FR3119770A1 - Pichia naganishii extract and its cosmetic uses - Google Patents

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Abstract

La présente invention concerne un principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espèce Pichia naganishii et ses utilisations cosmétiques, en particulier pour maintenir l’hydratation et restaurer l’intégrité de la peau.The present invention relates to a cosmetic active principle obtained from a yeast of the species Pichia naganishii and its cosmetic uses, in particular for maintaining hydration and restoring the integrity of the skin.

Description

Extrait de Pichia naganishii et ses utilisations cosmétiquesPichia naganishii extract and its cosmetic uses

L’invention concerne un principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espècePichia naganishiiet ses utilisations cosmétiques, en particulier pour favoriser l’hydratation de la peau et restaurer l’intégrité de la peau.The invention relates to a cosmetic active ingredient obtained from a yeast of the species Pichia naganishii and its cosmetic uses, in particular for promoting skin hydration and restoring skin integrity.

Etat de l’artState of the art

La peau nécessite d’être hydratée et protégée afin qu’elle joue correctement son rôle de barrière vis-à-vis des agressions extérieures. Dans nos modes de vie actuels effrénés, en particulier citadin, la peau est constamment agressée par des facteurs externes tels que la fatigue, le stress, la pollution, le tabagisme, l’alcool, certains traitements médicamenteux, aggravant la déshydratation naturelle qui apparaît dès l’âge de 25 ans.The skin needs to be hydrated and protected so that it plays its role of barrier correctly against external aggressions. In our current hectic lifestyles, especially in cities, the skin is constantly attacked by external factors such as fatigue, stress, pollution, smoking, alcohol, certain drug treatments, aggravating the natural dehydration that appears as soon as the age of 25.

Le renouvellement cellulaire s’affaiblit alors et la microcirculation ralentit. Le teint devient terne, perd en uniformité et la peau est plus sujette aux rougeurs. Or, l’éclat du teint traduit la santé de la peau, un teint terne donne un air fatigué et peut accentuer les signes de l’âge. Ainsi, une peau déshydratée peut avoir un impact important sur l’estime de soi et l’image que l’on renvoie.Cell renewal then weakens and microcirculation slows down. The complexion becomes dull, loses uniformity and the skin is more prone to redness. However, the radiance of the complexion reflects the health of the skin, a dull complexion gives a tired look and can accentuate the signs of aging. Thus, dehydrated skin can have a significant impact on self-esteem and the image that we send back.

C’est pourquoi, de nombreux produits cosmétiques visent à maintenir l’hydratation de la peau et renforcer son rôle de barrière protectrice afin d’éviter la sensation de tiraillement.This is why many cosmetic products aim to maintain the hydration of the skin and reinforce its role as a protective barrier in order to avoid the feeling of tightness.

Or, certains produits cosmétiques peuvent se révéler être trop agressifs pour la peau et aggraver la déshydratation.However, some cosmetic products may prove to be too aggressive for the skin and aggravate dehydration.

Il existe donc un besoin pour de nouveaux produits cosmétiques naturels qui permettent de maintenir l’hydratation et renforcer la fonction barrière de la peau, tout en apportant aux consommateurs une routine non agressive.There is therefore a need for new natural cosmetic products that help maintain hydration and strengthen the barrier function of the skin, while providing consumers with a non-aggressive routine.

C’est l’objectif de la présente invention qui, à cet effet, propose un nouveau principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espècePichia naganishii.This is the objective of the present invention which, for this purpose, proposes a new cosmetic active principle obtained from a yeast of the species Pichia naganishii .

La levurePichia naganishii, également dénomméeOgataea naganishiipeut être isolée à partir d’un exsudat du Camélia du Japon ouCamellia japonica. Cette levure spécifique a été identifiée jusqu’à présent uniquement sur deux plantes, leCamellia japonicaetSakaki ochnaceaet dans une seule zone géographique située au Japon. Une souche de la levurePichi a naganishiipeut également être obtenue auprès de la Banque ATCC sous le numéro ATCC 32418.The yeast Pichia naganishii , also called Ogataea naganishii can be isolated from an exudate of Japanese camellia or Camellia japonica . This specific yeast has so far been identified only on two plants, Camellia japonica and Sakaki ochnacea and in a single geographical area located in Japan. A strain of Pichi a naganishii yeast can also be obtained from the ATCC Bank under ATCC number 32418.

Il est connu de l’art antérieur, des brevets portant sur la production de molécules par la levurePichia naganishiitelles que l’acide glycolique, le dérivé de chioropropanediol, l’hydroxy-ketoester, le propanol, la muscone et la glycolate, mais aucun art antérieur ne décrit une utilisation cosmétique ou un principe actif issu de cette levure.It is known from the prior art, patents relating to the production of molecules by the yeast Pichia naganishii such as glycolic acid, the chioropropanediol derivative, the hydroxy-ketoester, the propanol, the muscone and the glycolate, but no prior art describes a cosmetic use or an active ingredient derived from this yeast.

Or, l’invention vise un principe actif issu de la biomasse de la levurePichia naganishii. En particulier, l’invention concerne un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de levure de l’espècePichia naganishii.Préférentiellement, l’extrait est un hydrolysat dePichia naganishii. However, the invention relates to an active ingredient derived from the biomass of the yeast Pichia naganishii . In particular, the invention relates to a cosmetic active principle comprising at least one extract of yeast of the species Pichia naganishii. Preferably, the extract is a hydrolyzate of Pichia naganishii.

L’invention se rapporte également à un procédé de préparation du principe actif selon l’invention, comprenant notamment une solubilisation de la levurePichia naganishiidans l’eau, une hydrolyse enzymatique, une séparation de la phase soluble et insoluble et récupération de la phase soluble, une inactivation enzymatique, et éventuellement une concentration de l’extrait suivi d’une filtration stérilisante.The invention also relates to a process for the preparation of the active principle according to the invention, comprising in particular solubilization of the yeast Pichia naganishii in water, enzymatic hydrolysis, separation of the soluble and insoluble phase and recovery of the phase soluble, enzymatic inactivation, and possibly concentration of the extract followed by sterilizing filtration.

Le principe actif selon l’invention est d’origine naturelle et présente avantageusement un effet hydratant et renforce la fonction barrière sans l’agresser. Il répond ainsi aux problématiques de l’art antérieur. Il peut être utilisé pour des applications cosmétiques, préférentiellement lorsqu’il est intégré dans une composition cosmétique, préférentiellement une composition sous une forme adaptée à une application topique. L’invention se rapporte donc également à une utilisation cosmétique d’une composition comprenant au moins 0,1% en poids du principe actif selon l’invention, en particulier pour hydrater la peau et renforcer sa fonction barrière.The active principle according to the invention is of natural origin and advantageously has a moisturizing effect and reinforces the barrier function without attacking it. It thus responds to the problems of the prior art. It can be used for cosmetic applications, preferentially when it is integrated into a cosmetic composition, preferentially a composition in a form suitable for topical application. The invention therefore also relates to a cosmetic use of a composition comprising at least 0.1% by weight of the active principle according to the invention, in particular for moisturizing the skin and reinforcing its barrier function.

D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l’invention et des exemples qui vont suivre.Other characteristics and advantages will emerge from the detailed description of the invention and the examples which follow.

Description détaillée de l’inventionDetailed description of the invention

DéfinitionDefinition

Par « principe actif cosmétique » au sens de l’invention, on entend un extrait comprenant au moins une molécule, préférentiellement un ensemble de molécules présentant un effet cosmétique sur la peau. Préférentiellement l’effet cosmétique sur la peau est un effet hydratant.By "cosmetic active ingredient" within the meaning of the invention, is meant an extract comprising at least one molecule, preferably a set of molecules having a cosmetic effect on the skin. Preferably, the cosmetic effect on the skin is a moisturizing effect.

Par « hydrolysat dePichia naganishii» au sens de l’invention, on entend tout principe actif issu de la levurePichia naganishii, obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse dePichia naganishii. Le terme hydrolysat dePichia naganishiiexclut les molécules produites uniquement par fermentation dePichia naganishii.By "hydrolyzate of Pichia naganishii " within the meaning of the invention, is meant any active ingredient derived from the yeast Pichia naganishii , obtained by a process comprising at least one stage of hydrolysis of Pichia naganishii . The term Pichia naganishii hydrolyzate excludes molecules produced solely by fermentation of Pichia naganishii .

Par «Pichia naganishii» au sens de l’invention, on entend toute levure de la famille desSaccharomycetaceae, du genrePichiaet de l’espècePichia naganishii. Une souche de la levurePichia naganishiia été enregistrée dans une collection de levures, sous le numéro ATCC 32418. Elle est également connue sous le nom :Ogataea naganishii.Pichia naganishiipeut être isolée à partir d’un exsudat duCamellia japonica.By “ Pichia naganishii ” within the meaning of the invention, is meant any yeast of the family Saccharomycetaceae , of the genus Pichia and of the species Pichia naganishii . A strain of the yeast Pichia naganishii has been registered in a yeast collection as ATCC number 32418. It is also known as: Ogataea naganishii . Pichia naganishii can be isolated from an exudate of Camellia japonica .

Principe actif selon l’inventionActive principle according to the invention

La présente invention a donc pour objet un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de levure de l’espècePichia naganishii.A subject of the present invention is therefore a cosmetic active principle comprising at least one extract of yeast of the species Pichia naganishii .

Selon un mode de réalisation préféré, la levurePichia naganishiiest obtenue à partir d’un exsudat deCamellia japonicaou à partir de la souche déposée sous le numéro ATCC 32418.According to a preferred embodiment, the Pichia naganishii yeast is obtained from an exudate of Camellia japonica or from the strain deposited under ATCC number 32418.

Préférentiellement, l’extrait de levure est un hydrolysat.Preferably, the yeast extract is a hydrolyzate.

L’extrait peut notamment comprendre des protéines et/ou des carbohydrates. Lorsque l’extrait comprend des protéines, l’extrait comprend préférentiellement entre 20% et 60% de protéines, en poids de matière sèche de l’extrait.The extract may in particular comprise proteins and/or carbohydrates. When the extract comprises proteins, the extract preferably comprises between 20% and 60% of proteins, by weight of dry matter of the extract.

Selon un mode de réalisation, l’extrait comprend entre 5% et 25% de carbohydrates, plus préférentiellement 12% en poids de matière sèche de l’extrait.According to one embodiment, the extract comprises between 5% and 25% carbohydrates, more preferably 12% by weight of dry matter of the extract.

Préférentiellement, le taux de cendres est compris entre 5 et 35% en poids, encore plus préférentiellement compris entre 20 et 30%.Preferably, the ash content is between 5 and 35% by weight, even more preferably between 20 and 30%.

La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique.The crude ash content can be determined by weighing the residues from the incineration of hydrolyzate samples at 550°C in an electric muffle furnace.

L’extrait selon l’invention est préférentiellement un hydrolysat obtenu par une hydrolyse enzymatique. Ainsi, l’extrait est préférentiellement un hydrolysat enzymatique. A titre d’exemple, les enzymes utilisées pour l’hydrolyse peuvent être une protéase ou une carbohydrase.The extract according to the invention is preferably a hydrolyzate obtained by enzymatic hydrolysis. Thus, the extract is preferably an enzymatic hydrolyzate. By way of example, the enzymes used for the hydrolysis can be a protease or a carbohydrase.

Le principe actif selon l’invention peut se présenter sous forme solide ou sous forme liquide.The active principle according to the invention can be in solid form or in liquid form.

Lorsqu’il se présente sous forme liquide, le principe actif selon l’invention est préférentiellement l’extrait tel que décrit précédemment en tant que tel. Il se présente sous forme d’un liquide limpide, de couleur jaune clair à l’odeur caractéristique.When it is in liquid form, the active principle according to the invention is preferably the extract as described above as such. It comes in the form of a clear liquid, light yellow in color with a characteristic odor.

Lorsqu’il se présente sous forme solide le principe actif selon l’invention est préférentiellement constitué par l’extrait dePichia naganishiitel que précédemment décrit et par un support choisi parmi la maltodextrine, la gomme arabique, la lécithine de soja ou l’isomalt. Selon un mode de réalisation, particulièrement adapté, l’extrait représente au moins 10% en poids du principe actif et le support au plus 90% en poids du principe actif.When it is in solid form, the active ingredient according to the invention preferably consists of the extract of Pichia naganishii as described above and of a carrier chosen from maltodextrin, gum arabic, soy lecithin or isomalt. . According to one particularly suitable embodiment, the extract represents at least 10% by weight of the active principle and the support at most 90% by weight of the active principle.

Dans le cas d’une forme solide dans laquelle le principe actif est associé à un support, les teneurs en protéines, en sucres et en cendres dans le principe actif sont modifiées, le support étant généralement constitué majoritairement de sucres.In the case of a solid form in which the active principle is associated with a support, the protein, sugar and ash contents in the active principle are modified, the support generally consisting mainly of sugars.

Le principe actif selon l’invention peut éventuellement être intégré dans une composition cosmétique, notamment une composition comprenant au moins 0,1% en poids dudit principe actif. En particulier, la composition est sous une forme adaptée à une application topique tel qu’une crème ou une lotion.The active principle according to the invention may optionally be integrated into a cosmetic composition, in particular a composition comprising at least 0.1% by weight of said active principle. In particular, the composition is in a form suitable for topical application such as a cream or a lotion.

ProcédéProcess d’extractionextraction

L’extrait constituant ou contenu dans le principe actif selon l’invention peut être obtenu par tout procédé comprenant au moins une étape d’extraction dePichia naganishii, en particulier une étape d’hydrolyse. De façon particulièrement préférée, il est obtenu par un procédé comprenant une étape d’hydrolyse enzymatique.The extract constituting or contained in the active principle according to the invention can be obtained by any process comprising at least one stage of extraction of Pichia naganishii , in particular a stage of hydrolysis. Particularly preferably, it is obtained by a process comprising an enzymatic hydrolysis step.

Préalablement au procédé d’obtention de l’extrait en tant que tel, il convient de produire la biomasse dePichia naganishii. Cette étape est réalisée selon le mode de culture des levures dans un milieu adapté à leur développement, de manière classique pour l’homme de métier. Une fois la biomasse obtenue, on réalise une extraction, préférentiellement une hydrolyse, en vue d’obtenir des molécules actives.Prior to the process for obtaining the extract as such, it is necessary to produce the biomass of Pichia naganishii . This step is carried out according to the method of culturing yeasts in a medium suitable for their development, in a conventional manner for those skilled in the art. Once the biomass has been obtained, an extraction, preferably a hydrolysis, is carried out in order to obtain active molecules.

Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- solubilisation à raison d’au moins 40 g/L de la levurePichia naganishiidans l’eau,
- hydrolyse, préférentiellement hydrolyse enzymatique,
- séparation de la phase soluble et insoluble et récupération de la phase soluble,
- inactivation enzymatique, et éventuellement filtration,
- éventuellement concentration et filtration stérilisante.
According to a particularly suitable embodiment, the active principle according to the invention is obtained by implementing the following steps:
- solubilization at a rate of at least 40 g/L of the Pichia naganishii yeast in water,
- hydrolysis, preferably enzymatic hydrolysis,
- separation of the soluble and insoluble phase and recovery of the soluble phase,
- enzymatic inactivation, and possibly filtration,
- possibly concentration and sterilizing filtration.

Les conditions d’hydrolyse sont choisies pour hydrolyser à la fois les parois des levures et le milieu intracellulaire des levures, préférentiellement l’hydrolyse est réalisée par voie enzymatique.The hydrolysis conditions are chosen to hydrolyze both the walls of the yeasts and the intracellular environment of the yeasts, preferentially the hydrolysis is carried out enzymatically.

La séparation des phases soluble et insoluble est réalisée par tout moyen connu de l’homme du métier, par exemple par centrifugation, filtration ou décantation. Préférentiellement la séparation des phases soluble et insoluble est réalisée par centrifugation, permettant ainsi la récupération de la phase soluble contenant entre autres les protéines solubles.The separation of the soluble and insoluble phases is carried out by any means known to those skilled in the art, for example by centrifugation, filtration or decantation. Preferably the separation of the soluble and insoluble phases is carried out by centrifugation, thus allowing the recovery of the soluble phase containing inter alia the soluble proteins.

L’inactivation de l’enzyme est préférentiellement réalisée par traitement thermique. Cette inactivation est alors réalisée selon les préconisations du fournisseur de l’enzyme.The inactivation of the enzyme is preferably carried out by heat treatment. This inactivation is then carried out according to the recommendations of the enzyme supplier.

Eventuellement, le procédé comprend une étape de filtration après la récupération de la phase soluble pour éliminer les particules encore en suspension. Ainsi, cette étape de filtration permet la purification de la phase soluble récupérée et est réalisée afin d’éliminer les molécules de haut poids moléculaire (les enzymes et les polymères…).Optionally, the process comprises a filtration step after the recovery of the soluble phase to eliminate the particles still in suspension. Thus, this filtration step allows the purification of the recovered soluble phase and is carried out in order to eliminate high molecular weight molecules (enzymes and polymers, etc.).

L’hydrolysat obtenu à ce stade peut éventuellement être encore concentré et/ou purifié, préférentiellement par des étapes d’ultrafiltrations successives à travers des filtres de porosité différentes, en conservant les filtrats à chaque étape et/ou par une méthode de type chromatographique.The hydrolyzate obtained at this stage can optionally be further concentrated and/or purified, preferably by successive ultrafiltration stages through filters of different porosity, preserving the filtrates at each stage and/or by a method of the chromatographic type.

L’hydrolysat obtenu après hydrolyse et filtration, avant ou après concentration et filtration stérilisante, est un hydrolysat dePichia naganishii, et constitue une première forme du principe actif selon l’invention, se présentant alors sous forme liquide.The hydrolyzate obtained after hydrolysis and filtration, before or after concentration and sterilizing filtration, is a hydrolyzate of Pichia naganishii , and constitutes a first form of the active ingredient according to the invention, then being in liquid form.

L’hydrolysat obtenu peut ensuite être séché et associé à un support, pour se présenter sous forme solide. Cette phase peut être réalisée par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- un support d’atomisation, de préférence la maltodextrine, est ajouté dans l’hydrolysat dePichia naganishii, d’au plus 90% (en masse/volume) ;
- cette solution est ensuite concentrée sous vide ;
- une élimination des bactéries éventuellement présentes est réalisée par traitement thermique ;
- l’atomisation permet d’obtenir une poudre.
The hydrolyzate obtained can then be dried and associated with a support, to be in solid form. This phase can be achieved by implementing the following steps:
- an atomization medium, preferably maltodextrin, is added to the hydrolyzate of Pichia naganishii , at most 90% (by mass/volume);
- This solution is then concentrated under vacuum;
- any bacteria present is eliminated by heat treatment;
- atomization makes it possible to obtain a powder.

Les étapes des procédés décrits ci-avant, prises individuellement sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de matières premières naturelles et l’homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.The steps of the processes described above, taken individually, are usual in the field of extractions of active ingredients from natural raw materials and the person skilled in the art is able to adjust the reaction parameters on the basis of his general knowledge. .

UtilisationUse cosmétiquecosmetic

Le principe actif selon l’invention est particulièrement efficace pour hydrater la peau et renforcer la fonction barrière de la peau. En particulier l’extrait dePichia naganishiiselon l’invention, lorsqu’il est appliqué sur la peau permet de :
- maintenir l’hydratation,
- renforcer la fonction barrière mécanique et immune de la peau.
Avantageusement, le principe actif selon l’invention est capable de stimuler la synthèse d’acide hyaluronique dans des kératinocytes humains et ainsi promouvoir une action hydratante.
The active principle according to the invention is particularly effective in moisturizing the skin and reinforcing the barrier function of the skin. In particular, the Pichia naganishii extract according to the invention, when applied to the skin, makes it possible to:
- maintain hydration,
- reinforce the mechanical and immune barrier function of the skin.
Advantageously, the active principle according to the invention is capable of stimulating the synthesis of hyaluronic acid in human keratinocytes and thus promoting a moisturizing action.

Le principe actif selon l’invention permet également d’augmenter l’expression des gènes des β-défensine, de la psoriasine, des récepteurs de type Toll et de la ribonucléase Rnase 7 afin d’ainsi renforcer la barrière immune. Le principe actif selon l’invention augmente également l’expression des gènes codant : occludine, claudine-1, desmogléine-1, fillaggrine, loricrine, caspase 14 afin de renforcer la barrière mécanique.The active ingredient according to the invention also makes it possible to increase the expression of the genes for β-defensin, psoriasin, Toll-type receptors and ribonuclease Rnase 7 in order to thus reinforce the immune barrier. The active ingredient according to the invention also increases the expression of genes encoding: occludin, claudin-1, desmoglein-1, fillaggrin, loricrin, caspase 14 in order to reinforce the mechanical barrier.

Le principe actif selon l’invention permet d’augmenter l’expression de la hyaluronane synthase 2 et de l’aquaporine 3, permettant ainsi d’améliorer l’hydratation de la peau en maintenant l’homéostasie de la fonction barrière. Enfin, le principe actif permet également de réduire l’inflammation de la peau notamment en limitant ou en n’activant pas la sécrétion des interleukines 13 et 17.The active principle according to the invention makes it possible to increase the expression of hyaluronan synthase 2 and of aquaporin 3, thus making it possible to improve the hydration of the skin by maintaining the homeostasis of the barrier function. Finally, the active principle also makes it possible to reduce inflammation of the skin, in particular by limiting or not activating the secretion of interleukins 13 and 17.

L’invention vise ainsi une utilisation cosmétique, non thérapeutique, d’un principe actif selon l’invention pour ses effets cosmétiques, seul ou dans une composition, en particulier pour au moins un effet cosmétique choisi parmi un effet hydratant et un effet de renforcement de la barrière cutanée.The invention thus aims at a cosmetic, non-therapeutic use of an active principle according to the invention for its cosmetic effects, alone or in a composition, in particular for at least one cosmetic effect chosen from a moisturizing effect and a reinforcing effect. of the skin barrier.

Par utilisation non thérapeutique, on entend au sens de l’invention une utilisation cosmétique du principe actif selon l’invention ou d’une composition le comprenant, destinée à des sujets sains non malades, en particulier à des sujets avec une peau saine.By non-therapeutic use, is meant within the meaning of the invention a cosmetic use of the active principle according to the invention or of a composition comprising it, intended for healthy subjects who are not sick, in particular for subjects with healthy skin.

Préférentiellement l’utilisation du principe actif selon l’invention, seul ou dans une composition, est une utilisation en application topique sur la peau.Preferably, the use of the active principle according to the invention, alone or in a composition, is a use in topical application to the skin.

L’utilisation cosmétique selon l’invention vise également l’utilisation d’une composition comprenant le principe actif selon l’invention.The cosmetic use according to the invention also targets the use of a composition comprising the active principle according to the invention.

Le principe actif selon l’invention est en effet préférentiellement utilisé dans des compositions, en particulier des compositions comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. Il peut s’agir de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à une application topique.The active principle according to the invention is indeed preferentially used in compositions, in particular compositions comprising a cosmetically acceptable medium. These can be compositions in different galenic forms, suitable for topical application.

Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d’émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l’aspect de lotion, crème ou mousse.These compositions may in particular be in the form of oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions (Water/Oil/Water or Oil/Water/Oil) which may optionally be microemulsions or nanoemulsions, or in the form of solutions, suspensions, hydrodispersions, aqueous gels. They can be more or less fluid and have the appearance of lotion, cream or mousse.

Il peut s’agir de compositions comprenant au moins 0,1% en poids du principe actif selon l’invention. Ces compositions comprennent, outre l’actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d’inconfort inacceptables pour l’utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements.These may be compositions comprising at least 0.1% by weight of the active principle according to the invention. These compositions comprise, in addition to the active agent, a medium that is physiologically acceptable and preferably cosmetically acceptable, that is to say which does not cause feelings of discomfort that are unacceptable for the user, such as redness, tightness or tingling.

Les compositions selon l’invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi :
- les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ;
- les cires, telles que l’ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d’abeille ou la cire de carnauba,
- les élastomères de silicone,
- les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu’ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères,
- les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires,
- les épaississants et/ou gélifiants,
- les humectants, tels que les polyols comme la glycérine,
- les colorants, les conservateurs, les charges,
- les tenseurs,
- les séquestrants,
- les parfums,
- et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.
The compositions according to the invention may contain, as adjuvant, at least one compound chosen from:
- oils, which can be chosen in particular from silicone oils, linear or cyclic, volatile or non-volatile;
- waxes, such as ozokerite, polyethylene wax, beeswax or carnauba wax,
- silicone elastomers,
- surfactants, preferably emulsifiers, whether nonionic, anionic, cationic or amphoteric,
- co-surfactants, such as linear fatty alcohols,
- thickeners and/or gelling agents,
- humectants, such as polyols such as glycerin,
- colorants, preservatives, fillers,
- the tensors,
- sequestrants,
- the perfumes,
- and mixtures thereof, without this list being exhaustive.

Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbookpublié par lePersonal Care Product Council).Examples of such adjuvants are cited in particular in the CTFA Dictionary ( International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook published by the Personal Care Product Council ).

Bien entendu, l’homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l’adjonction envisagée.Of course, the person skilled in the art will take care to choose the possible additional compounds, active or non-active, and their quantity, so that the advantageous properties of the mixture are not, or substantially not, altered by the addition envisaged.

Les compositions comprenant un principe actif selon l’invention sont notamment destinées à être utilisées pour des effets hydratant et/ou pour renforcer la barrière épithéliale cutanée.The compositions comprising an active principle according to the invention are in particular intended to be used for moisturizing effects and/or to reinforce the cutaneous epithelial barrier.

Préférentiellement, ladite composition comprenant un principe actif selon l’invention est appliquée, préférentiellement au moins une fois par jour pendant au moins un mois.Preferably, said composition comprising an active principle according to the invention is applied, preferably at least once a day for at least one month.

L’invention est à présent illustrée par des exemples non limitatifs de principe actif et composition selon l’invention et par des résultats.The invention is now illustrated by non-limiting examples of active principle and composition according to the invention and by results.

ExemplesExamples

ExempleExample 1 – Principe actif selon l’invention (PA1)1 – Active principle according to the invention (PA1)

Le principe actif de l’exemple 1 est obtenu par le procédé suivant :
- Solubilisation deP. naganishiidans l’eau, préférentiellement à raison de 50g/l,
- Hydrolyse enzymatique avec une carbohydrase,
- Séparation des phases solubles et insolubles
- Inactivation enzymatique par traitement thermique
- Filtration
- Concentration
- Filtration et filtration stérilisante
The active principle of Example 1 is obtained by the following process:
- Solubilization of P. naganishii in water, preferably at a rate of 50g/l,
- Enzymatic hydrolysis with a carbohydrase,
- Separation of soluble and insoluble phases
- Enzymatic inactivation by heat treatment
- Filtration
- Focus
- Filtration and sterilizing filtration

Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes : 45% de carbohydrates et 7% de protéines (en pourcentage par rapport à la matière sèche)The active ingredient obtained has the following characteristics: 45% carbohydrates and 7% proteins (in percentage relative to the dry matter)

ExempleExample 22 – Principe actif selon l’invention– Active ingredient according to the invention (PA2)(PA2)

Le principe actif de l’exemple 2 est obtenu par le procédé suivant :
- Solubilisation deP. naganishiidans l’eau, préférentiellement à raison de 50g/l,
- Hydrolyse enzymatique avec une protéase,
- Séparation des phases solubles et insolubles
- Inactivation enzymatique par traitement thermique
- Filtration
- Concentration
- Filtration et filtration stérilisante
The active principle of Example 2 is obtained by the following process:
- Solubilization of P. naganishii in water, preferably at a rate of 50g/l,
- Enzymatic hydrolysis with a protease,
- Separation of soluble and insoluble phases
- Enzymatic inactivation by heat treatment
- Filtration
- Focus
- Filtration and sterilizing filtration

Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes : 12% de carbohydrates, 29% de cendres et 59% de protéines (en pourcentage par rapport à la matière sèche). L’extrait est sous la forme d’une solution aqueuse liquide limpide, couleur jaune clair à l’odeur caractéristique.The active ingredient obtained has the following characteristics: 12% carbohydrates, 29% ashes and 59% proteins (in percentage relative to the dry matter). The extract is in the form of a clear liquid aqueous solution, light yellow in color with a characteristic odor.

ExempleExample 3 – Principe actif selon l’invention (PA3)3 – Active principle according to the invention (PA3)

Le principe actif de l’exemple 3 est obtenu par un procédé similaire à celui de l’exemple 2 et comprend une étape de filtration à l’aide de charbon.The active principle of example 3 is obtained by a process similar to that of example 2 and comprises a step of filtration using charcoal.

Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes : 45% de carbohydrates et 11% de protéines (en pourcentage par rapport à la matière sèche).The active ingredient obtained has the following characteristics: 45% carbohydrates and 11% proteins (as a percentage relative to the dry matter).

ExempleExample 4 – Principe actif hors invention (PA4)4 – Active ingredient outside invention (PA4)

Le principe actif de l’exemple 4 est obtenu par le procédé suivant :
- solubilisation dePichia anomaladans l’eau, préférentiellement à raison de 20g/l
- hydrolyse basique de la solution dePichia anomala,
- séparation des phases soluble et insoluble, par exemple par filtration, centrifugation ou décantation,
- récupération de la phase soluble
- filtration et purification pour récupérer les molécules
- hydrolyse enzymatique des protéines, préférentiellement au moyen d’une protéase,
- filtration et purification pour récupérer les bio-peptides de taille inférieure à 5000Da.
The active principle of Example 4 is obtained by the following process:
- solubilization of Pichia anomala in water, preferably at a rate of 20g/l
- basic hydrolysis of the Pichia anomala solution,
- separation of the soluble and insoluble phases, for example by filtration, centrifugation or decantation,
- recovery of the soluble phase
- filtration and purification to recover the molecules
- enzymatic hydrolysis of proteins, preferably by means of a protease,
- filtration and purification to recover bio-peptides smaller than 5000 Da.

ExempleExample 5 – Principe actif hors invention (PA5)5 – Active ingredient outside invention (PA5)

Le principe actif de l’exemple 5 est obtenu par le procédé suivant :
- solubilisation de levuresPichia anomaladans l’eau,
- hydrolyse enzymatique afin de couper les protéines et d’obtenir une fraction protéique de masse moléculaire inférieure à 5000Da,
- inactivation des enzymes utilisées pour l’hydrolyse,
- séparation des phases soluble et insoluble,
- ultrafiltration pour éliminer la fraction protéique, et
- filtrations.
The active principle of Example 5 is obtained by the following process:
- solubilization of Pichia anomala yeasts in water,
- enzymatic hydrolysis in order to cut the proteins and obtain a protein fraction with a molecular mass of less than 5000 Da,
- inactivation of enzymes used for hydrolysis,
- separation of the soluble and insoluble phases,
- ultrafiltration to remove the protein fraction, and
- filtrations.

Exemple 6 –Example 6 – Effet du principe actif selon l’invention surEffect of the active ingredient according to the invention on la synthèse d’acide hyaluronique.the synthesis of hyaluronic acid.

L’objectif de cet essai est de comparer l’effet d’un principe actif selon l’invention, en particulier celui de l’Exemple 2 (PA2)in vitrosur kératinocytes humains, sur la synthèse d’acide hyaluronique avec l’effet d’un principe actif hors invention correspondant au principe actif de l’Exemple 4 (PA4).The objective of this test is to compare the effect of an active principle according to the invention, in particular that of Example 2 (PA2) in vitro on human keratinocytes, on the synthesis of hyaluronic acid with the effect of an active principle outside the invention corresponding to the active principle of Example 4 (PA4).

Le protocole opératoire de l’étude est décrit en suivant.The operating protocol of the study is described below.

Les kératinocytes humains normaux sont ensemencés puis incubés à 37°C dans une étuve contenant 5% de CO2. Puis le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant les principes actifs :
- PA 2 à 1,00% (V/V)
- PA 4 à 1,00% (V/V)
Normal human keratinocytes are seeded and then incubated at 37° C. in an oven containing 5% CO2. Then the culture medium is removed and replaced with medium containing the active ingredients:
- PA 2 at 1.00% (V/V)
- PA 4 at 1.00% (V/V)

Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2 pendant 48 heures. Les surnageants sont récupérés avant d’être analysés par dosage ELISA.The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2 for 48 hours. The supernatants are recovered before being analyzed by ELISA assay.

Les résultats sont présentés dans le tableau 1 ci-après.The results are shown in Table 1 below.

Synthèse d’acide hyaluronique (%)Synthesis of hyaluronic acid (%) Taux d’acide hyaluronique / Témoin (%)Hyaluronic acid level / Control (%) TémoinWitness 100100 PA2 1,00%PA2 1.00% 150150 + 50+ 50 PA4 1,00%PA4 1.00% 8080 --

Ainsi, seul le principe actif selon l’invention (PA2) stimule la synthèse d’acide hyaluronique.Thus, only the active principle according to the invention (PA2) stimulates the synthesis of hyaluronic acid.

L’étude est également réalisée à différentes doses de principes actifs comme suit :
- PA 1 à 0,25% et 1,00% (V/V)
- PA 2 à 0,25% et 1,00% (V/V)
- PA 3 à 0,25% et 1,00% (V/V)
The study is also carried out at different doses of active ingredients as follows:
- PA 1 at 0.25% and 1.00% (V/V)
- PA 2 at 0.25% and 1.00% (V/V)
- PA 3 at 0.25% and 1.00% (V/V)

Les résultats sont présentés dans le tableau 2 ci-après.The results are shown in Table 2 below.

Synthèse d’acide hyaluroniqueSynthesis of hyaluronic acid
(pg/µg protéines)(pg/µg protein)
Taux d’acide hyaluronique / Témoin (%)Hyaluronic acid level / Control (%)
TémoinWitness 399 ± 64399±64 PA 1 0,25%PA 1 0.25% 527 ± 141527±141 + 32+ 32 PA 1 1,00%PA 1 1.00% 628 ± 94628±94 + 57+ 57 PA 2 0,25%PA2 0.25% 559 ± 113559±113 + 40+ 40 PA 2 1,00%PA2 1.00% 598 ± 90598±90 + 50+ 50 PA 3 0,25%PA3 0.25% 541 ± 100541±100 + 36+ 36 PA 3 1,00%PA 3 1.00% 591 ± 84591±84 + 48+ 48

Ainsi, les principes actifs selon l’invention à 1% stimulent la synthèse de l’acide hyaluronique de 57% pour PA1, 50% pour PA2, 48% pour PA3.Thus, the active principles according to the invention at 1% stimulate the synthesis of hyaluronic acid by 57% for PA1, 50% for PA2, 48% for PA3.

Exemple 7 –Example 7 – Effet du principe actif sur l’expression des gènesEffect of the active ingredient on gene expression β-défensine 4 etβ-defensin 4 and TollToll LikeLike RecepteurReceiver 22 (TLR2)(TLR2) ..

Cette étude a été réalisée sur kératinocytes humains normaux par PCR quantitative pour évaluer la capacité à augmenter l’expression des gènes : β-défensine 4 et Toll Like Recepteur 2. Le principe actif utilisé pour cet essai est le principe actif de l’exemple 2 ainsi que les principes actifs hors invention PA4 et PA5.This study was carried out on normal human keratinocytes by quantitative PCR to assess the ability to increase the expression of genes: β-defensin 4 and Toll Like Receptor 2. The active principle used for this test is the active principle of example 2 as well as the active principles outside the invention PA4 and PA5.

Le protocole opératoire de l’étude est décrit en suivant.The operating protocol of the study is described below.

Les kératinocytes humains normaux sont ensemencés puis incubés à 37°C dans une étuve contenant 5% de CO2. Puis, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant le produit issu des principes actifs.Normal human keratinocytes are seeded and then incubated at 37° C. in an oven containing 5% CO2. Then, the culture medium is removed and replaced with medium containing the product derived from the active principles.

Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. Les ARN totaux extraits ont été reverses-transcripts et les ADN complémentaires obtenus ont été analysés par la technique de PCR quantitative.The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2. The total RNAs extracted were reverse-transcribed and the complementary DNAs obtained were analyzed by the quantitative PCR technique.

La fluorescence (SYBR Green) est mesurée en continu à l’aide d’un thermocycleur. L’analyse des Ct (quantification relative) est réalisée à l’aide d’un logiciel.Fluorescence (SYBR Green) is measured continuously using a thermal cycler. Ct (relative quantification) analysis is performed using software.

Les résultats sont présentés dans le tableau 3 et le tableau 4 ci-après.The results are shown in Table 3 and Table 4 below.

β-défensine 4 (%)β-defensin 4 (%) Expression/Témoin (%)Expression/Control (%) TémoinWitness 100100 PA2 1,00%PA2 1.00% 300300 +200+200 PA2 2,00%PA2 2.00% 401401 +301+301 PA5 1,00%PA5 1.00% 103103 PA4 1,00%PA4 1.00% 8080

TLR2 (%)LRT2 (%) Expression/Témoin (%)Expression/Control (%) TémoinWitness 100100 PA2 1,00%PA2 1.00% 132132 +32+32 PA2 2,00%PA2 2.00% 174174 +74+74 PA4 1,00%PA4 1.00% 9999 00

Ainsi, seul le principe actif selon l’invention (PA2) augmente l’expression des gènes de la barrière immune cutanée : β-défensine 4 et TLR2.Thus, only the active principle according to the invention (PA2) increases the expression of the genes of the cutaneous immune barrier: β-defensin 4 and TLR2.

Exemple 8 –Example 8 – Effet du principe actif selon l’inventionEffect of the active principle according to the invention suron l’expression de HAS-2HAS-2 expression etAnd l’aquaporine 3.aquaporin 3.

L’objectif de cette étude est d’évaluer l’effet des principes actifs selon l’invention sur leur capacité à augmenter l’expression des ARNm codant pour HAS-2 et l’aquaporine 3.The objective of this study is to evaluate the effect of the active ingredients according to the invention on their ability to increase the expression of mRNAs coding for HAS-2 and aquaporin 3.

Cette étude a été réalisée sur kératinocytes humains normaux par PCR quantitative.This study was carried out on normal human keratinocytes by quantitative PCR.

Le protocole opératoire de l’étude est décrit en suivant.The operating protocol of the study is described below.

Les kératinocytes humains normaux sont ensemencés puis incubés à 37°C dans une étuve contenant 5% de CO2.Normal human keratinocytes are seeded and then incubated at 37° C. in an oven containing 5% CO2.

Puis le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant les principes actifs issus dePichia naganishii:
- PA 1 à 0,25% et 1,00% (V/V)
- PA 2 à 0,25% et 1,00% (V/V)
- PA 3 à 0,25% et 1,00% (V/V)
Then the culture medium is removed and replaced with medium containing the active ingredients from Pichia naganishii :
- PA 1 at 0.25% and 1.00% (V/V)
- PA 2 at 0.25% and 1.00% (V/V)
- PA 3 at 0.25% and 1.00% (V/V)

Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. Les cellules sont récupérées et les ARN totaux extraits pour l’étude de HAS-2 et de l’aquaporine 3. Les ARN ont été reverses-transcripts et les ADN complémentaires obtenus ont été analysés par la technique de PCR quantitative.The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2. The cells are recovered and the total RNAs extracted for the study of HAS-2 and aquaporin 3. The RNAs were reverse-transcribed and the complementary DNAs obtained were analyzed by the quantitative PCR technique.

Les ARNm de témoins de référence, ont été également analysés en parallèle des ARNm de l’aquaporine 3 et de HAS-2.The reference control mRNAs were also analyzed in parallel with the aquaporin 3 and HAS-2 mRNAs.

La quantification de l’incorporation de fluorescence (SYBR Green) est mesurée en continu à l’aide d’un thermocycleur. L’analyse des Ct (quantification relative) est réalisée à l’aide d’un logiciel.The quantification of fluorescence incorporation (SYBR Green) is measured continuously using a thermal cycler. Ct (relative quantification) analysis is performed using software.

Les résultats sont présentés dans le tableau 5 ci-après.The results are shown in Table 5 below.

Expression / Témoin (%)Expression / Control (%) HAS-2HAS-2 aquaporine 3aquaporin 3 PA 1 0,25%PA 1 0.25% +20+20 +14+14 PA 1 1,00%PA 1 1.00% +4+4 +43+43 PA 2 0,25%PA2 0.25% +50+50 +46+46 PA 2 1,00%PA2 1.00% +36+36 +130+130 PA 3 0,25%PA3 0.25% +12+12 +9+9 PA 3 1,00%PA 3 1.00% +18+18 +95+95

Ainsi, le principe actif selon l’invention augmente l’expression de HAS-2 et de l’aquaporine 3.Thus, the active principle according to the invention increases the expression of HAS-2 and of aquaporin 3.

Exemple 9 – EExample 9 – E ffet du principe actif selon l’invention sur le réseau membranaire, en particuliereffect of the active principle according to the invention on the membrane network, in particular sur les fonctions serréeson tight functions ..

Le but de cette étude est de visualiser l’effet des principes actifs issus dePichia naganishiisur le réseau membranaire formé par zonula occludens ZO-1, un des constituants majeurs des jonctions serrées.The aim of this study is to visualize the effect of active ingredients from Pichia naganishii on the membrane network formed by zonula occludens ZO-1, one of the major constituents of tight junctions.

L’étude a été réalisée par immunocytologie sur des kératinocytes humains normaux après agression au Sodium Lauryl Sulfate (SLS) à 0,4mM.The study was carried out by immunocytology on normal human keratinocytes after attack with Sodium Lauryl Sulfate (SLS) at 0.4 mM.

Le protocole opératoire de l’étude est décrit en suivant.The operating protocol of the study is described below.

Les kératinocytes humains normaux sont ensemencés puis incubés à 37°C dans une étuve contenant 5% de CO2. Puis, les kératinocytes humains normaux sont traités avec une solution de CaCl2 à 1 mM pendant 48h afin de permettre la formation du réseau de jonctions serrées. Ensuite, les kératinocytes humains normaux sont traités avec une solution de SLS à 0,4 mM pendant 30 minutes.Normal human keratinocytes are seeded and then incubated at 37° C. in an oven containing 5% CO2. Then, the normal human keratinocytes are treated with a CaCl2 solution at 1 mM for 48 h in order to allow the formation of the network of tight junctions. Next, normal human keratinocytes are treated with a 0.4 mM SLS solution for 30 minutes.

A la fin de l’incubation, la solution de SLS est éliminée et remplacée par du milieu contenant les principes actifs issus dePichia naganishii:
- PA 1 à 0,25% et 1,00% (V/V)
- PA 2 à 0,25% et 1,00% (V/V)
- PA 3 à 0,25% et 1,00% (V/V).
At the end of the incubation, the SLS solution is removed and replaced with medium containing the active ingredients from Pichia naganishii :
- PA 1 at 0.25% and 1.00% (V/V)
- PA 2 at 0.25% and 1.00% (V/V)
- PA 3 at 0.25% and 1.00% (V/V).

Les cellules sont incubées pendant 48h dans une étuve à 37°C en atmosphère humide contenant 5% de CO2.The cells are incubated for 48 hours in an oven at 37° C. in a humid atmosphere containing 5% CO2.

Les cellules sont immunomarquées à l’aide d’un fluorophore. La visualisation est réalisée sur microscope couplé à un système d’analyse d’image. L’intensité du marquage des ZO-1 est proportionnelle à l’intensité de fluorescence verte présente au niveau membranaire des cellules. Plus la couleur verte est importante, plus le taux de synthèse des ZO-1 est élevé.The cells are immunolabeled using a fluorophore. Visualization is performed on a microscope coupled to an image analysis system. The intensity of ZO-1 labeling is proportional to the intensity of green fluorescence present at the cell membrane level. The greater the green color, the higher the rate of ZO-1 synthesis.

De plus, une analyse quantitative des images a été réalisée à l’aide du logiciel Matlab. Cette quantification est exprimée en Unité Arbitraire (UA).In addition, quantitative image analysis was performed using Matlab software. This quantification is expressed in Arbitrary Units (AU).

Les résultats sont les suivants. Après agression SLS de kératinocytes humains, le réseau de ZO-1 membranaire induit par le CaCl2 est fortement altéré.The results are as follows. After SLS attack on human keratinocytes, the membrane ZO-1 network induced by CaCl2 is strongly altered.

Testés à 0,25% puis à 1% sur kératinocytes humains agressés, les principes actifs augmentent respectivement la synthèse et la formation du réseau membranaire de ZO-1 de :
– 127% et 139% pour PA 1
– 33% et 46% pour PA 2
– 47% et 79% pour PA 3
Tested at 0.25% then at 1% on damaged human keratinocytes, the active ingredients respectively increase the synthesis and formation of the membrane network of ZO-1 by:
– 127% and 139% for PA 1
– 33% and 46% for PA 2
– 47% and 79% for PA 3

Ainsi, quelle que soit l’enzyme utilisée et la filtration choisie, les principes actifs selon l’invention issus de la culture dePichia naganishiiaugmentent la synthèse d’acide hyaluronique et l’expression des gènes impliqués dans la formation des jonctions serrées.Thus, whatever the enzyme used and the filtration chosen, the active principles according to the invention derived from the culture of Pichia naganishii increase the synthesis of hyaluronic acid and the expression of the genes involved in the formation of tight junctions.

Exemple 10 - Effet du principe actif selon l’invention sur les gènes de la barrière mécanique épidermique et sur les gènes de la barrière immune cutanéeExample 10 - Effect of the active principle according to the invention on the genes of the epidermal mechanical barrier and on the genes of the cutaneous immune barrier ..

L’étude vise à évaluer l’effet du principe actif selon l’invention sur sa capacité à augmenter l’expression des gènes :
- de la barrière mécanique épidermique : occludine, claudine-1, desmogléine-1, fillaggrine, loricrine, caspase 14
- de la barrière immune cutanée : β-défensine 1, : β-défensine 4, psoriasine, Toll Like Recepteur 2, Toll Like Recepteur 3, ribonucléase Rnase 7.
The study aims to evaluate the effect of the active principle according to the invention on its capacity to increase the expression of genes:
- the epidermal mechanical barrier: occludin, claudin-1, desmoglein-1, fillaggrin, loricrin, caspase 14
- the cutaneous immune barrier: β-defensin 1,: β-defensin 4, psoriasin, Toll Like Receptor 2, Toll Like Receptor 3, ribonuclease RNase 7.

Cette étude a été réalisée sur kératinocytes humains normaux par PCR quantitative.This study was carried out on normal human keratinocytes by quantitative PCR.

Le principe actif utilisé pour cet essai est le principe actif de l’exemple 2.The active principle used for this test is the active principle of Example 2.

Le protocole opératoire de l’étude est décrit en suivant.The operating protocol of the study is described below.

Les kératinocytes humains normaux sont ensemencés puis incubés à 37°C dans une étuve contenant 5% de CO2. Puis, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant le produit issu de PA2 à 0,5%, 1,0% et 2,0% (V/V).Normal human keratinocytes are seeded and then incubated at 37° C. in an oven containing 5% CO2. Then, the culture medium is removed and replaced with medium containing the product from PA2 at 0.5%, 1.0% and 2.0% (V/V).

Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2. Les ARN totaux extraits ont été reverses-transcripts et les ADN complémentaires obtenus ont été analysés par la technique de PCR quantitative.The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2. The total RNAs extracted were reverse-transcribed and the complementary DNAs obtained were analyzed by the quantitative PCR technique.

Les ARNm des gènes : occludine, claudine-1, desmogléine-1, filaggrine, loricrine, caspase 14, β-défensine 1, β -défensine 4, psoriasine, Toll Like Recepteur 2, Toll Like Recepteur 3 et la ribonucléase Rnase 7 ont été analysés en parallèle des ARNm de témoins de référence pour la normalisation.The mRNAs of the genes: occludin, claudin-1, desmoglein-1, filaggrin, loricrin, caspase 14, β-defensin 1, β-defensin 4, psoriasin, Toll Like Receptor 2, Toll Like Receptor 3 and the ribonuclease Rnase 7 were analyzed in parallel with reference control mRNAs for normalization.

La fluorescence (SYBR Green) est mesurée en continu à l’aide d’un thermocycleur. L’analyse des Ct (quantification relative) est réalisée à l’aide d’un logiciel.Fluorescence (SYBR Green) is measured continuously using a thermal cycler. Ct (relative quantification) analysis is performed using software.

Les résultats sont présentés dans les tableaux 6 et 7 ci-après.The results are presented in Tables 6 and 7 below.

Expression / Témoin (%)Expression / Control (%) Principe actif selon l’invention PA2Active ingredient according to the invention PA2 0,5%0.5% 1,0%1.0% 2,0%2.0% OccludineOccludin 00 00 00 Claudine-1Claudine-1 00 00 00 Desmogléine-1Desmoglein-1 8080 8484 184184 FilaggrineFilaggrin 3333 VaGoes 6464 LoricrineLoricrin 9191 VaGoes 8989 Caspasecaspase 9595 150150 370370 Va = valeurs aberrantesVa = outliers

Expression / Témoin (%)Expression / Control (%) Principe actif selon l’invention PA2Active ingredient according to the invention PA2 0,5%0.5% 1,0%1.0% 2,0%2.0% β-défensine 1β-defensin 1 2424 3434 100100 β-défensine 4β-defensin 4 107107 200200 301301 PsoriasinePsoriasin 00 88 88 Toll Like Recepteur 2Toll Like Receiver 2 2727 3232 7474 Toll Like Recepteur 3Toll Like Receiver 3 3434 6767 106106 Ribonucléase RNase 7Ribonuclease RNase 7 00 00 00

Testé à 2,0%, le principe actif selon l’invention augmente significativement l’expression des gènes de la barrière mécanique épidermique :
- desmogléine-1 : +184%
- filaggrine : +64%
- loricrine : +89%
- caspase 14 : +370%
Tested at 2.0%, the active principle according to the invention significantly increases the expression of the genes of the epidermal mechanical barrier:
- desmoglein-1: +184%
- filaggrin: +64%
- loricrin: +89%
- caspase 14: +370%

Le principe actif selon l’invention augmente également significativement l’expression des gènes de la barrière immune cutanée :
- β -défensine 1 : +100%
- β -défensine 4 : +301%
- Toll Like Recepteur 2 : +74%
- Toll Like Recepteur 3 : +106%
The active principle according to the invention also significantly increases the expression of the genes of the cutaneous immune barrier:
- β -defensin 1: +100%
- β -defensin 4: +301%
- Toll Like Receiver 2: +74%
- Toll Like Receiver 3: +106%

Exemple 11 -Example 11 - Effet du principe actif selon l’invention sur la sécrétion cytokinique des lymphocytes T helperEffect of the active ingredient according to the invention on the cytokine secretion of helper T lymphocytes

A.AT. Effet du principe actif sur la sEffect of the active ingredient on the s écrétion d’IL-13 par les LTh2secretion of IL-13 by LTh2

L’IL-13 a un fort impact sur la peau. Elle déclenche une réponse inflammatoire et une diminution de la fonction barrière de l’épiderme. Cette cytokine est sécrétée par les lymphocytes T helper de type 2 (LTh2). L’abondance de la population LTh2 est une composante majeure de la peau atopique.IL-13 has a strong impact on the skin. It triggers an inflammatory response and a reduction in the barrier function of the epidermis. This cytokine is secreted by type 2 helper T lymphocytes (Th2). The abundance of the LTh2 population is a major component of atopic skin.

L’objectif de cette étude est d’évaluer le potentiel d’activité du principe actif selon l’invention sur la sécrétion d’IL-13 par des LTh2.The objective of this study is to evaluate the potential activity of the active principle according to the invention on the secretion of IL-13 by LTh2.

Cette étude a été réalisée sur LTh2 par dosage de leur sécrétion d’IL 13.This study was carried out on LTh2 by assaying their IL-13 secretion.

Le principe actif utilisé pour cet essai est le principe actif de l’exemple 2.The active principle used for this test is the active principle of example 2.

Le protocole opératoire de l’étude est décrit en suivant.The operating protocol of the study is described below.

Les lymphocytes T naïfs sont isolés de cellules mononucléaires du sang périphérique et ensemencés dans du milieu culture contenant un mix permettant la différenciation des LT naïfs en LTh2. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2.Naïve T lymphocytes are isolated from peripheral blood mononuclear cells and seeded in culture medium containing a mix allowing the differentiation of naive T cells into LTh2. The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2.

Au bout de quelques jours, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant les mix de différenciation en présence ou non de la cyclosporine (1 µg/mL) ou du produit issu de PA2.After a few days, the culture medium is removed and replaced with medium containing the differentiation mixes in the presence or absence of cyclosporine (1 μg/mL) or of the product derived from PA2.

Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2 pendant 48 heures.The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2 for 48 hours.

Les surnageants sont récupérés et le dosage de l’IL-13 est réalisé par ELISA.The supernatants are recovered and the IL-13 assay is performed by ELISA.

Les résultats sont présentés dans le tableau 8 ci-après.The results are shown in Table 8 below.

Sécrétion d’IL-13 (pg/mL)IL-13 secretion (pg/mL) % d’inhibition d’IL-13% inhibition of IL-13 TémoinWitness 12671267 Cyclosporine 1 µg/mLCyclosporine 1 µg/mL 805805 -36-36 Principe actif selon l’invention 0,5%Active principle according to the invention 0.5% 13231323 00 Principe actif selon l’invention 1,0%Active ingredient according to the invention 1.0% 11671167 -8-8

Au contact de mix de différenciation, les LT naïfs s’orientent en LTh2. Le principe actif selon l’invention n’a pas d’effet significatif sur la sécrétion d’IL-13 par les LTh2 et donc n’influe pas la réponse inflammatoire et la fonction barrière de la peau par cette voie.In contact with differentiation mixes, naive LTs orient themselves in LTh2. The active ingredient according to the invention has no significant effect on the secretion of IL-13 by LTh2 and therefore does not influence the inflammatory response and the barrier function of the skin by this route.

B.B. Effet du principe actif sur la sécrétion d’IL-17 par les lymphocytes T helper de type 17Effect of the active ingredient on IL-17 secretion by type 17 helper T lymphocytes

L’interleukine 17 (IL-17), cytokine produite par les lymphocytes T helper de type 17 (LTh17), a un effet sur la biologie de l’épiderme. Elle induit une inflammation ainsi qu’une prolifération épidermique anormale. L’IL-17 est impliquée dans la pathologie du psoriasis.Interleukin 17 (IL-17), a cytokine produced by type 17 helper T lymphocytes (LTh17), has an effect on the biology of the epidermis. It induces inflammation and abnormal epidermal proliferation. IL-17 is implicated in the pathology of psoriasis.

L’objectif de cette étude est d’évaluer le potentiel d’activité du principe actif selon l’invention sur la sécrétion d’IL-17 par des LTh17.The objective of this study is to evaluate the potential activity of the active principle according to the invention on the secretion of IL-17 by LTh17.

Le principe actif utilisé pour cet essai est le principe actif de l’exemple 2.The active principle used for this test is the active principle of Example 2.

Le protocole opératoire de l’étude est décrit en suivant.The operating protocol of the study is described below.

Les lymphocytes T naïfs sont isolés de cellules mononucléaires du sang périphérique et ensemencés dans du milieu culture contenant un mix permettant la différenciation des LT naïfs en LTh17. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2.Naïve T lymphocytes are isolated from peripheral blood mononuclear cells and seeded in culture medium containing a mix allowing the differentiation of naive T cells into LTh17. The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2.

Au bout de quelques jours, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu contenant les mix de différenciation en présence ou non de la cyclosporine (1 µg/mL) ou du produit issu de PA2.After a few days, the culture medium is removed and replaced with medium containing the differentiation mixes in the presence or absence of cyclosporine (1 μg/mL) or of the product derived from PA2.

Les cellules sont ensuite incubées à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2 pendant 48 heures. Les surnageants sont récupérés et le dosage de l’IL-17 est réalisé par ELISA.The cells are then incubated at 37°C in an atmosphere containing 5% CO2 for 48 hours. The supernatants are recovered and the IL-17 assay is carried out by ELISA.

Cette étude a été réalisée sur LTh17 par dosage de leur sécrétion d’IL 17. Les résultats sont présentés dans le tableau 9 ci-après.This study was carried out on LTh17 by assaying their IL 17 secretion. The results are presented in Table 9 below.

Sécrétion d’IL-17 (pg/mL)IL-17 secretion (pg/mL) % d’inhibition d’IL-17% inhibition of IL-17 TémoinWitness 42764276 Cyclosporine 1 µg/mLCyclosporine 1 µg/mL 11921192 -72-72 Principe actif 0,5%Active ingredient 0.5% 40774077 -5-5 Principe actif 1,0%Active ingredient 1.0% 36513651 -15-15

Au contact d’un mix de différenciation, les LT naïfs s’orientent en LTh17. Testé à 1% sur des lymphocytes Th17, le principe actif selon l’invention limite significativement la sécrétion d’IL 17 de 15%.
In contact with a differentiation mix, the naive LTs orient themselves in LTh17. Tested at 1% on Th17 lymphocytes, the active principle according to the invention significantly limits the secretion of IL 17 by 15%.

Claims (9)

Principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait de levure de l’espècePichia naganishii . Cosmetic active principle comprising at least one yeast extract of the Pichia naganishii species . Principe actif cosmétique selon la revendication précédente, caractérisé en ce que l’extrait est un hydrolysat dePichia naganishii. Cosmetic active principle according to the preceding claim, characterized in that the extract is a hydrolyzate of Pichia naganishii. Principe actif cosmétique selon la revendication précédente, caractérisé en ce que l’hydrolysat est un hydrolysat enzymatique.Cosmetic active principle according to the preceding claim, characterized in that the hydrolyzate is an enzymatic hydrolyzate. Principe actif cosmétique selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la levurePichia naganishiiest obtenue à partir d’un exsudat deCamellia japonica.Cosmetic active principle according to one of the preceding claims, characterized in that the Pichia naganishii yeast is obtained from an exudate of Camellia japonica . Principe actif cosmétique selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comprend entre 20% et 60% de protéines, en poids de matière sèche de l’extrait.Cosmetic active principle according to one of the preceding claims, characterized in that it comprises between 20% and 60% of proteins, by weight of dry matter of the extract. Principe actif cosmétique selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il se présente sous forme liquide ou sous forme solide.Cosmetic active principle according to one of the preceding claims, characterized in that it is in liquid form or in solid form. Principe actif cosmétique selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu’il est susceptible d’être obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes :
- solubilisation d’au moins 40 g/L dePichia naganishiidans l’eau,
- hydrolyse enzymatique
- séparation de la phase soluble et insoluble et récupération de la phase soluble,
- inactivation enzymatique, et
- éventuellement concentration et filtration stérilisante.
Cosmetic active principle according to one of the preceding claims, characterized in that it can be obtained by a process comprising the following steps:
- solubilization of at least 40 g/L of Pichia naganishii in water,
- enzymatic hydrolysis
- separation of the soluble and insoluble phase and recovery of the soluble phase,
- enzyme inactivation, and
- possibly concentration and sterilizing filtration.
Utilisation cosmétique d’un principe actif selon l’une des précédentes revendications ou d’une composition comprenant au moins 0,1% en poids d’un principe actif selon l’une des revendications précédentes, destiné à une application topique sur la peau pour un effet hydratant et/ou renforcer la fonction barrière de la peau.Cosmetic use of an active principle according to one of the preceding claims or of a composition comprising at least 0.1% by weight of an active principle according to one of the preceding claims, intended for topical application to the skin for a moisturizing effect and/or reinforce the barrier function of the skin. Procédé de préparation d’un principe actif selon l’une des revendications 1 à 7 comprenant les étapes suivantes :
- solubilisation d’au moins 40 g/L dePichia naganishiidans l’eau,
- hydrolyse enzymatique
- séparation de la phase soluble et insoluble et récupération de la phase soluble,
- inactivation enzymatique, et
- concentration et filtration stérilisante.
Process for the preparation of an active principle according to one of claims 1 to 7 comprising the following steps:
- solubilization of at least 40 g/L of Pichia naganishii in water,
- enzymatic hydrolysis
- separation of the soluble and insoluble phase and recovery of the soluble phase,
- enzyme inactivation, and
- concentration and sterilizing filtration.
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