FR2907129A1

FR2907129A1 - NEW BIOLOGICAL PRODUCT OF MARINE ORIGIN, PROCESS FOR OBTAINING SAME AND USES THEREOF

Info

Publication number: FR2907129A1
Application number: FR0609058A
Authority: FR
Inventors: Bihan Estelle Le; Noussithe Simeoni Koueta
Original assignee: Universite de Caen Normandie
Current assignee: Universite de Caen Normandie
Priority date: 2006-10-17
Filing date: 2006-10-17
Publication date: 2008-04-18
Also published as: WO2008046993A2; WO2008046993A3

Abstract

La présente invention se rapporte au domaine de la chimie et plus particulièrement à celui de la biologie.Elle a spécifiquement pour objet un procédé d'ensilage (ou liquéfaction) des organes digestifs d'un céphalopode comme la Seiche sous l'influence des enzymes endogènes au cours de l'ensilage par lyophilisation en un produit pulvérulent apte à se conserver.Utilisation en aqua culture pour améliorer le taux de croissance des juvéniles, en bactériologie dans la fabrication de suppléments pour milieux de culture, milieu de culture pour micro-organismes ou en alimentation pour suppléer une carence en protéines.The present invention relates to the field of chemistry and more particularly to that of biology.It specifically relates to a method of ensiling (or liquefaction) of the digestive organs of a cephalopod such as the cuttlefish under the influence of endogenous enzymes during silage by lyophilization into a powdery product suitable for storage.Use in aqua culture to improve the growth rate of juveniles, in bacteriology in the manufacture of supplements for culture media, culture medium for microorganisms or in food to supply a protein deficiency.

Description

Nouveau produit biologique d'origine marine, son procédé d'obtention etNew biological product of marine origin, its process of obtaining and

ses utilisations L'invention se rapporte au domaine de la chimie et plus particulièrement à celui de la biologie. Elle a plus particulièrement pour objet un moyen de valorisation et/ ou de récupération de déchets d'origine animale à des fins 10 alimentaires notamment pour les animaux. Elle a spécifiquement pour objet un procédé d'ensilage ou de liquéfaction des organes digestifs d'un céphalopode sous l'influence des enzymes endogènes au cours de l'ensilage. 15 La seiche, est un céphalopode (Sepia officinalis ou Sepia esculenta ou Sepia pharaonis, et surtout Sepia officinalis), qui est abondante dans les mers entourant notre pays et est principalement pêchée dans les bassins du Cotentin. 20 Ainsi qu'il a été précédemment exposé, (E. Le Bihan, A. Perrin et N. Koueta, Vie et Milieu 2006 ; 139-145), les animaux marins sont commercialisés principalement sous forme éviscérée après congélation et cette production constitue un motif de développement important pour beaucoup d'entreprises côtières. Ces entreprises 25 produisent un volume important de déchets, notamment la peau et les viscères. La peau des céphalopodes a déjà trouvé une possibilité d'utilisation car elle contient une forte proportion d'acides gras poly- 30 insaturés. Selon le document EP 1.027.833, il est possible de traiter des fragments de peau avec des enzymes protéolytique pour former une émulsion du type émulsion O/W qui contient les composants solubles dans l'eau et surtout les acides gras poly-insaturés insolubles dans l'eau. Parmi les composants solubles dans l'eau, on citera les aminoacides, les 35 oligoprotéines de poids moléculaire inférieur à 30.000 et des protéines. 2907129 2 Ce procédé permet déjà de valoriser un déchet important et de supprimer un risque permanent de pollution de l'environnement en hydrolysant de cette façon la peau de seiche. 5 Cependant, ceci n'est pas encore suffisant pour réaliser l'élimination des déchets de seiche et d'autres céphalopodes tels que calamars, poulpes et autres animaux marins. Des études ont montré que le tube digestif de la seiche lo (golden Cuttlefish) contient de nombreux enzymes et iso enzymes (Zeng X et al. J Ocean Univ. of China (Chem. Abst. 142 173513 (1997) ; Perrin A., 2004) qui contribuent au processus d'autolyse. On a montré aussi que les enzymes présents dans la glande 15 digestive de la seiche (Sepia officinalis) contenaient des formes activées par différents métaux tels que Cu, Zn ou Ag qui les rendaient sensiblement plus actifs (Le Bihan E. et al. J Exp. Mar. Biol Ecol 2004 ; 309, 47-66). On a également montré que l'alimentation des seiches en 20 élevage expérimental joue un rôle important sur la sécrétion d'enzymes digestifs et sur la croissance des jeunes seiches (Perrin A et al., J Exp. Mar. Biol Ecol 2004 ; 311, 267-285) Parmi les enzymes trouvés dans le tube digestif et 25 notamment dans la glande digestive des seiches et des calamars, on trouve principalement des protéases (Hatate H. Suisan Daigakko Kenkyu Hokuku (1999) 47, 121-1.27 ; Perrin A., (2004), loc. cit). Parallèlement, on a identifié dans les viscères de seiche des 30 acides gras insaturés comme l'acide éicosapentaénoïque et l'acide docosahexaénoique, mis en évidence par chromatographie en phase stationnaire et purification par passage sur gel de silice et alumine puis caractérisation par du nitrate d'argent (Ikushim Y et al. Brevet japonais JP 9008298 du 11/10/1990). 35 En définitive, E. Le Bihan et al., Food Chemistry 98 (2006) 39-51 ont montré que les céphalopodes constituent une ressource économique importante pour des pêcheries globales. La Basse Normandie 2907129 est la région productrice de céphalopodes la plus importante en France. La seiche ainsi produite est destinée à être exportée sous forme congelée vers les pays du Bassin Méditerranéen et vers le Japon. Traditionnellement, les viscères ont été considérés comme un déchet sans utilisation pratique, s sauf pour une faible part. Cependant, les viscères de seiche représentent une partie importante de la masse de seiche (15 à 25 /o). De ce fait, ce type de résidu représente une perte commerciale importante du fait de l'absence de valorisation d'un tel résidu. The invention relates to the field of chemistry and more particularly to that of biology. More particularly, it relates to a means of recovery and / or recovery of animal waste for food, especially for animals. It specifically relates to a process for ensiling or liquefying the digestive organs of a cephalopod under the influence of endogenous enzymes during silage. 15 The cuttlefish, is a cephalopod (Sepia officinalis or Sepia esculenta or Sepia pharaonis, and especially Sepia officinalis), which is abundant in the seas surrounding our country and is mainly fished in the basins of Cotentin. As previously stated, (E. Le Bihan, A. Perrin and N. Koueta, Life and Environment 2006: 139-145), marine animals are marketed mainly in eviscerated form after freezing and this production constitutes a important development reason for many coastal companies. These companies produce a large volume of waste, including skin and viscera. The skin of cephalopods has already found a possibility of use because it contains a high proportion of polyunsaturated fatty acids. According to the document EP 1.027.833, it is possible to treat skin fragments with proteolytic enzymes to form an emulsion of the O / W emulsion type which contains the water-soluble components and especially the polyunsaturated fatty acids insoluble in water. the water. Among the water-soluble components are amino acids, oligoproteins with a molecular weight of less than 30,000, and proteins. 2907129 2 This process already makes it possible to recover a significant waste and to eliminate a permanent risk of pollution of the environment by hydrolyzing the skin of cuttlefish in this way. However, this is not yet sufficient to achieve the disposal of cuttlefish waste and other cephalopods such as squid, octopus and other marine animals. Studies have shown that the digestive tract of cuttlefish (lo cuttlefish) contains many enzymes and isoenzymes (Zeng X et al., J Ocean Univ., Of China (Chem Abst 142, 173513 (1997), Perrin A., 2004), which contribute to the autolysis process, It has also been shown that the enzymes present in the digestive gland of the cuttlefish (Sepia officinalis) contained forms activated by different metals such as Cu, Zn or Ag which made them substantially more active. (Bihan E. et al., J. Exp Mar. Biol Ecol 2004; 309, 47-66) It has also been shown that the diet of experimental cuttlefish plays an important role in the secretion of digestive enzymes and on the growth of young cuttlefish (Perrin A et al., J. Exp. Mar. Biol Ecol 2004; 311, 267-285) Among the enzymes found in the digestive tract and especially in the digestive gland of cuttlefish and squid, found mainly proteases (Hatate H. Suisan Daigakko Kenkyu Hokuku (1999) 4 7, 121-1.27, Perrin A., (2004), loc. cit). At the same time, unsaturated fatty acids, such as eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid, have been identified in the cuttlefish viscera as evidenced by stationary phase chromatography and purification by passage over silica gel and alumina, followed by characterization with nitrate dicarboxylic acid. silver (Ikushim Y et al Japanese patent JP 9008298 of 11/10/1990). Ultimately, E. Le Bihan et al., Food Chemistry 98 (2006) 39-51 showed that cephalopods are an important economic resource for global fisheries. Lower Normandy 2907129 is the most important cephalopod producing region in France. The cuttlefish thus produced is intended to be exported in frozen form to the countries of the Mediterranean Basin and to Japan. Traditionally, viscera have been considered a waste without practical use, except for a small part. However, the cuttlefish viscera are an important part of the cuttlefish mass (15 to 25%). As a result, this type of residue represents a significant commercial loss due to the lack of recovery of such a residue.

L'utilisation des lipides, qui représentent 10 % des viscères, fait que les viscères des céphalopodes peuvent être la base d'autolysats de produits d'origine marine destinés à produire des lipides et aussi des peptides facilement digestibles, que l'on pourra utiliser comme ingrédient en aquaculture. The use of lipids, which represent 10% of viscera, makes cephalopod viscera may be the basis of autolysates of marine products to produce lipids and easily digestible peptides, which can be used as an ingredient in aquaculture.

Le processus d'autolyse post-mortem des viscères entraîne la libération des enzymes endogènes de telle sorte que le degré d'autolyse et le degré d'hydrolyse des fonctions amide, déterminent le degré d'hydrolyse des liaisons peptidiques et en définitive le poids moléculaire des protéines et des peptides dont dépend la durée de la réaction enzymatique. On a déterminé également le niveau d'activité enzymatique, l'évolution du pH au cours de l'autolyse, l'influence de l'acide Trichloroacétique sur le niveau de protéines solubles (Le Bihan E. et al., 2006, Food Chemistry, 98, 39-51). The process of post-mortem autolysis of the viscera results in the release of the endogenous enzymes so that the degree of autolysis and the degree of hydrolysis of the amide functions, determine the degree of hydrolysis of the peptide bonds and ultimately the molecular weight proteins and peptides on which the duration of the enzymatic reaction depends. The level of enzymatic activity, the pH evolution during autolysis, the influence of trichloroacetic acid on the level of soluble proteins were also determined (Bihan E. et al., 2006, Food Chemistry , 98, 39-51).

L'invention consiste donc à soumettre les viscères de seiche et notamment de Sepia officinalis à une autolyse partielle ou complète par les enzymes endogènes pour former des lysats contenant des protéines solubles, des agrégats d'huiles riches en acides gras poly-insaturés, des protéines, des hydrates de carbone. Ce procédé d'autolyse est également caractérisé par le fait que le pH du milieu est maintenu en dessous de 6 en cours de processus par addition d'un acide aliphatique carboxylique comme l'acide propionique. Le procédé d'autolyse est également défini par le fait que le taux de protéines solubles dans l'acide trichloroacétique varie. Il se 2907129 4 produit une rupture des lysosomes et de ce fait la quantité de protéines solubles dans l'acide trichloroacétique est augmentée. L'invention est encore caractérisée par une diminution du 5 taux de protéines de haut poids moléculaire et notamment de poids moléculaire supérieur à 20 kDa alors que le taux de protéines de bas poids moléculaire (< 6,5 kDa) demeure inchangé durant le stockage. En outre, on a déterminé qu'au cours de l'autolyse des io viscères, l'activité spécifique de l'amylase augmente significativement (p < 0,05) pour ensuite diminuer, par suite de la dégradation de l'enzyme et de son instabilité dans les conditions de stockage. L'activité des carboxypeptidases A' et B' présentes dans les 15 viscères augmente d'une manière significative (p < 0,05) par rapport aux viscères des animaux vivants. Ainsi, dans les conditions d'autolyse, les carboxypeptidases doivent être considérés comme très stables dans les conditions expérimentales utilisées. L'activité spécifique de la chymotrypsine a été trouvée significativement plus élevée par rapport à l'activité déterminée chez la seiche vivante. Cependant, cette augmentation a tendance à baisser par suite de la dégradation survenant pendant la transformation en usine. L'autolyse est due principalement aux taux élevés de protéases acides (cathépsines), de chymotrypsine et de trypsine dans le système digestif des animaux carnivores. Un phénomène important au cours de l'autolyse est la 30 libération de protéases digestives par suite de la rupture des vésicules à zymogène présents dans les cellules, ce qui induit une activité protéasique alcaline nettement augmentée. Pendant l'ensilage, la teneur en acides gras C22 : 6 - 3 35 augmente alors que le taux d'acides gras en C20: 5 - 3 diminue. Néanmoins, la teneur globale en acides gras poly-insaturés reste élevée. The invention therefore consists in subjecting the cuttlefish viscera, and in particular Sepia officinalis, to partial or complete autolysis by the endogenous enzymes to form lysates containing soluble proteins, oil aggregates rich in polyunsaturated fatty acids, proteins , carbohydrates. This autolysis process is also characterized by the fact that the pH of the medium is kept below 6 during the process by addition of an aliphatic carboxylic acid such as propionic acid. The autolysis process is also defined by the fact that the level of soluble proteins in trichloroacetic acid varies. It produces a disruption of the lysosomes and thus the amount of soluble proteins in trichloroacetic acid is increased. The invention is further characterized by a decrease in the level of high molecular weight proteins and especially molecular weight above 20 kDa while the level of low molecular weight protein (<6.5 kDa) remains unchanged during storage. In addition, it was determined that during the autolysis of the viscera, the specific activity of amylase increases significantly (p <0.05) and then decrease, as a result of the degradation of the enzyme and its instability under storage conditions. The activity of the carboxypeptidases A 'and B' present in the viscera increased significantly (p <0.05) relative to the viscera of live animals. Thus, under the conditions of autolysis, the carboxypeptidases must be considered as very stable under the experimental conditions used. The specific activity of chymotrypsin was found to be significantly higher compared to the activity determined in live cuttlefish. However, this increase tends to decrease as a result of degradation occurring during mill processing. Autolysis is mainly due to high levels of acid proteases (cathepsins), chymotrypsin and trypsin in the digestive system of carnivorous animals. An important phenomenon during autolysis is the release of digestive proteases as a result of the breakdown of zymogen vesicles present in the cells, which induces significantly increased alkaline protease activity. During silage, the C22: 6 - 3 fatty acid content increases while the level of C20: 5 - 3 fatty acids decreases. Nevertheless, the overall content of polyunsaturated fatty acids remains high.

20 25 2907129 5 En définitive, les viscères de seiche après autolyse contiennent en moyenne : 86-87g - pour 100 g de poids sec de protéines 5 12 g pour 100 g de poids sec de lipides et 2,1 g / 100 g de poids sec de glucides La congélation de la seiche induit un abaissement 10 important de la teneur en protéines, en lipides et en hydrates de carbone dans les viscères. Cependant, les proportions relatives en ces différents constituants demeurent similaires pendant la conservation à -20 C. Les tableaux I et II suivants montrent les différences de 15 compositions des viscères de seiche après différents traitements en cours de stockage. Les ensilages de viscères de seiche sont ensuite lyophilisés pour assurer une meilleure conservation et faciliter leur utilisation.Ultimately, cuttlefish viscera after autolysis contain on average: 86-87 g - per 100 g dry protein weight 12 g per 100 g dry weight of fat and 2.1 g / 100 g weight Dry carbohydrates Freezing the cuttlefish induces a significant lowering of the content of proteins, lipids and carbohydrates in the viscera. However, the relative proportions of these different constituents remain similar during storage at -20 ° C. The following Tables I and II show the differences in compositions of the cuttlefish viscera after different treatments during storage. The silages of cuttlefish viscera are then lyophilized to ensure better preservation and facilitate their use.

20 L'addition d'un acide organique aliphatique à l'ensilage (comme l'acide propionique) et l'addition d'un antioxydant (comme la vitamine E, le p. terbutylparacresol ou l'éthoxiquine) facilitent également l'autolyse et la conservation.The addition of an aliphatic organic acid to the silage (such as propionic acid) and the addition of an antioxidant (such as vitamin E, terbutylparacresol or ethoxiquin) also facilitate autolysis and the conversation.

25 Après analyse biochimique des différents constituants, les ensilages lyophilisés selon l'invention ont été testés in vivo afin de déterminer leur aptitude à être utilisés en aquaculture. Des élevages expérimentaux de juvéniles de mollusques (Sepia 30 officinalis), de poissons (Dicentrarchus labrax) et de larves de crustacés (Penaeus japonicus) ont été réalisés afin de tester l'impact de ces enrichissements sur les larves et sur les juvéniles. Les animaux sont placés en élevage expérimental pendant 40 jours dans le cas des seiches, 4 mois pour les bars et 60 jours pour les crevettes. Ils ont reçu des 35 aliments enrichis en ensilage (1 à 10 % de l'alimentation). Les essais d'enrichissement de l'alimentation avec les ensilages ainsi préparés ont montré une forte amélioration du taux de croissance des juvéniles de 2907129 6 seiches, de bars et de crevettes japonaises. La survie n'a pas été affectée par l'enrichissement de l'alimentation au cours des expériences. L'utilisation des ensilages peut aussi s'avérer utile dans le cadre de 5 la fabrication de supplément de milieux de culture (cellules isolées de mollusques marins ou de bactéries) et la régulation de phénomènes physiologiques. Pour cette raison, l'effet des ensilages sur la viabilité et l'activité physiologique cellulaire, a été testé sur cellules isolées de la glande digestive de seiche. Les expériences ont montré que l'ajout 1 o d'ensilage dans le milieu de culture permet une augmentation significative de la viabilité cellulaire et provoque une stimulation de leur activité physiologique (sécrétion d'enzymes digestives). La comparaison des effets des ensilages avec ceux de facteurs de croissance (IGF, EGF, Insuline) sur des cellules isolées de la glande digestive de seiche montre des similitudes.After biochemical analysis of the various constituents, the lyophilized silages according to the invention were tested in vivo to determine their suitability for use in aquaculture. Experimental trials of juvenile molluscs (Sepia 30 officinalis), fish (Dicentrarchus labrax) and crustacean larvae (Penaeus japonicus) were conducted to test the impact of these enrichments on larvae and juveniles. The animals are placed in experimental breeding for 40 days in the case of cuttlefish, 4 months for bars and 60 days for shrimps. They received silage-enriched foods (1 to 10% of the diet). Feed enrichment trials with ensilages thus prepared showed a strong improvement in the growth rate of cuttlefish juveniles, bars and Japanese shrimps. Survival was not affected by feeding fortification during the experiments. The use of silage may also prove useful in the context of the manufacture of culture media supplement (isolated cells of marine molluscs or bacteria) and the regulation of physiological phenomena. For this reason, the effect of silage on viability and cellular physiological activity, was tested on isolated cells of the digestive gland of cuttlefish. The experiments have shown that the addition of silage in the culture medium allows a significant increase in cell viability and provokes a stimulation of their physiological activity (secretion of digestive enzymes). Comparison of the effects of silage with growth factors (IGF, EGF, insulin) on isolated cells of the cutaneous digestive gland shows similarities.

15 De plus, l'ajout d'ensilage au milieu de culture d'hémocytes d'ormeau permet d'augmenter l'adhésion des cellules et le nombre de prolongements cytoplasmiques de celles-ci. Les ensilages stimulent les défenses immunitaires au niveau d'hémocytes d'ormeaux en culture 20 primaire. Ainsi, les ensilages LBBMA4 et LBBMA25 montrent une stimulation des activités lysosomales (stimulation de 176 % et 329 0/0 respectivement), de phénoloxydase (stimulation de 110 % et 120 respectivement) et anti-protéasique (inhibition de 35 % et 35 0/0 respectivement contre 19 pour le témoin) en comparaison avec celle dosée 25 dans le milieu de culture des hémocytes témoin. Enfin, l'utilisation des ensilages, en tant que milieu de culture seul, pour micro-organismes montre que les bactéries et levures peuvent se développer davantage sur ce type de milieu de culture. Ceci permet 30 d'envisager la possibilité de remplacer les peptones actuellement utilisées par des ensilages de viscères de seiches avec un résultat au moins comparable. Les ensilages par suite de leur teneur élevée en protéines trouvent encore un emploi en alimentation.In addition, the addition of silage to the culture medium of abalone haemocytes increases the adhesion of the cells and the number of cytoplasmic extensions thereof. Silage stimulates immune defenses at abalone hemocytes in primary culture. Thus, the ensilages LBBMA4 and LBBMA25 show a stimulation of the lysosomal activities (stimulation of 176% and 329% respectively), of phenoloxidase (stimulation of 110% and 120 respectively) and anti-protease (inhibition of 35% and 35%). 0 versus 19 for the control) compared to that assayed in the control hemocyte culture medium. Finally, the use of silage, as a culture medium alone, for microorganisms shows that bacteria and yeasts can develop further on this type of culture medium. This makes it possible to consider the possibility of replacing the peptones currently used with silage of cuttlefish viscera with a result at least comparable. Silage because of its high protein content is still used in food.

35 Les exemples suivants explicitent l'invention sans toutefois la limiter. Les chiffres fournis ci-après sont susceptibles de subir des variations en fonction de la saisonnalité.The following examples explain the invention without limiting it. The figures provided below are subject to variations depending on seasonality.

20 2907129 5 Exemple I Ensilage fabriqué à 4 C Io On broye dans un broyeur à galets 25 litres de viscères mélangées (viscères et yeux de seiche). On met le broyat dans un bac en plastique résistant à l'acide (polypropylène). On ajoute au jus 1,5 % en poids/vol. d'acide propionique puis 250 mg/1 d'un agent anti-oxydant. On mélange jusqu'à homogénéité puis on laisse incuber à 4 C pendant 50 jours. On 15 lyophilise le jus d'ensilage et on répartit le lyophilsat dans des récipients bouchés à l'abri de l'humidité. Composition de l'ensilage après lyophilisation : Ensilage fabriqué à 4 C : (LBBMA4) pH : 5.29 0.05 Protéines TCA solubles (mg/ml) 399.5 16 Protéines totales (g/ 100 g de poids sec) 84,61 3 HMW glucides (g/ 100 g de poids sec) 1,45 0.01 LMW glucides (g/ 100 g de poids sec) 1,19 0.005 Glucides totaux (g/ 100 g de poids sec) 2.63 0.016 Lipides totaux (g/ 100 g de poids sec) 8,5 0.4 Peptides <6.5 kDa (%) : 80.7 0.4 Digestibilité (%) : 89.53 2.15 Composition en acides aminés (mg/g de 240 9 poids sec) 7 TABLEAU I : Composition de l'ensilage après lyophilisation 2907129 Exemple II Ensilage fabriqué à 25 C Le même mode opératoire a été utilisé qu'à l'exemple I mais les viscères 5 de seiche ont été mises en incubation à 25 C pendant 50 jours. Le jus d'ensilage est séché par lyophilisation dans les mêmes conditions qu'à l'exemple I. La composition de l'ensilage après lyophilisation obtenu dans ces 10 conditions a été déterminée. On notera que le produit d'ensilage obtenu dans ces conditions présente une teneur en acides aminés sensiblement supérieure et un coefficient de digestibilité statistiquement plus élevé (95,59 3,11 contre 89,53 2,15). La teneur en peptides de faible poids moléculaire (<6, 5 kDa) et en lipides totaux est également statistiquement 15 plus élevée. Il apparaît donc que l'ensilage fabriqué à 25 C présente une valeur nutritive sensiblement supérieure. Les ensilages fabriqués selon la technique de l'exemple I et de l'exemple II trouvent un emploi comme complément alimentaire en nutrition animale, 20 pour la stimulation de la croissance pour les jeunes animaux, pour la stimulation et la maturation du système digestif des juvéniles ou de larves, pour l'augmentation de la digestibilité de tels aliments et encore comme immunostimulant.EXAMPLE I Ensilage made at 4 ° C. 25 liters of mixed viscera (viscera and cuttle-fish eyes) are ground in a roller mill. The ground material is put in an acid resistant plastic container (polypropylene). 1.5% w / v is added to the juice. of propionic acid and then 250 mg / l of an antioxidant. Mix until homogeneous and incubate at 4 C for 50 days. The silage juice is freeze-dried and the lyophilsate is distributed in sealed containers protected from moisture. Silage composition after lyophilization: Silage made at 4 C: (LBBMA4) pH: 5.29 0.05 Soluble TCA protein (mg / ml) 399.5 16 Total protein (g / 100 g dry weight) 84.61 3 HMW carbohydrates (g / 100 g dry weight) 1.45 0.01 LMW carbohydrates (g / 100 g dry weight) 1.19 0.005 Total carbohydrates (g / 100 g dry weight) 2.63 0.016 Total fat (g / 100 g dry weight) 8.5 0.4 Peptides <6.5 kDa (%): 80.7 0.4 Digestibility (%): 89.53 2.15 Amino acid composition (mg / g 240 9 dry weight) TABLE I: Composition of silage after freeze-drying 2907129 Example II Ensilage The same procedure was used as in Example I but the cuttlefish viscera were incubated at 25 ° C for 50 days. The silage juice is dried by lyophilization under the same conditions as in Example I. The composition of the silage after lyophilization obtained under these conditions was determined. It will be noted that the ensilage product obtained under these conditions has a substantially higher amino acid content and a statistically higher digestibility coefficient (95.59 3.11 against 89.53 2.15). The content of peptides of low molecular weight (<6.5 kDa) and total lipids is also statistically higher. It therefore appears that the silage manufactured at 25 C has a substantially higher nutritive value. Silage made according to the technique of Example I and Example II are used as a dietary supplement in animal nutrition, for the stimulation of growth for young animals, for stimulation and maturation of the digestive system of juveniles or larvae, for the increase of the digestibility of such foods and again as immunostimulant.

25 TABLEAU II Ensilage fabriqué à 25 C : (LBBMA25) pH : 5.94 0.05 Protéines TCA solubles 404 13 Protéines totales 63,90 2 Glucides à poids moléculaire élevé 1,3 0.02 Glucides à poids moléculaire bas 0,56 0.09 Glucides totaux 1.86 0.012 Lipides totaux 13,32 0.7 Peptides <6.5 kDa (%) : 89.3 1 Digestibilité (%) : 95.59 3.11 Composition en acides aminés (mg/ g de poids sec) 328.3 14.3 8 Composition de l'ensilage après lyophilisation 2907129 TABLEAU III Stabilité des produits d'ensilage Depuis 0 à 12 mois après la production 5 Ensilage fabriqué à 4 C : Ensilage fabriqué à 25 C : Temps (mois): 0 12 8 12 0 12 8 12 Salmonelles : - Absence - - - Absence Entero-bactéries : - - Absence - - - Absence Dioxine (OMS- - - - 2,57 pg/g - - - 2,27 pg/g ToxiqueEQuivalent de 2,56 pg/g 2,32 pg/g matrice sèche PCB (OMSToxiqueEQuivalent de 1,88 g/kg 2,62 g/kg matrice sèche HAP (OMSToxiqueEQuivalent de 5,13 pg/g 4,59 pg/g matrice sèche Dioxine + PCB (OMS0,09 g/ kg 0,15 g/ kg ToxiqueEQuivalent de matrice sèche Benzo-pyrène (OMS- ToxiqueEQuivalent de 80.7 84.8 85.6 86.4 89.3 91.4 90.91 91.5 matrice sèche Peptides <6. 5kDa (% pH : 5.29 5.18 5.14 5.12 5.94 5.61 5.56 5.5 0.05 0.2 0.1 0.2 0.05 0.1 0.06 0.1 Protéines solubles 1399,5 374 383 374 404 379 367 367 dans l'acide 16 18 11 8,7 13 9 14 12 Trichloracétique (en mg/ml) 9 5 lo 2907129 lo TABLEAU IV Composition en acides gras de produits d'ensilage à 4 et à 25 C Tableau IV : Composition en acides gras des viscères issus de l'ensilage (%). La composition de l'ensilage correspond aux dosages effectués sur un seul ensilage. Acides saturés Mono-insaturés Poly-insaturés Total c)3 Total c)6 37,6 16,6 45,8 36,1 6,1 37,7 15,1 47,2 38,5 6TABLE II Silage manufactured at 25 ° C: (LBBMA25) pH: 5.94 0.05 Soluble TCA Proteins 404 13 Total Proteins 63.90 2 High Molecular Carbohydrates 1.3 0.02 Low Molecular Weight Carbohydrates 0.56 0.09 Total Carbohydrates 1.86 0.012 Fat totals 13.32 0.7 Peptides <6.5 kDa (%): 89.3 1 Digestibility (%): 95.59 3.11 Composition in amino acids (mg / g dry weight) 328.3 14.3 8 Composition of silage after lyophilization 2907129 TABLE III Stability of products for silage From 0 to 12 months after production 5 Silage made at 4 C: Silage made at 25 C: Time (months): 0 12 8 12 0 12 8 12 Salmonella: - Absence - - - Absence Entero-bacteria: - - Absence - - - Absence Dioxin (WHO - - - - 2.57 pg / g - - - 2.27 pg / g ToxicEquivalent of 2.56 pg / g 2.32 pg / g dry matrix PCB (OMSToxicEquivalent of 1, 88 g / kg 2.62 g / kg dry matrix PAH (OMSToxicEquivalent of 5.13 pg / g 4.59 pg / g dry matrix Dioxin + PCB (WHO0.09 g / kg 0.15 g / kg ToxicEQuivalent of dry matrix Benzo-pyrene (WHO-ToxicEquivalent of 80.7 84.8 85.6 86.4 89.3 91.4 90.91 91.5 dry matrix Peptides <6. 5kDa (% pH: 5.29 5.18 5.14 5.12 5.94 5.61 5.56 5.5 0.05 0.2 0.1 0.2 0.05 0.1 0.06 0.1 Soluble protein 1399.5 374 383 374 404 379 367 367 in the acid 16 18 11 8.7 13 9 14 12 Trichloroacetic acid mg / ml) TABLE IV Fat composition of silage products at 4 and 25 ° C. Table IV: Fatty acid composition of viscera from silage (%) Silage composition corresponds to the assays performed on a single silage Saturated acids Monounsaturated Polyunsaturated Total c) 3 Total c) 6 37.6 16.6 45.8 36.1 6.1 37.7 15.1 47.2 38 , 5 6

Claims

1. A method of ensiling (or liquefying) the digestive organs of a cephalopod under the influence of endogenous enzymes and enzymes possibly made during silage, to obtain a nutrient-rich autolysate juice that it is dehydrated by physical means to obtain a powdery product which is preserved in the absence of moisture.

2. A silage process according to claim 1 wherein the endogenous enzymes made during silage consist essentially of an amylase.

3. A silage process according to claim 1 wherein the endogenous enzymes made during silage consist of carboxypeptidases A 'and B'.

4. A silage process according to claim 3, wherein the autolysis is also due to the action of acid proteases, chymotrypsin and trypsin present in the digestive system of carnivorous animals.

A silage method according to claim 4, wherein the silage produces a release of digestive proteases as a result of the breaking of the zymogen vesicles.

6. Silage process according to claim 1, wherein the digestive organs of cephalopod are those of the cuttlefish.

7. Silage process according to one of the preceding claims wherein the cephalopod is Sepia Officinalis.

8. A method of silage according to one of the preceding claims wherein there is added to the silage product an organic aliphatic acid to maintain the pH between 5 and 6.

9. A method of silage according to one of the preceding claims wherein an antioxidant is added to the silage juice to promote preservation. 2907129 12

10. Freeze-dried cephalopod silage products as obtained according to claim 1 characterized by a high total protein content of at least 63.90% of dry product, a lipid content greater than 8 g% of dry product and by a carbohydrate content of the order of 2 g% of dry product.

The cephalopod silage product of claim 10 wherein the protein content is in the range of 86 to 87 g per 100 g dry weight.

The cephalopod silage product of claim 10 wherein the lipid content is in the range of 12 g per 100 g dry weight.

13. Use of silage-enriched foods according to claim 10, in particular for rearing juveniles of molluscs, or fish and crustacean larvae.

14. Use of silage products according to claim 10 for producing or manufacturing supplements of culture media.

15. Use of the silage products according to claim 10 in the culture of abalone haemocytes, with a view to increasing the adhesion of the cells and the number of cytoplasmic extensions of the cells.

16. Use of silage products according to claim 10 in food because of their high protein content.