FR2922210A1 - Nouveaux composes, preparation et utilisations - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne de nouveaux composés, les compositions pharmaceutiques les comprenant ainsi que leurs applications thérapeutiques dans les domaines de la santé humaine et animale. La présente invention a également trait à un procédé de préparation de ces composés.

Description

NOUVEAUX COMPOSES, PREPARATION ET UTILISATIONS

DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne de nouveaux composés, les compositions pharmaceutiques les comprenant ainsi que leurs applications thérapeutiques dans les domaines de la santé humaine et animale. La présente invention a également trait à un procédé de préparation de ces composés.

DESCRIPTION DU CONTEXTE DE L'INVENTION Les métaux sont des élements essentiels à la chimie du Vivant. Si une carence en certains métaux peut conduire à des troubles métaboliques graves, la présence de ces métaux en excès dans les tissus vivants revêt un danger tout aussi significatif. Le fer est un élément crucial pour de nombreux processus métaboliques et fonctions physiologiques et, à ce titre, il est présent dans toutes les cellules. Il est ainsi constitutif de l'hème des transporteurs d'oxygène (hémoglobine, myoglobine) et des cytochromes (transporteurs d'électrons). Le fer est également co-facteur de nombreuses enzymes essentielles notamment celles impliquées dans les voies de biosynthèse des désoxyribonucléotides, monomères de l'ADN, le support du patrimoine génétique. Ce métal de transition peut exister sous forme de plusieurs degré d'oxydation et possède la propriété de gagner ou de perdre facilement un électron, passant ainsi par exemple de la forme ferreuse divalente (Fe2+) à la forme ferrique trivalente (Fe3+), et inversement. Cette propriété lui confère un rôle primordial dans les processus d'oxydation et de réduction biologique qui constituent la base de la chimie métabolique. Chez l'adulte, le stock en fer de l'organisme est d'environ 4 g. L'homéostasie du fer résulte d'une régulation de l'absorption intestinale qui équilibre la quantité de fer absorbé quotidiennement avec les pertes. Du fait de l'existence d'un processus de recyclage du fer dans l'organisme, des échanges entre sites de stockage et sites d'utilisation, le fer circule quasiment en circuit fermé. Les pertes (desquamation des cellules muqueuses, pertes menstruelles...), évaluées entre 1 et 2 mg par jour, sont compensées par l'absorption intestinale et il n'existe pas de mécanisme spécifique permettant d'éliminer le fer en cas de surcharge. Certaines maladies génétiques comme l'hémochromatose, l'anémie falciforme ou la béta-thalassémie se caractérisent par une surcharge en fer, ou surcharge martiale, soit symptômatique (hémochromatose) soit consécutive à des transfusions régulières (anémie falciforme, béta-thalassémie). Ces surcharges en fer ont de graves conséquences et peuvent conduire à une issue fatale pour les patients non traités (destruction progressive d'organes essentiels). Le fer se dépose dans l'hypophyse (dérèglement général, fatigue physique et psychique, perte de libido, impuissance, dépression mais aussi ostéoporose et ménopause précoce chez la femme), le coeur (myocardiopathies, tachycardie), le foie (fibrose, cirrhose, cancer), le pancréas (destruction progressive du nombre de cellules produisant l'insuline aboutissant au diabète), et les articulations (douleurs articulaires, arthrites, rhumatismes). Le foie, organe clé dans la régulation de l'homéostasie du fer (synthèse d'hepcidine, stockage du fer) est tout particulièrement affecté par les surcharges en fer (cirrhose, cancer). La faible biodisponibilité et la toxicité à long terme des chélateurs de fer actuellement utilisés dans le traitement des surcharges en fer expliquent le recours encore fréquents aux saignées pour désaturer en fer l'organisme du patient. Comme cela a déjà été mentionné, certaines enzymes intervenant dans la synthèse des désoxyribonucléotides, monomères de l'ADN, contiennent dans leurs sites actifs des atomes de fer essentiels à leur fonctionnalité. Ceci explique que la stratégie consistant à piéger le fer par des chélateurs de synthèse permet de diminuer la quantité d'ADN synthétisé et de ralentir ainsi la prolifération rapide et anarchique caractéristique des cellules cancéreuses.

DESCRIPTION DE L'INVENTION De manière inattendue, les inventeurs ont découvert une nouvelle famille de molécules présentant une activité cytoprotectrice contre les surcharges en métaux et en particulier les surcharges en fer et une activité antiproliférative dans des cellules cancéreuses, en particulier dans une lignée de cellules d'hépatome humain. Les composés selon l'invention sont des chélateurs de fer présentant des propriétés cytoprotectrices et antiprolifératives. Les molécules décrites dans l'invention présentent un intérêt pour traiter les pathologies liées à une surcharge en fer. Ces mêmes molécules pourraient aussi être utilisées pour le traitement des cancers en général et celui du foie plus particulièrement.

La présente invention concerne donc des composés de formule générale (I) dans laquelle : R1, R3, R5 et R7, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, d'halogène, un groupe COOH (acide), SO3H (acide sulfonique), NO2, CN, un groupe R, OR, COOR, CONH2, CONHR, ou CONRR', où R et R', identiques ou différents, représentent un radical (C1-C16)alkyle, (C2-C16)alkényle, (C2-C16)alkynyle, (C6-C14)aryl, ou hétéroaryle; R2, R4, R6 et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, d'halogène, un groupe hydroxy, NH2, NHR, NRR', NH-COR, R, ou OR, où R et R', identiques ou différents, sont tels que définis ci-dessus ; X représente un atome d'oxygène ou un atome de soufre ; A représente un atome d'oxygène ou un groupe NH ; m et n, identiques ou différents, représentent 1, 2 ou 3 ; leurs stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, mélanges racémiques, isomères géométriques, tautomères, sels, hydrates, 25 solvates, ainsi que leurs mélanges.

Il convient de noter que les deux n, X et/ou A représentés dans la formule (I) sont respectivement identiques ou différents de part et d'autre de la formule (I), de préférence ils sont identiques.

Dans le cadre de la présente invention, R1, R3, R5 et R7 peuvent être identiques ou différents, ils sont de préférence identiques au moins deux à deux, en particulier R1 est identique à R5 et/ou R3 identique à R7. R2, R4, R6 et R8 peuvent être identiques ou différents, ils sont de préférence identiques au moins deux à deux, en particulier R2 est identique à R6 et/ou R4 identique à R8.

Dans le cadre de la présente invention, le terme alkyle désigne un radical hydrocarboné saturé, linéaire, ramifié ou cyclique, substitué ou non, ayant de 1 à 16, de préférence 1 à 6, atomes de carbone. On peut citer, par exemple, le radical méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, isobutyle, tert-butyle, sec-butyle, pentyle, néopentyle, n-hexyle ou cyclohexyle. Lorsque le radical alkyle est cyclique, on peut citer notamment les groupes cyclohexyle, cyclopentyle, cyclopropyle, cyclobutyle, cycloheptyle ou norbornyle.

Le terme alkényle désigne un radical hydrocarboné insaturé (comprenant au moins une double liaison), linéaire, ramifié ou cyclique, substitué ou non, ayant de 2 à 16, de préférence 2 à 6 atomes de carbone. On peut citer, par exemple, le radical éthényle, 1-propényle, 2-propényle, 1-butényle, 2-butényle, 1-pentényle, 2-pentényle, 3-méthyl-3-butényle.

Le terme alkynyle désigne un radical hydrocarboné insaturé (comprenant au moins une triple liaison), linéaire, ramifié ou cyclique, substitué ou non, ayant de 2 à 16, de préférence 2 à 6 atomes de carbone. On peut citer, par exemple, le radical éthynyle, 1-propynyle, 2-propynyle, 1-butynyle, 2-butynyle, 1-pentynyle ou 2-pentynyle.

Le terme aryle désigne un radical hydrocarboné aromatique, substitué ou non, ayant de préférence 6 à 14 atomes de carbone. Il pourra en particulier être substitué par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, hydroxyle, thiol, alkyloxy, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino ou une fonction nitro (NO2). De préférence, les radicaux aryles selon la présente invention sont choisis parmi le phényle, le naphtyle (par exemple 1-naphtyle ou 2-naphtyle), le biphényle (par exemple, 2-, 3- ou 4- biphényle), l'anthryle ou le fluorényle. Les groupes phényles, substitués ou non, sont tout particulièrement préférés.

Le terme hétérocryle désigne un radical hydrocarboné aromatique comportant un ou plusieurs hétéroatomes tels que l'azote, le soufre et l'oxygène, substitué ou non, ayant de préférence 6 à 14 atomes de carbone. II peut en particulier être substitué par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle (tel que défini ci-dessus), hydroxyle, thiol, alkyloxy (-0-alkyl), alkylthio (-S-alkyl), amino (NH2), alkylamino (de type NHR, avec R étant un radical alkyle), dialkylamino (de type NRR', avec R et R', identiques ou différents, étant un radical alkyle) ou une fonction nitro (NO2). A titre d'exemple, on peut citer les groupements pyridinyle, pyridazinyle, pyrimidyle, pyrazyle, triazinyle, pyrrolyle, pyrazolyle, imidazolyle, (1,2,3,)- et (1,2,4)-triazolyle, pyrazinyle, pyrimidinyle, tétrazolyle, furyle, thiényle, isoxazolyle, thiazolyle, isoxazolyle ou oxazolyle, etc. Par le terme halogène , on désigne les atomes de chlore, brome, fluor et iode.

Lorsque R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 ou R8 représente un groupement OR, R représente en particulier un radical (C1-C16)alkyle, de préférence (C1-C8)alkyle. A titre d'exemple d'alkyloxy (i.e., OR avec R représente un alkyle), on peut citer les radicaux méthoxy, éthoxy, n-propyloxy, isopropyloxy, n-butoxy, isobutoxy, tert-butoxy, sec-butoxy ou hexyloxy.

Les radicaux ainsi définis peuvent être substitués, en particulier par au moins un atome d'halogène, un radical alkyle, cycloalkyle, aryle, hydroxyle, thiol, alkyloxy, alkylthio, amino, alkylamino, dialkylamino, hydroxyle, hétérocycle ou une fonction nitro (NO2). Ainsi, le groupe alkyle peut être un radical perhalogénoalkyle, en particulier perfluoroalkyle, tel que -CF3.

Un aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle n, identique ou différent de part et d'autre de la formule (I), est 1 ou 2, de préférence 1. De préférence, n est identique de part et d'autre de la formule (I). Un aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle m est 1 ou 2, de préférence 1.

Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle A est un atome d'oxygène. Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle R1 et R5, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, d'halogène, un groupe R, où R représente un radical (C1-C16)alkyle, de préférence R est un radical (C1-C3)alkyle. Avantageusement, R1 et R5 représentent un atome d'hydrogène. Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle R2 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, d'halogène, un groupe hydroxy, NH2, NHR, NRR' ou OR, où R et R', identiques ou différents, représentent un radical (C1-C16)alkyle, de préférence R et R', identiques ou différents, représentent un radical (C1-C3)alkyle. De préférence, R2 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe NH2, NHR, NRR' ou NHCOR. De manière encore plus préférentielle, R2 et R6 représentent un atome d'hydrogène. Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle R4 et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, d'halogène, un groupe hydroxy, OR, où R représente un radical (C1-C16)alkyle, de préférence R est un radical (C1-C3)alkyle.

Avantageusement, R4 et R8 représentent un atome d'hydrogène. Un autre aspect particulier de l'invention concerne les composés de formule générale (I) dans laquelle R3 et R7, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe COOH (acide), SO3H (acide sulfonique), ou un groupe COOR, où R représente un radical (C1-C16)alkyle, (C2-Cl 6)alkényle, (C2- C16)alkynyle, (C6-C14)aryl, ou hétéroaryle. De préférence, R3 et R7, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe COOH (acide) ou un groupe COOR, où R représente un radical (C1-C6)alkyle, de préférence méthyle ou éthyle. De manière préférentielle, les composés de formule (I) présentent au moins une ou deux des, de préférence toutes les, caractéristiques suivantes : - mest1, - n est 1, - A représente un atome d'oxygène, - R1 représente un atome d'hydrogène, - R2 représente un atome d'hydrogène, - R4 représente un atome d'hydrogène, - R5 représente un atome d'hydrogène, - R6 représente un atome d'hydrogène, - R8 représente un atome d'hydrogène, - R3 représente un atome d'hydrogène, un groupe COOH ou COOR, et/ou - R7 représente un atome d'hydrogène, un groupe COOH ou COOR.

Cette famille de composés est nommée, dans la présente description, BHPTC ("BHPTC" pour Bis-HydroxyPhényl Thiazole Carboxamide). Selon un mode particulier de l'invention, les composés préférés sont indiqués ci- dessous : Composé BHPTC-O : 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2, 2'-éthylènedioxy-biséthylamine-thiazolecarboxamide]-dibenzoate de méthyle OCH3 Composé BHPTC-S : 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2, 2'-éthylènedioxy-biséthylamine-thiazolethiocarboxamide]-dibenzoate de méthyle H3CO BHPTC-S S Composé BHPTC-OOH : Acide 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2,2'-éthylènedioxybiséthylamine-thiazolcarboxamide] dibenzoïque OH Composé BHPTC-SOH : Acide 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2, 2'-éthylènedioxybisethylamine-thiazolthiocarboxamide] dibenzoïque BHPTC-SOH L) Composé BHPTC-OX : N,N'-[l,2-éthanediyl-bis(oxy-2,1-ethandiyléthyl)]-bis[2-(2-5 hydroxyphényl)]-4-th iazolcarboxamide HO - 1 H BH PTC-OX Composé BHPTC-SU : N,N'-[l,2-éthanediyl-bis(oxy-2,1-ethandiyléthyl)]-bis[2-(2-10 hydroxyphényl)]-4-thiazolthiocarboxamide - BHPTC-SU Les composés de la présente invention incluent les stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, leurs mélanges racémiques, leurs isomères géométriques, leurs tautomères, leurs sels, leurs hydrates, leurs solvates, leurs formes solides ainsi que leurs mélanges. Les composés selon l'invention peuvent contenir un ou plusieurs centres asymétriques. La présente invention inclut les stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, ainsi que les mélanges racémiques.

La présente invention inclut également les isomères géométriques des composés selon l'invention. Quand un mélange énantiomériquement pur (ou enrichi) est souhaité, il peut être obtenu soit par purification du produit final ou d'intermédiaires chiraux, soit par synthèse asymétrique suivant des méthodes connues de l'homme du métier (utilisant par exemple des réactifs et catalyseurs chiraux). Certains composés selon l'invention peuvent avoir différentes formes tautomères stables et toutes ces formes ainsi que leurs mélanges sont inclus dans l'invention.

La présente invention concerne également les sels pharmaceutiquement acceptables des composés selon l'invention, notamment ceux présentant une fonction COO-, NH3, NHR+, NRR'H+ ou SO3-. Ce terme désigne les sels peu ou non toxiques obtenus à partir de bases ou d'acides, organiques ou inorganiques. Ces sels peuvent être obtenus lors de l'étape de purification finale du composé selon l'invention ou par incorporation du sel sur le composé déjà purifié.25 Certains composés selon l'invention et leurs sels pourraient être stables sous plusieurs formes solides. La présente invention inclut toutes les formes solides des composés selon l'invention ce qui inclut les formes amorphes, polymorphes, mono- et poly-cristallines. Les composés selon l'invention peuvent exister sous forme libre ou sous forme solvatée, par exemple avec des solvants pharmaceutiquement acceptables tels que l'eau (hydrates) ou l'éthanol.

10 Les composés selon l'invention marqués par un ou des isotopes sont également inclus dans l'invention : ces composés sont structurellement identiques mais diffèrent par le fait qu'au moins un atome de la molécule est remplacé par un isotope (radioactif ou non). Des exemples d'isotopes pouvant être inclus dans la structure des composés selon l'invention peuvent être choisis parmi l'hydrogène, 15 le carbone, l'azote, l'oxygène, le soufre tels que 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 180 170, 35S respectivement. Les isotopes radioactifs 3H et 14C sont particulièrement préférés car faciles à préparer et à détecter dans le cadre d'études de biodisponibilité in vivo des substances. Les isotopes lourds (tels que 2H) sont particulièrement préférés car ils sont utilisés comme standards internes dans des études 20 analytiques.

La présente invention a aussi pour objet les composés tels que décrits ci-avant, à titre de médicaments. La présente invention a également pour objet une composition 25 pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique. Il s'agit avantageusement d'une composition pharmaceutique ou médicament pour le traitement de pathologies ou désordres caractérisés par une surcharge en fer. 30 La surcharge en fer peut être limitée à un ou plusieurs types cellulaires ou tissulaires ou à un organe particulier ou, au contraire, peut être généralisée (plusieurs ou tous les tissus de l'organisme), telle que dans le cas de maladies génétiques, comme l'hémochromatose, l'anémie falciforme, ou la béta-5 thalassémie. La surcharge en fer (surcharge martiale) est soit symptômatique soit consécutive à un traitement, comme les transfusions régulières, souvent nécessaires pour les patients souffrant d'anémie falciforme ou de bétathalassémie. Ces surcharges en fer ont de graves conséquences et peuvent conduire à une issue fatale pour les patients non traités (destruction progressive d'organes essentiels). Le fer se dépose dans l'hypophyse (ce qui peut entraîner un dérèglement général, une fatigue physique ou psychique, une perte de libido, l'impuissance, la dépression, mais aussi l'ostéoporose et une ménopause précoce chez la femme), le coeur (ce qui peut entraîner des myocardiopathies, ou une tachycardie), le foie (ce qui peut entraîner une fibrose, cirrhose, ou cancer), le pancréas (ce qui peut entraîner une destruction progressive du nombre de cellules produisant l'insuline résultant en diabète), et les articulations (ce qui peut entraîner des douleurs articulaires, arthrites, rhumatismes). Le foie, organe clé dans la régulation de l'homéostasie du fer (synthèse d'hepcidine, stockage du fer) est tout particulièrement affecté par les surcharges en fer (ce qui peut entraîner une cirrhose ou un cancer du foie). Ainsi, les composés selon l'invention peuvent être utilisés pour traiter l'une des pathologies ou l'un des désordres indiqués ci-dessus dont l'une des causes serait une surcharge en fer. La surcharge en fer peut donc aussi être limitée à un organe, tel que le coeur, les poumons, le foie, le pancréas, le cerveau ou les reins. Ainsi, ces surcharges localisées peuvent aboutir à des désordres neurologiques ou neurodégénératifs, tels que la maladie d'Alzheimer, de Parkinson, de Huntington, des neuroferritinopathies, la sclérose latérale amyotrophique ou la sclérose en plaques. Ainsi, les composés selon l'invention peuvent être utilisés pour traiter l'une des pathologies indiquées ci-dessus. La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique ou médicament pour le traitement de pathologies néoplasiques ou de cancers. Les pathologies néoplasiques qui sont causées par une hyperprolifération cellulaire peuvent être bénignes ou malignes. Elles peuvent toucher un grand nombre de tissus, comme le cerveau, les poumons, l'oesophage, le nez, la bouche, la peau, l'estomac, le pancréas, le foie, les ovaires, la vessie, l'utérus, les testicules, le colon, les os, le système immunitaire et le système endocrinien.

L'invention a pour objet une composition pharmaceutique ou médicament pour le traitement de tumeurs ou de cancers, en particulier: cancer du sein, cancer du poumon, cancer de l'intestin grêle, cancer du colon et du rectum, cancer des voies respiratoires, de l'oropharynx et de l'hypopharynx, cancer de l'oesophage, cancer du foie, cancer de l'estomac, cancer des canaux biliaires, cancer de la vésicule biliaire, cancer du pancréas, cancers des voies urinaires y compris rein, urothélium et vessie, cancers du tractus génital féminin y compris le cancer de l'utérus, du col de l'utérus, des ovaires, chloriocarcinome et trophoblastome; cancers du tractus génital masculin y compris cancer de la prostate, des vésicules séminales, des testicules, tumeurs des cellules germinales; cancers des glandes endocrines y compris cancer de la thyroïde, de l'hypophyse, des glandes surrénales ; cancers de la peau y compris hémangiomes, mélanomes, sarcomes, incluant le sarcome de Kaposi ; tumeurs du cerveau, des nerfs, des yeux, des méninges, incluant astrocytomes, gliomes, glioblastomes, rétinoblastomes, neurinomes, neuroblastomes, schwannomes, méningiomes ; tumeurs malignes hématopoïétiques ; leucémies telles que leucémie aigüe lymphoïde, leucémie aigüe myéloïde, leucémie myéloïde chronique, leucémie lymphoïde chronique, chloromes, plasmocytomes, leucémies des cellules T ou B, lymphomes non hodgkiniens ou hodgkiniens, myélomes, ou hémopathies malignes diverses.

L'invention réside également dans une méthode de traitement de pathologies ou de désordres tels que décrits ci-dessus de sujets atteints de tels pathologies ou désordres, comprenant l'administration à ces sujets d'une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins un composé de formule (I).

Le terme traitement (ou traiter ) désigne le traitement curatif, symptomatique ou préventif. Les composés de la présente invention peuvent ainsi être utilisés chez des sujets (comme les mammifères, en particulier humains) atteints d'une maladie déclarée. Les composés de la présente invention peuvent aussi être utilisés pour retarder ou ralentir la progression ou prévenir une progression plus en avant de la maladie, améliorant ainsi la condition des sujets. Les composés de la présente invention peuvent enfin être administrés aux sujets non malades, mais qui pourraient développer normalement la maladie ou qui ont un risque important de développer la maladie.

Les compositions pharmaceutiques selon l'invention comprennent avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules, acceptables sur le plan pharmaceutique. On peut citer par exemple des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations (liquides et/ou injectables et/ou solides) sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des huiles végétales, l'acacia, les liposomes, les micelles, etc. Les compositions peuvent être formulées sous forme de suspensions injectables, gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, aérosols, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.

Les composés ou compositions selon l'invention peuvent être administrés de différentes manières et sous différentes formes. Ainsi, ils peuvent être par exemple administrés de manière systémique, par voie orale, parentérale, par inhalation ou par injection, comme par exemple par voie intraveineuse, infra- musculaire, sous-cutanée, trans-dermique, intra-artérielle, etc. Pour les injections, les composés sont généralement conditionnés sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple.

Il est entendu que le débit et/ou la dose injectée peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie, du mode d'administration, etc. Typiquement, les composés sont administrés à des doses (pour un sujet d'approximativement 70 kg) pouvant varier entre 50 mg et 10 g par administration, préférentiellement de 50 mg à 1 g par administration. Les administrations peuvent être quotidiennes ou répétées plusieurs fois par jour. D'autre part, les compositions selon l'invention peuvent comprendre, en outre, d'autres agents ou principes actifs. L'invention a également pour objet des procédés de préparation des composés selon l'invention.

Les composés de l'invention peuvent être préparés à partir de produits du 10 commerce, en mettant en oeuvre une combinaison de réactions chimiques connues de l'homme du métier. Les procédés selon l'invention présentent l'avantage d'être simple à mettre en oeuvre et peuvent correspondre à un nombre limité d'étapes réactionnelles (par exemple, un maximum de 4 à 5 étapes).

15 La présente invention a ainsi pour objet un procédé de préparation des composés selon l'invention comprenant les étapes suivantes : (i) une étape de condensation entre un 2-hydroxybenzonitrile, éventuellement fonctionnalisé sur le cycle phényle, et la cystéine, (ii) une étape de couplage de deux composés obtenus à l'étape (i) avec 20 une diamine symétrique, éventuellement suivie d'une étape de purification, en particulier par chromatographie, (iii) une étape d'oxydation des cycles thiazoline du produit obtenu en (ii) en thiazoles, de préférence suivie d'une étape de purification, en particulier par chromatographie, 25 (iv) éventuellement, une réaction de thionation du produit obtenu en (iii) pour tranformer le produit de formule (I) avec X=0 en un produit correspondant de formule (I) avec X=S, de préférence suivie d'une étape de purification, en particulier par chromatographique, (v) éventuellement après l'étape (iii) ou (iv), saponification de l'ester pour 30 obtenir le carboxylate correspondant.5 - Selon un mode particulier de l'invention, le procédé comprenant les étapes (i) et (ii) telles que décrites ci-avant permet d'obtenir des composés de type thiazoline de formule (II) suivante : (II) dans laquelle : R1-R8, X, A, n et m sont tels que définis précédemment. De préférence, dans le cadre de l'obtention de composés de formule (II), 10 l'étape (ii) du procédé est suivie d'une étape de purification, en particulier par chromatographie. La présente invention a donc également pour objet les composés de formule (II), éventuellement utilisés à titre d'intermédiaires de synthèse de composés de formule (I). 15 Une description détaillée des procédés de préparation des composés spécifiques identifiés ci-dessus est donnée dans les exemples.

DESCRIPTION DES FIGURES 20 Fiqure 1 : cytotoxicité du composé BHPTC-O Fiqure 2 : effet cytoprotecteur du composé BHPTC-O Fiqure 3 : effet du composé BHPTC-O sur la viabilité cellulaire Figure 4 : effet du composé BHPTC-O sur la réplication de l'ADN Fiqure 5 : comparaison de l'effet cytotoxique du BHPTC-O et du BHPTCûS 25 Fiqure 6 : comparaison de l'effet cytotoxique du BHPTC-O et du BHPTCûS Fiqure 7 : comparaison de l'effet du BHPTC-O et du BHPTC-S sur la viabilité cellulaire Fiqure 8 : comparaison de l'effet du BHPTC-O et du BHPTC-S sur la réplication de l'ADN5 D'autres avantages et aspects de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.

EXEMPLES Les pourcentages mentionnés sont exprimés en poids, sauf mention contraire. Abbréviations utilisées : DBU : 1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ène.

DMSO : Diméthylsulfoxyde. EDCI : N-(3-diméthylaminopropyl)-N'-éthylcarbodiimide. NTA : Acide nitriloacétique LDH : Lactate deshydrogénase RMN : Résonance Magnétique Nucléaire.

Matériels et Méthodes pour la partie chimie : Toutes les expériences sont réalisées sous atmosphère d'argon. Les solvants utilisés anhydres ne sont pas distillés mais achetés directement sous leur forme anhydre commerciale. Sauf mention particulière, les solvants sont utilisés sous leur forme commerciale avec un taux de pureté supérieur à 99%. Le contrôle des réactions est effectué à l'aide de plaques de gel de silice Merck 60F254 déposé sur feuilles d'aluminium. Les plaques sont révélées à l'aide d'une lampe UV (X = 254 nm ou = 365 nm) et d'un réactif à base de KMnO4. Les BHPTC, quant à eux, sont révélés par une solution hydrométhanolique à 5% de FeCI3. Les purifications sur colonnes chromatographiques ont été réalisées sur de la silice Merck Kiesel gel 60 (0,063 - 0 , 200 mm). Les spectres RMN ont été enregistrés sur un spectromètre de type Bruker Avance 300 (300 MHz pour 1H et 75 MHz pour 13C). La calibration des spectres RMN s'effectue à partir du pic résiduel du solvant non deutéré. Les multiplicités des signaux sont exprimées de la façon suivante : s (singulet), d (doublet), t (triplet), q (quadruplet), p (pentuplet) et m (multiplet). Une multiplicité suivie de la lettre I indique que le signal est élargi et une multiplicité précédée de la lettre d signifie que le signal est dédoublé. Les expériences de spéctrométrie de 18 2922210

masse de routine et à haute résolution ont été réalisées par électronébulisation grâce à un spectromètre MicroToF Bruker. EXEMPLE 1. Synthèse du composé BHPTC-O Méthode: Acide 2-(2-hydroxy-5-methoxycarbonyl-phenyl)-4,5-dihydro- 5 thiazole-4-carboxylique. Une solution de 3-cyano-4-hydroxy-methylbenzoate (1000 mg, 5,65 mmoles) et de L-cystéine (1589 mg, 13,11 mmoles, 2,32 équivalents) dans un mélange de méthanol (32 mL) et de tampon phosphate (pH 6,4 ; 0,1N, 20 mL) est chauffée à 60°C pendant 16 h. Le mélange est ramené à température ambiante pour être 10 évaporé sous pression réduite. Le résidu spongieux ainsi obtenu est dissout dans l'eau (100 mL) avant lavage par un mélange 2:1 de cyclohexane et de diéthylether (75 mL). La phase aqueuse est ensuite ajustée à un pH entre 2,0-3,0 par addition d'acide citrique solide. La suspension obtenue est ensuite extraite par CH2Cl2 (3 x 75 mL) puis les phases organiques sont rassemblées pour être séchées sur 15 Na2SO4, filtrées puis évaporées sous pression réduite. La thazoline recherchée (1434 mg ; 5,10 mmole, rendement : 90 %) est ainsi isolée à l'état d'une poudre cristalline jaune, utilisée sans autre purification pour la suite de la synthèse.

Formule Brute : C12H11NO5S. Masse molaire : 281,28 g.mole-1. Point de fusion : 20 184-186°C. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 3,64-3,81 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 5,51 (dd, J = 7,5; 9,6 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,98-8,02 (m, 2H). 13C-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 33,72; 52,07; 76,10; 115,46; 117,48; 120,58; 131,69; 134,26; 162,16; 165,08; 170,99; 171,98. 25 BHPTC-O. Une solution de 2,2'-(éthylènedioxy)bis-(éthylamine) (134 mg, 0,93 mmole) dans le CH2Cl2 (20 mL) est ajoutée goutte-à-goutte à température ambiante (25-27°C) à une solution d'acide 2-(2-hydroxy-5-méthoxycarbonylphényl)-4,5-dihydro-thiazole-4-carboxylique (565 mg ; 2,01 mmoles ; 2,16 30 équivalents) et de EDCI (463 mg, 2,41 mmoles, 2,59 équivalents) dans le CH2Cl2 (30 mL). La solution est agitée pendant 16 h à 25°C avant d'être lavée par une solution de HCI 0,5N (50 mL). La phase organique est lavée à l'eau (50 mL) avant d'être séchée sur Na2SO4, filtrée avant que les solvants soient éliminés sous pression reduite. La dithiazoline ainsi obtenue est dissoute dans du CH2Cl2 (50 mL) puis de la DBU (546 pL, 555 mg, 3,65 mmoles, 3,96 équivalents) et du CBrCI3 (315 pL, 634 mg, 3,20 mmoles, 3,50 équivalents) sont ajoutés successivement. La solution obtenue est agitée 14 h sous argon à 24°C. Le milieu réactionnel est adsorbé sur de la silice démétallée avant d'être chromatographié sur une colonne de silice démétallée (30 g de SiO2, éluant de charge : CH2Cl2, éluant de migration : CH2Cl2/EtOH : 95/5). Le solide jaune pale obtenu après évaporation des solvants est lavé avec de l'éthanol bouillant avant d'être filtré puis séché sous pression réduite. Le BHPTC-O (444 mg, 0.66 mmole, rendement : 71% sur les deux étapes) est isolé à l'état de poudre blanche.

Formule Brute : C30H30N4O10S2. Masse molaire : 670,71 g.mole-l. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 3,38-3,61 (m, 12H), 3,83 (s, 6H), 7,12 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,90 (dd, J= 2,3 ; 8,6 Hz, 2H), 8,28 (s, 2H), 8,51 (t, J= 5,7 Hz, 2H), 8,88 (d, J= 2,3 Hz, 2H), 12,07 (si, 2H). 13C-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 38,35 (2C), 51,95 (2C), 68,99 (2C), 69,61 (2C), 116,61 (2C), 119,25 (2C), 121,00 (2C), 124,56 (2C), 129,54 (2C), 131,95 (2C), 149,00 (2C), 158,97 (2C), 160,75 (2C), 161,50 (2C), 165,80 (2C).

Spectrométrie de masse (Electronébulisation) : m/z 671 (M+H+), 693 (M+Na+), 709 (M+K+). Spectrométrie de masse haute résolution (Electronébulisation) : m/z trouvé : 671,1359 (M+H+), m/z calculé pour C30H31 N4O10S2 : 671,1476.

Le composé BHPTC-O identifié ci-dessus est ainsi préparé selon le schéma réactionnel suivant en utilisant le 3-cyano-4-hydroxy-methylbenzoate comme produit de départ (dont la synthèse est décrite dans la référence : optimization of alkylidene hydrazide based human glucagon receptor antagonists. discovery of the highly potent and orally available 3-cyano-4-hydroxybenzoic acid [1-(2,3,5,6-tetramethylbenzyl)-1 H-indol-4-ylmethylene]hydrazide. Madsen, P.; Ling, A.; Plewe, M.; Sams, C.K.; Knudsen, L.B.; Sidelmann, U.G.; Ynddal, L.; Brand, Cl.; Andersen, B.; Murphy, D.; Teng, M.; Truesdale, L.; Kiel, D.; May, J.; Kuki, A.; Shi, S.; Johnson, M.D.; Teston, K.A.; Feng, J.; Lakis, J.; Anderes, K.; Gregor, V.; Lau, J. J. Med. Chem. 2002, 45, 5755-5775) : Fi,J!vCai

h9 ti9eCettàiriFira pheBre ats, 60"C me, N Oh HCO Emden-ben: :. 111f, Wu-les d'eu ètap % Schéma 1 EXEMPLE 2. Synthèse des composés BHPTC- S et BHPTC-OOH Méthode: BHPTC-S. Le BHPTC-O (350 mg, 0,52 mmole) et le réactif de Lawesson (422 mg, 1,04 mmole, 2,00 équivalents) sont dissouts dans du toluène anhydre (20 mL) et la suspension obtenue est chauffée à reflux (110°C) durant 2 h. Le mélange est ramené à température ambiante puis le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu huileux est ensuite dissout dans du CH2Cl2 (50 mL) avant des lavages successifs à l'eau (30 mL), avec une solution aqueuse saturée en NaHCO3 (30 C*t_,C:1,1. 2&''C MU. C8[t% C:I' 2 Iä 24'C - 21 mL) puis de saumure (30 mL). La phase organique est ensuite séchée sur Na2SO4, filtrée puis le solvant est éliminé sous pression reduite. Après purification par chromatographie sur une colonne de silice démétallée (30 g de SiO2, MeOH/CH2Cl2 : 1/99), le BHPTC-S (351 mg, 0,50 mmole, rendement : 96%) est isolé sous la forme d'une fine poudre jaune vif.

Formule brute : C30H30N4O8S4. Masse molaire : 702,84 g.mole-1. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 3,68-3,97 (m, 12H), 3,83 (s, 6H), 7,12 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,90 (dd, J = 2,2, 8,6 Hz, 2H), 8,45 (s, 2H), 8,90 (d, J = 2,2 Hz, 2H), 10,36 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 12,10 (si, 2H). 13C-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 44,57 (2C), 51,95 (2C), 67,30 (2C), 69,69 (2C), 116,55 (2C), 119,23 (2C), 121,03 (2C), 127,16 (2C), 129,55 (2C), 132,31 (2C), 152,68 (2C), 159,11 (2C), 161,14 (2C), 165,78 (2C), 186,14 (2C). Spectrométrie de masse (Electronébulisation) : m/z 703 (M+H+), 725 (M+Na+), 741 (M+K+). Spectrométrie de masse haute résolution (Electronébulisation) : m/z trouvé : 703.1013 (M+H+), m/z calculé pour C30H31N408S4 : 703.1019.

BHPTC-OOH. Le BHPTC-O (257 mg, 0,38 mmole) est suspendu dans un mélange de THF (30 mL) et d'une solution aqueuse de NaOH 1 N (30 mL). Le mélange est chauffé à 70°C durant 4 h. Le mélange est ramené à température ambiante avant d'être dilué avec de l'eau (50 mL) et de l'éther diéthylique (100 mL). Après une agitation vigoureuse, les deux phases sont séparées. Le pH de la phase aqueuse est ajusté à pH = 1 par addition de HCI 1 N. Le précipité qui se forme est récupéré par filtration, rinçé à l'eau glacée avant d'être séché sous pression réduite. Le BHPTC-OOH (160 mg, 0,25 mmole, rendement : 65%) est isolé sous la forme d'une fine poudre blanche.

Formule brute : C28H26N4O10S2. Masse molaire : 642,66 g.mole-1. 1H-RMN (300 MHz,DMSO-d6) 8 ppm = 3,45-3,60 (m, 12H), 7,12 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,90 (dd, J = 2,1, 8,4 Hz, 2H), 8,28 (s, 2H), 8,52 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 8,88 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 11,97 (si, 2H), 12,81 (si, 2H). 2922210 13C-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 38,20 (2C), 68,65 (2C), 69,26 (2C), 116,07 (2C), 118,97 (2C), 122,02 (2C), 124,37 (2C), 129,67 (2C), 132,32 (2C), 148,89 (2C), 158,58 (2C), 160,66 (2C), 161,66 (2C), 166,82 (2C). Spectrométrie de masse (Electronébulisation) : m/z 643 (M+H+), 665 (M+Na+), 681 5 (M+K+).

Les composés BHPTC-S et BHPTC-OOH identifiés ci-dessus sont ainsi préparés selon le schéma réactionnel suivant : ocH3 S Hico Rèâcfif d:-?: La',seessm T&u.4.ne f1hydre, O'C NCn ,THF, 7CrC BliPTC-00H () o c, om o Schéma 2 EXEMPLE 3. Synthèse des composés BHPTC-OX et BHPTC-SU Méthode: , BHPTC-OX. Une solution de 2,2'-(éthylènedioxy)bis-(éthylamine) (916 mg, 6,18 mmoles) dans le CH2Cl2 (10 mL) est ajouté goutte-à-goutte à température ambiante (25-27°C) à une solution d'acide 2-(2-hydroxyphényl)-4,5-dihydrothiazole-4-carboxylique (2755 mg, 12,36 mmoles, 2,00 équivalents) et de EDCI (2841 mg, 14,82 mmoles, 2,20 équivalents) dans le CH2Cl2 (100 mL). La solution est agitée pendant 16 h à 25°C avant d'être lavée par une solution de HCI 0.5N (100 mL). La phase organique est lavée à l'eau (100 mL) avant d'être séchée sur Na2SO4, filtrée avant que les solvants soient éliminés sous pression reduite. La dithiazoline ainsi obtenue est dissoute dans du CH2Cl2 (100 mL) puis de la DBU (2,68 mL, 2730 mg, 17,93 mmoles ; 4,00 équivalents) et du CBrCI3 (1, 55 mL, 3112 mg, 15,69 mmoles, 3,50 équivalents) sont ajoutés successivement. La solution obtenue est agitée 6 h sous argon à 20°C. Le milieu réactionnel est adsorbé sur de la silice démétallée avant d'être chromatographié sur une colonne de silice démétallée (40 g de SiO2, éluant de charge : CH2Cl2, éluant de migration : CH2Cl2/EtOH : 97/3). Le solide jaune pale obtenu après évaporation des solvants est recristallisé dans un mélange cyclohexane/ CH2Cl2. Le BHPTC-OX (1841 mg, 3,32 mmoles, rendement : 54% sur deux étapes) est isolé à l'état de poudre cristalline blanche.

Formule brute : C26H26N4O6S2. Masse molaire : 554,63 g.mole-1. Point de fusion : 165-167°C. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 3,36-3,60 (m, 12H), 6,96 (m, 2H), 7,03 (dd, J = 8,1, 0,6 Hz, 2H), 7,32 (ddd, J = 9,0, 7,2, 1,8 Hz, 2H), 8,23 (s, 2H), 8,31 (dd, J = BHPTC-SU. Le BHPT-OX (150 mg, 0,27 mmole) et le réactif de Lawesson (219 mg, 0,54 mmole, 2,00 équivalents) sont dissouts dans du toluène anhydre (10 mL) et la suspension obtenue est chauffée à reflux (110°C) durant 2 h 30 mn. Le mélange est ramené à température ambiante puis le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu huileux est ensuite chromatographié sur une colonne 7,8 ; 1,5 Hz, 2H), 8,54 (tl, J = 6,0 Hz, 2H). 13C-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 38,00 (2C), 68,89 (2C), 69,48 (2C), 116,37 (2C), 118,97 (2C), 119,31 (2C), 123,77 (2C), 127,83 (2C), 131,29 (2C), 148,60 (2C), 154,98 (2C), 160,70 (2C), 162,70 (2C). de silice démétallée (30 g de SiO2, MeOH/CH2Cl2 : 0,5/99,5 puis 1/99) le BHPTCS (81 mg, 0,14 mmole, rendement : 51%) est isolé sous la forme d'une fine poudre jaune.

Formule brute : C26H25N4O4S4. Masse molaire : 585,77 g.mole-1. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 3,62 (s, 4H), 3,75 (t, J = 5,7 Hz, 4H), 3,95 (q, J = 5,8 Hz, 4H), 6,97 (m, 2H), 7,03 (dd, J = 8,2, 0,7 Hz, 2H), 7,33 (ddd, J = 7,3, 5,7, 1,7 Hz, 2H), 8,38 (dd, J = 8,0, 1,7 Hz, 2H), 8, 42 (s, 2H), 10,42 (tl, J = 5,7 Hz, 2H), 11,13 (si, 2H). 13C-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 44,45 (2C), 67,29 (2C), 69,63 (2C), 116,37 (2C), 119,09 (2C), 119,40 (2C), 126,61 (2C), 127,98 (2C), 131,45 (2C), 152,39 (2C), 155,20 (2C), 162,27 (2C), 186,20 (2C). Spectrométrie de masse (Electronébulisation) : m/z 585 (M-).

Les composés BHPTC-OX et BHPTC-SU identifiés ci-dessus sont donc préparés selon le schéma réactionnel suivant à partir de l'acide 2-(2-hydroxyphényl)-4,5-dihydro-thiazole-4-carboxylique dont la synthèse a été décrite antérieurement dans la littérature (An improved stereocontrolled synthesis of pyochelin, a siderophore of Pseudomonas aeruginosa and Burkholderia cepacia. Zamri, A.; Abdallah, M.A. Tetrahedron 2000, 56, 249-256) : Schéma 3 EXEMPLE 4. Synthèse du composé BHPTC-SOH BHPTC-SOH. Le BHPTC-S (63 mg, 89 pmoles) est suspendu dans un mélange de dioxanne (5 mL) et d'une solution aqueuse de KOH IN (5 mL). Le mélange est chauffé à 60°C durant 2 h. Le mélange est ramené à température ambiante avant d'être dilué avec de l'eau (50 mL) et du CH2Cl2 (30 mL). Après une agitation vigoureuse, les deux phases sont séparées. Le pH de la phase aqueuse est ajusté à pH = 1 par addition de HCI 1 N. Le précipité qui se forme est récupéré par filtration, rinçé à l'eau glacée avant d'être séché sous pression réduite. Le BHPTC- H OH :H i `L NH2. EDC CH2CL 25'C o H0 o B PTC-OX 0 o N -ai: Ho BIIPTCSU o s - NH Rèact:f de LveessQ1 Tluèn an:hydre;. 110 0 rendemeM: : 54% ,sur les 2 étape:0 rendement : $1 % SOH (35 mg, 52 pmoles, rendement : 59%) est isolé sous la forme d'une fine poudre jaune pale.

Formule brute : C28H26N4O8S4. Masse molaire : 674,79 g.mole1. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 3,66 (s, 4H), 3,73 (t, J = 5,7 Hz, 4H), 3,94 (q, J = 5,8 Hz, 4H), 7,12 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,91 (dd, J = 2,1, 8, 7 Hz, 2H), 8,45 (s, 2H), 8,91 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 10,38 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 12,06 (si, 2H), 12,77 (si, 2H ). 13C-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 ppm = 44,44 (2C), 67,23 (2C), 69,68 (2C), 116,34 (2C), 118,98 (2C), 122,03 (2C), 127,00 (2C), 129,72 (2C), 132,43 (2C), 152,61 (2C), 158,86 (2C), 161,33 (2C), 166,87 (2C), 186,12 (2C). EXEMPLE 5. Capacité des BHPTC à complexer l'ion fer(lll) 15 exemple du BHPTC-O Etude effectuée par spectrométrie de masse sur un appareil microTOF LC de Bruker Daltonics. Spectrométrie de masse haute résolution du BHPTC-O (Electronébulisation) : m/z trouvé : 671,1359 (M+H+), m/z calculé pour C30H31 N4O10S2 : 671,1476. 20 Spectrométrie de masse du BHPTC-O en complexe avec Fe(lll) (Electronébulisation) : m/z trouvé : 724,0595 (M-2H++Fe3+), m/z calculé pour C30H28N4O10S2Fe : 724,0591 25 La stoechiométrie du composé de formule (I) avec Fe(III) est de 1 : 1. EXEMPLE 6. Activités biologiques des composés selon l'invention A ù CONDITIONS EXPERIMENTALES - solution mère de chélateur : 10 mM dans le DMSO.

Spectrométrie de masse (Electronébulisation) : m/z 673 (M-). 30 - modèle cellulaire : lignée d'hépatomes humains HepaRG en phase proliférative exposées pendant 48 h aux chélateurs ou au fer. Les cellules de la lignée HepaRG (demande de brevet FR20010009044 déposée le 06 07 2001 par l'INSERM) isolées à partir d'un carcinome hépato-cellulaire, présentent la particularité, de pouvoir se différencier dans des conditions de culture contrôlées. L'évolution des cultures de cellules HepaRG passe par une phase proliférative qui se prolonge après la confluence par une phase de différenciation. Deux types cellulaires peuvent être alors identifiés, l'un hépatocytaire exprimant des fonctions spécifiques du foie adulte (synthèse d'albumine, d'aldolase B, de transferrine, fonctions de détoxification) et l'autre épithélioïde biliaire.

1 - Conditions de culture et de traitement des cellules Les cellules HepaRG sont cultivées en atmosphère humide à 37°C, enrichie par 5% de 002, dans du milieu E de Williams supplémenté par 10% de sérum de veau foetal, de pénicilline-streptomycine (50pg/mL), de glutamine (2x10-3M), d'insuline bovine (5pg/mL) et d'hémisuccinate d'hydrocortisone (5x10-5M). Les cellules sont utilisées en phase proliférative et exposées pendant 48h aux chélateurs ou au fer.

2 - Evaluation de la cytotoxicité a. Evaluation de la viabilité cellulaire par le test MTT Le test MTT est utilisé pour étudier la prolifération cellulaire ; il dénombre le nombre de cellules viables après traitement. Il est basé sur la réduction du MTT jaune (tétrazolium bromure 3-(4,5-diméthylthiazol-2y1)-2,5-diphényltétrazolium) en cristaux bleus de formazan par une enzyme mitochondriale, la succinate déshydrogénase. Les cristaux de formazan formés sont solubilisés par le diméthylsulfoxyde et leur détection est réalisée par spectrophotométrie à une longueur d'onde de 535 nm. Les résultats sont exprimés en pourcentage de formazan formé dans les cultures traitées par rapport aux cultures témoins. b. Evaluation de la toxicité par dosage de l'activité lactate-deshydrogénase La lactate deshydrogénase (LDH) est une enzyme cytoplasmique, libérée dans le milieu de culture en cas d'altération membranaire. Son dosage colorimétrique a été effectué au niveau intra- et extra-cellulaire, grâce au kit Cytotoxicity detection kit (LDH) (Roche, Mannheim, Germany). Les dosages extra et intra-cellulaires de la LDH s'effectuent respectivement sur un volume de 20 pL de milieu de culture ou 20 pL de lysat cellulaire obtenu par sonication des cellules dans du tampon phosphate salin. Une gamme étalon est réalisée à partir d'une solution LDH de référence (Sigma) diluée, dans le milieu de culture sans sérum pour le dosage de LDH extra-cellulaire, et dans le tampon phosphate salin pour le dosage de LDH intra-cellulaire. La teneur en protéines totales des cultures est mesurée par la technique de Bradford. Les résultats sont exprimés en mUl de LDH par pg de protéines. 3 - Evaluation de la réplication de l'ADN par mesure de l'incorporation de thymidine La mesure de l'incorporation de thymidine tritiée (3H méthyl-thymidine, 25 Ci/mmole) dans l'ADN permet de mesurer sa réplication et donc de quantifier un éventuel effet antiprolifératif. Après 24h d'incubation en présence de 0,5 pCi/mL de thymidine tritiée, les cellules sont lavées deux fois par du tampon phosphate salin et lysées par sonication. 200 pL du lysat cellulaire sont déposés dans une fiole de comptage et auxquels on ajoute 2,5 mL de liquide scintillant. La radioactivité est mesurée dans un compteur à scintillation liquide. La radioactivité incorporée dans l'ADN est exprimée en cpm/pg protéine. Les résultats expérimentaux sont exprimés en pourcentage par rapport aux cultures témoins.

B û RESULTATS Figure 1 : cytotoxicité du chélateur Le BHPTC-O aux concentrations de 20 et 50 pM augmente le taux extracellulaire de LDH (140 et 239% respectivement par rapport au témoin fixé à 100%) et diminue le taux intracellulaire de LDH (90 et 83% par rapport au témoin fixé à 100%).

Donc, une cytotoxicité dose-dépendante est détectée mais elle n'est pas majeure car la baisse du taux intracellulaire ne dépasse pas 17%.

Figure 2 : effet cytoprotecteur du chélateur L'exposition des cultures à 50 pM de Fe-NTA pendant 48h augmente le taux extracellulaire de LDH qui passe de 0.3 mU/pg protéine à 5.8 mU/pg protéine ; parallèlement, le taux intracellulaire de LDH passe de 19 mU/pg prot. à 0.1 mU/pg prot. Donc forte cytotoxicité du Fe-NTA dans le modèle. L'addition de 50 pM de BHPTC-O en même temps que le chélateur dimininue de manière hautement significative la toxicité du fer dans la mesure où les concentrations extra et intracellullaires de LDH sont très proches des valeurs mesurées dans les cultures témoins.

Figure 3 : effet du chélateur sur la viabilité cellulaire Le BHPTC-O à la concentration de 20 pM n'a pas d'effet significatif sur la viabilité cellulaire évaluée par la mesure de l'activité succinate déshydrogénase mitochondriale. A la concentration de 50 pM, une diminution de la viabilité cellulaire est observée (40% du témoin fixé à 100%). Donc, on observe une nette diminution de la viabilité cellulaire.

Figure 4 : effet du chélateur sur la réplication de l'ADN Le BHPTC-O aux concentrations de 20 et 50 pM diminue la réplication de l'ADN (respectivement 66 et 27% par rapport au témoin fixé à 100%). On observe donc 20 un net effet antiprolifératif pouvant atteindre 73%.

Figures 5 et 6: comparaison de l'effet cytotoxique du BHPTC-O et du BHPTC-S A la concentration 20 pM, la cytotoxicité du BHPTC-O est faible et très proche de 25 celle du BHPTC-S (faible augmentation de LDH extracellulaire/témoin et faible diminution de LDH intracellulaire/témoin). A la concentration de 50 pM, la cytotoxicité du BHPTC-S est très nettement supérieure à celle du BHPTC-O [ LDH extracellulaire : 239 et 572% pour le BHPT-O et le BHPT-S ; LDH intracellulaire : 83 et 26% pour le BHPTC-O et le BHPTC-S]. 30 On observe donc une forte cytotoxicité du BHPTC-S à 50 pM comparé au BHPTCO.

Figure 7 : comparaison de l'effet du BHPTC-O et du BHPTC-S sur la viabilité cellulaire A la concentration 20 pM, l'effet du BHPTC-O sur la viabilité cellulaire n'est pas significatif ; le BHPTC-S a un effet (78% par rapport au témoin 100%). A la concentration de 50 pM, l'effet des deux chélateurs est significatif avec une plus grande efficacité du BHPTC-S (40 et 20% par rapport au témoin 100%).

Figure 8: comparaison de l'effet du BHPTC-O et du BHPTC-S sur la réplication de l'ADN En présence de 20 pM de BHPTC-O et de BHPTC-S, on note une diminution de la réplication de l'ADN en faveur du BHPTC-S (66 et 38% respectivement/témoin 100%). A 50 pM, une plus grande efficacité des chélateurs est observée sans aucune différence entre les deux.

C - CONCLUSIONS Ces exemples mettent donc en évidence pour les composés selon l'invention les propriétés suivantes : - une cytotoxicité modérée pour les deux chélateurs jusqu'à 20 pM et pas trop élevée à 50 pM pour le BHPTC-O, - un effet cytoprotecteur net, - une diminution de la viabilité cellulaire, dès 20 pM pour le BHPTC-S, - une diminution de la réplication de l'ADN, dès 20 pM pour les deux chélateurs en faveur du BHPTC-S.

Finalement, le BHPTC-S semble avoir un effet cytostatique plus fort que le BHPTC-O associé à une plus grande cytotoxicité. Cependant, l'effet cytostatique des deux chélateurs est significatif dans la zone de concentration 20 pM.

Claims (22)

REVENDICATIONS

1. Composés de formule générale (I) : R1 dans laquelle : R1, R3, R5 et R7, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, 10 d'halogène, un groupe COOH, SO3H, NO2, CN, un groupe R, OR, COOR, CONH2, CONHR, CONRR', où R et R', identiques ou différents, représentent un radical (C1-C16)alkyle, (C2-C16)alkényle, (C2-C16)alkynyle, (C6-C14)aryl, ou hétéroaryle; R2, R4, R6 et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, 15 d'halogène, un groupe hydroxy, NH2, NHR, NRR', NH-COR, R, OR, où R et R', identiques ou différents, sont tels que définis ci-dessus ; X représente un atome d'oxygène ou un atome de soufre; A représente un atome d'oxygène ou un groupe NH; m et n, identiques ou différents, représentent 1, 2 ou 3 ; leurs stéréoisomères (diastéréoisomères, énantiomères), purs ou en mélange, mélanges racémiques, isomères géométriques, tautomères, sels, hydrates, solvates, ainsi que leurs mélanges.

2. Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce que n est 1 ou 2, de préférence 1.

3. Composés selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que m est 1 ou 2, de préférence 1.

4. Composés selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que R1, R3, R5 et R7 sont identiques au moins deux à deux, en particulier R1 est identique à R5 et/ou R3 identique à R7.

5. Composés selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que R2, R4, R6 et R8 sont identiques au moins deux à deux, en particulier R2 est identique à R6 et/ou R4 identique à R8.

6. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisés en ce que A est un atome d'oxygène.

7. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisés en ce que R1 et R5, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, 15 d'halogène, un groupe R, où R représente un radical (C1-C16)alkyle, de préférence R est un radical (C1-C3)alkyle.

8. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisés en ce que R2 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, NH2, 20 NHR, NRR' ou NHCOR, où R et R', identiques ou différents, représentent un radical (C1-C16)alkyle, de préférence R et R', identiques ou différents, représentent un radical (C1-C3)alkyle.

9. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisés en ce 25 que R4 et R8, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, d'halogène, un groupe hydroxy, OR, où R représente un radical (C1-C16)alkyle, de préférence R est un radical (C1-C3)alkyle.

10- Composés l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisés en ce que 30 R3 et R7, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe COOH, SO3H, ou un groupe COOR, où R représente un radical (C1-C16)alkyle, (C2-Cl 6)alkényle, (C2-Cl 6)alkynyle, (C6-C14)aryl, ou hétéroaryle.5.

11- Composés selon la revendication précédente, caractérisés en ce que R3 et R7, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe COOH ou un groupe COOR, où R représente un radical (C1-C6)alkyle, de préférence méthyle ou éthyle.

12- Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce que les composés de formule (I) présentent au moins une ou deux des, de préférence toutes les, caractéristiques suivantes : - m est 1, - n est 1, - A représente un atome d'oxygène, - R1 représente un atome d'hydrogène, - R2 représente un atome d'hydrogène, - R4 représente un atome d'hydrogène, - R5 représente un atome d'hydrogène, - R6 représente un atome d'hydrogène, - R8 représente un atome d'hydrogène, -R3 représente un atome d'hydrogène, un groupe COOH ou COOR, et/ou - R7 représente un atome d'hydrogène, un groupe COOH ou COOR. 20

13- Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi: 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2, 2'-éthylènedioxy-biséthylamine-thiazolecarboxamide]-dibenzoate de méthyle ; 25 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2, 2'-éthylènedioxy-biséthylamine-thiazolethiocarboxamide]-dibenzoate de méthyle ; Acide 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2,2'-éthylènedioxy-biséthylamine-thiazolcarboxam ide] dibenzoïque ; Acide 4,4'-dihydroxy-3,3'-[(2,2'-éthylènedioxy-bisethylamine- 30 thiazolthiocarboxamide] dibenzoïque ; N,N'-[1,2-éthanediyl-bis(oxy-2,l-ethandiyléthyl)]-bis[2-(2-hydroxyphényl)] -4-thiazolcarboxamide ;N,N'-[1,2-éthanediyl-bis(oxy-2,1-ethandiyléthyl)]-bis[2-(2-hydroxyphényl) ]-4-th iazolthiocarboxamide.

14- Composés présentant la formule (II) suivante : (II) dans laquelle : R1-R8, X, A, n et m sont tels que définis dans l'une des revendications 10 précédentes.

15- Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes 1-13, à titre de médicaments. 15

16- Composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé tel que défini dans l'une des revendications 1 à 13.

17- Composition pharmaceutique selon la revendication précédente, pour le 20 traitement de pathologies ou désordres caractérisés par une surcharge en fer.

18- Composition pharmaceutique selon la revendication 16 ou 17, caractérisée en ce que les pathologies sont l'hémochromatose, l'anémie falciforme, ou la bétathalassémie.

19- Composition pharmaceutique selon la revendication 16 ou 17, caractérisée en ce que les pathologies ou désordres caractérisés par une surcharge en fer sont choisies parmi: un dérèglement général, une fatigue physique ou psychique, une perte de libido, l'impuissance, une dépression, l'ostéoporose, ménopause précoce, 25myocardiopathies, tachycardie, fibrose, cirrhose, cancer, diabète sucré, douleurs articulaires, arthrites, ou rhumatismes.

20- Composition pharmaceutique selon la revendication 16 ou 17, caractérisée en 5 ce que les pathologies ou désordres sont des désordres neurologiques ou neurodégénératifs.

21- Composition pharmaceutique selon la revendication 16 ou 17, caractérisée en ce que les pathologies sont choisies parmi la maladie d'Alzheimer, de Parkinson, 10 de Huntington, des neuroferritinopathies, la sclérose latérale amyotrophique et la sclérose en plaques.

22- Composition pharmaceutique selon la revendication 16, pour le traitement de pathologies néoplasiques ou de cancers. 15