FR3094215A1 - Using dianhydrohexitol to eliminate the cosmetic effects of acne - Google Patents
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Abstract
La présente demande se situe dans le domaine de la cosmétique, plus précisément dans le domaine des actifs cosmétiques antimicrobiens et/ou bactériostatique et/ou bactéricide, préférentiellement sur les souches bactériennes et/ou fongiques présentes sur l’épiderme humain. Il est proposé une utilisation de dianhydrohexitol, préférentiellement d’isosorbide, pour réduire le nombre de souches bactériennes ou fongiques présentes sur la peau, notamment dans le microbiome cutané, responsables de l’acné.The present application is in the field of cosmetics, more precisely in the field of cosmetic antimicrobial and / or bacteriostatic and / or bactericidal active ingredients, preferably on bacterial and / or fungal strains present on the human epidermis. It is proposed to use dianhydrohexitol, preferably isosorbide, to reduce the number of bacterial or fungal strains present on the skin, in particular in the skin microbiome, responsible for acne.
Description
La présente demande se situe dans le domaine de la cosmétique, plus précisément dans le domaine des actifs cosmétiques antimicrobiens et/ou bactériostatiques et/ou bactéricides et/ou antifongiques, préférentiellement sur les souches bactériennes et/ou fongiques présentes sur l’épiderme humain. Préférentiellement, il est proposé une utilisation d’isosorbide pour réduire le nombre de souches bactériennes ou fongiques présentes sur la peau, notamment dans le microbiome cutané, responsables de l’acné ; ou pour augmenter l’activité de biocides déjà employés à cet effet.The present application is in the field of cosmetics, more specifically in the field of antimicrobial and/or bacteriostatic and/or bactericidal and/or antifungal cosmetic active ingredients, preferably on bacterial and/or fungal strains present on the human epidermis. Preferably, the use of isosorbide is proposed to reduce the number of bacterial or fungal strains present on the skin, in particular in the cutaneous microbiome, responsible for acne; or to increase the activity of biocides already used for this purpose.
Dans le brevet US9295626 de Pilz et al., une méthode de conservation des préparations cosmétiques, dermatologiques et pharmaceutiques par l’utilisation de composés bactéricides à base de monoester et/ou diester d’isosorbide est dévoilée. Ce brevet présente une concentration minimale inhibitrice pour l’isosorbide égale à 10 % sur de nombreuses souches (col.27, tableau 2), dont notamment les souches suivantes que l’on peut retrouver dans le microbiome cutané :Aspergillus brasiliensis , Candida albicans , Staphylococcus aureus. In patent US9295626 from Pilz et al., a method of preserving cosmetic, dermatological and pharmaceutical preparations by the use of bactericidal compounds based on isosorbide monoester and/or diester is disclosed. This patent presents a minimum inhibitory concentration for isosorbide equal to 10% on many strains (col.27, table 2), including in particular the following strains that can be found in the skin microbiome: Aspergillus brasiliensis , Candida albicans , Staphylococcus aureus.
Le brevet US999300 de Stoer et al. divulgue également l’utilisation de dérivés d’isosorbide, ici des éthers, en tant qu’agent bactéricide pour préserver les compositions cosmétiques, notamment en inhibant la croissance d’une multitude de souche bactériennes, dont Propionobacterium acnes.US999300 to Stoer et al. also discloses the use of isosorbide derivatives, here ethers, as a bactericidal agent to preserve cosmetic compositions, in particular by inhibiting the growth of a multitude of bacterial strains, including Propionobacterium acnes.
Dans les préparations pharmaceutiques de traitement de l’acné du brevet US6433024 de Popp et al., l’isosorbide ou ses dérivés alkylés, sont mentionnés comme agent hydratant pour limiter l’irritation induite par l’actif anti-acné qu’est le peroxide de benzoyle. Seul le diméthylisosorbide est exemplifié dans des formulations topiques, et uniquement en tant qu’agent hydratant, car le peroxyde de benzoyle est l’actif toujours utilisé.In the pharmaceutical preparations for the treatment of acne of patent US6433024 from Popp et al., isosorbide or its alkylated derivatives are mentioned as a moisturizing agent to limit the irritation induced by the anti-acne active ingredient which is peroxide. of benzoyl. Only dimethylisosorbide is exemplified in topical formulations, and only as a moisturizing agent, as benzoyl peroxide is the active always used.
La solution apportée par la présente invention permet de résoudre les problèmes posés par une solution connue qu’est l’acide salicylique ou le peroxyde de benzoyle, qui ont pour inconvénients majeurs de provoquer l’irritation de l’épiderme, ou qui présente une certaine toxicité récemment découverte.The solution provided by the present invention makes it possible to solve the problems posed by a known solution which is salicylic acid or benzoyl peroxide, which have the major disadvantages of causing irritation of the epidermis, or which has a certain newly discovered toxicity.
Problème techniqueTechnical problem
La peau humaine est colonisée par une flore bactérienne résidente, qui constitue le microbiome cutané. Bien que cette flore soit la plupart du temps non pathogène, il peut y avoir des situations anormales où elle le devient. Une première situation anormale est celle d’une contamination du microbiome cutané par un microorganisme extérieur pathogène, par contact avec un environnement contaminé. Une seconde situation anormale est celle de l’apparition d’un déséquilibre dans les interactions entre les microorganismes constitutifs du microbiome cutané, qui résulte en la prolifération d’un microorganisme au détriment des autres microorganismes. Une telle prolifération peut être généralisée sur une grande surface de la peau, ou peut-être plus localisée, par exemple dans les zones de la peau plus riches en eau et plus chaudes, ou par exemple sur le visage ou scalp en raison de la présence de réserves nutritives pour lesdits microorganismes, tels que les triglycérides localisés dans les glandes à la base des cheveux ou des poils. En-dehors des conséquences potentiellement néfastes pour la santé de la peau ou de l’individu, ces situations anormales provoquent aussi des désagréments d’ordre cosmétique, notamment visuels, tactiles, ou olfactifs, qui peuvent nuire au confort de l’individu ou à son image, et ainsi perturber ou dégrader sa vie sociale.Human skin is colonized by a resident bacterial flora, which constitutes the skin microbiome. Although this flora is mostly non-pathogenic, there may be abnormal situations where it becomes so. A first abnormal situation is that of contamination of the skin microbiome by a pathogenic external microorganism, through contact with a contaminated environment. A second abnormal situation is that of the appearance of an imbalance in the interactions between the microorganisms that make up the skin microbiome, which results in the proliferation of one microorganism to the detriment of other microorganisms. Such proliferation may be generalized over a large area of the skin, or may be more localized, for example in areas of the skin richer in water and warmer, or for example on the face or scalp due to the presence nutrient reserves for said microorganisms, such as triglycerides located in the glands at the base of the hair or body hair. Apart from the potentially harmful consequences for the health of the skin or the individual, these abnormal situations also cause cosmetic inconveniences, in particular visual, tactile, or olfactory, which can harm the comfort of the individual or his image, and thus disturb or degrade his social life.
Le micro-organisme bactérienPropionobacterium acnes, aujourd’hui aussi appeléCutibacterium acnes, est responsable de l’acné. L’acné est un trouble de la peau caractérisé par une sécrétion excessive de sébum par les glandes sébacées. Le sébum atteint la surface de la peau au travers du conduit du follicule pileux. La présence excessive de sébum bloque le passage du conduit du follicule pileux. Cela provoque un épaississement du sébum, qui forme alors un comédon (point noir, ou point blanc). Ce comédon est contaminé par le microbiome cutané, dont notamment la bactériePropionobacterium acnes. Cette dernière croît et se multiplie dans le sébum accumulé dans le comédon. Le sébum est en effet une source nutritionnelle pour cette bactérie, qui relargue alors des métabolites dans le pore de la peau. Ces produits chimiques mettent en alerte et attirent les globules blancs du sang, ce qui conduit à une inflammation, visible par une rougeur par exemple au niveau des comédons, et ressentie par des démangeaisons cutanées, plus particulièrement localisées sur les comédons d’acné.The bacterial microorganism Propionobacterium acnes , now also called Cutibacterium acnes , is responsible for acne. Acne is a skin disorder characterized by excessive secretion of sebum by the sebaceous glands. Sebum reaches the surface of the skin through the hair follicle duct. The excessive presence of sebum blocks the passage of the hair follicle duct. This causes a thickening of the sebum, which then forms a comedone (blackhead, or whitehead). This comedo is contaminated by the skin microbiome, including the bacteria Propionobacterium acnes . The latter grows and multiplies in the sebum accumulated in the comedo. Sebum is indeed a nutritional source for this bacterium, which then releases metabolites into the pores of the skin. These chemicals alert and attract white blood cells, which leads to inflammation, visible by redness for example in the comedones, and felt by skin itching, more particularly localized on the comedones of acne.
L’inflammation peut endommager les cellules productrices de collagène. Une baisse de la production de collagène peut provoquer un amincissement de la peau, ce qui provoque des cicatrices creuses (aussi appelées cicatrices déprimées). Parfois, l’inflammation induit une augmentation de la production de collagène, ce qui provoque un épaississement des cicatrices. La présente invention permet d’améliorer la structure des cicatrices tout en évitant les rougeurs et démangeaisons.Inflammation can damage collagen-producing cells. A drop in collagen production can cause thinning of the skin, which causes sunken scars (also called sunken scars). Sometimes the inflammation induces an increase in the production of collagen, which causes the scars to thicken. The present invention makes it possible to improve the structure of scars while avoiding redness and itching.
Il y a de nos jours un besoin accru des consommateurs d’avoir des produits d’origine naturelle. L’utilisation selon l’invention répond à ce besoin, en proposant d’utiliser au moins dianhydrohexitol, car les dianhydrohexitols sont bien des molécules d’origine naturelle, produits à partir d’amidon d’origine céréalière par exemple.There is nowadays an increased need of consumers to have products of natural origin. The use according to the invention meets this need, by proposing to use at least dianhydrohexitol, because dianhydrohexitols are indeed molecules of natural origin, produced from starch of cereal origin for example.
Il est du mérite de la demanderesse d’avoir découvert, de manière inattendue, que les dianhydrohexitols non dérivés, préférentiellement l’isosorbide, ont des effets antimicrobiens, et/ou bactéricides et/ou bactériostatiques, et/ou antifongiques, sur des souches microbiennes responsables de l’acné.It is to the credit of the applicant to have discovered, unexpectedly, that non-derived dianhydrohexitols, preferably isosorbide, have antimicrobial, and/or bactericidal and/or bacteriostatic, and/or antifungal effects on microbial strains responsible for acne.
L’invention a plus particulièrement attrait à l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’au moins un dianhydrohexitol pour favoriser l’élimination des effets cosmétiques de l’acné. Préférentiellement le dianhydrohexitol est l’isosorbide. L’utilisation selon l’invention permet d’inhiber la croissance de souches bactériennes et/ou fongiques pathogènes impliquées dans l’acné, sur l’épiderme humain, jusqu’à la disparition de ces souches de l’épiderme humain.The invention more particularly appeals to the non-therapeutic cosmetic use of at least one dianhydrohexitol to promote the elimination of the cosmetic effects of acne. Preferably the dianhydrohexitol is isosorbide. The use according to the invention makes it possible to inhibit the growth of pathogenic bacterial and/or fungal strains involved in acne, on the human epidermis, until the disappearance of these strains from the human epidermis.
Selon un autre aspect, il est proposé une utilisation de l’isosorbide pour réduire ou éliminer les souches dePropionobacterium acnes(aussiappelé Cutibacterium acnes )du microbiome humain, et aussi atténuer ou de faire disparaître les symptômes cosmétiques de l’acné, notamment les rougeurs, les irritations et les démangeaisons.According to another aspect, there is proposed a use of isosorbide for reducing or eliminating strains of Propionobacterium acnes (also called Cutibacterium acnes ) from the human microbiome, and also attenuating or eliminating the cosmetic symptoms of acne, in particular redness, irritation and itching.
Utilisation deThe use of dianhydrohexitoldianhydrohexitol en traitement de l’acnéin the treatment of acne
La présente invention concerne l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’au moins un dianhydrohexitol pour favoriser l’élimination des effets cosmétiques de l’acné. Les effets cométiques de l’acné étant choisis parmi l’inflammation, ou les démangeaisons. L’invention concerne aussi le dianhydrohexitol pour son utilisation dans le traitement de l’acné.The present invention relates to the non-therapeutic cosmetic use of at least one dianhydrohexitol to promote the elimination of the cosmetic effects of acne. The cometic effects of acne being chosen from inflammation, or itching. The invention also relates to dianhydrohexitol for its use in the treatment of acne.
Préférentiellement, l’utilisation selon l’invention permet de réduire ou éliminer l’inflammation, visible par une rougeur par exemple au niveau des comédons d’acné, et/ou réduire ou éliminer les démangeaisons cutanées localisées sur les comédons d’acné.Preferably, the use according to the invention makes it possible to reduce or eliminate the inflammation, visible by a redness for example at the level of the acne comedones, and/or reduce or eliminate the itching of the skin localized on the acne comedones.
Selon un mode de réalisation préférentiel, le dianhydrohexitol est choisi parmi l’isosorbide, l’isomannide, l’isoidide, préférentiellement l’isosorbide.According to a preferred embodiment, the dianhydrohexitol is chosen from isosorbide, isomannide, isoidide, preferentially isosorbide.
De manière additionnelle, la concentration de dianhydrohexitol appliqué sur la peau est d’au moins 1 mg/cm2, préférentiellement d’au moins 25 mg/cm2, et tout préférentiellement d’au moins 50 mg/cm2.Additionally, the concentration of dianhydrohexitol applied to the skin is at least 1 mg/cm 2 , preferably at least 25 mg/cm 2 , and most preferably at least 50 mg/cm 2 .
Selon un mode de réalisation le dianhydrohexitol présente une action antimicrobienne. Plus particulièrement, le dianhydrohexitol présente une action bactériostatique ou/et bactéricide et/ou antifongique, en réduisant ou en empêchant le développement, ou en éliminant la présence de souches bactériennes et/ou fongiques impliquées dans l’acné, préférentiellement la présence de souches bactériennes. De manière préférentielle, la souche bactérienne est choisie parmi les bactéries propioniques commensables, dont le genre est couramment appeléPropionobacterium spp, préférentiellement la souche bactérienne estPropionobacterium acnes.According to one embodiment, the dianhydrohexitol exhibits an antimicrobial action. More particularly, dianhydrohexitol exhibits a bacteriostatic and/or bactericidal and/or antifungal action, by reducing or preventing the development, or by eliminating the presence of bacterial and/or fungal strains involved in acne, preferentially the presence of bacterial strains . Preferably, the bacterial strain is chosen from commensable propionic bacteria, the genus of which is commonly called Propionobacterium spp , preferably the bacterial strain is Propionobacterium acnes .
Selon un autre mode de réalisation de l’utilisation selon l’invention, le dianhydrohexitol est un agent de lutte contre les effets indésirables sur la peau des bactéries propioniques commensales, préférentiellement du genrePropionobacterium spp, et très préférentiellement dePropionobacterium acnes.According to another embodiment of the use according to the invention, dianhydrohexitol is an agent for combating the undesirable effects on the skin of commensal propionic bacteria, preferentially of the genus Propionobacterium spp , and very preferentially of Propionobacterium acnes .
Selon une variante de l’utilisation selon l’invention, l’utilisation du au moins un dianhydrohexitol peut se faire en combinaison avec au moins un autre actif cosmétique ou dermatologique ayant la même activité ou fonction.According to a variant of the use according to the invention, the use of at least one dianhydrohexitol can be done in combination with at least one other cosmetic or dermatological active ingredient having the same activity or function.
DianhydrohexitolDianhydrohexitol
La solution aqueuse en question peut contenir un dianhydrohexitol seul, comme elle peut en contenir plusieurs. Ces dianhydrohexitols (1,4 - 3,6-dianhydrohexitols) sont l'isosorbide (1,4-3,6-dianhydrosorbitol), l'isomannide (1,4-3,6-dianhydromannitol), l'isoidide (1,4-3,6-dianhydroiditol) et les mélanges d'au moins deux de ces produits. De préférence, la solution aqueuse ne contient qu'un seul dianhydrohexitol qui est l'isosorbide.The aqueous solution in question may contain a single dianhydrohexitol, as it may contain several. These dianhydrohexitols (1,4 - 3,6-dianhydrohexitols) are isosorbide (1,4-3,6-dianhydrosorbitol), isomannide (1,4-3,6-dianhydromannitol), isoidide (1, 4-3,6-dianhydroiditol) and mixtures of at least two of these products. Preferably, the aqueous solution contains only one dianhydrohexitol which is isosorbide.
A cet égard, la Demanderesse indique que généralement, les dianhydrohexitols sont synthétisés en présence d'eau (ou de l'eau est générée au cours de leur synthèse) : en récupérant ledit dianhydrohexitol dans ce milieu réactionnel, on dispose immédiatement d'une composition sous forme de solution aqueuse de dianhydrohexitol utilisable selon l'invention. Les solutions de dianhydrohexitols peuvent notamment être obtenues selon les procédés décrits dans les demandes de brevet précitées EP 1 287 000 et WO 03 / 043959. On peut choisir de conserver tout ou partie de l'eau utilisée lors de la préparation du dianhydrohexitol ou d'éliminer en totalité l'eau pour obtenir un produit sous forme solide qu'on remettra en solution aqueuse par simple ajout d'eau, ce qui constitue une autre possibilité pour préparer une solution aqueuse de dianhydrohexitol utilisable selon l'invention.In this respect, the Applicant indicates that generally, dianhydrohexitols are synthesized in the presence of water (or water is generated during their synthesis): by recovering said dianhydrohexitol in this reaction medium, one immediately has a composition in the form of an aqueous solution of dianhydrohexitol which can be used according to the invention. The solutions of dianhydrohexitols can in particular be obtained according to the methods described in the aforementioned patent applications EP 1 287 000 and WO 03/043959. It is possible to choose to retain all or part of the water used during the preparation of the dianhydrohexitol or to completely eliminate the water to obtain a product in solid form which will be put back into aqueous solution by simply adding water, which constitutes another possibility for preparing an aqueous solution of dianhydrohexitol which can be used according to the invention.
La demanderesse précise que le terme « 1,4-3,6-dianhydrohexitol » n’inclut pas les dérivés de 1,4-3,6-dianhydrohexitol, notamment tels que les éthers ou esters de 1,4-3,6-dianhydrohexitol.The applicant specifies that the term "1,4-3,6-dianhydrohexitol" does not include derivatives of 1,4-3,6-dianhydrohexitol, in particular such as ethers or esters of 1,4-3,6- dianhydrohexitol.
Préparation cosmétique ou dermatologiqueCosmetic or dermatological preparation
Par « préparation cosmétique ou dermatologique », la demanderesse entend toute composition destinée à être mise en contact avec la peau, humaine ou animale.By “cosmetic or dermatological preparation”, the applicant means any composition intended to be brought into contact with the skin, human or animal.
La préparation cosmétique ou dermatologique selon l’invention comprend comme agent actif de traitement non thérapeutique de l’acné, au moins un dianhydrohexitol, préférentiellement choisi parmi l’isosorbide, l’isomannide, l’isoidide, préférentiellement est l’isosorbideThe cosmetic or dermatological preparation according to the invention comprises, as active agent for the non-therapeutic treatment of acne, at least one dianhydrohexitol, preferentially chosen from isosorbide, isomannide, isoidide, preferentially is isosorbide
Selon un mode de réalisation préférentiel, la préparation cosmétique ou dermatologique selon l’invention comprend de 0,1 % à 50 % en poids de dianhydrohexitol, préférentiellement de 0,5 à 25 %, plus préférentiellement de 1 % à 25 %, encore plus préférentiellement de 2 % à 15 %, et tout préférentiellement de 5 % à 9 %.According to a preferred embodiment, the cosmetic or dermatological preparation according to the invention comprises from 0.1% to 50% by weight of dianhydrohexitol, preferably from 0.5 to 25%, more preferably from 1% to 25%, even more preferably from 2% to 15%, and very preferably from 5% to 9%.
Selon un mode de réalisation très préférentiel, la préparation cosmétique ou dermatologique contient comme seul agent antimicrobien et/ou bactéricide et/ou bactériostatique et/ou antifongique, au moins un dianhydrohexitol, préférentiellement choisi parmi l’isosorbide, l’isomannide, l’isoidide, préférentiellement est l’isosorbide.According to a very preferential embodiment, the cosmetic or dermatological preparation contains, as sole antimicrobial and/or bactericidal and/or bacteriostatic and/or antifungal agent, at least one dianhydrohexitol, preferentially chosen from isosorbide, isomannide, isoidide , preferably is isosorbide.
La préparation cosmétique ou dermatologique selon l’invention permet de réduire ou éliminer les rougeurs et/ou les démangeaisons dues à l’acné.The cosmetic or dermatological preparation according to the invention makes it possible to reduce or eliminate the redness and/or the itching due to acne.
La préparation cosmétique peut être un produit pour la peau, un produit pour les cheveux, un maquillage, ou un produit d’hygiène.The cosmetic preparation can be a product for the skin, a product for the hair, a make-up, or a hygiene product.
Parmi les produits de soin pour la peau, la préparation cosmétique selon l’invention peut être choisie parmi les crèmes de jour, les crèmes solaires, les crèmes après-soleil, les autobronzants, les masques. Parmi les produits de soin capillaires, la préparation cosmétique selon l’invention est préférentiellement choisie parmi les shampoings, les après-shampoings (crèmes, masques, lotions), les produits de coiffage (spray, gels, cires), les produits de coloration. Parmi les produits de maquillage, la préparation cosmétique selon l’invention est préférentiellement choisie parmi les fonds de teints, les fards à paupières. Parmi les produits d’hygiène, la préparation cosmétique selon l’invention est préférentiellement choisie parmi les gels lavant, les gels douches, les lingettes nettoyantes ou démaquillantes, les solutions ou gels hydroalcooliques, les savons, les déodorants, les anti-transpirants, les sprays pour le corps.Among the skin care products, the cosmetic preparation according to the invention can be chosen from day creams, sun creams, after-sun creams, self-tanners, masks. Among the hair care products, the cosmetic preparation according to the invention is preferably chosen from shampoos, conditioners (creams, masks, lotions), styling products (spray, gels, waxes), coloring products. Among the make-up products, the cosmetic preparation according to the invention is preferably chosen from foundations and eye shadows. Among the hygiene products, the cosmetic preparation according to the invention is preferably chosen from washing gels, shower gels, cleansing or makeup-removing wipes, hydroalcoholic solutions or gels, soaps, deodorants, antiperspirants, body sprays.
La préparation cosmétique ou dermatologique peut notamment être choisie dans les crèmes ou lotions anti-acné.The cosmetic or dermatological preparation can in particular be chosen from anti-acne creams or lotions.
Méthode de traitement non thérapeutiqueNon-therapeutic treatment method
L’invention propose une méthode cosmétique non thérapeutique de soin de la peau sujette à l’acné, qui comprend les étapes :
- nettoyage de la peau,
- application sur la peau d’une préparation cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un dianhydrohexitol, préférentiellement l’isosorbide, avant, pendant ou après l’apparition des effets cosmétiques de l’acné, pendant une durée d’au moins 20 minutes, préférentiellement d’au moins 2 heures, et tout préférentiellement d’au moins 6 heures,
- le retrait de la dite préparation.The invention provides a non-therapeutic cosmetic method for caring for acne-prone skin, which comprises the steps:
- skin cleansing,
- application to the skin of a cosmetic or dermatological preparation comprising at least one dianhydrohexitol, preferably isosorbide, before, during or after the appearance of the cosmetic effects of acne, for a period of at least 20 minutes, preferably at least 2 hours, and most preferably at least 6 hours,
- the withdrawal of said preparation.
MM esures in-vitro de l’effet de l’in vitro measurements of the effect of isosorbideisosorbide sur des souches microbienneson microbial strains
Les échantillons sont préparés en conditions stériles et déposés dans des microplaques (puits de 2ml) selon les concentrations ci-dessous. Deux témoins d'analyse ont été réalisés :
– un témoin positif correspondant à du Phenonip® 0,5%;
– un témoin négatif constitué de Sérum physiologique 0,85%.The samples are prepared under sterile conditions and placed in microplates (2ml wells) according to the concentrations below. Two analysis controls were carried out:
– a positive control corresponding to Phenonip® 0.5%;
– a negative control consisting of 0.85% physiological serum.
Échantillons et témoins sont contaminés par une souche bactérienne Propionobacterium acnes à raison d'environ 1,43.105 à 4,15.105 unités formant colonies par millilitre, noté ufc/ml. A l'issue de la contamination, les échantillons sont soigneusement mélangés par cycles d'aspirations – refoulements afin d'assurer une répartition homogène du micro-organisme. L'ensemble est incubé à 22°C pendant 28 jours.Samples and controls are contaminated with a Propionobacterium acnes bacterial strain at a rate of approximately 1.43.105 to 4.15.105 colony-forming units per millilitre, denoted cfu/ml. At the end of the contamination, the samples are carefully mixed by cycles of aspiration – repression in order to ensure a homogeneous distribution of the micro-organism. The whole is incubated at 22° C. for 28 days.
Des prélèvements et dénombrements de la population microbienne sont effectués à 24 heures, 7, 14, 21 et 28 jours pour la souche bactériennePropionobacterium acnes. Les échantillons contaminés sont prélevés puis déposés en dilutions sériées dans des plaques de microtitration, en présence de milieu de culture, qui est une solution saline à 0,85% en chlorure de sodium, et d'un réactif révélateur de l'activité déshydrogénase, qui est le chlorure de 2,3,5-triphenyltetrazolium (noté TTC). Les résultats sont présentés dans les pages suivantes avec l'évolution de la population microbienne au cours des 28 jours d'étude, pour la souche microbienne testée.Samples and counts of the microbial population are carried out at 24 hours, 7, 14, 21 and 28 days for the bacterial strain Propionobacterium acnes . The contaminated samples are taken and then deposited in serial dilutions in microtiter plates, in the presence of culture medium, which is a 0.85% saline solution in sodium chloride, and a reagent revealing the dehydrogenase activity, which is 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (denoted TTC). The results are presented in the following pages with the evolution of the microbial population during the 28 days of study, for the microbial strain tested.
Les mesures de populations microbiennes dans les prélèvements faits à chaque temps, sont réalisées selon la méthode de microtitration suivante, pour un prélèvement. Dans les 96 puits de volume 250 µL d’une plaque de microtitration, 20 µL du prélèvement sont dilués d’un facteur 10 par dispersion dans 180 µL de bouillon Letheen (Difco, ref 268110) contenant 1,5% de Tween 80 (Sigma, ref P1754) and le TTC (Sigma, ref T8877). La microplaque est incubée 48 heures à 32,5°C, et la croissance des microorganismes est suivie par le changement de couleur, d’incolore à rouge/rose. La dilution réciproque la plus élevée indiquant une croissance permet la détermination du nombre de log de chaque microorganisme à chaque temps.The measurements of microbial populations in the samples taken at each time are carried out according to the following microtitration method, for a sample. In the 96 wells of 250 µL volume of a microtiter plate, 20 µL of the sample is diluted by a factor of 10 by dispersion in 180 µL of Letheen broth (Difco, ref 268110) containing 1.5% of Tween 80 (Sigma , ref P1754) and the TTC (Sigma, ref T8877). The microplate is incubated for 48 hours at 32.5°C, and the growth of the microorganisms is followed by the color change, from colorless to red/pink. The highest reciprocal dilution indicating growth allows the determination of the log number of each microorganism at each time.
Les mesures de populations microbiennes réalisées à chaque temps de prélèvement, sont exprimées en unités formant colonies/ml.The measurements of microbial populations carried out at each sampling time are expressed in colony-forming units/ml.
Après 24 heures, aucune souche formant colonie n’est observée : l’isosorbide a permis de tuer la totalité de l’inoculum. L’isosorbide est un bactéricide de la souchePropionobacterium acnes.After 24 hours, no strain forming a colony is observed: the isosorbide made it possible to kill all of the inoculum. Isosorbide is a bactericide of the Propionobacterium acnes strain.
L’invention ne se limite pas aux exemples décrits ci-avant, seulement à titre d’exemple, mais elle englobe toutes les variantes que pourra envisager l’homme de l’art dans le cadre de la protection recherchée.The invention is not limited to the examples described above, only by way of example, but it encompasses all the variants that a person skilled in the art may consider in the context of the protection sought.
Claims (5)
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