FR2925334A1

FR2925334A1 - Nouvelles compositions antibacteriennes

Info

Publication number: FR2925334A1
Application number: FR0709196A
Authority: FR
Inventors: Pascal Butty; Laurent Mogenet; Brigitte Manco
Original assignee: Ceva Sante Animale SA
Current assignee: Ceva Sante Animale SA
Priority date: 2007-12-21
Filing date: 2007-12-21
Publication date: 2009-06-26
Also published as: WO2009083521A2; WO2009083521A3

Abstract

La présente invention concerne de nouvelles compositions antibactériennes comprenant des antibiotiques et antiseptiques particuliers en association synergique. Ces nouvelles compositions trouvent notamment leur application en tant que préparation thérapeutique dans les domaines vétérinaires contribuant à l'assainissement de l'environnement.

Description

NOUVELLES COMPOSITIONS ANTIBACTERIENNES La présente invention concerne de nouvelles compositions antibactériennes comprenant des antibactériens et antiseptiques particuliers en association synergique. Ces nouvelles compositions trouvent notamment leur application en tant que préparations thérapeutiques dans les domaines vétérinaires et contribuent à l'assainissement de l'environnement. Ces compositions antibactériennes sont particulièrement efficaces pour le traitement des troubles de santé tels que les infections respiratoires et digestives qui sont couramment observés au sein des élevages d'animaux. Les facteurs étiologiques de ces infections sont des bactéries provenant de l'environnement externe et/ou du tube digestif des animaux, qui colonisent les muqueuses des voies respiratoires supérieures. Dans des conditions d'élevage, les bactéries se disséminent aisément d'un animal à l'autre et peuvent être à l'origine de pertes économiques importantes si les infections respiratoires ne sont pas traitées à temps. Outre les mesures de prophylaxie sanitaire et les vaccins inactivés et adjuvés, vétérinaires et éleveurs font appel à tout un arsenal antibiotique tel que les fluoroquinolones (l'enrofloxacine ou marbofloxacine), les céphalosporines (le ceftiofur et la cefquinome), les tétracyclines (l'oxytétracycline), les macrolides (la spiramycine) ou encore les pénicillines (l'amoxicilline). Toutefois, l'efficacité de ces prescriptions est souvent décevante et ne permet pas d'éradiquer de manière efficace et définitive les bactéries dans les élevages. De plus l'usage répété de ces antibiotiques au cours de ces dernières 2 0 décennies a généré l'apparition de nombreuses résistances, les rendant inefficaces dans un certain nombre de cas. Par ailleurs, la limitation de ces phénomènes d'antibiorésistance acquise est devenue un enjeu essentiel. De façon inattendue, la Demanderesse a mis en évidence un effet synergique pour des associations particulières d'antibiotiques et d'antiseptiques. Ainsi, la Demanderesse a montré que des 2 5 antiseptiques particuliers tels que les alcools aromatiques naturels d'origine végétale ou les polymères de biguanide utilisés en association avec certains antibiotiques permettaient de synergiser l'activité antibactérienne de ces antibiotiques. La Demanderesse a également montré que les propriétés antibactériennes supérieures de ces associations peuvent avantageusement être utilisées pour traiter et/ou prévenir les infections respiratoires et/ou digestives de sujets animaux non humains. 30 Ainsi, la présente invention a pour objet de nouvelles compositions ayant une activité antibactérienne synergique comprenant l'association d'au moins un antiseptique sélectionné parmi les alcools aromatiques naturels d'origine végétale ou les polymères du biguanide avec au moins un antibiotique tel qu'une (3-lactamine, la fosfomycine, un glycopeptide antibiotique, la bacitracine, un polypeptide antibiotique, un aminoglycoside, un macrolide, une lincosamide, une streptogramine, une 35 tétracycline, un phénicolé, un fusidanide, ou une quinolone. La présente invention a également pour objet une composition vétérinaire pour le traitement de sujets animaux non humains atteints d'infection respiratoire et/ou d'infection digestive.

Un autre objet de la présente invention est un kit à usage vétérinaire préventif et/ou curatif comprenant une composition en dose thérapeutiquement efficace pour obtenir un effet de synergie antibactérienne.

BREVE DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 : est un graphe des cinétiques sur 24h de l'effet antibactérien du florfénicol à des concentrations de 4 à 32 pg/ml sur une souche d'E.coli de sérotype 0781(80 n° 05194 d'origine aviaire (essai préliminaire). Figure 2 : est un graphe des cinétiques sur 24h de l'effet antibactérien du thymol à des 10 concentrations de 128 à 256 pg/ml sur une souche d'E.coli de sérotype 078180 n° 05194 d'origine aviaire (essai préliminaire). Figure 3 : est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens du florfénicol à 8 pg/mI, et du thymol à 150 pg/ml, seuls ou en association, sur une souche d'E.coli de sérotype 0781(80 n° 05194 d'origine aviaire (démonstration de l'effet synergique). 1 5 Figure 4: est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens du florfénicol à 8 pg/ml, et du thymol à 170 pg/ml, seuls ou en association, sur une souche d'E.coli de sérotype 0781(80 n°05194 d'origine aviaire (démonstration de l'effet synergique). Figure 5 : est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens du florfénicol à 8 pg/ml, et du thymol à 200 pg/mI, seuls ou en association, sur une souche d'E.coli de sérotype 0781(80 n° 05194 2 0 d'origine aviaire (démonstration de l'effet synergique). Figure 6 : est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens du florfénicol à 16 pg/ml seul ou en association avec du thymol à différentes concentrations allant de 8 à 256 pg/ml, sur une souche d'E.coli de sérotype 0781(80 n° 05194 d'origine aviaire (essai préliminaire). Figure 7: est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens seul florfénicol à 32 2 5 pg/ml seul ou en association avec du thymol à différentes concentrations allant de 8 à 64 pg/ml, sur une souche d'E. coli de sérotype 0781(80 n° 05194 d'origine aviaire (essai préliminaire). Figure 8 : est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens du florfénicol à des concentrations de 4 pg/ml, 8 pg/ml, et 16 pg/ml sur une souche d'E.coli non typable n° 05208 d'origine aviaire (essai préliminaire). 30 Figure 9: est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens du florfénicol à 8 pg/ml et du thymol à 150 pg/ml sur une souche d'E.coli non typable n° 05208 d'origine aviaire (démonstration de l'effet synergique). Figure 10 : est un graphe des cinétiques sur 24h des effets antibactériens du florfénicol à 8 pg/ml et du thymol à 170 pg/ml sur une souche d'E.coli non typable n° 05208 d'origine aviaire (démonstration de 3 5 l'effet synergique). Figure 11 : est un graphe des cinétiques de bactéricidie sur 24h de l'acide fusidique à des concentrations comprises entre 0,125 et 8 pg/ml avec Staphylococcus aureus (ATCC 29213) (essai préliminaire). Figure 12 : est un graphe des cinétiques de bactéricidie sur 24h de PHMB à des concentrations comprises entre 0,25 et 8pg/ml avec le Staphylococcus aureus (ATCC 29213) (essai préliminaire).

Figure 13 : est un graphe des cinétiques de bactéricidie sur 24h de PHMB à des concentrations comprises entre 0,125 et 8pg/ml en association avec de l'acide fusidique à une concentration de 0,125 pg/ml avec Staphylococcus aureus (ATCC 29213) (essai préliminaire). Figure 14: est un graphe des cinétiques de bactéricidie sur 24h de l'acide fusidique à une concentration de 0,125 pg/ml et du PHMB à une concentration de 1pg/ml ou 2pg/ml, seuls ou en association vis-à-vis de Staphylococcus aureus (ATCC29213) (démonstration de l'effet synergique).

DESCRIPTION DETAILLEE Les compositions selon la présente invention sont des compositions antibactériennes particulièrement efficaces pour le traitement et/ou la prévention des infections respiratoires et/ou 1 5 digestives de sujets animaux non humains. Ces compositions comprennent une combinaison synergique d'au moins un antiseptique choisi parmi un alcool aromatique naturel d'origine végétale ou un polymère du biguanide et au moins un antibiotique tel qu'une f3-lactamine, la fosfomycine, un glycopeptide antibiotique, la bacitracine, un polypeptide antibiotique, un aminoglycoside, un macrolide, une lincosamide, une streptogramine, une tétracycline, un phénicolé, un fusidanide, ou une quinolone. 2 0 Par propriétés antibactériennes ou antibiotiques, on entend non seulement la propriété bactéricide caractérisée par la destruction des bactéries incluant les mycoplasmes, mais également la propriété bactériostatique, caractérisée par l'inhibition de la croissance desdits bactéries incluant les mycoplasmes. Les antiseptiques utilisés en association synergique selon la présente invention peuvent être 2 5 choisis parmi les alcools aromatiques antiseptiques naturels d'origine végétale ou les antiseptiques dérivés polymères du biguanide. Parmi les alcools aromatiques antiseptiques naturels d'origine végétale qui peuvent être utilisés en association synergique avec les antibiotiques selon la présente invention, on peut citer le thymol, le carvacrol, l'eucalyptol, l'eugénol, le gaïacol, le terpinéol, l'anéthole, et les dérivés. 3 0 Le thymol, qui est également désigné 5-méthyl-2-(1-méthyléthyl)phénol, est obtenu à partir des huiles essentielles des plantes Thymus vu/pris L. et Monarda punctata L. II a notamment été décrit par J. M. Schaffer, F. W. Tilley, J. Bacteriol. 14, 259 (1927); par O. W. Richards, K. J. Hawley, J. Chem. Educ. 16, 6 (1939); par H. B. Myers, J. Am. Med. Assoc. 89, 1834 (1927); par M. Dersarkissian, M. Goodberry: Stud. Conserv. 25, 28 (1980), et dans le brevet US 2,840,616 datant de 1958. 3 5 Le carvacrol peut également être utilisé dans les compositions selon la présente invention, il correspond au 2-méthyl-5-(1-méthyléthyl) phénol et a donc une formule chimique très voisine de celle du thymol. II est obtenu à partir des huiles d'origan, de thym, et de marjolaine. Le carvacrol a été décrit par E. Guenther, The Essential Oils vol. 2 (Van Nostrand, New York, 1949) p 503; Carpenter, Easter, J. Org. Chem. 20, 401 (1955); Ritter et al., J. Am. Chem. Soc. 72, 2381 (1950); Strubell et ail, Arch. Pharm. 291, 66 (1958); Kochmann et al., Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 161, 196 (1931). L'eucalyptol ou cinéole est le constituant majeur de l'huile essentielle de certains eucalyptus.

L'eucalyptol est un éther cyclique et un monoterpène, et sa formule chimique est le 1,3,3-triméthyl-2-oxabicyclo[2.2.2]octane. Il est décrit entre autres par Wallach, Ann. 291, 342 (1896). Le procédé de biosynthèse a été décrit par Birch et al., Tetrahedron Letters, no. 3, 1 (1959), et son activité par Jori et al., Eur. J. Pharmacol. 9, 362 (1970). L'eugénol est un phénol qui forme la majeure partie de l'essence de clou de girofle. Sa formule chimique est le 2-méthoxy-4-(2-propényl) phénol. II a été décrit par Priester, Rec. Trav. Chim. 48, 1272 (1929), et Hagan et al., Toxicol. Appl. Pharmacol. 7, 18 (1965). Le gaïacol est isolé à partir du bois de gaïac et a pour dénomination chimique le 2-méthoxyphénol. Il a également toute une série de noms, tels que le méthylcatéchol, le o-hydroxyanisole ou le 1-hydroxy-2-méthoxybenzène. Ce composé et les voies de synthèses ont été décrits par McClure et al., Williams, J. Org. Chem. 27, 627 (1962); par Taylor et al., Toxicol. Appl. Pharmacol. 6, 378 (1964) ; et dans le brevet US 3,057,927 de 1962 au nom de la Foundation Ontario Research, et le brevet DE 1148236 au nom la société Hoechst. Le terpinéol existe sous forme de trois isomères: a-, (3-, and y-terpinéol. C'est un constituant de l'huile de cajeput, de l'huile de petitgrain, et de l'huile de feuille de pin. La désignation chimique est le a,4-triméthyl-3-cyclohexne-1-méthanol. Ce composé a été décrit entre autres par J. L. Simonsen, The Terpenes vol. l (University Press, Cambridge, 2nd ed., 1947) pp 256-274. L'anéthole également désigné estragole est le constituant essentiel de l'huile de fenouil, de l'anis et de l'anis étoilé. II est connu sous le nom chimique 1-méthoxy-4-(1E)-1-propénylbenzène, et a été décrit par R. J. DePasquale, Synth. Commun. 10, 225 (1980), par J.-R. Boissier et al., Therapie 22, 309 (1967); 2 5 L. K. Liu, Anal. Commun. 33, 175 (1996), J. Caldwell, J. D. Sutton, Food Chem. Toxicol. 26, 87 (1988), G. S. Clark, Perfum. Flavor. 18, 11-18 (1993). Parmi les antiseptiques polymères du biguanide, on peut citer notamment le polymère d'hexaméthylène biguanide (PHMB), qui est aussi désigné polyaminopropyl biguanide (PAPE) ou polyhexanide et est couramment utilisé en tant que conservateur dans les solutions de nettoyage des 3 0 lentilles de contact. La formule chimique exacte est le poly(iminocarbonimidoylimino carbonimidoylimino-1,6-hexanediyl) hydrochloride. II a été notamment décrit dans le brevet américain US 4,758,595, et par G. C. East et al., Polymer 38, 3973 (1997) ; P. Broxton et al., J. Appl. Bacteriol. 57, 115 (1984); T. Ikeda et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 58, 705 (1985); W. Khunkitti et al., J. Appl. Microbiol. 82, 107 (1997); T. Hattori et al., Anal. Sci. 19, 1525 (2003). 3 5 Les antibiotiques utilisés en association synergique selon la présente invention, peuvent être choisis parmi le groupe constitué par les 13-lactamines, la fosfomycine, les glycopeptides ou les polypeptides à activité antibiotique, la bacitracine, les aminoglycosides, les macrolides, les lincosamides, les streptogramines, les tétracyclines, les phénicolés, les fusidanides, ou les quinolones. Les f3-lactamines incluent par exemple l'amoxicilline, l'ampicilline la pipéracilline, le cefpodoxime, la céfotaxime, le céfopérazone, le céftriaxone, le cefixime, le céfuroxime, et le céfaclor. La fosfomycine dont le nom chimique est l'acide (2R-cis)-(3-Methyloxiranyl) phosphonique, a été décrit entre autres par Shogi et al., J. Antibiot. 39, 1011 (1986) ; par Kahan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 235, 354 (1974); par Glamkowski et al., J. Org. Chem. 35, 3510 (1970), ainsi que dans le brevet US 3,914,231 de la société Merck & Co. Parmi les polypeptides, on peut citer polypeptides cycliques tels que notamment la colistine également connue sous le nom de polymyxine E. La colistine est constituée par un mélange complexe de plusieurs composants, en majorité des polypeptides cycliques colistine A et colistine B. Ce polypeptide a été décrit à l'origine dans le brevet japonais JP 52 1546 de 1952, et par M. Barnett et al., Br. J. Pharmacol. Chemother. 23, 552 (1964); B. Cancho-Grande et al., Chromatagraphia 54, 481 (2001); J. Horton, G. A. Pankey, Med. Clin. North Am. 66, 135-142 (1982); et M. E. Evans et al, Ann. Pharmacother. 33, 960-967 (1999); et par J. Li et al., Int. J. Antimicrob. Ag. 25, 11-25 (2005). Egalement, on peut citer la 1 5 bacitracine, un polypeptide cyclique isolé à partir de Bacillus subtilis commercialisé sous le nom de Baciim par la société Pharma-Tek, et décrit dans les brevets US 2,915,432, US 2,498,165, et US 2,828,246, ainsi que par Galardy et al., Biochemistry 10, 2429 (1971) ; par Storm, Ann. N.Y. Acad. Sci. 235, 387 (1974) ; Craig et al., "Bacitracin" in G. E. W. Wolstenholme, C. M. O'Connor, Ciba Foundation Symposium on Amino Acids and Peptides with Antimetabolic Activity (Little, Brown, Boston, 1958) pp 226-246; et D. R. 2 0 Storm, W. A. Toscano, Jr. in Antibiotics vol. 5, pt. 1, F. E. Hahn, Ed. (Springer-Verlag, New York, 1979) pp 1-17. Des dérivés de la bacitracine peuvent également être utilisés tels que la bacitracine méthylénedisalicylate ou la bacitracine zinc. Parmi les antibiotiques de type glycopeptide, on peut citer la vancomycine, la téicoplanine, la ristocétine, ou l'avorpacine. La classe des aminoglycosides inclue l'amikacine, la gentamicine, la 2 5 kanamycine, la néomycine, la nétilmycine, la paromomycine, la streptomycine, la tobramycine. Parmi les macrolides, on peut citer l'érythromycine, la spiramycine, l'ansamycine, l'oléandomycine, la carbomycine et la tylosine. Les kétolides comme la télithromycine, peuvent également être utilisés. Les lincosamides telles que la lincomycine et la clindamycine, et les tétracyclines dites de première génération telles que par exemple la tétracycline et l'oxytrétacycline, ou de deuxième génération, telles que par exemple la 3 0 doxycycline et la minocycline peuvent également être utilisées. La classe des streptogramines comprend la pristinamycine, la quinupristine ou la dalfopristine. Egalement, les quinolones qui comprennent les dérivés de l'acide nalidixique, telles que l'enrofloxacine ou la marbofloxaxine peuvent être utilisées. Parmi les antibiotiques phénicolés, on peut citer le thiamphénicol, le florfénicol, le chloramphénicol, ainsi que leurs dérivés, ou une combinaison de ces composés. Ceux-ci sont bien 3 5 connus en médecine humaine et vétérinaire. Ces antibiotiques agissent en bloquant la synthèse des protéines des bactéries incluant les mycoplasmes. Le chloramphénicol dont la désignation chimique est le 2-dichloro-N-[(1R,2R)-2-hydroxy-1-(hydroxyméthyl)-2-(4-nitrophényl)éthyl] acétamide est bien connu en antibiothérapie. Il est également connu sous d'autres désignations telles que le D-thréo-N-dichloroacetyl-1-p-nitrophenyl-2-amino-1,3-propanediol; le D(-)-thréo-2-dichloroacétamido-1-p-nitrophenyl-1,3-propanediol; ou encore le D-théo-N-(1,1'-dihydroxy-l-p-nitrophenylisopropyl) dichloro acétamide. Le chloramphénicol a été décrit entre autres par Bartz, J. (Biol. Chem. 172, 445 (1948)); Gottlieb et al., (J. Bacteriol. 55, 409 (1948)); Rebstock et al., (J. Am. Chem. Soc. 71, 2458 (1949)); et dans les brevets US 2,483,871 ; US 2,483,884; et US2,483,892, et US 2,839,577, et par Hahn in Antibiotics vol. 1, D. Gottlieb, P. D. Shaw, Eds. (Springer-Verlag, New York, 1967) pp 308-330. On peut citer en tant que dérivés du chloramphénicol, le chloramphénicol pantothénate, le chloramphénicol palmitate, le chloramphénicol arginine succinate, ou le chloramphénicol sodium succinate connu sous le nom de Globenicol et Kemicetine commercialisés respectivement par les sociétés Yamanouchi et Pharmacia. Le thiamphénicol est l'analogue méthyl sulfonyl du chloramphénicol. II correspond au 2,2-dichloro-N-[(1R,2R)-2-hydroxy-1-(hydroxyméthyl)-2-[4-(methylsulfonyl) phényl]éthyl] acétamide, ou il est désigné D-d-thréo-2-dichloro acétamido-1-(4-methylsulfonyl)phényl-1,3-propanediol; dextrosulphénidol. Il est connu 1 5 sous plusieurs autres dénominations telles que par exemple le thiophénicol ou le dextrosulphénidol, et est décrit entre autres dans Cutler et al., (J. Am. Chem. Soc. 74, 5475 (1952)); et dans les brevets US 2,759,927; US 2,759,970; US 2,759,971; US 2,759,972; et US 2,759,976. Le florfénicol est un dérivé fluoré du thiamphénicol. Il est désigné fluorothiamphénicol et il correspond au 2,2-dichloro-N-[(1S,2R)-1-(fluorométhyl)-2-hydroxy-2-[4-(méthylsulfonyl) phényl]éthyl] 20 acétamide ou le D-(thréo)-1-p-méthylsulfonylphenyl-2-amino-3-fluoro-1-propanol; et son procédé de préparation est en autres décrit dans les brevets US 5,082,863 ; US 4,235,892 ainsi que dans Budavari S., Merck Index. An Encyclopedia of chemicals, drugs, and biologicals, 12th ed. Whitehouse Station, NJ: Merck Research Laboratories; 1996. p.4146 ; et dans Sams RA. Florfenicol : chemistry; ainsi que D. P. Schumacher et al., J. Org. Chem. 55, 5291 (1990). 25 Lorsque les antibiotiques phénicolés des combinaisons selon l'invention se présentent sous forme de sels d'un acide minéral ou organique il s'agit plus particulièrement de palmitates, pantothénates, stéarates, ou succinates. Parmi les antibiotiques de la famille des fusidanines, on peut citer l'acide fusidique, les sels et dérivés tels que le fusidate de sodium. L'acide fusidique correspond à la formule chimique acide 3 0 (3a,4a,8a,9R,11a,13a,14I3,163,17Z)-16-(Acetyloxy)-3, 11-dihydroxy-29-nordammara-17(20), 24-dien-21-oique. II est commercialisé sous la désignation entre autre Fucithalmic ou Fucidine par la Société Léo Pharma. II a été isolé à l'origine à partir du milieu de fermentation de Fusidium coccineum. L'acide fusidique et les procédés de synthèse ont été entre autres décrits par D. Arigoni et al., Experientia 19, 521 (1963) ; W. G. Dauben et al., J. Am. Chem. Soc. 94, 8593 (1972); M. Tanabe et al., Tetrahedron Lett. 35 1977, 1481; W. von Daehne et al., Adv. Appl. Microbiol. 25, 95-146 (1979); et D. Dobie, J. Gray, Arch. Dis. Child. 89, 74-77 (2004).

Tout autre antibiotique ou dérivé peut être utilisé dans les combinaisons selon la présente invention dans la mesure où il permet d'obtenir un effet synergique antibactérien lorsqu'il est utilisé en association avec au moins un alcool aromatique antiseptique naturel d'origine végétale ou en association avec un antiseptique polymère du biguanide. Ceci peut être facilement déterminé par l'homme du métier comme cela est décrit dans les exemples ci-dessous. Lorsque l'antiseptique est sélectionné parmi les alcools aromatiques naturels d'origine végétale dans les compositions synergiques selon l'invention, celles-ci comprennent alors l'association de ces alcools avec un antibiotique tel qu'une f3-lactamine, la fosfomycine, un glycopeptide antibiotique, la bacitracine, un polypeptide antibiotique, un aminoglycoside, un macrolide, une lincosamide, une streptogramine, une tétracycline, un phénicolé, un fusidanide, ou une quinolone, et de préférence choisi parmi les phénicolés. Alternativement, lorsque l'antiseptique choisi est un polymère du biguanide tel que le polymère d'hexaméthylène biguanide, ce dernier est utilisé en association avec au moins un antibiotique tel qu'une f3-lactamine, la fosfomycine, un glycopeptide antibiotique, la bacitracine, un polypeptide antibiotique, un aminoglycoside, un macrolide, une lincosamide, une streptogramine, une tétracycline, un phénicolé, un fusidanide, ou une quinolone. Comme cela a été indiqué précédemment, les compositions selon l'invention ont un effet antibactérien à large spectre contre les bactéries à Gram et/ou Gram+ et également sur les bactéries pathogènes dépourvues de paroi telles que les mycoplasmes. Elles sont entre autres particulièrement efficaces pour la destruction des bactéries à Gram- à savoir les Enterobacteriaceae, telles que les 2 0 bactéries appartenant aux genres Salmonella, Shigella, et Escherichia, ainsi que Pasteurellaceae, telles que Pasteurella, et également Haemophilus, Actinobacillus, et mycoplasmes pathogènes, et ceci sans recroissance des germes. Ces compositions peuvent en outre s'avérer efficaces contre certaines bactéries antibiorésistantes. Par ailleurs, il a été découvert que ces compositions, du fait de leur activité antibactérienne synergique, sont particulièrement efficaces à titre curatif et/ou à titre préventif chez des 2 5 sujets animaux non humains infectés et/ou présentant un risque de contamination par une de ces bactéries et/ou mycoplasmes, ainsi que les symptômes des infections respiratoires et digestives. De préférence, les agents actifs utilisés dans les associations synergiques selon l'invention sont d'une part un antibiotique phénicolé et un alcool aromatique naturel d'origine végétale tel que le florfénicol et le thymol, et d'autre part le polymère d'hexaméthylène biguanide et l'acide fusidique ou toutes autres 3 0 associations du polymère d'hexaméthylène biguanide avec un antibiotique tel qu'une f3-lactamine, la fosfomycine, un glycopeptide antibiotique, la bacitracine, un polypeptide antibiotique, un aminoglycoside, un macrolide, une lincosamide, une streptogramine, une tétracycline, un phénicolé, un fusidanide, ou une quinolone. Ceux-ci sont présents en quantités efficaces pour obtenir un effet antibacterien synergique in 3 5 vivo. Les quantités des agents actifs peuvent facilement être déterminées par l'homme du métier. Par quantité efficace, on entend une quantité des composés ou de la composition selon l'invention suffisante pour permettre le contrôle et/ou la destruction des agents bactériens pathogènes précités, par un effet antibactérien synergique au niveau de l'appareil respiratoire et/ou digestif des sujets animaux non humains traités. Une telle quantité est susceptible de varier selon les agents pathogènes, les animaux à traiter, les conditions d'élevage, le mode d'administration du produit et le stade des infections. Ces quantités peuvent facilement être déterminées par des essais systématiques sur la base des exemples ci-dessous à la portée de l'homme du métier. Les compositions vétérinaires antibactériennes selon l'invention peuvent comprendre en plus des combinaisons synergiques précitées, un solvant physiologiquement acceptable et/ou un excipient également physiologiquement acceptable. D'une manière générale, ces compositions sont également appelées médicaments.

Par physiologiquement acceptable, on entend un solvant ou un excipient qui ne soit pas nocif pour les animaux destinés à recevoir la composition selon l'invention. A titre d'exemples, on peut citer les solvants organiques tels que la N-2-méthylpyrrolidone, le 2-pyrrolidone, la N, 5-diméthyl-2-pyrrolidone, la 3,3-diméthyl-2-pyrrolidone, la N-éthyl-2-pyrrolidone, la 1-pyrrolidone, le diéthylène glycol monoéthyl éther (commercialisé sous le nom de Transcutol ), le 1 5 diméthylacétamide (DMAC), le polyéthylène glycol, le propylène glycol, la glycérine, l'eau, le benzoate de benzyl, l'alcool isopropyl, les xylènes, ou une combinaison de ces solvants. Les compositions antibactériennes selon l'invention peuvent en outre contenir de nombreux autres ingrédients tels que, par exemple, des arômes, des colloïdes protecteurs, des adhésifs, des épaississants, des agents thixotropes, des agents de pénétration, des stabilisants, des séquestrants, des 2 0 antioxydants, des agents solubilisants, des agents fluidifiants, des agents complexants, des agents de conservation, ou des agents tampons. Plus généralement, les matières actives peuvent être combinées à tous les additifs solides ou liquides correspondant aux techniques habituelles de la mise en formulation. Comme exemples d'antioxydants, on peut citer sans limitation, le métabisulfite de sodium, le formaldéhyde sulfoxylate de sodium, la vitamine E acétate, la vitamine C, la vitamine B12, or une 2 5 combinaison de ces agents. On peut citer comme agents solubilisants sans limitation, la polypyrrolidone réticulée telle que le povidone C-15 (ayant 15 monomères), l'oxyde de magnésium, l'oxyde de calcium, ou une combinaison de ces agents. Comme exemples d'agents de fluidifiants, on peut citer les fluidifiants spécifiques aux mucosités 3 0 du tractus respiratoire tel que la bromhexine. Comme exemples d'agents de conservation on peut citer, sans limitation, l'alcool benzylique, les parabènes, tels que le méthyl-, éthyl-, propyl-, ou butylparabène, le chlorobutanol, le benzoate de sodium, l'acide benzoique, le chlorure de myristyl-gamma-picolinium, le chlorure de benzalkonium, le chlorure de benzethonium, le chlorure de cétylpyridinium, le chlorocrésol, le crésol, l'acide déhydroacétique, le phénol, 3 5 l'alcool phényléthyl, le benzoate de potassium, le sorbate de potassium, le propionate de sodium, l'acide sorbique, ou des combinaisons de ces agents. Les proportions et la nature des différents éléments entrant dans les compositions vétérinaires selon l'invention sont déterminées en fonction du mode d'administration choisi et sont régies par les pratiques standards bien connues de l'homme du métier spécialisé dans la galénique des produits pharmaceutiques et vétérinaires. Les compositions à usage vétérinaire pourront être utilisées sous les différentes formes galéniques appropriées pour l'administration chez l'animal. Les modes d'administration et formes galéniques utilisés de préférence permettent aux associations d'avoir une action au niveau de l'arbre respiratoire des voies supérieures et/ou des parties profondes de l'appareil respiratoire qui peuvent être infectées par des mycoplasmes pathogènes. Egalement, ces associations peuvent être administrées de préférence de sorte à avoir une action au niveau du tube digestif et/ou par absorption systémique.

Les compositions vétérinaires selon l'invention peuvent être administrées par exemple par voie orale, en particulier par absorption buccale ou nasale, ou par nébulisation directe ou indirecte. Tous autres modes d'administration susceptibles d'atteindre les voies aériennes supérieures, la partie supérieure du tube digestif, ou le tube digestif des animaux peuvent être utilisés selon les cas de figures. Alternativement, les compositions peuvent être administrées par voie parentérale, par une injection intramusculaire, sous-cutanée ou intra-péritonéale. La présente invention concerne l'obtention d'un médicament contenant au moins deux principes actifs en association synergique d'un antiseptique et d'un antibiotique tels que précédemment décrits ou sous forme d'une composition vétérinaire en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles. Ces compositions peuvent se présenter sous forme liquide, solide, semi-solide, ou sous 2 0 forme d'aérosols. Des compositions liquides sont par exemple des solutions, des suspensions, des émulsions des sirops ou des élixirs. De telles compositions liquides comprennent un diluant inerte tel que l'eau, l'éthanol, le glycérol, des huiles végétales ou l'huile de paraffine. Elles peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants. 2 5 Les compositions selon la présente invention peuvent également être mélangées aux aliments pour animaux ou diluées dans l'eau de boisson avec une quantité suffisante d'au moins deux des principes actifs des combinaisons précédemment décrites. Elles peuvent alors se présenter sous forme de poudres hydrosolubles à mélanger à l'alimentation ou sous forme de solutions liquides concentrées diluables dans l'eau de boisson des animaux. Les compositions antibactériennes vétérinaires liquides 3 0 conservent un aspect homogène et limpide sans dégradation ni formation de précipité pendant plusieurs mois. Elles comprennent au moins un antibiotique en association avec au moins un antiseptique et un solvant organique, tels que précédemment décrits. Selon un mode de réalisation préféré, les compositions sont également miscibles dans l'eau et peuvent donc être diluées dans l'eau de boisson des animaux et conservent un aspect homogène et stable avant ingestion par les animaux. Ces compositions 3 5 buvables peuvent comprendre par exemple des quantités thérapeutiquement efficaces de florfénicol et de thymol en solution dans le solvant organique de type pyrrolidone tel que le N-méthyl-2-pyrrolidone, et un agent tensioactif choisi parmi les polyoxyéthylènes de sorbitan, tel que les Tweens ayant un poids moléculaire compris entre 40 et 80, les macrogols stéarate, tel que le glycérol ricinoléate, les macrogols glycérol, ou les tensioactifs de type amine, tel que le triéthanolamine. Elles peuvent également comprendre un arôme permettant de masquer le gout par exemple de certains antiseptiques notamment des alcools aromatiques naturels d'origine végétale, et ainsi d'accroitre l'appétence des compositions vétérinaires sous forme buvable. Selon un autre mode de réalisation préféré, les compositions selon l'invention peuvent également prendre la forme d'aérosols. Les composés actifs des combinaisons synergiques sont alors dissous ou dispersés à l'aide de solvants inertes sous la forme de solutions sous pression qui lorsqu'elles sont pulvérisées donnent des aérosols qui conviennent particulièrement bien pour traiter les infections respiratoires. Les compositions sont ainsi pulvérisées ou nébulisées directement sur les animaux et viennent tapisser, après inhalation, les muqueuses des voies aériennes supérieures des animaux, telles que les muqueuses nasales, intranasales, et/ou buccales. Les compositions destinées à l'usage sous forme d'aérosols liquides peuvent être des solutions stériles stables ou des compositions solides dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile apyrogène, du sérum ou tout autre véhicule 1 5 pharmaceutiquement acceptable. Les aérosols peuvent être également des aérosols secs destinés à être directement inhalés, dans lesquels le principe actif finement divisé est associé à un diluant ou véhicule solide hydrosoluble comme par exemple le dextrane, le mannitol ou le lactose. Des compositions solides sont par exemple des comprimés, des pilules, des poudres ou des granulés. Des compositions semi-solides sont par exemple des pâtes ou des gels. De telles compositions 20 solides ou semi-solides comprennent un véhicule inerte tel que par exemple l'amidon, la cellulose, le saccharose, le lactose ou la silice. Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium. Alternativement, les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous une forme appropriée pour une administration parentérale. Celles-ci peuvent être des solutions stériles aqueuses ou 25 non aqueuses, des suspensions ou des émulsions, et comprennent au moins un agent diluant physiologiquement acceptable tel que par exemple, l'eau, une solution saline, du dextrose, un agent solubilisant, tel que par exemple le polyéthylène glycol, ou le polypropylène glycol, ou d'autres diluants classiques connus de l'homme du métier. De telles compositions sont généralement stériles. La stérilisation peut se faire de plusieurs manières, par exemple par filtration ionisante, par incorporation 3 0 d'agents stérilisants, par irradiation ou par chauffage. Les compositions antibactériennes vétérinaires telles que précédemment décrites peuvent être utilisées pour le traitement de sujets animaux non humains atteints d'infection respiratoire et/ou digestive. Ceux-ci peuvent être par exemple, des animaux d'élevage ou des animaux de compagnie, tels que par exemple, les bovins, les ovins, les caprins, les porcs, les lapins, les volailles, les chevaux, les camélidés, 3 5 les chiens et les chats. Les compositions selon l'invention comprennent alors des doses thérapeutiquement efficaces d'au moins un alcool aromatique antiseptique naturel d'origine végétale ou un antiseptique polymère du biguanide avec au moins un antibiotique tel que précédemment décrit afin d'obtenir un effet de synergie local au niveau de l'appareil respiratoire et/ou digestif selon la voie d'administration. Les compositions peuvent comprendre en outre un agent thérapeutique, un agent antiparasite, un agent antiviral, un agent anti-inflammatoire, agent anthelmintique, un composé NSAID, ou un antibiotique de type macrolide, tel que les avermectines et les milbemycines, incluant l'ivermectine, la doramectine, la milbemycine D, la moxidectine, la selamectine, l'abamectine, et l'eprinomectine. De préférence, l'agent thérapeutique est un fluidifiant bronchique tel que la bromhexine. D'une manière générale, en thérapeutique animale, le vétérinaire ou l'éleveur peut déterminer la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction d'un traitement préventif ou curatif, en fonction de l'âge, du poids de l'animal, du degré de l'infection et des autres facteurs propres au sujet à traiter, étant entendu que la dose convenable pour produire un effet peut varier dans d'assez larges limites. L'invention concerne également l'utilisation des compositions synergiques telles que précédemment décrites pour la préparation d'un médicament destiné au traitement et/ou à la prévention des infections respiratoires et/ou digestive, en particulier celles causées par les Enterobacteriaceae, telles 1 5 que les bactéries appartenant aux genres Salmonella, Shigella, et Escherichia, ainsi que Pasteurellaceae, telles que Pasteurella, et également Haemophilus, Actinobacillus, et les mycoplasmes, desdits sujets animaux non humains. En outre, la présente invention a pour objet un kit à usage vétérinaire comprenant les agents actifs de la composition synergique telle que précédemment décrite en doses thérapeutiquement 2 0 efficaces. Le kit selon l'invention peut également présenter une fiche d'instructions concernant le mode opératoire et le mode d'administration de l'association des agents actifs. Les exemples suivants illustrent des compositions selon l'invention destinées au traitement des infections respiratoires chez un certain nombre de sujets animaux non humains.

25 EXEMPLES Exemple 1 : Préparation d'une composition antibactérienne selon l'invention Un exemple de composition antibactérienne selon la présente invention comprend du florfénicol en tant qu'antibiotique phénicolé en association avec un alcool aromatique naturel d'origine végétale tel que le thymol cristallisé. Pour tester cette combinaison antibactérienne, une solution mère de thymol est 3 0 préparée par dissolution dans 40% d'éthanol et 60% d'eau. Les solutions qui sont préparées à partir de cette solution mère sont diluées au minimum au 1/10 dans du bouillon Mueller-Hinton pour la détermination in vitro de l'activité antibactérienne. Le florfénicol étant également insoluble dans l'eau, est formulé dans une solution mère contenant 10% de méthanol et 90% d'eau. Les solutions ainsi obtenues à partir des solutions mères sont diluées au 35 minimum au 1/10 dans du bouillon Mueller-Hinton.

Exemple 2 : Test de mise en évidence d'un effet antibactérien synergique La mise en évidence ou la confirmation d'un effet antibactérien synergique peut être réalisée en mettant en contact dans un tube une suspension bactérienne calibrée à 106 CFU/ml dans du bouillon nutritif avec des concentrations différentes et prédéfinies de la combinaison florfénicol et thymol. Des prélèvements sont ensuite réalisés immédiatement après le contact (TO), puis après 1h, 3h, 6h et 24h d'incubation à 37°C sous agitation légère. Les prélèvements sont dilués de manière à permettre le dénombrement des germes viables par repiquage sur milieu nutritif gélosé. Le nombre total de germes survivants est exprimé en 1og10 de CFU/ml. Les limites de détection sont en Iog10de CFU/ml : 2,3 en limite basse et 9,3 en limite haute. Au bout de 24 heures, une augmentation de 3 log10 correspond normalement à la croissance de la culture témoin. En comparant les résultats des essais et en retranchant le log obtenu à TO à celui du log obtenu dans l'essai après 24h, tous nombres inférieurs à 3 correspondent à l'effet inhibiteur incomplet du produit testé sur la croissance des germes. Cet effet est plus ou moins marqué et il devient bactériostatique lorsque la valeur passe de 3 à +1- 1. Lorsque la valeur calculée atteint -3, l'effet est franchement bactéricide. 1 5 La totalité du protocole peut être ainsi appliqué à plusieurs antibiotiques phénicolés ou autres antibiotiques tels que précédemment cités et à plusieurs antiseptiques de type alcools aromatiques naturels d'origine végétale ou polymères de biguanide, à des concentrations différentes, et/ou à plusieurs types de souches bactériennes sérotypées ou non. 2 0 Exemple 3 : Mise en évidence de l'effet synergique de l'association florfénicol et thymol L'activité antibactérienne du florfénicol et du thymol seuls puis de l'association thymol/florfénicol a été testée sur plusieurs souches et des résultats consistants ont été observés quelque soit la souche testée. Les résultats obtenus avec E.coli de sérotype 0781(80 et E.coli non typable n° 05208 d'origine aviaire sont représentés respectivement dans les Tableaux 1 et 2 suivants. Les concentrations minimales inhibitrices 2 5 (CMI) du florfénicol et du thymol vis-à-vis d'E. coli sont respectivement de 8 pg/ml et 256 pg/mI. Florfénicol Les concentrations de l'ordre de '/2 fois la CMI à 4 fois la CMI pg/ml de florfénicol n'ont pas une forte activité bactéricide vis-à-vis des germes testés (Figures 1 et 8). En effet à 4 fois la CMI la population bactérienne est abaissée de seulement de 2 log10 après 24 h de contact (Figure 1). 3 0 Thymol Les concentrations inférieures ou égales à 128 pg/ml de thymol n'ont pas d'activité sur les bactéries testées (concentrations sub-inhibitrices).

Les concentrations de 150 et 170 pg/ml de thymol commencent à provoquer une activité bactériostatique. Une concentration de 200 pg/ml exerce une activité bactéricide jusqu'à 6 h de contact mais sans empêcher une recroissance à 24 h. Une concentration de 225 pg/ml représente la première concentration bactéricide dès 1 h de contact et sans recroissance à 24h (Figure 2).

L'association florfénicol + thymol Les associations de florfénicol à une concentration égale à la CMI (en l'occurrence de 8 pg/ml en ce qui concerne les 2 souches testées dans le cadre de cet exemple) et de thymol à des concentrations de 150 à 200pg/ml sont synergiques avec un effet bactéricide à 24 heures (Figures 3 à 4, 9 et 10). La Figure 5 montre encore un effet bactéricide synergique, mais cet effet résulte alors surtout de l'utilisation d'une concentration élevée en thymol (200pg/ml) qui l'emporte sur celle du florfénicol. Au-delà de 200 pg/ml de thymol, l'effet bactéricide et non synergique est assuré uniquement par la concentration très élevée du thymol. Les associations en florfénicol équivalentes à 2 fois la CMI et 4 fois la CMI de florfénicol avec des concentrations sub-inhibitrices de thymol (de 8 à 128 pg/ml) ne sont pas synergiques (Figures 6 et 7). 1 5 Tableau 1: Cinétiques de bactéricidie du florfénicol seul ou du thymol seul, et de l'association thymol et florfénicol vis-à-vis d'E.coli de sérotype 078K80 d'origine aviaire Logio CFU/ml Concentrations (en pg/ml) Tlh T3h T6h T24h Témoin E.coli n°05194 + 0,1 + 2,2 + 3,3 + 3,3 Florfénicol 4 (1/2CMI) - 0,1 + 0,7 + 0,7 + 2,6 Florfénicol 8 (CMI) + 0,2 + 0,3 + 0,1 + 1,3 Florfénicol 16 (2CMI) + 0,2 0 - 0,5 - 1,3 Florfénicol 32 (4CMI) 0 - 0,4 - 0,7 - 2,0 Thymol 8 + 0,4 + 2, 1 + 3,5 + 3,7 Thymol 16 + 0,5 + 1,8 + 3,3 + 3,6 Thymol 32 + 0,6 + 2,1 + 3,7 + 3,7 Thymol 64 0 + 1,7 + 3,5 + 3,5 Thymol 128 - 0,1 + 1,1 + 2,2 + 2,9 Thymol 150 - 0,4 - 1,1 + 1 + 1,3 Thymol 170 - 0,7 - 2,8 - 0,5 + 0,9 Thymol 200 - 1,4 - 3,7 - 3,7 + 0,4 Thymol 225 - 2,1 - 3,5 - 3,5 - 3,5 Thymol 256 - 3,5 - 3,7 - 3,7 - 3,7 Thymol 512 - 3,8 - 3,8 - 3,8 - 3,8 Florfénicol 8+ Thymol 128 - 0,1 - 0,2 0 - 1,2 Florfénicol 8+ Thymol 150 0 - 0,3 - 0,7 -3,7 Florfénicol 8+ Thymol 170 - 0,5 - 1,7 - 2,5 - 3,7 Florfénicol 8+ Thymol 200 - 2,6 - 3,4 - 3,4 - 3,4 Florfénicol 8+ Thymol 225 - 3,2 - 3,2 -3,2 - 3,2 Florfénicol 8+ Thymol 256 - 3,6 - 3,6 - 3,6 - 3,6 Florfénicol 16 + Thymol 8 + 0,2 0 - 0,4 - 1,5 Florfénicol 16 + Thymol 16 + 0,2 - 0,1 -0,4 - 1,5 Florfénicol 16 + Thymol 32 - 0,1 - 0,6 - 0,7 - 1,3 Florfénicol 16 + Thymol 64 0 - 0,1 - 0,3 - 0,8 Florfénicol 16 + Thymol 128 0 - 0,1 0 -0,8 Florfénicol 16 + Thymol 256 - 3,7 - 3,7 - 3,7 - 3,7 Florfénicol 32 + Thymol 8 0 - 0,4 - 1 - 2 Florfénicol 32 + Thymol 16 + 0,1 - 0,6 - 0,9 -2, 1 Florfénicol 32 + Thymol 32 - 0,3 - 0,6 - 0,9 - 2 Florfénicol 32 + Thymol 64 - 0,2 - 0,5 - 0,9 - 1,3 Concentration (en pg/ml) Log ,o CFU/mI Tlh T3h T6h T24h Témoin E.coli n°05208 non-typable 0 + 1,8 + 2,9 + 3,1 Florfénicol 4 pg/ml (1/2CMI) - 0,3 + 0,7 + 1,3 + 2,3 Florfénicol 8 pg/ml (CMI) + 0,2 + 0,8 - 0,4 + 1,1 Thymol 150 pg/ml - 1 0 + 0,8 + 1,5 Thymol 170 pg/ml - 2,1 - 0,2 + 0,9 + 1,1 florfénicol 8pg/ml + thymol 150 pg/ml -0,6 - 1,6 - 2,6 - 4 florfénicol 8pg/ml + thymol 170 pg/ml - 0,7 - 3,7 - 4 - 4 Exemple 4 : Mise en évidence de l'effet synergique de l'association acide fusidique et polymère d'hexaméthylène biguanide L'activité antibactérienne de l'acide fusidique seul et du polymère d'hexaméthylène biguanide (PHMB) seul, puis de l'association l'acide fusidique/ polymère d'hexaméthylène biguanide a été testée sur la souche de Staphylocoque doré (ATCC 29213). Un exemple de composition antibactérienne selon la présente invention comprend de l'acide fusidique en 1 0 tant qu'antibactérien en association avec un polymère artificiel tel que le PHMB. Pour tester cette combinaison antibactérienne, une solution mère d'acide fusidique est préparée par dissolution dans 10% de soude et 90% d'eau. Les solutions qui sont préparées à partir de cette solution mère sont diluées au minimum au 1/10 dans du bouillon Mueller-Hinton pour la détermination in vitro de l'activité antibactérienne. 15 Le PHMB soluble dans l'eau, est formulé dans une solution mère contenant 100% d'eau. Les solutions ainsi obtenues à partir des solutions mères sont diluées au minimum au 1/10 dans du bouillon Mueller-Hinton. La mise en évidence ou la confirmation d'un effet antibactérien synergique peut être réalisée en mettant en contact dans un tube une suspension bactérienne calibrée à 106 CFU/ml dans du bouillon nutritif avec 2 0 des concentrations différentes et prédéfinies de la combinaison acide fusidique et PHMB. Des prélèvements sont ensuite réalisés immédiatement après le contact (TO), puis après 1h, 3h, 6h et 24h d'incubation à 37°C sous agitation légère. Les prélèvements sont dilués de manière à permettre le dénombrement des germes viables par repiquage sur milieu nutritif gélosé. Le nombre total de germes survivants est exprimé en logo de CFU/mI. Tableau 2: Cinétique de bactéricidie du florfénicol ou du thymol seul et des associations florfénicol et thy

Les limites de détection sont en 1og10 de CFU/ml : 2,3 en limite basse et 9,3 en limite haute. Au bout de 24 heures, une augmentation de 3 Iog10 correspond normalement à la croissance de la culture témoin. En comparant les résultats des essais et en retranchant le log obtenu à TO à celui du log obtenu dans l'essai après 24h, tous nombres inférieurs à 3 correspondent à l'effet inhibiteur incomplet du produit testé sur la croissance des germes. Cet effet est plus ou moins marqué et il devient bactériostatique lorsque la valeur passe de 3 à +/- 1. Lorsque la valeur calculée atteint -3, l'effet est franchement bactéricide. La totalité du protocole peut être ainsi appliqué à plusieurs antibiotiques de familles différentes et le PHMB, à des concentrations différentes, et/ou à plusieurs types de souches bactériennes sérotypées ou non.

La Figure 11 montre que l'acide fusidique a une activité bactériostatique contre Staphylococcus aureus à des concentrations de 0,125 pg/ml jusqu'à des concentrations de 8 pg/mI. Le polymère d'hexaméthylène biguanide présente par contre une activité bactéricide dite concentration dépendante vis-à-vis de Staphylococcus aureus. Les résultats sont donnés dans le Tableau 3 et la Figure 12 avec des concentrations testées allant de 0,125 à 8 pg/ml de PHMB. Ces résultats montrent que la concentration de 8 pg/ml de PHMB est la concentration bactéricide minimale de PHMB qui permet d'obtenir un effet bactéricide après 6 heures de contact avec Staphylococcus aureus, cet effet étant maintenu pendant 24h. Tableau 3 : Dénombrement bactérien après mise en contact de différentes concentrations de PHMB avec la souche de Staphylococcus aureus ATCC 29213 e0nC6nttations Nombre de germes S. aureus ATCC 29213 (en Iogio CFUIml) de PHMB TO Tlh T3h D T24h 0.125 Nglml 6.1 6. 3 7.0 9.3 9.3 0.25 pglml 6.1 6.3 6.4 9.3 9.3 0.5 pglml 5.9 6.2 5.7 7.8 9.3 1 ~giml 6.2 6.1 5.7 5.3 9.3 2 pglml 6.2 5.9 5.2 4.4 9.3 4 pglml 6.1 5.8 4.6 3.0 7.3 8ag{mIb 6.3 4.9 3.6 2.3 32 pglml 3.0 2.3 2.3 2.3 2.3 128 pglml 2. 3 2.3 2.3 2.3 2.3 3 0 La Figure 13 ainsi que le Tableau 4 mettent en évidence l'effet de synergie de l'acide fusidique à une concentration de 0,125 pg/ml en association avec différentes concentrations de PHMB allant de 0,125 et 8 pg/ml. Ces résultats montrent que des concentrations d'acide fusidique est de PHMB respectivement de 0,125 pg/ml et de 1 pg/ml de PHMB sont les concentrations minimales pour obtenir une activité synergique bactéricide sur Staphylococcus aureus. 35

Tableau 4 : Dénombrement bactérien après mise en contact d'une combinaison comprenant différentes concentrations de PHMB et 0,125 pg/ml d'acide fusidique avec la souche Staphylococcus aureus ATCC 29213 Cç~r3Sr~~k2Rx ` Nombre de germes S meus ATCC 29213 (en!neiuCFIJ,hrrQ a + s Ac.lusidique PHMtt3 To 1- h T3h T6h {AF) 0,125 0.125 X5.2 6.2 rJ.4 6.1 9. 3 0125 0.25 63 63 65 6.1 9.3 0125 0.5 ti.3 6 4 ' 7 6.7 0 ü125 1 6.2 6.2 7. 50 3.0• 0.12; 2 6.2 57 5.2 4.7 2.3 0125 4 6 66 4.9 3.4 0.12 8 4.6 3.2 0.125 32 j r 2.3 2.3 2.3 0.1255 128 2.3 2.3 2.3 2.3 2:3 Comme le montre les résultats du Tableau 4, la concentration d'acide fusidique peut être fortement diminuée jusqu'à 0,125 pg/ml. Par ailleurs, cette association est particulièrement efficace pour empêcher la survie bactérienne qui persiste généralement 24h après traitement avec l'acide fusidique seul quelque 1 5 soit la concentration appliquée.

La Figure 14 et le Tableau 5 montrent l'activité antibiotique de l'acide fusidique à une concentration de 0,125 pg/ml seul ou en association avec du PHMB à une concentration de 1 pg/ml ou de 2 pg/ml. Tableau 5: Dénombrement bactérien après mise en contact avec 0,125 pg/ml d'acide fusidique et 1 pg/ml 2 0 de PHMB seuls ou associés CarrcenUata~g Nombre de germes associées Eurarrrdl S. aweus ATCC 29213 (en 1091. CFU/mll rusid ieq FHMB T0 Titi T3t' 1-th T24h 0.125 1 6.4 6A 6.7 6.7 9.3 1 6.2 6. 1 5.7 5.3 9.3 0,125 1 6.2 6.2 5.7 5.0 3.0 10 25

Claims

REVENDICATIONS

1. Une composition synergique antibactérienne caractérisée en ce qu'elle comprend un antiseptique sélectionné parmi les alcools aromatiques naturels d'origine végétale ou les polymères du biguanide en association avec au moins un antibiotique.

2. Une composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'antiseptique est un alcool aromatique naturel d'origine végétale et l'antibiotique est un antibiotique phénicolé.

3. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'agent antibiotique phénicolé est choisi parmi le florfénicol, le thiamphénicol, le chloramphénicol et dérivés, et l'alcool aromatique antiseptique naturel d'origine végétale est choisi parmi le thymol, le carvacrol, l'eucalyptol, l'eugénol, le gaïacol, le terpinéol, I'anéthole, et les dérivés.

4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'agent antibiotique phénicolé est le florfénicol et l'alcool aromatique antiseptique naturel d'origine végétale est le thymol.

5. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'antibiotique est choisi 2 0 parmi une f3-lactamine, la fosfomycine, un glycopeptide, la bacitracine, un polypeptide, un aminoglycoside, un macrolide, une lincosamide, une streptogramine, une tetracycline, un phénicolé, un fusidanine, ou une quinolone et l'antiseptique est un polymère du biguanide.

6. Composition selon la revendication 1 ou 5, caractérisée en ce que l'antiseptique polymère 25 du biguanide est le polymère d'hexaméthylène biguanide.

7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite composition comprend en outre un excipient pharmaceutiquement acceptable. 3 0

8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes en tant que médicament vétérinaire.

9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes en tant que médicament bactéricide à large spectre contre les bactéries pathogènes. 18 35

10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes en tant que composition vétérinaire pour le traitement de sujets animaux non humains atteints d'infection respiratoire et/ou digestives.

11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle est administrée par voie orale, buccale, nasale ou par vaporisation directe ou indirecte.

12. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme liquide, solide, semi solide, ou sous forme d'aérosol.

13. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une solution liquide miscible dans l'eau.

14. Composition buvable antibactérienne comprenant la composition telle que définie dans la 15 revendication 13 sous forme diluée dans l'eau de boisson avec ou sans addition d'un arôme.

15. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un agent thérapeutique, un fluidifiant bronchique tel que la bromhexine, un agent anti-inflammatoire, un composé NSAID, un agent antiparasite ou un agent antiviral.

16. Utilisation d'une composition synergique antibactérienne telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament vétérinaire destiné au traitement de sujets animaux non humains atteints d'une infection respiratoire et/ou digestive. 25

17. Un kit à usage vétérinaire comprenant une composition synergique antibactérienne telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 15 en doses thérapeutiquement efficaces pour obtenir un effet de synergique.

18. Kit selon l'une quelconque des revendications 17, caractérisé en ce qu'il comprend en 3 0 outre une fiche d'instructions concernant le mode opératoire et le mode d'administration de la composition. 20