FR2984153A1 - Utilisation d'un extrait de millet comme agent stimulant l'elafine - Google Patents

Abstract

L'invention concerne l'utilisation d'un extrait de Panicum miliaceum dans une composition cosmétique en tant qu'agent stimulateur de l'expression de l'élafine du derme de la peau. L'extrait est en particulier utile comme agent raffermissant, lissant, tenseur, repulpant, restructurant, maintenant ou restaurant l'élasticité de la peau, et/ou tonifiant la peau. L'extrait de Panicum miliaceum est obtenu à partir des fibres de la plante, en particulier du son des graines. Il est obtenu par broyage de la plante, mise en suspension dans l'eau de la poudre obtenue, hydrolyse enzymatique ou chimique au moins partielle des carbohydrates contenus dans la suspension, et filtration. L'invention a également pour objet une composition contenant un extrait de Panicum miliaceum pour son utilisation dans le contrôle du développement des cellules de mélanome, ainsi que dans le traitement antimicrobien des peaux à tendance acnéique, des peaux grasses, et des peaux normales en cours de cicatrisation.

Description

UTILISATION D'UN EXTRAIT DE MILLET COMME AGENT STIMULANT L'ELAFINE La présente invention concerne de nouvelles utilisations d'un extrait de millet dans les domaines de la cosmétique et de la dermatologie. Il a été mis en évidence par la Demanderesse qu'un extrait de Panicum miliaceum, plus communément appelé millet, permet de stimuler l'expression, dans des cultures de kératinocytes normaux d'épiderme humain, de multiples cibles biologiques cruciales dans la mise en place d'une barrière épidermique efficace, et en particulier de l'élafine. La formation de la barrière cutanée est un processus déterminant dans la protection de la peau et de ses structures, dans son hydratation et sa fonction de barrière, dans son vieillissement et son esthétique. La formation de cette barrière protectrice est le résultat de l'articulation de plusieurs processus clefs: celui de la différenciation des kératinocytes, de la formation des cornéocytes et du NMF (natural moisturizing factor), de la biosynthèse des lipides épidermiques, et de la production par les kératinocytes de molécules impliquées dans les fonctions de défense contre les xénobiotiques. L'élafine est une protéine multifonctionnelle.

L'élafine est ainsi capable de se lier à l'élastine, à la laminine et la fibronectine, pour les protéger d'une dégradation par les protéases. L'élafine et son précurseur la trappine-2 (encore appelée pré-élafine) présentent des propriétés inhibitrices des sérine-protéases, et particulièrement des protéases des neutrophiles telles que l'élastase leukocytaire et la protéinase-3, qui sont de puissants agents de dégradation du réseau protéique de la matrice extracellulaire. L'élafine et son précurseur la trappine-2 sont des substrats ayant beaucoup d'affinité avec les transglutaminases tissulaires, et peuvent se lier de façon covalente à des constituants aussi différents que : - la laminine, constituant clef de la jonction dermo-épidermique et de l'adhésion des kératinocytes épidermiques, - l'élastine, constituant clef du derme et de ses propriétés élastiques, - la fibronectine, un linker entre les cellules et le collagène et les protéoglycannes, et aussi un substrat guidant la migration des cellules, et - d'autres protéines de la matrice extracellulaire, tout en conservant leurs propriétés anti-protéasiques.

L'élafine et son précurseur la trappine-2 exercent donc une protection essentielle et ciblée au contact même des protéines de structure et cela à deux niveaux: - celui de la matrice extracellulaire du derme dont la dégradation est impliquée dans la perte de fermeté et d'élasticité cutanée, et - celui de la jonction dermoépidermique dont les constituants diminuent avec l'âge et qui constituent un microenvironnement essentiel (appelé « niche matricielle ») pour les progéniteurs épidermiques qui assurent le renouvellement, la réparation de l'épiderme et sa pérennité tout au long de la vie.

Par ailleurs, l'élafine est un des constituants importants de l'enveloppe cornée où elle s'intègre grâce à l'action de la transglutaminase. A ce titre elle est un acteur de la formation du stratum corneum et de l'enveloppe cornée dont le rôle dans la résistance de la barrière cutanée et l'organisation des lipides à sa surface a été largement décrit.

Enfin l'élafine présente aussi des propriétés antimicrobiennes, antifongiques et antivirales remarquables, ce qui en fait une protéine importante dans la défense de la peau contre la flore bactérienne, fongique et virale présente à sa surface et pour limiter le développement de germes infectieux. Il a été mis en évidence de façon tout à fait surprenante dans le cadre de la présente invention l'effet d'un extrait de millet sur l'expression de l'élafine par des kératinocytes humains normaux en culture. L'extrait de millet est capable de stimuler l'élafine, une protéine multifonctionnelle qui participe à la genèse de l'enveloppe cornée, et possède également une activité antiprotéasique protectrice de l'élastine, de la laminine et de la fibronectine auxquelles elle se lie. La stimulation de cette protéine est extrêmement intéressante dans une utilisation cosmétique ou dermatologique puisqu'elle est capable de se lier à des protéines majeures dont l'élastine, constituant essentiel des fibres élastiques, la laminine et la fibronectine pour les protéger d'une dégradation par les protéases.

L'extrait de millet utilisé dans le cadre de l'invention est également capable de stimuler la différenciation de l'épiderme en augmentant l'expression de l'involucrine une protéine présente dans les kératinocytes différenciés et l'enzyme clef de la formation de l'enveloppe cornée, la transglutaminase. Ainsi, l'invention concerne l'utilisation d'un extrait de millet comme agent cosmétique ou dermatologique destiné à stimuler la synthèse de l'élafine dans les cellules de la peau, en particulier dans les kératinocytes. Aux fins de la présente description, on utilisera indifféremment les termes «millet » ou « Panicum miliaceum ». Le millet de nom scientifique Panicum miliaceum est une graminée de hauteur comprise entre 40 à 120 cm. Sa tige est dressée, robuste, presque lisse à talles nombreuses et généralement près du maître brin. Ses feuilles larges de 15 à 30 mm, très longues (45 cm) sont ciliées dans leur partie basale, et poilues sur leurs deux faces, à gaines hérissées de longs poils. Le limbe est poilu et longuement cilié dans sa partie basale, d'aspect large et court. La pilosité est longue et abondante sur toute la plante. La gaine à section arrondie non maculée ni veinée est de teinte rose. Les inflorescences sont des panicules allongées, penchées au sommet, vertes, à rameaux longs et dressés. Les épillets sont assez gros (4 à 5 mm), oblongs et aigus. L'extrait de millet est capable de stimuler l'expression de l'élafine qui possède de multiples propriétés exploitables dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie. Des études menées sur l'activité biologique d'autres extraits végétaux, tels que l'alfalfa, le soja, le riz, et le chanvre, sur les enzymes de la lipidogénèse (céramide-synthase et glucocérébrosidase) mais aussi sur les marqueurs de la différenciation épidermique (involucrine), de la formation de l'enveloppe cornée (transglutaminase 1) et de la protéine précurseur du NMF (filaggrine) n'ont pas permis de mettre en évidence d'effet sur l'élafine, ce qui renforce le caractère inattendu de l'invention. L'extrait de millet présente en outre l'avantage de ne présenter aucun élément rédhibitoire au niveau de l'odeur et de la couleur. Son innocuité sur la peau a également été vérifiée. Cet extrait est également capable de stimuler l'expression de l'involucrine, une protéine impliquée dans la différenciation des kératinocytes, et de la transglutaminase, une enzyme qui assure la formation de l'enveloppe cornée des cornéocytes en liant de nombreuses protéines kératinocytaires entre elles. L'extrait de millet mis en oeuvre dans le cadre de l'invention est de préférence obtenu par broyage de la plante, et hydrolyse au moins partielle des carbohydrates qu'elle contient. Cet agent cosmétique ou dermatologique peut être introduit dans une 30 composition cosmétique ou dermatologique comprenant un véhicule cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable dans lequel l'extrait sera dissous ou mis en suspension. La composition s'avère particulièrement utile dans toutes les applications cosmétiques ou dermatologiques où l'on cherche à augmenter la proportion 35 d'élafine. Selon un premier aspect, l'invention a pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique ou dermatologique d'au moins un extrait de Panicum miliaceum en tant qu'agent stimulant l'expression de l'élafine du derme de la peau, en particulier dans les kératinocytes.

Selon un deuxième aspect, l'invention concerne l'utilisation dans une composition cosmétique ou dermatologique d'au moins un extrait de Panicum mi/iaceum en tant qu'agent raffermissant la peau, lissant la peau ou procurant un effet tenseur de la surface de la peau, repulpant ou restructurant la peau, maintenant ou restaurant l'élasticité de la peau, et/ou tonifiant la peau. Par agent, composition, produit, gamme ou méthode de soin « anti-âge », on entend tout agent, composition, produit, gamme ou méthode destiné(e) à prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané, ou en atténuer les effets.

Selon un troisième aspect l'invention a pour objet une composition contenant un extrait de Panicum miliaceum pour son utilisation - dans le traitement cosmétique ou dermatologique de troubles cutanés liées à une déficience de l'expression de l'élafine, - dans la prévention du développement de cellules de mélanome, ou - dans le traitement antimicrobien des peaux à tendance acnéique, des peaux grasses, et des peaux normales en cours de cicatrisation. La composition cosmétique peut être une composition cosmétique anti- âge ou renforçant la barrière cutanée et éventuellement se présenter comme produit raffermissant, produit lissant ou tenseur, produit repulpant ou restructurant, produit destiné à maintenir ou restaurer l'élasticité de la peau, ou comme produit ayant une action tonifiante sur la peau. D'une façon générale, les compositions cosmétiques s'avèrent particulièrement utiles en tant que produits raffermissants de la peau destinés, en particulier, à lutter contre les peaux lâches ou atones, ou à titre préventif pour enrayer la perte progressive d'élasticité et de fermeté de la peau. La composition cosmétique est particulièrement utile pour prévenir et/ou lutter contre les effets du vieillissement et du photovieillissement de la peau qui présente des signes visibles caractéristiques, ou renforcer la barrière cutanée. Avantageusement, la composition cosmétique est appliquée sur une zone de peau du corps ou du visage présentant des signes visibles de relâchement, une perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau ou d'autres signes tels qu'une diminution de l'épaisseur de la peau, ou une augmentation de la sécheresse, des rides et des ridules. La composition cosmétique ou dermatologique par les propriétés antimicrobiennes que confère l'élafine, peut être aussi appliquée sur des peaux présentant un risque infectieux modéré comme les peaux à tendance acnéique, avec des rougeurs, des irritations, avec un excès de sébum et des pores dilatés et après de petits actes de chirurgie esthétique.

La composition cosmétique ou dermatologique peut aussi être avantageusement appliquée sur des zones cutanées du visage ou du corps particulièrement exposées au soleil pour prévenir des risques d'élastose solaire et de perte d'élasticité et de fermeté. L'extrait de millet est notamment utile comme agent cosmétique anti-âge, raffermissant, restructurant, tenseur, lissant, repulpant, et/ou tonifiant de la peau. L'extrait de millet et les compositions qui le contiennent sont destinés à induire la restructuration de la peau et/ou à augmenter son élasticité, notamment 10 par la stimulation de la synthèse de l'élafine dans les kératinocytes. L'extrait de millet peut ainsi être utilisé dans des gammes de soins hydratantes, pour les peaux sèches à très sèches ou pour les peaux fragiles, en aidant à renforcer la barrière cutanée par une action positive sur la formation de l'enveloppe des cornéocytes tout en stimulant la différenciation des kératinocytes. 15 L'extrait de millet peut encore être utilisé dans des gammes de produits de soins anti-âges pour maintenir sur le long terme la fermeté et l'élasticité cutanée en renforçant la résistance des fibres élastiques à l'action délétère des élastases mais aussi des autres constituants des réseaux protéiques du derme. Dans le cadre de lInvention, l'extrait de millet peut être aussi utilisé 20 dans des gammes de produits de soins anti-âges pour favoriser sur le long terme la formation de l'épiderme, son renouvellement et sa réparation par augmentation de la résistance de constituants de la jonction dermo-épidermique tels que la laminine sur laquelle sont ancrés les progéniteurs épidermiques et pour lesquels on sait que ce microenvironnement, appelé « niche matricielle », constitue un élément 25 déterminant du maintien de leur capacité régénérative. L'extrait peut être également utilisé dans des gammes de soin hydratantes ou anti-âges destinées aux peaux à tendance grasse et/ou acnéïque. Avantageusement, outre l'extrait de millet, la composition cosmétique ou dermatologique comprend au moins un excipient acceptable du point de vue 30 cosmétique ou dermatologique pouvant être choisi parmi des pigments, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des conservateurs, et l'un quelconque de leurs mélanges. La composition cosmétique ou dermatologique peut être par exemple 35 une poudre, un gel, un sérum, une lotion, une crème, une émulsion huile-dans-eau ou huile-dans-eau, un hydrogel, un masque, ou encore se présenter sous la forme d'un stick, d'un patch, ou sous la forme d'un produit de maquillage de type rouge-àlèvres, mascara ou fond de teint.

Dans l'un ou l'autre des aspects précédents, on utilisera de préférence l'extrait de Panicum miliaceum à une concentration comprise entre 0,001 % et 5 % en poids par rapport au poids total de la composition finale. Par exemple, cette concentration est comprise entre 0,001 % et 0,5 %, entre 0,005 et 0,1%, entre 0,01 et 0,05% en poids par rapport au poids total de la composition finale. Selon une variante, dans les différentes compositions cosmétiques ou dermatologiques visées par la présente invention, l'extrait de Panicum miliaceum est obtenu à partir des parties de la plante riches en polysaccharides, notamment les parties fibreuses de la plante.

L'extrait peut être en particulier avantageusement obtenu à partir des fibres de la plante, par exemple des fibres de la graine de cette plante. On prendra de préférence le son des graines qui est le plus riche en fibres. Dans un mode de mise en oeuvre, l'extrait contient au moins 40 % de carbohydrates, de préférence au moins 60 % en trois par rapport au poids des matières sèches totales de l'extrait. Le taux de matière sèche de l'extrait peut être mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon jusqu'à obtention d'un poids constant. Il est de préférence compris entre 5 et 200 g/I, et de préférence encore entre 30 et 50 g/I.

Le pH de l'extrait est généralement compris entre 3,0 et 6,0, par exemple entre 3,0 et 4,0. Le taux de sucres totaux mesurés selon la méthode de Dubois est de façon préférée compris entre 3 et 160 g/I, et plus préférentiellement entre 20 et 40 9/1.

En particulier, l'extrait de Panicum miliaceum peut être obtenu selon une des étapes ou un des procédés décrits ci-après à titre indicatif, mais nullement limitatif. L'extrait peut être obtenu par broyage de la plante, mise en suspension dans l'eau de la poudre obtenue, hydrolyse enzymatique ou chimique au moins partielle des carbohydrates contenus dans la suspension, et filtration. L'extrait de Panicum miliaceum utilisé dans le cadre de la présente invention est de préférence obtenu par hydrolyse des carbohydrates d'un broyat de plante. L'hydrolyse peut être enzymatique et/ou chimique, de préférence enzymatique. L'extrait de Panicum miliaceum peut être obtenu selon un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique de carbohydrates. Cette étape est réalisée de façon à obtenir une fraction de carbohydrates constituée majoritairement d'oligosaccharides. Le procédé peut également comprendre une étape d'élimination des molécules de haut poids moléculaire par filtration. 2 98415 3 7 Selon un mode de réalisation particulier, l'extrait de Panicum miliaceum est obtenu par un procédé comprenant la mise en oeuvre des étapes suivantes : - le broyage de la plante Panicum miliaceum, de préférence des graines, et de préférence encore du son, 5 - la solubilisation de la poudre obtenue dans l'eau, - l'hydrolyse enzymatique des carbohydrates contenus dans la plante, - la séparation des phases soluble et insoluble, - l'inactivation de l'enzyme ou des enzymes utilisées pour l'hydrolyse, - au moins une filtration. 10 Le procédé peut également comprendre une étape de désodorisation, de décoloration ou de stabilisation avant l'état de filtration. La filtration peut être une filtration stérilisante. Par des filtrations successives sur filtres de tailles différentes, on obtient un hydrolysat contenant une quantité de saccharides, dont une majorité d'oligosaccharides, supérieure à 40 % 15 du poids total d'extraits secs. L'hydrolysat obtenu se présente avantageusement sous la forme d'une solution aqueuse limpide couleur jaune, et peut-être éventuellement concentré en vue de réduire la proportion d'eau qu'il contient. Selon une variante, des graines de Panicum miliaceum sont finement 20 broyées et dispersées dans un milieu aqueux tamponné. Au moins une, et de préférence plusieurs hydrolyses enzymatiques sont effectuées simultanément. L'hydrolysat subit une séparation entre les phases solubles et insolubles, la phase soluble étant inactivée thermiquement, filtrée et concentrée. Selon un mode de mise en oeuvre préféré, l'extrait de Panicum 25 miliaceum est obtenu par mise en suspension de poudre de fibres de Panicum miliaceum dans de l'eau, de préférence osmosée, à une concentration de 50 g par litre, suivie d'une hydrolyse enzymatique par une carbohydrase en milieu basique à une température de 25°C pendant 6 heures environ. La suspension peut être centrifugée pendant 30 minutes puis filtrée et éventuellement stérilisée. 30 Selon un mode de réalisation de linvention, on peut associer à l'extrait de millet au moins un autre actif cosmétique ou dermatologique qui viendra compléter ou renforcer la stimulation de l'expression de l'élafine. Ainsi, l'extrait de millet pourra être associé à au moins un deuxième actif choisi de préférence parmi les inhibiteurs des élastases et les actifs pro-élastine qui 35 stimulent sa formation. Des exemples d'inhibiteurs d'élastase sont l'élastinile, la secretory leukocyte proteinase inhibitor alpha-l-macroglobuline, et l'alpha-la ntitrypsin (AAT). On pourra également ajouter à l'extrait de millet au moins un deuxième actif choisi parmi les actifs stimulant la biosynthèse de la laminine, les actifs stimulant la biosynthèse de la fibronectine et les actifs stimulant l'expression des différents types de collagène présent au niveau de la jonction dermo-épidermique et du derme comme les collagènes de type IV, VII et de type I, III et V respectivement. Parmi les inhibiteurs de collagénase on citera l'acide rétinoïque et comme agent stimulant la biosynthèse de collagène, la vitamine C et ses dérivés, les extraits de Centella asiatica et ses hétérosides comme le madécassoside et l'asiaticoside, ou plus simplement l'acide asiatique et madécassique, un extrait de Malva sylvestris, un extrait de Potentille connu aussi sous le nom de Phytélène de tormentille, et des peptides comme par exemple ceux du Matrixyl® de structure 10 Palmitoyl-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser. L'extrait peut encore être associé à des filtres solaires capables à la surface de la peau, de filtrer ou de réfléchir la lumière solaire en particulier ses composantes UVA et UVB. Dans le même esprit, l'extrait pourra être associé à des actifs capables de stimuler le processus de pigmentation naturel de la peau comme 15 par exemple l'extrait de Coleus ou la forskoline, pigmentation qui constitue une protection naturelle à la lumière ultaviolette. L'extrait de millet pourra aussi être associé à des actifs comme un extrait de Sapindus mukurossi qui stimule le processus de contraction de la matrice de collagène, ou encore un hydrolysat de farine de soja riche en hydroxy-proline 20 (comme la Raffermine®) ou un extrait de levure (Toniskin®) pour stimuler la formation de myofibroblastes, cellules dermiques capables de mettre en tension les constituants du derme. L'extrait de millet peut encore être associé à une substance active choisie dans le groupe des antioxydants ou antiradicalaires par exemple le 25 tocophérol et ses dérivés comme le phosphate de tocophérol, ou un extrait de rose noire. L'extrait de millet pourra avantageusement être associé à des actifs stimulant l'hydratation de la peau comme l'extrait d'Ajuga turkestanica qui stimule la biosynthèse des aquaporines, l'extrait de Viola tricolor connu sous le nom 30 d'Aquaphyline® qui stimule l'expression du récepteur à l'acide hyaluronique, le D- xylose qui stimule la biosynthèse des glycosaminoglycannes, des osmolytes tels que la triméthylglycine ou bétaïne, de glycérol, d'inositol, de taurine ou de tréhalose, des humectants comme l'acide hyaluronique hydrolysé ou non présentant un haut ou bas poids moléculaire, ou un extrait de fleurs d'Opunta ficus Indica ou Exfolactive® 35 qui stimule le processus de desquamation. Enfin l'extrait de millet pourra avantageusement être associé à des actifs qui inhibent l'activité 5-alpha réductase qui permet la formation de dihydrotestostérone qui active la production de sébum, ou des antisens comme l'ADSL qui diminuent l'expression des récepteurs aux androgènes et à des régulateurs de la sebogénèse et astringeants comme par exemple l'extrait d'Enanthia chlorantha ou Evermat® et l'extrait de Cinnamomum cassia bark et de racines de Zingiberou Sebustop®, ou bien encore à un extrait de Centella asiatica et les hétérosides, un extrait de Malva sylvestris, un extrait de Potentilla eracta, un extrait de soja, un extrait de levure, des peptides naturels et de synthèses, un extrait de gelée royale, un extrait de miels monofloraux et de miels toutes fleurs, un extrait d'algues par exemple Chlorella vulgaris, ou un extrait de caroube. L'invention a également pour objet une composition contenant l'association d'un extrait de millet décrit précédemment avec au moins un deuxième actif tel que décrit précédemment. L'invention a encore pour objet une méthode de soin cosmétique caractérisée en ce que la composition cosmétique décrite précédemment est appliquée sur une zone de peau du corps ou du visage lâche ou atone, ou sur une zone de peau du corps ou du visage présentant - des signes visibles de relâchement, - une perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau, - une diminution de l'épaisseur de la peau, - une augmentation de la sécheresse, - des rides ou des ridules, La composition peut aussi être appliquée sur une zone de peau du corps ou du visage à tendance grasse et/ou présentant de l'acné. Les caractéristiques qui ont été décrites en relation avec les précédents aspects de l'invention sont aussi des caractéristiques de cette méthode de soin cosmétique.

D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lecture de la description explicative qui va suivre, faite en référence à plusieurs exemples donnés uniquement à titre d'illustration et qui ne sauraient par conséquent en aucune façon limiter la portée de l'invention.

Dans les exemples, les pourcentages sont exprimés en poids, sauf indication contraire. Dans le cas des extraits, les quantités de ceux-ci sont exprimées en poids sec.

EXEMPLE 1: Préparation d'un extrait de millet On a réalisé une mise en suspension de poudre de fibres de Panicum miliaceum dans de l'eau osmosée à une concentration de 50 g par litre, suivie d'une hydrolyse enzymatique par une carbohydrase en milieu basique à une température de 25°C pendant 6 heures environ. La suspension a été centrifugée pendant 30 minutes puis filtrée et stérilisée. L'extrait de Panicum miliaceum présentait les caractéristiques suivantes : - solution aqueuse, - aspect : liquide limpide - couleur : jaune - teneur en matières sèches : 47,4 g/I - teneur en sucre totaux selon la méthode de Dubois : 36,4 g/I - pourcentage de carbohydrates par rapport à la matière sèche : 77 % - pH égal à 3,4. EXEMPLE 2: Effet d'un extrait de millet sur l'expression de l'élafine Cette étude a consisté en la mesure de l'effet d'un extrait de millet sur l'expression de l'élafine par une méthode d'immunomarquage sur Kératinocytes Humains Normaux (KHN) en culture. L'étude a été réalisée sur des Kératinocytes Humains Normaux isolés à partir de résidus opératoires issus d'une plastie abdominale. Les KHN ont été isolés à partir de prélèvements de peau humaine traités à la thermolysine. Après décongélation, les KHN ont été cultivés en passage 3 en milieu Epilife complet (Cascade) en flasque 175. Au stade de pré-confluence, les KHN ont été trypsinés et ensemencés à raison de 20 000 cellules par puit dans des systèmes de culture Lab-Tek II, 8 puits (Nalge Nunc International, 154534) et 4 puits par conditions de traitement. Lorsque les cellules ont atteint le stade de confluence (environ 5 jours de culture), l'actif testé, préalablement filtré, a été ajouté au milieu de culture. Le temps de traitement était de 72h.

L'actif testé était soit un témoin positif Vitactyl® clair (fourni par la société SILAB), liquide soluble en milieux aqueux, utilisé à 1% et à 3%, soit l'extrait de Millet préparé selon l'exemple, liquide soluble en milieu aqueux, utilisé à 0,5% et à1%. Après 48 heures de traitement, le milieu de culture a été aspiré. Les cellules ont été rincées au PBS (PBS Tablets®, Invitrogen GIBCO), puis fixées à la formaline (Formalin Solution 10% Neutral Buffered®, Sigma) pendant 10 minutes. Après rinçage au PBS, les chambres de culture ont été remplies avec une solution de Triton 0,1% (Triton X-100®, Sigma) pendant 10 minutes afin de perméabiliser les membranes, puis rincées 2 fois au PBS.

Les cellules ont été recouvertes d'une solution de PBS/BSA 1% (BSA®, Sigma) pendant 30 minutes à température ambiante. La solution de PBS/BSA a été retirée des lames en les inclinant sur du papier absorbant. Les cellules ont ensuite été recouvertes d'une solution d'anticorps primaire anti-élafine (mouse monoclonal HM2062 Hycu/t Biotechnology) dilué au 1/50ème, pendant 60 minutes à température ambiante: Les lames ont ensuite été rincées trois fois dans une solution de PBS. Les cellules ont ensuite été recouvertes d'une solution d'anticorps secondaire anti-mouse dilué au 1/200è (Alexa fluor 488, Rabbit anti-goat IgG Molecular probes). Une coloration des noyaux cellulaires a été réalisée au Dapi. Les lames ont été incubées pendant 60 minutes à température ambiante à l'abri de la lumière. Les lames ont été rincées 3 fois dans du PBS. La chambre de culture a été démontée et quelques gouttes de milieu de montage (Fluorescent Mounting Medium®, DAKO) ont été déposées sur les cellules puis recouvertes d'une lamelle (24 x 60 mm, Knittel Glaeser). Les lames ont été conservées à 4°C et à l'obscurité. Les images ont été réalisées sur un vidéomicroscope Nikon TE2000 avec ou sans la contre-coloration nucléaire. Les immunomarquages ont été observés à l'objectif grossissement x20.

Pour chaque condition, quatre photos ont été réalisées selon les mêmes paramètres d'acquisition. Les photos ont été analysées à l'aide du logiciel d'analyse d'image Leica QWin. Un programme a été créé afin de quantifier l'expression des marqueurs par surface de mesure. Les résultats ont été affichés à l'écran. Les étapes de traitement des images étaient les suivantes : - Etape 1: Ouverture de limage à analyser - Etape 2 : Détection du marquage de l'élafine (en rouge) Etape 3 : Ouverture de l'image correspondant aux noyaux cellulaires Etape 4 : Détection des noyaux cellulaires (en jaune) - Etape 5 : Détermination de la zone de mesure (tout le champ microscopique) - Etape 6 : Soustraction binaire : Mesure du marquage de l'élafine dans le cytoplasme uniquement (en rose) L'analyse statistique a consisté en un calcul de la moyenne, de l'écart type et de l'intervalle de confiance (a = 0,05) de l'expression des trois marqueurs de différenciation par surface mesurée.

RESULTATS _ Surface champ Expression Elafine Moyenne Ecart_type Surface marquée complet Elafine Témoin non traité 119 2019 5,89% 5,58% 0,34% 118 2019 5,84% 109 2019 5,40% 105 2019 5,20% Témoin 280 1986 14,10% 14,96% 1,09% positif : Vitactyl Clair 329 2016 16,32% 284 2021 14,05% 311 2021 15,39% Extrait de 299 1999 14,96% 15,33% 1,93% Millet 0,5% 275 2021 13,61% 344 1975 17,42% Extrait de 269 1922 14,00% 14,60% 0,59% Millet 1% 287 2021 14,20% 298 1967 15,15% 297 1973 15,05% Les résultats ont été reportés sur la figure. Les résultats montrent une augmentation significative de l'expression de l'élafine par le traitement avec le témoin positif Vitactyl® Clair à 3% : +168% pour l'élafine. L'extrait de millet présente également une augmentation significative de 10 l'expression de l'élafine aux deux doses testées, à 0.5% (+174%) et 1% (+161%). EXEMPLE 3 : Sérum raffermissant pour le visage 15 La composition du sérum est donnée par la liste des ingrédients qui la composent, désignés par leur dénomination INCI. Aqua (eau), Squalane, Glycerin, Isohexadecane, Caprylic/Capric/Succinic Triglyceride, Butylene Glycol, Cera Alba (Beeswax), Myristyl Myristate, Steareth- 20, 20 c12-15 Alkyl Benzoate, Glyceryl Stearate, Tromethamine, Polymethyl Methacrylate, Serine, Sodium PCA, Glycolic Acid, Palmitic Acid, Stearic Acid, Phenoxyethanol, Xanthan Gum, Laureth-23, Tocopheryl Acetate, Parfum (Fragrance), Castanea Sativa (Chestnut) Seed Extract, Stearalkonium Hectorite, Adenium Obesum Leaf Cell Extract, Sodium Hyaluronate, Fagus Sylvaticate Extract, Xylose, Sanguisorba 25 Offcinalis Root Extract, Artemia Extract, Panicum miliaceum Extract. La composition contient 1 % d'extrait de Panicum miliaceum.

EXEMPLE 4: Gel raffermissant et relaxant pour le corps Ce gel est préparé à partir des composants suivants. Les pourcentages sont en poids. Extrait de millet de l'exemple 1 1 Madécassoside 0,2 Extrait de Sapindus mukurossi 0,2 Protéines de blé 2 Glycérine 2 Excipient gélifiant qsp 100 Ce gel raffermissant pour le corps libère au cours de l'application par massage des sensations de bien-être et de plaisir.

EXEMPLE 5: Emulsion nuit oour le visage à effets tenseur et relaxant Cette émulsion est préparée à partir des composants suivants. Les pourcentages sont en poids. Extrait de millet de l'exemple 1 1 Madécassoside 0,1 Sapindosides 0,1 OPC de pépin de raisin 0,5 Excipient émulsionné qsp 100 Cette émulsion fine aux effets tenseurs est appliquée sur l'ovale du visage, repose les traits, améliore le bien être cutané et redonne un visage plus jeune au matin.

Claims (18)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation dans une composition cosmétique ou dermatologique 5 d'au moins un extrait de Panicum miliaceum en tant qu'agent stimulant l'expression de l'élafine du derme de la peau.
2. 2. Utilisation dans une composition cosmétique ou dermatologique d'au moins un extrait de Panicum miliaceum en tant qu'agent raffermissant la peau, lissant la peau ou procurant un effet tenseur de la surface de la peau, repulpant ou 10 restructurant la peau, maintenant ou restaurant l'élasticité de la peau, et/ou tonifiant la peau.
3. 3. Utilisation selon les revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que la composition est une composition cosmétique anti-âge ou renforçant la barrière cutanée. 15
4. 4. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait de Panicum miliaceum est obtenu à partir de parties de la plante riches en polysaccharides.
5. 5. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait de Panicum miliaceum est obtenu à partir des fibres de la plante, 20 en particulier du son des graines.
6. 6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition contient de 0,001 à 5% en poids d'extrait de Panicum miliaceum par rapport au poids total de la composition.
7. 7. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée 25 en ce que la composition est une poudre, un gel, un sérum, une émulsion ou une crème.
8. 8. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait de Panicum miliaceum est obtenu par broyage de la plante, mise en suspension dans l'eau de la poudre obtenue, hydrolyse enzymatique ou chimique 30 au moins partielle des carbohydrates contenus dans la suspension, et filtration.
9. 9. Composition contenant un extrait de Panicum miliaceum pour son utilisation dans le traitement cosmétique ou dermatologique de troubles cutanés liés à une déficience de l'expression de l'élafine.
10. 10. Composition contenant un extrait de Panicum miliaceum pour son 35 utilisation dans la prévention du développement de cellules de mélanome.
11. 11. Composition contenant un extrait de Panicum miliaceum pour son utilisation dans le traitement antimicrobien des peaux à tendance acnéique, des peaux grasses, et des peaux normales en cours de cicatrisation.Fév. 2012 - N° 1161886 - Extrait de Millet
12. 12. Composition selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,001 à 5% en poids d'extrait de Panicum mi/iaceum par rapport au poids total de la composition.
13. 13. Composition selon l'une des revendications 9 à 12, caractérisée en 5 ce que l'extrait de Panicum miliaceum est obtenu à partir des fibres de la plante, en particulier du son des graines.
14. 14. Composition selon l'une des revendications 9 à 13, caractérisée en ce que l'extrait de Panicum mlliaceum est obtenue par broyage de la plante, mise en suspension dans l'eau de la poudre obtenu, hydrolyse enzymatique ou chimique 10 au moins partielle des carbohydrates contenus dans la suspension, et filtration.
15. 15. Composition selon l'une des revendications 9 à 14, caractérisée en ce qu'elle est une poudre, un gel, un sérum, une émulsion ou une crème.
16. 16. Composition selon l'une des revendications 9 à 15, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un deuxième actif choisi parmi : 15 - les inhibiteurs des élastases et les actifs pro-élastine qui stimulent sa formation tels que l'élastinile, la secretory leukocyte proteinase inhibitor alpha-lmacrogiobuline, et l'alpha-l-antitrypsin (AAT), - les actifs stimulant la biosynthèse de la laminine, les actifs stimulant la biosynthèse de la fibronectine et les actifs stimulant l'expression des 20 différents types de collagène présent au niveau de la jonction dermo-épidermique et du derme comme les collagènes de type IV, VII et de type I, III et V respectivement, - les inhibiteurs de collagénase ou les agents stimulant la biosynthèse de collagène, la vitamine C et ses dérivés, les extraits de Centella 25 asiatica et ses hétérosides comme le madécassoside et l'asiaticoside, l'acide asiatique ou l'acide madécassique, un extrait de Ma/va sy/vestris, un extrait de Potentille, et des peptides tels que ceux de structure Palmitoyl-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser, - des filtres solaires capables à la surface de la peau, de filtrer ou de réfléchir la lumière solaire en particulier ses composantes UVA et UVB, 30 - des actifs capables de stimuler le processus de pigmentation naturel de la peau comme par exemple l'extrait de Coleus ou la forskoline, - des actifs comme un extrait de Sapindus mukurossi, un hydrolysat de farine de soja riche en hydroxy-proline ou un extrait de levure, - une substance active choisie dans le groupe des antioxydants ou 35 antiradicalaires tels que le tocophérol et ses dérivés comme le phosphate de tocophérol, ou un extrait de rose noire, - des actifs stimulant l'hydratation de la peau comme l'extrait d'Ajuga turkestanica, l'extrait de Viola tricoter, le D-xylose, des osmolytes tels que la triméthylglycine ou bétaïne, de glycérol, d'inositol, de taurine ou de tréhalose, desFév. 2012 N° 1161886 - Extrait de Millet humectants comme l'acide hyaluronique, ou un extrait de fleurs d'Opunta ficus Indica, - des actifs qui inhibent l'activité 5-alpha réductase qui permet la formation de dihydrotestostérone qui active la production de sébum, ou des antisens comme I'ADSL qui diminuent l'expression des récepteurs aux androgènes et à des régulateurs de la sebogénèse et astringeants comme l'extrait d'Enanthia chlorantha, l'extrait de Cinnamomum cassia bark, l'extrait de racines de Zingiber, un extrait de Centella asiatica, un extrait de Halva sylvestris, un extrait de Potentilla eracta, un extrait de soja, un extrait de levure, des peptides naturels et de synthèses, un extrait de gelée royale, un extrait de miels monofloraux et de miels toutes fleurs, un extrait d'algues par exemple Chlorella vulgaris, ou un extrait de caroube.
17. 17. Composition selon l'une des revendications 9 à 16 destinée à être appliquée sur une zone de peau du corps ou du visage lâche ou atone, ou sur une 15 zone de peau du corps ou du visage présentant - des signes visibles de relâchement, - une perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau, - une diminution de l'épaisseur de la peau, - une augmentation de la sécheresse, 20 - des rides ou des ridules.
18. 18. Composition selon l'une des revendications 9 à 16 destinée à être appliquée sur une zone de peau du corps ou du visage à tendance grasse et/ou présentant de l'acné.