FR2936251A1 - Dispositif pour l'analyse microbiologique. - Google Patents

Abstract

Le dispositif pour l'analyse microbiologique d'un support (41 ) adapté à contenir des micro-organismes marqués par un agent fluorophore comporte des moyens d'éclairage adaptés à éclairer ledit support (41 ) comportant deux embases (21 ) sur chacune desquelles est montée au moins un groupe de sources lumineuses (22), avec lesdites sources (22) de ce groupe qui sont régulièrement espacées les unes des autres pour former une matrice d'éclairage dudit support (41), lesdites embases (21) étant fixées à une armature dudit dispositif, de part et d'autre d'une ouverture (9) ménagée dans ladite armature, avec lesdites embases (21 ) qui sont inclinées l'une vers l'autre en direction d'un emplacement prédéterminé de réception dudit support (41 ) dans ledit dispositif.

Description

La présente invention concerne un dispositif pour l'analyse microbiologique de supports susceptibles de contenir des micro-organismes afin de détecter la présence ou l'absence de ces micro-organismes. Une façon d'analyser de tels supports consiste à détecter la présence des micro-organismes par analyse de la fluorescence émise par ces micro-organismes après qu'ils aient été marqués par des marqueurs dits fluorogéniques ou fluorophores. Ces marqueurs ont la particularité d'émettre en fluorescence uniquement lorsqu'ils ont été préalablement activés par une enzyme contenue 10 dans les micro-organismes. Ces marqueurs comprennent généralement un groupement fluorophore ainsi qu'un autre groupement capable de masquer ou d'empêcher la fluorescence du groupement fluorophore de se manifester. L'enzyme des micro-organismes lorsqu'ils sont présents a pour effet de modifier ce second 15 groupement afin que la fluorescence du premier groupement puisse être détectée. Ainsi, et comme illustrés par les spectres 53 et 54 en figure 7, lorsque les micro-organismes ainsi marqués sont soumis à une lumière d'excitation adaptée, le groupement fluorophore est capable d'absorber de 20 l'énergie lumineuse selon un spectre d'absorption 53 dont le sommet 53' est à une longueur d'onde À2 et de restituer cette énergie sous la forme d'un spectre d'émission en fluorescence caractéristique 54 dont le sommet 54' est à une longueur d'onde À3, distincte de À2. On connaît déjà, afin d'observer la fluorescence émise par les micro- 25 organismes en présence de tels marqueurs, des dispositifs pour l'analyse microbiologique (intégrés à des microscopes, comme par exemple dans la demande américaine US 2007/0153372), comportant des moyens d'éclairage adaptés à éclairer le support à analyser pour détecter par fluorescence la présence de micro-organismes marqués par un agent fluorophore ainsi qu'une 30 fenêtre de visualisation de la lumière provenant du support en réponse à la lumière émise par les moyens d'éclairage.

L'invention vise à fournir un dispositif pour réaliser, comme pour le dispositif de l'art antérieur, une détection en fluorescence mais tout en étant plus performant et plus pratique. Elle propose à cet effet un dispositif pour l'analyse microbiologique d'un support adapté à contenir des micro-organismes marqués par un agent fluorophore comportant des moyens d'éclairage adaptés à éclairer ledit support pour détecter par fluorescence la présence desdits micro-organismes marqués ainsi qu'une fenêtre de visualisation de la lumière émise par ledit support en réponse à la lumière d'excitation produite par lesdits moyens d'éclairage ; caractérisé en ce que lesdits moyens d'éclairage comportent deux embases sur chacune desquelles est montée au moins un groupe de sources lumineuses, avec lesdites sources de ce groupe qui sont régulièrement espacées les unes des autres pour former une matrice d'éclairage dudit support, lesdites embases étant fixées à une armature dudit dispositif, de part et d'autre d'une ouverture ménagée dans ladite armature pour permettre à la lumière émise par ledit support de traverser ladite fenêtre de visualisation, avec lesdites embases qui sont inclinées l'une vers l'autre en direction d'un emplacement prédéterminé de réception dudit support dans ledit dispositif. Le deux embases munies de sources lumineuses du dispositif selon l'invention, en étant inclinées l'une vers l'autre et dirigées vers le support à analyser (lorsqu'il est placé dans le dispositif), permettent d'obtenir un éclairage symétrique et homogène de l'ensemble de la surface du support à éclairer puisque la lumière d'excitation produite par les sources lumineuses est émise des deux côtés de l'ouverture qui est prévue pour permettre l'observation de la lumière émise en réponse cette excitation lumineuse. Le fait que ces embases soient chacune munies d'un groupe de sources lumineuses agencées en une matrice régulière contribue également à rendre particulièrement homogène l'éclairage de l'ensemble de la surface de ce support.

Un tel agencement permet ainsi d'éclairer des supports de plus grande dimension que pour les dispositifs de l'art antérieur intégrés à des microscopes tout en conservant un éclairage uniforme avec un contraste tel que l'on peut détecter aisément la présence des micro-organismes à l'oeil nu ou avec tout autre capteur d'images. Il est en particulier rendu possible d'éclairer par exemple des membranes microporeuses tout en conservant un emplacement optimal et central de l'ouverture permettant l'observation de la lumière émise en réponse à l'excitation lumineuse produite par les sources lumineuses. Selon des caractéristiques préférées, pour des raisons de simplicité et de commodité tant à la fabrication qu'à l'utilisation : - lesdites sources lumineuses présentent chacune un même spectre lumineux centré sur une longueur d'onde prédéterminée ; et/ou - lesdites sources lumineuses sont des diodes électroluminescentes. Selon encore d'autres caractéristiques préférées, chaque dite embase est inclinée d'un angle compris entre 40° et 50° par rapport audit 15 emplacement prédéterminé de réception dudit support. Il s'est avéré que, de façon surprenante, la plage de valeurs [40°-50°] pour l'inclinaison des plaques par rapport au support offrait un optimum de performances au niveau du confort de lecture pour la détection des micro-organismes. 20 En effet, il apparaît que dans cette plage de valeurs sont significativement minimisés les phénomènes d'effet de voile (provenant d'une diffusion de la lumière parasite au travers de la fenêtre de visualisation) et les phénomènes de reflets (provenant de la réflexion de la lumière sur le support à analyser). 25 En d'autres termes, c'est dans cette plage de valeur que sont obtenus les meilleurs rendus d'image en termes de contraste, d'homogénéité et de luminosité. Selon encore d'autres caractéristiques préférées, la hauteur entre le centre de chaque dite matrice et ledit emplacement prédéterminé de réception 30 dudit support dans ledit dispositif est fonction de la taille dudit support.

Selon encore d'autres caractéristiques préférées, le centre de chaque dite matrice est situé à une hauteur comprise entre 39,75 mm et 69,75 mm dudit emplacement prédéterminé de réception dudit support. Il s'est ainsi avéré, compte tenu en particulier des dimensions intéressantes en pratique pour le support à analyser, que cette plage de hauteur offrait un bon compromis permettant à la fois d'obtenir un dispositif compact tout en conservant de bonnes performances en matière de contraste et de confort de lecture pour la détection aisée des micro-organismes Selon encore d'autres caractéristiques préférées : - sur chaque embase est également monté, en plus dudit groupe de sources lumineuses, dit premier groupe, un autre groupe de sources lumineuses, dit deuxième groupe, avec lesdites sources du deuxième groupe qui sont également régulièrement espacées les unes des autres pour former une deuxième matrice d'éclairage dudit support ; - pour chaque embase, les centres desdites première et deuxième matrices sont confondus ; - lesdites première et deuxième matrices sont entrelacées l'une dans l'autre ; - lesdits moyens d'éclairage comporte pour chaque embase, un diffuseur de la lumière émise par lesdites sources ; - chaque diffuseur est une plaque de verre sur laquelle une des faces est sablée ; - ladite fenêtre de visualisation comporte un filtre adapté à laisser passer les plus grandes longueurs d'onde ; - ladite fenêtre de visualisation comporte une pluralité de filtres ; - lesdits filtres appartiennent à un coulisseau monté à coulissement sur ladite armature ; - lesdits moyens d'éclairage sont adaptés à éclairer l'ensemble dudit emplacement prédéterminé de réception dudit support ; et/ou - ledit support à analyser est une membrane microporeuse.

Les caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description qui suit, donnée à titre d'exemple préféré, mais non limitatif, en référence aux dessins annexés sur lesquels : - la figure 1 est une représentation schématique d'un dispositif selon l'invention ; - la figure 2 est une vue en perspective de ce dispositif à côté duquel est représentée une unité de filtration à analyser dans ce dispositif ; - les figures 3 et 4 sont respectivement une vue en perspective prise de dessous et une vue en élévation-coupe prise selon un plan médian de symétrie de ce dispositif ; - la figure 5 est une vue en perspective d'une des deux plaques de circuits imprimés que comporte ce dispositif sur laquelle sont fixés deux groupes de diodes électroluminescentes, chacun émettant de la lumière à une longueur d'onde prédéterminée ; - la figure 6 est une vue en perspective d'un autre mode de réalisation du dispositif selon l'invention ; et - la figure 7 illustre, avec une échelle de longueurs d'onde commune portée en abscisse et une échelle d'intensité lumineuse relative commune portée en ordonnée, les diagrammes spectraux de différents éléments optiques d'un dispositif selon l'invention ainsi que le diagramme spectral de l'agent fluorophore utilisé avec ce dispositif pour marquer les micro-organismes. On va maintenant décrire un mode de réalisation préféré du dispositif selon l'invention à l'aide des figures 1 à 5 avant de détailler son mode de fonctionnement à l'aide des diagrammes spectraux illustrés en figure 7. Le dispositif 1 illustré sur les figures 1 à 5 comporte une enceinte 2, des moyens d'éclairage 3 formés de deux éléments d'éclairage 4, un tiroir coulissant 5 et une fenêtre de visualisation 7. L'enceinte est de forme générale parallélépipédique et présente une paroi supérieure 10 et quatre parois latérales 11 à 14, une portion de la paroi 14 étant volontairement non représentée afin de visualiser l'intérieur du dispositif.

La fenêtre de visualisation 7 est ici constituée d'un filtre passe-bas 6 (c'est-à-dire qu'il laisse passer les plus basses fréquences et donc les plus grandes longueurs d'onde), une ouverture 9 étant ménagée dans la paroi supérieure 10 de l'enceinte 2 pour y recevoir ce filtre 6.

L'intérieur de cette enceinte 2, délimitée par les parois 10 à 14 et 30 forme, comme on le verra ci-après, une chambre d'analyse isolée de la lumière ambiante et dans laquelle est reçu le support à analyser. Le support à analyser est ici une membrane microporeuse 41 appartenant à une unité de filtration 40, ici une unité commercialisée par Millipore sous la marque Milliflex . Cette membrane 41 présente un diamètre de 55 mm et est entourée par un corps 42 que comporte l'unité de filtration. La membrane 41 utilisée ici est en ester de cellulose et présente une porosité adaptée à retenir les micro-organismes dont on souhaite détectée la présence, le plus souvent comprise entre 0,10 et 100 microns.

Le tiroir 5 présente un corps 30, une collerette 31 et un ergot de saisie 32. Dans le corps 30 est ménagée une cavité cylindrique 33 prévue pour recevoir une unité de filtration 40. On va maintenant décrire les moyens d'éclairage 3 à l'aide des figures 3 à 5. Ces moyens 3 comporte deux éléments d'éclairage 4 séparés. Chaque élément 4 comporte un socle 20 à section trapézoïdale, une plaque de circuit imprimé 21 sur laquelle sont disposées deux groupes 27 et 28 de diodes 22 et 23, un diffuseur 24 recouvrant ces diodes et deux masques noirs 26 entre les bords de la plaque 21 et ceux du diffuseur 24. Les socles 20 sont fixés à l'intérieur de l'enceinte 2 sur la paroi 10 de cette enceinte, tandis que les plaques 21 sont fixées aux socles 20 sur leurs faces inclinées, opposées à celles disposées contre la paroi 10 de sorte que ces plaques sont inclinées l'une vers l'autre en direction de la zone de réception 33 du support 41. Chaque socle 20 est ainsi prévu pour que chaque plaque 21 présente une inclinaison A (figure 1) de 45° par rapport à la paroi 10 et à l'emplacement prédéterminé qu'occupe la membrane 41, lorsque l'unité 40 est dans le logement 33 du dispositif (figure 1). Les bords supérieurs 25 des plaques 21 sont à une distance l'un de l'autre égale à 100 mm tandis que ces bords 25 sont à une distance de 23 mm de la paroi 10. Les sommets de diodes électroluminescentes 22 et 23 sont eux situés à une distance de 15 mm des diffuseurs 24. Ces diffuseurs 24 sont ici réalisés à partir d'une plaque de verre sur laquelle une des faces est sablée (la face qui est tournée vers les diodes).

Sur chaque plaque de circuit imprimé, et comme illustré en figure 5, est disposé un premier groupe 27 de diodes constitué de seize diodes 22 ainsi qu'un deuxième groupe 28 de diodes constitué de quatre diodes 23. Les diodes 22 sont régulièrement espacées les une des autres et disposées en quatre rangée de quatre diodes équidistantes, de sorte que chaque diode 22 est située à une distance de 16 mm des diodes 22 qui lui sont directement voisines. Ce groupe 27 forme ainsi une matrice de diodes permettant d'éclairer de façon uniforme la membrane 41 lorsqu'elle disposée dans l'enceinte 2 à son emplacement prédéterminé, le centre 29 de cette matrice étant situé à une hauteur H de 54,75 mm de cet emplacement prédéterminé (figure 1). Les diodes 23 sont réparties aux quatre coins d'un carré entrelacé au centre de la matrice de diodes 22, chaque diode 23 étant située à une distance de 32 mm des deux diodes 23 qui lui sont voisines et au centre d'un carré aux coins duquel sont situés quatre diodes 22 (figure 5). Le centre de cette matrice est confondu avec le centre 29 de la matrice constitué des diodes 22. Les diodes 22 sont des diodes de la société LUMILED commercialisées sous la référence LXHL-PB01 et dont le spectre d'émission 55 est illustré sur la figure 7, ce spectre en gaussienne présentant un sommet 55' à la longueur d'onde À1 de 470 nm, émettant ainsi dans le bleu.

Les diodes 23 sont des diodes de la même société commercialisées sous la référence LXHL-PDO1, dont le spectre d'émission, non illustré sur les figures, est en gaussienne également et présente un sommet à la longueur d'onde de 625 nm, émettant ainsi dans le rouge. Ces diodes ont un angle solide d'émission de 140° pour une valeur d'intensité relative de 25% et un angle solide d'émission de 90° pour une valeur d'intensité relative de 60%. Les diodes 23 ont une puissance d'émission sensiblement quatre fois plus importante que celle des diodes 22 de sorte qu'elles sont quatre fois moins nombreuses que les diodes 22. Les matrices de diodes 22 et 23 sont entrelacées (c'est-à-dire imbriquées l'une dans l'autre) de façon à obtenir la lumière la plus homogène possible au niveau de l'unité de filtration à éclairer, qu'elle provienne des diodes 22 ou des diodes 23. Chaque groupe de diodes produit un spectre lumineux centré sur une longueur d'onde prédéterminée de façon à pouvoir exciter différents types de fluorophores prédéterminés. Les pistes conductrices de chaque plaque 21 sont reliées électriquement à une unité de contrôle et de commande de ce dispositif (non représentée). On va maintenant décrire brièvement la préparation d'un échantillon à analyser. Préalablement à l'étape de détection proprement dite, l'opérateur recueille par filtration au travers d'une membrane 41 d'une unité 40 un échantillon à analyser (susceptible de contenir des micro-organismes). Une fois les micro-organismes filtrés et retenus sur la membrane, une étape facultative de culture des micro-organismes au contact d'un milieu de culture approprié peut être incluse. Ce milieu de culture est préférentiellement un milieu gélosé sur lequel on dépose la membrane après filtration. Cette étape, qui est facultative, permet d'obtenir des colonies de chacun des micro-organismes initialement filtrés, ce qui augmente le nombre de cellules à détecter. La membrane et les micro-organismes qu'elle contient sont ensuite mis en contact d'une composition de perméabilisation des parois des micro- organismes et les marqueurs fluorophores sont ensuite incorporés à la composition de perméabilisation afin de pénétrer à l'intérieur des micro-organismes à détecter. On va maintenant décrire la mise en oeuvre de la détermination de la présence ou non de micro-organismes sur un échantillon ainsi préparé à partir du dispositif selon l'invention. Dans un premier temps, le tiroir 5 est tiré et l'opérateur vient placer une unité de filtration 40 (éventuellement recouvert d'un couvercle transparent non illustré pour protéger la membrane des contaminations extérieures) dans la cavité 33 de ce tiroir. Le tiroir 5 est ensuite poussé jusqu'à ce que la collerette 31 vienne en butée contre la paroi 13 de façon à ce que la membrane 41 soit disposée à son emplacement prédéterminé dans l'enceinte 2 pour être éclairée. En fonction du fluorophore qui a été utilisé pour réaliser le marquage des micro-organismes, l'opérateur sélectionne ensuite (par exemple par l'intermédiaire d'un commutateur non illustré sur les figures) les diodes correspondantes 22 ou 23 à allumer (les diodes 22 dans l'exemple illustré) de façon à éclairer de manière uniforme l'ensemble de la surface de la membrane 41 et à exciter à la bonne longueur d'onde le fluorophore ayant servi au marquage.

Les diffuseurs 24 ainsi que la distribution spatiale des diodes sur les plaques 21 permettent d'avoir un éclairage particulièrement homogène de toute la surface de la membrane 41, quelque soit le groupe de diodes utilisé. Les plaques 21 étant disposées de part et d'autre de l'ouverture 9 recevant le filtre 6, la lumière provenant de l'unité de filtration 40 qui est émise en réponse à la lumière d'excitation des diodes traverse ce filtre comme illustré sur la figure 1 de sorte qu'il est possible d'observer la réponse lumineuse de la membrane 41 au travers du filtre 6, à l'oeil nu ou bien par l'intermédiaire d'une caméra. On va maintenant détailler la réponse lumineuse obtenue en 30 présence de micro-organismes à l'aide des différents diagrammes spectraux illustrés sur la figure 7.

Sur cette figure 7, le spectre 55 est de forme gaussienne et correspond au spectre de la lumière d'excitation (ici le spectre produit par les diodes 22) et qui présente un pic dont le sommet 55' correspondant à la valeur d'intensité lumineuse maximale est à la longueur d'onde À1 égale à 470 nm.

Les spectres 53 et 54 correspondent respectivement au spectre d'absorption et au spectre d'émission du fluorophore ici choisi pour marquer les micro-organismes présents sur la membrane. Ce fluorophore représenté ici est la 5-6 CFDA (Carboxy-Fluoresceine-Di-Acétate).

Le spectre d'absorption 53 présente un sommet 53' à la longueur d'onde À2 supérieure à À1 et le spectre d'émission 54 présente un sommet 54' à la longueur d'onde À3 supérieure à À2. Dans l'exemple illustré À2 est égal à 492 nm et À3 à 517 nm, l'écart entre À1 et À2 étant ici plus faible que l'écart entre À2 et À3.

La longueur d'onde d'excitation À1 est choisie volontairement inférieure à À2 de façon à ce que le sommet 55' du spectre 55 soit décalé par rapport au sommet 53' du spectre 53, du côté opposé au spectre 54. Ce décalage est choisi pour que la lumière provenant des moyens d'éclairage présente une énergie suffisante pour exciter le fluorophore sans que cette lumière ne parasite significativement celle émise par le fluorophore en réponse à cette lumière d'excitation. Le spectre 56 est celui du filtre 6 de la fenêtre de visualisation, sa fréquence de coupure étant choisie (ici de l'ordre de 550 nm) pour laisser passer essentiellement la lumière émise par le fluorophore (spectre 54) et pour retenir la lumière à des longueurs d'onde plus faible, en particulier celle provenant des diodes 22 après réflexion sur l'unité 40. Ce filtre de sortie (un filtre coloré) est faiblement sélectif pour laisser revenir aux yeux de l'utilisateur une quantité suffisante de lumière donnant une scène globalement lumineuse et donc confortable à observer tout en garantissant un niveau de contraste qui est adapté pour une observation à l'oeil nu.

Lorsque la lumière d'excitation provenant des moyens d'éclairage 3 éclaire la membrane 41 de l'unité de filtration 40, chaque endroit de cette membrane présentant des micro-organismes marqués par le fluorophore est rendu visible sous la forme d'un spot lumineux de faibles dimensions (quelques centaines de microns) directement observable à l'oeil nu en sortie du filtre 6. Les valeurs de l'angle A et de la hauteur H assurent un rendu optimal pour la lecture des spots lumineux sur la membrane 41, que ce soit à l'oeil ou par l'intermédiaire d'une caméra. Ces valeurs ont été déterminées en appliquant sur une membrane témoin une marque noire et une marque jaune fluorescente et en recherchant, pour différentes valeurs de cet angle A et de cette hauteur H, les configurations A, H où la luminosité de la bande fluorescente est maximale tout en minimisant la luminosité parasite sur la marque noire. Il s'est ainsi avéré de façon surprenante que la plage [40°-50°] pour l'angle A présentait à la fois une intensité lumineuse maximale pour la marque fluorescente et une quasi absence de lumière parasite pour la marque noire, ce qui correspond donc à un optimum en termes de confort de lecture. De façon à avoir une certaine marge de sécurité par rapport au jeu de montage du dispositif c'est la valeur moyenne de 45° qui a donc ici été retenue. La valeur de hauteur H est quant à elle fonction de la dimension de l'objet à éclairer, les différentes configurations testées ont montré que pour une membrane d'un diamètre de 55 mm et pour une plage de valeur d'angle A comprise entre 40° et 50°, les meilleurs résultats étaient obtenus pour une plage de hauteur comprise entre 39,75 et 69,75 mm. De même ici, c'est la valeur moyenne de 54,75 mm qui a dans cet exemple été retenue. Le dispositif est également adapté, en jouant sur la hauteur H à éclairer d'autres types d'échantillons que des membranes, et de façon générale tout support adapté à contenir des micro-organismes (en surface ou en volume) et dont on souhaite détecter la présence par fluorescence. Un autre mode de réalisation de ce dispositif est représenté en figure 6.

D'une manière générale, on a employé pour les éléments similaires les mêmes références, mais additionnées du nombre 100. Le dispositif 101 présente les mêmes caractéristiques que le dispositif 1 si ce n'est qu'il est dépourvu du tiroir 5 (l'unité de filtration 40 étant ici posée directement sur une table par exemple) et que la fenêtre de visualisation 107 est ici formée d'un coulisseau 108 de forme rectangulaire disposé contre la paroi 110 de l'enceinte 102 et de quatre filtres 106 à 106-, chacun des filtres étant logé dans une ouverture correspondante du coulisseau 108.

Chaque filtre optique est un filtre passe-bas, laissant donc passer les plus basses fréquences (les plus grandes longueurs d'ondes) et dont la fréquence de coupure est distincte des autres fréquences de coupure. Le coulisseau 108 est engagé dans un rail de guidage (non illustré) que comporte ce dispositif de façon à pouvoir disposer au choix l'un des quatre filtres 106 à 106ù en face de l'ouverture 109 de la paroi 110. Il est ainsi possible en fonction du fluorophore choisi et des diodes qui sont allumées de sélectionner parmi les quatre filtres disponibles celui qui présente la fréquence de coupure la plus adaptée (pour obtenir le meilleur contraste par exemple).

Dans un mode de réalisation non illustré, le filtre 6 n'est pas un filtre passe-bas mais un filtre passe bande centré sur la longueur d'onde À2. Dans encore un autre mode de réalisation non illustré les plaques de circuits imprimés 21 présentent soit un unique groupe de diodes régulièrement espacées, soit plus que deux groupes de diode, chaque groupe de diode étant adapté à éclairer le support 41 selon des longueurs d'ondes différentes, les matrices de chaque groupe de diodes présentant des formes régulières, telles que par exemple en carré, losange, triangle, etc. Dans encore un autre mode de réalisation non illustré les diodes sont remplacées par tout autre type de sources lumineuses ponctuelles et unitaires telles que par exemple des spots chimiluminescents et/ou les plaques de circuit imprimé sont remplacées par tout autre type d'embases pouvant supporter ces sources lumineuses telles que par exemple des plaques en verre ou en céramique. On notera enfin qu'un tel système d'éclairage peut également être décliné pour bien d'autres applications telles que par exemple l'analyse par microscope, le scannage de biopuces, la lecture de plaques en fluorescence, la cytométrie, les trans-illuminateurs, la lecture en temps réel PCR, la configuration géométrique du dispositif pour chacune de ces applications étant alors déclinée de façon spécifique à l'application en question. L'armature du dispositif à laquelle sont fixées les embases 21 n'est ainsi pas nécessairement une enceinte comme l'enceinte 2 illustrée, il peut s'agir, par exemple, d'un arceau entourant l'optique d'un microscope. La présente invention n'est pas limitée aux modes de réalisation décrits et représentés, mais englobe toute variante d'exécution.15

Claims (16)

1. REVENDICATIONS1. Dispositif pour l'analyse microbiologique d'un support (41) adapté à contenir des micro-organismes marqués par un agent fluorophore comportant des moyens d'éclairage (3) adaptés à éclairer ledit support (41) pour détecter par fluorescence la présence desdits micro-organismes marqués ainsi qu'une fenêtre de visualisation (7 ; 107) de la lumière émise par ledit support (41) en réponse à la lumière d'excitation produite par lesdits moyens d'éclairage (3) ; caractérisé en ce que lesdits moyens d'éclairage (3) comportent deux embases (21) sur chacune desquelles est montée au moins un groupe (27) de sources lumineuses (22), avec lesdites sources (22) de ce groupe (27) qui sont régulièrement espacées les unes des autres pour former une matrice d'éclairage dudit support (41), lesdites embases (21) étant fixées à une armature (2 ; 102) dudit dispositif, de part et d'autre d'une ouverture (9 ; 109) ménagée dans ladite armature (2 ; 102) pour permettre à la lumière émise par ledit support (41) de traverser ladite fenêtre de visualisation (7 ; 107), avec lesdites embases (21) qui sont inclinées l'une vers l'autre en direction d'un emplacement prédéterminé de réception dudit support (41) dans ledit dispositif.
2. 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que lesdites sources lumineuses (22) présentent chacune un même spectre lumineux (55) centré sur une longueur d'onde prédéterminée (Ài).
3. 3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que lesdites sources lumineuses sont des diodes électroluminescentes (22).
4. 4. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que chaque dite embase (21) est inclinée d'un angle (A) compris entre 40° et 50° par rapport audit emplacement prédéterminé de réception dudit support (41).
5. 5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la hauteur (H) entre le centre (29) de chaque dite matrice (27) et ledit emplacement prédéterminé de réception dudit support (41) dans ledit dispositif est fonction de la taille dudit support (41).
6. 6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce que le centre (29) de chaque dite matrice (27, 28) est situé à une hauteur (H) comprise entre 39,75 mm et 69,75 mm dudit emplacement prédéterminé de réception dudit support (41).
7. 7. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que sur chaque embase (21) est également monté, en plus dudit groupe (27) de sources lumineuses (22), dit premier groupe (27), un autre groupe (28) de sources lumineuses (23), dit deuxième groupe, avec lesdites sources (23) du deuxième groupe (28) qui sont également régulièrement espacées les unes des autres pour former une deuxième matrice d'éclairage dudit support (41).
8. 8. Dispositif selon la revendication 7, caractérisé en ce que pour chaque embase (21), les centres (29) desdites première et deuxième matrices (27, 28) sont confondus.
9. 9. Dispositif selon la revendication 8, caractérisé en ce que lesdites première et deuxième matrices (27, 28) sont entrelacées l'une dans l'autre.
10. 10. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que lesdits moyens d'éclairage (3) comporte pour chaque embase (21), un diffuseur (24) de la lumière émise par lesdites sources (22, 23).
11. 11. Dispositif selon la revendication 10, caractérisé en ce que chaque diffuseur (24) est une plaque de verre sur laquelle une des faces est sablée.
12. 12. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que ladite fenêtre de visualisation (7 ; 107) comporte un filtre (6 ; 106) adapté à laisser passer les plus grandes longueurs d'onde.
13. 13. Dispositif selon la revendication 12, caractérisé en ce que ladite fenêtre de visualisation (107) comporte une pluralité de filtres (106, 106', 106", 106"').
14. 14. Dispositif selon la revendication 13, caractérisé en ce que lesdits filtres (106, 106', 106", 106"') appartiennent à un coulisseau (108) monté à coulissement sur ladite armature (102).
15. 15. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que lesdits moyens d'éclairage (3) sont adaptés à éclairer l'ensemble dudit emplacement prédéterminé de réception dudit support (41).
16. 16. Dispositif selon la revendication 15, caractérisé en ce que ledit support à analyser est une membrane microporeuse (41).