FR3019743A1 - Composition de nanoparticules recouvertes d'une couche stabilisatrice composee de polymeres multifonctionnels phosphores porteurs de fonctions de biodistribution/ciblage - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une nouvelle composition et un nouveau procédé de préparation de nanoparticules magnétiques furtives. Cette composition est constituée de nanoparticules d'oxyde métallique recouvertes de polymères d'attache/biodistribution/ciblage multifonctionnels composés, au sein de la même macromolécule, d'un ou plusieurs groupements phosphorés d'attache permettant la liaison à la surface des particules magnétiques et une ou plusieurs fonctions hydrophiles susceptible de se lier ou d'être reconnues par des cellules ou des tissus cibles. L'invention concerne l'utilisation de ces nanoparticules stabilisées comme agent de contraste pour la caractérisation, le diagnostique et le suivi thérapeutique dans le domaine de la médecine nucléaire.

Description

DESCRIPTION DE L'INVENTION DOMAINE TECHNIQUE DE L'INVENTION [001] L'invention concerne une nouvelle composition et un nouveau procédé de préparation de nanoparticules magnétiques furtives. Cette composition est constituée de nanoparticules d'oxyde métallique recouvertes de polymères d'attache/biodistribution/ciblage multifonctionnels composés, au sein de la même macromolécule, d'un ou plusieurs groupements phosphorés d'attache permettant la liaison à la surface des particules magnétiques et une ou plusieurs fonctions hydrophiles susceptible de se lier ou d'être reconnues par des cellules ou des tissus cibles. L'invention concerne l'utilisation de ces nanoparticules stabilisées comme agent de contraste pour la caractérisation, le diagnostique et le suivi thérapeutique dans le domaine de la médecine nucléaire. ETAT DE L'ART [002] L'imagerie médicale par résonance magnétique (IRM) permet de visualiser un organe ou un tissu à partir de la densité de protons. L'administration d'un produit de contraste dans les organes soumis à examen permet d'accentuer la résolution des images obtenues par IRM ce qui contribue à améliorer la précision des diagnostiques. Ces produits de contraste sont des espèces magnétiques, par exemple paramagnétiques, ferromagnétiques ou superparamagnétiques. [3] Les substances paramagnétiques comprennent certains métaux comme le fer, le manganèse, le gadolinium à l'état ionique ou organométallique. Les substances de contraste ferromagnétiques comprennent généralement des particules d'agrégat magnétiques de taille micrométrique ou sous-micrométrique, c'est-à-dire non inférieure à 100-200 nm, par exemple des particules de ferrites, dont notamment de magnétite (Fe304), de maghémite (y-Fe203) et autres composés minéraux magnétiques d'éléments de transition qui se comportent comme des aimants permanents. Les particules superparamagnétiques sont habituellement de très petites particules de ferrite, dont notamment de magnétite (Fe304), de maghémite (y-Fe2O3) et autres composés minéraux magnétiques d'éléments de transition, de taille inférieure à environ 100-150 nm. [4] On connait déjà l'utilisation en IRM de produits de contrastes formulés à partir de chélates d'ions de métaux et décrit dans les documents WO 2006/100305, 35 WO 00/75141, W091/14178 et FR 2 836 916. [5] Pour obtenir des solutions colloïdales de particules magnétiques stables en milieu physiologique, il est nécessaire de conditionner la surface des particules magnétiques. Des particules magnétiques recouvertes de molécules organiques de faible poids moléculaire ont été décrites. [006] Le document J. of Coll. and Interf. Science 2001, 238, p 37-42 enseigne le recouvrement de particules magnétiques par des molécules organiques comportant une partie bisphosphonate qui permet d'obtenir des objets de petite taille (inférieure à 15 nm) et stables dans un large domaine de pH. [007] Cependant, la mesure de la taille hydrodynamique des particules recouvertes de composés bisphosphonates par PCS (Photon Correlation Spectroscopy) décrite dans ce document requiert une étape de filtration préalable sur des filtres de 100 nm, pour éliminer les agrégats et n'isoler que les particules de faible taille hydrodynamique. Cette mesure ne reflète donc pas la taille hydrodynamique réelle des particules obtenues qui est, en fait, beaucoup plus élevée. En outre, la purification des particules magnétiques nécessite la mise en oeuvre d'une étape de dialyse ou de traitement par des résines, ce qui s'avère laborieux, peu reproductible et très difficilement exploitable industriellement. [8] Il a été montré que de bonnes stabilisations de particules sont le plus souvent obtenues par l'utilisation de macromolécules stabilisantes. Ces macromolécules sont par exemple des carbohydrates comme le dextrane, des protéines comme l'albumine ou des polymères de synthèse comme les méthacrylates et les organosilanes. Les synthèses permettant d'aboutir à ce type de particules sont généralement effectuées selon le procédé dit « de Molday » (Référence : Robert S. Molday and D. Mackenzie ; J. of Immunological Methods (1982), 52, p 353-367) et nécessitent des purifications laborieuses et coûteuses. [9] Il est ensuite très avantageux de coupler les particules ainsi obtenues avec des ligands de ciblage appropriés (biovecteurs), de manière à ce qu'elles se lient à et/ou soient reconnues spécifiquement par des cellules ou tissus cibles. Ces ligands sont par exemple des peptides ou d'autres composés organiques porteurs de groupements hydrophiles tels que des groupements polyéthylène glycol (PEG) ou des aminoalcool. Les groupements de type PEG sont d'autant plus intéressant qu'il sont soluble à la température du corps humain, qu'ils sont peut coûteux et approuvés par les agences de réglementation de la santé (Référence : Jokerst, 3. V. et al. ; Nanomedicine (2011), 6, p 715-728). [10] WO 2004/058275 décrit la synthèse de composés utilisant, comme couche de stabilisation/d'attache, une couche de type gem- bisphosphonate, et comme ligand, parmi les nombreux ligands possibles, des groupements hydrophiles à effet sur la biodistribution. Il est en particulier décrit des composés se présentant sous la forme d'un noyau métallique N recouverts d'éléments de ciblage de formule S-C, dans laquelle S est un groupement gem-bisphosphonate greffé au noyau et de formule (I) Y-L-CH(P03H2)2 (I) C est un ligand hydrophile (couplée à la fonction X) de type aminoalcool et/ou de 40 type PEG ; avec : - L représente un groupement organique reliant la fonction Y à la fonction gembisphosphonate -CH(P03H2)2 ; - Y représente une fonction chimique capable d'être couplée au ligand hydrophile C. [11] Pour la préparation de ces composés, le procédé antérieur (utilisé de manière générale pour les USPIO) comprend schématiquement les étapes suivantes : a). Préparation du noyau métallique N des nanoparticules métalliques b). Enrobage du noyau N avec la couche stabilisatrice gem-bisphosphonate de formule Y-L-CH(P03H2)2 (I) c). Couplage de la particule obtenue avec le ou les biovecteurs [12] Cette méthode de préparation implique cependant qu'il est difficile d'avoir un contrôle satisfaisant de la quantité de ligand de ciblage greffé à la surface des particules stabilisées. [13] Or, le contrôle de la quantité de molécule d'affinité spécifique greffée est important pour moduler l'affinité de la solution finale de particules vis-à-vis de la cible, mais aussi pour moduler la pharmacocinétique, la biodistribution et éventuellement le métabolisme, l'excrétion et l'innocuité de ces particules. En outre, d'un point de vue industriel, il est intéressant de pouvoir minimiser la quantité de molécule d'affinité spécifique, dont le coût est en général très élevé. [14] De plus, les fonctions réactives à la surface de la molécule n'ayant pas réagi avec le ligand de ciblage sont susceptibles d'introduire des réactions toxiques in vivo. La fraction libre de biovecteur est quand-à-elle préjudiciable au niveau du 20 contraste en IRM. [15] Le document FR 2 921 838 décrit une amélioration importante de ce procédé et propose un procédé (désigné voie inverse) de préparation basé sur l'utilisation de composés constitués par un ou plusieurs ligands hydrophiles couplés chimiquement avec des groupements organiques de liaison gem-bisphosphonate 25 permettant le greffage sur le noyau métallique, puis ces éléments [groupement de liaison-ligand] sont couplés aux nanoparticules métalliques. Ce procédé permet d'optimiser et de contrôler avec reproductibilité le taux de greffage sur le noyau, d'éviter des étapes de purification et de simplifier la maîtrise pharmaceutique en minimisant les risques de contamination bactérienne ou pyrogène. Ce procédé de 30 préparation permet également de réduire considérablement les quantités de ligands de couplage utilisés et ainsi d'obtenir une fabrication du produit performante au niveau industriel. [16] Ce procédé de préparation de nanoparticules métalliques comprenant un noyau métallique N recouvert d'une couche stabilisatrice organique couplée à au 35 moins un ligand hydrophile à effet sur la stabilité/biodistribution des nanoparticules, le procédé comprenant les étapes de : a) préparation du noyau métallique N des nanoparticules métalliques ; b) préparation d'éléments de ciblage/stabilisation de formule S-C dans laquelle: -S est un groupe d'attache gem-bisphosphonate de formule (I) 40 -C est un ligand de biodistribution hydrophile, avantageusement choisi parmi les PEG ou les aminoalcools; c) greffage sur le noyau N d'au moins un élément de biodistribution/ciblage. [17] Cette méthode de préparation implique cependant que le greffage d'un ligand de biodistribution sur la particule a lieu, dans le meilleur des cas, par l'intermédiaire d'un seul groupement gem-bisphosphonate. [18] Un autre inconvénient de cette méthode est qu'un défaut de fonctionnalité du groupe d'attache de formule (I) peut induire une diminution de la densité de greffage autour du noyau N étant donnée que le couplage résulte de la réaction entre le groupement Y du composé de formule (I) et le ligand de biodistribution/ciblage. [19] Le demandeur a réussi à améliorer les méthodes de préparation de particules 10 stabilisées précédentes grâce à des compositions comprenant des polymères multifonctionnels porteurs de groupements d'attache phosphorés et de groupements de biodistribution/ciblage. [20] Par opposition aux procédés de préparation de l'art antérieur où le contrôle de la quantité de ligand de biodistribution dépend du couplage entre le groupement 15 Y du composé de formule (I) et le ligand de biodistribution/ciblage, la présente invention démontre que la combinaison de ces deux types de groupements fonctionnels au sein de la même macromolécule permet un meilleur contrôle de la quantité de ligand de biodistribution/ciblage greffé à la surface des particules stabilisées 20 [021] Selon des réalisations, le demandeur a également montré qu'il était possible de moduler la quantité de groupement phosphoré porté par le polymère et ainsi accroitre l'adhésion de ce dernier sur le noyau N par rapport aux groupements gem-bisphosphonate utilisés dans les documents de l'art antérieur.

OBJET DE L'INVENTION [022] L'objet de cette invention réside dans la préparation de nouveaux composés pour l'imagerie médicale basés sur un noyau métallique N recouvert d'une couche stabilisatrice constituée de polymères d'attache/biodistribution/ciblage contenant d'une part des groupements organiques fonctionnels de type phosphoré permettant le greffage sur les particules métalliques (groupement d'attache) et d'autre part des ligands de biodistribution hydrophile susceptible de lier ou d'être reconnues par des cellules ou des tissus cibles, l'ensemble de ces groupements étant portés par une unique chaine carbonée. [023] L'invention concerne le procédé de synthèse permettant l'obtention des polymères multifonctionnels et également le procédé de préparation des particules furtives à partir de ces polymères: a) Préparation du noyau métallique N des nanoparticules métalliques b) Préparation du polymère multifonctionnel de formule (II) dans laquelle Y R1 R2 - X est un groupement d'attache phosphoré - R1 et R2 sont des ligands de biodistribution hydrophile, R1 étant avantageusement choisi parmi les polyéthylènes glycols et R2 étant avantageusement choisi parmi les aminoalcools ou les aminopolyéthylène 20 glycols. -x est la proportion relative molaire d'unité monomère porteuse de fonction X composant le polymère. (0<x<1) -y est la proportion relative molaire d'unité monomère porteuse de fonction R1 composant le polymère. (0y<1) 25 -z est la proportion relative molaire d'unité monomère porteuse de fonction R2 composant le polymère. (0z<1) -n est le nombre total d'unité monomère formant le polymère, les valeurs de n représentent des nombres entiers allant de 1 à 1000, préférentiellement de 1 à 50, mieux encore de 1 à 20. 30 c) Greffage du polymère multifonctionnel sur le noyau N par au moins un des groupements d'attache X [024] L'utilisation des polymères d'attache/biodistribution/ciblage dans la préparation de particules magnétique constitue une amélioration importante du 35 procédé précédent du fait que le groupement d'attache phosphoré X et les groupements de biodistribution/ciblage R1 et R2 sont portés par la même macromolécule. De façon avantageuse, on peut parfaitement contrôler les taux de groupements phosphorés et de ligands biodistribution/ciblage R1 et R2 via des X n variations de valeurs de x, y et z ainsi que la masse molaire des polymères par modification de la valeur de n. [25] Les voies de synthèse de polymère connues permettant de contrôler de manière précise le nombre d'unité X, R1 et R2 par chaînes, la présente invention permet donc d'accéder à un contrôle simultané du nombre de site phosphoré d'attache et de la densité de groupement hydrophile de biodistribution/ciblage entourant le noyau N et, de ce fait, la taille hydrodynamique des nanoparticules furtives résultantes. [26] En outre, la synthèse des composés de formule (II) étant relativement simple à mettre en oeuvre et ne nécessitant pas d'étapes de purification laborieuses, le procédé d'obtention de particules magnétique stabilisée par une couche polymérique proposé par le demandeur est facilement transposable à l'échelle industrielle. NOYAU METALLIQUE N [027] On décrit tout d'abord le noyau N. Le noyau métallique des nanoparticules préparées est typiquement composé en tout ou partie d'hydroxyde de fer ; d'oxyde de fer hydraté ; d'oxydes de fer mixtes tels que des oxydes de fer mixtes de cobalt, de nickel, de manganèse, de béryllium, de magnésium, de calcium, de baryum, de strontium, de cuivre, de zinc ou de platine ; ou d'un mélange de ceux-ci. Le terme "ferrite" désigne les oxydes de fer de formule générale [xFe203,y MOz], où M désigne un métal magnétisable sous l'effet d'un champ magnétique tel que Fe, Co, Ru, Mg, Mn, le métal magnétisable pouvant être éventuellement radioactif. De façon préférentielle, les particules magnétiques des compositions de l'invention comprennent une ferrite, notamment la maghémite (yFe2O3) et la magnétite (Fe304), ou encore les ferrites mixtes de cobalt (Fe2Co04) ou de manganèse (Fe2MnO4). [028] On pourra aussi utiliser pour le noyau des métaux non superparamagnétiques tels que les oxydes de lanthanides (gadolinium, cérium et europium notamment), des particules à luminescence retardée (PNAS, 2007, 29,104,22,9266 : particules de CaZnHgSiO dopé avec des lanthanides Eu3÷, Dy3+, Mn2÷), un composé mixte à base des éléments choisis dans le groupe consistant en Ca, Mn, Mg, Si et O, ledit composé mixte étant dopé par des lanthanides, des particules de type quantum dot. PREPARATION DES COMPOSES DE FORMULE (II) [029] Les polymères d'attache/biodistribution/ciblage porteurs de groupements d'attache phosphorés d'une part et de groupements de biodistribution/ciblage d'autre part, sont composés de plusieurs monomères. Ces polymères peuvent être synthétisés par un procédé de polymérisation en solution ou en émulsion ou en suspension. Ils peuvent être sous la forme de polymères statistiques, polymères à gradient, polymères à blocs, polymères greffés. Ils peuvent être obtenus par polymérisation radicalaire, polymérisation radicalaire contrôlée (RAFT, ATRP, NMP, RITP, ...), polymérisation ionique, polymérisation par transfert de groupe ou par polymérisation de coordination. [30] Les groupements d'attaches X selon l'invention sont les groupements qui 5 assurent la fixation du composé de formule (II) sur le noyau métallique N. De préférence, le groupement X est un groupement phosphoré de type acide phosphonique, phosphate ou phosphonate. [31] Dans le cadre de l'invention, les monomères porteurs de groupement 10 d'attache phosphoré X pouvant être polymérisés en vue de l'obtention de composés de formule (II) concerne les composés de structure suivante : CH2z---- C H CH2= CH CH2-= CH I I I A O C- A I II A 0 CH3 CH2= C/ CH2= CH C- A I I 0 [032] Le groupement A est un groupement porteur d'une ou plusieurs fonctions d'attache phosphorées X et est choisi parmi les groupes suivant : aliphatique, 15 alicyclique ; alicyclique-aliphatique ; aromatique ; aromatique-aliphatique, les dits groupes aliphatiques, alicycliques et aromatiques pouvant être éventuellement substitutes, en plus des groupements d'attache phosphoré X, par un groupe méthyle, hydroxy, méthoxy, acétoxy, amido, ou un atome de chlore, d'iode ou de brome. 20 [033] Un groupe aliphatique, au sens de la présente invention, désigne une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée comportant de préférence de 1 à 16 atomes de carbone, mieux encore de 1 à 6 atomes de carbone. Des exemples en sont notamment les radicaux méthyles, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, tert-butyle, isobutyle, pentyle et hexyle. 25 [034] Le terme "alicyclique" désigne une chaîne hydrocarbonée cyclique comportant de préférence de 3 à 8 atomes de carbone. A titre d'exemple, on citera notamment le cyclopropyle et le cyclohexyle. [35] Le terme "aromatique" représente un groupement hydrocarboné mono- ou polycyclique aromatique comprenant préférentiellement de 5 à 20 atomes de 30 carbone, mieux encore de 6 à 18. Des exemples en sont notamment les radicaux phényles et 1- ou 2-naphtyles. Selon une variante particulière, un groupe "aromatique" au sens de l'invention peut intégrer un ou plusieurs hétéroatomes tels que le soufre, l'oxygène ou l'azote. Dans ce cas particulier, le groupe "aromatique" désigne un groupement hétéroaromatique mono- ou polycyclique. 35 [36] Les groupes "aliphatique-alicyclique" et "aliphatique-aromatique" représentent des chaînes aliphatiques répondant à la définition susmentionnée, substituées par respectivement un groupement alicyclique ou aromatique tels que définis ci-dessus. A titre d'exemple de groupe aliphatique-aromatique, on peut 10 - Phosphonic acid, [(4-ethenylphenyl)methyI]-,monomethyl ester [71303-24-7]; 15 - Les composés acide phosphonique d'aminoalkylène polymérisables décrits dans la revendication n° 1 du brevet FR0403272; - Le méthacrylate de polyéthylène glycol porteur de groupement phosphate diacide 20 25 [038] Par "groupement de biodistribution/ciblage" au sens de la présente invention, on entend de préférence une entité de ciblage spécifique, c'est-à-dire possédant une affinité spécifique pour un tissu et/ou pour un récepteur biologique et/ou un transporteur, et/ou une matrice biologique cibles donnés. 30 [039] Les couples d'affinités récepteurs/groupements sont multiples et l'invention telle que définie pourra être aisément appliquée par l'homme du métier à différents groupements susceptibles de former une paire d'affinité avec un récepteur cible tels que les couples anticorps/antigènes, lectines/polysaccharides, biotine/avidine, acides nucléiques (brin + et -), étant entendu que le groupement puisse être couplé 35 par liaison covalente à une fonction réactive en polymérisation. [040] Par extension, au sens de la présente description, le terme "groupement de biodistribution/ciblage" peut également couvrir des groupements organiques ayant une activité pharmacologique et/ou cytotoxique, ou plus généralement des 40 pharmacophores utiles dans les méthodes de traitement thérapeutique ou prophylactique. Le terme "pharmacophore" couvre au sens de la présente invention des molécules organiques à activité pharmacologique et/ou cytotoxique, ainsi que leurs analogues structuraux, ces derniers pouvant posséder ou non une activité pharmacologique et/ou cytotoxique. 45 notamment citer le benzyle. [037] Selon une variante préférée, les monomères porteurs de groupement d'attache phosphoré X sont choisi parmi la liste non exhaustive suivante: - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, phosphonomethyl ester [87243-97-8]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, (phosphonooxy)methyl ester [73310-45-9]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 2-phosphonoethyl ester [80730-17-2]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 2-(phosphonooxy)ethyl ester [24599-21-1]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 3-phosphonopropyl ester [252210-30-3]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 3-(phosphonooxy)propyl ester [82427-01-8]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 4-phosphonobutyl ester [477874-42-3]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 4-(phosphonooxy)butyl ester [40074-59-7]; - Phosphonic acid, [(4-ethenylphenyl)methyI]-; [53459-43-1] ; tel que par exemple le SIPOMER PAM 100 (RHODIA) [658695-59-1]; - Le Méthacrylate de polypropylène glycol porteur de groupement phosphate diacide tel que par exemple le SIPOMER PAM 200 (RHODIA) [658695-60-4]; - Acide vinyl phosphonique [1746-03-8] - Vinyl phosphonate de diméthyle [4645-32-3] - Vinyl phosphonate de diéthyle [682-30-4] [041] Au sens de la présente description, un "groupement de biodistribution/ciblage" désigne par extension des molécules biocompatibles possédant un caractère hydrophile marqué, telles que les polyéthylèneglycols, les aminopolyéthylèneglycols ou les aminoalcools. Ces composés sont particulièrement utiles pour obtenir des particules magnétiques finales suffisamment hydrophiles en termes de stabilité aqueuse et de biocompatibilité, ainsi que pour moduler la pharmacocinétique et la biodistribution. [042] Parmi les monomères porteurs de groupements de biodistribution/ciblage on préfère particulièrement ceux répondant aux formules suivantes : CH3 CH2= H C C CH2= C/ C CH2= H CH2= H I I I 0 C H2 C- R C- R I I I I I R O O O I R dans laquelle R est un groupement polyéthylèneglycols (R1) ou aminopolyéthylèneglycols ou aminoalcool (R2). [43] Parmi les groupements R de type polyéthylène glycols, on préfère particulièrement ceux de formule -(CH2-CH2-O)k-CH2-CH2-ORC dans laquelle k varie 15 de 1 à 100, et R, est choisi parmi H, alkyle ou -(CO)alk, le terme "alkyle" ou "alk" désignant un groupe aliphatique hydrocarboné, linéaire ou ramifié, ayant environ de 1 à 6 atomes de carbone dans la chaîne. [44] Parmi les groupements R de type aminopolyéthylèneglycols, on préfère particulièrement les composés de formule -N(Ra)-Rb dans laquelle Ra et Rb, 20 identiques ou différents, représentent H, un groupe alkyle ou une chaîne polyéthylèneglycol de formule -(CH2-CH2-O)k-CH2-CH2-ORc dans laquelle k varie de 1 à 100, et R, est choisi parmi H, alkyle ou -(CO)alk, le terme "alkyle" ou "alk" désignant un groupe aliphatique hydrocarboné, linéaire ou ramifié, ayant environ de 1 à 6 atomes de carbone dans la chaîne. 25 [045] Parmi les groupements R de type aminoalcools, on préfère particulièrement ceux de structure -N(Ra)-Rb dans laquelle Ra et Rb sont identiques ou différents et représentent H, une chaîne hydrocarbonée aliphatique comportant de 2 à 6 atomes de carbone substituée de préférence par 6 à 10 groupements hydroxyles, ou bien par 4 à 8 groupements hydroxyles dans le cas où Ra et/ou Rb est interrompu par un 30 atome d'oxygène. [046]Selon une variante préférée, les monomères porteurs de groupement de biodistribution/ciblage R sont choisis parmi la liste non exhaustive suivante: - Poly(ethylene glycol) acrylate; [9051-31-4]; 35 - Poly(ethylene glycol) methyl ether acrylate; [32171-39-4]; - Poly(ethylene glycol) methacrylate; [25736-86-1]; - Poly(ethylene glycol) methyl ether methacrylate; [26915-72-0]; - Poly(ethylene glycol) ethyl ether methacrylate; [35625-93-5];10 - Poly(ethylene glycol) butyl ether methacrylate; [7328-22-5]; - Poly(ethylene glycol) monoallyl ether; [27274-31-3]; - Poly(ethylene glycol) allyl methyl ether; [27252-80-8]; - Poly(ethylene glycol) vinyl ether par exemple les composés RPEG (INEOS); [126682-74-4] ; -Allyle alcohol ethoxylate par exemple les composés Pluriol A-10-R et Pluriol A-46-R (BASF); -Allyle alcohol alkoxylate par exemple les composés Pluriol A-750-R(BASF) - 2-Propenamide, N-[2-(2-hydroxyethoxy)ethyl]- ; [89911-50-2] - 2-Propenamide, N-[2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethyl]-2-methyl-; [96189-83- 2] - 2-Propenamide, N-3,6,9,12,15,18-hexaoxanonadec-1-y1-2-methyl-; [1204531- 62-3] - 2-Propenamide, N-(20-hydroxy-3,6,9,12,15,18-hexaoxaeicos-1-yl)-2-methyl-; [134267-21-3] - 2-Propenamide, N-[2-(2-hydroxyethoxy)ethyl]-; [89911-50-2]; - 2-Propenamide, N-[2-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxy]ethyl]-; [76054-31-4]; - D-Glucitol, 1-deoxy-1-[(1-oxo-2-propen-1-yl)amino]-; [56607-26-2]; - D-Glucitol, 1-deoxy-1-[(2-methyl-1-oxo-2-propen-1-yl)amino]-; [56660-52-7]; 20 [047] Le demandeur a noté en particulier pour les groupements R de type PEG que produit final obtenu répond de manière très satisfaisante aux spécifications réglementaires et à l'utilisation diagnostique. La couverture de la quasi-totalité du noyau par ces groupements confère au produit une stabilité et une résistance à 25 l'adsorption de protéines particulièrement avantageuses pour ces ligands hydrophiles, notamment en améliorant la furtivité (le produit est alors avantageusement moins capté par le foie) et la captation macrophagique (le ciblage des macrophages est amélioré, avec un intérêt notamment pour le suivi des plaques d'athérome, des ganglions et autres zones d'inflammation). Par ailleurs on 30 comprend l'avantage de la maîtrise de la quantité de ligand pour les produits à couverture mixte, par exemple ligand aminoalcool et ligand PEG, pour respecter les exigences de reproductibilité des lots de fabrication, de qualité et de sécurité pharmaceutiques. PARTICULES FINALES 35 [048] Dans ce cadre, on privilégie notamment les particules finales couplées aux polymères porteurs de groupement de biodistribution/ciblage dont le diamètre hydrodynamique global est compris entre 5 nm et 200 nm, de préférence compris entre 5 et 60 nm. [49] Les compositions de particules éventuellement couplées aux polymères 40 porteurs de groupements d'attache/biodistribution/ciblage sont généralement sous forme d'une suspension aqueuse éventuellement en présence d'un solvant organique miscible dans l'eau tel que le DMSO, l'acétone ou le méthanol, les suspensions biocompatibles étant particulièrement préférées. [50] Selon une variante de l'invention, la composition de particules 45 éventuellement couplées aux polymères porteurs de groupements d'attaches/ biodistribution/ciblage comprennent un ou plusieurs véhicule(s) et/ou additif(s) pharmaceutiquement acceptable. Dans ce cadre, les compositions stériles sont particulièrement préférées. [51] Les termes "pharmaceutiquement acceptable" font référence à une composition ou une entité moléculaire ne produisant pas de réaction allergique, d'effets secondaires ou indésirables lorsqu'elle est administrée à un animal ou à un être humain de façon appropriée. PROCEDE DE PREPARATION DES PARTICULES [52] Selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet un procédé de préparation d'une composition comprenant les étapes successives consistant à mettre en contacte une solution de particules métalliques composé de noyau N tels que défini précédemment avec des composes de formule (II) tels que spécifiés auparavant en quantités suffisante et récupération des particules complexées obtenues. Cette étape unique est généralement réalisée en milieu aqueux, éventuellement en présence d'un solvant miscible dans l'eau, tel que le DMSO, l'acétone ou le méthanol, à pH acide, de préférence à un pH de 1 à 3. [53] Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, on opère en présence d'une quantité allant de 10 équivalents molaires par rapport au nombre de moles de sites à la surface de la surface de la particule, de manière à saturer les sites de la particule. Ceci représente, en général, une densité de greffage allant de 1 à 2 PEG / nm2 selon la taille de la particule, le nombre de sites en surface étant proportionnel à la surface de la particule. [54] De manière avantageuse, l'évaluation du taux de greffage qui définit le rapport du nombre de moles des composés de formule (II) au nombre de moles de sites de la particule magnétique peut être aisément déterminée par des méthodes conventionnelles telles que l'analyse élémentaire C, P, Fe. En effet, la particule magnétique avant greffage ne comporte aucun atome de phosphore, ni de carbone. Or, après le greffage des composés de formule (II) à la surface de la particule, la détermination du ratio phosphore/fer ou carbone/fer permet de connaître le nombre de mole de composé de formule (II) greffé sur la particule. [55] De par ces outils analytiques, il est possible d'ajuster la quantité de composé de formule (H) en fonction du taux de greffage qu'on souhaite obtenir in fine. [56] Avantageusement, ce procédé permet donc de contrôler le greffage de la particule par les composés de formule (II). [57] Selon un autre aspect avantageux, contrairement à l'art antérieur, la suspension de particules magnétique est obtenue en une seule et unique étape et ne nécessite pas d'étape préalable de couplage entre les groupements d'attache X et les groupements de biodistribution/ciblage R1 et R2 via une fonction réactive Y comme dans le cas de l'invention antérieure décrite en détails dans le document FR 2 848 580 - Al. [58] Selon un autre aspect avantageux, les particules magnétiques complexées par les polymères sont obtenues avec de très bons rendements en fer, généralement compris entre 90 et 95 %. [59] L'art antérieur ne suggérait nullement de greffer des composés macromoléculaires multifonctionnels porteurs à la fois de groupements d'attache phosphoré et de biodistribution/ciblage sur des particules. [60] Sont également comprises dans l'invention les compositions comprenant un mélange de ces particules avec les particules couplées à des polymères 10 multifonctionnels porteur de groupements d'attache/biodistribution/ciblage. APPLICATIONS [61] L'invention concerne l'utilisation des nanoparticules obtenues par le procédé du demandeur pour la préparation d'une composition diagnostique et/ou 15 thérapeutique. Les nanoparticules sont en particulier utilisées comme agent de contraste de type composition de nanoparticules telles que décrites en détail dans le document WO 2004058275, pour l'imagerie IRM ou scanner RX. [62] Selon des réalisations, les particules sont véhiculées dans des systèmes de libération de principes actifs, tels que des systèmes d'encapsulation de type 20 liposomes ou nanoparticules lipidiques solides qui peuvent également enfermer, en plus des nanoparticules utilisées comme agent de diagnostique, des principes actifs thérapeutiques. [63] Les compositions de l'invention pourront être utilisées en particulier pour la caractérisation et/ou le suivi thérapeutique dans de nombreuses pathologies : à 25 titre indicatif, nous pouvons citer les maladies cardiovasculaires (imagerie de la plaque d'athérome), les cancers (tumeurs, métastases), les maladies inflammatoires et dégénératives (sclérose en plaque, polyarthrite rhumatoïde, maladie d'Alzheimer). [64] A moins que les milieux ou agents conventionnels ne soient incompatibles 30 avec les particules complexées par des composés de formule (II) leur utilisation dans les compositions de diagnostique peut être envisagée. Des ingrédients actifs supplémentaires peuvent également être incorporés dans les compositions selon l'invention. 35 [065] Il est entendu que, dans les méthodes de traitement de l'invention, les compositions sont administrées en une quantité thérapeutique efficace, qui peut être ajustée par l'homme du métier selon la pathologie visée, l'état du patient, son poids, son âge, etc. [066] Les voies d'administration des compositions de l'invention sont décrites en 40 détails dans le document FR 2 848 580 - Al. [67] Dans ce qui suit, des exemples de préparation des compositions sont décrits à titre d'illustration et n'ont donc aucun caractère limitatif de la présente invention. EXEMPLES GENERALITES [68] Fonctionnalité des polymères de formule (II) Le nombre et la nature chimique des groupements fonctionnels portés par les polymères multifonctionnels de formule (II) sont déterminée par analyses RMN (Résonnance Magnétique Nucléaire). Appareil Bruker Avance 300. [069] Masse molaire des polymères de formule (II) La masse molaire de polymères multifonctionnels de formule (II) est déterminées par Diffusion statique de la lumière (Appareil Malvern Instrument, NanoZS Zeta Sizer). [70] Taille des particules : Les tailles et les distributions de taille des particules greffées ou non-greffées sont déterminées par les techniques d'analyses suivantes : VSM (Vibrating Sample Magnetometry ou magnétomètre à pot vibrant) Les mesures de magnétométrie ont été obtenues en utilisant un appareil Lake Shore Cryotronics, model 7410 VSM sur une gamme de champ variant de 0 à 1 Tesla. TEM (Microscopie Electronique à Transmission) Les mesures de microscopie électronique à transmission ont été réalisées en utilisant un microscope Jeol-100 CX. Diffusion dynamique de la lumière Les mesures de diffusion dynamique de la lumière ont été réalisées en utilisant un appareil Malvern Instrument, model NanoZS Zeta Sizer. EXEMPLE 1 : Préparation des nanoparticules magnétiques [71] EXEMPLE 1 : Préparation de nanoparticules magnétique d'oxyde de fer Les nanoparticules magnétique d'oxyde de fer sont préparées par la méthode de Massart consistant en une co-précipitation alcaline de sels de Fer(II) et Fer(III) et oxidation de la magnetite (Fe304) en maghemite (y-Fe203) - (Références : Berret, 3.-F. et al. ; Langmuir (2007), 23, 2993-2999 ; Massart, R. et al. ; Journal of Magnetism and Magnetic Materials (1995), 149, 1-5) Les particules sont ensuite triées en fonction de leurs tailles par séparation de phase. Au pH de 1.8, les particules sont chargées positivement et possèdent des contre-ions nitrate à leur surface conduisant a des répulsions électrostatique entre particules et ainsi à des suspensions colloïdales stables. Diamètre nanoparticules magnétiques : TEM : diamètres moyens : 6.8 nm et 13.2 nm. VSM : diamètres moyens : 6.7 nm et 10.7 nm. Diffusion dynamique de la lumière : diamètre hydrodynamique : 13 nm et 27 nm. EXEMPLE 2 et CONTRE EXEMPLE 2 : Préparation de polymères multifonctionnels porteurs de groupements d'attache phosphoré et de groupements de biodistribution/ciblage [072] EXEMPLE 2: Préparation de polymères Poly(PEGMA-co-MAPC1aode) oY n L on-13 1-o cH3o , o 0 0 121 0 AIBN, 70 °C MethyEthylKetone O CH30" II OCH3 x = y = 0.5 n = 12 m = 44 1. BrSi(CH3)3 - CHCI3 2. CH3OH, 25 °C La synthèse de polymère Poly(méthacrylate de poly(éthylène glycol)-co-acide diméthyl(methacryoyloxy)méthyl phosphonique) Poly(PEGMA-co-MAPClacide) est réalisé par polymérisation radicalaire classique entre les monomères PEGMA (méthacrylates de poly(éthylène glycol)) et MAPC1 (acide diméthyl(methacryoyloxy)méthyl phosphonique) avec l'azobisisobutyronitrile (AIBN) comme amorceur radicalaire et la méthyl éthyl cétone (MEK) comme solvant. 0,5 g de MAPC1 (2.4 mmol), 5g de PEGMA (2.4 mmol) et 0,02g d'AIBN (0.12 mmol) sont mélangé dans 20 mL de MEK. L'ensemble est dégazé par trois cycles successif vide-argon et porté à 70°C sous atmosphère d'argon pendant 24 heures. La conversion est de 100%. Le polymère Poly(PEGMA-co-MAPC1) est ensuite récupéré par évaporation des solvants sous vide. Les esters phosphonés sont ensuite hydrolysés en acide phosphonique telles que décrites en détail dans le document Graillot, A. et al. ; Polymer Chemistry (2013), 4, 795-803. RMN 1H (CDCI3, 300MHz) b (ppm): 4.5-3.5 (CH2-0-12-0, O-CH2-P), 2.1-1.7 (C(CH3)-C112), 0.9-1.3 (C(CH3)-C1-12)- RMN 31P (CDCI3, 300MHz) ô (ppm): 18.0 ppm Masse molaire: 13 000 ± 2 000 g.rnol-1 Fonction diacide phosphonique (fonction d'attache) par chaînes : 5 - 6 [073] CONTRE EXEMPLE 2 : Préparation de polymères Poly(PEGMA-co-MAA) O AIBN, 70 °C O HO THF nt ' x = y = 0.5 n = 12 m = 45 La synthèse de polymère Poly(méthacrylate de poly(éthylène glycol)-co-acide méthacrylique) Poly(PEGMA-co-MAA) est réalisé par polymérisation radicalaire classique entre les monomères PEGMA (méthacrylates de poly(éthylène glycol)) et MAA (acide méthacrylique) avec l'azobisisobutyronitrile (AIBN) comme amorceur radialcaire et le tétrahydrofurane (THF) comme solvant. 0,21 g de MAA (2.4 mmol), 5g de PEGMA (2.4 mmol) et 0,02g d'AIBN (0.12 mmol) sont mélangé dans 40 mL de THF. L'ensemble est dégazé par trois cycles successif vide-argon et porté à 70°C sous atmosphère d'argon pendant 24 heures. La conversion est de 100%. Le polymère Poly(PEGMA-co-MAA) est ensuite récupéré par évaporation des solvants sous vide. RMN 1H(CDCI3, 300MHz) b (ppm): 4.0-3.4 (CH2-CH2-O), 2.2-1.7 (C(CH3)-0-12), 0.9-1.5 (C(CH3)-CH2). Masse molaire: 15 500 ± 2 000 g.mo1-1 Fonction acide carboxylique (fonction d'attache) par chaînes : 6 - 7 [074] EXEMPLE 3 : Préparation de solutions de particules d'oxyde de fer stabilisées 20 par des polymère Poly(PEGMA-co-MAPClacide) et Poly(PEGMA-co-MAA), détermination du ratio volumique critique Vc et du nombre de chaines absorbée par particules. Une solution aqueuse d'oxyde de fer (pH fixé à 2) est préparée selon la méthode donnée dans l'Exemple 1 à une concentration de 0,1% massique. 25 Des solution aqueuse (pH fixé à 2) de Poly(méthacrylate de Poly(PEGMA-co- MAPClacide) et de Poly(PEGMA-co-MAA) sont préparée à 0,1% massique. La solution aqueuse d'oxyde de fer est ensuite mélangée à une solution de polymère avec différents ratios volumiques V variant entre 10-3 et 103, V étant le rapport volumique entre les dispersions de nanoparticules et de polymère. Le pH 30 de la solution obtenue est ajusté à pH=8 par addition d'hydroxyde d'ammonium. Le diamètre hydrodynamique des particules obtenues pour différents ratios volumique V. Pour les valeurs de V les plus faibles, de larges plateaux de stabilité sont observés, correspondant à des particules d'oxydes de fer saturé par le 35 polymère absorbé. Une augmentation du diamètre hydrodynamique des particules est ensuite observée pour des valeurs de V plus élevées correspondant à l'agrégation des particules. La valeur critique Vc est alors déterminée comme la valeur de V la plus élevée à laquelle des suspensions stables sont observées.

Les valeurs de Vc sont de 1,2 et 1,5 pour les solutions préparée à partir des polymères Poly(PEGMA-co-MAPClacide) et Poly(PEGMA-co-MAA) respectivement, correspondant à un excès de particules d'oxyde de fer par rapport au polymère d'attache/biodistribution/ciblage en solution.

Ces valeurs de Vc permettent ensuite de déterminer le nombre de chaînes adsorbés par particules (nads) via la relation nad, = (1/Vc)*(Mw ,- -particules / MWpolymère)- (Référence : Sehgal, A. et al. ; Langmuir (2005), 21, 9359-9364). Les valeurs de nads sont de 90 et 60 pour les Poly(PEGMA-co-MAPClacide) et Poly(PEGMA-co-MAA) respectivement indiquant que la densité de greffage plus importante des polymères porteurs de groupements acide phosphonique que ceux porteurs de groupement acide carboxylique. [075] EXEMPLE 4 : Stabilité de particules stabilisées par différents polymères dans différents milieu de culture.

La stabilité des particules d'oxydes de fer de 13,2 nm stabilisée par différents polymères est évaluée dans les milieux suivant : - PBS (Phosphate Buffer Saline) - NH4CI, 1M - Milieu cellulaire - Milieu cellulaire + sérum Pour cela, quelques microlitres de dispersion concentrée préparée selon le protocole donné dans l'EXEMPLE 3 sont déversés et homogénéisé dans 1 mL de milieux. La stabilité est évaluée par mesure de l'intensité diffusée et du diamètre hydrodynamique par diffusion de la lumière. Ces valeurs sont mesurées sur des périodes de 1 semaine et de 1 mois afin de déterminer la stabilité à long terme des dispersions de particules.

Parmi les molécules et polymères étudiés en stabilisation (citrate, poly(acide acrylique) PAA (5000 g.mo1-1), Poly(PEGMA-co-MAPClacide), Poly(PEGMA-co-MAA)), seuls les polymères porteurs de multiple fonctions acide phosphonique permettent une stabilité à long terme dans tous les milieux précédents.

Stabilité des suspensions de particules d'oxyde de fer stabilisé par différentes couches stabilisatrices pour des durées d'une semaine et un mois. 1 semaine PBS NH4CI 1M Milieu Milieu cellulaire cellulaire + sérum citrate Particules de 6.8 nm Stable Non-stable Non-stable Non-stable Particules de 13.2 nm Stable I Non-stable t Non-stable Non-stable PAA (5000 g.mo1-1) Particules de 6.8 nm Stable I Stable I Stable I Stable Particules de 13.2 nm Stable I Non-stable J Non-stable J Non-stable Poly(PEGMA-co-MAA) Particules de 6.8 nm Stable I Stable I Non-stable Stable Particules de 13.2 nm Stable I Stable Non-stable I Non-stable Poly(PEGMA-co-MAPC1aCIde) Particules de 6.8 nm Stable I Stable I Stable I Stable Particules de 13.2 nm Stable I Stable Stable Stable 1 mois PBS NH4CI 1M Milieu Milieu cellulaire cellulaire + sérum citrate Particules de 6.8 nm Stable Non-stable Non-stable Non-stable Particules de 13.2 nm Stable I Non-stable Non-stable I Non-stable PAA (5000 g.mo1-1) Particules de 6.8 nm Stable I Non-stable Non-stable J Non-stable Particules de 13.2 nm Stable I Non-stable Non-stable Non-stable Poly(PEGMA-co-MAA) Particules de 6.8 nm Stable 1 Stable I Non-stable J Non-stable Particules de 13.2 nm Stable I Stable Non-stable Non-stable Poly(PEGMA-co-MAPC 'acide) Particules de 6.8 nm Stable 1 Stable Stable J Stable Particules de 13.2 nm Stable I Stable Stable J Stable Le polymère d'attache/biodistribution/ciblage Poly(PEGMA-co-MAPC1acide) surpasse 10 tous les autres types de couche stabilisatrice étudiés et permet l'obtention de particules stables dans tous les milieux cités précédemment pendant au moins 1 mois. [076] EXEMPLE 5 : Biodistribution des particules enrobées dans des expériences in vivo sur le petit animal. Les particules d'oxyde de fer de 6.8 et de 13.2 nm enrobées de polymères polymère d'attache/biodistribution/ciblage Poly(PEGMA-co-MAPC 'acide) ont été préparées comme décrit précédemment. La biodistribution a été testée en suivant le noircissement du foie en IRM après injection intraveineuse sur petit animal. Une fois endormies, la souris est équipée d'un cathéter placé dans la queue, et introduite au centre d'une bobine d'IRM de 7 teslas pour un suivi en temps de différents organes et des muscles de l'animal. En particulier la rate et le foie ont été étudiés en détail. L'expérience comprend une séquence d'images prises toutes les 45 secondes pendant deux heures. A la suite de cela, les souris sont étudiées à intervalles réguliers à 3h, 6h, 24h et 48h. Les expériences in vivo ont d'abord été faites en utilisant une référence, le CLIAVIST (CLIAVIST 0,5 mmol Fe/mL Solution injectable Boîte de 1 Seringue préremplie de 0.9 mL, laboratoire Bayer Santé). La dose injectée correspond à 100 pL de la dispersion initiale à la concentration de 10 mM de fer. Les particules d'oxyde de fer du CLIAVIST ont la même taille que celles synthétisées dans notre étude. Dans les 5 minutes après l'injection, le foie présente un fort hyposignal caractéristique de la capture des particules d'oxyde de fer par les cellules de Kuppfer du foie. Ensuite, sur une période comprise entre 10 minutes et trois heures, le signal diminue et se stabilise à environ 20% du signal initial. A 24h, le noircissement du foie dû à la présence des particules est très avancé et stabilisé. Pour des particules de 6.8 nm traitées avec les polymère d'attache/biodistribution/ciblage Poly(PEGMA-co-MAPC1',de), au contraire, le signal d'IRM montre un niveau constant pendant les deux premières heures après injection. Le foie conserve son contraste initial. Les doses injectées sont identiques à celles du CLIAVIST. Après trois heures, un hyposignal apparaît et on assiste au noircissement du foie, indice de la capture des particules circulantes. On assiste ainsi clairement à un décalage de cette capture, d'une durée d'environ 2-3 heures, et attribué à la présence d'agent du polymère d'attache/biodistribution/ciblage Poly(PEGMA-co-MAPC1acide) autour des particules. On démontre ainsi le bénéfice d'un tel enrobage, qui améliore la biodistribution des particules in vivo, et diminue leur capture par le foie de manière notable.

Claims (20)

1. REVENDICATIONS1. Composition de nanoparticules métalliques comprenant un noyau métallique N recouvert d'une couche stabilisatrice organique constituée d'un polymère multifonctionnel de formule (II) à la fois porteur d'au moins un groupement d'attache phosphoré et de groupements à effet sur la stabilité/biodistribution des nanoparticules - X est un groupement d'attache phosphoré - R1 et R2 sont des ligands de biodistribution hydrophile, R1 étant avantageusement choisi parmi les polyéthylènes glycols et R2 étant avantageusement choisi parmi les aminoalcools ou les aminopolyéthylène glycols. -x est la proportion relative molaire d'unité monomère porteuse de fonction X composant le polymère. (0<x<1) -y est la proportion relative molaire d'unité monomère porteuse de fonction R1 composant le polymère. (05_y<1) -z est la proportion relative molaire d'unité monomère porteuse de fonction R2 composant le polymère. (02<1) -n est le nombre total d'unité monomère formant le polymère, les valeurs de n représentent des nombres entiers allant de 1 à 1000, préférentiellement de 1 à 50, mieux encore de 1 à 20.
2. 2. Composition selon la revendication 1, dans laquelle le noyau métallique est choisi parmi les suivants : hydroxyde de fer, oxyde de fer hydraté, ferrite, oxyde de fer mixte, oxydes de lanthanides (oxydes de gadolinium, de cérium et d'europium notamment), particules à luminescence retardée, composé mixte à base des éléments choisis dans le groupe consistant en Ca, Mn, Mg, Si et O dopé par des lanthanides, des particules de type quantum dot.
3. 3. Composition selon les revendications 1 et 2, dans laquelle les particules sont paramagnétiques ou superparamagnétiques.
4. 4. Composition selon les revendications 1 à 3 dans laquelle le polymère multifonctionnel de formule (II) est un polymère de type acrylique, méthacrylique, vinylique ou allylique porteur de groupements d'attache phosphorés d'une part et de groupements de biodistribution/ciblage polyéthylènes glycols et/ou aminopolyéthylène glycols et/ou aminoalcools d'autre part.
5. 5. Composition selon les revendications 1 à 4 dans laquelle le polymère multifonctionnel de formule (II) est synthétisé à partir d'une combinaison des monomères fonctionnels choisis parmi :- 2-Propenoic acid, 2-methyl-, phosphonomethyl ester [87243-97-8]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, (phosphonooxy)methyl ester [73310-45-9]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 2-phosphonoethyl ester [80730-17-2]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 2-(phosphonooxy)ethyl ester [24599-21-1]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 3-phosphonopropyl ester [252210-30-3]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 3-(phosphonooxy)propyl ester [82427-01-8]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 4-phosphonobutyl ester [477874-42-3]; - 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 4-(phosphonooxy)butyl ester [40074-59-7]; - Phosphonic acid, [(4-ethenylphenyl)methyI]-; [53459-43-1] ; - Phosphonic acid, [(4-ethenylphenyl)methyl]-,monomethyl ester [71303-24-7]; - Les composés acide phosphonique d'aminoalkylène polymérisables décrits dans la revendication n° 1 du brevet FR0403272 ; - Le méthacrylate de polyéthylène glycol porteur de groupement phosphate diacide tel que par exemple le SIPOMER PAM 100 (RHODIA) [658695-59-1] ; - Le Méthacrylate de polypropylène glycol porteur de groupement phosphate diacide tel que par exemple le SIPOMER PAM 200 (RHODIA) [658695-60-4] ; -Acide vinyl phosphonique [1746-03-8] -Vinyl phosphonate de diméthyle [4645-32-3] -Vinyl phosphonate de diéthyle [682-30-4] - Poly(ethylene glycol) acrylate; [9051-31-4]; - Poly(ethylene glycol) methyl ether acrylate; [32171-39-4]; - Poly(ethylene glycol) methacrylate; [25736-86-1]; - Poly(ethylene glycol) methyl ether methacrylate; [26915-72-0]; - Poly(ethylene glycol) ethyl ether methacrylate; [35625-93-5]; - Poly(ethylene glycol) butyl ether methacrylate; [7328-22-5]; - Poly(ethylene glycol) monoallyl ether; [27274-31-3]; - Poly(ethylene glycol) allyl methyl ether; [27252-80-8]; - Poly(ethylene glycol) vinyl ether par exemple les composés RPEG (INEOS); [126682-74-4] ; -Allyl alcool ethoxylé par exemple les composés Pluriol A-10-R et Pluriol A-46-R (BASF); -Allyl alcool ethoxylé par exemple les composés Pluriol A-750-R (BASF) - 2-Propenamide, N-[2-(2-hydroxyethoxy)ethyI]- ; [89911-50-2] - 2-Propenamide, N-[2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethyl]-2-methyl-; [96189-83- 2] - 2-Propenamide, N-3,6,9,12,15,18-hexaoxanonadec-1-yl-2-methyl-; [120453162-3] - 2-Propenamide, N-(20-hydroxy-3,6,9,12,15,18-hexaoxaeicos-1-yl)-2-methyl-; [134267-21-3] - 2-Propenamide, N-[2-(2-hydroxyethoxy)ethyl]-; [89911-50-2]; - 2-Propenamide, N-[2-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxy]ethyl]-; [76054-31-4]; - D-Glucitol, 1-deoxy-1-[(1-oxo-2-propen-1-yl)amino]-; [56607-26-2]; - D-Glucitol, 1-deoxy-1-[(2-methyl-1-oxo-2-propen-1-yl)amino]-; [56660-52-7];
6. 6. Composition selon les revendications 1 à 4 dans laquelle le polymère multifonctionnel de formule (H) est synthétisé par polymérisation radicalaire, polymérisation radicalaire contrôlée (RAFT, ATRP, NMP, RITP, ...), polymérisationionique, polymérisation par transfert de groupe ou par polymérisation de coordination.
7. 7. Composition selon les revendications 1 à 4 dans laquelle le polymère multifonctionnel de formule (II) est synthétisé par un procédé de polymérisation en 5 masse, en solution ou en émulsion ou en suspension.
8. 8. Composition selon les revendications 1 à 4 dans laquelle le polymère multifonctionnel de formule (H) est caractérisé par une architecture statistique, à gradient, à blocs ou greffés.
9. 9. Composition selon les revendications 1 à 4 dans laquelle le polymère 10 multifonctionnel de formule (II) est caractérisé par des valeurs de x, y, z et n tel que 0<x<1 ;0S.y<1 et 05z<1, préférentiellement x=0,5 ; y=0,5 et z=0.
10. 10. Composition selon les revendications 1 à 4 dans laquelle le polymère multifonctionnel de formule (II) est caractérisé par des valeurs n tel que n 15 représentent des nombres entiers allant de 1 à 1000, préférentiellement de 1 à 50, mieux encore de 1 à 20, mieux encore n=12.
11. 11. Procédé de préparation d'une composition selon les revendications 1 à 10, ledit procédé comprenant l'étape unique de préparation consistant à mettre en contact 20 une solution acide de particules magnétiques telles que définies dans les revendications 2 et 3 avec des composés de formule (H) tels que défini dans les revendications 1 à 11 en quantité suffisante.
12. 12. Procédé de préparation d'une composition selon les revendications 1 à 11, ledit 25 procédé comprenant les étapes successives consistant à : a) Préparation du noyau métallique N des nanoparticules métalliques b) Préparation du polymère multifonctionnel de formule (II) c) Greffage du polymère multifonctionnel sur le noyau N par au moins un des groupements d'attache X 30
13. 13. Produit de contraste pour l'imagerie par résonnance magnétique comprenant des particules magnétiques stabilisés par des polymères d'attache/biodistribution/ciblage telles que définie dans les revendications 1 à 12.
14. 14. Utilisation des compositions selon les revendications 1 à 12 pour la fabrication d'un agent de contraste utile pour l'Imagerie par Résonance Magnétique ou scanner 35 RX.
15. 15. Utilisation des compositions selon les revendications 1 à 12 pour la fabrication d'un agent de contraste utile pour la médecine nucléaire.
16. 16. Utilisation des compositions selon les revendications 1 à 12 pour la fabrication d'un agent de contraste utile pour la caractérisation, le diagnostique et/ou le suivi 40 thérapeutique, notamment dans les maladies cardiovasculaires, les cancers ou les maladies inflammatoires ou dégénératives.
17. 17. Utilisation des compositions selon les revendications 1 à 12, dans laquelle le ligand de biodistribution/ciblage est un ligand spécifique d'un récepteur biologique, pour la différenciation et/ou la séparation in vitro, au sein d'un mélange, de composants portant une cible dudit ligand de biodistribution/ciblage et de composants ne portant pas ladite cible.
18. 18. Utilisation des compositions selon les revendications 1 à 12 pour la fabrication de médicament, dans laquelle le ligand de biodistribution/ciblage possède des propriétés pharmacologiques et/ou cytotoxiques.
19. 19. Utilisation des compositions selon les revendications 1 à 12 pour la fabrication de médicament, dans laquelle le ligand de biodistribution/ciblage est un ligand spécifique d'un récépteur biologique, pour le traitement par hyperthermie de territoires pathologiques.
20. 20. Utilisation des compositions selon les revendications 1 à 12 pour le marquage cellulaire in vitro ou ex vivo, et en particulier le marquage des cellules souches.