FR3035971A1 - Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b - Google Patents

Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b Download PDF

Info

Publication number
FR3035971A1
FR3035971A1 FR1554122A FR1554122A FR3035971A1 FR 3035971 A1 FR3035971 A1 FR 3035971A1 FR 1554122 A FR1554122 A FR 1554122A FR 1554122 A FR1554122 A FR 1554122A FR 3035971 A1 FR3035971 A1 FR 3035971A1
Authority
FR
France
Prior art keywords
polyclonal human
human immunoglobulins
composition
polyclonal
immunoglobulins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
FR1554122A
Other languages
English (en)
Inventor
Philippe Paolantonacci
Coupade Catherine De
Stephane Boyer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LFB SA
Original Assignee
LFB SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LFB SA filed Critical LFB SA
Priority to FR1554122A priority Critical patent/FR3035971A1/fr
Priority to EP16723306.3A priority patent/EP3291904A1/fr
Priority to PCT/EP2016/060158 priority patent/WO2016177871A1/fr
Priority to US15/568,781 priority patent/US20180100023A1/en
Publication of FR3035971A1 publication Critical patent/FR3035971A1/fr
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/34—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood group antigens
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/80—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood groups or blood types or red blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

La présente invention concerne une composition fortement enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B, comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. Elle concerne également un procédé de préparation d'une telle composition, ainsi que l'utilisation de la composition pour la préparation d'un témoin positif utile dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'un concentré d'immunoglobulines humaines normales, et l'utilisation de la composition pour la détermination du groupe sanguin d'un sujet.

Description

1 DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention se situe dans le domaine des produits de référence utilisés pour la caractérisation des concentrés thérapeutiques d'immunoglobulines polyclonales. Elle concerne une composition fortement enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B, un procédé de préparation d'une telle composition, ainsi que l'utilisation de la composition pour la préparation d'un témoin positif utile dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'un concentré d'immunoglobulines humaines normales, et l'utilisation de la composition pour la détermination du groupe sanguin d'un sujet. ART ANTERIEUR Les immunoglobulines humaines normales (immunoglobulines humaines polyvalentes purifiées à partir de pools de plasma d'au moins 1000 donneurs) sont utilisées dans le traitement de pathologies de plus en plus nombreuses. Elles sont notamment utilisées comme traitement de substitution dans les déficits immunitaires primaires (déficits congénitaux) ou secondaires (leucémie lymphoïde chronique, myélome, infections après greffe de moelle osseuse, infections bactériennes récidivantes chez l'enfant infecté par le VIN) avec défaut de production d'anticorps. Elles sont également utilisées en tant que traitement innnnunonnodulateur dans différentes pathologies autoinnnnunes, telles que le purpura thronnbopénique idiopathique (PTI), la rétinochoroïdite de Birdshot, le syndrome de Guillain-Barré, la neuropathie motrice nnultifocale (NMM), les polyradiculonévrites inflammatoires dénnyélinisantes chroniques (PIDC), ou dans la maladie de Kawasaki. Cette utilisation grandissante nécessite un approvisionnement toujours plus important en immunoglobulines humaines normales. Cela conduit à l'utilisation de pools toujours plus grands de donneurs. Une proportion non négligeable des donneurs est de groupe sanguin 0, et leur plasma contient par conséquent des immunoglobulines anti-A et anti- B, dirigées contre les antigènes des groupes sanguins A et B. Par ailleurs, les donneurs de groupe sanguin A possèdent généralement des immunoglobulines anti-B et les donneurs de groupe sanguin B des immunoglobulines anti-A. Seuls les donneurs de groupe sanguin AB ne possèdent pas d'immunoglobulines anti-A et anti-B, mais ceux-ci sont peu nombreux.
3035971 2 Or, lorsque les immunoglobulines anti-A et anti-B sont présentes en proportions trop importantes dans les immunoglobulines humaines normales, celle-ci sont susceptibles de provoquer des hémolyses accidentelles, potentiellement sévères, chez les patients traités porteurs des antigènes A et/ou B.
5 Par conséquent, les autorités de santé requièrent que les immunoglobulines humaines normales soient testées vis-à-vis de l'activité d'agglutination des hématies des groupes sanguins A et B, et imposent des limites quant à cette activité. Ainsi, pendant longtemps, selon la pharmacopée européenne, les immunoglobulines humaines normales par voie intraveineuse (IVIG) ne devaient pas présenter d'agglutination des hématies A 10 et B à la dilution 1/64 d'une solution de concentration initiale de 30 g/l (soit 3%), dans un test indirect à l'antiglobuline (TIA, également appelé test de Coonnbs indirect). Cependant, il a ensuite été montré que le test TIA possède une forte variabilité et est en outre susceptible de sous-estimer l'activité anti-A et anti-B des immunoglobulines humaines normales (Thorpe et al. Biologicals.
2005 Jun;33(2):111-6). En effet, le test 15 TIA repose sur l'utilisation d'une antiglobuline, c'est-à-dire d'immunoglobulines d'origine animale reconnaissant spécifiquement les immunoglobulines humaines. Or, la capacité de l'antiglobuline à agglutiner les hématies de groupe A ou B revêtues d'immunoglobulines anti-A ou anti-B est susceptible d'être saturée par la présence concomitante d'une forte concentration d'immunoglobulines humaines dirigées contre 20 d'autres antigènes que ceux des groupes sanguins A et B. Afin de limiter cette variabilité, Thorpe et collaborateurs ont développé une méthode d'agglutination directe, sans utilisation d'antiglobuline, dans laquelle des hématies A ou B traitées à la papaïne sont mises en contact avec des dilutions au demi en série d'une solution d'immunoglobulines humaines normales à 5% (50 g/l), dans une nnicroplaque avec des 25 puits en V. Après centrifugation, la plaque est inclinée à un angle d'environ 70° pendant environ 4-5 minutes. En cas d'agglutination, le culot de cellules reste collé au fond du puits en V, formant un point bien rond. Dans le cas contraire, le culot de cellules non agglutiné glisse le long de la paroi du puits en V, générant ainsi une forme de type gouttelette (Thorpe et al. Biologicals.
2005 Jun;33(2):111-6).
30 Bien que conduisant à des résultats moins variables que le test TIA, cette méthode manquait encore de témoins positifs et négatifs. Pour pallier ce manque, Thorpe et collaborateurs ont ensuite développé trois produits d'immunoglobulines humaines de référence, destinés à calibrer la méthode d'agglutination directe précédemment développée (Thorpe et al. Vox Sang.
2009 Aug;97(2):160-8 ; Thorpe et al. Pharnneur Bio 35 Sci Notes.
2010 Apr;2010(1):39-50 ; Document WHO/BS/08.2091 téléchargeable à l'adresse http://apps.whoint/iris/handle/10665/69970?locale=fr): - un témoin négatif (fraction 07/308), constitué d'immunoglobulines humaines normales à 5% (50 g/l) purifiées à partir de plasma de donneurs tous de groupe sanguin AB, dont le plasma ne contient pas d'immunoglobulines anti-A et anti-B. - un témoin positif (fraction 07/306), constitué d'immunoglobulines humaines normales à 5% (50 g/l) connues pour posséder une activité anti-A et anti-B 3035971 3 supérieure à la moyenne des immunoglobulines humaines normales, mais ne produisant pas d'agglutination d'hématies A ou B à une dilution de 1/64 dans la méthode d'agglutination directe précédemment développée. - Un témoin positif limite (fraction 07/310), constitué de la fraction 07/306, à 5 laquelle ont été ajoutés des quantités d'un anticorps monoclonal nnurin anti-A (BRIC 145) et d'un anticorps monoclonal nnurin anti-B (BGRL 1) telles que ce témoin produit une agglutination d'hématies A ou B pour une dilution d'au plus 1/64 dans la méthode d'agglutination directe précédemment développée. Les tests réalisés avec ces témoins ont montré que ceux-ci peuvent permettre de 10 standardiser les tests d'agglutination pour les immunoglobulines anti-A et anti-B, de vérifier que les tests utilisés sont suffisamment spécifiques et sensibles, et de faciliter l'identification des lots d'immunoglobulines humaines normales dont l'activité anti-A et anti-B excède celle tolérée par les autorités de santé. Suite à ces travaux, les trois témoins mentionnés ci-dessus ont été adoptés comme 15 réactifs de référence par la pharmacopée européenne, par l'organisation mondiale de la santé (OMS) et par la Food and Drug Administration (FDA), et la limite d'activité anti-A et anti-B des IVIG dans la pharmacopée européenne a été revue : les IVIG doivent désormais ne pas présenter d'agglutination des hématies A et B à la dilution 1/64 d'une solution de concentration initiale de 50 g/l (5%), dans un test d'agglutination directe 20 particulier correspondant à celui développé par Thorpe et collaborateurs (Pharmacopée européenne, chapitre 2.6.20 tel que révisé par le supplément 7.2 de janvier 2011). Cependant, les témoins positifs mentionnés ci-dessus ont leurs inconvénients, et en particulier le témoin positif limite, censé posséder une activité anti-A et anti-B correspondant à la limite acceptée par les autorités de santé. En effet, comme indiqué 25 par Thorpe et collaborateurs, un des principaux défauts de ce témoin positif limite est sa disponibilité limitée. Notamment, du fait de sa disponibilité insuffisante, l'utilisation de ce produit n'est à ce jour recommandée que pour vérifier l'activité anti-A et anti-B des concentrés d'immunoglobulines humaines normales possédant une activité anti-A anti-B supérieure à celle de la fraction 07/306 (témoin positif, IVIG à 5% avec une 30 activité anti-A et anti-B supérieure à la moyenne mais inférieure aux limites fixées par les autorités de santé) (Thorpe et al. Vox Sang.
2009 Aug;97(2):160-8 ; Thorpe et al. Pharnneur Bio Sci Notes.
2010 Apr;2010(1):39-50). Ainsi, la disponibilité limitée du seul témoin positif limite existant à ce jour ne permet pas son utilisation systématique dans les tests d'agglutination pour les immunoglobulines anti-A et anti-B des concentrés 35 d'immunoglobulines humaines normales. De plus, les immunoglobulines anti-A et anti-B présentes dans ce témoin positif limite sont d'origine nnurine et non humaine, et sont en outre monoclonales et non polyclonales, contrairement aux immunoglobulines anti-A et anti-B présentes dans les concentrés d'immunoglobulines humaines normales. Ces deux différences peuvent 40 conduire à sous-estimer ou surestimer l'activité anti-A et anti-B d'immunoglobulines humaines normales, ce qui n'est pas souhaitable dans les deux cas.
3035971 4 Il existe donc un besoin pour de nouveaux témoins positifs permettant de calibrer les tests d'agglutination pour les immunoglobulines anti-A et anti-B et de détecter de façon fiable les lots d'immunoglobulines humaines normales ayant une activité anti-A et antiB supérieure aux limites acceptées par les autorités de santé.
5 Dans le but d'éviter les hémolyses accidentelles sans réduire les pools de donneurs susceptibles d'être utilisés, les fractionneurs de plasma ont développé des procédés pour éliminer les immunoglobulines anti-A et anti-B de leurs concentrés d'immunoglobulines humaines normales.
10 Ainsi, W001/27623 et W02007/077365 décrivent l'utilisation de différents supports de chromatographie d'affinité se liant spécifiquement aux immunoglobulines anti-A et antiB pour éliminer les immunoglobulines anti-A et anti-B de compositions biologiques, notamment de concentrés d'immunoglobulines humaines normales. La fraction non adsorbée ne comprenant pas d'immunoglobulines anti-A et anti-B est récupérée par 15 percolation, pour traitement et conditionnement ultérieur. La colonne de chromatographie d'affinité anti-A anti-B est ensuite régénérée par des lavages qui sont éliminés. La fraction d'immunoglobulines anti-A et anti-B adsorbée lors de l'étape de chromatographie d'affinité correspond donc aujourd'hui à une fraction perdue. RESUME DE L'INVENTION 20 Or, dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont mis en évidence que la fraction d'immunoglobulines polyclonales anti-A et anti-B adsorbée sur la colonne de chromatographie d'affinité visant à éliminer les immunoglobulines anti-A et anti-B, et obtenue par assemblage de deux fractions de lavage de la colonne, peut être utilisée pour préparer un nouveau témoin positif utile pour calibrer les tests d'agglutination 25 pour les immunoglobulines anti-A et anti-B et pour détecter de façon fiable les lots d'immunoglobulines humaines normales ayant une activité anti-A et anti-B supérieure aux limites acceptées par les autorités de santé. Ce nouveau témoin positif a l'avantage d'être constitué des mêmes immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B que celles susceptibles d'être présentes en quantité variable dans les concentrés 30 d'immunoglobulines humaines normales. De plus, au vu de la quantité grandissante d'immunoglobulines humaines normales produites chaque année, ce nouveau témoin positif pourrait être produit dans des quantités suffisantes pour permettre son utilisation systématique comme témoin positif limite dans tous les tests d'agglutination pour les immunoglobulines anti-A et anti-B des concentrés d'immunoglobulines 35 humaines normales. Dans un premier aspect, la présente invention concerne donc une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la 3035971 5 composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. Avantageusement, les immunoglobulines humaines polyclonales représentent au moins 85% en poids des protéines totales de la composition. Dans un mode de réalisation avantageux, au moins 80% en poids des immunoglobulines 5 humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A. Dans un autre mode de réalisation avantageux, au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans encore un autre mode de réalisation avantageux, la composition comprend à la fois des 10 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) est compris entre 1/10 et 10/1. Dans un mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines 15 humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 2/1 et 10/1. Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des 20 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 1/10 et 1/2.
25 Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est équilibrée dans les deux types d'immunoglobulines, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 3/10 et 30 7/10, avantageusement entre 4/10 et 6/10. L'invention concerne également un procédé de préparation d'une composition selon l'invention, comprenant les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain 35 enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, et 40 c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée.
3035971 6 Lorsqu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, le procédé comprend avantageusement les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain 5 enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, 10 c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée, d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et e) récolte de la fraction non adsorbée. Lorsqu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes 15 dans la composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, le procédé comprend avantageusement les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand 20 spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée, d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un 25 ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, et e) récolte de la fraction non adsorbée. Dans un procédé de préparation selon l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des antigènes du groupe A de type 1, 2, 3 et 4.
30 Dans un procédé de préparation selon l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 et 4. Dans un procédé de préparation selon l'invention, le support utilisé à l'étape a) et/ou à l'étape d) se présente avantageusement sous la forme : 35 a) de particules (notamment de particules de polymère) greffées par le ou les ligands d'intérêt, ou b) d'une membrane polynnérique, la membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt. Les particules sont avantageusement incorporées dans un gel ou une résine, qui est 40 utilisé comme matrice d'une colonne de chromatographie d'affinité. De même, la membrane polynnérique peut être incluse dans une colonne de chromatographie 3035971 7 d'affinité. Le lot de plasma humain ou la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sont alors adsorbés sur la colonne de chromatographie d'affinité, et la fraction adsorbée est éluée et récupérée. Le polymère des particules ou de la membrane est avantageusement choisi parmi la 5 cellulose et ses dérivés, l'agarose, le dextran, les polyacrylates, le polystyrène, le polyacrylarnide, le polyrnéthacrylannide, les copolymères de styrène et divinylbenzène, ou les mélanges de ces polymères. Dans un procédé de préparation selon l'invention, le ligand d'intérêt est avantageusement greffé sur les particules de polymères ou sur la membrane 10 polyrnérique par l'intermédiaire d'un espaceur. L'invention concerne en outre une composition susceptible d'être obtenue par un procédé de préparation selon l'invention. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l'invention comme 15 témoin positif dans une méthode de dosage de l'activité anti-A ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un témoin positif et/ou d'un témoin positif limite destinés à être utilisés dans une méthode de dosage de l'activité anti-A ou anti-B d'une composition 20 comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales. L'invention concerne également un procédé de préparation d'un témoin positif destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, comprenant les étapes suivantes : 25 a) la fourniture d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales possédant une activité anti-A et/ou une activité anti-B inférieures à une valeur limite donnée dans ladite méthode de dosage, et b) l'ajout d'une composition selon l'invention. L'invention concerne également un procédé de préparation d'un témoin positif inférieur 30 à la limite, d'un témoin positif limite ou d'un témoin positif supérieur à la limite, destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, comprenant les étapes suivantes : a) la fourniture d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines 35 polyclonales possédant une activité anti-A et une activité anti-B inférieures à une valeur limite donnée dans ladite méthode de dosage, b) l'ajout de quantités croissantes d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti- 40 A et/ou d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon 3035971 8 l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, pour obtenir différentes compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, c) le dosage par ladite méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B des 5 compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti- B obtenues à l'étape b), et d) la sélection de la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B ayant une activité anti-A et/ou anti-B dans ladite méthode de dosage inférieure (pour obtenir un témoin positif inférieur à la limite), 10 égale (pour obtenir un témoin positif limite) ou supérieure (pour obtenir un témoin positif supérieur à la limite) à ladite valeur limite. L'invention concerne en outre un témoin positif (témoin positif inférieur à la limite, témoin positif limite, ou témoin positif supérieur à la limite) destiné à être utilisé dans 15 une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, susceptible d'être obtenu par l'un des procédés selon l'invention de préparation d'un témoin positif décrits ci-dessus. L'invention concerne enfin l'utilisation d'une composition caractérisée en ce qu'au 20 moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B ou d'une composition susceptible d'être obtenue par le procédé selon l'invention dans un test de détermination du groupe sanguin d'un sujet. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION 25 Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont mis en évidence que la fraction d'immunoglobulines polyclonales anti-A et/ou anti-B adsorbée sur la colonne de chromatographie d'affinité visant à éliminer les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B peut être utilisée pour préparer un nouveau témoin positif utile pour calibrer les tests d'agglutination pour les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B et pour détecter de façon 30 fiable les lots d'immunoglobulines humaines normales ayant une activité anti-A et/ou anti-B supérieure aux limites acceptées par les autorités de santé. Ce nouveau témoin positif a l'avantage d'être constitué des mêmes immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B que celles susceptibles d'être présentes en quantité variable dans les concentrés d'immunoglobulines humaines normales. De plus, au vu de 35 la quantité grandissante d'immunoglobulines humaines normales produites chaque année, ce nouveau témoin positif pourrait être produit dans des quantités suffisantes pour permettre son utilisation systématique comme témoin positif limite dans tous les tests d'agglutination pour les immunoglobulines anti-A et/ou anti-B des concentrés d'immunoglobulines humaines normales.
3035971 9 Définitions Par - anticorps » ou - immunoglobuline », on entend une molécule comprenant au moins un domaine de liaison à un antigène donné et un domaine constant comprenant un fragment Fe capable de se lier aux récepteurs FeR.
5 Par - immunoglobulines humaines polyclonales », on entend une composition d'immunoglobulines humaines dirigées contre de nombreux antigènes distincts, et comprenant, pour chaque antigène reconnu, une pluralité d'immunoglobulines distinctes capables de reconnaitre ledit antigène, généralement au niveau de plusieurs épitopes distincts. De telles immunoglobulines humaines polyclonales sont 10 généralement purifiées à partir du plasma d'un ou de préférence de plusieurs donneurs (on parle alors d'un pool de donneurs). Les immunoglobulines humaines normales thérapeutiques sont ainsi purifiées à partir de pools de plasma de généralement au moins 1000 donneurs. Par - immunoglobulines humaines polyclonales anti-A » ou - immunoglobulines anti-A », 15 on entend des immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A. Les - antigènes du groupe sanguin A » ou - antigènes A » sont caractérisés par la présence d'un trisaccharide comprenant une N-acétylgalactosarnine (abrégé dans la présente description en - GalNAc ») liée à un galactose (abrégé dans la présente description en - Gal »), lui-même lié à un fucose (abrégé dans la présente 20 description en - Fuc »), selon la séquence suivante : GalNAca1 -3(Fuca1-2)Gal. Ce trisaccharide peut être lui-même attaché par son galactose central à d'autres sucres, dont le nombre et l'assemblage varie en fonction du type d'antigène A, comme indiqué dans le Tableau 1 ci-dessous pour les antigènes A de type 1 à 4, et de la présence ou l'absence ainsi que la nature d'un antigène de Lewis. Type 1 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Gal01 -3GlcNAcB1-3GalB1 -4Glc-R Type 2 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Gal01 -4GlcNAc01 -3GalB1-4Glc-R Type 3 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Gal01 -3GalNAca1 -3GalB1 -4GlcNAc-R Type 4 GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Gal01 -3GalNAc01 -3Gala1 -4Gal-R 25 Tableau 1. Structure de différents types d'antigène du groupe sanguin A. GalNAc : N-acétylgalactosarnine, Fuc : fucose, Gal : galactose, GlcNAc : N- acétylglucosarnine, Glc : glucose, R: support (oligosaccharide, glycoprotéine, glycolipide). Le trisaccharide déterminant du groupe A est indiqué en gras.
30 Par - immunoglobulines humaines polyclonales anti-B » ou - immunoglobulines anti-B », on entend des immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B. Les - antigènes du groupe sanguin B » ou - antigènes B » sont caractérisés par la présence d'un trisaccharide comprenant un premier galactose lié à un second galactose, lui-même lié à un fucose, selon la séquence suivante : Gala1 - 35 3(Fuca1 -2)Gal.
3035971 10 Ce trisaccharide peut être lui-même attaché par son galactose central à d'autres sucres, dont le nombre et l'assemblage varie en fonction du type d'antigène B, comme indiqué dans le Tableau 2 ci-dessous pour les antigènes B de type 1 à 4, et de la présence ou l'absence ainsi que la nature d'un antigène de Lewis.
5 Type 1 Gala1-3(Fuca1-2)Galf31-3GlcNAcf31-3GalB1-4Glc-R Type 2 Gala1-3 (Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAcf31-3GalB1-4Glc-R Type 3 Gala1-3 (Fuca1-2)Ga1131-3GalNAca1 -3GalB1-4GlcNAc-R Type 4 Gala1-3(Fuca1-2)Galf31-3GalNAcf31-3Gala1 -4Gal-R Tableau 2. Structure de différents types d'antigène du groupe sanguin B. GalNAc : N-acétylgalactosannine, Fuc : fucose, Gal : galactose, GlcNAc : N- acétylglucosannine, Glc : glucose, R: support (oligosaccharide, glycoprotéine, glycolipide). Le trisaccharide déterminant du groupe B est indiqué en gras.
10 Par - fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales », on entend toute fraction du plasma humain susceptible d'être obtenue par fractionnement du plasma humain et dont le pourcentage en poids des immunoglobulines polyclonales par rapport aux protéines totales de la fraction, est 15 supérieur à celui du plasma humain. De telles fractions sont avantageusement obtenues par fractionnement de pools de plasma d'au moins 1000 donneurs. Elles peuvent notamment inclure toute partie ou sous-partie du plasma, ayant fait l'objet d'une ou plusieurs étapes de purification et notamment, le surnageant de plasma cryoprécipité, le cryoprécipité de plasma (remis ou non en suspension), les fractions I à V obtenues par 20 fractionnement éthanolique (selon la méthode de Cohn ou de Kistler Et Nitschnnann), le surnageant et le précipité obtenus après précipitation à l'acide caprylique et/ou au caprylate, les filtrats, ou toute fraction enrichie en immunoglobulines (éluats de chromatographies et/ou fractions non adsorbées) par séparation chronnatographique, comme décrit notamment dans W099/64462 et W002/092632, et plus particulièrement 25 dans W002/092632. Par - ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A », on entend une molécule se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-A telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. De tels ligands 30 peuvent notamment être choisis parmi les oligosaccharides représentant les antigènes du groupe sanguin A. Par - oligosaccharide représentant les antigènes du groupe sanguin A », on entend tout oligosaccharide comprenant le trisaccharide caractéristique des antigènes du groupe sanguin A tel que défini ci-dessus : GalNAca1 -3(Fuca1-2)Gal. Un tel oligosaccharide peut en outre comprendre d'autres sucres présents dans les antigènes 35 du groupe sanguin A définis ci-dessus. Notamment, outre le trisaccharide GalNAca1 - 3(Fuca1-2)Gal, un tel oligosaccharide peut également être choisi parmi les tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe 3035971 11 A de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus et comprenant le trisaccharide caractéristique GalNAca1 -3 (Fuca1-2)Gal : - Tétrasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GlcNAc, 5 o Type 2: GalNAca1-3 (Fuca1- 2 )Gal(31 -4GlcNAc, o Type 3 ou 4: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GalNAc - Pentasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal01-3GlcNAc 01-3Gal, o Type 2: GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal01 -4GlcNAc 01-3Gal, 10 o Type 3 : GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GalNAc al-3Gal, o Type 4: GalNAca1-3(Fuca1-2)Ga101-3GalNAc 01-3Gal, - Hexasaccharides : o Type 1 : GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal01-3GlcNAc 01-3GalB1-4Glc, o Type 2: GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal01 -4GlcNAc 01-3GalB1-4Glc, 15 o Type 3 : GalNAca1-3 (Fuca1-2)Gal01 -3GalNAc al -3GalB1-4GlcNAc, o Type 4: GalNAca1-3 (Fuca1- 2 )Gal(31 -3GalNAc 01-3Gala1-4Gal. L'oligosaccharide peut également comprendre des répétitions du trisaccharide caractéristique GalNAca1 -3(Fuca1-2)Gal, ou des tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe A de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-20 dessus. Avantageusement, le ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A est le trisaccharide caractéristique GalNAca1 -3(Fuca1- 2)Gal.
25 Par - ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B », on entend une molécule se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-B telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. De tels ligands peuvent notamment être choisis parmi les oligosaccharides représentant les antigènes du groupe sanguin B. Par - oligosaccharide représentant les antigènes du groupe sanguin 30 B », on entend tout oligosaccharide comprenant le trisaccharide caractéristique des antigènes du groupe sanguin B tel que défini ci-dessus : Gala1 -3(Fuca1-2)Gal. Un tel oligosaccharide peut en outre comprendre d'autres sucres présents dans les antigènes du groupe sanguin B définis ci-dessus. Notamment, outre le trisaccharide Gala1 - 3(Fuca1-2)Gal, un tel oligosaccharide peut également être choisi parmi les 35 tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus et comprenant le trisaccharide caractéristique Gala1 -3 (Fuca1-2)Gal : - Tétrasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31-3GlcNAc, 40 o Type 2: Galal -3 (Fucal -2)Galf31 -4G1cNAc, o Type 3 ou 4: Gala1-3(Fucal-2)Ga1131 -3GalNAc 3035971 12 - Pentasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GlcNAc f31 -3Gal, o Type 2: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -4GlcNAc f31 -3Gal, o Type 3 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc al -3Gal, 5 o Type 4: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc f31 -3Gal, - Hexasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GlcNAc f31 -3GalB1-4Glc, o Type 2: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -4GlcNAc f31 -3GalB1-4Glc, o Type 3 : Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc al -3GalB1-4GlcNAc, 10 o Type 4: Gala1-3(Fucal -2)Galf31 -3GalNAc f31 -3Galal -4Gal. L'oligosaccharide peut également comprendre des répétitions du trisaccharide caractéristique Gala1-3(Fucal -2)Gal, ou des tétrasaccharides, pentasaccharides et hexasaccharides dérivés des antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 ou 4 décrits ci-dessus.
15 Avantageusement, le ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B est le trisaccharide caractéristique Galal -3(Fucal -2)Gal. Dans toute la présente description, une référence à - un » ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B inclut la possibilité d'utiliser 20 soit un seul type de ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti- A ou anti-B (c'est-à-dire que tous les ligands greffés sur le support ont la même structure chimique), soit plusieurs types de ligands distincts (c'est-à-dire de structure chimique différente) spécifique(s) des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B. En revanche, il convient de comprendre que chaque ligand de structure 25 chimique donnée susceptible d'être utilisé est nécessairement greffé plusieurs fois sur le support, de façon à ce que les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B puissent être retenues par le support. L'homme du métier sait quelle densité de ligand doit être utilisée pour permettre une adsorption optimale des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B sur le support.
30 Par - témoin positif » d'une méthode de dosage d'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, on entend une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B.
35 Les autorités réglementaires requièrent que les compositions d'immunoglobulines humaines normales aient une activité anti-A et une activité anti-B inférieure à une valeur limite, fixée à un temps donné, mais susceptible de varier au cours du temps et des modifications des exigences des autorités réglementaires. Pour une valeur limite donnée d'activité anti-A et/ou anti-B, l'expression - témoin 40 positif » recouvre trois types de témoins positifs, appelés respectivement dans la présente description - témoin positif inférieur à la limite », - témoin positif limite », et 3035971 13 - témoin positif supérieur à la limite », chacun de ces témoins positifs présentant un intérêt dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B. Par - témoin positif inférieur à la limite » d'une méthode de dosage d'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines 5 polyclonales, on entend un témoin positif comprenant une quantité d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B générant dans la méthode de dosage une valeur d'activité inférieure à une valeur limite prédéfinie. Une telle valeur limite peut notamment correspondre à la valeur maximale d'activité anti-A et/ou anti-B acceptée par les autorités de santé d'un pays pour les immunoglobulines humaines normales 10 destinées à une administration chez l'homme par toute voie d'administration, notamment par voie intraveineuse ou intramusculaire ou sous-cutanée. De tels témoins positifs inférieurs à la limite sont utiles notamment pour vérifier que le dosage réalisé s'est déroulé de façon satisfaisante, un tel témoin devant systématiquement posséder une activité anti-A et/ou anti-B inférieure à la valeur limite choisie. Il peut également 15 permettre d'établir si un concentré thérapeutique se trouve proche de la valeur limite maximale acceptée par les autorités de santé ou bien très en-dessous de cette limite. Par - témoin positif limite » d'une méthode de dosage d'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, on entend un témoin positif comprenant une quantité d'immunoglobulines humaines polyclonales 20 anti-A et/ou anti-B générant dans la méthode de dosage une valeur d'activité égale à une valeur limite prédéfinie. Une telle valeur limite peut notamment correspondre à la valeur maximale d'activité anti-A et/ou anti-B acceptée par les autorités de santé d'un pays pour les immunoglobulines humaines normales destinées à une administration chez l'homme par toute voie d'administration, notamment par voie intraveineuse ou 25 intramusculaire ou sous-cutanée. Un tel témoin positif limite est utile notamment pour déterminer si un concentré thérapeutique possède bien ou non une activité anti-A et/ou anti-B inférieure à la valeur limite maximale acceptée par les autorités de santé. Par - témoin positif supérieur à la limite » d'une méthode de dosage d'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines 30 polyclonales, on entend un témoin positif comprenant une quantité d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B générant dans la méthode de dosage une valeur d'activité supérieure à une valeur limite prédéfinie. Une telle valeur limite peut notamment correspondre à la valeur maximale d'activité anti-A et/ou anti-B acceptée par les autorités de santé d'un pays pour les immunoglobulines humaines normales 35 destinées à une administration chez l'homme par toute voie d'administration, notamment par voie intraveineuse ou intramusculaire ou sous-cutanée. Un tel témoin positif supérieur à la limite est utile notamment pour vérifier que le dosage réalisé s'est déroulé de façon satisfaisante, un tel témoin devant systématiquement posséder une activité anti-A et/ou anti-B supérieure à la valeur limite choisie. Il peut également 40 permettre de déterminer si un concentré thérapeutique se trouve proche de la valeur 3035971 14 limite maximale acceptée par les autorités de santé ou bien très au-dessus de cette limite. Compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B La présente invention concerne une composition comprenant des immunoglobulines 5 humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% 10 en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. Le pourcentage en poids des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou antiB parmi les immunoglobulines humaines polyclonales totales d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales purifiées peut être mesuré en 15 purifiant la composition par chromatographie d'affinité sur une colonne greffée par des ligands spécifiques des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, et en faisant le rapport entre le poids d'immunoglobulines adsorbées sur la colonne et le poids des immunoglobulines totales. Si la composition n'est pas purifiée en immunoglobulines, une étape préalable de purification des immunoglobulines totales 20 permet ensuite de mesurer le pourcentage en poids des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B parmi les immunoglobulines humaines polyclonales totales. Les compositions selon l'invention sont de préférence purifiées, et les immunoglobulines 25 humaines polyclonales représentent avantageusement au moins 85%, avantageusement au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des protéines totales de la composition.
30 Les compositions selon l'invention peuvent comprendre des immunoglobulines humaines polyclonales d'un seul isotype (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, avantageusement IgG ou IgM, de préférence IgG) ou de plusieurs isotypes. Cependant, dans un mode de réalisation préféré, les immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans les compositions 35 selon l'invention sont nnajoritairennent (à au moins 90%, avantageusement au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, plus avantageusement au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, encore plus avantageusement au moins 98%, au moins 99% en poids) des IgG. Dans ce cas, les compositions selon l'invention sont avantageusement enrichies en immunoglobulines de sous-classe IgG2 par rapport aux concentrés 3035971 15 d'immunoglobulines humaines normales. En particulier, les compositions d'IgG selon l'invention sont avantageusement caractérisées en ce qu'au moins 40%, au moins 45%, au moins 50%, au moins 55%, au moins 60%, au moins 65%, au moins 70%, au moins 75%, voire au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales d'isotype IgG 5 présentes dans la composition sont des immunoglobulines de sous-classe IgG2, avantageusement mesuré par néphélénnétrie et/ou par spectrographie et/ou par kit ELISA de dosage des sous classes (i.e par néphélénnétrie, par spectrographie, par kit ELISA de dosage des sous classes, ou par plusieurs de ces méthodes, par exemple par néphélénnétrie et par spectrographie, ou par chacune de ces trois méthodes).
10 Alternativement ou en outre, les compositions d'IgG selon l'invention ont avantageusement un ratio en poids IgG2/IgG1 d'au moins 0,8, au moins 0,9, avantageusement au moins 1, au moins 1,1, au moins 1,2, au moins 1,3, au moins 1,4, au moins 1,5, au moins 1,6, au moins 1,7, au moins 1,8, au moins 1, 9, voire au moins 2, au moins 2,5, au moins 3, au moins 3,1, au moins 3,2, au moins 3,3, au moins 3,4, au 15 moins 3,5, au moins 3,6, au moins 3,7, au moins 3,8, au moins 3,9, voire au moins 4, avantageusement mesuré par néphélénnétrie et/ou par spectrographie et/ou par kit ELISA de dosage des sous classes (i.e par néphélénnétrie, par spectrographie, par kit ELISA de dosage des sous classes, ou par plusieurs de ces méthodes, par exemple par néphélénnétrie et par spectrographie, ou par chacune de ces trois méthodes).
20 Dans un autre mode de réalisation préféré, les immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans les compositions selon l'invention sont nnajoritairennent (à au moins 90%, avantageusement au moins 91%, au moins 92%, au moins 93%, au moins 94%, plus avantageusement au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, encore plus avantageusement au moins 98%, au moins 99% en poids) des IgM.
25 Dans un mode de réalisation avantageux, au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 30 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, telles que définies ci-dessus. Dans un autre mode de réalisation avantageux, au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au 35 moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, telles que définies ci-dessus.
40 Dans encore un autre mode de réalisation avantageux, la composition comprend à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines 3035971 16 humaines polyclonales anti-B, et en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (antiA/anti-B) est compris entre 1/10 et 10/1. Dans un mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines 5 humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 2/1 et 10/1. Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des 10 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 1/10 et 1/2.
15 Dans un autre mode de réalisation, la composition comprenant à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est équilibrée dans les deux types d'immunoglobulines, et possède donc un rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (anti-A/anti-B) compris entre 3/10 et 20 7/10, avantageusement entre 4/10 et 6/10. Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A selon l'invention peut posséder une activité anti-A enrichie d'un 25 facteur au moins 4, avantageusement au moins 5, au moins 6, au moins 7, au moins 8, au moins 9, au moins 10, au moins 15, au moins 20, au moins 25, au moins 30, au moins 35, au moins 40, au moins 45, au moins 50, au moins 55, au moins 60, au moins 65, au moins 70, au moins 75, au moins 80, au moins 85, au moins 90, au moins 95, au moins 100, au moins 125, au moins 150, au moins 175, au moins 200, au moins 250, au moins 30 300, au moins 350, au moins 400, au moins 450, au moins 500, au moins 600, au moins 700, au moins 800, au moins 900, au moins 1000, au moins 1500, au moins 2000, au moins 2500, au moins 3000, au moins 4000, au moins 5000, au moins 6000, au moins 7000, au moins 8000, au moins 9000, voire au moins 10000 par rapport à une référence Immunoglobulines humaines normales lyophilisées ou à une référence EDQM.
35 Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids mentionnés ci-dessus, la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B selon l'invention peut posséder une activité anti-B enrichie d'un facteur au moins 4, avantageusement au moins 5, au moins 6, au moins 7, au moins 8, au moins 9, au moins 10, au moins 15, au moins 20, au moins 25, au moins 30, au moins 40 35, au moins 40, au moins 45, au moins 50, au moins 55, au moins 60, au moins 65, au moins 70, au moins 75, au moins 80, au moins 85, au moins 90, au moins 95, au moins 3035971 17 100, au moins 125, au moins 150, au moins 175, au moins 200, au moins 250, au moins 300, au moins 350, au moins 400, au moins 450, au moins 500, au moins 600, au moins 700, au moins 800, au moins 900, au moins 1000, au moins 1500, au moins 2000, au moins 2500, au moins 3000, au moins 4000, au moins 5000, au moins 6000, au moins 5 7000, au moins 8000, au moins 9000, au moins 10000, au moins 11000, au moins 12000, au moins 13000, au moins 14000, au moins 15000, au moins 16000, au moins 17000, au moins 18000, voire au moins 19000 par rapport à une référence Immunoglobulines humaines normales lyophilisées ou à une référence EDQM. Alternativement ou en combinaison avec les pourcentages ou rapports en poids 10 mentionnés ci-dessus, la composition peut comprendre à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et possède un rapport (activité anti-A/ activité anti-B) compris entre 1/10 et 10/1, notamment entre 1/9 et 9/1, entre 1/8 et 8/1, entre 1/7 et 7/1, entre 1/6 et 6/1, entre 1/5 et 5/1, entre 1/4 et 4/1, entre 1/3 et 3/1, voire entre 1/2 et 2/1 ou entre 15 0,6 et 1,5. L'activité anti-A et l'activité anti-B sont déterminées à l'aide d'une méthode de dosage d'activité (notamment l'une de celles décrites ci-dessous, et en particulier la méthode de cytonnétrie en flux décrite ici) et exprimées en unités arbitraires vis-à-vis du même standard de référence (standard EDQM ref Y0001688 ou médicament immunoglobuline 20 humaine normale lyophilisée). Le rapport (activité anti-A/ activité anti-B) et le rapport (activité anti-B/ activité antiA) sont calculés sur la base de résultats d'activité anti-A et anti-B obtenus dans des tests réalisés en parallèle, avec la même méthode de dosage d'activité (notamment l'une de celles décrites ci-dessous, et en particulier la méthode de cytonnétrie en flux 25 décrite ici) et exprimés en unités arbitraires vis-à-vis du même standard de référence (standard EDQM ref Y0001688 ou médicament immunoglobuline humaine normale lyophilisée). Les compositions selon l'invention sont purifiées et sont avantageusement concentrées.
30 Avantageusement, les compositions selon l'invention sont concentrées selon toute technique connue de l'homme du métier, par exemple en utilisant une membrane d'ultrafiltration, une centrifugation, une dialyse, ou plusieurs de ces étapes. De manière encore plus avantageuse, les compositions selon l'invention présentent une concentration suffisante pour permettre les dilutions successives de la composition pour 35 leur utilisation comme gamme étalon dans une méthode de dosage appropriée, par exemple le test de Coonnbs indirect, la méthode d'agglutination directe, la cytonnétrie en flux, ou par plusieurs de ces méthodes (par exemple, le test de Coonnbs indirect et la méthode d'agglutination directe ; le test de Coonnbs indirect et la cytonnétrie en flux ; la méthode d'agglutination directe et la cytonnétrie en flux ; ou chacune de ces trois 40 méthodes).
3035971 18 De manière avantageuse, les compositions selon l'invention concentrées présentent un résultat au test de Coonnbs indirect (décrit ci-dessous) supérieur à 1/64, avantageusement supérieur à 1/128, supérieur à 1/256, supérieur à 1/512, supérieur à 1/1024, supérieur à 1/2048, voire supérieur à 1/4096, afin de permettre les dilutions 5 successives de la composition pour en faire une gamme étalon dans la méthode de dosage en test de Coonnbs indirect. Par résultat au test de Coonnbs indirect supérieur à 1/N, on entend que le résultat du test de Coonnbs indirect est négatif à une dilution de l'échantillon à 1/N. Alternativement ou en outre, de manière avantageuse, les compositions selon 10 l'invention concentrées présentent un résultat avec la méthode d'agglutination directe (décrite ci-dessous) supérieur à 1/64, avantageusement supérieur à 1/128, supérieur à 1/256, supérieur à 1/512, supérieur à 1/1024, supérieur à 1/2048, voire supérieur à 1/4096, afin de permettre les dilutions successives de la composition pour en faire une gamme étalon dans la méthode d'agglutination directe. Par résultat au test 15 d'agglutination direct supérieur à 1/N, on entend que le résultat avec la méthode d'agglutination directe est négatif à une dilution de l'échantillon à 1/N. Alternativement ou en outre, de manière avantageuse, les compositions selon l'invention concentrées présentent un résultat avec la méthode de cytonnétrie en flux (décrite ci-dessous) supérieur à 1/64, avantageusement supérieur à 1/128, supérieur à 20 1/256, supérieur à 1/512, supérieur à 1/1024, supérieur à 1/2048, voire supérieur à 1/4096, afin de permettre les dilutions successives de la composition pour en faire une gamme étalon dans la méthode de cytonnétrie en flux. Par résultat au test de cytonnétrie en flux supérieur à 1/N, on entend que le résultat avec la méthode cytonnétrie en flux est négatif à une dilution de l'échantillon à 1/N.
25 De manière encore plus avantageuse, les compositions selon l'invention concentrées présentent une concentration en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B supérieure à 1 g/L, supérieure à 1,5 g/L, supérieure à 2 g/L, supérieure à 5 g/L, supérieure à 10 g/L, supérieur à 15 g/L, supérieur à 20 g/L, voire supérieur à 50 g/L. Préparation des compositions selon l'invention 30 Les compositions selon l'invention peuvent être obtenues à partir de fractions plus ou moins purifiées du plasma humain comprenant des immunoglobulines polyclonales par différents procédés de purification. Dans un deuxième aspect, la présente invention concerne donc un procédé de préparation d'une composition selon l'invention, comprenant les étapes suivantes : 35 a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, 3035971 19 b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, et c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée.
5 La préparation des compositions selon l'invention repose sur une étape d'adsorption spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B sur un support greffé par un ligand spécifique de ces immunoglobulines, qui sont ensuite éluées. Avantageusement, il est possible de partir directement du plasma ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales, plus ou 10 moins purifiée en immunoglobulines humaines polyclonales. Dans un mode de réalisation préféré, le procédé de préparation des compositions selon l'invention s'intègre dans un procédé plus général de purification d'immunoglobulines humaines normales thérapeutiques (récupération de fraction jusqu'ici éliminées) et est donc mis en oeuvre sur une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales 15 prépurifiée. Cette fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée contient avantageusement une teneur en immunoglobulines humaines polyclonales d'au moins 80%, avantageusement au moins 81%, au moins 82%, plus avantageusement au moins 83%, au moins 84%, encore plus avantageusement au moins 85%, au moins 86%, au moins 87% au moins 88%, au moins 89%, voire au moins 90%, au moins 91%, ou au moins 20 92% en poids des protéines totales de la fraction. Comme indiqué ci-dessus, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée peut notamment avoir été obtenue par séparation chronnatographique, notamment selon les procédés de purification d'immunoglobulines humaines polyclonales décrits dans W099/64462 et W002/092632, et plus particulièrement dans 25 W002/092632. Dans ce cas, la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée est obtenue par prépurification par une étape de précipitation de contaminants lipidiques à partir d'un plasma sanguin ou d'une fraction de plasma sanguin enrichie en IgG, et une étape de chromatographie unique sur un support de résine échangeuse d'anions effectuée à pH alcalin, avec une élution sélective des IgG en une 30 étape par un tampon approprié à pH compris entre 4 et 7. Avantageusement, la prépurification par une étape de précipitation de contaminants lipidiques consiste en une étape de précipitation à l'acide caprylique. Lorsqu'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée est utilisée à l'étape a) du procédé selon l'invention décrit ci-dessus, la fraction d'immunoglobulines 35 humaines polyclonales prépurifiée peut en outre avoir subi une étape de sécurisation biologique (élimination virale et/ou d''inactivation virale, notamment par un traitement solvant-détergent), une étape de concentration (notamment par ultrafiltration), et/ou une étape de filtration stérilisante.
3035971 20 Dans un procédé de préparation selon l'invention, le support peut être tout support approprié susceptible d'être choisi par l'homme du métier pour adsorber des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et /ou anti-B. Un tel support utilisé à l'étape a) se présente avantageusement sous la forme : 5 a) de particules (notamment de particules de polymère) greffées par le ou les ligands d'intérêt, ou b) d'une membrane polynnérique, la membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt.
10 Le support peut ainsi notamment se présenter sous la forme de particules greffées par le ou les ligands d'intérêt. Les particules sont avantageusement de forme sphérique ou oblongue, il peut s'agir notamment de billes. Ces particules ont généralement une taille moyenne d'environ 0,1 [Inn à environ 1000 [Inn, de préférence d'environ 20 à environ 50 0 [Inn, de préférence encore d'environ 50 à environ 200 [Inn, de préférence encore 15 d'environ 70 [Inn à environ 120 [Inn de diamètre. Elles peuvent être constituées de polymère ou de matières inorganiques (comme la silice ou le verre par exemple). Avantageusement, les particules sont poreuses. Dans un mode de réalisation avantageux, il s'agit de particules de polymère. Le polymère peut être naturel ou non-naturel (synthétique ou hénnisynthétique), organique 20 ou inorganique (de préférence le polymère sera organique), réticulé ou non réticulé (de préférence le polymère sera réticulé). Avantageusement, le polymère est un polymère organique réticulé. Le polymère peut notamment être choisi parmi la cellulose et ses dérivés, l'agarose, le dextran, les polyacrylates, le polystyrène, le polyacrylannide, le polynnéthacrylannide, 25 les copolymères de styrène et divinylbenzène, ou les mélanges de ces polymères. Dans un mode de réalisation préféré, le polymère est de la cellulose, et les particules sont de préférence des billes de cellulose poreuses. De préférence encore, il s'agit de cellulose réticulée. Le support peut également se présenter sous la forme d'une membrane polynnérique, la 30 membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt. Le polymère de la membrane peut être choisi parmi les polymères mentionnés ci-dessus pour les particules de polymère. Les particules sont avantageusement incorporées dans un gel ou une résine, qui est utilisé comme matrice d'une colonne de chromatographie d'affinité. De même, la 35 membrane polynnérique peut être incluse dans une colonne de chromatographie d'affinité. Le lot de plasma humain ou la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sont alors adsorbés sur la colonne de chromatographie d'affinité, et la fraction adsorbée est éluée et récupérée. Cependant, bien que préférée, l'utilisation d'une colonne de chromatographie d'affinité n'est pas 40 essentielle, et d'autres modes d'adsorption, de dissociation et de récolte peuvent être utilisés.
3035971 21 Dans un procédé de préparation selon l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A peut être toute molécule appropriée connue de l'homme du métier et se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales 5 anti-A telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. Un tel ligand est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des antigènes du groupe A de type 1, 2, 3 et 4, et notamment parmi les oligosaccharides suivants : - Trisaccharide : GaINAca1-3(Fuca1-2)Gal ; 10 - Tétrasaccharides : o Type 1 : GaINAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc, o Type 2: GaINAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc, o Type 3 ou 4: GaINAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc - Pentasaccharides : 15 o Type 1 : GaINAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc 131-3Gal, o Type 2: GaINAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc 131-3Gal, o Type 3 : GaINAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc al -3Gal, o Type 4: GaINAca1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc 131-3Gal, - Hexasaccharides : 20 o Type 1 : GaINAca 1-3 (Fuca1-2)Galf31-3GlcNAc 01-3Gal131-4Glc, o Type 2: GaINAca 1-3 (Fuca1-2)Galf31-4GlcNAc 01-3Gal131-4Glc, o Type 3 : GaINAca 1-3 (Fuca1-2)Galf31-3GalNAc al -3Gal131-4G1cNAc, o Type 4: GaINAca1-3(Fuca1-2)GalB1-3GalNAc 131-3Gala1-4Gal.
25 Dans un procédé de préparation selon l'invention, le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B peut être toute molécule appropriée connue de l'homme du métier et se liant aux immunoglobulines humaines polyclonales anti-B telles que définies ci-dessus et ne se liant pas aux autres immunoglobulines. Un tel ligand est avantageusement choisi parmi les oligosaccharides représentatifs des 30 antigènes du groupe B de type 1, 2, 3 et 4, et notamment parmi les oligosaccharides suivants : - Trisaccharide : Gala1-3(Fuca1-2)Gal ; - Tétrasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc, 35 o Type 2: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc, o Type 3 ou 4: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc - Pentasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc 131-3Gal, o Type 2: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc 131-3Gal, 40 o Type 3 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc al -3Gal, o Type 4: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc 131-3Gal, 3035971 22 - Hexasaccharides : o Type 1 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GlcNAc 131-3GalB1-4Glc, o Type 2: Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-4GlcNAc 131-3GalB1-4Glc, o Type 3 : Gala1-3(Fuca1-2)Ga1131-3GalNAc al -3GalB1-4GlcNAc, 5 o Type 4: Gala1-3(Fuca1-2)GalB1-3GalNAc B1-3Gala1-4Gal. A l'étape a) du procédé selon l'invention tel que décrit ci-dessus, le support peut être greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.
10 Dans un mode de réalisation, le support n'est greffé que par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A. Dans un autre mode de réalisation, le support n'est greffé que par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans encore un autre mode de réalisation, le support est greffé à la fois par un ligand 15 spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans ce cas, on utilisera avantageusement un mélange de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, dans des proportions 20 respectives généralement comprises entre 25/75 (v/v) et 75/25 (v/v), et notamment de 50/50 (v/v). Notamment, lorsque des particules greffées par le(s) ligands d'intérêt sont utilisées, on peut utiliser un mélange de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et 25 remplir une colonne de chromatographie d'affinité. Dans ce cas, les particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et les particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont mélangées dans des proportions respectives généralement comprises entre 25/75 (v/v) et 75/25 (v/v), et notamment de 50/50 (v/v). Dans un 30 autre mode de réalisation, il est également possible d'utiliser un support comprenant des particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Dans un autre mode de réalisation, il est également possible d'utiliser un mélange : 35 - de particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et - de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou de particules greffées par un ligand spécifique des 40 immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.
3035971 23 Dans un procédé de préparation selon l'invention, le ligand d'intérêt est avantageusement greffé sur les particules de polymères ou sur la membrane polynnérique par l'intermédiaire d'un espaceur, ce qui permet de réduire l'encombrement stérique et de rendre le trisaccharide caractéristique des antigènes A 5 ou B plus accessible aux immunoglobulines susceptibles de s'adsorber sur le support. Un tel espaceur peut être tout groupement approprié connu de l'homme du métier pour permettre le greffage du ligand d'intérêt et donc notamment d'oligosaccharides sur un support d'intérêt, notamment les polymères décrits ci-dessus. L'espaceur comprend typiquement au moins un atome de C, 0, N, ou S, et comprendra 10 le plus souvent au moins une des fonctions chimiques suivantes : éther (-0-), thioéther (-S-), annino (-NH-), carboxy -(-000- ou -000-), amide (-CONH- ou -HNOC-). Il peut notamment être choisi parmi : - -(CH2)nnX(CH2)n- ou -(CH2)nnX1(CH2)nX2(CH2)p-, où X, X1, et X2 sont chacun indépendamment l'un de l'autre choisi parmi 0, S, NH, et une liaison covalente; 15 m, n, et p sont chacun indépendamment 0, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6; et 1, 2, ou 3 des atomes d'hydrogène peuvent être remplacés par un nombre équivalent de groupes OH et/ou méthyle. L'espaceur peut notamment avoir une structure choisie parmi : et 20 où chacun de X1 et X2 est choisie indépendamment parmi 0, S, et NH; et chacun de Ra, Rb, Re, and Rd est choisie indépendamment parmi H, OH, et méthyle. - L'une des structures suivantes : OH et 25 - Les espaceurs de formule -NH-R1-CONH-R2-, dans laquelle R1 est un groupe alkyle en C4-C6, R2 est un groupe alkyle en C3-C8, et ledit espaceur est lié par sa fonction amine (en gras ci-dessus) au support. Dans ce cas, R1 est un groupe alkyle en C4-C6, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. De préférence, R1 est un groupe alkyle en C5.
30 R2 est un groupe alkyle en C3-C8, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. De préférence, R2 est un groupe alkyle en C3.
3035971 24 Dans un mode de réalisation préféré, les ligands (qui sont de préférence des trisaccharides tels que décrits plus haut) sont greffés aux particules ou à la membrane par un espaceur selon la formule : (particule/nnennbrane)-NH-05H10CO-NH-C3H6-(ligand).
5 Le couplage entre la particule ou la membrane et l'espaceur, d'une part, et le couplage entre l'espaceur et le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B peut être réalisé par tout protocole de synthèse chimique approprié connu de l'homme du 10 métier. Dans un mode de réalisation particulier, la particule ou la membrane peut porter un bras -NH-R1-COOH. De préférence il s'agit d'acide E-anninocaproïque (où R1 est un groupe pentyle). De manière classique, la particule peut alors être activée en utilisant des réactifs bifonctionnels tels que l'épichlorhydrine, l'épibronnhydrine, le dibronno- et 15 le dichloropropanol, le dibronnobutane, l'éthylène glycol diglycidyléther, le butanediol diglycidylether, la divinylsulfone, l'allylglycidyléther, et le bromure d'allyle. Le réactif bifonctionnel est capable de réagir à la fois avec les particules/la membrane et le bras - NH-R1-COOH. Les composés hétérofonctionnels allyle, tels que le bromure d'allyle, sont des réactifs bifonctionnels préférés et permettent d'obtenir une matrice activée.
20 Pour certains supports solides, tels que la cellulose, les composites contenant un hydrogel ou d'autres matériaux présentant des groupes hydroxyles, il est avantageux de déprotoner les groupes hydroxyles avec une source d'hydroxyde, par exemple, avant la réaction avec un réactif bifonctionnel. Les ligands représentant les antigènes des groupes sanguins A et/ou B sont ensuite 25 immobilisés sur la particule/la membrane activée portant le bras -NH-R1-COOH via un groupe lieur -NH-R2-, où R2 est un groupe alkyle en C3-C8, linéaire ou ramifié, de préférence linéaire. Pour cela, la fonction COOH du bras -NH-R1-COOH portée par la particule/la membrane est mis à réagir avec la fonction NH2 du ligand NH2-R2- oligosacccharide, par la mise en oeuvre d'un agent de condensation de type N- 30 éthoxycarbonyl-2-éthoxy-1,2-dihydroquinoline (EEDQ). Des exemples de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A qui peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention sont les suivants : Glycosorb ABO A (matrice Sepharose sur laquelle est greffé le 35 trisaccharide caractéristique de l'antigène A, Glycorex Transplantation AB, Lund, Suède), Allotran A (trisaccharide caractéristique de l'antigène A greffé à une matrice Sepharose FF par du polyacrylannide, Lectinity Corp), HyperCel IsoA (particules de cellulose réticulée greffées par le trisaccharide caractéristique de l'antigène A, Pall). Des exemples de supports greffés par un ligand spécifique des immunoglobulines 40 humaines polyclonales anti-B qui peuvent être utilisés dans le cadre de l'invention sont les suivants : Glycosorb ABO B (matrice Sepharose sur laquelle est greffé le 3035971 25 trisaccharide caractéristique de l'antigène B, Glycorex Transplantation AB, Lund, Suède), Allotran B (trisaccharide caractéristique de l'antigène B greffé à une matrice Sepharose FF par du polyacrylarnide, Lectinity Corp), HyperCel IsoB (particules de cellulose réticulée greffées par le trisaccharide caractéristique de l'antigène B, Pall).
5 Lorsqu'on souhaite utiliser un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, on utilisera généralement un mélange d'un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A tel que décrit ci-dessus et d'un support greffé par un ligand 10 spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B tel que décrit ci-dessus. Notamment, lorsque des particules greffées par le(s) ligands d'intérêt sont utilisées, on peut utiliser un mélange de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et 15 remplir une colonne de chromatographie d'affinité. On peut également utiliser un des particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B pour préparer un gel et remplir une colonne de chromatographie d'affinité. Dans un autre mode de réalisation, il est également possible d'utiliser un 20 mélange : - de particules greffées à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et - de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines 25 polyclonales anti-A et/ou de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Lorsque la purification de la composition selon l'invention est réalisée par chromatographie d'affinité, le lot de plasma humain ou la fraction de plasma humain 30 enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales est adsorbé à l'étape a) sur la colonne de chromatographie dans toute condition appropriée connue de l'homme du métier, notamment toute condition recommandée par le fabricant du support de chromatographie, en fonction du support choisi. Une percolation du lot de plasma humain ou de la fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines 35 polyclonales sur la colonne peut notamment être mise en oeuvre. La fraction non adsorbée est avantageusement récupérée pour d'autres usages ultérieurs. La fraction adsorbée est ensuite dissociée et récupérée à l'aide d'un ou plusieurs lavages de la colonne par un ou plusieurs tampons d'élution appropriés. Un tampon d'élution acide (par exemple un tampon glycine-HCl, pH entre 2 et 4 et/ou un tampon d'élution 40 basique (par exemple une solution de glycine-NaOH, pH entre 10 et 12) peuvent notamment être utilisés.
3035971 26 La composition ainsi obtenue peut en outre être soumises à une ou plusieurs étapes optionnelles ultérieures, telles que : une étape de neutralisation de la composition (ajustement du pH entre 3 et 9, préférentiellement entre 4 et 5, une ou plusieurs 5 étapes de purification additionnelles, une étape de concentration (par exemple par ultrafiltration), au moins une étape d'inactivation (traitement solvant-détergent par exemple) ou d'élimination virale (nanofiltration par exemple), ou une combinaison de plusieurs de ces étapes.
10 Le procédé selon l'invention tel que décrit ci-dessus permet d'obtenir une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales reconnaissant pour au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au 15 moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition les antigènes des groupes sanguins A et B. Lorsque le support utilisé à l'étape a) est greffé uniquement par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, les immunoglobulines humaines 20 polyclonales anti-A sont retenues, et la composition obtenue comprend alors des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A. Alternativement, lorsque que le support utilisé à l'étape a) est greffé uniquement par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont retenues, et la composition 25 obtenue comprend alors des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Lorsque le support utilisé à l'étape a) est greffé à la fois par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, la composition purifiée comprend alors un mélange d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et d'immunoglobulines 30 humaines polyclonales anti-B. Dans les immunoglobulines humaines polyclonales purifiées à partir de pools de plasma, la proportion d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B dépend de la population initiale de donneurs. En effet, des différences de pourcentage de répartition des différents groupes sanguins existent en fonction des populations de donneurs. Ces 35 variations peuvent donc se retrouver dans les compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B selon l'invention. Afin d'obtenir soit une composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, soit une composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, les inventeurs ont mis au point de nouveaux procédés de 40 purification.
3035971 27 Ainsi, afin de préparer une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au 5 moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, le procédé comprend avantageusement les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain 10 enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, 15 c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée, d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et e) récolte de la fraction non adsorbée. Les étapes a) à c) sont identiques à celles décrites ci-dessus pour la préparation d'une 20 composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. Notamment, les conditions d'adsorption, de mise en réserve de la fraction non adsorbée et de dissociation et de récolte de la fraction adsorbée peuvent être similaires à celles décrites ci-dessus.
25 Les étapes d) et e) visent à isoler spécifiquement les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A. Pour ce faire, on utilise à l'étape d) un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B afin que soient adsorbées sur le support toutes les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A peuvent ainsi être récupérées 30 directement (étape e)), conduisant à l'obtention d'une composition spécifiquement enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A. De manière avantageuse, les conditions de l'étape d) sont adaptées pour permettre l'adsorption sur le support de toutes les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, par exemple en adaptant le volume de gel et/ou le temps de résidence. Lorsque le support utilisé à l'étape d) est 35 une colonne de chromatographie d'affinité comprenant comme support une membrane ou un gel de particule greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, les conditions d'adsorption peuvent être similaires à celles décrites précédemment pour l'étape a). La fraction non adsorbée est alors directement récupérée à l'étape e).
40 De manière alternative, afin de préparer une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80%, au moins 81%, au moins 82%, au moins 83%, au moins 84%, 3035971 28 avantageusement au moins 85% au moins 86%, au moins 87%, plus avantageusement au moins 88%, au moins 89%, encore plus avantageusement au moins 90%, au moins 91%, au moins 92% au moins 93%, au moins 94%, voire au moins 95%, au moins 96%, au moins 97%, au moins 98%, ou au moins 99% en poids des immunoglobulines humaines 5 polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, le procédé comprend avantageusement les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand 10 spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée, d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un 15 ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A, et e) récolte de la fraction non adsorbée. Les étapes a) à c) sont identiques à celles décrites ci-dessus pour la préparation d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines 20 humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B. Notamment, les conditions d'adsorption, de mise en réserve de la fraction non adsorbée et de dissociation et de récolte de la fraction adsorbée peuvent être similaires à celles décrites ci-dessus. Les étapes d) et e) visent à isoler spécifiquement les immunoglobulines humaines 25 polyclonales anti-B. Pour ce faire, on utilise à l'étape d) un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A afin que soient adsorbées sur le support toutes les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A. Les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B peuvent ainsi être récupérées directement (étape e)), conduisant à l'obtention d'une composition spécifiquement 30 enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. De manière avantageuse, les conditions de l'étape d) sont adaptées pour permettre l'adsorption sur le support de toutes les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, par exemple en adaptant le volume de gel et/ou le temps de résidence. Lorsque le support utilisé à l'étape d) est une colonne de chromatographie d'affinité comprenant comme support une membrane 35 ou un gel de particules greffées par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, les conditions d'adsorption peuvent être similaires à celles décrites précédemment pour l'étape a). La fraction non adsorbée est alors directement récupérée à l'étape e). Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le lot de plasma humain ou la 40 fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales (fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée) non adsorbée à l'étape 3035971 29 a) est utilisé dans un procédé de préparation d'immunoglobulines polyvalentes humaines. Ce mode de réalisation particulier de l'invention permet avantageusement la préparation à la fois d'un concentré d'immunoglobulines polyvalentes humaines, déplété en anti-A et 5 en anti-B, d'une composition spécifiquement enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, et d'une composition spécifiquement enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.
10 Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, le procédé de préparation d'une composition purifiée en immunoglobulines anti-A comprend donc les étapes suivantes : a) adsorption d'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines 15 polyclonales anti-B et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, b) récupération de la fraction non adsorbée pour l'utilisation dans un procédé de purification d'un concentré d'immunoglobulines humaines polyvalentes déplété en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, 20 c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée à l'étape a), d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B, et e) récolte de la fraction non adsorbée.
25 Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, le procédé de préparation d'une composition purifiée en immunoglobulines anti-A comprend donc les étapes suivantes : a) adsorption d'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée, en particulier d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines 30 humaines polyclonales issue d'une chromatographie échangeuse d'anions à pH alcalin, sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, b) récupération de la fraction non adsorbée pour l'utilisation dans un procédé de 35 purification d'un concentré d'immunoglobulines humaines polyvalentes déplété en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée à l'étape a), d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe 40 sanguin B, et e) récolte de la fraction non adsorbée.
3035971 30 Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, le procédé de préparation d'une composition purifiée en immunoglobulines anti-B comprend donc les étapes suivantes : a) adsorption d'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée 5 sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, b) récupération de la fraction non adsorbée pour l'utilisation dans un procédé de purification d'un concentré d'immunoglobulines humaines polyvalentes déplété en 10 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée à l'étape a), d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A, et 15 e) récolte de la fraction non adsorbée. Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, le procédé de préparation d'une composition purifiée en immunoglobulines anti-B comprend donc les étapes suivantes : a) adsorption d'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée, 20 en particulier d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales issue d'une chromatographie échangeuse d'anions à pH alcalin, sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, 25 b) récupération de la fraction non adsorbée pour l'utilisation dans un procédé de purification d'un concentré d'immunoglobulines humaines polyvalentes déplété en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée à l'étape a), d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un 30 ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin A, et e) récolte de la fraction non adsorbée. Dans un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le procédé de préparation 35 d'une composition purifiée en immunoglobulines anti-A et d'une composition purifiée en immunoglobulines anti-B comprend donc les étapes suivantes : a) adsorption d'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines 40 polyclonales anti-A, 3035971 31 b) récupération de la fraction non adsorbée pour l'utilisation dans un procédé de purification d'un concentré d'immunoglobulines humaines polyvalentes déplété en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée à l'étape a), 5 d) adsorption d'une partie de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B, et récolte de la fraction non adsorbée enrichie en anti-A, e) adsorption de l'autre partie de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du 10 groupe sanguin A, et récolte de la fraction non adsorbée enrichie en anti-B. Ce mode de réalisation particulièrement avantageux permet de valoriser de manière optimale les fractions retenues et non retenues de la chromatographie d'affinité utilisant des ligands spécifiques des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et des ligands spécifiques des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A.
15 Dans les procédés de préparation de compositions spécifiquement enrichies en immunoglobulines anti-A ou en immunoglobulines anti-B décrits ci-dessus, les supports et ligands utilisés aux étapes a) et d) et/ou e) peuvent être choisis parmi ceux décrits ci-dessus pour le procédé général de préparation d'une composition enrichie en 20 immunoglobulines anti-A et anti-B. L'invention concerne en outre une composition susceptible d'être obtenue par l'un des procédés de préparation selon l'invention tels que décrits ci-dessus. Témoins positifs destinés à être utilisés dans une méthode de dosage de l'activité 25 anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales Les compositions selon l'invention sont utiles notamment pour la préparation d'un témoin positif (témoin positif inférieur à la limite, témoin positif limite ou témoin positif supérieur à la limite) utile dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou 30 anti-B d'un concentré d'immunoglobulines humaines normales, qui ne présente pas les inconvénients du témoin positif et/ou du témoin positif limite disponibles à ce jour (fractions 07/306 et 07/310), c'est-à-dire qui comprend des immunoglobulines anti-A et/ou anti-B humaines et polyclonales et non nnurines et monoclonales, et qui puisse être préparé dans des quantités suffisantes.
35 Ainsi, dans un troisième aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition selon l'invention comme témoin positif dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales.
3035971 32 L'invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un témoin positif (témoin positif inférieur à la limite, témoin positif limite ou témoin positif supérieur à la limite) destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des 5 immunoglobulines humaines polyclonales. L'invention concerne également un procédé de préparation d'un témoin positif destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, comprenant les étapes suivantes : 10 a) la fourniture d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales possédant une activité anti-A et une activité anti-B inférieures à une valeur limite donnée dans ladite méthode de dosage, et b) l'ajout d'une composition selon l'invention. L'invention concerne également un procédé de préparation d'un témoin positif (témoin 15 positif inférieur à la limite, témoin positif limite, ou témoin positif supérieur à la limite) destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, comprenant les étapes suivantes : a) la fourniture d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines 20 polyclonales possédant une activité anti-A et une activité anti-B inférieures à une valeur limite donnée dans ladite méthode de dosage, b) l'ajout de quantités croissantes d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti- 25 A et/ou d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, pour obtenir différentes compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, 30 c) le dosage par ladite méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B des compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou antiB obtenues à l'étape b), et d) la sélection de la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B ayant une activité anti-A et/ou anti-B dans ladite 35 méthode de dosage inférieure (pour obtenir un témoin positif inférieur à la limite), égale (pour obtenir un témoin positif limite), ou supérieure (pour obtenir un témoin positif supérieur à la limite) à ladite valeur limite. Un témoin positif (témoin positif inférieur à la limite, témoin positif limite, ou témoin 40 positif supérieur à la limite) peut être préparé par le procédé ci-dessus pour toute 3035971 33 méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'intérêt, et pour toute valeur limite d'intérêt. Notamment, un témoin positif (témoin positif inférieur à la limite, témoin positif limite, ou témoin positif supérieur à la limite) peut être préparé par le procédé ci-dessus pour 5 l'une ou l'autre des méthodes de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B qui sont généralement utilisées : (i) une méthode appelée test indirect à l'antiglobuline (TIA, également appelé test de Coonnbs indirect), qui repose sur l'utilisation d'une antiglobuline (c'est-à-dire d'immunoglobulines d'origine animale reconnaissant spécifiquement les 10 immunoglobulines humaines) pour révéler les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou anti-B fixées aux hématies de groupe sanguin A ou B. La détection de l'agglutination des hématies en présence d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B peut être faite par différentes méthodes, plus ou moins précises.
15 Dans le test TIA usuel, l'agglutination est lue de manière visuelle, par détection de la présence d'un précipité. Le test TIA est l'ancien test recommandé par les autorités de santé pour le dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B des concentrés thérapeutiques d'immunoglobulines humaines normales. 20 (ii) une méthode appelée méthode d'agglutination directe, développée par Thorpe et collaborateurs (Thorpe et al. Vox Sang.
2009 Aug;97(2):160-8 ; Thorpe et al. Pharnneur Bio Sci Notes.
2010 Apr;2010(1):39-50 ; Document WHO/BS/08.2091 téléchargeable à l'adresse http://apps.whoint/iris/handle/10665/69970?locale=fr).
25 Dans cette méthode, des hématies A ou B traitées à la papaïne sont mises en contact avec des dilutions au demi en série d'une solution d'immunoglobulines humaines normales à 5% (50 g/l), dans une nnicroplaque avec des puits en V. Après centrifugation, la plaque est inclinée à un angle d'environ 70° pendant environ 4-5 minutes. En cas d'agglutination, le culot de cellules reste collé au fond du puits en 30 V, formant un point bien rond. Dans le cas contraire, le culot de cellules non agglutiné glisse le long de la paroi du puits en V, générant ainsi une forme de type gouttelette. La méthode d'agglutination directe est le nouveau test recommandé par les autorités de santé pour le dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B des concentrés 35 thérapeutiques d'immunoglobulines humaines normales. (iii) Un test en cytonnétrie utilise un F(ab')2 marqué par un marqueur fluorescent. Après ajout du F(ab')2 marqué et lavage du F(ab')2 non lié, l'intensité moyenne de fluorescence dans l'échantillon est mesurée et comparée à celle d'un ou plusieurs échantillons de référence. Une description plus précise de ce test est décrite dans 40 la demande W02007/077365.
3035971 34 La valeur limite pour laquelle le témoin positif limite est préparé peut être toute valeur limite d'activité anti-A et/ou anti-B d'intérêt. En particulier, il peut s'agir de la valeur maximale d'activité anti-A et/ou anti-B acceptée par les autorités de santé dans un pays ou une région du monde. Actuellement, d'après les critères de la pharmacopée 5 européenne, de l'OMS et de la FDA, les concentrés thérapeutiques d'immunoglobulines humaines normales doivent ne pas présenter d'agglutination des hématies A et B à la dilution 1/64 d'une solution de concentration initiale de 50 g/l (5%), dans un test d'agglutination directe particulier correspondant à celui développé par Thorpe et collaborateurs (Pharmacopée européenne, chapitre 2.6.20), et cette valeur limite peut 10 donc être choisie de façon avantageuse. Il convient toutefois de noter que cette valeur limite est susceptible d'être modifiée par les autorités de santé en fonction de la surveillance des accidents d'hémolyses qui pourraient se produire dans le futur sur la base de concentrés thérapeutiques respectant cette valeur limite. Le procédé décrit ci-dessus pourra alors être à nouveau mis en oeuvre pour préparer un nouveau témoin 15 positif limite, adapté à la nouvelle limite fixée par les autorités de santé. En outre, d'autres témoins positifs peuvent être utiles à l'homme du métier. Par exemple, une gamme de témoins positifs inférieurs à la limite avec des activités anti-A et/ou anti-B croissantes mais inférieures à la valeur limite fixée par les autorités de santé pourrait permettre d'établir si un concentré thérapeutique se trouve proche de la 20 limite maximale acceptée par les autorités de santé ou bien très en-dessous de cette limite. De même, une gamme de témoins positifs supérieurs à la limite avec des activités anti-A et/ou anti-B croissantes mais toutes supérieures à la valeur limite fixée par les autorités de santé pourrait permettre d'établir si un concentré thérapeutique se trouve proche de la limite maximale acceptée par les autorités de santé ou bien très 25 au-dessus de cette limite. A l'étape a) du procédé ci-dessus, une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales possédant une activité anti-A et une activité anti-B inférieures à une valeur limite donnée dans ladite méthode de dosage (composition de départ) est 30 fournie, à laquelle des quantités croissantes d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon 35 l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont ajoutées à l'étape b) pour obtenir différentes compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. La composition de départ peut être dépourvue d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B (par exemple par une sélection appropriée des 40 donneurs de plasmas utilisés), ou peut comprendre des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, à condition que son activité anti-A et son activité anti- 3035971 35 B soit inférieure à la valeur limite choisie dans la méthode de dosage choisie. Lorsque la valeur limite et la méthode de dosage choisies correspondent à celles prescrites par les autorités réglementaires, une telle composition de départ peut notamment être une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée et déplétée en 5 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, obtenue par exemple comme décrit dans W02007/077365. La présence des immunoglobulines humaines polyclonales ne reconnaissant pas les antigènes A et B est destinée à conserver dans le témoin positif limite la même concentration en immunoglobulines totales que dans la composition dont l'activité anti-A ou anti-B sera ensuite testée par la méthode de dosage. En 10 particulier, cette composition de départ possède de préférence une concentration en immunoglobulines égale ou supérieure à celle préconisée dans le test d'activité anti-A et anti-B requis par les autorités de santé (50 g/L, soit 5% à ce jour). A l'étape b), des quantités croissantes d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la 15 composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou d'une composition selon l'invention dans laquelle au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition selon l'invention sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B sont ajoutées pour obtenir différentes compositions enrichies de façon plus ou moins importante en 20 immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B. A l'étape c), l'activité anti-A et/ou anti-B des compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B obtenues à l'étape b) est testée par la méthode de dosage choisie initialement. Enfin, à l'étape d), on sélectionne la composition enrichie en immunoglobulines 25 humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B ayant une activité anti-A et/ou anti-B dans ladite méthode de dosage inférieure (pour obtenir un témoin positif inférieur à la limite), égale (pour obtenir un témoin positif limite), ou supérieure (pour obtenir un témoin positif supérieur à la limite) à la valeur limite choisie initialement. Si on cherche à préparer un témoin positif supérieur à la limite et qu'aucune des 30 compositions testées n'a une activité anti-A et/ou anti-B supérieure à la valeur limite choisie initialement, les étapes a) à c) peuvent être mises en oeuvre à nouveau jusqu'à ce que la composition ayant une activité anti-A et/ou anti-B supérieure à la valeur limite choisie initialement soit obtenue. A l'inverse, si on cherche à préparer un témoin positif inférieur à la limite et qu'aucune 35 des compositions testées n'a une activité anti-A et/ou anti-B inférieure à la valeur limite choisie initialement, les étapes a) à c) peuvent être mises en oeuvre à nouveau jusqu'à ce que la composition ayant une activité anti-A et/ou anti-B inférieure à la valeur limite choisie initialement soit obtenue. Enfin, si on cherche à préparer un témoin positif limite et qu'aucune des compositions 40 testées n'a une activité anti-A et/ou anti-B égale à la valeur limite choisie initialement, les étapes a) à c) peuvent être mises en oeuvre à nouveau jusqu'à ce que la composition 3035971 36 ayant une activité anti-A et/ou anti-B égale à la valeur limite choisie initialement soit obtenue. En particulier, selon que les compositions testées à l'étape c) ont une activité anti-A et/ou anti-B inférieure, égale ou supérieure à la valeur limite choisie initialement, 5 l'homme du métier saura adapter en conséquence les quantités de composition selon l'invention à ajouter à l'étape b) de façon à pouvoir sélectionner le témoin positif d'intérêt. L'invention concerne en outre un témoin positif (témoin positif inférieur à la limite, 10 témoin positif limite, ou témoin positif supérieur à la limite) destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention de préparation d'un témoin positif (témoin positif inférieur à la limite, témoin positif limite, ou témoin positif supérieur à la limite) décrit ci-dessus.
15 Diagnostic des groupes sanguins Les compositions selon l'invention dans lesquelles au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A peuvent en outre être utilisées dans un test de détermination du groupe sanguin d'un sujet.
20 De même, les compositions selon l'invention dans lesquelles au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B peuvent en outre être utilisées dans un test de détermination du groupe sanguin d'un sujet. Les compositions selon l'invention sont alors mises en contact avec les hématies d'un 25 sujet dont on cherche à déterminer le groupe sanguin, et le groupe sanguin est déterminé de la façon suivante : - agglutination par la composition comprenant au moins 80% d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, mais pas par la composition comprenant au moins 80% d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B : le patient est de groupe 30 A. - agglutination par la composition comprenant au moins 80% d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B mais pas par la composition comprenant au moins 80% d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A : le patient est de groupe B. 35 - agglutination par la composition comprenant au moins 80% d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par la composition comprenant au moins 80% d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B : le patient est de groupe AB, - pas d'agglutination par aucune des deux compositions : le patient est de groupe O.
3035971 37 Cette méthode de détermination des groupes sanguins à l'aide des compositions selon l'invention sera avantageusement complétée par une recherche des anticorps spécifiques dans le sérum du patient.
5 Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention. EXEMPLES Exemple 1 : Préparation d'une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales, enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B Une première composition d'immunoglobulines humaines polyclonales selon l'invention, 10 enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B a été préparée. Matériels et méthodes Une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée a été préparée à partir d'un pool de plasma selon le procédé décrit dans la demande W002/092632.
15 Cette composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée a ensuite été adsorbée sur une colonne de chromatographie d'affinité de 1nnL remplie par un gel comprenant un mélange de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe A (colonne A) et de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes 20 de groupe B ( colonne B), dans des proportions respectives de 50/50 La charge était de 1,8 kg de composition d'immunoglobulines humaines polyclonales purifiée par litre de gel. Le temps de contact a été fixé à 2 minutes. La fraction non adsorbée est récupérée pour traitement ultérieur afin de préparer un concentré thérapeutique d'immunoglobulines humaines polyclonales 25 dépourvu d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B. La fraction d'intérêt dans le cadre de la présente invention est alors obtenue par assemblage de deux fractions d'élution : - Une 1è' élution de la colonne de chromatographie par un tampon acide (glycine 0.1M pH3), 30 - Une 2è" élution de la colonne de chromatographie par un tampon basique (glycine 0.1M pH11 ), suivi d'une neutralisation de la fraction d'assemblage (ajustement du pH à 7). Cette composition a ensuite été analysée par les technologies usuelles pour déterminer 35 la concentration en IgG, IgA et IgM, les taux de polymères, dimères, monomères et fragments d'immunoglobulines.
3035971 38 L'activité anti-A et anti-B de la composition a également été analysée par la méthode décrite dans W02007/077365 et comparée à celle d'une Immunoglobuline humaine normale lyophilisée.
5 Résultats La composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales de départ, qui a été adsorbée sur la colonne de chromatographie d'affinité anti-A et anti-B possède les caractéristiques suivantes : - Protéines totales : 10,0 g/L - IgG : 9,20 g/L (Sous classes : IgG1 : 65% ; IgG2 : 30%; IgG3 : 3%; IgG4 : 2%) - IgA : < 0,013 g/L - IgM : < 0,009 g/L - DTM (distribution de taille moléculaire) o Polymères : <0,4% o Dimères : 5,4% o Monomères : 93,5% o Fragments : < 1,0% Suite à l'étape de chromatographie d'affinité anti-A et anti-B, la fraction d'assemblage 20 des deux élutions successives par un tampon acide puis par un tampon basique possède les caractéristiques suivantes : - IgG : 0,34 g/L - IgA :0,015 g/L - IgM : < 6,3 nng/L 25 - Anti-A : 622,3 UA* - Anti-B : 638,7 UA* - DTM (distribution de taille moléculaire) 30 A ce stade, l'activité anti-A et l'activité anti-B sont exprimées en unités arbitraires rapportées à une Immunoglobuline humaine normale lyophilisée, produit considéré 35 comme référentiel mis à 1. L'Immunoglobuline humaine normale lyophilisée, est un produit immunoglobulines normales humaines, disposant d'une autorisation de mise sur le marché en France. L'Immunoglobuline humaine normale lyophilisée, présente donc pour les anti-A et anti-B un résultat négatif au test de Coonnbs direct à la dilution 1/64 comme requis par les Autorités Règlennentaires. Ainsi, la composition obtenue par le 10 15 o Polymères : 0,1 % o Dimères : 2,9 % o Monomères : 95,6 % o Fragments : 1,3% 3035971 39 procédé selon l'invention possède une activité anti-A et une activité anti-B environ 600 fois plus importante que les immunoglobulines humaines normales polyvalentes de l'Immunoglobuline humaine normale lyophilisée (concentré thérapeutique d'immunoglobulines humaines polyclonales).
5 Conclusions Les résultats présentés ci-dessus montrent qu'il est possible d'obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B par récolte de la fraction d'une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales sur une colonne de chromatographie d'affinité porteuse de ligands reconnaissant spécifiquement les 10 anticorps anti-A et anti-B. Exemple 2: Préparation de compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales, enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B Les inventeurs ont ensuite cherché à séparer les immunoglobulines humaines 15 polyclonales anti-A des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B. Matériels et méthodes Afin de séparer les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, deux aliquots de la composition obtenue à l'Exemple 1 ont été soumis à deux traitements distincts : 20 1. Afin d'obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A purifiée, un 1' aliquot a été adsorbé sur une colonne de chromatographie d'affinité de 1nnL remplie par un gel de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe B (colonne 1). La charge était de 1,2 mg de composition 25 d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B purifiée par nnL de gel. Le temps de contact a été fixé à 2 minutes. La fraction non adsorbée a été récupérée pour analyses ultérieures. 2. Afin d'obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B purifiée, un 2è" aliquot a été adsorbé sur une colonne de 30 chromatographie d'affinité de 1nnL remplie par un gel de billes de cellulose réticulée poreuses greffées par le trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe A (colonne 2). La charge était de 1,2 mg de composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B purifiée par nnL de gel. Le temps de contact a été fixé à 2 minutes.
3035971 40 La fraction non adsorbée a été récupérée pour analyses ultérieures. Résultats Les résultats obtenus sont résumés dans le Tableau 3 ci-dessous : Colonne 1 Colonne 2 Fraction non adsorbée Fraction non adsorbée IgG (nrig/L) 3,4 3,6 Anti-A (UA*) 7323 0,00 Anti-B (UA*) 0,00 4248 5 Tableau 3. Concentration en IgG et activités anti-A et anti-B de la fraction non adsorbée. *UA = unités arbitraires par rapport au médicament Immunoglobuline humaine normale lyophilisée rapporté à 1. Les résultats présentés dans le Tableau 3 montrent que toutes les immunoglobulines 10 anti-B sont adsorbées sur la colonne 1, aucune activité anti-B n'étant détectée dans la fraction non adsorbée. Celle-ci possède uniquement une très forte activité anti-A. En effet, par rapport à l'activité anti-A de 622,3 UA de la composition obtenue à l'Exemple 1, la fraction non adsorbée sur la colonne 1 possède une activité anti-A de 7323 UA, soit environ 11,8 fois plus que la composition obtenue à l'Exemple 1.
15 Ainsi, le passage de la composition obtenue à l'Exemple 1 sur la colonne 1 (greffée par le trisaccharide caractéristique des antigènes B) permet d'obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines anti-A par récolte de la fraction non adsorbée. De manière similaire, les résultats présentés dans le Tableau 3 montrent que, toutes les 20 immunoglobulines anti-A sont adsorbées sur la colonne 2, aucune activité anti-A n'étant détectée dans la fraction non adsorbée. Celle-ci possède uniquement une très forte activité anti-B. En effet, par rapport à l'activité anti-B de 638,7 UA de la composition obtenue à l'Exemple 1, la fraction non adsorbée sur la colonne 2 possède une activité anti-B de 4248 UA, soit environ 6,7 fois plus que la composition obtenue à l'Exemple 1.
25 Ainsi, le passage de la composition obtenue à l'Exemple 1 sur la colonne 2 (greffée par le trisaccharide caractéristique des antigènes A) permet d'obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines anti-B par récolte de la fraction non adsorbée. Conclusions Les résultats présentés ci-dessus montrent que l'utilisation d'une deuxième étape de 30 chromatographie d'affinité avec une colonne porteuse du trisaccharide caractéristique des antigènes A ou du trisaccharide caractéristique des antigènes B permet de séparer 3035971 41 les immunoglobulines anti-A des immunoglobulines anti-B, et ainsi d'obtenir des compositions purifiées d'immunoglobulines anti-A ou d'immunoglobulines anti-B. La composition purifiée d'immunoglobulines anti-A est obtenue par récolte de la fraction non adsorbée à une colonne porteuse du trisaccharide caractéristique des 5 antigènes B. En effet, les conditions opératoires sont optimisées de façon que toutes les immunoglobulines anti-B se lient à une colonne porteuse du trisaccharide caractéristique des antigènes B. De même, la composition purifiée d'immunoglobulines anti-B est obtenue par récolte de la fraction non adsorbée à une colonne porteuse du trisaccharide caractéristique des 10 antigènes A. En effet, les conditions opératoires sont optimisées de façon que toutes les immunoglobulines anti-A se lient à une colonne porteuse du trisaccharide caractéristique des antigènes A. Pour obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines anti-A à partir de la composition obtenue à l'Exemple 1, il est donc nécessaire de récolter la fraction non 15 adsorbée d'une colonne porteuse du trisaccharide caractéristique des antigènes B. De même, pour obtenir une composition purifiée d'immunoglobulines anti-B à partir de la composition obtenue à l'Exemple 1, il est donc nécessaire de récolter la fraction non adsorbée d'une colonne porteuse du trisaccharide caractéristique des antigènes A.
20 Les compositions purifiées d'immunoglobulines anti-A et/ou d'immunoglobulines anti-B peuvent être utilisées en tant que témoin positif dans une méthode dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition d'immunoglobulines humaines polyclonales. Exemple 3: Caractérisation des compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales, enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou en 25 immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, obtenues dans l'Exemple 2 La composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B obtenue par élution de la fraction adsorbée d'une 1è' étape de chromatographie dans l'Exemple 1 a été concentrée par ultrafiltration sur une membrane PELLICON 2, 30kDa, de 0,1 m2 (Merck Milliporee).Les compositions d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A 30 ou d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (fractions non adsorbées obtenues à l'issue de la 2è" étape de chromatographie de l'Exemple 2), ont été concentrées par ultrafiltration à l'aide d'une membrane PELLICON XL Bionnax, 30kDa, de 50 cnn2 (Merck Milliporee) puis reconcentrées 10 fois par centrifugation sur Annicon Ultra, membrane Ultracel(Merck Milliporee) . Les compositions sont ensuite caractérisées plus finement 35 concernant la répartition des différentes sous-classes d'IgG, l'intégrité des IgG (pourcentages de monomères, dimères, polymères, et fragments), et leur activité vis-à-vis d'hématies de groupe sanguin 0 (ne portant ni les antigènes A ni les antigènes B), d'hématies de groupe sanguin A (porteuses d'antigènes A, mais pas d'antigènes B), et d'hématies de groupe sanguin B (porteuses d'antigènes B, mais pas d'antigènes A). La 3035971 42 même caractérisation a été réalisée sur une composition d'immunoglobulines humaines normales administrée par voie intraveineuse (IgIV) déplétée en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B. Méthodes de caractérisation 5 Répartition des sous-classes d'IgG La répartition des sous-classes d'IgG a été mesurée par trois méthodes distinctes : néphélénnétrie, spectrographie de masse, et électroluminescence (MSD). Néphélénnétrie : Le principe de dosage par néphélénnétrie est fondé sur la réaction en phase fluide d'un antigène avec un anticorps spécifique. Le complexe anticorps- 10 antigène insoluble formé provoque une turbidité, que l'on mesure par une technique néphélénnétrique, dont le principe est le suivant : lorsqu'un faisceau lumineux traverse un milieu trouble, une partie de la lumière est déviée de sa trajectoire (phénomène de diffusion). La mesure au moyen d'un photorécepteur de la lumière diffusée selon un certain angle par rapport au faisceau incident, permet de quantifier le trouble par un 15 signal électrique. La relation entre la concentration d'antigène et le signal électrique obtenu, pour une concentration d'anticorps constante est décrite par la courbe de HEIDELBERGER-KENDALL. Le domaine de mesure se situe dans la partie ascendante de la courbe correspondant à un excès d'anticorps. Les mesures de néphélénnétrie ont été réalisées avec un néphélénnètre BNII (SIEMENS) avec Logiciel Version 2.5/F.
20 Spectrographie de masse (LC-MS) : Cette méthode permet la quantification et la caractérisation des sous-classes et allotypes d'IgG. La cystéine protéinase de Streptococcus pyogenes (IdeS) clive spécifiquement les IgG humaines dans la région charnière. Les fragments Fc/2 générés à partir des sous-classes IgGs sont séparés par chromatographie et les différents allotypes de chaque sous-classe sont caractérisés par 25 spectrométrie de masse. La protéolyse enzymatique et la glycolyse ont été obtenus en incubant 10 pl de l'échantillon à une concentration de 10 mg / ml dans un tampon phosphate salin à 100 Ul de Ides et 100 Ul d'enzymes IgGZero pendant 1 heure à 37°C. La réduction des IgG digérées a été réalisée en ajoutant 35 pl de tampon de dénaturation (guanidine-HCl 8M, 30 Tris-HCl 0,1M, pH 7,5) et 5 pl d'une solution à 200 nnM de Un-. La préparation a été incubée à 50°C pendant 30 minutes. La séparation des fragments Fc/2 a été effectuée sur un système Acquity (Waters, Mil gué, MA, USA) couplé à un détecteur UV et un spectromètre de masse électrospray (Synapt G25, Waters, Milford, MA, USA). Environ 20 pg de l'échantillon ont été injectés 35 sur une colonne Pursuit diphényl 150 mm x 2,0 mm (Agitent, Santa Clara, CA, USA) équilibrée à 70°C et fonctionnant à un débit d'écoulement de 200 pl/min. Un gradient d'élution a été appliqué en utilisant un solvant A (0,1% de TFA dans l'eau) et un solvant B (90% de MeCN, 10% d'eau et 0,1% de TFA), après une élution isocratique à 10% de B pendant 5 min, B a été porté à 38% pendant 10 min et à 44% pendant 48 minutes 3035971 43 supplémentaires. La colonne a ensuite été lavée pendant 4 min à 80% de B, et en outre équilibrée pendant 9 min à 10% de B. Le spectromètre de masse a été utilisé dans le mode de résolution positive et les données ont été enregistrées pour des nn/z de 200 à 2000. Les spectres de masse de protéines ont été déconvolués à l'aide du logiciel 5 MassLynx. Electrolunninescence (MSD) : la détection par électroluminescence utilise des marqueurs qui émettent de la lumière lorsqu'ils sont stimulés électrochinniquennent. Le bruit de fond est minimal parce que le mécanisme de stimulation (électricité) est découplé du signal (lumière). Les marqueurs sont stables, non-radioactifs et émettent de la lumière 10 à -620 nnn, éliminant les problèmes de quenching. Peu de composés interfèrent avec les marqueurs électroluminescents. Des cycles d'excitation multiple de chaque marqueur amplifient le niveau de signal lumineux et permettent d'augmenter la sensibilité. La technologie Meso Scale Discovery (MSD) a été utilisée, en suivant les recommandations du fabricant. Cette technologie repose sur l'utilisation de nnicroplaques comprenant des 15 électrodes de carbone intégrées au fond des puits. Intégrité des IgG La quantification des formes polynnériques, dinnériques, nnononnériques ainsi que les éventuels produits de dégradation (fragments) des IgG a été mesurée par deux méthodes distinctes : SDS-PAGE et chromatographie d'exclusion de taille haute 20 performance (HPSEC). SDS-PAGE : Les échantillons ont été analysés par migration électrophorétique sur gel SDS-PAGE en système MULTIPHOR (GE). 2 pg d'échantillon sont ajoutés à 3 pl de tampon Tris 250 nnM, pH 7,5, SDS 5% (+1,5 pl de réductant NuPAGE Sannple Reducing Agent (10x) 25 - Invitrogen Réf. NP0004 pour les conditions réductrices). Après agitation, l'échantillon est chauffé à 95°C pendant 3 minutes juste avant le dépôt sur un gel ExcelGel SDS Honnogeneous 12.5%. La méthode de migration suivante est utilisée : - pour 1 gel entier : 600 V ; 50 nnA ; 30W pendant 1h30; - pour 2 gels entiers : 600 V ; 100 nnA ; 60W pendant 1h30.
30 Pour la révélation au CBB (Bleu de Coonnassie Brillant, BioRad Réf. 161-0406), le gel est mis en contact avec la solution de coloration (Méthanol 50%, Acide Acétique 7%, 0,1% CBB) sous agitation pendant 30 min, puis avec la solution de décoloration 1 (Méthanol 50%, Acide Acétique 7%) sous agitation pendant 5 min, puis la solution de décoloration 2 (Méthanol 5%, Acide Acétique 7%) sous agitation jusqu'à obtenir un fond clair et 35 homogène. Quand le gel est suffisamment décoloré, le gel est mis en eau. Pour la révélation au nitrate d'argent, les gel est mis en contact pendant 30 min avec la solution de fixation (250 ml d'éthanol 40%, acide acétique 10% dans de l'eau PPI), sous agitation modérée sur un agitateur, puis pendant 30 min avec la solution de sensibilisation (75 ml d'éthanol absolu + 17 g d'acétate de sodium + 10 ml de thiosulfate 40 de sodium, qsp 250 ml d'eau PPI+ 1,25 ml de glutardialdehyde extemporané) sous 3035971 44 agitation, avant d'être rincé 3 x 5 min en eau PPI. Le gel est alors mis en contact pendant 20 min avec la solution d'AgNO3 (10% AgNO3 dans 250 ml + 100 pl de fornnaldéhyde extemporané) sous agitation, avant d'être rincé 2 x 1 min en eau PPI. Le gel est ensuite mis en contact avec la solution de développement (6,25 g de carbonate 5 de sodium dans 250 nnL d'eau PPI + 50 pl de fornnaldéhyde extemporané), et on laisse la coloration se développer (2 à 5 min maximum) sous agitation. Le développement est stoppé en éliminant la solution et en mettant le gel en contact avec la solution d'EDTA (3,65 g d'EDTA dans 250 nnL d'eau PPI) pendant 10 min minimum.
10 HPSEC : Cette technique permet de séparer les protéines selon leur taille moléculaire. Un système DIONEX Ultinnate 3000 avec une colonne Superdex Tricorn 200 10/300 GL (GE Healthcare Réf. 17-5175-01) a été utilisé. Les conditions d'analyse suivantes ont été utilisées : - Débit : 0,4nn1/nnin 15 - Phase Mobile : Tampon PBS - Température Injecteur : 5° C El 2° C - Température Colonne : Température Ambiante - Longueur d'onde de détection : 280 nnn - Volume injecté : cf. § 5.3.1, 5.3.2, 5.3.3 20 - Temps d'acquisition : 60 min Les chromatogrammes sont intégrés et des aires relatives sont calculées par le logiciel Chronneleon en %, selon la formule : Aire relative du pic Y = (aire pic Y x 100)/ aire totale Activité des compositions 25 Le dosage de l'activité anti-A, ou anti-B sur des hématies A, B ou 0 a été réalisé par le test en cytonnétrie utilisant un F(ab')2 marqué par un marqueur fluorescent, tel que décrit à l'exemple 2 de la demande W02007/077365. Brièvement, une suspension d'hématies à 40.106 hématies/ml est préparée en PBS/BSA 1%. 50 pL de cette suspension est déposée dans une micro plaque 96 puits à fond rond 30 (2.106 hématies/puits). Des gammes de dilution des standards (Immunoglobuline humaine normale lyophilisée ou référence Y0001688 de l'EDQM (European Directorate for the Quality of Medicines Et HealthCare)) sont réalisées. 50 pl d'une dilution de standard ou d'un échantillon à tester sont ajoutés aux 50 pl d'hématies dans la nnicroplaque, qui est recouverte d'un film adhésif et incubée 2 heures à 37°C ± 2°C sous 35 agitation. Après trois lavages en PBS/BSA 1%, le conjugué F(ab')2 de chèvre anti-humain marqué par un marqueur fluorescent et ajouté et la plaque est incubée 20 à 30 minutes à température ambiante à l'abri de la lumière. Après 3 lavages, les dilutions de standard et les échantillons sont repris dans 200 pl de PBS/BSA 1%. Les échantillons sont alors analysés en cytonnétrie en flux (Becknnan Coulter FC500). La lecture est effectuée 3035971 sur 50 000 événements et l'appareil calcul automatiquement l'intensité moyenne de fluorescence (IMF) de chaque point de gamme ou échantillon. L'IMF est rapportée en fonction de la concentration en standard et l'équation de la droite de régression est obtenue au moyen du logiciel Excel. Puis, pour chaque échantillon, la concentration en 5 équivalent standard est obtenue en utilisant l'équation linéaire de la droite de régression. L'activité est exprimée en unités arbitraires par rapport au standard (référence Y0001688 de l'EDQM ou médicament (immunoglobuline humaine normale lyophilisée)) rapporté à 1.
10 Résultats Répartition des sous-classes d'IgG Les résultats sont présentés dans le Tableau 4 ci-dessous, et montrent que les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B obtenues dans l'Exemple 1 après élution de la fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales totales adsorbée 15 sur une colonne de chromatographie d'affinité porteuse du trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe A et du trisaccharide caractéristique des antigènes de groupe B, sont enrichies en IgG2 par rapport à la composition d'immunoglobulines humaines polyclonales déplétées en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B. C'est également le cas, de façon encore plus prononcée, pour les compositions 20 d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A ou d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-B (fractions non adsorbées obtenues à l'issue de la 2è" étape de chromatographie de l'Exemple 2). Ainsi, les immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et les immunoglobulines humaines polyclonales anti-B d'isotype IgG sont caractérisées par un enrichissement en isotype IgG2.
25 3035971 46 Référence Produits Composition d'immunoglobulines humaines Composition d'immunoglobulines normales déplétée en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B humaines polyclonales anti-A et anti-B (Exemple 1) IgG (g/l) 50 14,4 Néphélémétrie Spectrographie MSD Néphélémétrie Spectrographie MSD IgG1 (g/l) 29,6 (61%) 65% 35,44 4'42 (32,6%) 28% 4,74 (65%) (40,6%) IgG2 (g/l) 17,1 (35%) 32% 14,82 8'82 (65,1%) 70% 6,06 (27%) (52%) IgG3 (g/l) 1,049 (2,16%) 3% 3,54 0'227 (1,7%) 2% 0,851 (6,48%) (7,3%) IgG4 (g/l) 0,744(1,5%) 0,823 0'0807 (0,59%) 0,068 (1,5%) (0,58%) Somme 48,493 54,623 13,5477 11,6578 (g/l) Référence Produits Composition d'immunoglobulines humaines Composition d'immunoglobu humaines polyclonales anti-B (Exemple 2) mes polyclonales anti-A (Exemple 2) IgG (g/l) 0,694 0,538 Néphélémétrie Spectrographie MSD Néphélémétrie Spectrographie MSD IgG1 (g/l) 0,0904 (17,6%) 15% 0,049 0 '127(19%) 16% 0,046 (18,8%) (19%) IgG2 (g/l) 0,408 (79,6%) 84% 0,197 0 '474 (72,2%) 81% 0,175 (75,6%) (73,6%) IgG3 (g/l) 0,00264 (0,51%) 2% 0,0068 0'00432 (0,65%) 3% 0,00909 (2,6%) (3,8%) IgG4 (g/l) 0,01156 (2,25%) 0,00783 0'01185 (1,8%) 0,00752 (3%) (3,16%) Somme 0,5126 0,2606 0,65605 0,23761 (g/l) Tableau 4. Concentration et répartition des sous-classes d'IgG parmi les différentes compositions testées Intégrité des IgG Les résultats de SDS-PAGE et de HPSEC sont synthétisés dans le Tableau 5 ci-dessous.
5 Les résultats obtenus montrent que les immunoglobulines sont intègres à plus de 87% pour toutes les compositions testées.
3035971 47 Référence Composition d'immunoglobulines Produits humaines polyclonales anti-A et anti-B (Exemple 1) SDS-Page intégrité IgG 89,60% HPSEC Polymères 2 - Polymères 1 0,50% Dimères 7,30% Monomères 90,90% Fragments 1,30% Référence Produits Composition d'immunoglobulines Composition d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A humaines polyclonales anti-B (Exemple 2) (Exemple 2) SDS-Page SDS-Page intégrité IgG 87,00% 87,80% HPSEC HPSEC Polymères 2 0,70% - Polymères 1 0,50% 8,30% Dimères 3,00% 3,10% Monomères 94,40% 87,30% Fragments 1,30% 1,40% Tableau 5. Intégrité des immunoglobulines dans les compositions testées. ND : non déterminé. Activité vis-à-vis des hématies Les résultats sont présentés dans le Tableau 6 ci-dessous, exprimés en unités arbitraires 5 par rapport au standard de référence EDQM ou au médicament Immunoglobuline humaine normale lyophilisée, rapportés à 1.
3035971 48 Référence Composition d'immunoglobulines humaines normales déplétée en Composition Produits immunoglobulines humaines d'immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B polyclonales anti-A et anti-B (Exemple 1) Cytométrie Ref EDQM Ref Ref EDQM Ref Immunoglobuline Immunoglobuline humaine normale humaine normale lyophilisée lyophilisée Activité 0,17 0,75 251,36 930,24 Hématies A Activité 0,07 0,43 344,06 1271,81 Hématies B Activité o o o o Hématies 0 Rapport anti- 2,43 1,74 0,73 0,73 A/anti-B Rapport anti- 0,41 0,57 1,37 1,37 B/anti-A Référence Composition d immunoglobulines Composition Produits humaines polyclonales anti-A d'immunoglobulines humaines (Exemple 2) polyclonales anti-B (Exemple 2) Cytométrie Ref EDQM Ref Ref EDQM Ref Immunoglobuline Immunoglobuline humaine normale humaine normale lyophilisée lyophilisée Activité 2801,73 11043,7 o o Hématies A Activité o o 4923,24 19326,71 Hématies B Activité o o o o Hématies 0 Tableau 6. Activité de la composition testée dans le test de cytonnétrie vis-à-vis des hématies de groupe sanguin 0, A et B. *UA = unités arbitraires par rapport au standard de référence EDQM ou au médicament Immunoglobuline humaine normale lyophilisée rapporté à 1.
5 Ces résultats confirment qu'il est possible d'obtenir, par le procédé décrit ici, des compositions purifiées : - fortement enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et possédant une forte activité anti-A mais pas d'activité anti-B, ou 10 - fortement enrichies en en immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et possédant une forte activité anti-B mais pas d'activité anti-A.
3035971 49 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Thorpe SJ, Fox BJ, Dolman CD, Thorpe R. Anti-A and anti-B activity in batches of different intravenous innnnunoglobulin products deternnined using a direct haennagglutination nnethod. Biologicals.
2005 Jun;33(2):111-6.
5 Thorpe SJ, Fox B, Sharp G, Heath AB, Behr-Gross ME, Terao E, Virata-Theinner ML, Yu MW. International collaborative study to evaluate candidate reference reagents to standardize haennagglutination testing for anti-A and anti-B in normal intravenous innnnunoglobulin products. Vox Sang.
2009 Aug;97(2):160-8. Thorpe SJ, Fox B, Sharp G, Heath AB, Behr-Gross ME, Terao E, Virata-Theinner ML, Yu 10 MW. International collaborative study to establish reference preparations to standardise haennagglutination testing for anti-A and anti-B in normal intravenous innnnunoglobulins by the direct nnethod. Pharnneur Bio Sci Notes.
2010 Apr;2010(1):39- 50. WHO/BS/08.2091 15 W099/64462 W001/27623 W002/092632 W02007/077365

Claims (29)

  1. REVENDICATIONS1. Composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou antiB.
  2. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que les immunoglobulines humaines polyclonales représentent au moins 85% en poids des protéines totales de la composition.
  3. 3. Composition selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A.
  4. 4. Composition selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce qu'au moins 80% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B.
  5. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 4, caractérisée en ce qu'elle possède une activité anti-A ou une activité anti-B enrichie d'un facteur au moins 4 par rapport à une référence EDQM ou à des immunoglobulines humaines normales lyophilisées.
  6. 6. Composition selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce la composition comprend à la fois des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est compris entre 1/10 et 10/1.
  7. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1, 2 et 6, caractérisée en ce qu'elle possède un rapport (activité anti-A/ activité anti-B) compris entre 1/10 et 10/1.
  8. 8. Composition selon la revendication 6 ou la revendication 7, caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est compris entre 2/1 et 10/1. 3035971 51
  9. 9. Composition selon la revendication 6 ou la revendication 7, caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est compris entre 1/10 et 1/2. 5
  10. 10. Composition selon la revendication 6 ou la revendication 7, caractérisée en ce que le rapport en poids immunoglobulines humaines polyclonales anti-A sur immunoglobulines humaines polyclonales anti-B est compris entre 3/10 et 7/10, avantageusement entre 4/10 et 6/10. 10
  11. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle présente une concentration en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B supérieure à 1 g/L.
  12. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée en ce 15 qu'au moins 90% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales présentes dans la composition sont des IgG.
  13. 13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'au moins 40% en poids des immunoglobulines humaines polyclonales d'isotype IgG présentes dans la 20 composition sont de sous-classe IgG2.
  14. 14. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle possède un ratio en poids IgG2/IgG1 d'au moins 0,8. 25
  15. 15. Procédé de préparation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, comprenant les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou un ligand 30 spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, et c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée. 35
  16. 16. Procédé de préparation d'une composition selon la revendication 3 ou la revendication 5, comprenant les étapes suivantes : a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, 3035971 52 b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure éventuelle, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée, d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un 5 ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B, et e) récolte de la fraction non adsorbée.
  17. 17. Procédé de préparation d'une composition selon la revendication 4 ou la revendication 5, comprenant les étapes suivantes : 10 a) adsorption d'un lot de plasma humain ou d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, b) mise en réserve de la fraction non adsorbée pour une utilisation ultérieure 15 éventuelle, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée, d) adsorption de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A, et e) récolte de la fraction non adsorbée. 20
  18. 18. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisé en ce que le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-A comprend le trisaccharide GalNAca1 -3 (Fuca1 -2)Gal. 25
  19. 19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 18, caractérisé en ce que le ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B comprend le trisaccharide Gala1 -3 (Fuca1 -2)Gal.
  20. 20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 19, caractérisé en ce que le 30 support utilisé à l'étape a) et/ou à l'étape d) se présente sous la forme : a) de particules, avantageusement de particules de polymère, greffées par le ou les ligands d'intérêt, ou b) d'une membrane polyrnérique, la membrane étant greffée par le ou les ligands d'intérêt. 35
  21. 21. Procédé selon la revendication 20, caractérisé en ce que le polymère des particules ou de la membrane est choisi parmi la cellulose et ses dérivés, l'agarose, le dextran, les polyacrylates, le polystyrène, le polyacrylarnide, le polyrnéthacrylannide, les copolymères de styrène et divinylbenzène, ou les mélanges de ces polymères. 40 3035971 53
  22. 22. Procédé selon la revendication 20 ou la revendication 21, caractérisé en ce que le ou les ligands d'intérêt sont greffés sur les particules de polymères ou sur la membrane polyrnérique par l'intermédiaire d'un espaceur. 5
  23. 23. Composition susceptible d'être obtenue par le procédé selon l'une quelconque des revendications 15 à 22.
  24. 24. Procédé de préparation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 comprenant les étapes suivantes : 10 a) adsorption d'une fraction d'immunoglobulines humaines polyclonales prépurifiée, en particulier d'une fraction de plasma humain enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales issue d'une chromatographie échangeuse d'anions à pH alcalin, sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines humaines polyclonales anti-B et par un ligand spécifique des immunoglobulines 15 humaines polyclonales anti-A, b) récupération de la fraction non adsorbée pour l'utilisation dans un procédé de purification d'un concentré d'immunoglobulines humaines polyvalentes déplété en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et anti-B, c) dissociation et récolte de la fraction adsorbée à l'étape a), 20 d) adsorption d'une partie de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du groupe sanguin B, et récolte de la fraction non adsorbée enrichie en anti-A, e) adsorption de l'autre partie de la composition obtenue à l'étape c) sur un support greffé par un ligand spécifique des immunoglobulines reconnaissant les antigènes du 25 groupe sanguin A, et récolte de la fraction non adsorbée enrichie en anti-B.
  25. 25. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 et 23 comme témoin positif dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales.
  26. 26. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 et 23 pour la préparation d'un témoin positif destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales.
  27. 27. Procédé de préparation d'un témoin positif inférieur à la limite, d'un témoin positif limite, ou d'un témoin positif supérieur à la limite destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, comprenant les étapes suivantes : 30 35 3035971 54 a) la fourniture d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales possédant une activité anti-A et une activité anti-B inférieures à une valeur limite donnée dans ladite méthode de dosage, b) l'ajout de quantités croissantes d'une composition selon la revendication 3 et/ou 5 d'une composition selon la revendication 4 et/ou d'une composition selon l'une quelconque des revendications 6 à 10 pour obtenir différentes compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B, c) le dosage par ladite méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B des compositions enrichies en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti- 10 B obtenues à l'étape b), et d) la sélection de la composition enrichie en immunoglobulines humaines polyclonales anti-A et/ou anti-B ayant une activité anti-A et/ou anti-B dans ladite méthode de dosage inférieure (pour obtenir un témoin positif inférieur à la limite), égale (pour obtenir un témoin positif limite), ou supérieure (pour obtenir un témoin 15 positif supérieur à la limite) à ladite valeur limite.
  28. 28. Témoin positif destiné à être utilisé dans une méthode de dosage de l'activité anti-A et/ou anti-B d'une composition comprenant des immunoglobulines humaines polyclonales, susceptible d'être obtenu par le procédé selon la revendication 27. 20
  29. 29. Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, ou d'une composition susceptible d'être obtenue par le procédé selon la revendication 16 ou la revendication 17, dans un test de détermination du groupe sanguin d'un sujet.
FR1554122A 2015-05-07 2015-05-07 Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b Pending FR3035971A1 (fr)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1554122A FR3035971A1 (fr) 2015-05-07 2015-05-07 Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b
EP16723306.3A EP3291904A1 (fr) 2015-05-07 2016-05-06 Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b
PCT/EP2016/060158 WO2016177871A1 (fr) 2015-05-07 2016-05-06 Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b
US15/568,781 US20180100023A1 (en) 2015-05-07 2016-05-06 Composition Enriched in Anti-A and /or Anti B Polyclonal Immunoglobulins

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1554122A FR3035971A1 (fr) 2015-05-07 2015-05-07 Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b

Publications (1)

Publication Number Publication Date
FR3035971A1 true FR3035971A1 (fr) 2016-11-11

Family

ID=54186058

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR1554122A Pending FR3035971A1 (fr) 2015-05-07 2015-05-07 Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20180100023A1 (fr)
EP (1) EP3291904A1 (fr)
FR (1) FR3035971A1 (fr)
WO (1) WO2016177871A1 (fr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110672862B (zh) * 2019-09-29 2023-03-31 迈克生物股份有限公司 一种血型检测卡及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001027363A1 (fr) * 1999-10-13 2001-04-19 Abb Research Ltd. Dispositif et procede destines au traitement thermique d'un objet dans un suscepteur
WO2007077365A2 (fr) * 2005-12-26 2007-07-12 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Societe Anonyme CONCENTRE D’IMMUNOGLOBULINES G (IgG) APPAUVRI EN ANTICORPS ANTI-A ET ANTI-B, ET EN IgG POLYREACTIVES
WO2013062479A1 (fr) * 2011-10-28 2013-05-02 Glycorex Transplantation Ab Procédé pour l'élimination extracorporelle d'un ou de plusieurs constituants à partir du sang

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2330170C (fr) 1998-06-09 2010-11-02 Statens Serum Institut Procede de production d'immunoglobulines destinees a une administration intraveineuse et d'autres produits d'immunoglobulines
WO2001027623A2 (fr) 1999-10-08 2001-04-19 V.I. Technologies, Inc. Composes du sang appauvris en isoagglutinine et leurs procedes de fabrication
FR2824568B1 (fr) 2001-05-11 2004-04-09 Lab Francais Du Fractionnement Procede de preparation de concentres d'immunoglobulines humaines a usage therapeutique
CN102892774A (zh) * 2010-05-05 2013-01-23 阿尔利克斯公司 利用抗体使人类红细胞功能化的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001027363A1 (fr) * 1999-10-13 2001-04-19 Abb Research Ltd. Dispositif et procede destines au traitement thermique d'un objet dans un suscepteur
WO2007077365A2 (fr) * 2005-12-26 2007-07-12 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Societe Anonyme CONCENTRE D’IMMUNOGLOBULINES G (IgG) APPAUVRI EN ANTICORPS ANTI-A ET ANTI-B, ET EN IgG POLYREACTIVES
WO2013062479A1 (fr) * 2011-10-28 2013-05-02 Glycorex Transplantation Ab Procédé pour l'élimination extracorporelle d'un ou de plusieurs constituants à partir du sang

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
S J THORPE ET AL: "International collaborative study to evaluate a candidate reference preparation to define an appropriate specified limit of anti-D in intravenous immunoglobulin products", VOX SANGUINIS, 1 January 2005 (2005-01-01), pages 278 - 287, XP055146704, Retrieved from the Internet <URL:http://onlinelibrary.wiley.com/store/10.1111/j.1423-0410.2005.00622.x/asset/j.1423-0410.2005.00622.x.pdf?v=1&t=i1affk4q&s=d5d3d1955461bd4676321255960566ebeb8b11d8> [retrieved on 20141015], DOI: 10.1111/j.2005.1423-0410.00622.x *
S. J. THORPE ET AL: "International collaborative study to evaluate candidate reference reagents to standardize haemagglutination testing for anti-A and anti-B in normal intravenous immunoglobulin products", VOX SANGUINIS, vol. 97, no. 2, 1 August 2009 (2009-08-01), pages 160 - 168, XP055146510, ISSN: 0042-9007, DOI: 10.1111/j.1423-0410.2009.01194.x *
SUSAN J THORPE ET AL: "WHO Reference Reagents to standardise haemagglutination testing for anti-A and anti-B in normal intravenous immunoglobulia products Report of the international collaborative study to evaluate candidate WHO Reference Reagents", 1 January 2008 (2008-01-01), XP055147001, Retrieved from the Internet <URL:http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/69970/1/WHO_BS_08.2091_eng.pdf> [retrieved on 20141016] *

Also Published As

Publication number Publication date
US20180100023A1 (en) 2018-04-12
EP3291904A1 (fr) 2018-03-14
WO2016177871A1 (fr) 2016-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2345425B1 (fr) CONCENTRÉ D&#39;IMMUNOGLOBULINES G (IgG) APPAUVRI EN ANTICORPS ANTI-A ET ANTI-B, ET EN IgG POLYRÉACTIVES
EP3016729B1 (fr) Matrice de chromatographie d&#39;affinité
HUT65139A (en) Process for separating biomolecules by using linear polymers
CN106995496B (zh) 用于去除抗a和/或抗b抗体的新型亲和层析介质
KR102425339B1 (ko) 비타민 d 의 측정을 위한 방법
RU2010148904A (ru) Антитела к интерлейкину-1альфа и способы применения
TW201124428A (en) Method of dotecting cancer cells, method of structure analysis for sugar chain, and sugar chain derivatives
KR101921907B1 (ko) 항-a 또는 항-b 항체에 결합하는 크로마토그래피 매질의 품질 평가 방법
CA2489057A1 (fr) Compositions et methodes pour le dosage de l&#39;apo b48 et de l&#39;apo b100
TW202020453A (zh) 糖化血紅素(%)之測定方法
FR3008097A1 (fr) Matrice de chromatographie d&#39;affinite
KR101918545B1 (ko) 항-a 또는 항-b 항체를 제거하기에 적합한 매질의 품질 평가 방법
FR3035971A1 (fr) Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b
FR3008098A1 (fr) Matrice de chromatographie d&#39;affinite a densite de ligands reduite
McIntyre et al. Autoantibody potential of cancer therapeutic monoclonal antibodies
Hancock et al. Production of polyclonal antibodies in rabbits
CA2862287A1 (fr) Immunoglobuline chimerique monoclonale anti-hla, procede et kit mettant en oeuvre une telle immunoglobuline chimerique monoclonale
CA3015711A1 (fr) Procede de determination des concentrations actives et/ou des constantes cinetiques d&#39;interaction dans des echantillons biologiques complexes en resonance plasmonique de surface
EP2297201A1 (fr) Anticorps specifique de la lysine propionylee/butyrylee, son procede d&#39;obtention et ses applications
WO2016177870A1 (fr) Composition enrichie en immunoglobulines polyclonales anti-a et/ou anti-b pour son utilisation dans le traitement des maladies autoimmunes ou des polyglobulies
EP1697410A1 (fr) Facteur cytotoxique isole associe a la sclerose en plaques et procede de detection dudit facteur cytotoxique
Boysen et al. Research Article SEC Based Method for Size Determination of Immune Complexes of Therapeutic Antibodies in Animal Matrix
Daga Biophysical characterisation and profile of HLA-specific antibodies in transplantation
FR2679034A1 (fr) Determination de la malignite des cellules de tumeurs humaines ou animales, au moyen de lectines endogenes.
JPH0276577A (ja) モノクローナル抗体産生細胞ライン及びモノクローナル抗体

Legal Events

Date Code Title Description
PLFP Fee payment

Year of fee payment: 2

EXTE Extension to a french territory

Extension state: PF

PLSC Publication of the preliminary search report

Effective date: 20161111

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 3

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 4

PLFP Fee payment

Year of fee payment: 5

RX Complete rejection

Effective date: 20200604