FR3065284A1 - Nouvelle carte de collecte de plasma a partir d'un echantillon de sang - Google Patents
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Abstract
Carte de collecte (1) de plasma à partir d'un échantillon de sang se présentant sous la forme d'un support comprenant 2 zones respectivement : - une zone de séparation (3) comprenant au moins un média de séparation (13) du plasma selon un flux latéral en direction d'une zone de collecte ; - une zone de collecte (4) du plasma comprenant au moins un média d'absorption (18); caractérisée en ce qu'elle présente en outre une zone de réception (2) de l'échantillon comprenant un média de préfiltration (11) destiné à recevoir ledit échantillon.
Description
© N° de publication : 3 065 284 (à n’utiliser que pour les commandes de reproduction)
©) N° d’enregistrement national : 17 53332 ® RÉPUBLIQUE FRANÇAISE
INSTITUT NATIONAL DE LA PROPRIÉTÉ INDUSTRIELLE
COURBEVOIE © Int Cl8 : G 01 N 1/40 (2017.01), G 01 N 33/49, B 01 L 3/00
DEMANDE DE BREVET D'INVENTION A1
©) Date de dépôt : 18.04.17. | © Demandeur(s) : AHLSTROM-MUNKSJO OYJ—F\. |
©) Priorité : | |
@ Inventeur(s) : BEBIEN FREDERIC et LEGAST | |
AURORE. | |
(43) Date de mise à la disposition du public de la | |
demande : 19.10.18 Bulletin 18/42. | |
©) Liste des documents cités dans le rapport de | |
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(© Références à d’autres documents nationaux | ® Titulaire(s) : AHLSTROM-MUNKSJO OYJ. |
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©) Demande(s) d’extension : | ® Mandataire(s) : CABINET LAURENT ET CHARRAS. |
£>4/ NOUVELLE CARTE DE COLLECTE DE PLASMA A PARTIR D'UN ECHANTILLON DE SANG
FR 3 065 284 - A1 yV) Carte de collecte (1 ) de plasma à partir d'un échantillon de sang se présentant sous la forme d'un support comprenant 2 zones respectivement:
- une zone de séparation (3) comprenant au moins un média de séparation (13) du plasma selon un flux latéral en direction d'une zone de collecte;
- une zone de collecte (4) du plasma comprenant au moins un média d'absorption (18);
caractérisée en ce qu'elle présente en outre une zone de réception (2) de l'échantillon comprenant un média de préfiltration (11) destiné à recevoir ledit échantillon.
Illllllllllllllllllllllllllllllllllllllllllll
NOUVELLE CARTE DE COLLECTE DE PLASMA À PARTIR D’UN
ÉCHANTILLON DE SANG
L'invention a pour objet une nouvelle carte de collecte de plasma à partir d'un échantillon de sang. Elle concerne également un procédé de collecte de plasma mettant en œuvre la carte.
Les cartes de collecte d’échantillon biologique en général, et plus particulièrement de collecte du plasma à partir de sang permettent de pouvoir récolter et stocker un échantillon sur un seul et même support. Ces cartes sont donc particulièrement simples d’utilisation puisqu’elles facilitent le stockage et le transport de l’échantillon biologique.
Ces cartes présentent un avantage particulier lorsqu’elles permettent de séparer les constituants de l’échantillon biologique qui doit être analysé. Elles présentent alors une zone de collecte dans laquelle les constituants souhaités de l’échantillon à analyser sont isolés et peuvent être directement prélevés juste avant leur analyse.
Par exemple, la demande de brevet WO 2016/025726 décrit une carte de ce type, incorporant un système de séparation du plasma à partir d’un échantillon de sang. Cette carte comprend une membrane de séparation et une membrane de collecte située en aval de la membrane de séparation par rapport au flux de sang. Cette carte se présente sous la forme d’un support pliable qui permet de protéger l’échantillon de l’air ambiant.
En pratique, ces cartes une fois l'échantillon recueilli sont ensuite traitées au sein d'un automate lequel procède au poinçonnage, c'est-à-dire à la découpe de la membrane de collecte en vue comme déjà dit, de son analyse ultérieure.
Les cartes décrites dans le document précité constituent une avancée en terme de rendement de plasma mais présentent encore un certain nombre d'inconvénients.
En particulier, la vitesse d'absorption du sang au travers du média de séparation reste lente, ce qui retarde l'analyse ultérieure du plasma récupéré. En effet, la carte ne peut être traitée, que ce soit pour la transporter d'un point à un autre ou pour l'introduire directement dans l'automate une fois seulement que le sang a été complètement absorbé, c'est-à-dire que le média de séparation est pratiquement sec. Cela limite en effet les risques contamination, que ce que ce soit celle de l'opérateur ou encore celle de l'automate.
Un autre inconvénient réside dans la construction des médias et plus largement celle des zones incorporant ces différents médias au sein desquelles l'échantillon est susceptible de diffuser par capillarité diminuant ainsi le rendement en plasma.
En d'autres termes, le problème que se propose de résoudre l'invention est celui de mettre au point une carte permettant d'accélérer le temps d'absorption du sang tout en améliorant le cas échéant, le rendement en plasma.
Pour ce faire, le Demandeur a mis au point une nouvelle carte de collecte de plasma qui ne comprend pas 2 médias respectivement, un média de séparation et un média de collecte mais 3 médias. Ce troisième média dénommé par la suite « média de préfiltration » permet d'assurer la séparation des constituants du sang non pas en une seule étape au sein d'un média de séparation mais en deux étapes par deux filtrations successives.
Ainsi, le média de préfiltration a pour fonction de séparer les cellules de tailles les plus importantes et en particulier les globules blancs et les plaquettes alors que le média de séparation a pour fonction de séparer les cellules de taille inférieure, et en particulier les globules rouges.
En d'autres termes, le fait de séparer la filtration en deux étapes permet d'éviter de saturer le média de séparation et ainsi favoriser l'écoulement de l'échantillon en son sein et donc le temps d'absorption.
Un autre avantage de l’invention est également celui de disposer d’un média supplémentaire (le média de préfiltration) qui peut être utilisé pour procéder à une analyse d’une fraction du sang de l’échantillon qui n’était pas disponible dans les cartes de l’art antérieur. En d’autres termes, la carte de l’invention permet d’analyser 3 types de constituants du sang, respectivement plaquettes et globules blancs dans le média de préfiltration, globules rouges dans le média de séparation et plasma dans le média de collecte.
Plus précisément, l'invention a pour objet une carte de collecte de plasma à partir d’un échantillon de sang se présentant sous la forme d’un support comprenant 2 zones respectivement :
une zone de séparation comprenant au moins un média de séparation du plasma selon un flux latéral en direction d’une zone de collecte ;
une zone de collecte du plasma comprenant au moins un média d’absorption.
L'invention se caractérise en ce que la carte de collecte présente en outre une zone de réception de l'échantillon comprenant un média de préfiltration destiné à recevoir ledit échantillon.
Agencement des différentes zones entre elles
De manière générale, la filtration du sang au travers du média de préfiltration vers le média de séparation s'effectue verticalement. Dans ces conditions, il est nécessaire au moment de l'utilisation, de superposer les deux médias.
Pour ce faire et dans un mode de réalisation avantageux, les zones de réception et de séparation sont séparées par une ligne de pliage positionnée de sorte à ce que ledit échantillon s’écoule verticalement à travers le média de préfiltration jusqu’au média de séparation après repliage de la zone de réception sur la zone de séparation et superposition au moins partielle du média de préfiltration sur le média de séparation.
Comme mentionné, la superposition des deux médias doit être au moins partielle, l'essentiel étant de mettre en contact le maximum de la surface du média de préfiltration dans laquelle diffuse l'échantillon avec la surface correspondante du média de séparation. En pratique, au moins 50 %, de préférence au moins 80 % avantageusement au moins 95 %, idéalement 100% de la surface du média de préfiltration est destinée à entrer en contact avec le média de séparation.
Parallèlement, la séparation du plasma dans le média de séparation s’effectuant latéralement, il est nécessaire de laisser la partie du média de séparation dans laquelle se concentre le plasma accessible au média d’absorption. En d’autres termes, il est avantageux que le média de préfiltration ne recouvre pas la totalité de la surface du média de séparation après superposition de l’un sur l’autre. En pratique, le média de préfiltration recouvre au moins 50 %, avantageusement au moins 70 %, au maximum 90% de la surface du média de séparation, la surface restante correspondant à la partie du média de séparation dans laquelle se concentre le plasma.
De la même manière, pour permettre la récupération du plasma dans le média d'absorption, il est nécessaire de mettre en contact le média d'absorption avec le média de séparation. Cette mise en contact peut être effectuée par superposition partielle ou par contact bord à bord des deux médias.
Dans un mode de réalisation préféré, à l'instar des médias de préfiltration et de séparation, les médias d'absorption et de séparation sont superposés au moment de la collecte du plasma.
Pour ce faire et avantageusement, les zones de séparation et de collecte sont séparées par une ligne de pliage positionnée de sorte à ce que le plasma soit absorbé par le média d’absorption après repliage de la zone de collecte sur la zone de séparation et superposition au moins partielle du média d’absorption sur le média de séparation au moins dans la partie du média de séparation destinée à concentrer le plasma.
Comme mentionné, la superposition des deux médias doit être au moins partielle, l'essentiel étant de mettre en contact le maximum de la partie de la surface du média de séparation concentrant le plasma avec la surface correspondante du média d’absorption. En pratique, au moins 50 %, de préférence au moins 80 % de la partie de la surface du média de séparation concentrant le plasma est destinée à entrer en contact avec le média d’absorption.
En pratique, la totalité de la surface du média de préfiltration est en contact avec la surface correspondante du média de séparation après repliage de la zone de réception sur la zone de séparation tandis que le média d’absorption est en contact avec au moins une partie, de préférence la totalité de la surface restante du média de séparation non en contact avec le média de préfiltration.
En d’autres termes et dans ce mode de réalisation, les zones de réception et de collecte recouvrent les parties correspondantes de la zone de séparation qui leur sont en vis à vis après repliage.
Pour permettre de solidariser temporairement les zones de réception et de collecte à la zone de séparation, ladite zone de séparation présente une couche d’adhésif appliquée sur sa surface en dehors des parties recouvertes par le média de séparation.
Pour protéger la zone de réception avant utilisation de la carte, la zone de collecte se prolonge par un rabat, séparé de ladite zone de collecte par une ligne de pliage parallèle à la ligne de pliage séparant la zone séparation de la zone de collecte, le rabat étant dimensionné pour recouvrir la zone de réception lorsqu’elle est repliée sur la zone de séparation. Ce rabat présente en outre l’avantage de constituer un moyen de préhension permettant d’ouvrir la carte et d’exposer la zone de réception au manipulateur au moment de l’utilisation mais également pour détacher la zone de collecte.
Pour faciliter le traitement ultérieur de la carte dans un automate, les zones de réception et de collecte sont avantageusement détachables de la zone de séparation. En pratique, chacune des deux zones présente une prédécoupe positionnée parallèlement à la ligne de pliure.
Pour favoriser la collecte du plasma par le média d’absorption, la zone de séparation présente des moyens d’inclinaison du média de séparation d’un angle vertical positif en direction de la zone de collecte par rapport au support compris entre 3° et 30°, avantageusement entre 15 et 20°.
Le Demandeur a en effet constaté que de manière tout à fait surprenante, cette inclinaison du média de séparation permettait d'améliorer le contact intime de la partie du média de séparation concentrant le plasma avec le média d'absorption lorsque la zone de collecte était repliée sur la zone de séparation. L'inclinaison du média de séparation peut être optimisée en fonction des caractéristiques de filtration dudit média dans la fourchette angulaire précitée.
Tout moyen d'inclinaison permettant d'incliner le média de séparation peut être envisagé. Dans un mode de réalisation avantageux, le moyen d'inclinaison se présente sous la forme d'une surépaisseur du support localisée en regard de la zone de collecte après repliage de celle-ci sur la zone de séparation. De préférence, la surépaisseur se présente sous la forme d'un cadre sur le bord supérieur duquel vient reposer la partie du média de séparation concentrant le plasma.
Forme géométrique des médias
Les médias de séparation et de préfiltration
Toute forme géométrique de média peut être envisagée.
Toutefois, le Demandeur a constaté qu'on obtenait des résultats particulièrement avantageux en matière de temps d'absorption et de rendement, lorsque les médias de séparation présente la forme d’un trapèze isocèle, dont la petite base est orientée en direction de la zone de collecte. Cette forme spécifique tend en effet à concentrer le plasma à proximité de la petite base du trapèze.
Comme déjà dit, la superposition des médias de préfiltration et de séparation doit être au moins partielle, l'essentiel étant de mettre en contact le maximum de la surface du média de préfiltration dans laquelle diffuse l'échantillon avec la surface correspondante du média de séparation.
Par conséquent et dans un mode de réalisation avantageux, le média de préfiltration présente la forme d’un trapèze isocèle dont les dimensions sont identiques ou sensiblement identiques à celles du trapèze constitutif du média de séparation, à l’exception de la longueur de la petite base qui est supérieure. Dans ces conditions, le trapèze formant le média de préfiltration ne recouvre pas la totalité du media de séparation en laissant libre la zone du média de séparation concentrant le plasma.
Le média d’absorption
De la même manière que précédemment, toute forme géométrique du média d'absorption peut être envisagée. L'essentiel est qu'il puisse entrer en contact avec la partie du média de séparation dans laquelle se concentre le plasma et que par ailleurs, il présente une surface suffisamment importante pour pouvoir être poinçonné ultérieurement par l'automate en vue de l'analyse finale de l’échantillon.
En pratique, le média d'absorption occupe la majeure partie de la zone de collecte. Il représente avantageusement au moins 70 % de la surface de la zone de collecte, avantageusement au moins 80 %. Dans un mode de réalisation particulier, le média d’absorption a une forme rectangulaire.
La forme spécifique des médias de préfiltration, de séparation et d’absorption peut être obtenue de différentes manières.
Dans un premier mode de réalisation, la forme spécifique est obtenue par découpe à la forme souhaitée d'une feuille de média. Le média ainsi découpé est ensuite solidarisé au support constitutif des zones de réception, de séparation et de collecte.
En ce qui concerne la zone de réception, pour permettre l’écoulement vertical du sang dans le média de préfiltration, le support constitutif de ladite zone présente une fenêtre au sein de laquelle est positionné le média découpé. Dans un mode de réalisation particulier, le support comprend deux feuilles entre lesquels le média découpé est pris en sandwich.
En ce qui concerne la zone de séparation, le support constitutif de ladite zone est plein et le média de séparation découpé est rendue solidaire de celui-ci par exemple par collage.
En ce qui concerne la zone de collecte, pour permettre le poinçonnage ultérieur du média d’absorption au sein de l’automate, la zone de collecte présente une fenêtre au niveau de laquelle est inséré le média d'absorption. Le poinçonnage se fait au travers du média d’absorption, lequel présente avantageusement au moins une zone prédécoupée prévue à cet effet. En pratique, la zone de collecte présente deux feuilles entre lesquelles le média d'absorption est pris en sandwich.
Si une telle construction permet d'améliorer le temps d'absorption du sang, cette solution n'est cependant pas optimale. En effet, du point de vue du procédé de fabrication de la carte, il est nécessaire de multiplier le nombre d'opérations de découpe (du média et du support) augmentant ainsi le temps de fabrication et donc le coût sans oublier la fragilité des médias qui limite ce procédé. Par ailleurs, le contact des médias découpés avec les supports adjacents entraîne irrémédiablement un risque de diffusion de l'échantillon dans le support et donc une diminution du rendement.
Pour résoudre ce problème, le Demandeur a mis au point une solution améliorée qui consiste, plutôt que d'effectuer une découpe au sein d'un média existant, de former directement sur le média, la zone de forme spécifique en rendant hydrophobe au moins une partie du reste du média en dehors de la zone de forme spécifique. Le media ainsi traité peut ensuite être inséré directement dans la fenêtre de la zone de réception ou de collecte ou rendu solidaire du support constitutif de la zone de séparation, par collage notamment.
En d’autres termes et selon un mode de réalisation avantageux, les médias de préfiltration, de séparation et d’absorption sont traités partiellement dans toute leur épaisseur par au moins un agent hydrophobe pour créer des murs physiques et chimiques. Pour ce faire, on fait pénétrer un agent hydrophobe dans l'épaisseur du média en dehors de la zone de forme spécifique, c’est-à-dire de la surface destinée à être en contact avec l’échantillon.
Cet agent hydrophobe peut être appliqué sur toute ou une partie de la zone en dehors de la zone destinée à recevoir l’échantillon. Lorsque le traitement hydrophobe du média n'est effectué que partiellement, on fait pénétrer dans le média un agent hydrophobe sous la forme d'une ligne définissant le périmètre de la surface destinée à être en contact avec l’échantillon.
Ce mode de réalisation permet ainsi d'éviter les différentes étapes de découpe des médias mais également et surtout de garantir que l'échantillon ne diffuse pas :
dans la zone adjacente au niveau de laquelle l'échantillon est déposé pour ce qui est du média de préfiltration, dans la zone adjacente au niveau de laquelle l'échantillon est séparé, pour ce qui est du média de séparation, dans la zone adjacente au niveau de laquelle le plasma est collecté, pour ce qui est du média d’absorption.
Structure des médias
Média de préfiltration
Le média de préfiltration est hydrophile et il comprend majoritairement un mélange de fibres synthétiques ou artificielles. Il peut s'agir par exemple de fibres de polyester, fibre de polyamide, fibres de polyacrylamide, fibres acryliques, fibres d’acide polylactique, fibres de polypropylène, fibres de polyéthylène, fibres « island in sea », fibre de verres. Toutes ces fibres peuvent être combinées avec des fibres liantes de CoPET ou copolymer PBS/PLA, dans des proportions d’au moins 10%, préférentiellement 40%. Le média est hydrophile de par la nature du mélange fibreux utilisé. Son caractère hydrophile peut également résulter d’un traitement ultérieur du media par un agent hydrophile.
Selon une autre caractéristique, pour permettre la filtration des plus grosses molécules du sang, le média de préfiltration présente une porosité moyenne comprise entre 10 et 50 pm et préférentiellement entre 15 et 30 pm. La porosité est déterminée selon la norme à ASTM F316-03 (2011)
Média de séparation
Selon une autre caractéristique, le média de séparation présente une porosité moyenne comprise entre 3 et 7 pm, avantageusement entre 4 et 6 pm. La porosité est déterminée selon la norme à ASTM F316-03 (2011).
Fe média de séparation se présente avantageusement sous la forme d'un mélange de fibres fibrillées et de fibres choisies dans le groupe comprenant les microfibres de verre et les fibres non fibrillées. Fe mélange de fibres comprend avantageusement un liant hydrophile, et éventuellement un agent mouillant ainsi qu’un sel.
Les fibres fibrillées sont des fibres qui ont été soumises à des forces mécaniques de sorte à faire apparaître à la surface des fibres des microfibrilles. Les fibres fibrillées sont des structures branchées de forme irrégulière présentant des caractéristiques optimisées d'ancrage et de liaison. Il peut s'agir de fibres non synthétiques ou de fibres thermoplastiques.
Parmi les fibres non synthétiques, on préfère les fibres cellulosiques régénérées ou naturelles ou une combinaison des deux. Les fibres cellulosiques sont notamment choisies dans le groupe comprenant les fibres de bois raffinées ou non, de fibres de plantes annuelles comme le coton, les micro ou nano fibres de cellulose, lyocell, lyocell fibrillé et fibres de viscose. Les fibres fibrillées peuvent résulter de la combinaison de plusieurs types de fibres, telles que fibres naturelles de cellulose en combinaison avec des fibres régénérées de cellulose. Dans ce cas, le ratio en poids fibres naturelles/fibres régénérées est généralement compris entre 20:1 et 1:20, de préférence entre 10:1 et 10:10, par exemple 8:1 à 2:1.
Les microfibres de verre sont des fibres fines comprenant de la silice et d'autres oxydes qui ont un diamètre nominal compris entre 0,25 pm et 5 pm, de préférence moins de 1 pm. La surface spécifique des microfibres de verre est particulièrement élevée, en pratique supérieure à 1,5 m2/g.
Dans un mode de réalisation avantageux, les microfibres de verre ont un diamètre inférieur à 5 pm, de préférence compris entre 0,4 et 1 pm, une surface spécifique supérieure à 1,5 m2/g, de préférence supérieure à 2 m2/gramme et un ratio longueur/diamètre de 100 ou plus, en particulier de 500 ou plus.
Les fibres non-fibrillées sont des fibres polymériques telles que les fibres de polyester, de polypropylène, de polyéthylène, de polyacrylonitrile, de polyamide (nylon, par exemple nylon-6, nylon 6,6, nylon-6,12....).
En pratique, le média de séparation contient entre 50 et 99 parties, de préférence entre 70 et 98 parties en poids de microfibres de verre. Il contient en outre un complément à 100% de 1 à 50 parties en poids, de préférence entre 2 et 30 parties en poids de fibres fibrillées.
Comme déjà dit, le média de séparation contient éventuellement un agent mouillant tel que par exemple un polysorbate. Il peut s'agir notamment du polysorbate 20, polysorbate 40, polysorbate 60, polysorbate 80 ou encore d'un tensioactif organique tel qu'un polyéthylène glycol du type par exemple Triton X 100 ou encore poloxamer. L'agent mouillant représente entre 0,1 et 15 parties, de préférence entre 0,5 et 5 parties en poids du poids total de fibres.
Le média de séparation comprend également un liant hydrophile polymérique. Il s'agit notamment d'un liant choisi parmi les latex acrylate, le polyvinyle alcool, le polyvinyle acétate et autres polymères dispersés ou solubles dans l'eau. Le liant polymérique est utilisé à des concentrations comprises entre 0,1 et 10 parties, de préférence entre 0.5 et 5 parties pour 100 parties des fibres totales du média.
Le média de séparation comprend également éventuellement un sel. Il peut s'agir notamment de métaux alcalins, d’halogénures et de sulfates de terres rares alcalins, tels que chlorure de calcium et sulfate de potassium, et de chlorhydrate de bases organiques tel que le chlorhydrate de guanidine. D'autres sels, tels que le chlorure de manganèse, chlorure de potassium, chlorure de magnésium et chlorure de sodium peuvent également être utilisés. Le sel représente en pratique entre 1 et 25% en poids du média, de préférence entre 10 et 20 % en poids.
Le grammage du média de séparation est compris entre 10 à 300 g/m2, de préférence de 50 à 200 g/m2, avantageusement entre 75 et 175 g/m2.
Il présente par exemple une épaisseur comprise entre 10 et 1500 pm, de préférence comprise entre 50 et 1000 pm, avantageusement entre 100 et 750 pm, en pratique comprise entre 250 et 700 pm.
Le média de séparation utilisé dans l’invention est avantageusement un média tel que décrit dans la demande PCT/FI2016/050543.
Pour limiter la diffusion de l'échantillon de sang dans le support constitutif de la zone de séparation destinée à recevoir le média, ledit média de séparation présente sur sa face inférieure, une couche hydrophobe. De manière avantageuse, cette couche hydrophobe inférieure comprend un mélange de fibres hydrophobes du type PET, polyamide, polypropylène, polyéthylène, acide polylactique. En pratique, la couche inferieure hydrophobe est laminée sur le média de séparation. Cette couche hydrophobe peut également être obtenue en traitant seulement le verso du media de séparation avec des solutions mousse ou liquide plus ou moins visqueuses hydrophobes du type polymère fluoré, de cires, de silicones.
Le média de séparation incluant sa couche inférieure hydrophobe est rendu solidaire du support de séparation par tout moyen connu et en particulier par collage, au moyen d'un adhésif.
Média d'absorption
Le média d'absorption est quant à lui constitué de fibres synthétiques ou artificielles ou naturelles ou un mélange de celles-ci. Il s'agit par exemple d'un mélange de microfibres de verre, ou de fibres de coton, ou de lyocell ou de viscose ou de fibres PET liés par des procédés chimiques ou mécaniques.
Dimensions de la carte
La carte de collecte de l'invention est dimensionnée pour pouvoir être traitée dans un automate.
En pratique :
la zone de réception présente une longueur comprise entre 2 et 5 cm avantageusement entre 3 et 4 cm, en pratique de l’ordre de 3.5 cm, la zone de séparation présente une longueur comprise entre 4 et 7 cm, avantageusement entre 5 et 6 cm, en pratique de l’ordre de 5.5 cm, la zone de collecte présente une longueur comprise entre 3 et 7 cm, avantageusement entre 4 et 6 cm, de préférence de l'ordre de 5 cm.
La zone de collecte est avantageusement divisée en deux parties égales, une partie pour la collecte et l'autre partie faisant office de rabat.
Chaque zone présente la même hauteur à savoir compris entre 3 et 12 cm, de préférence entre 4 et 10 cm, avantageusement de l'ordre de 8.5 cm.
Les zones de préfiltration, séparation et collecte sont dimensionnées en fonction du volume d’échantillon à traiter respectivement 50, 100 et 150 pL de sang.
L’invention concerne enfin l’utilisation de la carte précédemment décrite pour la collecte de plasma. Comme déjà dit, le média de préfiltration peut être utilisé pour l’analyse des plaquettes et des globules blancs. De même, le média de séparation peut être utilisé pour l’analyse des globules rouges.
L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des exemples de réalisations suivants à l'appui des figures annexées.
La figure 1 est une représentation schématique de la carte de collecte de l'invention dépliée, face supérieure (la) face inférieure (lb).
Les figures 2a, 2b et 2c sont des représentations en perspective de la carte à différentes étapes d'utilisation.
Mode de réalisation préféré de la carte
La carte de collecte de l'invention présente 2 faces respectivement une face supérieure telle que représentée sur la figure la et une face inférieure telle que représentée sur la face lb.
La carte de collecte (1) se présente sous la forme d’un support en carton et présente trois zones respectivement une zone de réception (2) de l'échantillon de sang, une zone de séparation (3) du plasma et une zone de collecte (4) du plasma. La zone de collecte (4) présente 2 parties respectivement une partie (4.1) correspondant à la zone de collecte proprement dite et une partie (4.2) servant de rabat.
La zone de réception (2) est séparée de la zone de séparation (3) par une ligne de pliage (5) prédécoupée. La zone de séparation (3) est séparée de la zone de collecte (4) par une seconde ligne de pliage (6) également prédécoupée. Enfin, la zone de collecte (4.1) proprement dite est séparée du rabat (4.2) par une troisième ligne de pliage (7) laquelle n'est pas prédécoupée.
Dans ce mode de réalisation, la zone de réception (2) a une longueur de 3,2 cm, la zone de séparation (3) a une longueur de 5,5 cm et la zone de collecte (4) a une longueur de 4.8 cm, ladite zone étant séparée en deux parties égales de longueur de 2,5 cm. La hauteur de la carte sur toute sa longueur est de 6 cm.
La zone de réception (2) présente une fenêtre (9) dans le cadre (10) de laquelle est inséré un média de préfiltration (11). Le média de préfiltration (11) se présente sous la forme d'un rectangle dont la longueur du grand côté est égale à 5,5 cm et la longueur du petit côté est égale à 3 cm. Le média est collé sur le support pour venir recouvrir la fenêtre rectangulaire (9) précitée dont la longueur du grand côté est égale à 5 cm et la longueur du petit côté est égale à 2.1 cm. De la sorte, le média de préfiltration est accessible depuis les deux faces de la zone de réception.
Dans le média de préfiltration (11) sont formés 2 trapèzes isocèles (12.1, 12.2) destinés chacun à recevoir l'échantillon de sang. Ces trapèzes, dans cet exemple de réalisation, ont une hauteur de 2 cm, une grande base de 2 cm et une petite base de 0,65 cm.
Les trapèzes isocèles sont formés par imprégnation d'un média de préfiltration par un agent hydrophobe sur toute la surface et l'épaisseur du média en dehors de la zone prédéfinie (12.1, 12.2). En pratique, le média de préfiltration correspond au média commercialisé sous la référence HOLLYTEX® 3266 et l'agent hydrophobe est par exemple une résine fluorée.
Comme le montrent les figures la et lb, la zone de séparation présente 2 éléments essentiels que sont un média de séparation (13) et un cadre (14).
Le média de séparation (13) se présente sous la forme d'un rectangle dont la longueur du grand côté est égale à 5 cm et la longueur du petit côté est égale à 2.9 cm. Le média est partiellement collé sur le support de la zone de séparation (3). Le support dans la zone de séparation est plein et donc dépourvu de fenêtre. Il s’ensuit que le média de séparation (13) n’est accessible que depuis la face supérieure de la carte (1).
Dans le média de séparation (13) sont formés 2 trapèzes isocèles (15.1 et 15.2). Les trapèzes (15.1 et 15.2) ont une hauteur de 2.5 cm, une grande base dont la longueur est égale à 2 cm et une petite base dont la longueur est égale à 0,4 cm.
Il s’ensuit que les trapèzes (12.1, 12.2) de la zone de réception se superposent sur les trapèzes correspondants (15.1 et 15.2) de la zone de séparation après pliage de la zone de réception (2) sur la zone de séparation (3). Les trapèzes sont superposés au niveau de leur grande base. Les trapèzes de la zone de séparation étant de taille supérieure, l’extrémité opposée des trapèzes (15.1 et 15.2) n’est pas recouverte par les trapèzes (12.1, 12.2) au moment de la superposition. Cette surface libre correspond à la zone dans laquelle se concentre le plasma à l’issue de la filtration latérale.
De la même manière que précédemment, les trapèzes (15.1 et 15.2) sont formés par imprégnation du média de séparation (13) au moyen d'un agent hydrophobe en dehors des zones prédéfinies (15.1 et 15.2).
Comme le montre la figure 2c, l’extrémité (16) du média de séparation (13) repose, en regard de la petite base des trapèzes (15.1 et 15.2) sur un cadre (14). Ce cadre (14) constitue une surépaisseur agencée dans la zone de séparation (3) en regard de la zone de collecte (4), lorsque celle-ci est repliée. Le média de séparation (13) se trouve ainsi incliné d’un angle vertical positif de 15°. La présence de cette surépaisseur permet de surélever le média de séparation (13) en direction de la zone de collecte (4) et ainsi d'améliorer la vitesse d'absorption du sang et le rendement en plasma.
Selon une autre caractéristique, la face supérieure (17) du cadre (14) de même que la face supérieure (22) de la zone de séparation (3) est recouverte d'un adhésif temporaire permettant de faire adhérer les zones de réception (2) et de collecte (4) à la zone de séparation (3) au moment de l'utilisation.
Bien que cela n'apparaisse pas sur les figures, le média de séparation (13) présente avantageusement sur une de ses faces, une couche hydrophobe. Cette couche est destinée à séparer le support (3) du média de séparation (13) permettant d'éviter toute diffusion de l'échantillon dans le support au niveau de la zone de séparation (3).
Le média de séparation est en pratique un média identique à celui décrit dans l'exemple de la demande de brevet PCT/FI2016/050543. Il s’agit par exemple du média commercialisé sous la dénomination CYTOSEP® 1667 HV.
La couche hydrophobe appliquée sous le média de séparation comprend un mélange de fibres synthétiques ou artificielles, hydrophobes. Il s’agit par exemple du média commercialisé sous la référence HOLLYTEX®. En pratique, la couche hydrophobe est laminée sous le média de séparation (13).
La zone de collecte (4.1) présente une fenêtre (19) dans le cadre (20) de laquelle est inséré un média d’absorption (18). Le média d’absorption (18) se présente sous la forme d'un rectangle dont la longueur du grand côté est égale à 5 cm et la longueur du petit côté est égale à 2 cm. Le média est collé sur le support pour venir recouvrir la fenêtre rectangulaire (19) précitée dont la longueur du grand côté est égale à 4.5 cm et la longueur du petit côté est égale à 1.5 cm. De la sorte, le média d’absorption (18) est accessible depuis les deux faces de la zone de collecte (4.1). En pratique, le média d'absorption (18) est dimensionné pour venir reposer, après repliage de la zone de collecte (4.1) sur la zone de séparation (3), sur le cadre (14).
Dans le média d’absorption (18) sont formés 2 disques (21.1, 21.2) destinés chacun à collecter le plasma. Ces disques, dans cet exemple de réalisation, ont un diamètre de
1.2 cm.
Les disques sont formés par imprégnation d'un média d’absorption (18) par un agent hydrophobe sur toute la surface et l'épaisseur du média en dehors de la zone prédéfinie (21.1, 21.2). En pratique, le média d’absorption (18) correspond au média commercialisé sous la référence grade 237 par le Demandeur
La figure 2a est une représentation en perspective de la carte telle qu'elle est livrée à l'utilisateur.
La position « fermée » de la carte résulte de trois pliages consécutifs.
Dans un premier temps, on replie la zone de réception (2) sur la zone de séparation (3) selon la ligne de pliure (5). Les deux zones adhèrent l'une à l'autre grâce à la présence de l'adhésif appliqué sur la surface (22) de la zone de séparation. Une fois cette opération effectuée, on rabat ensuite la partie (4.1) de la zone de collecte (4) sur la zone de séparation (3) selon la ligne de pliure (6). La partie du cadre (20) de la zone de collecte (4) se retrouve en regard et en contact avec la surface adhésive (17) du cadre (14) à laquelle il adhère temporairement. La dernière opération consiste à déplier le rabat (4.2) sur la zone de réception (2) selon la ligne de pliure (7) de manière à recouvrir ladite zone de réception (2). De la sorte, le média de préfiltration (11) et en particulier les trapèzes isocèles (12.1, 12.2) se trouvent protégés.
Au moment de l'utilisation et tel que représenté sur la figure 2b, l'utilisateur saisit le rabat (4.1) pour le replier sur la face inférieure (avant pliage) de la partie (4.1) de la zone de collecte (4). L'utilisateur peut alors déposer l'échantillon de sang à analyser sur les trapèzes (12.1, 12.2). L'opération de séparation débute alors. Le média de préfiltration entraîne ainsi une première séparation des constituants du sang de taille la plus importante et en particulier globules blancs et plaquettes. La filtration s’opère par un écoulement vertical dudit échantillon au sein du média de préfiltration (11). Une fois le média de séparation atteint, l'échantillon est alors filtré latéralement dans le média de séparation (13), lequel permet notamment la séparation des globules rouges. Le plasma atteint ensuite la base la plus petite des trapèzes (15.1 et 15.2). Le média de séparation (13), légèrement incliné par rapport au support, permet d'améliorer le rendement en plasma. Le plasma atteignant l'extrémité des trapèzes (15.1 et 15.2) entre alors en contact avec le média d'absorption (18) et spécifiquement avec les zones (21.1 et 21.2) du média. Une fois l'absorption effectuée, il ne reste plus à l'utilisateur qu'à saisir le rabat (4.2) puis décoller la zone de collecte (4) de la zone de séparation (3). Les zones de réception (2) et de collecte (4) sont ensuite détachées de manière à ce que les échantillons puissent être ultérieurement traités dans des automates. Une des opérations consiste notamment à venir poinçonner la zone au niveau de laquelle est stocké l’échantillon biologique. Il s’agit des disques (21.1 et 21.2) pour ce qui est du média d’absorption.
Résultats
L’exemple suivant montre l’impact de la présence d’un média de préfiltration sur la 10 vitesse d’absorption du sang et le rendement en plasma. La carte utilisée est celle décrite ci-avant.
Le média de préfiltration est celui connu sous la référence HOLLYTEX® 3266.
Le média de séparation est celui connu sous la référence CYTOSEP® 1667 HV. Il est laminé avec une couche inférieure connue sous la référence Reemay® 2200 Le média d’absorption est celui connu sous la référence grade 237
Pour chaque configuration, 3 essais ont été conduits en chargeant à chaque fois 100pL de sang à 39% d’hématocrite.
Les résultats figurent dans le tableau suivant :
Média de préfiltration | Media de séparation | Media d’absorption | Temps d’absorption en minute | Rendement en plasma en % |
non | Cytosep® 1667 laminé | 237 | 3.0 | 47 |
non | Cytosep® 1667 laminé | 237 | 2.7 | 51 |
non | Cytosep® 1667 laminé | 237 | 3.0 | 37 |
moyenne | 45 | |||
HOLLYTEX® 3266 | Cytosep® 1667 laminé | 237 | 0.8 | 35 |
HOLLYTEX® 3266 | Cytosep® 1667 laminé | 237 | 0.7 | 53 |
HOLLYTEX 3266 | Cytosep® 1667 laminé | 237 | 0.8 | 59 |
moyenne | 49 |
Ces résultats montrent que le temps d’absorption augmente en présence d’un préfiltre. En outre, le rendement en plasma n’est pas affecté par la présence du préfiltre mais au contraire augmente.
Claims (16)
- REVENDICATIONS1/ Carte de collecte (1) de plasma à partir d’un échantillon de sang se présentant sous la forme d’un support comprenant 2 zones respectivement :- une zone de séparation (3) comprenant au moins un média de séparation (13) du plasma selon un flux latéral en direction d’une zone de collecte ;- une zone de collecte (4) du plasma comprenant au moins un média d’absorption (18);caractérisée en ce qu’elle présente en outre une zone de réception (2) de l’échantillon comprenant un média de préfiltration (11) destiné à recevoir ledit échantillon.
- 2/ Carte selon la revendication 1, caractérisée en ce que les zones de réception (2) et de séparation (3) sont séparées par une ligne de pliage (5) positionnée de sorte à ce que ledit échantillon s’écoule verticalement à travers le média de préfiltration (11) jusqu’au média de séparation (13) après repliage de la zone de réception (2) sur la zone de séparation (3) et superposition au moins partielle du média de préfiltration (11) sur le média de séparation (13).
- 3/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les zones de séparation (3) et de collecte (4) sont séparées par une ligne de pliage (6) positionnée de sorte à ce que le plasma soit absorbé par le média d’absorption (18) après repliage de la zone de collecte (4) sur la zone de séparation (3) et superposition au moins partielle du média d’absorption (18) sur le média de séparation (13) au moins dans la partie du média de séparation destinée à concentrer le plasma.
- 4/ Carte selon l’une des revendications 2 à 3, caractérisée en ce que la zone de collecte (4) se prolonge par un rabat (4.2) séparé de ladite zone de collecte (4.1) par une ligne de pliage (7) parallèle à la ligne de pliage (6) séparant la zone de séparation (3) de la zone de collecte (4) , le rabat (4.2) étant dimensionné pour recouvrir la zone de réception (2) lorsqu’elle est repliée sur la zone de séparation (3).
- 5/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les zones de réception (2) et de collecte (4) sont avantageusement détachables (5, 6) de la zone de séparation
- 6/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la zone de séparation présente des moyens d’inclinaison (14) du média de séparation (13) d’un angle vertical positif en direction de la zone de collecte par rapport au support compris entre 3° et 30°, avantageusement entre 15° et 20°.
- 7/ Carte selon la revendication 5, caractérisée en ce que les moyens d’inclinaison se présentent sous la forme d’une surépaisseur du support localisée en regard de la zone de collecte après repliage de celle-ci sur la zone de séparation.
- 8/ Carte selon l’une des revendications précédente, caractérisée en ce que le média de séparation (13) présente la forme d’un trapèze isocèle (15.1, 15.2), dont la petite base est orientée en direction de la zone de collecte.
- 9/ Carte selon la revendication 8, caractérisée en ce que le média de préfiltration (11) présente la forme d’un trapèze isocèle (12.1, 12.2), dont les dimensions sont identiques ou sensiblement identiques à celles du trapèze (15.1, 15.2) constitutif du média de séparation (13), à l’exception de la longueur de la petite base, qui est supérieure.
- 10/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le média de préfiltration (11) comprend un mélange de fibres synthétiques ou artificielles, hydrophiles.
- 11/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le média de préfiltration (11) a une porosité moyenne comprise entre 10 et 50 pm et préférentiellement entre 15 et 30 pm.
- 12/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le média de séparation (13) contient entre 50 et 99 parties, de préférence entre 70 et 98 parties en poids de microfibres de verre et de 1 à 50 parties en poids, de préférence entre 2 et 30 parties en poids de fibres fibrillées.
- 13/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le média de séparation (13) présente une porosité moyenne comprise entre 3 et 7 pm, avantageusement entre 4 et 6 pm.
- 14/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le média de séparation (11) présente sur sa face inférieure, une couche hydrophobe.
- 15/ Carte selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les médias sont traités partiellement dans toute leur épaisseur par au moins un agent hydrophobe.
- 16/ Carte selon la revendication précédente, caractérisée en ce que l’agent hydrophobe est appliqué sous la forme d'une ligne définissant le périmètre de la surface destinée à être en contact avec l’échantillon.10 17/ Utilisation de la carte objet de l’une des revendications 1 à 16 pour la collecte de plasma à partir d’un échantillon de sang.1/3ΔCÜ ο2/3
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EP2375249A2 (fr) * | 2010-04-09 | 2011-10-12 | F. Hoffmann-La Roche AG | Dispositifs et procédé de séparation de plasma d'un échantillon sanguin |
WO2016025726A1 (fr) * | 2014-08-13 | 2016-02-18 | Vivebio, Llc | Réseau de membranes analytiques, et dispositif de séparation de plasma l'incorporant |
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2017
- 2017-04-18 FR FR1753332A patent/FR3065284B1/fr active Active
-
2018
- 2018-04-18 WO PCT/FI2018/050272 patent/WO2018193159A1/fr active Application Filing
Patent Citations (3)
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