FR3143370A1 - Metschnikowia rubicola extract and its cosmetic uses - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne un principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espèce Metschnikowia rubicola et ses utilisations cosmétiques, en particulier pour améliorer la fonction barrière et l’hydratation cutanée.The present invention relates to a cosmetic active ingredient obtained from a yeast of the Metschnikowia rubicola species and its cosmetic uses, in particular to improve barrier function and skin hydration.
Description
L’invention concerne un principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espèceMetschnikowia rubicolaet ses utilisations cosmétiques, en particulier pour améliorer la fonction barrière et l’hydratation cutanée.The invention relates to a cosmetic active ingredient obtained from a yeast of the Metschnikowia rubicola species and its cosmetic uses, in particular to improve the barrier function and skin hydration.
Etat de l’artState of the art
Depuis la crise sanitaire, les consommateurs recherchent des produits cosmétiques reflétant leurs aspirations à un mode de vie sain ainsi que leurs préoccupations environnementales et éthiques. Ainsi, près de 2/3 des consommateurs sont plus attentifs aux indications mentionnées sur l’emballage des produits qu’ils consomment et s’intéressent à des produits plus respectueux de l’environnement et de la santé. On peut notamment citer les produits naturels, biologiques, certifiés végan, respectueux de l’environnement etc. En particulier, les produits à base d’ingrédients naturels respectueux de l’environnement constituent une forte attente de la part des consommateurs.Since the health crisis, consumers have been looking for cosmetic products that reflect their aspirations for a healthy lifestyle as well as their environmental and ethical concerns. Thus, almost 2/3 of consumers are more attentive to the indications mentioned on the packaging of the products they consume and are interested in products that are more respectful of the environment and health. These include natural, organic, certified vegan, environmentally friendly products, etc. In particular, products based on environmentally friendly natural ingredients constitute a strong expectation among consumers.
A ce titre, il existe donc un besoin pour de nouveaux produits cosmétiques à base d’ingrédients naturels, permettant d’améliorer la fonction barrière et l’hydratation cutanée.As such, there is therefore a need for new cosmetic products based on natural ingredients, making it possible to improve the barrier function and skin hydration.
Pour répondre à ce besoin, l’inventeur s’est intéressé à des matières premières naturelles et originales pour développer de tels principes actifs, prélevés à partir de plantes cultivées de la famille desRosaceae.To meet this need, the inventor was interested in natural and original raw materials to develop such active ingredients, taken from cultivated plants of the Rosaceae family.
Dans le cadre de ses travaux, l’inventeur s’est particulièrement intéressé aux levures présentes sur les plantes cultivées de la famille desRosaceae. L’inventeur a identifié une levure spécifique appartenant à l’espèceMetschnikowia rubicolasur ces plantes cultivées de la famille desRosaceae.As part of his work, the inventor was particularly interested in the yeasts present on cultivated plants of the Rosaceae family. The inventor identified a specific yeast belonging to the species Metschnikowia rubicola on these cultivated plants of the Rosaceae family.
La levureMetschnikowia rubicolan’a jamais été utilisée en cosmétique, et de façon étonnante, selon l’invention, un extrait issu de cette levure permet d’améliorer la fonction barrière et donc l’hydratation cutanée. Metschnikowia rubicola yeast has never been used in cosmetics, and surprisingly, according to the invention, an extract from this yeast makes it possible to improve the barrier function and therefore skin hydration.
Ainsi, l’invention propose un nouveau principe actif cosmétique obtenu à partir d’une levure de l’espèceMetschnikowia rubicola.Thus, the invention proposes a new cosmetic active ingredient obtained from a yeast of the Metschnikowia rubicola species.
La levureMetschnikowia rubicolaa été prélevée en France sur des plantes cultivées de la famille desRosaceae, en conformité avec la règlementation APA en vigueur.The Metschnikowia rubicola yeast was collected in France from cultivated plants of the Rosaceae family, in compliance with current APA regulations.
Ainsi, l’invention vise un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait issu de la biomasse de la levure de l’espèceMetschnikowia rubicola, en particulier ledit extrait est un hydrolysat deMetschnikowia rubicola. Préférentiellement l’hydrolysat deMetschnikowia rubicolaest un hydrolysat enzymatique.Thus, the invention aims at a cosmetic active ingredient comprising at least one extract derived from the biomass of yeast of the species Metschnikowia rubicola , in particular said extract is a hydrolyzate of Metschnikowia rubicola . Preferably the hydrolyzate of Metschnikowia rubicola is an enzymatic hydrolyzate.
L’hydrolysat deMetschnikowia rubicolapeut être obtenu par au moins une hydrolyse, préférentiellement au moins une hydrolyse enzymatique. Selon un objet particulièrement préféré, l’hydrolysat est obtenu par deux hydrolyses enzymatiques, en particulier les deux hydrolyses sont simultanées.The hydrolyzate of Metschnikowia rubicola can be obtained by at least one hydrolysis, preferably at least one enzymatic hydrolysis. According to a particularly preferred object, the hydrolyzate is obtained by two enzymatic hydrolyses, in particular the two hydrolyses are simultaneous.
Selon un autre objet préféré de l’invention, l’extrait comprend des saccharides.According to another preferred object of the invention, the extract comprises saccharides.
La fraction saccharidique représente au moins 15% en poids de matière sèche de l’extrait, selon la méthode de DUBOIS ((Dubois M. etal.,Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956), préférentiellement entre 28 et 75% en poids de matière sèche de l’extrait.The saccharide fraction represents at least 15% by weight of dry matter of the extract, according to the DUBOIS method ((Dubois M. et al ., Analytical chemistry , 28, 3, 350-356, 1956), preferably between 28 and 75% by weight of dry matter of the extract.
La fraction saccharidique présente dans l’extrait selon l’invention comprend majoritairement des oligosaccharides de masse moléculaire inférieure à 3600 Da constitués de glucose et de mannose.The saccharide fraction present in the extract according to the invention mainly comprises oligosaccharides with a molecular mass of less than 3600 Da consisting of glucose and mannose.
L’extrait selon l’invention peut également comprendre des peptides. La fraction peptidique représente au moins 20% en poids de matière sèche de l’extrait. De façon préférée, la fraction peptidique représente moins de 50% en poids de matière sèche de l’extrait.The extract according to the invention may also comprise peptides. The peptide fraction represents at least 20% by weight of dry matter of the extract. Preferably, the peptide fraction represents less than 50% by weight of dry matter of the extract.
L’invention se rapporte également à un procédé de préparation du principe actif selon l’invention, comprenant notamment une culture de la biomasse deMetschnikowia rubicoladans un milieu de culture adapté, suivie d’une solubilisation de la biomasse deMetschnikowia rubicoladans l’eau, au moins une hydrolyse, préférentiellement enzymatique, une inactivation thermique, une séparation de la phase soluble et insoluble. Après récupération de la phase soluble, un tri moléculaire est réalisé, et éventuellement une désodorisation ou décoloration, et/ou une filtration de l’extrait suivie d’une filtration stérilisante.The invention also relates to a process for preparing the active principle according to the invention, comprising in particular a cultivation of the biomass of Metschnikowia rubicola in a suitable culture medium, followed by a solubilization of the biomass of Metschnikowia rubicola in the water, at least one hydrolysis, preferably enzymatic, thermal inactivation, separation of the soluble and insoluble phase. After recovery of the soluble phase, molecular sorting is carried out, and possibly deodorization or discoloration, and/or filtration of the extract followed by sterilizing filtration.
Le principe actif selon l’invention est un ingrédient cosmétique dérivé de matériaux naturels selon la définition de la norme ISO 16128, internationalement reconnue. Il présente avantageusement un effet hydratant et améliore la fonction barrière de la peau, permettant ainsi de répondre aux problématiques du marché cosmétique. Aussi, il peut être utilisé pour des applications cosmétiques et être intégré dans une composition cosmétique sous une forme adaptée à une application topique.The active ingredient according to the invention is a cosmetic ingredient derived from natural materials according to the definition of the internationally recognized ISO 16128 standard. It advantageously has a moisturizing effect and improves the barrier function of the skin, thus making it possible to respond to the problems of the cosmetic market. Also, it can be used for cosmetic applications and be integrated into a cosmetic composition in a form suitable for topical application.
L’invention se rapporte donc également à une utilisation cosmétique du principe actif selon l’invention ou d’une composition comprenant au moins 0,5% en poids du principe actif selon l’invention, en particulier pour améliorer la fonction barrière et l’hydratation de la peau.The invention therefore also relates to a cosmetic use of the active principle according to the invention or of a composition comprising at least 0.5% by weight of the active principle according to the invention, in particular to improve the barrier function and the hydration of the skin.
D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l’invention et des exemples qui vont suivre.Other characteristics and advantages will emerge from the detailed description of the invention and the examples which follow.
DéfinitionDefinition
Par «Metschnikowia rubicola» au sens de l’invention, on entend toute levure de la famille desMetschnikowiaceae, du genreMetschnikowiaet de l’espèceMetschnikowia rubicola. Préférentiellement, une souche de la levureMetschnikowia rubicolaa été enregistrée dans une collection de levures (CIRM), sous le numéro 2141. Cette levureMetschnikowia rubicolaa été isolée à partir de plantes de la famille desRosaceae.By “ Metschnikowia rubicola ” within the meaning of the invention is meant any yeast of the family Metschnikowiaceae , of the genus Metschnikowia and of the species Metschnikowia rubicola . Preferably, a strain of the yeast Metschnikowia rubicola was registered in a yeast collection (CIRM), under the number 2141. This yeast Metschnikowia rubicola was isolated from plants of the Rosaceae family.
Par « principe actif cosmétique » au sens de l’invention, on entend un extrait comprenant au moins un ensemble de molécules présentant un effet cosmétique sur la peau. Préférentiellement l’effet est un effet hydratant et le principe actif améliore la fonction barrière de la peau.By “cosmetic active ingredient” within the meaning of the invention is meant an extract comprising at least one set of molecules having a cosmetic effect on the skin. Preferably the effect is a hydrating effect and the active ingredient improves the barrier function of the skin.
Par « extrait deMetschnikowia rubicola» au sens de l’invention, on entend un extrait comprenant au moins un ensemble de molécules, préférentiellement un extrait de la biomasse de la levureMetschnikowia rubicola, ledit extrait étant un hydrolysat, comprenant, préférentiellement au moins des sucres représentant au moins 15% en poids du poids total de l’extrait. Ledit extrait constituant un ingrédient dérivé des matériaux naturels, selon la définition de la norme ISO 16128.By “extract of Metschnikowia rubicola ” within the meaning of the invention, is meant an extract comprising at least one set of molecules, preferably an extract of the biomass of the yeast Metschnikowia rubicola , said extract being a hydrolyzate, comprising, preferably at least sugars representing at least 15% by weight of the total weight of the extract. Said extract constituting an ingredient derived from natural materials, according to the definition of standard ISO 16128.
Par « ingrédient cosmétique dérivé de matériaux naturels » au sens de l’invention, on entend un ingrédient cosmétique obtenu par des procédés chimiques et/ou biologiques définis visant à le modifier chimiquement. Ces modifications chimiques sont intentionnelles, associées au procédé réalisé, les structures et les ratios des molécules obtenues ne sont plus identiques à ce que l’homme du métier sait présent naturellement dans la levure.By “cosmetic ingredient derived from natural materials” within the meaning of the invention is meant a cosmetic ingredient obtained by defined chemical and/or biological processes aimed at chemically modifying it. These chemical modifications are intentional, associated with the process carried out, the structures and ratios of the molecules obtained are no longer identical to what those skilled in the art know to be present naturally in yeast.
Par « hydrolysat deMetschnikowia rubicola» au sens de l’invention, on entend tout extrait issu de la levureMetschnikowia rubicola, obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse, préférentiellement au moins une étape d’hydrolyse enzymatique.By “hydrolyzate of Metschnikowia rubicola ” within the meaning of the invention is meant any extract obtained from the yeast Metschnikowia rubicola , obtained by a process comprising at least one hydrolysis step, preferably at least one enzymatic hydrolysis step.
Principe actifActive ingredient
La présente invention a donc pour objet un principe actif cosmétique comprenant au moins un extrait deMetschnikowia rubicola, ledit extrait est un hydrolysat de la levure deMetschnikowia rubicola . The present invention therefore relates to a cosmetic active ingredient comprising at least one extract of Metschnikowia rubicola , said extract is a hydrolyzate of the yeast of Metschnikowia rubicola .
L’extrait selon l’invention peut être obtenu par tout type de procédé d’extraction ou de transformation des molécules de la levure comprenant au moins une étape d’hydrolyse. Aussi, l’extrait est un hydrolysat, c’est-à-dire qu’il est obtenu par hydrolyse de la levure. Il est préférentiellement obtenu par au moins une hydrolyse enzymatique. Ainsi, l’extrait selon l’invention est préférentiellement un hydrolysat enzymatique. De façon particulièrement avantageuse, l’extrait est obtenu par deux hydrolyses enzymatiques simultanées.The extract according to the invention can be obtained by any type of extraction or transformation process of yeast molecules comprising at least one hydrolysis step. Also, the extract is a hydrolyzate, that is to say it is obtained by hydrolysis of yeast. It is preferably obtained by at least one enzymatic hydrolysis. Thus, the extract according to the invention is preferably an enzymatic hydrolyzate. Particularly advantageously, the extract is obtained by two simultaneous enzymatic hydrolysis.
L’extrait selon l’invention comprend des sucres, ceux-ci représentent au moins 15% en poids de matière sèche de l’extrait, plus préférentiellement entre 28% et 75% en poids de matière sèche de l’extrait. La teneur en sucres dans l’extrait peut être déterminée par la méthode de DUBOIS (Dubois M. etal.,Analytical chemistry, 28, 3, 350-356, 1956).The extract according to the invention comprises sugars, these represent at least 15% by weight of dry matter of the extract, more preferably between 28% and 75% by weight of dry matter of the extract. The sugar content in the extract can be determined by the DUBOIS method (Dubois M. et al ., Analytical chemistry , 28, 3, 350-356, 1956).
De façon préférée les sucres présents dans l’extrait selon l’invention sont majoritairement des oligosaccharides de masses molaires inférieures à 3600Da et des polysaccharides de masses molaires inférieures à 306 kDa. Les sucres présents majoritairement dans l’extrait sont des oligosaccharides de masses molaires comprises entre 180 et 3 600 Da.Preferably the sugars present in the extract according to the invention are mainly oligosaccharides with molar masses less than 3600Da and polysaccharides with molar masses less than 306 kDa. The sugars present mainly in the extract are oligosaccharides with molar masses between 180 and 3,600 Da.
Préférentiellement les oligosaccharides et les polysaccharides de l’extrait sont composés de glucose et de mannose.Preferably the oligosaccharides and polysaccharides of the extract are composed of glucose and mannose.
L’extrait deMetschnikowia rubicolapeut également comprendre des peptides.
Metschnikowia rubicola extract may also include peptides.
Préférentiellement, l’extrait deMetschnikowia rubicolacomprend des peptides ayant un poids moléculaire inférieur à 10 kDa, préférentiellement inférieur à 3500 Da, très préférentiellement inférieur à 2000 Da. La répartition et la quantité de la fraction protéique peut être déterminée par le dosage de l’azote total selon la méthode de KJELDHAL (référence : Official method of analysis of the A.O.C., 12th ed. W Horwitz, E.D., New-York, 15-60, 1975).Preferably, the Metschnikowia rubicola extract comprises peptides having a molecular weight less than 10 kDa, preferably less than 3500 Da, very preferably less than 2000 Da. The distribution and quantity of the protein fraction can be determined by measuring the total nitrogen according to the KJELDHAL method (reference: Official method of analysis of the AOC, 12th ed. W Horwitz, ED, New York, 15- 60, 1975).
De façon préférée, les peptides ayant un poids moléculaire inférieur à 3500 Da représentent au moins 90% en poids de la fraction protéique de l’extrait, encore plus préférentiellement les peptides ayant un poids moléculaire inférieur à 2000Da représentent au moins 75% en poids de la fraction protéique de l’extrait, selon la méthode de KJELDHAL.Preferably, the peptides having a molecular weight less than 3500 Da represent at least 90% by weight of the protein fraction of the extract, even more preferably the peptides having a molecular weight less than 2000 Da represent at least 75% by weight of the protein fraction of the extract, according to the KJELDHAL method.
Dans l’extrait, la fraction peptidique représente au moins 20% en poids de matière sèche de l’extrait, préférentiellement entre 20 et 60%.In the extract, the peptide fraction represents at least 20% by weight of dry matter of the extract, preferably between 20 and 60%.
L’inventeur a également déterminé le taux de cendres de l’extrait selon l’invention. Le taux de cendres est préférentiellement compris entre 10 et 40% en poids de matière sèche de l’extrait. La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’extrait selon l’invention à 550°C dans un four à moufle électrique.The inventor also determined the ash content of the extract according to the invention. The ash content is preferably between 10 and 40% by weight of dry matter of the extract. The raw ash content can be determined by weighing the residues resulting from the incineration of samples of the extract according to the invention at 550°C in an electric muffle furnace.
Dans le cadre de ses travaux de caractérisation, l’inventeur a également déterminé la teneur en matières sèches de l’extrait. Celle-ci peut être déterminée par la pesée des résidus issus du séchage de l’extrait selon l’invention à 105°C dans une étuve jusqu’à l’obtention d’un poids constant. Préférentiellement, l’extrait selon l’invention sous forme liquide a une teneur en matières sèches de : 15 g/L à 38 g/L, encore plus préférentiellement de 20 g/L à 32g/L.As part of his characterization work, the inventor also determined the dry matter content of the extract. This can be determined by weighing the residues resulting from drying the extract according to the invention at 105°C in an oven until a constant weight is obtained. Preferably, the extract according to the invention in liquid form has a dry matter content of: 15 g/L to 38 g/L, even more preferably 20 g/L to 32g/L.
Le principe actif selon l’invention peut également comprendre d’autres ingrédients ajoutés par l’Homme du métier, en particulier des excipients. Aussi, le principe actif selon l’invention comprend préférentiellement au moins un excipient choisi parmi un conservateur, un antioxydant, un stabilisant, un support d’atomisation, et leur combinaison. De tels excipients permettent de stabiliser, conserver, éviter la dégradation de l’extrait, en particulier des molécules comprises dans l’extrait responsables de l’effet hydratant dudit principe actif cosmétique.The active principle according to the invention may also include other ingredients added by those skilled in the art, in particular excipients. Also, the active principle according to the invention preferably comprises at least one excipient chosen from a preservative, an antioxidant, a stabilizer, an atomization support, and their combination. Such excipients make it possible to stabilize, preserve and avoid degradation of the extract, in particular of the molecules included in the extract responsible for the moisturizing effect of said cosmetic active ingredient.
Le principe actif cosmétique selon l’invention peut se présenter sous différentes formes, préférentiellement sous forme liquide ou sous forme solide.The cosmetic active ingredient according to the invention can be presented in different forms, preferably in liquid form or in solid form.
Lorsqu’il se présente sous forme liquide, le principe actif selon l’invention est exclusivement constitué par l’extrait deMetschnikowia rubicolaaccompagné d’excipients, préférentiellement de stabilisant et/ou conservateur, et/ou d’antioxydant.When it is in liquid form, the active principle according to the invention consists exclusively of the extract of Metschnikowia rubicola accompanied by excipients, preferably a stabilizer and/or preservative, and/or an antioxidant.
L’extrait sous forme liquide se présente préférentiellement sous forme d’un liquide limpide, de couleur jaune clair et présentant une faible odeur. Il peut toutefois être plus coloré et/ou être décoloré par tout procédé connu de l’homme du métier. Le principe actif peut également être combiné à des agents de stabilisation ou des agents de conservation.The extract in liquid form is preferably in the form of a clear liquid, light yellow in color and with a faint odor. It may, however, be more colored and/or be discolored by any process known to those skilled in the art. The active ingredient can also be combined with stabilizing agents or preservatives.
Lorsqu’il se présente sous forme solide le principe actif selon l’invention est préférentiellement constitué par l’extrait deMetschnikowia rubicolatel que précédemment décrit et par au moins un excipient tel qu’un support choisi parmi la maltodextrine, la gomme arabique ou la lécithine de soja. Selon un mode de réalisation, particulièrement adapté, l’extrait représente au moins 10% en poids du principe actif et le support au plus 90% en poids du principe actif.When it is in solid form, the active principle according to the invention is preferably constituted by the extract of Metschnikowia rubicola as previously described and by at least one excipient such as a support chosen from maltodextrin, gum arabic or soy lecithin. According to a particularly suitable embodiment, the extract represents at least 10% by weight of the active principle and the support at most 90% by weight of the active principle.
Dans le cas d’une forme solide dans laquelle le principe actif est associé à un support, les teneurs en protéines, en sucres et en cendres dans le principe actif sont modifiées, le support étant généralement constitué majoritairement de sucres.In the case of a solid form in which the active principle is associated with a support, the protein, sugar and ash contents in the active principle are modified, the support generally consisting mainly of sugars.
Le principe actif selon l’invention peut éventuellement être intégré dans une composition cosmétique, notamment une composition comprenant au moins 0,5% en poids dudit principe actif. Le principe actif selon l’invention est en effet préférentiellement utilisé dans des compositions, en particulier des compositions comprenant un milieu cosmétiquement acceptable. Il peut s’agir de compositions sous différentes formes galéniques, adaptées à une application topique.The active ingredient according to the invention can optionally be integrated into a cosmetic composition, in particular a composition comprising at least 0.5% by weight of said active ingredient. The active principle according to the invention is in fact preferentially used in compositions, in particular compositions comprising a cosmetically acceptable medium. These may be compositions in different galenic forms, suitable for topical application.
Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d’émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, ou gels aqueux. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l’aspect de lotion, crème, ou mousse.These compositions may be in the form of oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions (Water/Oil/Water or Oil/Water/Oil) which may optionally be microemulsions or nanoemulsions, or in the form of solutions, suspensions, hydrodispersions, or aqueous gels. They can be more or less fluid and have the appearance of lotion, cream, or foam.
Il peut s’agir de compositions comprenant au moins 0,5% en poids du principe actif selon l’invention. Ces compositions comprennent, outre l’actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d’inconfort inacceptables pour l’utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements.These may be compositions comprising at least 0.5% by weight of the active ingredient according to the invention. These compositions comprise, in addition to the active ingredient, a physiologically acceptable and preferably cosmetically acceptable medium, that is to say which does not cause unacceptable sensations of discomfort for the user such as redness, tightness or tingling.
Les compositions selon l’invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi :
- les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ;
- les cires, telles que l’ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d’abeille ou la cire de carnauba,
- les élastomères de silicone,
- les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu’ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères,
- les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires,
- les épaississants et/ou gélifiants,
- les humectants, tels que les polyols comme la glycérine,
- les colorants, les conservateurs, les charges,
- les tenseurs,
- les séquestrants,
- les parfums,
- et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.
- oils, which can be chosen in particular from silicone oils, linear or cyclic, volatile or non-volatile;
- waxes, such as ozokerite, polyethylene wax, beeswax or carnauba wax,
- silicone elastomers,
- surfactants, preferably emulsifiers, whether non-ionic, anionic, cationic or amphoteric,
- co-surfactants, such as linear fatty alcohols,
- thickeners and/or gelling agents,
- humectants, such as polyols like glycerin,
- colorings, preservatives, fillers,
- tensors,
- the sequestrants,
- the perfumes,
- and their mixtures, without this list being exhaustive.
Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le DictionnaireInternational Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbookpublié par lePersonal Care Product Council.Examples of such adjuvants are cited in particular in the International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook published by the Personal Care Product Council .
Bien entendu, l’homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l’adjonction envisagée.Of course, those skilled in the art will take care to choose any additional compounds, active or non-active, and their quantity, such that the advantageous properties of the mixture are not, or significantly not, altered by the planned addition.
Les compositions comprenant un principe actif selon l’invention sont notamment destinées à être utilisées pour améliorer la fonction barrière et l’hydratation de la peau.The compositions comprising an active ingredient according to the invention are intended in particular to be used to improve the barrier function and hydration of the skin.
Procédé d’extractionExtraction process
L’extrait constituant ou contenu dans le principe actif selon l’invention peut être obtenu par tout procédé comprenant au moins une étape d’extraction de la biomasse de la levure deMetschnikowia rubicolaet au moins une étape d’hydrolyse. Selon la présente invention, l’extraction de la biomasse de la levure ne consiste pas en la récupération du surnageant de la culture de la levure.The extract constituting or contained in the active principle according to the invention can be obtained by any process comprising at least one step of extracting the biomass of the yeast of Metschnikowia rubicola and at least one step of hydrolysis. According to the present invention, the extraction of the yeast biomass does not consist of the recovery of the supernatant of the yeast culture.
Préalablement au procédé d’obtention de l’extrait en tant que tel, il convient de produire la biomasse deMetschnikowia rubicola. Cette étape est réalisée selon le mode de culture des levures dans un milieu adapté à leur développement, par exemple un milieu de culture adapté, de manière classique pour l’homme de métier. A partir de la biomasse, une extraction des molécules actives, préférentiellement des sucres, est réalisée. L’extraction est réalisée par au moins une hydrolyse, selon tout moyen connu de l’homme du métier, préférentiellement par hydrolyse enzymatique.Prior to the process of obtaining the extract as such, it is appropriate to produce the biomass of Metschnikowia rubicola . This step is carried out according to the method of cultivating the yeasts in a medium adapted to their development, for example a suitable culture medium, in a conventional manner for those skilled in the art. From the biomass, an extraction of active molecules, preferably sugars, is carried out. The extraction is carried out by at least one hydrolysis, according to any means known to those skilled in the art, preferably by enzymatic hydrolysis.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, le principe actif selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- Culture de la biomasse deMetschnikowia rubicoladans un milieu de culture adapté à leur développement,
- Solubilisation à raison d’au moins 80 g/L de la biomasse deMetschnikowia rubicoladans l’eau,
- Au moins une hydrolyse enzymatique, préférentiellement au moins deux hydrolyses enzymatiques simultanées,
- Traitement permettant l’inactivation des activités enzymatiques, par exemple par traitement thermique de l'hydrolysat,
- Séparation de la phase soluble et insoluble, et récupération de la phase soluble,
- Tri moléculaire des molécules de la phase soluble, par tout moyen permettant le tri moléculaire, par exemple par ultrafiltration ou chromatographie ionique,
- Éventuellement, désodorisation ou décoloration, et
- Eventuellement, filtration et filtration stérilisante.
- Cultivation of Metschnikowia rubicola biomass in a culture medium adapted to their development,
- Solubilization at a rate of at least 80 g/L of the biomass of Metschnikowia rubicola in water,
- At least one enzymatic hydrolysis, preferably at least two simultaneous enzymatic hydrolyses,
- Treatment allowing the inactivation of enzymatic activities, for example by heat treatment of the hydrolyzate,
- Separation of the soluble and insoluble phase, and recovery of the soluble phase,
- Molecular sorting of molecules from the soluble phase, by any means allowing molecular sorting, for example by ultrafiltration or ion chromatography,
- Possibly, deodorization or discoloration, and
- Optionally, filtration and sterilizing filtration.
Une étape d’hydrolyse, préférentiellement au moins une hydrolyse enzymatique, et encore plus préférentiellement au moins deux hydrolyses enzymatiques simultanées peuvent être envisagées dans le procédé de préparation du principe actif selon l’invention.A hydrolysis step, preferably at least one enzymatic hydrolysis, and even more preferably at least two simultaneous enzymatic hydrolyses can be envisaged in the process for preparing the active ingredient according to the invention.
Le procédé peut éventuellement comprendre une étape de traitement thermique de l’extrait, en particulier pour éliminer les activités enzymatiques résiduelles.The process may optionally include a heat treatment step of the extract, in particular to eliminate residual enzymatic activities.
La séparation de la phase soluble et insoluble est réalisée par tout moyen connu de l’homme du métier, par exemple par centrifugation, filtration ou décantation. Préférentiellement la séparation des phases soluble et insoluble est réalisée pour récupérer la phase soluble contenant entre autres les sucres solubles, tels que les oligosaccharides et les polysaccharides et la fraction peptidique.The separation of the soluble and insoluble phase is carried out by any means known to those skilled in the art, for example by centrifugation, filtration or decantation. Preferably the separation of the soluble and insoluble phases is carried out to recover the soluble phase containing, among other things, the soluble sugars, such as oligosaccharides and polysaccharides and the peptide fraction.
Le procédé comprend une étape de filtration, préférentiellement par tri moléculaire adapté, par exemple part ultrafiltration ou chromatographie ionique.The process comprises a filtration step, preferably by suitable molecular sorting, for example ultrafiltration or ion chromatography.
Des étapes de décoloration ou désodorisation peuvent aussi être ajoutées.Bleaching or deodorization steps can also be added.
Le produit obtenu à ce stade peut éventuellement être encore concentré et/ou purifié, préférentiellement par des étapes d’ultrafiltrations successives à travers des filtres de porosité différentes, en conservant les filtrats à chaque étape et/ou par une méthode de type chromatographique.The product obtained at this stage can optionally be further concentrated and/or purified, preferably by successive ultrafiltration stages through filters of different porosity, preserving the filtrates at each stage and/or by a chromatographic type method.
Le produit obtenu après filtration, avant ou après concentration et filtration stérilisante, est un extrait deMetschnikowia rubicola, et constitue une première forme du principe actif selon l’invention, et se présente alors sous forme liquide.The product obtained after filtration, before or after concentration and sterilizing filtration, is an extract of Metschnikowia rubicola , and constitutes a first form of the active principle according to the invention, and is then in liquid form.
L’extrait obtenu peut ensuite être séché et associé ou non à un support, pour se présenter sous forme solide. Cette phase peut être réalisée par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- un support d’atomisation, de préférence la maltodextrine, est ajouté dans l’extrait deMetschnikowia rubicola, d’au plus 90% (en masse/volume) ;
- cette solution est ensuite concentrée sous vide ;
- une élimination des bactéries éventuellement présentes est réalisée par traitement thermique ;
- l’atomisation permet d’obtenir une poudre.
- an atomization support, preferably maltodextrin, is added to the extract of Metschnikowia rubicola , at most 90% (by mass/volume);
- this solution is then concentrated under vacuum;
- any bacteria present is eliminated by heat treatment;
- atomization produces a powder.
Les étapes des procédés décrits ci-avant, prises individuellement sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de matières premières naturelles et l’homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.The steps of the processes described above, taken individually, are usual in the field of extraction of active ingredients from natural raw materials and those skilled in the art are able to adjust the reaction parameters on the basis of their general knowledge. .
Utilisation cosmétiqueCosmetic use
Le principe actif selon l’invention est particulièrement d’intérêt pour renforcer/améliorer la fonction barrière de la peau et pour améliorer l’hydratation de la peau.The active ingredient according to the invention is of particular interest for strengthening/improving the barrier function of the skin and for improving the hydration of the skin.
L’invention vise ainsi une utilisation cosmétique, non thérapeutique, du principe actif selon l’invention pour ses effets cosmétiques, seul ou dans une composition, en particulier pour au moins un effet cosmétique hydratant et pour améliorer la fonction barrière cutanée.The invention thus aims at a cosmetic, non-therapeutic use of the active principle according to the invention for its cosmetic effects, alone or in a composition, in particular for at least one moisturizing cosmetic effect and to improve the skin barrier function.
Par utilisation non thérapeutique, on entend au sens de l’invention une utilisation cosmétique du principe actif selon l’invention ou d’une composition cosmétique le comprenant, destinée à des personnes saines non malades, en particulier à des personnes présentant une peau saine.For the purposes of the invention, non-therapeutic use means a cosmetic use of the active ingredient according to the invention or of a cosmetic composition comprising it, intended for healthy, non-sick people, in particular for people with healthy skin.
Préférentiellement le principe actif selon l’invention, seul ou dans une composition, vise à être utilisé pour un traitement cosmétique en application topique sur la peau. Aussi, l’utilisation cosmétique selon l’invention vise également l’utilisation d’une composition comprenant le principe actif selon l’invention.Preferably the active ingredient according to the invention, alone or in a composition, is intended to be used for a cosmetic treatment in topical application to the skin. Also, the cosmetic use according to the invention also aims at the use of a composition comprising the active principle according to the invention.
L’invention est à présent illustrée par des exemples non limitatifs de composition selon l’invention et par des résultats.The invention is now illustrated by non-limiting examples of composition according to the invention and by results.
Exemple 1 – Principe actif selon l’inventionExample 1 – Active principle according to the invention
Le principe actif de l’exemple 1 est obtenu à partir d’une levure de Metschnikowia rubicola. Le principe actif de l’exemple 1 est obtenu par le procédé suivant :
- Culture deMetschnikowia rubicoladans un milieu de culture adapté
- Solubilisation de la biomasse de la levureMetschnikowia rubicoladans l’eau, à raison de 80g/l,
- Au moins deux hydrolyses enzymatiques simultanées par des carbohydrases,
- Inactivation enzymatique par traitement thermique,
- Séparation des phases soluble et insoluble par décantation et récupération de la phase soluble,
- Purification par tri moléculaire, en particulier par ultrafiltration,
- Filtration, et filtration stérilisante.
- Cultivation of Metschnikowia rubicola in a suitable culture medium
- Solubilization of the biomass of the yeast Metschnikowia rubicola in water, at a rate of 80g/l,
- At least two simultaneous enzymatic hydrolysis by carbohydrases,
- Enzymatic inactivation by heat treatment,
- Separation of the soluble and insoluble phases by decantation and recovery of the soluble phase,
- Purification by molecular sorting, in particular by ultrafiltration,
- Filtration, and sterilizing filtration.
Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes :
- Teneur en Matières Sèches = 32 g/L
- Teneur en Sucres Totaux (selon la méthode de Dubois) = 15,4 g/L (48%, en poids par rapport à la matière sèche)
- Teneur en peptides (selon la méthode KJELDHAL) = 11,3 g/L (35,3%, en poids par rapport à la matière sèche)
- Liquide limpide, jaune clair, il présente une odeur faible.
- Dry Matter Content = 32 g/L
- Total Sugar Content (according to the Dubois method) = 15.4 g/L (48%, by weight relative to dry matter)
- Peptide content (according to the KJELDHAL method) = 11.3 g/L (35.3%, by weight relative to dry matter)
- Clear, light yellow liquid, it has a faint odor.
La fraction saccharidique du principe actif selon l’exemple 1 est composé de glucose et d’au moins 20% de mannose.The saccharide fraction of the active principle according to Example 1 is composed of glucose and at least 20% mannose.
ExempleExample 22 – Principe actif- Active ingredient selon l’according to' inventioninvention
Le principe actif de l’exemple 2 est obtenu à partir d’une levure deMetschnikowia rubicola. Le principe actif de l’exemple 2 est obtenu par le procédé suivant :
- Culture deMetschnikowia rubicoladans un milieu de culture adapté
- Solubilisation de la biomasse de la levureMetschnikowia rubicoladans l’eau, à raison de 90g/l,
- Hydrolyse enzymatique des protéines,
- Inactivation enzymatique,
- Séparation des phases soluble et insoluble par décantation et récupération de la phase soluble,
- Tri moléculaire, en particulier par ultrafiltration,
- Filtration, et filtration stérilisante.
- Cultivation of Metschnikowia rubicola in a suitable culture medium
- Solubilization of the biomass of the yeast Metschnikowia rubicola in water, at a rate of 90g/l,
- Enzymatic hydrolysis of proteins,
- Enzymatic inactivation,
- Separation of the soluble and insoluble phases by decantation and recovery of the soluble phase,
- Molecular sorting, in particular by ultrafiltration,
- Filtration, and sterilizing filtration.
Le principe actif obtenu possède les caractéristiques suivantes :
- Teneur en Matières Sèches = 24,6 g/L
- Teneur en Sucres Totaux = 6,1 g/L (24,8%, en poids par rapport à la matière sèche)
- Teneur en peptides (selon la méthode KJELDHAL) = 10,2 g/L (41,5%, en poids par rapport à la matière sèche)
- Teneur en cendres minérales = 8,3 g/L (33,7%, en poids par rapport à la matière sèche)
- Dry Matter Content = 24.6 g/L
- Total Sugar Content = 6.1 g/L (24.8%, by weight relative to dry matter)
- Peptide content (according to the KJELDHAL method) = 10.2 g/L (41.5%, by weight relative to dry matter)
- Mineral ash content = 8.3 g/L (33.7%, by weight relative to dry matter)
ExempleExample 33 – Composition selon l’invention– Composition according to the invention
Un exemple de formulation comprenant le principe actif selon l’invention sous forme d’un gel de jour est présenté dans le tableau 1 ci-après.An example of a formulation comprising the active ingredient according to the invention in the form of a day gel is presented in Table 1 below.
La composition se présente sous forme d’une émulsion fluide, blanche, sans odeur, brillante, avec une application aisée, un étalement doux et glissant.The composition is in the form of a fluid, white, odorless, shiny emulsion, with easy application, soft and slippery spreading.
La composition peut être obtenue comme suit :
- Mélanger A. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique.
- Mélanger B. Chauffer au bain-marie à 80°C sous agitation magnétique.
- A 80°C, émulsionner A dans B sous rotor stator à 1800 tr/min.
- A 30°C additionner C.
- Laisser sous agitation jusqu’à complet refroidissement.
- Mix A. Heat in a water bath to 80°C with magnetic stirring.
- Mix B. Heat in a water bath to 80°C with magnetic stirring.
- At 80°C, emulsify A in B under a stator rotor at 1800 rpm.
- At 30°C add C.
- Leave to stir until completely cooled.
Essais – Efficacité du principe actif selon l’invention sur la fonction barrière et l’hydratationTests – Effectiveness of the active ingredient according to the invention on barrier function and hydration
L’étudein vitroa été réalisée sur des kératinocytes humains normaux, cellules de l’épiderme, en culture monocouche avec ou sans traitement avec les principes actifs selon l’exemple 1 ou l’exemple 2 pendant 24h. Une analyse du profil transcriptomique par PCR quantitative en temps réel des gènes impliqués dans le métabolisme de l’épiderme, en particulier en lien avec la fonction barrière et l’hydratation, a été conduite.The in vitro study was carried out on normal human keratinocytes, cells of the epidermis, in monolayer culture with or without treatment with the active ingredients according to Example 1 or Example 2 for 24 hours. An analysis of the transcriptomic profile by real-time quantitative PCR of genes involved in epidermal metabolism, particularly in relation to barrier function and hydration, was conducted.
Les variations d’activité transcriptionnelle statistiquement significatives des gènes décrits ci-dessous entre les kératinocytes humains normaux témoins non traités et les kératinocytes humains normaux traités avec le principe actif selon l’exemple 1 ou l’exemple 2 sont présentés dans les tableaux 2 et 3 ci-après. Seules les valeurs de variation d’expression génique significativement supérieures à 1,5 (surexpression du gène) ou significativement inférieures à 0,75 (sous-expression du gène) sont reportées. Si aucune variation significative de l’expression génique n’est mesurée, alors aucune valeur n’est reportée dans les tableaux (/).The statistically significant variations in transcriptional activity of the genes described below between untreated control normal human keratinocytes and normal human keratinocytes treated with the active ingredient according to Example 1 or Example 2 are presented in Tables 2 and 3 below. Only gene expression variation values significantly greater than 1.5 (gene overexpression) or significantly less than 0.75 (gene underexpression) are reported. If no significant variation in gene expression is measured, then no value is reported in the tables (/).
Effet sur la fonction barrièreEffect on barrier function
L’inventeur a analysé l’expression de gènes impliqués dans le renforcement de la fonction barrière cutanée, à savoir :
- TGM1 (Transglutaminase 1) : code pour l’enzyme impliquée dans la formation de l'enveloppe cornée, une structure protéique rigide et insoluble qui entoure les kératinocytes en différenciation terminale et contribue à former une barrière protectrice entre le corps et son environnement.
- SPRR1B (Small Proline-Rich Protein 1B ) ou Cornifin : code pour une protéine qui est réticulée aux protéines de la membrane des kératinocytes et participe ainsi à la formation de l’enveloppe cornée.
- ZNF750 (Zinc Finger Protein 750) ou Epigenin : code pour un facteur de transcription impliqué dans l’activation des gènes de différenciation épidermique terminale.
- DSG1 (Desmoglein) : code pour une protéine impliquée dans la formation des desmosomes, des jonctions inter-kératinocytaires qui confèrent aux kératinocytes leur résistance et leur extensibilité. Ces jonctions jouent un rôle clef dans la cohésion de l’épiderme et sa fonction barrière physique.
- OCLN (Occludin) et CLDN1 (Claudin-1) : codent pour des protéines constitutives des jonctions serrées, qui assurent la cohésion entre les kératinocytes au niveau de la couche granuleuse et participent à la fonction barrière mécanique épidermique. Les jonctions serrées assurent aussi l’étanchéité de l’épiderme et préviennent la perte en eau.
- FABP5 (Fatty Acid Binding Protein 5) : code pour une protéine impliquée dans le métabolisme des lipides épidermiques, lipides qui jouent un rôle important dans la formation de la fonction barrière cutanée.
- PI3 (Peptidase Inhibitor 3) ou Elafin ou SKALP (Sin-derived anti-leukoproteinase) : code pour une protéine inhibitrice des protéinases, elle participe à la formation de l’enveloppe cornée. Elle est décrite également pour son une activité bactéricide et participe ainsi à la fonction barrière épidermique antimicrobienne.
- BIRC5 (baculoviral IAP repeat containing 5) ou Survivin : code pour une protéine régulatrice du cycle cellulaire, exprimée particulièrement dans les cellules souches kératinocytaires, elle participe au renouvellement de l’épiderme.
- TLR2 (Toll-like receptor 2) : code pour un récepteur transmembranaire qui permet aux kératinocytes de discriminer la présence de microorganismes commensaux des microorganismes transitoires et d’activer des voies de signalisation distinctes pour induire une réponse immune innée spécifique et adaptée, notamment antimicrobienne.
- TGM1 (Transglutaminase 1): codes for the enzyme involved in the formation of the stratum corneum, a rigid, insoluble protein structure that surrounds terminally differentiating keratinocytes and helps form a protective barrier between the body and its environment.
- SPRR1B (Small Proline-Rich Protein 1B) or Cornifin: codes for a protein which is cross-linked to keratinocyte membrane proteins and thus participates in the formation of the corneal envelope.
- ZNF750 (Zinc Finger Protein 750) or Epigenin: codes for a transcription factor involved in the activation of terminal epidermal differentiation genes.
- DSG1 (Desmoglein): codes for a protein involved in the formation of desmosomes, inter-keratinocyte junctions which give keratinocytes their resistance and extensibility. These junctions play a key role in the cohesion of the epidermis and its physical barrier function.
- OCLN (Occludin) and CLDN1 (Claudin-1): encode proteins constituting tight junctions, which ensure cohesion between keratinocytes at the granular layer and participate in the epidermal mechanical barrier function. The tight junctions also ensure the waterproofness of the epidermis and prevent water loss.
- FABP5 (Fatty Acid Binding Protein 5): codes for a protein involved in the metabolism of epidermal lipids, lipids which play an important role in the formation of the skin barrier function.
- PI3 (Peptidase Inhibitor 3) or Elafin or SKALP (Sin-derived anti-leukoproteinase): codes for a proteinase inhibitor protein, it participates in the formation of the horny envelope. It is also described for its bactericidal activity and thus participates in the antimicrobial epidermal barrier function.
- BIRC5 (baculoviral IAP repeat containing 5) or Survivin: codes for a cell cycle regulatory protein, expressed particularly in keratinocyte stem cells, it participates in the renewal of the epidermis.
- TLR2 (Toll-like receptor 2): codes for a transmembrane receptor which allows keratinocytes to discriminate the presence of commensal microorganisms from transient microorganisms and to activate distinct signaling pathways to induce a specific and adapted innate immune response, in particular antimicrobial.
Les résultats de l’expression des gènes décrits ci-dessus sont présentés dans le tableau 2 ci-après.The results of the expression of the genes described above are presented in Table 2 below.
Le principe actif selon l’exemple 1 augmente significativement l’expression des gènes TGM1, SPRR1B, ZNF750, DSG1, OCLN, CLDN1, FABP5, PI3, BIRC5 et TLR2, gènes essentiels pour renforcer la fonction barrière épidermique mécanique et immunitaire. En particulier, le principe actif selon l’exemple 1 module l’expression des gènes TGM1, ZNF750, OCLN, CLDN1, FABP5 et BIRC5 que le principe actif selon l’exemple 2 ne module pas.The active ingredient according to Example 1 significantly increases the expression of the TGM1, SPRR1B, ZNF750, DSG1, OCLN, CLDN1, FABP5, PI3, BIRC5 and TLR2 genes, essential genes for strengthening the mechanical and immune epidermal barrier function. In particular, the active principle according to Example 1 modulates the expression of the TGM1, ZNF750, OCLN, CLDN1, FABP5 and BIRC5 genes which the active principle according to Example 2 does not modulate.
Effet sur l’hydratationEffect on hydration
L’inventeur a poursuivi ses travaux en analysant l’expression de gènes impliqués dans l’hydratation cutanée, à savoir :
- HAS3 (Hyaluronan Synthase 3) : code pour une enzyme intervenant dans la synthèse de l’acide hyaluronique, une molécule à fort pouvoir hygroscopique qui retient l’eau dans l’épiderme.
- AQP3 (Aquaporin 3) et AQP9 (Aquaporin 9) : codent pour des protéines transmembranaires des kératinocytes impliquées dans le transport sélectif de l’eau, du glycérol ou de l’urée à travers l’épiderme. Ces protéines jouent un rôle majeur dans l’hydratation cutanée.
- HAS3 (Hyaluronan Synthase 3): codes for an enzyme involved in the synthesis of hyaluronic acid, a molecule with strong hygroscopic power which retains water in the epidermis.
- AQP3 (Aquaporin 3) and AQP9 (Aquaporin 9): encode keratinocyte transmembrane proteins involved in the selective transport of water, glycerol or urea across the epidermis. These proteins play a major role in skin hydration.
Les résultats de l’expression des gènes décrits ci-dessus sont présentés dans le tableau 3 ci-après.The results of the expression of the genes described above are presented in Table 3 below.
Le principe actif selon l’exemple 1 augmente significativement l’expression des gènes HAS3, AQP3 et AQP9 et améliore ainsi l’hydratation cutanée. En particulier, le principe actif selon l’exemple 1 augmente significativement l’expression des gènes HAS3 et AQP3 que le principe actif selon l’exemple 2 ne module pas.
The active ingredient according to Example 1 significantly increases the expression of the HAS3, AQP3 and AQP9 genes and thus improves skin hydration. In particular, the active principle according to example 1 significantly increases the expression of the HAS3 and AQP3 genes which the active principle according to example 2 does not modulate.
Claims (11)
- Solubilisation de la biomasse deMetschnikowia rubicoladans l'eau a raison d’au moins 80 g/I,
- Au moins une hydrolyse enzymatique,
- Inactivation enzymatique,
- Séparation des phases soluble et insoluble par décantation, et récupération de la phase soluble,
- Tri moléculaire,
- Éventuellement, désodorisation ou décoloration,
- Éventuellement, filtration et filtration stérilisante.
- Solubilization of the biomass of Metschnikowia rubicola in water at a rate of at least 80 g/l,
- At least one enzymatic hydrolysis,
- Enzymatic inactivation,
- Separation of the soluble and insoluble phases by decantation, and recovery of the soluble phase,
- Molecular sorting,
- Possibly deodorization or discoloration,
- Optionally, filtration and sterilizing filtration.
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