FR2934047A1 - Procede, dispositif et cartouche de coloration de cellules - Google Patents

Abstract

Le colorateur pour la coloration de cellules portées par une lame comporte : - une paroi (104), - un moyen (102) de déplacement respectif de la lame et de la paroi de manière à ce que la lame et la paroi forment un récipient, les cellules portées par la lame se trouvant à l'intérieur dudit récipient, - un moyen (105, 109a, 109b, 109c, 110a, 110b, 110c, 142a, 142b, 142c) d'amenée d'au moins un réactif à l'intérieur dudit récipient et - un moyen d'évacuation (105, 143) adapté à évacuer chaque réactif usagé depuis l'intérieur dudit récipient. Dans des modes de réalisation, le colorateur comporte, en outre, un moyen de séchage de la lame. Dans des modes de réalisation, ladite paroi possède des ouvertures, au moins une ouverture étant reliée au moyen d'amenée de réactif et au moins une ouverture étant reliée au moyen d'évacuation. Dans des modes de réalisation, le moyen d'amenée de réactif comporte au moins un réservoir de réactif relié à la paroi, ledit réservoir de réactif comportant un piston mu par un moteur électrique.

Description

PROCEDE, DISPOSITIF ET CARTOUCHE DE COLORATION DE CELLULES La présente invention concerne un procédé, un dispositif et une cartouche de coloration de cellules. Elle s'applique, en particulier, à la coloration de tous dépôts ou étalements réalisés sur une lame de verre à partir de liquides corporels ou de tissus. A titre d'exemple, un frottis sanguin est réalisé à partir d'une goutte de sang qui est étalée sur une lame de verre à l'aide d'une autre lame ou d'un accessoire spécialisé. On obtient ainsi une fine couche de sang sur environ les deux tiers de la surface de la lame. Cet étalement est ensuite séché puis coloré avec un colorateur de lame, puis séché de nouveau avant l'observation des cellules sous microscope. La coloration est une étape qui permet de mettre en évidence les caractéristiques distinctives des cellules. En hématologie, la coloration permet, par exemple, de mettre en évidence la complexité des noyaux ou des globules blancs et la présence de granules typiques de certaines cellules du fait qu'ils se colorent différemment. On peut aussi distinguer les plaquettes sanguines ou la présence d'inclusions parasitaires dans les globules rouges. L'analyse au microscope des lames ainsi réalisées et colorées permet de déterminer la composition de l'échantillon de sang concerné, ce qui est d'une grande importance pour le diagnostic de pathologies spécifiques et de maladies parasitaires. Rien que pour la coloration des frottis sanguins, il existe de nombreuses techniques. Le choix d'une technique ou d'une autre dépend de plusieurs critères dont les habitudes régionales, les cellules et pathologies à mettre en évidence, le degré d'automatisation et la rapidité d'obtention de la lame colorée. La coloration comporte généralement une première étape de fixation suivie d'une ou plusieurs étapes de coloration et d'une éventuelle étape de rinçage, lorsque cela est nécessaire. Il existe des techniques de coloration traditionnelles comme le MGG (acronyme de May Gründwald Giemsa , du nom de ses inventeurs) ou le Wright Giemsa (du nom de ses inventeurs) qui sont très utilisées dans les laboratoires. Le délai moyen de coloration est de l'ordre de quinze minutes. Il existe aussi des techniques de coloration dites rapides qui permettent d'obtenir des délais de coloration inférieurs à la minute. Les laboratoires d'analyses ont pour habitude d'effectuer des colorations traditionnelles qui sont plus faciles à automatiser lorsque les lames sont regroupées en séries. Elles prennent environ quinze minutes. En revanche, les vétérinaires et les médecins qui font des lames occasionnellement et en présence du client préfèrent les colorations rapides qu'ils effectuent manuellement. En ce qui concerne les dispositifs de coloration de lame automatiques, largement utilisés par les laboratoires ayant quotidiennement un grand nombre de lames à colorer, une première technique consiste à disposer les lames dans un ou plusieurs paniers pouvant se déplacer au dessus des différents bacs de colorants qui sont ouverts. Le panier est ensuite descendu dans chacun des bacs afin de faire tremper lès lames pendant un temps déterminé par le programme de coloration, généralement sous la commande d'un automate. Cette méthode présente l'inconvénient de contaminer un colorant par le précédent du fait des trempages successifs des lames. Les colorants sont réutilisés à chaque série de lames et il faut veiller à les remplacer fréquemment. Les lames doivent être rincées de façon à éliminer les excès de colorant sur toute la surface de la lame. On connaît aussi un procédé de coloration qui consiste à mettre chaque lame dans un puits unitaire et de remplir chaque bac successivement avec les différents colorants, ceux-ci étant ensuite évacués vers les déchets. Cette technique permet d'éviter la contamination entre les colorants et d'utiliser des colorants neufs à chaque fois. Les désavantages sont surtout une consommation importante de colorants et un instrument plus complexe à réaliser. Les lames doivent être rincées de façon à éliminer les excès de colorant sur toute la surface de la lame.

Le brevet US 4 391 710 et la demande internationale WO 93 08 898 décrivent un dispositif de coloration qui utilise la force centrifuge pour vaporiser le colorant sur les lames, celles-ci étant disposées sur un rotor. Ce procédé est de réalisation complexe et onéreuse. Un autre automate de type connu permet de faire défiler les lames sur un rail, le frottis se trouvant contre le rail. Le rail est percé d'un premier jeu de trous permettant au premier réactif de venir en contact avec le frottis en utilisant le phénomène de capillarité. La lame défile ensuite devant un second jeu de trous permettant l'arrivée du réactif suivant et ainsi de suite. Cette technique ne permet pas de faire varier les conditions de coloration en fonction de la nature de l'étalement. Tous ces automates sont lents, complexes, onéreux et, par conséquent, réservés 30 aux gros laboratoires. Les laboratoires de taille plus modeste effectuent les colorations manuellement en disposant les lames au dessus d'un évier et en distribuant manuellement les réactifs de coloration, ce qui rend l'analyse consommatrice de temps de travail et donc onéreuse. Les inventeurs ont déterminé qu'il y avait un besoin de colorateurs rapides, de 35 faible coût et de colorateurs portables pour les analyses sanguines sur le terrain, notamment dans les pays en voie de développement.

Les inventeurs ont aussi déterminé qu'il y avait un besoin de colorateurs adapté à traiter un petit nombre de lames, voire une seule, pour le analyses très urgentes ou arrivant en surplus ou en retard par rapport aux analyses groupées par quinzaines de lames. A cet effet, la présente invention vise, selon un premier aspect, un colorateur pour la coloration de cellules portées par une lame, caractérisé en ce qu'il comporte : - une paroi, - un moyen de déplacement respectif de la lame et de la paroi de manière à ce que la lame et la paroi forment un récipient, les cellules portées par la lame se trouvant à l'intérieur dudit récipient, - un moyen d'amenée d'au moins un réactif à l'intérieur dudit récipient et un moyen d'évacuation adapté à évacuer chaque réactif usagé depuis l'intérieur dudit récipient. Grâce à ces dispositions, la face de la lame portant les cellules à colorer formant elle-même une paroi du récipient, très peu de réactif suffit pour réaliser la réaction visée, par exemple très peu de colorant suffit pour colorer les cellules. De plus, le récipient peut-être de très petit volume, ce qui économise le réactif. L'invention permet aussi de réaliser un colorateur pour ne colorer qu'une seule lame ou un petit nombre de lame. La présente invention permet aussi de réaliser un colorateur portable puisqu'une seule lame peut être traitée dans un très petit volume de récipient et avec très peu de réactif.

Selon des caractéristiques particulières, le colorateur comporte un moyen de séchage de la lame. Grâce à ces dispositions, on peut sécher la lame avant et/ou après la coloration des cellules, par exemple par chauffage. Selon des caractéristiques particulières, ladite paroi possède des ouvertures, au moins une ouverture étant reliée au moyen d'amenée de réactif et au moins une ouverture étant reliée au moyen d'évacuation. Grâce à ces dispositions, le réactif est directement injecté dans le récipient, ce qui réduit la quantité de liquide à consommer à chaque coloration, les risques de pollution, de perte ou de bulles. Préférentiellement, au moins une ouverture d'évacuation est positionnée dans la partie la plus basse du récipient. Selon des caractéristiques particulières, le moyen de déplacement respectif est adapté à ce que ladite paroi soit fixe et ladite lame soit mobile. Grâce à ces dispositions, les éléments d'amenée de réactif sont simples puisque le ou les réservoirs peuvent être fixes par rapport à la paroi. Selon des caractéristiques particulières, ladite paroi comporte un joint latéral qui ferme latéralement le récipient entre la paroi et la lame. Grâce à ces dispositions, l'étanchéité est assurée et le volume du récipient est très réduit. Typiquement, le récipient a une épaisseur de l'ordre de quelques dixièmes de millimètre.

Selon des caractéristiques particulières, la paroi possède des bords latéraux, à l'exception de la partie supérieure, qui constituent une butée mécanique pour la lame lorsqu'elle vient se plaquer sur la paroi. L'épaisseur du récipient entre la lame et la paroi est déterminée mécaniquement par l'épaisseur de la bordure de la paroi. La lame vient en butée et, malgré la tolérance des joints, notamment toriques, on garantit ainsi une distance pratiquement constante entre la lame et la paroi. Selon des caractéristiques particulières, le moyen de déplacement est adapté à ce que ledit récipient soit vertical. Grâce à ces dispositions, on peut laisser le récipient ouvert à l'air libre tout en évitant les risques d'écoulement dû à la pesanteur.

Selon des caractéristiques particulières, le moyen de déplacement est adapté à retenir la lame sur un porte-lame et à faire tourner le porte-lame et la lame. Grâce à ces dispositions, le mouvement de la lame évite un frottement sur les cellules. Selon des caractéristiques particulières, le colorateur comporte un moyen de mise en pression respectif de la lame et de la paroi. Grâce à ces dispositions, l'étanchéité et 15 la répétitivité de l'épaisseur du récipient sont conjointement assurées. Selon des caractéristiques particulières, le moyen d'amenée de réactif comporte au moins un réservoir de réactif relié à la paroi. Grâce à ces dispositions, l'utilisateur évite des risques de salissure et on évite des risques de pollution du réactif. Selon des caractéristiques particulières, au moins un réservoir de réactif 20 comporte un piston mu par un moteur électrique. Grâce à ces dispositions, l'amenée de réactif est automatique et la quantité de réactif consommée est contrôlée. Selon des caractéristiques particulières, le moyen d'évacuation du réactif usagé comporte un réservoir. Grâce à ces dispositions, on peut recueillir proprement le réactif usagé. 25 Selon des caractéristiques particulières, le moyen de déplacement comporte une ventouse magnétique. Grâce à ces dispositions, la position verticale de la porte est assurée de façon répétitive et la force appliquée sur la lame vers la paroi est contrôlée et constante. Selon des caractéristiques particulières, le colorateur comporte un moyen de génération d'une impulsion électrique de relâchement de la ventouse magnétique. Grâce à 30 ces dispositions, l'ouverture du récipient est automatique. Selon des caractéristiques particulières, le colorateur comporte un moyen de programmation de la durée d'au moins une étape de coloration ou de séchage. Grâce à ces dispositions, l'utilisateur peut tenir compte du ou des produits utilisés, des cellules à colorer, de la température et/ou de l'humidité ambiante pour définir chaque durée programmable. 35 La présente invention vise, selon un deuxième aspect, un procédé de coloration de cellules portées par une lame, caractérisé en ce qu'il comporte : - une étape de déplacement respectif de la lame et d'une paroi de manière à ce que la lame et la paroi forment un récipient, les cellules portées par la lame se trouvant à l'intérieur dudit récipient, - au moins une étape d'amenée de réactif à l'intérieur dudit récipient et 5 - au moins une étape d'évacuation de réactif usagé depuis l'intérieur dudit récipient. Selon un troisième aspect, la présente invention vise une cartouche de fluides, caractérisée en ce qu'elle comporte : - au moins un réservoir de réactif pour coloration de cellules et 10 - un moyen de solidarisation provisoire d'une ouverture dudit réservoir avec des conduits de réactif aboutissant dans un récipient de coloration formé entre une paroi et une lame portant lesdites cellules. Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte, pour au moins un dit réservoir, un piston adapté à mettre le contenu dudit réservoir en déplacement. 15 Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte une membrane d'obturation de ladite ouverture d'au moins un dit réservoir. Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte un moyen de mise sous pression du contenu d'au moins un dit réservoir. Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte trois réservoirs 20 contenant, respectivement : - un fixateur de type alcoolique, - un colorant plus spécifique des cellules de Ph basique et - un colorant plus spécifique des cellules de Ph acide. Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte un réservoir 25 de récupération du contenu de chaque autre réservoir après usage dans ledit récipient de coloration. Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte une mémoire conservant un identifiant de ladite cartouche et d'au moins un réactif qu'elle contient. Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte une mémoire 30 conservant une information représentative du volume d'au moins un réservoir. Selon des caractéristiques particulières, ladite cartouche comporte une mémoire conservant une information représentative d'un nombre de colorations pouvant être effectuées avec le contenu de ladite cartouche. Selon l'une des caractéristiques, ladite cartouche comporte une mémoire avec 35 des informations cryptées. On réduit ainsi les risques de contrefaçon et on protège ainsi la qualité de la coloration.

Les avantages, buts et caractéristiques particulières de ce procédé et de cette cartouche étant similaires à ceux du colorateur objet de la présente invention, tel que succinctement exposé ci-dessus, ils ne sont pas rappelés ici. D'autres avantages, buts et caractéristiques de la présente invention ressortiront 5 de la description qui va suivre faite, dans un but explicatif et nullement limitatif, en regard des dessins annexés, dans lesquels : - la figure 1 représente, en perspective, un mode de réalisation particulier du colorateur objet de la présente invention avant fermeture d'un récipient de coloration, 10 la figure 2 représente, en perspective, une cartouche et un moyen d'amenée de fluides dans le récipient, selon un mode de réalisation particulier du colorateur et de la cartouche objets de la présente invention, - la figure 3 représente, en élévation, un récipient du mode de réalisation particulier du colorateur illustré en figures 1 et 2, 15 la figure 4 représente, en coupe, le récipient illustré en figure 3, - la figure 5 représente, en perspective, un moyen de mise en déplacement respectif d'une lame et d'une paroi du mode de réalisation illustré en figures 1 à4 la figure 6 représente, sous forme d'un logigramme, des étapes d'un mode de 20 réalisation particulier du procédé objet de la présente invention. La description qui va suivre s'applique, en particulier, à la coloration de cellules sanguines d'un frottis sanguin. Cependant, la portée de la présente invention ne se limite pas à ce type de cellule ni à ce type de répartition de cellules sur une lame mais s'étend, bien au contraire, à toute cellule portée par une lame et susceptible de subir une réaction, 25 par exemple d'être colorée, par exemple des cellules d'autres liquides corporels, du lait, de productions agricoles ou viticoles et d'autres organismes vivants ou morts. L'invention concerne aussi la coloration et, éventuellement, le séchage de tous dépôts ou étalements réalisés sur une lame de verre à partir de liquides corporels ou de tissus. 30 Dans la description, on utilise indifféremment les termes de réactif et de colorant. Comme exposé ci-dessus, le frottis sanguin permet d'obtenir une fine couche de sang sur une partie, typiquement les deux tiers, de la surface d'une face d'une lame. Le mode de réalisation particulier du colorateur objet de la présente invention illustré en figures 1 à 5 prend en charge le séchage du frottis sanguin avant la coloration, la 35 coloration et le séchage du frottis sanguin après coloration. On verra plus loin qu'elle simplifie considérablement le processus de réalisation du frottis sanguin dans son ensemble en automatisant les étapes les plus délicates à réaliser. Elle apporte aussi bien d'autres 15 20 25 30 35 avantages de confort et de propreté, notamment ceux exposés dans le préambule de la description. La coloration réalisée ici comporte une première étape de fixation suivie d'une ou plusieurs étapes de coloration et d'une étape de rinçage lorsque cela est nécessaire.

Dans le mode de réalisation illustré en figures 1 à 5, le colorateur objet de la présente invention fonctionne lame par lame et il est principalement dédié à une clientèle traitant de petites quantités de lame ou de façon occasionnelle et utilisant des colorants rapides. Cette clientèle est principalement composée des vétérinaires, des médecins la ou ils pratiquent des analyses (Etats Unis, Japon, Suisse, ...) et des petits laboratoires. II trouve aussi sa place dans les gros laboratoires pour traiter les échantillons en urgences ou arrivant après le passage de la série de lames. Toutefois, cette réalisation préférentielle n'est pas limitative et l'invention peut se décliner en toutes sortes de réalisation. On observe, en figures 1 à 5, montés sur un châssis 108 et dans un boîtier (non représenté) : une lame 101 portant des cellules à colorer (non représentées), - une porte 102, - un porte lame 103, - une paroi 104 de récipient de coloration (partie fixe avec un joint), - une cartouche 105, un contact 106 de détection de la présence de la lame, - une ventouse 107 de verrouillage de la porte, des crémaillères 109 a, 109b et 109c pour pousser des pistons de seringues (a et c absents de description), - des moteur 110a, 110b et 110c pour actionner les crémaillères, un support de cartouche 111, un réactif 112, une rondelle métallique 123 pour verrouillage de la porte 102, des fentes 124 dans la porte 102, - un support 125 de lame chauffant, un joint d'étanchéité 141, des orifices 142a, 142b et 142c d'arrivée des réactifs, - un orifice de vidange 143, une fermeture 151 du boîtier de la cartouche, un boîtier 152 de cartouche, des clips 153 de fixation de la cuve, - des seringues 154a, 154b et 154c de réactifs, - une pièce d'étanchéité 155 entre les seringues et la cuve et - un réservoir 156 de récupération des colorants usés. La lame 101 portant des cellules à colorer est une lame de verre connue dans le domaine des frottis sanguins. Les cellules sont réparties sur la face de la lame tournée vers la paroi 104.

Le porte-lame 103 est adapté à tenir la lame 101 dans une position prédéterminée. La porte 102 est mobile en rotation autour d'un axe horizontal pour amener le porte-lame 103 et la lame 101 qu'il porte à fermer un récipient de coloration constituer entre la lame 101 et la paroi 104. Préférentiellement, ce récipient est, une fois fermé, vertical et sans obturation de sa partie supérieure afin que l'air puisse s'échapper ou revenir dans le récipient au cours des cycles d'injection et de retrait des réactifs dans le récipient. Comme on l'observe, en particulier, en figures 3 et 4, la paroi 104 porte un joint d'étanchéité 141 qui constitue les parois latérales du récipient de coloration et lui donne son épaisseur. La paroi 104 présente des orifices 142a, 142b et 142c d'amenée des réactifs 112 et un orifice 143 d'évacuation des réactifs usagés. Préférentiellement, l'orifice d'évacuation 143 est positionné dans la partie la plus basse du récipient et donc contre l'extrémité inférieure du joint d'étanchéité 141 afin que l'évacuation du réactif soit pratiquement totale. Les fentes latérales 124 dans la porte 102, au nombre de quatre, permettent un mouvement de chaque coin du porte-lame 103 perpendiculairement à la paroi 104. Un moyen de pression (non représenté) positionné entre la porte 102 et le porte-lame 103 assure la mise en pression constante de la lame 101 sur le joint 141, ce qui permet d'assurer l'étanchéité du récipient et la constance de son volume. Ce moyen de pression peut être constitué par un ressort ou une mousse. Le contact 106 est fermé, selon des techniques connues, lorsque la lame 101 ferme le récipient de coloration. La fermeture du contact 106 permet à une carte électronique (non représentée) à microprocesseur incorporée au colorateur de commencer les cycles de coloration et de séchage. Le porte-lame 103 porte la lame 101 sur le support de lame chauffant 125. Ce support de lame chauffant 125, par exemple à résistance chauffante, est alimenté par la carte électronique et commandé par son microprocesseur pour sécher la lame 101 avant et après coloration des cellules. La ventouse 107 de verrouillage de la porte 102 est une ventouse magnétique qui interagit avec la rondelle métallique 123 pour maintenir la porte 102 fermée pendant les cycles de coloration. A cet effet, la ventouse magnétique 107 et la rondelle métallique 123 se trouvent au regard l'une de l'autre lorsque la porte 102 est fermée.

La distance entre la lame et la paroi est déterminé mécaniquement par une bordure (non représentée) de la paroi. La lame vient en butée et, malgré la tolérance des joints toriques, on garantit une distance constante entre la lame et la paroi. Le joint torique est alors choisi pour être très souple. Il peut être constitué par un 5 tuyau en silicone garantissant à la fois l'étanchéité et la souplesse nécessaire pour que la lame puisse se plaquer contre les bords latéraux. La cartouche 105 est amovible, par rapport au support de cartouche 111. L'utilisateur peut facilement la changer par un mouvement de traction horizontal vers l'avant du colorateur lorsque la porte 102 est en positon ouverte. La réinsertion de la nouvelle 10 cartouche se fait par un mouvement horizontal opposé. La cartouche 105 comporte les trois seringues 154a, 154b et 154c, qui contiennent, respectivement un fixateur de type alcoolique, un colorant plus spécifique des cellules de Ph basique et un colorant plus spécifique des cellules de Ph acide. Chaque seringue est munie d'un piston mis en mouvement par un moteur, 15 respectivement 110a, 110b et 110c, par l'intermédiaire d'une crémaillère, respectivement 109a, 109b et 109c. Les moteurs 110a à 110c sont alimentés par la carte électronique et commandés par son microprocesseur. Les clips 153 de fixation de la paroi 104 maintiennent la paroi 104 en position par rapport au boîtier 152 de la cartouche 105 et, plus particulièrement, à la pièce d'étanchéité 20 155, par exemple en silicone. La cartouche neuve est livrée sans la paroi 104, la pièce d'étanchéité 155 permettant de garantir l'étanchéité des seringues par trois membranes souples. L'opérateur désolidarise et récupère la paroi de la cartouche précédente et l'insère dans la nouvelle cartouche. La face arrière de la paroi possède trois morceaux de tubes inox qui percent les membranes de la pièce d'étanchéité 155 et permettent le passage des 25 colorants entre les seringues et la paroi 104. Le clips permet de fixer de façon rapide et pratique la paroi 104 au boîtier de la cartouche. La pièce d'étanchéité 155 contient une quatrième membrane qui est percée lors de l'insertion de la cartouche dans le colorateur. Cette quatrième membrane permet de mettre en communication l'orifice de vidange avec la pompe (non représentée) et donc le réservoir 156. 30 La pièce d'étanchéité 155 en matière souple permet ainsi d'assurer la connexion hydraulique entre les seringues 154a, 154b, 154c et le réservoir 156 respectivement avec les orifices de remplissage 142a, 142b, 142c et l'orifice d'évacuation 143. La cartouche 105 comporte aussi le réservoir 156 de récupération des réactifs usagés qui est reliée, d'une part, à l'orifice d'évacuation 143 et, d'autre part, à une pompe 35 (non représentée) alimentée par la carte électronique et commandée par le microprocesseur. Préférentiellement, la cartouche comporte une mémoire lisible par la carte électronique. Par exemple, cette mémoire est intégrée à une puce RFID (acronyme de RadioFréquence Identification pour identification à radio fréquences). Selon un autre exemple, cette mémoire et son connecteur sont du type de ceux d'une carte à puce. Le contenu de la mémoire permet d'identifier le type de cartouche et de décrémenter le nombre de cycles restants faisables avec le contenu de la cartouche.

Comme on le comprend à la lecture de la description qui précède, le colorateur représenté en figures 1 à 5 est composé principalement d'une porte 102 destinée à recevoir une lame de verre 101 qui constitue la paroi frontale du récipient, ou cuve, de coloration lorsque la porte 102 est fermée. La paroi 104 qui constitue, avec ses rebords et le joint 141, l'autre partie du récipient de coloration est connectée à la cartouche jetable 105 qui comporte les différents réactifs et colorants conditionnés dans des seringues 154 ainsi qu'un réservoir de récupération des colorants 156. La porte comporte un système de mise en pression de la lame contre le joint 141 afin d'assurer l'étanchéité de cuve de coloration composée du fond de cuve 104 et de la lame de verre 1. On décrit, ci-dessous, le fonctionnement du colorateur, en regard de la figure 6. 15 D'une manière générale, le procédé de coloration objet de la présente invention comporte notamment : une étape 210 de déplacement respectif de la lame et d'une paroi de manière à ce que la lame et la paroi forment un récipient, les cellules portées par la lame se trouvant à l'intérieur dudit récipient, 20 - une étape 226 d'amenée de colorant à l'intérieur dudit récipient et - une étape 228 d'évacuation du colorant usagé depuis l'intérieur dudit récipient. De manière plus détaillée, au cours d'une étape optionnelle 202, l'opérateur programme les durées des phases de séchage et de maintien des réactifs en contact avec la 25 lame 101. On note que, pour la programmation des durées et le suivi des opérations du colorateur décrit ci-dessus, son boîtier externe porte un écran alphanumérique ou graphique et un clavier (non représentés). Cet écran et ce clavier sont reliés à la carte électronique et, notamment, au microprocesseur. Au cours d'une étape 204, la lame avec son frottis sanguin est déposée sur le 30 porte lame 103 orientée de façon à ce que le frottis soit sur la face externe. Au cours de l'étape 210, l'opérateur ferme la porte 102 de façon à la mettre en position verticale ce qui a pour effet de fermer (à l'exception de sa face supérieure qui reste ouverte) le récipient de coloration. Au cours d'une étape 212, le verrouillage de la porte 102 est assuré par une ventouse magnétique 107 associée à la rondelle métallique 123 fixée sur la porte 102. 35 Le porte lame 103 est mobile dans les encoches latérales 124 de la porte 102. Un système de mise en pression basé sur au moins un ressort (non représenté) permet de maintenir une pression constante sur la lame 101 lorsque la porte 102 est verrouillée en position verticale. En variante, cette mise en pression est assurée par de la mousse ou tout système équivalent. La lame 101 est ainsi plaquée sur le joint 141 afin s'assurer l'étanchéité du récipient de coloration.

Le porte lame 103 est équipé d'une plaque métallique chauffante 125 qui permet de sécher le frottis sanguin avant coloration au cours d'une étape 214. C'est la première opération du cycle dont la dont la durée est déterminée par le cycle de coloration. Cette durée est programmable par l'opérateur en fonction de ses conditions de travail et de son environnement.

Au cours d'une étape 222, par la mise en mouvement du moteur 110a et de la crémaillère 109a, un premier réactif est ensuite introduit dans le récipient de coloration, depuis la seringue 154a et par l'orifice 142a. Le réactif se répartit entre la paroi 104 et la lame 101 et entre en contact avec le frottis sanguins. La faible épaisseur de la cuve permet de réduire la quantité de réactif à utiliser. Ainsi, par exemple, dans le prototype réalisé par les inventeurs un nombre de 50 colorations a été réalisé avec des seringues de 20 millilitres. La durée de contact du réactif est déterminée par le cycle. Elle est programmable par l'opérateur. Au cours d'une étape 224, le premier réactif est vidangé par pompage à travers l'orifice 143 de la paroi 104 pour être récupéré dans le réservoir 156 de la cartouche 105. L'effet de capillarité associé à une vidange lente permet d'enlever la majeure partie du réactif avant l'arrivée du colorant suivant lui conservant ainsi toute son efficacité. Préférentiellement, chaque pompage finit par une brusque dépression pour évacuer pratiquement la totalité du réactif usagé. Le cycle continue, au cours d'une étape 226, avec le remplissage du récipient par le deuxième réactif, à travers l'orifice 142b de la cuve 104 en provenance de la seringue 154b poussée par la crémaillère 109b actionnée par le moteur 110b. La durée de contact du deuxième réactif est également programmable par l'opérateur. Ce réactif est ensuite vidangé à son tour et recueilli dans le réservoir 156 au cours d'une étape 228. Le cycle continue avec le troisième réactif et les moyens qui lui sont dédiés, au cours d'une étape 230 d'injection et l'étape 240 d'évacuation par pompage.

La très faible quantité résiduelle de réactif après la dernière vidange permet d'éviter le rinçage final de la lame avant séchage. On note qu'il n'en est pas de même avec la méthode manuelle et la plus part des automates de coloration dans lesquels la totalité de la lame est immergée dans les réactifs. Au cours d'une étape 242, l'ouverture de la porte 102 est commandée. Une impulsion électrique émise sur la ventouse magnétique par la carte électronique permet de neutraliser l'aimant et de déverrouiller la porte 102 en fin de cycle de coloration et avant le séchage de la lame 101. La porte 102 revient alors en position horizontale, par un mouvement amorti (par un moyen d'amortissement non représenté). Puis, au cours d'une étape 244, on effectue un séchage final de la lame 101 pour la mettre en condition d'observation au microscope. Cette durée est déterminée par le cycle. Cette durée aussi est programmable par l'opérateur pour s'adapter aux conditions environnementales.

Au cours d'une étape 246, une alarme sonore et visuelle (émise par des composants de la carte électronique) indique à l'opérateur que la lame est sèche et que le cycle de coloration et de séchage est terminé. On décrit, ci-dessous, des variantes de réalisation d'un colorateur, notamment pour cellules sanguines.

La cartouche contient, en variante, des réactifs sous pression et les moteurs et crémaillères sont remplacées par des vannes doseuses. On note, cependant, que la cartouche à seringues décrites dans les figures présente les avantages suivants : - les réactifs ne sont pas au contact avec l'air ambiant (le premier réactif est, 15 par exemple, un alcool qui risquerait, au contact de l'air ambiant de se charger d'eau et de perdre ses performances de fixation des cellules) ; - les réactifs ne sont pas en contact avec l'air et la lumière (or le troisième réactif s'oxyde facilement) et elle permet d'effectuer des dosages précis avec des moteurs pas-à-pas.

20 Dans la cartouche 105 présentée, la paroi 104 est amovible et clipsée. En variante, elle est intégrée à la cartouche 105 et jetable avec elle. La lame 101 est plaquée sur la paroi 104 par un mouvement rotatif. Cependant, ce mouvement pourrait être linéaire, à la façon d'un tiroir. Le nombre de réactifs peut varier. En effet, certaines colorations spécifiques 25 peuvent demander des réactifs supplémentaires. On peut prévoir différentes cartouches avec des réactifs différents. Dans des variantes, la cartouche est remplacée par des récipients, notamment des bouteilles, dans lesquels les réactifs sont pompés. Le réservoir 156 peut ne pas être intégré à la cartouche mais être externe au 30 colorateur ou interne et lavable. Dans des variantes, c'est la paroi 104 qui est mobile et vient se plaquer sur une lame fixe pour constituer le récipient de coloration, ce qui permet de réaliser un colorateur automatique mono ou multi-lames, notamment avec les colorations traditionnelles prenant quinze minutes. 35

Claims (1)

1. REVENDICATIONS1 - Colorateur pour la coloration de cellules portées par une lame (101), caractérisé en ce qu'il comporte : 15 2 ù Colorateur selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte, en outre, un moyen (125) de séchage de la lame. 3 ù Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite paroi (104) possède des ouvertures (142a, 142b, 142c, 143), au moins une dite ouverture (142a, 142b, 142c) étant reliée au moyen d'amenée de réactif et au moins une dite 20 ouverture (143) étant reliée au moyen d'évacuation. 4 ù Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le moyen de déplacement respectif est adapté à ce que ladite paroi (104) soit fixe et ladite lame (101) soit mobile. 5 ù Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce 25 que la paroi (104) possède des bords latéraux, à l'exception de la partie supérieure, qui constituent une butée mécanique pour la lame (101) lorsqu'elle vient se plaquer sur la paroi. 6 ù Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que le moyen (102) de déplacement est adapté à ce que ledit récipient soit vertical. 7 ù Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce 30 que le moyen (102) de déplacement est adapté à retenir la lame sur un porte-lame (103) et à faire tourner le porte-lame et la lame (101). 8 ù Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il comporte un moyen (107) de mise en pression respectif de la lame (101) et de la paroi (104). 35 9 ù Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le moyen (109a, 109b, 109c, 110a, 110b, 110c, 142a, 142b, 142c) d'amenée de réactif comporte au moins un réservoir (154a, 154b, 154c) de réactif relié à la paroi (104). une paroi (104), un moyen (102) de déplacement respectif de la lame et de la paroi de manière à ce que la lame et la paroi forment un récipient, les cellules portées - par la lame se trouvant à l'intérieur dudit récipient, 142b, 142c) d'amenée un moyen (109a, 109b, 109c, 110a, 110b, 110c, 142a, - de réactif à l'intérieur dudit récipient et un moyen d'évacuation (143) adapté à évacuer du réactif usagé depuis l'intérieur dudit récipient.10 û Colorateur selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'au moins un réservoir de réactif (154a, 154b, 154c) comporte un piston mu par un moteur électrique (110a, 110b, 110c). 11 û Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le moyen (143) d'évacuation du réactif usagé comporte un réservoir (156). 12 û Colorateur selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce qu'il comporte un moyen de programmation de la durée d'au moins une étape de coloration ou de séchage. 13 - Procédé de coloration de cellules portées par une lame, caractérisé en ce qu'il comporte : - une étape (210) de déplacement respectif de la lame et d'une paroi de manière à ce que la lame et la paroi forment un récipient, les cellules portées par la lame se trouvant à l'intérieur dudit récipient, - au moins une étape (222, 226, 230) d'amenée de réactif à l'intérieur dudit récipient et au moins une étape (224, 228, 232) d'évacuation du réactif usagé depuis l'intérieur dudit récipient. 14 - Cartouche (105) de fluides, caractérisée en ce qu'elle comporte : au moins un réservoir (154a, 154b, 154c) de réactif pour coloration de cellules et - un moyen (153, 155) de solidarisation provisoire d'une ouverture dudit réservoir avec des conduits de réactif aboutissant dans un récipient de coloration formé entre une paroi (104) et une lame (101) portant lesdites cellules. 15 û Cartouche selon la revendication 14, caractérisée en ce qu'elle comporte une mémoire conservant un identifiant de ladite cartouche et d'au moins un réactif qu'elle contient.