRPD测量(图1)，实验10中获得的固体材料形成化合物I游离形式模式1。此模式的特征在于DSC(图2)，其具有熔融起始温度40.3℃(其中转变焓为43J/g)；并且在于TGA(图3)，其在40℃下具有0.1％的失重。根据¹H NMR，所述材料包含0.2％的残余庚烷。

通过添加抗溶剂沉淀

将约30mg化合物I游离碱溶解于以下列出的溶剂中(表3)。将抗溶剂缓慢添加至所获得的溶液。通过过滤收集实验3中的沉淀物，并且通过XRPD进行分析。

表3.通过添加抗溶剂沉淀的结果

根据XRPD数据(图1)，形成的固体材料如在实验3中显示的，表3是化合物I游离形式模式1。

一种结晶游离形式，化合物I游离形式模式1从在庚烷中的平衡实验和在丙酮/MTBE中的抗溶剂实验中获得。

实施例3：化合物I的盐的合成

化合物I硫酸盐

两种方法用于合成化合物I的硫酸盐。

方法A

在0-10℃下，向化合物I(0.049g，0.1mmol)在干燥THF(1mL)中的溶液里缓慢添加硫酸溶液(1N在THF中)。在添加硫酸溶液期间，化合物I游离碱的粉色澄清的THF溶液变为灰白色半固体。在20-30分钟内使反应混合物达到室温，并振摇。在允许固体材料沉降后，将上清液小心倾析。将所得的半固体用额外量的干燥THF(2x2mL)洗涤，并将所得固体在高真空下干燥，以产出0.053g呈灰白色固体的化合物I硫酸盐-1。

方法B

在0-10℃下，向化合物I(0.024g，0.05mmol)在干燥乙酸乙酯(EtOAc，0.5mL)中的溶液里缓慢添加硫酸溶液(1N，在EtOAc中)。在添加硫酸溶液期间，化合物I游离碱的粉色EtOAc澄清溶液变为灰白颜色的固体。在20-30min内使反应混合物达到室温，并充分振摇。在允许固体材料沉降后，将上清液小心倾析。将灰白色固体用额外量的EtOAc(2x2mL)洗涤。将所得的灰白色固体在高真空下干燥，以产出0.023g化合物I硫酸盐-2。

化合物I甲磺酸盐

两种方法用于合成化合物I的甲磺酸盐。

方法A

在0-10℃下，向化合物I(0.049g，0.1mmol)在干燥EtOAc(1mL)中的溶液里逐滴添加纯净的甲磺酸(MSA；MW＝96.11；d＝1.47；0.007mL；0.11mmol)。在添加MSA溶液期间，化合物I游离碱的粉色EtOAc澄清溶液变为灰白色半固体(胶水样)。在20-30min内使异质混合物达到室温，并充分振摇。在半固体材料沉降下后，将上清液小心地倾析。将所得的半固体(胶水样)用甲基叔丁醚(MTBE；2x2mL)洗涤，并在高真空下干燥，以产出0.054g化合物I甲磺酸盐-1。

方法B

在0-10℃下，向化合物I(0.049g，0.1mmol)在干燥IPA(1mL)中的溶液里逐滴添加甲磺酸溶液(1N，在THF中；0.11mmol；0.110mL)。在添加MSA溶液期间，化合物I游离碱的粉色EtOAc澄清溶液变为灰白色固体。在20-30min内使异质混合物达到室温，并充分振摇。在允许固体材料沉降下后，将上清液小心地倾析。将所得的固体用甲基叔丁醚(MTBE；2x2mL)洗涤，并在高真空下干燥，以产出0.049g化合物I甲磺酸盐-2。

化合物I盐酸盐

在0-10℃下，向化合物I(MW＝492；0.049g，0.1mmol)在干燥EtOAc(1mL)中的溶液里逐滴添加HCl溶液(4N，在二噁烷中；0.11mmole；0.027mL)。在添加HCl溶液期间，化合物I游离碱的粉色EtOAc澄清溶液变为灰白色固体。在20-30min内使该异质混合物达到室温，并充分振摇。在允许固体材料沉降下后，将上清液小心地倾析。将所得的固体用甲基叔丁醚(MTBE；2x2mL)洗涤，并在高真空下干燥，以产出0.045g化合物I HCl盐。

化合物I单富马酸盐

在0-10℃下，向化合物I(0.035g，0.071mmol)在干燥异丙醇(0.1mL)中的溶液里添加富马酸(MW＝116；12.3mg；0.106mmol；1.5当量)。使反应混合物达到室温，然后在60℃下加热30min，并且在室温下搅拌12h。将反应混合物过滤，并且在40℃下将滤液在减压下浓缩。将混合物用MTBE(2mL)稀释，充分振摇，并将MTBE小心地倾析。将无色固体用额外量的MTBE(2mL)洗涤，并且在高真空下干燥，以产出0.022g化合物I倍半富马酸盐。可以通过用额外的MTBE洗涤化合物I倍半富马酸盐，并且在高真空下干燥来合成化合物I单富马酸盐。

化合物I苯磺酸盐

在0-10℃下，向化合物I(0.057g，0.115mmol)在干燥EtOAc(1.0mL)中的溶液里逐滴添加苯磺酸溶液(BsOH，MW＝158；0.020g；0.127mmol在0.2mL EtOAc中)。在添加BsOH溶液期间，化合物I游离碱的粉色EtOAc澄清溶液沉淀为无色固体。在20-30min内使反应混合物达到室温，充分振摇。在允许固体材料沉降后，将上清液小心地倾析。将无色固体用额外量的MTBE(2x2mL)洗涤。将所得固体在高真空下干燥，以产出0.064g化合物I苯磺酸盐。

化合物I甲苯磺酸盐

在0-10℃下，向化合物I(0.024g，0.05mmol)在干燥EtOAc(0.5mL)中的溶液里逐滴添加对甲苯磺酸溶液(p-TsOH，0.055mL；0.055mmol；1N，在EtOAc中)。在添加p-TsOH溶液期间，化合物I游离碱的粉色EtOAc澄清溶液沉淀为无色固体。在20-30min内使反应混合物达到室温，并充分振摇。在允许固体材料沉降后，将上清液小心地倾析。将无色固体用额外量的MTBE(2x 2mL)洗涤。将所得固体在高真空下干燥，以产出0.027g化合物I甲苯磺酸盐。

通过差示扫描量热法测定在该实施例中获得的化合物I的盐的熔点。结果呈现在表4中。通过洗涤倍半富马酸盐产生的单富马酸盐具有经测试的盐中最高的熔点。

表4.化合物I的盐的熔点

实施例5：对化合物I游离碱的盐筛选

选择八种酸(富马酸、柠檬酸、L-苹果酸、L-酒石酸、琥珀酸、苯磺酸、草酸和马来酸)和两种共形成物(L-脯氨酸和烟酰胺)来筛选潜在的盐和/或共晶形成。将化合物I以两种非对映异构体的混合物使用(¹H NMR纯度为约98％-99％)。选择异丙醇(IPA)、乙醇和乙酸乙酯(EA)作为筛选溶剂。将浆液平衡、抗溶剂添加和缓慢蒸发应用为筛选方法。

通过浆液平衡筛选盐

将化合物I游离碱作为非对映异构体的混合物(约30mg)添加至合适的溶剂，随后在50℃、在搅拌下添加1或0.5摩尔当量(如在以下表5中所示)的酸(实验RC2至RC10)或共形成物(实验RC11和RC12)。在50℃下，将混合物搅拌2小时，并然后在25℃下搅拌至少12小时。对于其中形成澄清溶液的那些实验，在通风橱中将一半的体积蒸发，并将剩余物通过添加抗溶剂进行处理。将获得的悬浮液取出并离心。通过XRPD分析实验RC2(样品RC2-EA)、RC3(样品RC3-EA)、RC7(样品RC7-IPA和RC7-EA)和RC11(样品RC11-EA)中获得的固体。结果呈现在表5中。

表5.通过浆液平衡筛选盐(共晶)

在实验RC2中，在EA(样品RC2-EA)中获得的固体材料显示为富马酸的混合物，并且根据XRPD(图7和图10)类似于半富马酸盐模式1(表6中的样品AS3-B)的相。在实验RC3中，在EA(样品RC3-EA)中获得的固体材料显示为根据XRPD数据(图7)类似于半富马酸盐模式1的相。在实验RC11中，在EA中获得的固体材料显示为L-脯氨酸共形成物和游离形式模式1的混合物。在实验RC7中，从异丙醇(样品RC7-IPA，图8)和乙酸乙酯(样品RC7-EA，图9)中获得的固体材料的特征在于XRPD呈类似于单琥珀酸盐模式1(参见下文，表6，实验AS7，样品AS7-B)的相。

通过抗溶剂添加进行的盐筛选结果

向表5的实验中获得的澄清溶液中缓慢添加抗溶剂(甲基叔丁醚(MTBE)或庚烷)(表6中实验AS1至AS12)。在实验AS2、AS3和AS7的情况下，向EtOH中的溶液添加庚烷抗溶剂形成固体材料AS2-B、AS3-B和AS7-B的沉淀，这些材料由XRPD表征。

接下来，在25℃下，在搅拌下，向澄清溶液(来自实验AS1、AS3和AS12)和含有添加抗溶剂后获得的少量固体材料的样品AS5-A中添加0.5、1或1.5摩尔量的酸或共形成物，并将混合物在此温度下搅拌至少12小时。在实验AS13至AS17中没有形成固相。将结果总结在表6中。

表6.通过抗溶剂添加进行的盐筛选结果

向从实验RC2(乙醇作为溶剂，1摩尔当量的富马酸)获得的澄清溶液中添加庚烷抗溶剂导致单富马酸盐模式1的形成，其特征在于XRPD(样品AS2-B，图10)。为单富马酸盐的该材料的组合物通过¹H NMR(游离碱形式与富马酸的比率＝1:0.98)建立；根据XRPD，在该样品中没有发现游离富马酸相。向从实验RC3(乙醇作为溶剂，0.5摩尔当量的富马酸)获得的澄清溶液中添加庚烷抗溶剂，导致半富马酸盐模式1的形成，其特征在于XRPD(样品AS3-B，图10)。为半富马酸盐的该材料的组合物通过¹H NMR(游离碱形式与富马酸的比率＝1:0.54)建立；根据XRPD，在该样品中没有发现游离富马酸相。向从条目RC7(乙醇作为溶剂，1摩尔当量的琥珀酸)中获得的澄清溶液中添加庚烷抗溶剂导致单琥珀酸盐模式1的形成，其特征在于XRPD(样品AS7-B，图11)。为单琥珀酸盐的该材料的组合物通过¹H NMR(游离碱形式与琥珀酸的比率＝1:1.06)建立；根据XRPD，在该样品中没有发现游离琥珀酸相。

再平衡实验

从在以上所述的通过抗溶剂添加进行的盐筛选中获得的凝胶样或油状样品中蒸发溶剂。在25℃下，如表7中所示，使残余混合物在MTBE或庚烷中浆液化。将实验的结果在表7中给出。

表7.再平衡的结果

柠檬酸、L-苹果酸、L-酒石酸、草酸、马来酸和烟酰胺在再平衡实验中不形成化合物I的结晶相。

实施例6：通过浆液结晶的化合物I盐形成

在实验RC13中，将约50mg的化合物I游离碱添加至EtOH，并在50℃下在搅拌下持续2小时添加0.5摩尔量的富马酸，并然后在25℃下持续搅拌至少12小时。添加样品AS3-B的晶种，并且添加庚烷(0.4mL)作为抗溶剂。将所获得的混合物在5℃下搅拌约3天。然后将悬浮液取出并离心。在50℃，在真空下将获得的固体在炉中干燥约1小时，并且通过XRPD(图12)、NMR、DSC(图13)和TGA(图14)分析。

在实验RC14中，将约50mg化合物I游离碱添加至EtOH，并且在50℃，在搅拌下添加等摩尔量的琥珀酸持续2小时，并然后在25℃下持续搅拌至少12小时。添加样品AS7-B的晶种，并添加庚烷(0.2mL)作为抗溶剂。将获得的悬浮液取出并离心。在50℃，在真空下将获得的固体在炉中干燥约1小时，并且通过XRPD(图15)、NMR、DSC(图16)和TGA(图17)分析。

在实验RC15中，在0.1mL EtOH中添加约50mg化合物I游离碱。将等摩尔量的苯磺酸溶解于0.2mL EtOH中。然后在25℃下将苯磺酸的溶液逐滴添加至游离碱溶液。添加作为抗溶剂的MTBE(0.8mL)，并且将混合物在5℃下搅拌，其中形成一些固体。

在实验RC16中，在0.1mL IPA中添加约50mg化合物I游离碱。将1.5摩尔量的富马酸添加至混合物，并将混合物在25℃下搅拌。在约3小时后，样品太粘，添加0.1mL额外的IPA，并且在25℃下保持搅拌持续约22小时。获得粘性样品，并且在50℃下在真空烘箱中干燥约2小时，并且在25℃下在1.0mL MTBE中再次浆液化持续约5天。将获得的悬浮液取出并离心。将获得的固体在40℃、在真空下的炉中干燥约1小时，并且通过XRPD(图18)和NMR分析。在RC18中添加残余固体作为晶种。

在实验RC17中，在0.1mL EtOH中添加约30mg化合物I游离碱。在50℃下，在搅拌下，将0.5摩尔量的琥珀酸添加至混合物持续2小时，并获得澄清溶液。添加作为抗溶剂的庚烷(0.3mL)。获得油，并将混合物在25℃下搅拌持续约5天。将获得的悬浮液取出并离心。将获得的固体在40℃、在真空下的炉中干燥约1小时，并且通过XRPD(图19)、NMR、DSC(图20)和TGA(图21)分析。

在实验RC18中，将约30mg化合物I游离碱添加至0.1mL IPA。在50℃下，在搅拌下，将等摩尔量的富马酸添加至混合物持续2小时，获得黄色澄清溶液，并且添加0.3mL庚烷作为抗溶剂。添加一些来自RC16的晶种。获得悬浮液，并将其在25℃下搅拌持续至少12小时。将获得的悬浮液取出并离心，并通过XRPD(图22)分析。获得单富马酸盐模式1，并作为晶种添加至扩大样品。

表8.通过浆液结晶的盐筛选的结果

注：

*盐的比率是如在¹H NMR谱中通过质子整合测定的化合物I游

离碱:反离子的比率；

**ND：数据未收集。

根据盐筛选实验，鉴定了4种模式，半富马酸盐模式1、单富马酸盐模式1、半琥珀酸盐模式1和单琥珀酸盐模式1。四种模式显示可比的特性，例如相对于低熔点低至中等结晶度。

实施例7：富马酸盐的制备

化合物I半富马酸盐模式1的制备

将约200mg化合物I游离碱添加至0.5mL EtOH。伴随搅拌，在50℃下添加0.5摩尔量的富马酸，并将混合物搅拌2小时。获得澄清溶液。然后将溶液在1小时内冷却至25℃。添加样品RC13(实施例5，表7)的半富马酸盐晶种，随后添加2.5mL庚烷以引起沉淀。获得油，并且在25℃下持续搅拌约4天。在4天后，将所得的悬浮液冷却至5℃。在5℃下搅拌约4天后，通过过滤收集沉淀的固体，并且在40℃、在真空下干燥约3小时。作为结果，获得116mg淡橙色半富马酸盐模式1，其产率为52％。XRPD显示在图23中；DSC显示在图24中；并且TGA显示在图25中。

化合物I单富马酸盐模式1的制备(小规模制备)

将约244mg化合物I游离碱添加至0.8mL IPA。然后，添加1.0当量的富马酸，伴随在50℃下搅拌约1.5小时。将获得的黄色澄清溶液冷却至25℃，并且搅拌约5分钟。将样品RC18(表7)的单富马酸盐晶种添加至混合物，随后添加4mL庚烷作为抗溶剂。将混合物在25℃下搅拌持续4天。通过过滤收集沉淀的材料，并且在40℃、在真空下干燥约2小时。作为结果，获得208mg单富马酸盐模式1固体，其产率为69％。XRPD显示在图23中。以10℃/min进行的DSC显示在图26中，以2℃/min进行的DSC显示在图27b中。DSC循环结果显示在图27c中。TGA显示在图28中。

表9.化合物I游离碱模式及其单富马酸盐和半富马酸盐模式的表征

化合物I模式1是高结晶度。半富马酸盐和单富马酸盐模式是中等结晶度。

化合物I模式1是无水化合物，并且在75.0℃的T_起始下具有熔融峰，其中焓为约64J/g。它显示在约70℃下的约0.3％失重。KF显示它含有约1.7％的水。通过¹H NMR检测约0.7％的MTBE(按重量计)残余物。

化合物I半富马酸盐模式1是无水化合物。基于¹H NMR结果，游离形式:富马酸的化学计量为约1:0.5。它在85.2℃的T_起始下具有熔融峰，其中焓为约37J/g。它显示在约85℃下的约1.0％失重。KF显示它含有约1.7％的水。通过¹H NMR检测约0.7％的EtOH和0.7％的庚烷(残余物按重量计)。

化合物I单富马酸盐模式1是无水化合物。基于¹H NMR结果，游离形式:富马酸的化学计量为约1:1.0。它在107.2℃的T_起始下具有熔融峰和分裂峰，并且其中焓为约78J/g。两个热事件不能用2K/min和0.5K/min加热速率以及通过DSC进行分辨。它显示在约107℃下的约0.3％失重。KF显示它含有约1.2％的水。通过¹H NMR检测约0.7％的IPA和2.2％的庚烷(按重量计)残余物。

实施例8.化合物I游离碱模式1、化合物I单富马酸盐模式1和化合物I半富马酸盐模式1的稳定性

初始化学纯度：化合物I游离碱模式1、化合物I单富马酸盐模式1和化合物I半富马酸盐模式1的初始纯度分别为98.7％、98.6％和97.8％。

容积稳定性：在25℃/92％RH和40℃/75％RH在敞式容器中，在60℃在密封容器中进行加速稳定性实验持续一周。结果呈现在表10中。化合物I单富马酸盐模式1的结果还呈现在图28中。

所有三种候选物在暴露于三种条件后均显示出良好的物理稳定性。它们在暴露于40℃/75％ RH持续一周后均显示一些降解，其中两种在升高的温度(60℃持续一周)下是不稳定的。在上述两种条件下，化合物I半富马酸盐模式1比化合物I单富马酸盐模式1更倾向于被降解。

表10.化合物I游离碱模式1、化合物I单富马酸盐模式1和化合物I半富马酸盐模式1的容积稳定性

实施例9.化合物I游离碱模式1、化合物I单富马酸盐模式1和化合物I半富马酸盐模式1的溶解度

将约4mg的化合物I模式1添加至2mL的缓冲液溶液。分别将约4mg的化合物I半富马酸盐模式1和化合物I单富马酸盐模式1添加至1.8mL和1.6mL缓冲液溶液。在模拟的阴道分泌液中用0.2N NaOH调节pH值。在37℃下搅拌0.5小时和2小时后，获得所有三种候选物的澄清溶液。

表11.化合物I游离碱模式1、化合物I单富马酸盐模式1和化合物I半富马酸盐模式1的溶解度

在37℃下在五种介质中持续0.5h和2h测试溶解度：pH 3.0柠檬酸盐缓冲液、pH4.5乙酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液、水、模拟的阴道分泌液(pH 4.2)。所有三种候选物在介质中均高度可溶(>2mg/mL)。

实施例10：化合物I游离碱模式1、化合物I半富马酸盐模式1和化合物I单富马酸盐模式1的吸湿性

通过DVS在25℃下使用以下方法对吸湿性进行了研究：

方法：40-0-95-0-40％ RH，dm/dt＝0.002

结果呈现在表12和图29至34中。

表12.化合物I游离碱模式1、化合物I半富马酸盐模式1和化合物I单富马酸盐模式1的吸湿性

注：D.–解吸附；S.–吸附

通过DVS在25℃下对吸湿性进行了研究。所有三种模式均为中等吸湿性。化合物I模式1显示约4.3％水吸收至90％ RH，但在95％Rh下吸收约14.3％的水。对于化合物I单富马酸盐模式1和化合物I半富马酸盐模式1，它们在高达95％ RH显示约2.9％和6.9％的水吸收。在DVS测试之后无形式变化。

实施例11：单富马酸盐模式1的大规模制备

将约4.16g的化合物I游离碱溶解于11mL的IPA。然后，在50℃下，在搅拌下，将1.0当量的富马酸添加至黄色澄清溶液。约1小时后，一些固体沉淀析出。然后，添加10mg的单富马酸盐晶种(来自上述‘小规模制备’)。将混合物在50℃下搅拌约1.5小时并冷却至25℃，然后将其在25℃下搅拌约10min。然后，添加40mL的庚烷作为抗溶剂。将获得的悬浮液在25℃下搅拌约24小时，然后以0.1℃/min的速率冷却至5℃，并在5℃下搅拌约1天。通过过滤收集固体并在40℃、在真空下在炉中干燥约2小时。获得约4.1g的淡粉色固体，其产率为81.2％。XRPD显示在图35中；10℃/min速率的DSC显示在图36a中；2℃/min速率的DSC显示在图36b中；mDSC热谱图显示在图36c中；TGA显示在图37中。

表13.化合物I单富马酸盐模式1的特性

实施例12：化合物I富马酸盐的多晶型物筛选研究

进行化合物I(非对映异构体的混合物)的富马酸盐的多晶型物筛选研究。通过平衡、沉淀(通过添加抗溶剂)、缓慢冷却、快速冷却和缓慢蒸发实验对其多晶型行为进行了研究。

化合物I单富马酸盐模式1在25℃和50℃下的近似溶解度

将约2mg化合物I单富马酸盐模式1(实施例11)称重于2mL玻璃小瓶中，并添加20μL等分试样的每种溶剂(如显示在表14中)，以确定在25℃下的溶解度。将约10mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例11)称重于2mL玻璃小瓶中，并添加等分试样的20μL的每种溶剂(如显示在下表14中)，以确定在50℃下的溶解度。所添加的每种溶剂的最大体积为1mL。通过视觉观察确定近似溶解度。

表14.化合物I单富马酸盐模式1在25℃和50℃下的近似溶解度

用溶剂在25℃下平衡持续2周和3周

将约30mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例11中获得的)在合适的量的溶剂在25℃下用搅拌片器平衡持续2周和3周。将获得的悬浮液过滤。通过XRPD对固体部分(湿饼)进行了研究。当观察到差异时，进行了另外的研究(例如NMR、DSC、TGA、HPLC和PLM)。结果呈现在表15-30和图38-60中。

表15.用水在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡持续2周和3周的结果。

对于模式D，XRPD衍射图显示在图38和图39中；DSC热谱图显示在图40和图41中；TGA热谱图显示在图42和图43中。

表16.用乙腈在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡持续2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

对于模式C，XRPD衍射图显示在图44中；DSC热谱图显示在图45中；并且TGA热谱图显示在图46中。

表17.用MEK在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡持续2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

对于模式B，XRPD衍射图显示在图47中；DSC热谱图显示在图48中；并且TGA热谱图显示在图49中。

表18.用丙酮在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡持续2周和3周的结果。

XRPD衍射图显示在图47(3周)中。

表19.用异丙醇在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡持续

2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

对于模式1，XRPD衍射图显示在图50中；DSC热谱图显示在图51中；并且TGA热谱图显示在图52中。

表20.用丙酮/甲苯(1:1v/v)在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡持续2周和3周的结果。

对于模式E，XRPD衍射图显示在图53中；DSC热谱图显示在图54和图55中；并且TGA热谱图显示在图56和图57中。

表21.用丙酮/庚烷(1:1v/v)在25℃下对化合物I单富马酸盐模

式1平衡持续2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD衍射图显示在图47(3周)。

表22.用IPA/庚烷(1:1v/v)在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡持续2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD衍射图显示在图50中。

表23.用IPA/甲苯(1:1v/v)在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD衍射图显示在图50中。

表24.用IPA/MTBE(1:3v/v)在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD衍射图显示在图50中。

表25.用THF/庚烷(1:3v/v)，在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD显示在图58和图59中。

表26.用EtOH/庚烷(1:3v/v)，在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD衍射图显示在图50中。

表27.用EA/甲苯(1:3v/v)，在25℃下，对化合物I单富马酸盐模式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD显示在图58和图59

表28.用EtOH/甲苯(1:3v/v)，在25℃下对化合物I单富马酸盐模式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD显示在图58和图59中。

表29.用水/ACN(2.9:97.1v/v)，在25℃下，对化合物I单富马酸盐模式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD衍射图显示在图44中。

表30.用IPA/庚烷(1:4v/v)，在25℃下对化合物I单富马酸盐模

式1平衡2周和3周的结果。

注：盐的比率是游离碱形式:富马酸的比率

XRPD衍射图显示在图60中。

通过添加抗溶剂沉淀

将约30mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)溶解于良好溶剂。将抗溶剂缓慢添加至所获得的溶液。通过过滤收集沉淀物。通过XRPD对固体部分(湿饼)进行了研究。当观察到差异时，进行了另外的研究(例如NMR、DSC、TGA)。如果没有获得沉淀，则将溶液冷却至5℃进行结晶。在5℃下搅拌约23天后，没有获得沉淀，将溶液放入-20℃冷柜中进行结晶。

结果呈现在表31中。XRPD衍射图显示在图61和图62中。

表31.通过添加抗溶剂使化合物I富马酸盐沉淀

通过缓慢蒸发在室温下结晶

与近似溶解度实验组合，将溶解度样品通过0.45μm尼龙过滤网过滤。将获得的溶液在环境条件下缓慢蒸发。检查固体残余物的多晶型形式。

结果呈现在表32中。XRPD衍射图显示在图63和图64中。

表32.通过缓慢蒸发在室温下结晶

通过缓慢冷却从热饱和的溶液结晶

在50℃下，将约30mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)溶解于最小量的所选溶剂。将获得的溶液以0.1℃/min的速率冷却至5℃。通过过滤收集沉淀物。通过XRPD对固体部分(湿饼)进行了研究。当观察到差异时，进行了另外的研究(例如NMR、DSC、TGA)。如果没有获得沉淀，则将溶液放入-20℃冷柜中进行结晶。在-20℃冷柜中储存约5天后，没有获得沉淀，添加庚烷作为抗溶剂。通过过滤收集沉淀物。通过XRPD对固体部分(湿饼)进行了研究。

结果呈现在表33中。XRPD衍射图显示在图65和图66中。

表33.通过缓慢冷却从热饱和的溶液结晶

通过快速冷却从热饱和的溶液结晶

在50℃下，将约30mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)溶解于最小量的所选溶剂。将获得的溶液放入冰浴中并摇动。通过过滤收集沉淀物。通过XRPD对固体部分(湿饼)进行了研究。当观察到差异时，进行了另外的研究(例如NMR、DSC、TGA)。如果没有获得沉淀，则将溶液放入-20℃冷柜中进行结晶。在-20℃冷柜中储存约7天后，没有获得沉淀，添加庚烷作为抗溶剂。通过过滤收集沉淀物。通过XRPD对固体部分(湿饼)进行了研究。

结果呈现在表34中。XRPD衍射图显示在图67和图68中。

表34.通过快速冷却从热饱和的溶液结晶

在加热和冷却下化合物I单富马酸盐模式1的行为

通过两种不同的加热-冷却循环的DSC对化合物I单富马酸盐模式的多晶型行为进行了研究。

循环1：以10℃/min，0℃至106℃；以10℃/min，106℃至0℃；以10℃/min，从0℃至250℃重新加热。

循环2：以10℃/min，0℃至130℃；以10℃/min，130℃至0℃；以10℃/min，从0℃至250℃重新加热。

结果呈现在表35以及图69和图70中。

表35.在加热和冷却下化合物I单富马酸盐模式1的行为

压缩后行为

用液压机在10MPa将约10mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)压缩5分钟。进行了XRPD表征以研究压缩后多晶型行为根据XRPD，未观察到形式变化。

研磨模拟实验

将约10mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)用研钵手动研磨并捣5min。通过XRPD评估晶型转变和结晶度。根据XRPD，未观察到形式变化；结晶度结晶度略有降低。

制粒模拟实验

将水或乙醇逐滴添加至约10mg的化合物I单富马酸盐模式1(实施例7)直到固体充分润湿。将样品用研钵手动研磨并捣3分钟。将样品在环境条件下干燥10min。通过XRPD评估晶型转变和结晶度。根据XRPD，观察到乙醇和水中均无形式变化。

经鉴定的单富马酸盐和半富马酸盐多晶型物的总结

研究中使用的化合物I单富马酸盐模式1由化合物I游离碱根据实施例7制备。在以下所述的多晶型研究中使用的单富马酸盐的初始形式(模式1)是单富马酸盐的无水化合物，其HPLC纯度为约99.3％。游离形式和富马酸的比率为约1:0.96(根据¹H NMR)。如通过差示扫描量热法(DSC)测量，它在约98.5℃的T_起始下(其中焓为约14J/g)，并且在109.6℃下(焓为约25J/g)具有两个熔融峰。通过热重量分析(TGA)，模式1显示在约98℃下的约0.5％失重和在98℃至140℃下的约0.6％失重。通过¹HNMR检测到约1.0％(按重量计)庚烷和0.2％(按重量计)IPA残余物。Karl Fischer滴定显示其含有约1.3％水。

在多晶型物研究期间，鉴定了四种新模式。尽管使用单富马酸盐作为初始物理形式，获得新的模式显示不同的化学计量比。模式B、模式C和模式E是半富马酸盐，模式D是降解产物。

模式B是半富马酸盐的无水化合物，其HPLC纯度为约99.6％。使用MEK、丙酮、丙酮/庚烷、MEK/庚烷和EtOH/MTBE作为溶剂，其可以由平衡实验、添加抗溶剂、缓慢冷却和快速冷却实验获得。游离碱形式与富马酸的比率为约1:0.52(通过1H-NMR)。它在约77.4℃的T_起始下(其中焓为约71J/g)，并且在88.4℃下(其中焓为约18J/g)具有两个热事件。它显示在约77℃下的约0.7％失重和在77℃至130℃下的约4.2％失重。通过¹H NMR检测约4.6％(按重量计)MEK残余物。

使用ACN和ACN/水作为溶剂，模式C和富马酸的混合物可以通过平衡、缓慢冷却和快速冷却实验获得。混合物的游离碱形式与富马酸的比率为约1:0.95(根据¹H NMR)。用水洗涤后，该比率降低至约1:0.76。这表示模式C不是单富马酸盐。它在约74.0℃的T_起始下(其中焓为约89J/g)及在约90.6℃的T_起始下(其中焓为约15J/g)具有两个热事件。它显示在约73℃下的约0.4％失重和在73℃至144℃下的约2.1％失重。通过¹H NMR检测约2.0％(按重量计)ACN残余物。

模式D是降解产物，其中HPLC纯度为约0.2％。其通过平衡实验实验在水中获得。它在约41.4℃的T_起始下(其中焓为约67J/g)及在约72.1℃的T_起始下(其中焓为约29J/g)具有两个热事件。它显示在约41℃下的约0.6％失重和在41℃至178℃下的约8.5％失重。

模式E是半富马酸盐的无水化合物，其中HPLC纯度为约98.9％。其通过平衡实验在丙酮/甲苯中获得。混合物的游离碱形式与富马酸的比率为约1:0.69(通过¹H NMR)。它在约53.1℃的T_起始下(其中焓为约33J/g)及在约96.5℃的T_起始下(其中焓为约34J/g)具有两个热事件。它显示在约53℃下的约1.0％失重和在53℃至96℃下的约3.6％失重。通过¹H NMR检测约0.6％(按重量计)丙酮残余物。

化合物I单富马酸盐和半富马酸盐多晶型物的研究结果总结在下表36中。盐的比率是化合物I游离碱和盐反离子之间的比率。“AS”表示可以使用表中列出的溶剂/抗溶剂对，通过添加抗溶剂来制备的形式。“EQ”表示可以通过在所列溶剂中的平衡来制备的形式。“SC”表示可以通过缓慢冷却化合物I单富马酸盐在所列溶剂中的溶液来制备的形式。“FC”表示可以通过快速冷却化合物I单富马酸盐在所列溶剂中的溶液来制备该形式。

表36.经鉴定的化合物I富马酸盐模式A、B、C和E的总结

实施例13：化合物II模式1的制备

实验1.晶种的小规模合成和制备

将100mg的R_P化合物I游离碱和0.3mL的IPA添加至玻璃小瓶中。向其中添加1.0当量的富马酸并将所得的混合物在50℃下搅拌2min，大多数材料沉淀析出。向其中添加1.0mL的庚烷。将样品在50℃下搅拌1h，然后以0.1℃/min冷却至3℃。在3℃搅拌约8h后，添加0.4mL的庚烷。将获得的固体通过过滤分离并在真空烘箱中在40℃下干燥约2h以获得化合物II模式1。表征结果报告于表37中。化合物II模式1的XRPD衍射图显示在图71中。

表37.化合物II模式1(小规模制备)的特性

实验2.大规模制备

将3g的R_P化合物I游离碱和9mL的IPA添加至玻璃小瓶中。向其中添加1.0当量的富马酸并将所得的混合物在50℃下搅拌5分钟。将来自实验1的约21mg的化合物II模式1晶种添加到混合物中。将30mL的庚烷添加到混合物中。将样品在50℃下搅拌1h，然后以0.1℃/min的速率冷却至3℃。在3℃下搅拌约16h后，通过过滤分离获得的固体并在真空烘箱中在40℃下干燥约4h并在50℃下干燥约3h。这产生2.9g白色固体化合物II模式1，其产率为78.3％。化合物II模式1的XRPD衍射图显示在图71中。化合物II模式1的DSC热谱图显示在图72中。化合物II模式1的TGA热谱图显示在图73中。

表38.化合物II模式1(大规模制备)的特性

化合物II模式1是无水化合物。基于¹H NMR结果，游离碱:富马酸的化学计量为约1:1.0。它在141.5℃的T_起始下具有熔融峰，并伴有分解。TGA显示在约130℃下的约0.3％失重。通过¹H NMR没有检测到残余溶剂。

实施例14：化合物IV模式1的制备

将66mg的R_P化合物I游离碱和0.2mL的EtOH添加至玻璃小瓶中。向其中添加0.5当量的富马酸并将所得的混合物在50℃下搅拌2h，然后一些固体沉淀析出。向该悬浮液中添加0.4ml的庚烷并在25℃下进一步搅拌持续约4天。将固体通过过滤分离并在真空烘箱中在50℃下干燥约2h。获得的化合物IV模式1表征为如表39中报告的。化合物IV模式1的XRPD衍射图显示在图74中。化合物IV模式1的DSC热谱图显示在图75中。化合物IV模式1的TGA热谱图显示在图76中。

表39.化合物IV模式1的特性

实施例15：化合物III模式1的制备

将100mg的S_P化合物I游离碱和0.3mL的IPA添加至玻璃小瓶中。向其中添加1.0当量的富马酸并将混合物在50℃下搅拌15min，大多数材料沉淀析出。添加1.0mL庚烷后，将样品在50℃下搅拌1h，然后以0.1℃/min冷却至3℃。在3℃搅拌约8h后，将0.4mL的庚烷添加至混合物中以得到更好的悬浮液。将白色固体通过过滤分离并在真空烘箱中在40℃下干燥约2h以产出化合物III模式1。表征结果报告于表40中。化合物III模式1的XRPD衍射图显示在图77中。化合物III模式1的DSC热谱图显示在图78中。化合物III模式1的TGA热谱图显示在图79中。

表40.化合物III模式1的特性

实施例16：化合物III模式2的制备

将3g的S_P化合物I游离碱和9mL的IPA添加至玻璃小瓶中。添加1.0当量富马酸后，大量固体立即沉淀析出。将30mL的庚烷添加至混合物，然后将约20mg的化合物III模式1晶种添加至混合物。将样品在50℃下搅拌1h，然后以0.1℃/min冷却至3℃。在3℃下搅拌约20h后，在20min内将样品从3℃加热到50℃，然后将0.2当量的富马酸和1.5ml的庚烷添加至混合物。将所得的混合物在50℃下搅拌约2h，然后以0.1℃/min的速率冷却至3℃。在3℃下搅拌约13h后，在20分钟内重新加热到50℃，并在50℃下搅拌约6h。以0.1℃/min冷却至3℃并在3℃下搅拌约2天。将所得的固体通过过滤分离并在真空烘箱中在50℃下干燥约3h以获得3.1g的白色固体，其产率为83.6％。结果报告于表41中。化合物III模式2的XRPD衍射图显示在图80中。化合物III模式2的DSC热谱图显示在图81中。化合物III模式2的TGA热谱图显示在图82中。

表41.化合物III模式2的特性

化合物III模式2是无水化合物。基于¹H NMR结果，游离碱:富马酸的化学计量为约1:1.2。它在106.4℃的T_起始下(其中焓为约47J/g)及在118.8℃的T_起始下(其中焓为约63J/g)具有两个熔融峰。它显示在约105℃下的约0.3％失重。通过¹H NMR没有检测到残余溶剂。

实施例17：化合物V模式1的制备

将100mg的S_P化合物I游离碱和1.0当量的富马酸添加至玻璃小瓶中，随后添加0.8mL的IPA。在50℃搅拌约1h后，获得澄清溶液。将约2mg化合物III模式1晶种添加至混合物。在观察到一些固体沉淀后，将1mL庚烷添加至混合物中。将混合物在50℃下搅拌2h然后以0.1℃/min冷却至3℃。将其在3℃下搅拌约3天。将固体通过过滤分离并在真空烘箱中在50℃下干燥约2h以产出化合物V模式1。结果报告于表42中。化合物V模式1的XRPD衍射图显示在图83中。化合物V模式1的DSC热谱图显示在图84中。化合物V模式1的TGA热谱图显示在图85中。

表42.化合物V模式1的特性

实施例18：化合物V模式2的制备

将100mg的S_P化合物I游离碱和1.0当量的富马酸添加至玻璃小瓶随后添加0.8mL的IPA。向所得的澄清溶液中添加1ml的庚烷，并将混合物在50℃下搅拌2h然后以0.1℃/min冷却至3℃。将其在3℃下搅拌约3天。将形成的固体通过过滤分离并在真空烘箱中在50℃下干燥约2h以获得化合物V模式2。结果报告于表43中。化合物V模式2的XRPD衍射图显示在图86中。化合物V模式2的DSC热谱图显示在图87中。化合物V模式2的TGA热谱图显示在图88中。

表43.化合物V模式2的特性

实施例19：化合物II模式1和化合物III模式2的容积稳定性

将化合物Ⅱ模式1和化合物Ⅲ模式2置于25℃/92％ RH的敞式容器中，置于40℃/75％ RH的敞式容器中，及置于60℃的密封的容器中，放置1周。通过XRPD和HPLC对样品进行表征，并检查颜色变化。结果呈现在表44中。

表44.稳定性：纯度和外观

初始化学和手性纯度

化合物II模式1和化合物III模式2的初始化学纯度分别为99.7％和98.8％。化合物II模式1的手性纯度(％de)是98.4％。

容积稳定性

在25℃/92％ RH在敞式容器中，在40℃/75％ RH在敞式容器中和在60℃在密封容器中进行加速稳定性实验持续一周。化合物II模式1显示在暴露于三种条件后的良好的物理和化学稳定性。化合物III模式2在以上提及的三种条件下显示出良好的物理稳定性。在分别暴露于敞式容器中40℃/75％ RH和密封容器中60℃后，降解产物增加了1.6％和1.5％。

实施例20：化合物II模式1和化合物III模式2的溶解度研究

将12mg化合物II模式1、12mg化合物III模式2准确称取到8mL玻璃小瓶中，并向其中添加5mL溶解度介质(solubility medium)。使用的盐量相当于10mg无水游离碱。在37℃下0.5和2h后，所有样品在介质中均为澄清溶液。用pH计分析所获得的澄清溶液的pH，并通过观察确定溶解度。

表45.在37℃下的溶解度，目标浓度10mg/5mL，平衡持续0.5h和2h

在37℃下，在五种介质(pH 3.0柠檬酸盐缓冲液、pH 4.5乙酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液、水、模拟的阴道分泌液(pH 4.2))中持续0.5h和2h测试溶解度。两种候选物，化合物II模式1和化合物III模式2在介质中是高度溶解的(>2mg/mL)。

实施例21：化合物II模式1和化合物III模式2的吸湿性

通过DVS在25℃下使用以下方法对吸湿性进行了研究：

方法：40-0-95-0-40％ RH，dm/dt＝0.002

化合物II模式1和化合物III模式2是轻微吸湿的。化合物II模式1在高达95％ RH显示约0.2％水吸收。在DSC测试后未观察到形式变化。化合物III模式2在高达95％ RH显示约1.0％水吸收。在DSC测试后未观察到形式变化。结果呈现在表46中。

表46.

实施例22：化合物II模式1和化合物III模式2的多晶型物筛选

50mg单富马酸盐在合适量的溶剂或溶剂混合物中平衡。将获得的悬浮液平衡1周。通过离心过滤分离固体。通过XRPD分析在平衡后获得的湿饼，以确定晶型变化。

表47.微型多晶型物筛选：在25℃下平衡1周后的晶体修饰(盐的比率被定义为游离碱:富马酸的比率)

化合物II模式1的多态性评估

在该研究中，在平衡实验期间没有观察到解离，并且异构体I的富马酸盐的2种新的潜在多晶型物(化合物II模式2和化合物II模式3)分别从乙腈和MEK获得。这些都显示出比化合物II模式1更低的熔融温度。异构体1的两种多晶型物显示未改变的高手性纯度。

化合物III模式2的多态性评估

在该研究中，在平衡实验期间观察到解离，获得异构体II的半富马酸盐(半富马酸盐模式2)。另外，获得异构体II的4种新的单富马酸盐(化合物III模式3、化合物III模式4、化合物III模式5和化合物III模式6)。

实施例23：X-射线粉末衍射(XRPD)

在Bruker D8 Advance衍射计上进行XRPD分析。

以下表48提供了在化合物II模式1上进行的XRPD的结果。XRPD示出尖锐的峰，表明样品由结晶材料组成。在化合物II模式1的XRPD中，在约3.1±0.2°、约9.3±0.2°、约12.1±0.2°、约14.9±0.2°、约15.1±0.2°、约18.1±0.2°、约19.8±0.2°、约20.1±0.2°、约25.1±0.2°、约25.9±0.2°和约28.8±0.2°处观察到显著的峰。

表48.化合物II模式1的XRPD峰列表

下表49提供了在化合物IV模式1上进行的XRPD的结果。在化合物IV模式1的XRPD中，在约6.5±0.2°、约12.1±0.2°、约17.5±0.2°、约18.1±0.2°、约18.5±0.2°、约19.6±0.2°、约19.8±0.2°、约20.2±0.2°、约20.6±0.2°和约21.3±0.2处观察到显著的峰。

表49.化合物IV模式1的XRPD峰列表

下表50提供了在化合物III模式1上进行的XRPD的结果。在化合物III模式1的XRPD中，在约9.5±0.2°、约11.7±0.2°、约14.6±0.2°、约17.5±0.2°、约18.0±0.2°、约20.0±0.2°、约20.4±0.2°、约22.3±0.2°、约23.7±0.2°和约25.5±0.2处观察到显著的峰。

表50.化合物III模式1的XRPD峰列表

下表51提供了在化合物III模式2上进行的XRPD的结果。XRPD示出尖锐的峰，表明样品由结晶材料组成。在化合物III模式2的XRPD中，在约8.9±0.2°、约9.9±0.2°、约11.7±0.2°、约12.1±0.2°、约15.1±0.2°、约17.9±0.2°、约18.2±0.2°、约19.9±0.2°、约25.1±0.2°、约29.6±0.2°和约38.1±0.2°处观察到显著的峰。

表51.化合物III模式2的XRPD峰列表

下表52提供了在化合物V模式1上进行的XRPD的结果。在化合物V模式1的XRPD中，在约5.0±0.2°、约7.2±0.2°、约10.1±0.2°、约12.1±0.2°、约17.5±0.2°、约17.9±0.2°、约19.3±0.2°、约22.0±0.2°、约24.3±0.2°、约25.1±0.2°和约26.3±0.2处观察到显著的峰。

表52.化合物V模式1的XRPD峰列表

下表53提供了在化合物V模式2上进行的XRPD的结果。在化合物V模式2的XRPD中的约5.1±0.2°、约6.9±0.2°、约7.6±0.2°、约10.2±0.2°、约11.6±0.2°、约12.1±0.2°、约15.1±0.2°、约17.6±0.2°、约18.1±0.2°、约18.7±0.2°、约19.5±0.2°、约19.8±0.2°和约25.1±0.2°处观察到显著的峰。

表53.化合物V模式2的XRPD峰列表

实施例24：化合物II模式1的单晶X射线衍射(SC-XRD)研究

在MeOH中的温度循环实验中，获得了合适于SC-XRD研究的化合物II模式1的单晶。在配备有CMOS面检测器的D8 Venture衍射计上，在170(2)K下，使用Cu-Kα辐射X射线发生器功率：50kV，1.4mA；样品与面检测器之间的距离：40mm；曝光时间150秒；分辨率：0.81，收集X射线衍射数据。结构精制：在F²上。氢位点位置：混合的。H原子被独立的和受约束的精制混合物处理。X射线衍射数据和晶体数据呈现在表54中。

表54.晶体学参数和X射线衍射数据

在单斜系统，具有R_int＝5.7％和最终R₁[I>2σ(I)]＝7.4％的P2₁空间群中结晶的化合物II模式1的结晶形式。结晶形式不包含溶剂分子。发现化合物II模式1的该结晶形式具有游离碱与富马酸的比率为1:1，并且对应于具有Flack参数(绝对结构参数)为0.16(10)的异构体I的单富马酸盐。如显示在图115中，在单晶结构中，质子化的游离碱和富马酸阴离子通过N⁺(5)-H(5)···O(7)离子键连接。从富马酸到嘌呤的N(5)-氮原子观察到质子转移。

实施例25.片剂稳定性研究

使用显示在以下表中第一列的一种或多种赋形剂的比率制备片剂。然后将片剂储存在所示条件下，并定期取样，并通过HPLC检测纯度。在一系列不同的制剂中，从化合物I单富马酸盐生产的片剂降解少于从化合物I生产的片剂。

用化合物I生生的片剂

用化合物I单富马酸盐生产的片剂

PEO：聚氧化乙烯；PC：聚卡波非；MCC：微晶纤维素；MgS：硬脂酸镁

实施例26：(R,S)和(S,S)乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯(化合物I)的混合物的合成

步骤1：二乙基-((2-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸盐(3)的制备

在N₂气氛下，在室温下，将干燥反应容器中装入2-氨基-6-氯嘌呤1(50g，0.296mol，1当量)、Cs₂CO₃(96.37g，0.296mol，1当量)和DMF(250mL)。在该室温下，且在搅拌下以逐滴方式添加二乙基2-氯乙氧基甲基膦酸酯2(74.85g，0.325mol，1.1当量)。将反应在40-50℃下搅拌0.5至1.5小时，加热至60-70℃，并且搅拌0.5-1.5小时，并然后在75至85℃下搅拌18-24h。在使反应温度达到20-30℃后，将反应混合物过滤，并将所得的饼用DMF(100mL x2)洗涤。在低于70℃下，将合并的滤液浓缩至一半的体积，用正庚烷(250mL)稀释，并在低于75℃下再次浓缩至一半的体积。在20至30℃下，将所得的溶液倒入DCM(1L)中，搅拌20-40min，然后添加水性10％ Na₂SO₄溶液(约100mL)。将所得的双相溶液搅拌20-40分钟，然后通过硅藻土过滤，并将湿饼用DCM(约100mL)洗涤。从滤液中分离水相，并将有机相再次用水性10％ Na₂SO₄溶液(约100mL)洗涤。将合并的水相在用DCM(200-300mL)洗涤(反萃取)后，将有机相合并，并且浓缩。然后将所得的粗产物3通过硅胶柱色谱(使用DCM至DCM中的1％ MeOH)进行纯化。将含有产物的级分合并，并将溶剂在低于40℃下蒸发。将固体产物3用重复稀释的MTBE处理，并浓缩(达到1/3^rd体积)。然后将所得的浆液用MTBE(400-500mL)稀释并在40-50℃下搅动4-6h，并且在15-25℃下搅动8-15h。将悬浮液过滤，并用MTBE洗涤，并且在35℃-40℃下干燥15-20h，以提供所希望的产物，二乙基-((2-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸酯3，处于43.4％(48.66g)分离的产率，具有根据HPLC的91.8％纯度。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm:8.08(s,1H),6.91(s,2H),4.24(d,2H,J＝8Hz),3.92(m,4H),3.86(q,4H,J＝8Hz),1.14(t,6H,J＝8Hz)。LCMS(m/z):364.2(MH+)和366.2(MH+)。

步骤2：((2-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸(4)的制备

在N₂气氛下，将含有DCM(1L)的干燥反应容器中装入二乙基-((2-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸酯3(100g，0.275mol)，随后装入2,6-卢剔啶(147.33g，1.375mol，5当量)，并将温度调节至0-5℃。以逐滴方式向其中添加TMSBr(167.47g，1.102mol，4.0当量)，并且在0-5℃下再搅拌0.5-1，且在20-25℃下搅拌15-20h。在0-5℃下调节反应温度后，进行1144g水性1NNaOH的逐滴添加。在将温度在20-30℃下维持1-2h后，将水性碱性层分离，并且用MTBE重复洗涤。在15-25℃下，用逐滴添加水性2N HCl的方式将水性溶液酸化为pH＝6-7，并且装入MeOH(10体积)。在35-45℃下，将该所得的甲醇溶液用逐滴添加水性2N HCl的方式进一步酸化为pH＝3-4。在添加产物4的晶种后，将甲醇酸溶液在35-45℃下搅拌3-5h，并且在此外使用逐滴添加水性2N HCl的方式酸化至pH＝1.5-2.5，并且在15-20℃下搅拌11-20h。将所得固体通过过滤分离，用MeOH(2x100mL)洗涤，并且在45-55℃下干燥20-30h，以产出所希望的产物，((2-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸4，处于96.5％(84.4g)分离的产率，具有根据HPLC的99.8％纯度。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6),δppm:8.1(s,1H),6.92(bs,2H),4.5-5.5(bs,2H),4.22(dd＝t,2H,J＝8Hz),3.84(t,2H,J＝8Hz),3.58(t,2H,J＝8Hz)。LCMS(m/z):308(MH+)和310(MH+)。

步骤3：((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸(5)的制备

在20-30℃下向含有MeOH(350mL)的烧瓶中装入((2-(2-氨基-6-氯-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸4(50g，0.162mol)，并搅拌10-30min。向该溶液中以逐滴方式添加在MeOH中的30wt％NaOMe溶液(1.62mol，10当量)，并然后在50-60℃下搅拌15-24h。将反应在20-30℃下维持20-40min，并然后过滤。然后通过逐滴添加浓缩HCl将滤液在20-30℃下进行酸化以调节pH＝6-7，并且在低于40℃下浓缩至体积的三分之一。将浓缩溶液的温度升至35-45℃，并且通过逐滴添加浓缩HCl的方式进行酸化以调节pH＝3-4。将所得的酸性溶液装入产物5的晶种，并且在35-45℃下搅拌1.5-2.5h。在此温度下，以逐滴的速率添加浓缩HCl完成调节pH＝2-3，搅拌3-5h，冷却至-3℃至3℃范围，并且搅拌8-15h。将所得固体过滤，用MeOH(约100mL)和正庚烷(约100mL)洗涤。将所得的饼在50-60℃下、在真空下干燥16-24h，以提供所希望的产物，((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸5，处于89.3％(48.22g)分离的产率，具有根据HPLC的99.5％纯度。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ,ppm:7.88(s,1H),6.47(bs,4H),4.18(t,2H,J＝8Hz),3.96(t,2H,J＝8Hz),3.60(d,2H,J＝12Hz)。LCMS(m/z):304.20(MH+)。

步骤4a:(R,S)-和(S,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯(8)混合物的制备

在20-30℃下，在搅拌下，向((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-膦酸5(40g，0.132mol，1当量)在DCM(560mL)中的溶液里装入(S)-乙基2-氨基丙酸酯氯化氢盐6(20.19g，0.132mol，1当量)、苄基醇7(71.28g，0.66mol，5当量)和TEA(159.98g，1.58mol，12当量)，并将溶液搅拌10-30min。在20-30℃下，在60min内，向该溶液中添加从Ph₃P(207.5g，0.792mol，6当量)和在DCM(320mL)中的2,2’-二硫代吡啶(Aldrithiol-2)(174.24g，0.792mol，6当量)制备的溶液。将所得的反应混合物在35-45℃下搅拌15-20h，并且在真空下，在低于40℃下，浓缩以除去3/4^th的溶剂。向所得的残余物中添加MeOH(约120mL)、蒸馏水(约400mL)、甲苯(约400mL)和正庚烷(约400mL)，并且在20-30℃下搅拌0.5-1h。在允许反应混合物在20-30℃下静置0.5至1h后，将有机相分离，并将水相用甲苯(约400mL)和正庚烷(约400ml)的混合物多萃取几次以除去最大量的剩余试剂和副产物。然后将剩余水相用DCM(2x400mL)萃取，并且在真空下在低于40℃下浓缩DCM后，将粗产物通过硅胶柱色谱(用DCM至DCM中2％ MeOH作为流动相)进行纯化。将含有产物的洗脱级分合并，并且在真空下在低于40℃下将溶剂除去，以给出作为非对映异构体混合物的所希望的产物，即(R,S)和(S,S)；(±)(2S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯8(化合物I)，处于45.8％(29.74g)分离的产率，具有根据HPLC的98.8％纯度。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6),δ,ppm:7.85(s,1H),7.34(m,5H),6.44(s,2H),5.36(m,1H),4.90(m,2H),4.17(m,2H),4.07(m,2H),3.95(s,3H),3.82(m,5H),1.18-1.24(m,6H)。LCMS(m/z):493.3(MH+)。

步骤4b:(R,R)-和(S,R)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯混合物的制备

为合成(R,R)和(S,R)混合物，可以将D-丙氨酸乙基酯((R)-乙基2-氨基丙酸酯氯化氢盐)替换为L-丙氨酸乙基酯((S)-乙基2-氨基丙酸酯氯化氢盐)，进行步骤4a的程序。

实施例27：(±)-化合物I单富马酸盐((±)-(2S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐)(9)的制备

在45-55℃下，通过过滤器，向(±)-(2S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯(化合物I)8(29.72g，0.06mol，1当量)在IPA中的溶液里添加富马酸(7.66mol，1.1当量)在IPA中的溶液，并且继续搅拌持续1-2h。将化合物9的晶种添加至反应混合物，并且在45-55℃下继续搅拌持续1-2h。在允许反应混合物在20-30℃下沉降4-6h后，进行逐滴添加正庚烷(约300mL)，并且在20-30℃下继续再搅拌持续8-15h，且在0-5℃下持续8-15h。将观察到的固体过滤，并且将湿饼用IPA/正庚烷(1/3，v/v，约50-60mL)的混合物洗涤。在真空下，将固体饼在35-45℃下干燥16-24h，以提供所希望的产物，(±)-(2S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐9(化合物I单富马酸盐)，处于87.9％(32.74g)分离的产率，具有根据HPLC的99.1％纯度。¹H NMR(DMSO-d₆),δ,ppm:1.14(t,3H,J＝7.2Hz),1.22(d,3H,J＝7.2Hz),3.82(m,2H；dd,1H,J＝4.0Hz；bs,2H),3.95(s,3H),4.06(m,2H),4.17(m,2H),4.87(m,2H),5.38(q,1H,J＝4Hz),6.44(s,2H),6.64(s,2H),7.33(m,5H),7.82(s,1H),13.18(bs,2H)。LCMS(m/z):493.20(MH+)。

实施例28：化合物I的(R,S)-和(S,S)-异构体的手性分离及其单富马酸盐、化合物II和化合物III的制备

步骤1a:(R,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯和(S,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯的手性分离

在如下所示的SFC分离条件下，使化合物I(异构体I和II的非对映异构体混合物)(22.50g)经历手性色谱分离，以分离和获得11.7g(R,S)-异构体I(10)(具有根据HPLC的98.6％纯度)和9.1g(S,S)-异构体II(11)(具有根据HPLC的95.6％纯度)。

SFC条件：

柱：ChiralPak AD，250×30mm I.D.，10μm；

流动相：A：CO₂和B：乙醇(0.1％ NH₃H₂O)；

梯度：B 45％等度；

流速：200mL/min；

波长：310nm；

循环时间：约6min；

背压：100bar；

注射量：约1g。

(R,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯(异构体I)作为游离碱的表征：通过HPLC的纯度：98.6％；¹HNMR(DMSO-d6),δ,ppm:7.82(s,1H),7.30(m,5H),6.38(s,2H),5.30(t,1H),4.83(d,2H),4.18(t,2H),4.05(m,2H),3.95(s,3H),3.84(m,2H),3.60(m,5H),1.20(d,3H),1.15(t,3H)；LCMS(m/z):493(MH+)。

(S,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯(异构体II)作为游离碱的表征：通过HPLC的纯度：95.6％；¹HNMR(DMSO-d6):δppm 7.82(s,1H),7.35(m,5H),6.45(s,2H),5.30(t,1H),4.80(d,2H),4.18(t,2H),4.05(m,2H),3.95(s,3H),3.80(m,3H),3.70(m,2H),1.20(d,3H),1.15(t,3H)；LCMS(m/z):493(MH+)。

在某些非限制性实施例中，使用具有非手性或手性固定相的HPLC或SFC分离立体异构体。可以使用的手性固定相的非限制性实例包括Chiralpak AD、Chiralpak AS、Chiralcel OG和Chiralcel OJ。

在替代性的非限制性实施例中，可以非对称地合成单个异构体。对于膦酰基酰胺的非对称合成的非限制性实例，参见Numan,A等人.“Asymmetric Synthesis ofStereogenic Phosphorus P(V)Centers Using Chiral Nucleophilic Catalysis”,Molecules 2021,26,3661和Ambrosi,A.等人“Synthesis of Rovafovir Etalafenamide(Part III):Evolution of the Synthetic Process to the PhosphonamidateFragment”2021,Org.Process Res.Dev.25,5,1247-1262。

步骤1b：(R,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯和(S,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯的手性分离

可以使用针对如上所述(R,S)和(S,S)混合物的相同的技术进行(R,R)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯和(S,R)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯(合成在实施例26的步骤4b中所述)的分离。

步骤2a:(R,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐(化合物II)的制备

向(R,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯10(3g，6mmol，1当量)在IPA中的溶液里添加的富马酸(0.765g，6.6mmol，1.1当量)在IPA中的溶液，在45℃-55℃下通过过滤器，并且持续搅拌1-2。将化合物12的晶种添加至反应混合物，并且在45-55℃下继续搅拌持续1-2h。在允许反应混合物在20-30℃下沉降4-6h后，进行逐滴添加正庚烷(约30mL)，并且在20-30℃下继续再搅拌持续8-15h，且在0-5℃下持续8-15h。将观察到的固体过滤，并将湿饼用IPA/正庚烷(1/3，v/v，约5mL)的混合物洗涤。在真空下，将固体饼在35-45℃下干燥16-24h，以提供所希望的产物，(R,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐12(异构体I单富马酸盐或化合物II)，处于85％(3.1g)分离的产率，具有根据HPLC的98.6％纯度。¹H NMR(DMSO-d₆),δ,ppm:δ7.80(s,1H),7.35(m,5H),6.63(s,2H),6.40(s,2H),5.53(t,1H),4.84(d,2H),4.15(t,2H),4.00(m,2H),3.92(s,3H),3.80(m,3H),3.75(m,2H),1.20(d,3H),1.13(t,3H)；碱(10):富马酸的比率:1:1.00(通过¹H NMR)。

步骤2b:(S,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐(13)(还称为化合物III)的制备

向(R,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯11(3g，6mmol，1当量)在IPA中的溶液里添加的富马酸(0.765g，6.6mmol，1.1当量)在IPA中的溶液，在45℃-55℃下通过过滤器，并且持续搅拌1-2。将化合物13的晶种添加至反应混合物，并且在45-55℃下继续搅拌持续1-2h。在允许反应混合物在20-30℃下沉降4-6h后，进行逐滴添加正庚烷(约30mL)，并且在20-30℃下继续再搅拌持续8-15h，且在0-5℃下持续8-15h。将观察到的固体过滤，并将湿饼用IPA/正庚烷(1/3，v/v，约5mL)的混合物洗涤。在真空下，将固体饼在35-45℃下干燥16-24h，以提供所希望的产物，(S,S)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐13(异构体II单富马酸盐或化合物III)，处于80％(2.9g)分离的产率，具有根据HPLC的95.6％纯度。¹H NMR(DMSO-d₆),δ,ppm:δ7.82(s,1H),7.35(m,5H),6.62(s,2H),6.35(s,2H),5.30(t,1H),4.90(d,2H),4.15(t,2H),4.05(m,2H),3.95(s,3H),3.80(m,3H),3.70(m,2H),1.20(d,3H),1.15(t,3H)；碱(11):富马酸的比率:1:1.2(通过¹H NMR)。

步骤2c:(R,R)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐和(S,R)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐的制备

(R,R)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐和(S,R)-乙基-2-((((2-(2-氨基-6-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)-乙氧基)-甲基)-(苄氧基)-磷酰基)-氨基)-丙酸酯单富马酸盐的合成可以如在步骤2b和2c中针对(R,S)和(S,S)立体异构体，用步骤1b中的手性分离的产物取代步骤2b和2c中的起始材料来进行。

实施例29.半固体制剂的制备的非限制性实例

可以例如通过乳化油相和水相连同活性药物成分来自制备局部乳膏剂制剂。在非限制性实施例中，通过将轻矿物油、对羟基苯甲酸丙酯和63混合来制备乳膏剂的油相。接下来，通过将水、EDTA、对羟基苯甲酸甲酯和974P混合来制备乳膏剂的水相然后将油相和水相乳化。向经乳化的混合物中添加活性药物成分和丙二醇。混合物是经pH调节的，并然后填充进管中。

可以例如通过将水性凝胶载剂与活性药物成分混合来制备局部凝胶制剂。在非限制性实施例中，通过将水、EDTA、对羟基苯甲酸甲酯(或山梨酸)和974P混合来制备局部凝胶的水相。将活性药物成分和丙二醇添加至该溶液，混合并进行pH调节，然后填充进管中。

在某些非限制性实施例中，将从约0.001％w/w至约10％w/w活性药物成分添加至半固体制剂。例如，从约0.0025％w/w至约2.5％w/w，如0.003％、0.01％、0.03％、0.1％、0.3％或1％。

实施例30.化合物I单富马酸盐片剂的制备

以下提供了化合物I单富马酸盐的宫颈片剂制备的非限制性实例(参见图119的流程图)。将两种或更多种赋形剂合并，共混，并筛选以制备赋形剂共混物。然后筛选活性药物成分(例如，化合物I单富马酸盐)，并添加至一部分赋形剂共混物。然后将所得的混合物共混，并然后添加更多的赋形剂共混物。因此，将混合物用赋形剂共混物逐步稀释，其中在每次添加赋形剂共混物后进行充分混合。一旦赋形剂共混物被用尽，添加硬脂酸镁，并将混合物再次共混在一起。然后将混合物压成片剂并包装。

表57.化合物I单富马酸盐阴道片剂的配方组成，0.3mg的批次大小为1.0Kg

成分	％w/w	量/批(g)
			化合物I单富马酸盐、化合物II或化合物III	0.212	2.126
微晶纤维素(PH 102)	88.788	887.88
			甘露醇	10.0	100.0
硬脂酸镁	1.0	10
			总共	100.0	1000.0

单个片剂重量:175mg

化合物I单富马酸盐阴道片剂，0.3mg

以下提供了制备化合物I单富马酸盐的阴道片剂的工艺的非限制性实例。

分装

1.根据批次制造配方称量材料，并分装在单独的塑料袋中。

筛选

1.提供筛选对所有赋形剂过筛。

活性剂的共混和筛选

1.在扩散共混仪中将筛选的赋形剂:微晶纤维素和甘露醇进行共混。

2.取49.5克赋形剂共混物，并添加2.12克的化合物I单富马酸盐。

3.将活性剂和赋形剂共混，并且筛选以除去大块。

4.向该共混物中添加148.5克赋形剂共混物。

5.将活性共混物和赋形剂共混并且筛选以除去大块。

6.向该共混物中添加247.5克赋形剂共混物。

7.将活性共混物和赋形剂共混并且筛选以除去大块。

8.向该共混物中添加剩余495克赋形剂共混物。

9.将活性共混物和赋形剂共混并且筛选以除去大块。

最终的共混

10.将硬脂酸镁添加至扩散共混仪，并将内容物混合。

11.排出并调和共混物。

压缩

1.使用合适的工具(冲孔和模具)在旋转式压片机上压缩共混物，以达到目标重量。在压缩运行开始时检查易碎性和崩解性，并定期检查单个片剂重量、厚度和硬度。

包装

1.将散装药片包装到双线可重新密封的透明PE袋中，在所述袋之间具有干燥剂，并进一步包装到具有干燥剂的铝箔袋中并热密封。

实施例31.片剂制剂的示例性赋形剂

选择片剂制剂以展示粘膜粘着性和亲和性的特性，并包括具有增溶性、产生侵蚀(用于崩解)、孔隙性(用于吸水)和增强粘度(以保持药物在目标部位)特性的赋形剂。将导致快速崩解，以覆盖宫颈、肛门或阴道区域的赋形剂的实例包括但不限于甘露醇、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、磷酸钙、磷酸钠、碳酸氢钠、柠檬酸、马来酸、己二酸或富马酸。可以增强崩解并覆盖受影响区域的赋形剂的实例包括但不限于乙醇酸淀粉钠、预胶凝淀粉、交聚维酮和交联羧甲基纤维素钠。可用于本发明的粘膜粘着赋形剂包括但不限于微晶纤维素、聚卡波非、羟甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素和PVP。

下表列出了赋形剂的组合，它们具有针对片剂制剂的所希望的特性。片剂制剂包含活性药物成分、微晶纤维素，并且可以包含甘露醇。在某些非限制性实施例中，片剂制剂包含一种或多种选自快速崩解剂种类的赋形剂(表58的左列)。在某些非限制性实施例中，片剂制剂包含一种或多种选自崩解增强剂种类的赋形剂(表58的中间列)。在某些非限制性实施例中，片剂制剂包含一种或多种选自粘膜粘着赋形剂种类的赋形剂(表58的右列)。

表58.片剂的赋形剂

(百分比以重量/重量％表示)

实施例32.重构粉剂或干粉制剂的示例性赋形剂

重构粉剂或干粉制剂可以改善药剂或制剂的货架稳定性。在某些非限制性实施例中，可以在施用之前不久将干粉制剂与盐水、丙二醇或其他水性载剂混合，最小化降解时间。在某些非限制性实施例中，在施用前不久将干粉制剂与油、乳膏剂或其他非水性载剂混合。

在某些实施例中，重构粉剂或干粉制剂快速覆盖宫颈、外阴、阴道、肛周区、阴茎或肛门中的受感染组织或患病组织。增强对宫颈、外阴、阴道、肛周区、阴茎或肛门的快速覆盖的赋形剂包括但不限于甘露醇、乳糖、蔗糖、磷酸钙和微晶纤维素。在某些实施例中，用于快速覆盖宫颈、外阴、阴道、肛周区、阴茎或肛门的赋形剂是甘露醇。

在某些实施例中，重构粉剂或干粉制剂具有对宫颈、外阴、阴道、肛周区、阴茎或肛门的良好覆盖。增强对宫颈、外阴、阴道、肛周区、阴茎或肛门的覆盖的赋形剂的非限制性实例包括乙醇酸淀粉钠、预胶凝淀粉、交聚维酮和交联羧甲基纤维素钠。

在某些实施例中，重构粉剂或干粉制剂一旦被重构就包含粘膜粘着特性。这防止了剂型的涂抹或以其他方式使健康组织暴露于活性药物成分。提高重构粉剂或干粉制剂的粘膜粘着特性的赋形剂包括但不限于黄原胶、聚卡波非、聚氧化乙烯、羟乙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、PVP和微晶纤维素。在某些实施例中，改善粘膜粘着性的赋形剂是黄原胶。

下表列出了赋形剂的组合，它们具有针对重构粉剂或干粉制剂的所希望的特性。干粉剂或重构粉剂制剂包含活性药物成分，并且可以包含甘露醇和/或黄原胶。在某些非限制性实施例中，干粉剂或重构粉剂制剂包含一种或多种选自快速覆盖种类的赋形剂(表59的左列)。在某些非限制性实施例中，干粉剂或重构粉剂制剂包含一种或多种选自覆盖增强种类的赋形剂(表59的中间列)。在某些非限制性实施例中，干粉剂或重构粉剂制剂包含一种或多种选自粘膜粘着赋形剂种类的赋形剂(表58的右柱)。

表59.用于重构粉末或干粉剂型的赋形剂

(百分比以重量/重量％表示)

实施例33.半固体制剂的示例性赋形剂

选择半固体制剂以展示粘膜粘着的特性，并有助于药物穿透进组织中。半固体制剂可以包含赋形剂，所述赋形剂具有增溶性、亲脂性(以有助于溶解亲脂性化合物)、穿透增强(更高的活性)和粘膜粘着(以保持药物在目标部位)特性。

在某些实施例中，半固体制剂具有粘膜粘着性。有助于粘膜粘着特性的赋形剂包括但不限于卡波姆、聚乙二醇、交聚维酮、聚卡波非、羟丙甲纤维素和羟乙基纤维素。

在某些实施例中，半固体制剂增强活性药物成分的穿透和/或溶解度。增强活性药物成分的穿透和/或溶解度的赋形剂包括但不限于聚乙二醇6硬脂酸酯I型、硬脂酸乙二醇酯、聚乙二醇32硬脂酸酯I型和丙二醇。

下表列出了赋形剂的组合，它们具有针对半固体制剂的所希望的特性。半固体制剂包含活性药物成分和来自表60中每列的一种或多种赋形剂。在某些非限制性实施例中，半固体制剂包含一种或多种选自粘膜粘着聚合物种类的赋形剂(表60的左柱)。在某些非限制性实施例中，片剂制剂包含一种或多种选自溶解度和穿透增强剂种类的赋形剂(表60的第二列)。在某些非限制性实施例中，半固体制剂包含一种或多种选自亲脂性增溶剂种类的赋形剂(表60的第三列)。在某些非限制性实施例中，半固体制剂包含一种或多种选自穿透增强剂种类的赋形剂(表60的右列)。

表60.半固体剂型的赋形剂

(百分比以重量/重量％表示)

实施例34.半固体制剂的示例性赋形剂

选择阴道药栓和成膜制剂在室温下为固体，但在体温下软化以释放活性药物成分。这样允许方便地处理和储存制剂，以及在宫颈、外阴、阴道、肛周区、阴茎或肛门处实现所希望的组织覆盖。在成膜制剂的非限制性实施例中，一种或多种来自表61中左列的赋形剂提供了所希望的特性。在阴道药栓制剂的非限制性实施例中，一种或多种来自表61中右列的赋形剂提供了所希望的特性。

表61.用于薄膜和阴道药栓的赋形剂

(百分比以重量/重量％表示)

实施例35.示例性片剂制剂

在某些非限制性实施例中，片剂剂型的制剂包含表62中的成分。在某些非限制性实施例中，片剂剂型的制剂包含表63中的成分。用于将这些成分组合成片剂剂型的说明性工艺可以在实施例29中发现。

表62.实例片剂制剂

表63.实例片剂制剂

实施例36.示例性半固体制剂

在某些非限制性实施例中，用于乳膏剂半固体剂型的制剂包含表64中的成分。在某些非限制性实施例中，凝胶半固体剂型的制剂包含表65中的成分。用于将这些成分组合成乳膏剂或凝胶半固体剂型的说明性工艺可以在实施例27中发现。

表64.实例半固体制剂(乳膏剂)

表65.实例半固体制剂(凝胶)

实施例37.示例性成膜制剂

可以通过溶剂流延或热熔挤出制备薄膜剂型。例如，为制备薄膜剂型，将活性药物成分溶解到赋形剂和水的溶液中。然后将该溶液任选地脱气，并浇铸成薄膜，并在炉中进行干燥。还可以通过热熔挤出制备薄膜剂型。在某些实施例中，将活性药物成分在料斗中与一种或多种赋形剂混合。然后将这些组分混合、研磨并捏合成均匀的混合物。将混合物加热直到它流动，并将其通过模具挤出到辊子上，在辊子上冷却。在某些实施例中，薄膜剂型的成分可以在表66中找到。

表66.薄膜制剂的实例

实施例38.示例性干粉剂或重构粉剂制剂

在某些非限制性实施例中，干粉剂或重构粉剂制剂包含表67中列出的成分。可以将这些成分在合适的设备(例如，V型共混机)中混合，并然后分到无菌小瓶中进行重构。

表67.干粉剂或重构粉剂的制剂的实例

实施例39.示例性阴道药栓制剂

在某些非限制性实施例中，阴道药栓制剂包含表68或表69中列出的成分。例如，可以通过将活性药物成分与赋形剂混合来制备阴道药栓剂型。在一个非限制性实施例中，将赋形剂在混合装置中加热，同时搅拌，直至其软化或熔化，然后分批添加活性药物成分。控制温度、搅拌速度和添加速率以确保活性药物成分的均匀分布。然后将混合物混合直至均匀并放入阴道药栓中或栓剂模具中固化。

表68.用于阴道药栓的制剂的实例

表69.用于阴道药栓的制剂的实例

实施例40.体外细胞毒性测试

化合物：

将三种化合物(化合物I、化合物II和化合物III)以40mM溶解在DMSO中，并储存在-20℃下。使用50μM的高测试浓度评估测试化合物。针对体外细胞毒性测定进行连续半对数稀释。柠檬酸它莫昔芬购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。将柠檬酸它莫昔芬以40mM溶解在DMSO中，并在100μM的高测试浓度下用作阳性对照化合物，用于细胞毒性测定。

体外细胞毒性评估：

将表70中列出的细胞通过台盼蓝染料(Trypan Blue Dye)排除方法进行计数，并按100μL/孔接种在96孔平底微量滴定板的内孔中。将增殖细胞在37℃/5％ CO2下孵育过夜，以允许细胞以大约70％的融合度粘附在平板上。将组织培养基除去，并用100μL/孔的新鲜培养基替换。将一百微升(100μL)的每种化合物按六种浓度转移到含有一式三份细胞的96孔板中。表70列出了细胞系；细胞类型；细胞原液来源；补充有10％胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的基本组织培养基；以及微量滴定板接种密度。

表70：

细胞毒性XTT：

在37℃下，在5％ CO₂孵育箱中孵育五天后，用四唑鎓染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯基氨基)羰基]-2H-氢氧化四唑鎓)对测试板进行染色。XTT-四唑鎓被代谢活跃细胞的线粒体酶代谢为可溶性甲臜产物。每天制备XTT溶液作为RPMl1640中1mg/ml的储备液。按0.15mg/ml，在PBS中制备吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，并在-20℃下储存在黑暗中。通过添加40μL PMS/ml的XTT溶液，在使用前立即制备XTT/PMS储备液。将50微升XTT/PMS添加至板的每个孔中，并将板在37℃下再孵育4小时。将板用粘性板密封剂密封，并轻轻振摇或倒置数次，以混合可溶性甲臜产物，并用Molecular Devices Vmax板读数器以450/650nm对板进行分光光度法读数。

数据分析和评估：

将Microsoft Excel 2010用于对原始数据进行分析和做图。将CCso(细胞生活力的50％降低)值制表并提供。具有图形表示的数据的细胞毒性的原始数据以打印输出提供，总结了对细胞生活力的复合效应。

体外细胞毒性评估：

通过使用XTI四唑鎓染料在培养5天后测量细胞生活力，评估化合物I、II和III对Hs27、HeLa、C33A和HEK293细胞增殖的细胞毒性(表71)。从这些测定中计算出的CC₅₀值总结在下表中。

平行评价柠檬酸它莫昔芬作为对照化合物。柠檬酸它莫昔芬在C33A、HeLa、Hs27和HEK293细胞增殖中的CC₅₀值分别为17.2、19.9、21.2和21.3μM。当同时评价时，化合物I及其两个异构体针对四种细胞系中的每一种细胞毒性相似。在C33A细胞中，三种测试化合物的CC₅₀值的范围是从大约0.1至0.28μM。在HeLa细胞中，三种测试化合物的CC₅₀值的范围是从15.1至18.6μM。在Hs27细胞中，三种测试化合物的CC₅₀值的范围是从大约7.62至23.2μM。在HEK293细胞中，三种测试化合物的CC₅₀值为大约0.1μM。

表71：体外细胞毒性

实施例41.抗病毒药物在猪阴道组织中的离体渗透和穿透

猪阴道组织的制备

新鲜收获的猪阴道组织采购自当地屠宰场，置于冰盒中。将阴道组织切开，暴露粘膜表面，并用PBS pH 7.4的温和流清洗组织。在遥测穿孔的帮助下，猪阴道组织被切割成圆形部分(大约2cm²)。

将猪阴道组织固定在Franz扩散池上

将组织的圆形部分夹在Franz扩散池的两个腔室之间，其中的活性扩散区域为1cm²，并且将粘膜层暴露于供药腔。使用波形发生器测量猪阴道组织内的阻力，以确保用于穿透研究的组织段的完整性。将阻力为≥3KΩ.cm²的猪阴道组织用于研究。将接收腔中填充8ml5％solutol PBS 7.4pH，将其以600rpm用3mm的磁力搅拌棒搅拌，并用循环水浴将温度维持在37℃下。

在供药腔中加载制剂

将约200mg凝胶注入去皮重的1mL注射器中，并将凝胶分配到供药腔中。用预先称重的涂抹器将凝胶涂抹在粘膜表面。将凝胶加载并铺展到粘膜表面的表面上后，记录1mL注射器和涂抹器的重量，以确定加载到供药腔的凝胶的确切量。

渗透和穿透研究

进行时间过程(2h、4h和8h)猪阴道渗透研究。在加载凝胶后，将500μL样品按不同时间间隔从接收室中取出，并且每次将等体积的新鲜接收介质用于替换取出的样品。在每个时间间隔取出的样品立即储存在-20℃，直到分析。在2、4、8小时后，在注射器的帮助下将制剂从供药腔中除去，并用棉签清洁。将组织取出，并用洗涤溶液(在水中的50％甲醇)轻轻清洗5次，并用棉签交替清洗。

表72:时间过程IVPT研究设计

研究	接收腔液体采样时间点	研究期间
			2h IVPT	0和2h	2h
4h IVPT	0、2和4h	4h
			8h IVPT	0、2、4、6和8h	8h

在IVPT之后切碎猪阴道组织(活性扩散区域)

将经洗涤的猪阴道组织中活性扩散区域的8mm穿孔除去，称重并转移到试管中。将该管立即置于干冰中约15min。在指定时间后，取出组织，并置于预冷的盘中。用预冷的手术刀片在盘子上将组织切碎成小块。将切碎的组织转移到样品管中，并用在PBS 7.4pH中的1ml 5％solutol冲洗盘子，并转移到相同的组织样品管中。将这些试管储存在-70℃下直到分析。

用于分析的接收腔液体的制备

将储存在-20℃下的样品取出，并在室温下解冻30min。将来自接收腔液体的药物以13000rpm离心5min，并且向200μL上清液中添加等体积的提取溶剂。将这些样品以13000rpm离心5min，并将上清液转移至小瓶中用于进行分析。

从猪阴道组织中提取药物

将储存在-70℃下的经切碎的组织取出，并在室温下解冻约90min。将样品在BioShaker中在室温下保持振摇4h。4h后，将样品以13000rpm离心5min。向100μL上清液中添加400μL提取溶剂，并且涡旋2min。将这些样品以13000rpm离心5min，并将上清液转移至小瓶中用于进行分析。

本说明书中引用的所有出版物和专利申请通过引用并入本文，如同每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指示为通过引用并入一样。

尽管出于清楚理解的目的，已经通过说明和示例的方式对前述发明进行了一些详细的描述，但是根据本发明的教导，对于本领域普通技术人员将是显而易见的是在不背离如在实施例和/或权利要求中定义的本发明的精神或范围的情况下，可以对做出某些变化和修改。

Claims (184)

1.一种化合物，具有下式：

2.一种化合物，具有下式：

或其药学上可接受的盐。

3.一种化合物，具有下式：

或其药学上可接受的盐。

4.如权利要求2所述的化合物，具有下式：

5.如权利要求3所述的化合物，具有下式：

6.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中所述分离的晶型形式的特征在于包含至少5个选自以下的2θ值的ZRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

7.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中所述分离的晶型形式的特征在于包含至少7个选自以下的2θ值的ZRPD图谱：9.53±0.2°、10.04±0.2°、11.60±0.2°、14.57±0.2°、17.22±0.2°、17.50±0.2°、20.04±0.2°、20.36±0.2°、22.34±0.2°、23.73±0.2°、25.48±0.2°、26.06±0.2°、27.38±0.2°和32.20±0.2°。

8.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中所述分离的晶型形式的特征在于包含至少7个选自以下的2θ值的XRPD图谱：8.94±0.2°、9.89±0.2°、9.91±0.2°、11.66±0.2°、12.11±0.2°、15.13±0.2°、17.85±0.2°、18.15±0.2°、19.90±0.2°、20.38±0.2°、22.94±0.2°、25.09±0.2°、26.54±0.2°、26.90±0.2°、27.38±0.2°、28.28±0.2°、28.95±0.2°、29.64±0.2°和38.07±0.2°。

9.具有下式的化合物的一种分离的晶型形式：

其中所述分离的晶型形式的特征在于包含至少5个选自以下的2θ值的XRPD图谱：3.08±0.2°、9.30±0.2°、12.08±0.2°、14.92±0.2°、15.10±0.2°、20.14±0.2°、25.14±0.2°和28.82±0.2°。

10.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-5中任一项所述的化合物和药学上可接受的载剂。

11.一种药物组合物，所述药物组合物包含在药学上可接受的载剂中的如权利要求6-9中任一项所述的晶型形式。

12.如权利要求10-11所述的药物组合物，其为固体剂型。

13.如权利要求10-11所述的药物组合物，其为半固体剂型。

14.如权利要求10-11所述的药物组合物，其为重构粉末形式。

15.如权利要求10-11所述的药物组合物，其为干粉剂型形式。

16.如权利要求10-11所述的药物组合物，其为薄膜形式。

17.如权利要求10-11所述的药物组合物，其为阴道药栓形式。

18.如权利要求12所述的药物组合物，其为片剂形式。

19.如权利要求13所述的药物组合物，其为乳膏剂形式。

20.如权利要求13所述的药物组合物，其为凝胶形式。

21.如权利要求10-20中任一项所述的药物组合物，其配制成用于局部施用。

22.如权利要求10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至宫颈。

23.如权利要求10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至阴道。

24.如权利要求10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至外阴。

25.如权利要求10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至肛周区。

26.如权利要求10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至肛门。

27.如权利要求10-21中任一项所述的药物组合物，用于递送至阴茎。

28.如权利要求18所述的药物组合物，其中所述片剂是双层片剂。

29.如权利要求18所述的药物组合物，其中所述片剂在小于约250μL流体中崩解。

30.如权利要求18所述的药物组合物，其中所述片剂在小于约150μL流体中崩解。

31.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.01mg至约10mg的所述化合物。

32.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.01mg至约5mg的所述化合物。

33.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.03mg至约1mg的所述化合物。

34.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.03mg至约0.07mg的所述化合物。

35.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.05mg至约0.15mg的所述化合物。

36.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.15mg至约0.45mg的所述化合物。

37.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含至少约0.05mg的所述化合物。

38.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含至少约0.1mg的所述化合物。

39.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.001％至约10％的所述化合物。

40.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.01％至0.5％的所述化合物。

41.如权利要求10-30中任一项所述的药物组合物，其包含约0.1％至5％的所述化合物。

42.如权利要求10-41中任一项所述的药物组合物，其包含粘膜粘着聚合物。

43.如权利要求42所述的药物组合物，其包含约5％至约20％的粘膜粘着聚合物。

44.如权利要求42所述的药物组合物，其包含约10％至约50％的粘膜粘着聚合物。

45.如权利要求42所述的药物组合物，其包含约50％至约90％的粘膜粘着聚合物。

46.如权利要求10-41中任一项所述的药物组合物，其包含崩解增强赋形剂。

47.如权利要求10-41中任一项所述的药物组合物，其包含穿透增强赋形剂。

48.如权利要求10-41中任一项所述的药物组合物，其包含允许活性化合物受控释放的赋形剂。

49.如权利要求19所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载剂包含：轻质矿物油、对羟基苯甲酸丙酯、Tefose 63、水、EDTA、对羟基苯甲酸甲酯和Carbopol 974P。

50.如权利要求20所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载剂包含：水、EDTA、苯甲酸甲酯、Carbopol 974P、丙二醇和山梨酸。

51.如权利要求18所述的药物组合物，其中所述片剂包含：甘露醇、多晶纤维素和硬脂酸镁。

52.一种治疗人乳头瘤病毒感染的方法，所述方法包括向有需要的宿主施用有效量的如权利要求1-5中任一项所述的化合物，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

53.一种治疗由人乳头瘤病毒感染引起的病症的方法，所述方法包括向有需要的宿主施用有效量的如权利要求1-5中任一项所述的化合物，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

54.如权利要求53所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒感染引起的病症是上皮内瘤变。

55.如权利要求54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是意义不明的非典型鳞状细胞(ASC-US)。

56.如权利要求54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是非典型腺细胞(AGC)。

57.如权利要求54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是低度鳞状上皮内病变(LSIL)。

58.如权利要求54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是非典型鳞状细胞，不能排除高度鳞状上皮内病变(ASC-H)。

59.如权利要求54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是高度鳞状上皮内病变(HSIL)。

60.如权利要求54所述的方法，其中所述由人乳头瘤病毒引起的病症是原位腺癌(AIS)。

61.如权利要求54所述的方法，其中所述上皮内瘤变是宫颈上皮内瘤变。

62.如权利要求61所述的方法，其中所述宫颈上皮内瘤变是1级宫颈上皮内瘤变。

63.如权利要求61所述的方法，其中所述宫颈上皮内瘤变是2级宫颈上皮内瘤变。

64.如权利要求61所述的方法，其中所述宫颈上皮内瘤变是3级宫颈上皮内瘤变。

65.如权利要求54所述的方法，其中所述上皮内瘤变是阴道上皮内瘤变。

66.如权利要求54所述的方法，其中所述上皮内瘤变是外阴上皮内瘤变。

67.如权利要求54所述的方法，其中所述上皮内瘤变是肛门上皮内瘤变。

68.如权利要求54所述的方法，其中所述上皮内瘤变是肛周上皮内瘤变。

69.如权利要求54所述的方法，其中所述上皮内瘤变是阴茎上皮内瘤变。

70.如权利要求52-69中任一项所述的方法，其中所述宿主是人。

71.如权利要求52-70中任一项所述的方法，其中局部施用所述化合物。

72.如权利要求52-71中任一项所述的方法，其中施用约0.01毫克至约1毫克的化合物。

73.如权利要求52-71中任一项所述的方法，其中施用约0.05毫克至约0.3毫克。

74.如权利要求52-73中任一项所述的方法，其进一步包括在将剂型插入受累区域之前，向上皮组织应用润滑方式。

75.如权利要求52-73中任一项所述的方法，其进一步包括在将剂型插入受累区域之前，向所述剂型应用润滑方式。

76.如权利要求74或75所述的方法，其中所述润滑方式选自水、基于甘油的润滑剂和基于羟乙基纤维素的润滑剂。

77.如权利要求52-76中任一项所述的方法，其中所述化合物被每天施用。

78.如权利要求52-76中任一项所述的方法，约每天一次施用。

79.如权利要求52-76中任一项所述的方法，约每周两次施用。

80.如权利要求52-76中任一项所述的方法，约每周三次或更多次施用。

81.如权利要求52-80中任一项所述的方法，施用约一周。

82.如权利要求52-80中任一项所述的方法，施用约两周。

83.如权利要求52-80中任一项所述的方法，施用约三周。

84.如权利要求52-80中任一项所述的方法，施用约四周。

85.如权利要求52-80中任一项所述的方法，施用约五周。

86.如权利要求52-80中任一项所述的方法，施用约六周。

87.如权利要求52-86中任一项所述的方法，其中将所述化合物以治疗周期施用，所述治疗周期包括：

a.治疗期，其包括施用所述化合物，和

b.停药期，其包括无治疗的时间段。

88.如权利要求87所述的方法，其中所述停药期为约一周。

89.如权利要求87所述的方法，其中所述停药期为约两周。

90.如权利要求87所述的方法，其中所述停药期为约三周。

91.如权利要求87所述的方法，其中所述停药期为约四周。

92.如权利要求87所述的方法，其中所述停药期为约五周。

93.如权利要求87所述的方法，其中所述停药期为约六周。

94.如权利要求87-93中任一项所述的方法，其中施用至少两个治疗周期。

95.如权利要求87-93中任一项所述的方法，其中施用至少三个治疗周期。

96.如权利要求52-80中任一项所述的方法，其中约0.05毫克至约0.3毫克的所述化合物被每天施用。

97.如权利要求52-80中任一项所述的方法，其中约0.05毫克至约0.3毫克的所述化合物被每周三次施用。

98.如权利要求52-80中任一项所述的方法，其中约0.05毫克至约0.3毫克的所述化合物被每周一次施用。

99.如权利要求52-98中任一项所述的方法，其中人乳头瘤病毒是高危毒株。

100.如权利要求52-98中任一项所述的方法，其中所述人乳头瘤病毒是HPV-16或HPV-18。

101.如权利要求52-100中任一项所述的方法，其中所述化合物与另一种抗病毒化合物组合施用。

102.如权利要求101所述的方法，其中所述抗病毒化合物选自下组，该组由以下组成：蛋白酶抑制剂、另一种DNA聚合酶抑制剂、E6或E6AP的抑制剂、E7的抑制剂、E1的抑制剂、E2的抑制剂、E1-E2蛋白质相互作用的抑制剂、L2脂肽、L1的抑制剂、L2的抑制剂、L1的降解剂和L2的降解剂。

103.如权利要求52-100中任一项所述的方法，其中所述化合物与抗癌化合物组合施用。

104.如权利要求103所述的方法，其中所述抗癌化合物选自下组，该组由以下组成：HDAC抑制剂、四跨膜蛋白的降解剂、免疫检查点抑制剂、T细胞疗法和抗增殖药物。

105.如权利要求52-100中任一项所述的方法，其中所述化合物与外科手术组合施用。

106.如权利要求105所述的方法，其中在所述外科手术之前施用所述化合物。

107.如权利要求105所述的方法，其中在所述外科手术之后施用所述化合物。

108.如权利要求105所述的方法，其中所述外科手术在施用所述化合物期间进行。

109.如权利要求105-108中任一项所述的方法，其中所述外科手术是切除患病组织。

110.如权利要求109所述的方法，其中所述切除是环形电切除术(LEEP)。

111.如权利要求109所述的方法，其中所述切除是转化区大环切除术(LLETZ)。

112.如权利要求109所述的方法，其中所述切除是刀锥切除术。

113.如权利要求109所述的方法，其中所述切除是激光锥形切除术。

114.如权利要求105-108中任一项所述的方法，其中所述外科手术是所述患病组织的消融。

115.如权利要求114所述的方法，其中所述消融是激光消融。

116.如权利要求114所述的方法，其中所述消融是冷冻消融。

117.如权利要求1-5所述的化合物在制备用于在有需要的宿主中治疗人乳头瘤病毒感染的药物中的用途，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

118.如权利要求1-5所述的化合物在制备用于在有需要的宿主中治疗由人乳头瘤病毒感染引起的病症的药物中的用途，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

119.如权利要求118所述的用途，其中所述由人乳头瘤病毒感染引起的病症是上皮内瘤变。

120.如权利要求119所述的用途，其中所述上皮内瘤变是阴道上皮内瘤变。

121.如权利要求119所述的用途，其中所述上皮内瘤变是外阴上皮内瘤变。

122.如权利要求119所述的用途，其中所述上皮内瘤变是宫颈上皮内瘤变。

123.如权利要求119所述的用途，其中所述上皮内瘤变是肛门上皮内瘤变。

124.如权利要求119所述的用途，其中所述上皮内瘤变是肛周上皮内瘤变。

125.如权利要求119所述的用途，其中所述上皮内瘤变是阴茎上皮内瘤变。

126.如权利要求117-125所述的用途，其中所述宿主是人。

127.如权利要求117-126所述的用途，用于局部施用。

128.如权利要求1-5中任一项所述的化合物，其用于在有需要的宿主中治疗人乳头瘤病毒感染，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

129.如权利要求1-5中任一项所述的化合物，其用于在有需要的宿主中治疗由人乳头瘤病毒感染引起的病症，所述化合物任选地在药学上可接受的载剂中。

130.如权利要求129所述用途的化合物，其中所述由人乳头瘤病毒感染引起的病症是上皮内瘤变。

131.如权利要求130所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是阴道上皮内瘤变。

132.如权利要求130所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是外阴上皮内瘤变。

133.如权利要求130所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是宫颈上皮内瘤变。

134.如权利要求130所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是肛门上皮内瘤变。

135.如权利要求130所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是肛周上皮内瘤变。

136.如权利要求130所述用途的化合物，其中所述上皮内瘤变是阴茎上皮内瘤变。

137.如权利要求128-136所述用途的化合物，其中所述宿主是人。

138.如权利要求128-137所述用途的化合物，其中局部施用所述化合物。

139.一种用于制备如权利要求4所述的晶型形式的方法，所述方法包括：

a.将R_P化合物I溶解于选自甲醇、乙醇和异丙醇的溶剂中；

b.在约20℃至约70℃的温度下搅拌；

c.添加1.0当量的富马酸；

d.添加选自戊烷、己烷和庚烷的溶剂；

e.冷却混合物；

f.搅拌冷却的溶液；并且

g.分离和干燥固体。

140.如权利要求139所述的方法，其中步骤(a)的醇溶剂是乙醇或异丙醇。

141.如权利要求139-140所述的方法，其中步骤(a)的醇溶剂是异丙醇。

142.如权利要求139所述的方法，其中将步骤(b)的溶液在约45℃至约55℃下进行搅拌。

143.如权利要求139所述的方法，其中脂肪族溶剂是己烷或庚烷。

144.如权利要求139和143所述的方法，其中脂肪族溶剂是庚烷。

145.如权利要求139所述的方法，其中所述混合物被冷却至低于约20℃。

146.如权利要求139所述的方法，其中所述混合物被冷却至低于约10℃。

147.如权利要求139所述的方法，其中所述混合物被冷却至低于约5℃。

148.如权利要求139所述的方法，其中所述混合物被冷却至约5℃至0℃。

149.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含微晶纤维素。

150.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含乳糖。

151.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含蔗糖。

152.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含磷酸钙。

153.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含碳酸氢钠。

154.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含柠檬酸。

155.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含乙醇酸淀粉钠。

156.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含预胶凝淀粉。

157.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含交聚维酮。

158.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含交联羧甲基纤维素钠。

159.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含聚卡波非。

160.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含聚氧化乙烯。

161.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含羟乙基甲基纤维素。

162.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含羟乙基纤维素。

163.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含羟丙甲纤维素。

164.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含马来酸。

165.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含己二酸。

166.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含富马酸。

167.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含羟丙基纤维素。

168.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含PVP。

169.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含黄原胶。

170.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含甘露醇。

171.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含卡波姆。

172.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含聚乙二醇。

173.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含鲸蜡醇。

174.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含硬脂醇。

175.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含聚山梨醇酯。

176.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含月桂基硫酸钠。

177.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含轻质矿物油或矿物油。

178.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含白蜡。

179.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含硅流体。

180.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含二乙二醇单乙基醚。

181.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含油酸。

182.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含肉豆蔻酸异丙酯。

183.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含丙二醇二辛酸酯。

184.如权利要求10或11所述的药物组合物，其包含甘油基单油酸酯。