FR3067933A1 - Modulateurs de l’opsine 3 dans la modulation de la pigmentation de la peau - Google Patents

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Abstract

Utilisation cosmétique d'au moins un composé apte à moduler l'expression et/ou l'activité biologique de l'opsine 3, à titre d'agent actif pour moduler la pigmentation de la peau ; composition comprenant ledit composé ; procédé de traitement cosmétique comprenant l'application sur la peau de ladite composition et procédé de criblage de nouveaux composés aptes à moduler la pigmentation de la peau.

Description

Modulateurs de l’opsine 3 dans la modulation de la pigmentation de la peau
La présente invention concerne l’identification et l’utilisation de modulateurs de l’opsine 3, nouvelle cible cosmétique impliquée dans la modulation de la pigmentation de la peau.
Plus précisément, la présente invention concerne l’utilisation cosmétique d’au moins un composé apte à moduler l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3, à titre d’agent actif pour moduler la pigmentation de la peau ; la composition cosmétique comprenant ledit composé ainsi que le procédé de traitement cosmétique comprenant l’application de ladite composition sur la peau.
La présente invention concerne en outre le procédé de criblage de nouveaux composés actifs aptes à moduler la pigmentation de la peau.
Par « la peau», on entend l’ensemble de la peau du visage et/ou du corps, incluant le cuir chevelu et les muqueuses, de préférence la peau du visage et/ou du corps.
La couleur de la peau est principalement due à la présence dans l’épiderme, d’un pigment, la mélanine. La mélanine est synthétisée par des cellules dendritiques spécifiques localisées dans la couche basale de l’épiderme, les mélanocytes. La mélanogénèse prend place dans des organelles, les mélanosomes qui, chargés de mélanine, sont transférés aux cellules voisines épidermiques, les kératinocytes, via les dendrites. Parmi les principaux marqueurs de la mélanogénése, on peut citer par exemple une enzyme clé la tyrosinase TYR ou les protéines TRP1 et TRP2/DCT qui sont sous le contrôle d’un facteur de transcription MITF.
La pigmentation de la peau du visage et/ou du corps est fonction de différents facteurs tels que des facteurs environnementaux liés aux saisons de l’année, de l’origine de l’individu et/ ou de l’âge.
En outre, à différentes périodes de leur vie, certaines personnes voient apparaître sur leur peau, des taches plus foncées et/ou plus colorées, conférant à la peau une hétérogénéité. Ces taches sont dues aussi à une concentration importante de mélanine dans la peau.
Ainsi, lorsque le processus de pigmentation est altéré, cela peut aboutir à des défauts esthétiques pigmentaires. Parmi les altérations pigmentaires bénignes inesthétiques, caractérisées par une accumulation de mélanine, on peut citer notamment le lentigo actinique ou solaire, et le lentigo sénile. On peut également citer des altérations pigmentaires bénignes inesthétiques susceptibles d’être induites par un trouble pigmentaire bénin choisi parmi le mélasma, les dyschromies bénignes du visage ainsi que les hyperpigmentations postinflammatoires.
Il a récemment été démontré que la lumière du visible pouvait induire une pigmentation de la peau et être responsable de l’apparition et de l’accentuation de ces défauts esthétiques pigmentaires.
L'élimination ou la réduction de la présence de ces défauts esthétiques repose, d'ordinaire, sur l’utilisation de dépigmentants, basés sur la réduction de l'activité de synthèse de la mélanine dans les mélanocytes. Parmi les substances dépigmentantes de référence on peut citer par exemple l'hydroquinone et ses dérivés, l’acide Kojique, l’acide ascorbique, les dérivés de résorcinol etc.
Toutefois, il existe des inconvénients majeurs liés à l’utilisation des agents dépigmentants précités. En effet, ces substances dépigmentantes peuvent présenter notamment une faible efficacité notamment vis-à-vis des défauts esthétiques pigmentaires tels que précités, une activité biologique touchant d'autres fonctions, des propriétés toxiques ou allergisantes.
Par ailleurs, il est également connu d’utiliser des pigments ou des oxydes de fer pour prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible. Néanmoins, l’utilisation de ces composés dans des compositions cosmétiques implique obligatoirement que les compositions soient teintées et/ou opaques.
En parallèle, le maintien d'un teint bronzé est un facteur fortement impliqué dans l'obtention d'un aspect cosmétique attractif.
De nombreuses solutions ont été proposées dans le domaine de la coloration artificielle par apport de réactifs exogènes, tels que la DHA (Dihydroxyacetone), censés donner à la peau une coloration la plus proche possible de ce qu'elle est naturellement lorsqu’elle est bronzée. Cependant, ces composés ne permettent pas de stimuler physiologiquement la pigmentation de la peau puisqu’ils n’induisent pas d’augmentation de la quantité de mélanine au sein de la peau.
Ainsi, il demeure donc un besoin d’identifier et de disposer de nouveaux composés modulateurs de la pigmentation de la peau efficace et/ou présentant une bonne tolérance cutanée, en particulier d’agents permettant de prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible.
Il demeure également le besoin de stimuler physiologiquement la pigmentation de la peau sans avoir nécessairement recours à une exposition solaire ou UV.
Pour cela, la Demanderesse a mis en évidence une nouvelle cible cosmétique, l’opsine 3, impliquée dans la modulation de la pigmentation de la peau.
La présente invention découle de la découverte inattendue par les inventeurs que l’utilisation de modulateurs de l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3 permet de moduler de la pigmentation de la peau en particulier permet de prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible, ou stimuler la pigmentation de la peau notamment sans nécessairement avoir recours à une exposition à la lumière solaire ou aux UV.
Ainsi, la présente invention concerne l’utilisation cosmétique d’au moins un composé apte à moduler l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3, à titre d’agent actif pour moduler la pigmentation de la peau, en particulier pour prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible, ou stimuler la pigmentation de la peau notamment sans nécessairement avoir recours à une exposition à la lumière solaire ou aux UV.
Au sens de la présente invention, on entend par « moduler l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3 (OPN 3) », le fait de favoriser, d’induire, de prévenir ou de réduire l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3.
Au sens de la présente invention, on entend par « moduler l’expression de l’opsine 3 » le fait de favoriser, d’induire, de prévenir ou de réduire le niveau de transcription et/ou le niveau de traduction du gène codant pour l’opsine 3, ou de favoriser la stabilisation ou la déstabilisation de l’opsine 3, ou encore d’induire ou de prévenir la dégradation de l’opsine 3.
On entend par « moduler l’activité biologique de l’opsine 3 » le fait d’activer, de stabiliser la forme active, ou d’inhiber le récepteur opsine 3 et/ou de favoriser, d’induire, de prévenir ou de réduire la teneur en calcium intracellulaire, la teneur en mélanine et/ou la teneur d’au moins un marqueur des voies de signalisation conduisant à la mélanogénèse choisi parmi TYR, DCT, CAMKII, PERK, p38, CREB et/ou MITF dans les mélanocytes, en particulier la teneur d’au moins une forme active phosphorylée des protéines choisies parmi CAMKII, PERK, p38, CREB et/ou MITF dans les mélanocytes.
Au sens de la présente invention, on entend par « lumière du visible » les longueurs d’onde comprises entre 400 nm et 750 nm. En outre, la lumière du visible est la partie du spectre électromagnétique qui est visible pour l'œil humain et dont les longueurs d’onde sont comprises entre les Ultra-Violets et les Infra-rouges.
La présente invention concerne par ailleurs un procédé de criblage d’un composé apte à prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible ou à stimuler la pigmentation de la peau, ledit procédé comprenant au moins les étapes décrites ciaprès. De manière préférée, un procédé ou une utilisation de l’invention peuvent être effectués in vitro, ex vivo ou in vivo, et de préférence encore in vitro ou ex vivo.
La présente invention concerne également une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable au moins un composé de l’invention.
Par « milieu physiologiquement acceptable », on entend un milieu compatible avec les matières kératiniques d’êtres humains comme la peau, les muqueuses, les ongles, les cheveux, le cuir chevelu, ou toute autre zone cutanée du corps. Un milieu physiologiquement acceptable est préférentiellement un milieu cosmétiquement acceptable, c’est-à-dire parfaitement compatible avec la voie d’administration considérée.
La présente invention concerne également un procédé de traitement cosmétique, en particulier non thérapeutique comprenant l’application sur la peau d’une composition cosmétique selon l’invention.
Modulateurs
La présente invention concerne l’utilisation cosmétique d’au moins un composé apte à moduler l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3, à titre d’agent actif pour moduler la pigmentation de la peau.
Les opsines sont des photorécepteurs bien décrits dans le domaine oculaire ainsi que dans d’autres organes. Seules certaines opsines ont été décrites dans la peau. Cependant, le rôle de l’opsine 3 dans la pigmentation de la peau n’avait encore jamais été découvert.
L’opsine 3 est une protéine membranaire, en particulier cette protéine fait partie de la famille des récepteurs couplés aux protéines G. L’opsine 3 comprend une partie protéique constituée de 7 domaines transmembranaires et une partie apoprotéique comprenant un chromophore : le rétinal ou l’un de ses dérivés. Ainsi, après exposition à la lumière du visible, en particulier la lumière bleue-violette, le chromophore couplé à l’opsine 3 absorbe les photons, entraînant l’activation de l’opsine 3 puis de sa protéine G associée qui stimule le flux calcique intracellulaire ainsi que les voies de signalisation intracellulaire conduisant à la mélanogénèse au sein des mélanocytes.
La stimulation du flux calcique intracellulaire entraîne la phosphorylation de la protéine CAMKII (protéine kinase calcium calmoduline dépendante), l’activation de la voie des MAPKs (MAP kinases), en particulier ERK (extracellular signal regulated kinase) et P38, la phosphorylation de CREB (AMP cyclic response element binding), puis la phosphorylation de MITF (microphthalmia associated transcription factor), le facteur de transcription responsable de l’activation des gènes cibles comme le gène codant pour l’enzyme tyrosinase (TYR), enzyme clé de la mélanogénèse permettant l’hydroxylation de la tyrosine en 3,4dihydroxyphénylalanine (DOPA) et l’oxydation de la DOPA (intermédiaire non libre de la réaction catalytique) en DOPAquinone. Le facteur de transcription MITF permet également d’activer le gène codant pour l’enzyme DCT/TRP2 (la DOPAchrome tautomérase) qui catalyse l’isomérisation du DOPAchrome (acide 5,6-dioxo-2,3-dihydro-lH-indole-2carboxylique) en acide 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylique (DHICA), ou encore d’activer le gène codant pour TRP1 qui catalyse la réaction d’oxydation du DHICA pour former la mélanine.
Le gène codant pour la protéine opsine 3 est représenté par la séquence nucléotidique identifiée sous la référence GenBank NC 000001.11.
La séquence ARNm de l’opsine 3 est représentée par la séquence NCBI NM_014322.2.
La séquence protéique de l’opsine 3 peut comprendre 402 acides aminés identifiée sous la référence Uniprot/Swissprot : Q9H1Y3-1 présentant un poids moléculaire de 44.873 Da, correspondant ainsi à l’isoforme 1 de la protéine opsine 3 ; ou 323 acides aminés identifiés sous la référence Uniprot/Swissprot : Q9H1Y3-2 présentant un poids moléculaire de 35.730 Da, correspondant ainsi à l’isoforme 2 de la protéine opsine 3.
Selon un premier mode de réalisation de l’invention, ledit composé modulateur de la pigmentation de la peau permet de prévenir et/ou de réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible.
De préférence, la lumière du visible est en particulier la lumière bleue-violette, de préférence les longueurs d’onde comprises entre 400 nm et 470 nm, encore mieux les longueurs d’onde comprises entre 410 et 420 nm.
On entend par « réduire la pigmentation de la peau » toute action visant à dépigmenter, et/ou éclaircir la peau. Par réduction de la pigmentation, on entend en particulier, interférer avec une des étapes de la biosynthèse de la mélanine.
Au sens de la présente invention, on entend par « prévenir » le fait de réduire le risque ou la probabilité de manifestation d’un phénomène donné, i.e. dans le cadre de la présente invention, il s’agira de la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible.
Plus particulièrement, ledit composé permet de prévenir et/ou de réduire les défauts esthétiques pigmentaires, en particulier les défauts esthétiques pigmentaires tels que le mélasma, le lentigo sénile, le lentigo actinique ou solaire, les dyschromies bénignes du visage et les hyperpigmentations post inflammatoire, en particulier les hyperpigmentations postinflammatoires apparues suite à des lésions acnéiques, des zones cicatricielles, ou des altérations de l’intégrité de la peau suite à des interventions esthétiques ou dermatologiques (laser, dermabrasion, peelings).
On pourra notamment préférer un composé apte à prévenir et/ou réduire l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3.
De manière particulièrement préférée, ledit composé est un composé apte à réduire l’expression de l’opsine 3 notamment ledit composé est choisi parmi les siRNA capables de s’hybrider avec la séquence ARNm de l’opsine 3, le pentanal, le thiostrepton, la cephaeline, la chlortetracycline, le MG-262, et leurs mélanges.
Encore mieux, ledit composé est choisi parmi les siRNA capables de s’hybrider avec la séquence ARNm de l’opsine 3, en particulier les siRNA de séquences choisies parmi SEQ ID N°l, SEQ ID N°2, SEQ ID N°3, SEQ ID N°4, SEQ ID N°5, et leurs mélanges.
On entend par «siRNA» ou « small interfering RNA» un fragment d’ARN double brin (dsRNA) constitué de 12 à 40 nucléotides, de préférence de 18 à 24 nucléotides.
Le mécanisme moléculaire mis en jeu faisant intervenir ces fragments d’ARN double brin consiste en l’activation du complexe RISC (RNA Induced Silencing Complex) effective par la fixation du brin anti-sens du siRNA sur l’ARNm entraînant la dégradation de l’ARNm cible, voir notamment Tuschl T. Chem. Biochem. 2001 ;2 :239-245, Nykanen A & al Cell 2001 107 309-321, Dorsett Y. Nature, April 20 2004, Vol.3, page 318-329 et Downward J. BMJ 2004, 328, 1245-1248.
Selon un second mode de réalisation de l’invention, ledit composé modulateur de la pigmentation de la peau permet de stimuler la pigmentation de la peau, notamment sans nécessairement avoir recours à une exposition à la lumière solaire ou aux UV.
Par « stimuler la pigmentation de la peau », on entend augmenter la pigmentation de la peau, et notamment en augmentant la quantité de mélanine dans la peau.
On entend par « lumière solaire » les longueurs d’onde comprises entre 200nm et
1400nm.
On pourra notamment préférer un composé apte à induire, stabiliser, ou augmenter l’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3. Plus particulièrement, ledit composé est choisi parmi la chelidonine, les saccharides et/ou polyphénols extraits de végétaux, en particulier l’extrait de theobroma cacao.
Procédé de criblage de nouveaux actifs
La présente invention concerne également un procédé de criblage d’actifs aptes à prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible comprenant les étapes suivantes :
a. Mettre en contact le composé à tester avec un échantillon de mélanocytes ;
b. Exposer ledit échantillon de mélanocytes à la lumière du visible ;
c. Mesurer le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3 ;
d. Sélectionner le composé pour lequel le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3 obtenue en c) est diminué(e) de manière significative par rapport au niveau d’expression et/ou à l’activité biologique mesuré(e) à partir d’un échantillon de référence.
Selon un mode de réalisation préféré de l’invention, un composé criblé peut être apte à prévenir et/ou réduire les défauts esthétiques pigmentaires tels que définis ci-dessus.
Avantageusement, les mélanocytes en présence du composé à tester sont exposés à une longueur d’onde comprise entre 400nm et 470nm, encore mieux entre 410 nm et 420 nm.
De préférence, le procédé de criblage selon l’invention est un procédé effectué ex vivo ou in vitro.
Selon un mode de réalisation préféré ledit échantillon de mélanocytes est choisi parmi des mélanocytes en culture, des modèles d’épidermes reconstruits ou de peaux reconstruites comprenant des mélanocytes ou encore des expiants de peau humaine.
Lesdits mélanocytes en culture peuvent être en particulier des cellules en lignées c’est-à-dire transformées par un virus pour les immortaliser ou d’origine tumorale ou des cellules de culture primaire, c’est-à-dire issues d’un tissu prélevé chez un organisme vivant, par exemple un épiderme d’un être humain. Les cultures de cellules peuvent être effectuées selon toute méthode connue de l’homme de l’art.
Parmi les modèles d’épiderme ou de peaux utilisables, on peut citer par exemple le modèle de peau pigmentée SkinEthic® RHE.
L’évaluation in vitro ou ex vivo d’un composé criblé selon l’invention peut être effectuée par tout protocole connu de l’homme de l’art visant à comparer l’effet donné d’un composé à tester à une valeur contrôle ou standard obtenue à partir d’un échantillon de référence.
On entend par « échantillon de référence » un échantillon de mélanocytes tel que défini ci-dessus exposé à la lumière du visible en l’absence dudit composé à tester, de préférence à une longueur d’onde comprise entre 400 nm et 470 nm, encore mieux entre 410 nm et 420 nm.
La présente invention concerne en outre un procédé de criblage d’actifs aptes à stimuler la pigmentation de la peau notamment sans nécessairement avoir recours à une exposition à la lumière solaire ou aux UV :
a) Mettre en contact le composé à tester avec un échantillon de mélanocytes ;
b) Mesurer le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3 ;
c) Sélectionner le composé pour lequel le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de l’opsine 3 obtenue en c) est augmenté(e) de manière significative par rapport au niveau d’expression et/ou à l’activité biologique mesuré(e) à partir d’un échantillon de référence.
De préférence, le procédé de criblage selon l’invention est un procédé effectué ex vivo ou in vitro.
Selon un mode de réalisation préféré ledit échantillon de mélanocytes est choisi parmi des mélanocytes en culture, des modèles d’épidermes reconstruits ou de peaux reconstruites comprenant des mélanocytes ou encore des expiants de peau humaine.
Lesdits mélanocytes en culture peuvent être en particulier des cellules en lignées c’est-à-dire transformées par un virus pour les immortaliser ou d’origine tumorale ou des cellules de culture primaire, c’est-à-dire issues d’un tissu prélevé chez un organisme vivant, par exemple un épiderme d’un être humain. Les cultures de cellules peuvent être effectuées selon toute méthode connue de l’homme de l’art.
Parmi les modèles d’épiderme ou de peaux utilisables, on peut citer par exemple le modèle de peau pigmentée SkinEthic® RHE.
L’évaluation in vitro ou ex vivo d’un composé criblé selon l’invention peut être effectuée par tout protocole connu de l’homme de l’art visant à comparer l’effet donné d’un composé à tester à une valeur contrôle ou standard obtenue à partir d’un échantillon de référence.
On entend par « échantillon de référence » un échantillon de mélanocytes tel que défini ci-dessus en l’absence dudit composé à tester.
L’effet d’un composé criblé selon les deux procédés de criblage précités, in vitro ou ex vivo, est déterminé par la mesure de l’expression et/ou de l’activité biologique de l’opsine 3, en particulier par la mesure de la teneur en calcium intracellulaire, la teneur d’au moins un marqueur des voies de signalisation conduisant à la mélanogénèse et/ou la teneur en mélanine.
De tels marqueurs peuvent être choisis, par exemple, parmi les protéines TYR, DCT, les formes actives phosphorylées des protéines CAMKII, PERK, p38, CREB et/ou MITF.
Le niveau d’expression de l’opsine 3 et/ou la teneur des marqueurs des voies de signalisation conduisant à la mélanogénèse peuvent être déterminés, par exemple, par qPCR, par Western Blost ou immunofluorescence selon tout protocole connu de l’homme de l’art.
La teneur en calcium intracellulaire peut être déterminée par des techniques connues de l’homme du métier, en particulier par une méthode de marquage fluorescent.
La teneur en mélanine peut être déterminée par des techniques connues de l’homme du métier, par mesure de la DO par spectrophotométrie à 500nm après solubilisation des cellules au Soluène-350, par mesure colorimétrique à l’aide d’un colorimètre après filtration des lysats cellulaires sur filtres DEAE et séchage ; par mesure en chromatographie liquide EtPLC après extraction chimique.
Compositions
La présente invention concerne également une composition, en particulier cosmétique, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable au moins un siRNA capable de s’hybrider avec la séquence ARNm de l’opsine 3.
De préférence, la composition selon l’invention comprend dans un milieu physiologiquement acceptable au moins un siRNA de séquences choisies parmi SEQ ID N°l, SEQ ID N°2, SEQ ID N°3, SEQ ID N°4, SEQ ID N°5, et leurs mélanges.
Avantageusement, la composition selon l’invention comprend dans un milieu physiologiquement acceptable une quantité efficace d’au moins un siRNA capable de s’hybrider avec la séquence ARNm de l’opsine 3, de préférence d’au moins un siRNA de séquences choisies parmi SEQ ID N°l, SEQ ID N°2, SEQ ID N°3, SEQ ID N°4, SEQ ID N°5, et leurs mélanges.
Au sens de la présente invention, on entend par « quantité efficace » d’un composé de l’invention, une quantité suffisante et nécessaire de ce composé pour prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible. Une telle quantité peut être déterminée par toute méthode connue de l’homme de l’art, par exemple au moyen d’essais in vitro, ex vivo ou in vivo, tels que des essais cliniques.
De manière préférée, une composition de l’invention peut être administrée par voie topique.
Une composition destinée à une administration par voie topique peut être de toute forme galénique notamment sous la forme d’une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, une solution ou une dispersion du type lotion ou sérum, une émulsion de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenue par dispersion d’une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), une suspension ou une émulsion, de consistance molle, semi-solide ou solide, du type crème ou du type gel aqueux ou anhydre, une émulsion multiple (E/H/E ou H/E/H), une microémulsion, une nano-émulsion, une préparation de microcapsules, une préparation de microparticules, ou une dispersion vésiculaire de type ionique et/ou non ionique, ou une dispersion cire/phase aqueuse.
Selon un mode préféré de réalisation, une composition par voie topique peut se présenter sous la forme d’une solution, d’une crème, d’un gel, d’une émulsion, d’une mousse ou d’une composition pour aérosol contenant un agent propulseur.
Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.
Une composition selon l’invention peut constituer une composition de soin de la peau, ou encore un produit nettoyant ou démaquillant de la peau, une lotion, un gel ou une mousse pour le soin de la peau, une composition pour le bain.
Une telle composition peut contenir éventuellement au moins un ingrédient additionnel choisi parmi des actifs cosmétiques, des conservateurs, des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des agents tensioactifs non ioniques, anioniques, cationiques, des antioxydants, des sels, des parfums, des charges, des absorbeurs d’odeur, des matières colorantes, des polymères filmogènes, des polymères semi-cristallins, des gommes, des huiles volatiles ou non volatiles, et leurs mélanges.
Comme solvants utilisables dans l’invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l’éthanol et l’isopropanol, le propylène glycol.
De manière préférée, la composition selon l’invention comprend au moins un actif cosmétique.
Un actif cosmétique convenant à l’invention peut être choisi parmi des hydratants, des vitamines, des acides gras essentiels, des sphingolipides, des filtres UV, des composés antioxydants, des agents anti-acnés, des agents anti-inflammatoires, des agents bronzant (en l’absence de rayonnement UV), des agents dépigmentant, des agents matifiant, des protéines ou des hydrolysats de protéines, des acides aminés, des polyols, l’urée, l’allantoïne, des sucres et des dérivés de sucre, des vitamines hydrosolubles, des extraits végétaux et des hydroxyacides, le rétinol et ses dérivés, le tocophérol et ses dérivés, des acides gras essentiels, des céramides, des huiles essentielles, l’acide salicylique et ses dérivés, la vitamine D3 et ses dérivés, les rétinoïdes et leurs dérivés, les agonistes PPAR-gamma, et leurs mélanges.
De manière particulièrement préférée, un actif cosmétique convenant à l’invention est choisi parmi les composés antioxydants, les filtres UV organiques et/ou minéraux, et leurs mélanges.
Encore préférentiellement, un actif cosmétique convenant à l’invention est choisi parmi les filtres UV organiques et/ou minéraux.
Les quantités de ces différents ingrédients sont celles classiquement utilisées dans le domaine considéré, et sont notamment déterminées pour ne pas affecter les propriétés recherchées pour un composé de l’invention ou pour une composition de l’invention.
Procédé de traitement cosmétique
Comme indiqué précédemment, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique de la peau, en particulier non thérapeutique comprenant l’application sur la peau d’une composition comprenant au moins un siRNA capable de s’hybrider avec la séquence ARNm de l’opsine 3.
Préférentiellement, le procédé cosmétique selon l’invention comprend l’application de ladite composition sur la peau du visage et/ou du corps.
De préférence, le procédé cosmétique selon l’invention comprend l’application sur la peau d’une composition comprenant au moins un siRNA de séquences choisies parmi SEQ ID N°l, SEQ ID N°2, SEQ ID N°3, SEQ ID N°4, SEQ ID N°5, et leurs mélanges.
Un procédé de l’invention permet notamment de prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible, de préférence, de prévenir et/ou réduire les défauts esthétiques pigmentaires tels que définis précédemment.
De préférence, un procédé selon l’invention est mis en œuvre par voie topique.
Dans la description et dans les exemples suivants, sauf indication contraire, les pourcentages sont des pourcentages en poids et les plages de valeurs libellées sous la forme « entre ... et... » incluent les bornes inférieure et supérieure précisées.
Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ».
Au sens de la présente invention, « au moins un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « un ou plusieurs ».
Les exemples figurant ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l’invention.
FIGURES
Figure 1 : Diminution de la teneur du facteur de transcription MITF par les siRNA ciblant OPN3 en condition d’exposition à 415 nm (effet précoce).
Figure 2 : Diminution de la teneur en TYR (tyrosinase) et DCT (dopachrome tautomérase) par les siRNA ciblant OPN3 en condition d’exposition 415 nm (effet tardif).
Figure 3 : Diminution du flux calcique par les siRNA ciblant OPN3 en condition d’exposition 415 nm.
Figure 4 : Diminution de la teneur des protéines CAMKII, ERK, p38, CREB. par les siRNA ciblant OPN3 en condition d’exposition 415 nm.
Figure 5 : Schéma récapitulatif du rôle central de l’opsine 3 dans la réponse des mélanocytes à la lumière du visible (415nm).
EXEMPLE
Exemple 1
Utilisation d’un siRNA OPN3 bloquant l’induction de la mélanogénèsepar la lumière du visible (415 nm)
Echantillon
Les mélanocytes humains normaux sont obtenus à partir de prélèvements de prépuces (déchets opératoires) de sujets de phototypes ΠΙ-IV. Après isolement des mélanocytes par un traitement dispase, puis trypsine/EDTA, ils sont cultivés en milieu MCDB 153 (Sigma Aldrich) supplémenté avec 2% sérum de veau fêtai (Perbio; Helsingborg, Sweden), 5 pg ml-1 insuline (Sigma Aldrich), 0.5 pg ml-1 hydrocortisone (Sigma Aldrich), 16 nM TPA (Sigma Aldrich), 1 ng ml-1 FGF (Promega, Madison, WI, USA), 15pgml_1 extrait pituitaire bovin (Invitrogen; Carisbad, CA, USA), 10 pM forskoline (Sigma Aldrich), and 20 pg ml-1 geneticine (Invitrogen) pendant 2 semaines. Avant chaque expérience les cellules sont mises pendant 2 jours en milieu MCDB 153 medium supplémenté de 2% de sérum de veau fêtai, 5 pg ml-1 insuline and 15 pg ml-1 extrait puititaire.
Mise en contact de l’échantillon avec les siRNA
Transfection des siRNA de SEQ ID N°l: 400,000 mélanocytes sont utilisés pour la reverse transfection. Les mélanocytes sont trypsinisés, resuspendus dans du milieu de culture de maintenance et transfectés à l’aide du kit lipofectamine RNAiMax (Thermo Fisher Scientific, Walthma, MA, USA). Le contrôle négatif siRNA et le siRNA OPN3 à 50 pmol (Ambion, Foster City, CA, USA) sont incubés avec le réactif lipofectamine RNAiMax pendant 15 minutes et mis dans le puit de culture avant ajout des cellules en suspension.
Le test tel que décrit ci-dessus a été reproduit avec les siRNA de SEQ ID N°2 à SEQIDNO5.
Exposition
Les expériences d’exposition à la lumière bleue/violette (50J/cm2) sont réalisées 2 jours après la transfection.
Les cellules sont exposées à une source de lumière bleu/violette LED émettant à 415 ± 5 nm (Deleo luminotherapy, St Raphaël, France). La source LED est constituée de 154 LEDs (11 lignes de 14 LEDs). Pendant l’exposition les échantillons biologiques sont maintenus en PBS à environ 30°C, 15 cm au-dessus de la lampe. Une dose de 50J/cm2 représente 33 minutes d’exposition, ce qui représente environ 90 minutes d’exposition en condition réelle.
Analyse Western Blot des protéines MITF, TYR, DCT, CAMKII, ERK, p38,
CREE
Les cellules sont reprises en tampon de lyse : 150mM NaCl; 50mM Tris, IX Triton; contenant des phosphatases et des inhibiteurs de proteases (Roche, Bâle, Switzerland). Les lysats sont centrifugés à 14 000 rpm pendant 10 minutes at 4°C. La quantité de proteines est mesurée en utilisant le Biorad assay. Pour l’analyse en Western blot, les lysats sont séparés par SDS-PAGE et transféré sur une membrane de PVDF. Après incubation avec l’anti-corps approprié, les protéines sont visualisées en utilisant une détection grâce à un substrat électrochimiluminescent (ECL) et le système Fujifilm LAS-4000 System. La quantification est réalisée avec les logiciels Multigauge et image J.
Les anti-corps utilisés sont des anti-corps MITF, pCAMKII and β-actin de la société Abcam (Cambridge, MA, USA), pERK, pCREB and pp38 de la société Cell Signaling
Technology (Beverly, MA, US), TYR et DCT de la société V. Hearing (USA).
Analyse du flux calcique
La mesure du flux calcique est réalisée par marquage fluorescent à l’aide du
Fluo-4 Direct Calcium reagent (Invitrogen). Fluo-4 Direct Calcium reagent est incubé pendant 45 minutes avec les cellules avant exposition. Immédiatelment après exposition à 415nm, la fluorescence est mesurée avec une excitation à 485nm et une émission à 520nm.
Résultats
On observe en présence de siRNA OPN3, une diminution du flux calcique ainsi qu’une diminution de la teneur du facteur de transcription MITF, des protéines TYR, DCT, CAMKII, ERK, p38, et CREB.
Les siRNA de SEQ ID N°1 à SEQ ID N°5 testés permettent ainsi de prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible.

Claims (17)

1. Utilisation cosmétique d’au moins un composé apte à moduler l’expression et/ou l’activité biologique de Topsine 3, à titre d’agent actif pour moduler la pigmentation de la peau.
2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit composé est apte à prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible.
3. Utilisation selon Tune quelconque des revendications 1 à 2, dans laquelle la lumière du visible est la lumière bleue-violette, en particulier la lumière comprise entre les longueurs d’onde 400 nm à 470 nm, de préférence entre 410 nm et 420 nm.
4. Utilisation selon Tune quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit composé permet de prévenir et/ou réduire les défauts esthétiques pigmentaires tels que le mélasma, le lentigo sénile, le lentigo actinique ou solaire, les dyschromies bénignes du visage et les hyperpigmentations post-inflammatoires.
5. Utilisation selon Tune quelconque des revendications 1 à 4 dans laquelle ledit composé est choisi parmi les siRNA capables de s’hybrider avec la séquence ARNm de Topsine 3.
6. Utilisation selon Tune quelconque des revendications 1 à 5 dans laquelle ledit composé est choisi parmi les siRNA de séquences choisies parmi SEQ ID N°l, SEQ ID N°2, SEQ ID N°3, SEQ ID N°4, SEQ ID N°5, et leurs mélanges.
7. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit composé est apte à stimuler la pigmentation de la peau.
8. Composition comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable au moins un siRNA capable de s’hybrider avec la séquence ARNm de Topsine 3.
9. Composition selon la revendication 8, dans laquelle ledit siRNA est choisi parmi les séquences SEQ ID N°l, SEQ ID N°2, SEQ ID N°3, SEQ ID N°4, SEQ ID N°5, et leurs mélanges.
10. Composition selon Tune quelconque des revendications 8 et 9, comprenant en outre au moins un actif cosmétique choisi parmi les filtres UV organiques et/ou minéraux, les agents antioxydants et leurs mélanges.
11. Procédé de traitement cosmétique de la peau comprenant l’application sur la peau d’une composition telle que définie selon les revendications 8 à 10.
12. Procédé de criblage d’actifs aptes à prévenir et/ou réduire la pigmentation de la peau induite par la lumière du visible comprenant les étapes suivantes :
a. Mettre en contact le composé à tester avec un échantillon de mélanocytes ;
b. Exposer ledit échantillon de mélanocytes à la lumière du visible ;
c. Mesurer le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de Topsine 3 ;
d. Sélectionner le composé pour lequel le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de Topsine 3 obtenue en c) est diminué(e) de manière significative par rapport au niveau d’expression et/ou à l’activité biologique mesuré(e) à partir d’un échantillon de référence.
13. Procédé de criblage d’actifs aptes à stimuler la pigmentation de la peau comprenant les étapes suivantes :
a. Mettre en contact le composé à tester avec un échantillon de mélanocytes ;
b. Mesurer le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de Topsine 3 ;
c. Sélectionner le composé pour lequel le niveau d’expression et/ou l’activité biologique de Topsine 3 obtenue en c) est augmenté(e) de manière significative par rapport au niveau d’expression et/ou à l’activité biologique mesuré(e) à partir d’un échantillon de référence.
14. Procédé selon Tune quelconque des revendications 12 et 13, dans lequel le niveau d’expression de Topsine 3 est déterminé par qPCR, par Western Blost ou immunofluorescence.
15. Procédé selon l’une quelconque des revendications 12 et 13, dans lequel l’activité biologique de l’opsine 3 est mesurée en déterminant la teneur en calcium intracellulaire, la teneur d’au moins un marqueur des voies de signalisation conduisant à la mélanogénèse, et/ou la teneur en mélanine.
16. Procédé selon la revendication 15, dans lequel la teneur d’au moins un marqueur des voies de signalisation conduisant à la mélanogénèse est déterminée par qPCR, par Western Blost ou immunofluorescence.
10
17. Procédé selon la revendication 15, dans lequel la teneur en calcium intracellulaire est déterminée par une méthode de marquage flurorescent.
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