FR2895255A1 - Composition associant un extrait de bacterie filamenteuse non photosynthetique non fructifiante et la vitamine c ou un de ses derives stabilise par un copolymere. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne notamment une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, (i) au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et (ii) au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique et ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.Elle porte également sur un procédé cosmétique de traitement de la perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau mettant en oeuvre ladite composition.L'invention porte également sur l'utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante comme agent destiné à sensibiliser les cellules de la peau à l'action d'un agent augmentant la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation.En particulier, l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante est un extrait de Vitreoscilla filiformis.

Description

L'invention concerne notamment une composition comprenant, dans un milieu

physiologiquement acceptable, (i) au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et (ii) au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique et ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.

Elle porte également sur un procédé cosmétique de traitement de la perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau mettant en oeuvre ladite composition.

L'invention porte également sur l'utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante comme agent destiné à sensibiliser les cellules de la peau à l'action d'un agent augmentant la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation.

La peau humaine est constituée de deux compartiments à savoir un compartiment superficiel, l'épiderme, et un compartiment profond, le derme.

L'épiderme humain naturel est composé principalement de trois types de cellules qui sont les kératinocytes, très majoritaires, les mélanocytes et les cellules de Langerhans.

Chacun de ces types cellulaires contribue par ses fonctions propres au rôle essentiel joué dans l'organisme par la peau.

Le derme fournit à l'épiderme un support solide. C'est également son élément nourricier. Il est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire composée elle-même principalement de collagène, d'élastine et d'une substance, dite substance fondamentale, composants synthétisés par le fibroblaste. On y trouve aussi des leucocytes, des mastocytes ou encore des macrophages tissulaires. Il est également traversée par des vaisseaux sanguins et des fibres nerveuses. Dans une peau normale, c'est à dire non pathologique ni cicatricielle, le fibroblaste est à l'état quiescent, c'est à dire non prolifératif, peu actif d'un point de vue métabolique et non mobile.

Ce sont les fibres de collagène qui assurent la solidité du derme. Les fibres de collagène sont constituées de fibrilles scellées les unes aux autres, formant ainsi plus de dix types de structures différentes, les collagènes de types I et III représentent 90% des collagènes matriciels. La solidité du derme est en grande partie due à l'enchevêtrement des fibres de collagène tassées les unes contre les autres en tous sens. Les fibres de collagène participent à l'élasticité et à la tonicité de la peau et/ou des muqueuses.

La synthèse des fibres de collagènes, et plus particulièrement des collagènes de types I et III, commence par la synthèse d'ARNm procollagènes de types I et III, suivi de leur traduction en procollagènes de types I et III, ces procollagènes subissent différentes étapes post-traductionnelles pour les rendre actifs (ou efficaces). Ces procollagènes sont tout d'abord hydroxylés sur leurs résidus proline et lysine par les lysine- et prolinehydroxylases. Les procollagènes inactifs et solubles ainsi obtenus portent des propeptides amino- et carboxy-terminaux permettant leur transport à distance de leur lieu de synthèse vers la matrice extracellulaire où ils deviennent insolubles et actifs par polymérisation spontanée après clivage de ces propeptides. Ce clivage est assuré par deux enzymes spécifiques, l'aminoprocollagène peptidase (N-PCP) et la carboxyprocollagène peptidase (C-PCP). Les polymères de collagène sont finalement stabilisés par la formation de liaisons covalentes croisées sous l'activité de la lysyloxydase.

Les fibres de collagènes sont constamment renouvelées mais ce renouvellement diminue avec l'âge ce qui entraîne un amincissement du derme. Il est également admis que des facteurs extrinsèques comme les rayons ultraviolets, le tabac ou certains traitements (Glucocorticoïdes, vitamine D et dérivés par exemple) ont également un effet sur la peau et sur son taux de collagène.

Par ailleurs à la ménopause, les principales modifications concernant le derme sont une diminution du taux de collagène et de l'épaisseur dermique. Cela entraîne chez la femme ménopausée un amincissement de la peau et/ou des muqueuses. La femme ressent alors une sensation de "peau sèche" ou de peau qui tire et l'on constate une accentuation des fines rides et ridules de surface. La peau présente un aspect rugueux à la palpation. Enfin la peau présente une souplesse diminuée.

On sait aussi que des changements hormonaux peuvent conduire à la formation de vergetures qui sont la conséquence d'une perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau.

On comprend alors à la lecture de ce qui précède l'importance des collagènes dans la structure des tissus, particulièrement de la peau et/ou des muqueuses, et l'importance qu'il y a à augmenter leur efficacité dans les tissus pour ainsi lutter contre le vieillissement cutané qu'il soit chronobiologique ou photo-induit et ses conséquences, l'amincissement du derme et/ou la dégradation des fibres de collagène ce qui entraînent l'apparence de peau molle et ridée ; ou pour prévenir et/ou traiter la formation des vergetures.

On connaît de l'art antérieur l'utilisation de l'acide ascorbique (ou vitamine C) pour stimuler la synthèse de collagène, en empêchant, en tant que co-facteur, l'auto- inactivation des enzymes lysine- et proline-hydroxylases et en augmentant la synthèse des ARNm de procollagènes. L'acide ascorbique (ou vitamine C) est également connu pour stimuler la synthèse de l'élastine de la peau. On peut citer à cet égard les brevets US 5801192, US 4983382 et EP 0717983. On connaît également la capacité de la vitamine C à transformer les procollagènes en collagène (WO-00/ 56326). On connaît également de la demande EP-1-374 853 l'utilisation de la vitamine C stabilisée par des polymères dans des compositions anti-âge.

Mais la Demanderesse vient de mettre en évidence, de façon surprenante et inattendue, que l'on pouvait potentialiser et/ou augmenter l'action de la vitamine C sur la synthèse de collagène en lui associant un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthtéique non fructifiante connu notamment pour ses propriétés immunomodulatrices (WO-94/02158). En particulier, elle a pu montrer qu'un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante, qui n'a pas d'effet en tant que tel sur la synthèse du collagène, permettait néanmoins de sensibiliser les cellules de la peau et en particulier les fibroblastes à l'action de la vitamine C et augmenter ainsi l'action de la vitamine C sur la stimulation de la synthèse de collagène.

Cette association permet en outre avantageusement de diminuer la quantité de vitamine C nécessaire pour l'obtention du même effet.

L'invention concerne donc notamment une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, (i) au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et (ii) au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique et ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.

Cette composition peut être une composition cosmétique ou une composition dermatologique, de préférence une composition cosmétique. Il s'agira notamment d'une composition cosmétique de soin et/ou de maquillage.

Extraits de bactérie filamenteuse non photosvnthétique non fructifiante Les extraits de bactéries utilisables dans la composition de l'invention sont préparés à partir de bactéries filamenteuses non photosynthétiques telles que définies selon la classification du Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (vol. 3, sections 22 et 23, 9 édition, 1989), parmi lesquelles on peut citer les bactéries appartenant à l'ordre des Beggiatoales, et plus particulièrement les bactéries appartenant aux genres Beggiatoa, Vitreoscilla, Flexithrix ou Leucothrix.

Les bactéries qui viennent d'être définies et dont plusieurs ont déjà été décrites ont généralement un habitat aquatique et peuvent être trouvées notamment dans des eaux marines ou dans des eaux thermales. Parmi les bactéries utilisables, on peut citer par exemple :

Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551) Vitreoscilla beggiatoïdes (ATCC 43181) Beggiatoa alba (ATCC 33555) Flexithrix dorotheae (ATCC 23163) Leucothrix mucor (ATCC 25107) Sphaerotilus natans (ATCC 13338) De préférence, on utilisera un extrait de Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551).

Par `extrait de bactérie' selon l'invention, on entend un extrait de la biomasse bactérienne ou toute fraction active dudit extrait, en particulier : (i) des cellules de bactérie isolées du milieu de culture, qui ont été concentrées, par exemple par centrifugation (`extrait cellulaire non stabilisé') ; ou (ii) des cellules de bactérie concentrées (i), puis soumises à une opération de rupture des enveloppes des cellules de bactérie, par tout moyen connu de l'homme du métier, comme l'action d'ultrasons ou préférentiellement l'autoclavage (`extrait cellulaire stabilisé'). Par `enveloppes', on entend paroi bactérienne et éventuellement les membranes sous-jacentes ; le surnageant obtenu par filtration de l'extrait cellulaire stabilisé (ii), 5 ou toute fraction active dudit extrait.

Cette fraction active peut être obtenue par les méthodes classiques de fractionnement, telles que l'extraction en présence d'un solvant, la précipitation sélective ou l'ultrafiltration tangentielle (UFT) par exemple. Un exemple préféré de fraction active est un isolat de lipopolysaccharides LPS tel que préparé selon l'exemple 1 b- ci-après.

Ces extraits ou fractions peuvent être conservés par exemple par congélation desdits 15 extraits ou desdites fractions et utilisés après décongélation. On parlera plus simplement dans le reste de la description `d'extrait cellulaire' de bactéries ((i) et (ii)), de `surnageant' dudit extrait (iii) ou de `fraction active' enrichie en lipopolysaccharides.

20 L'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante utilisable selon l'invention est de préférence choisi parmi un extrait cellulaire, le surnageant dudit extrait cellulaire ou une fraction active dudit extrait cellulaire enrichie en lipopolysaccharides (LPS).

25 De préférence, l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante est un extrait de Vitreoscilla filiformis, encore plus préférentiellement un extrait cellulaire de Vitreoscilla filiformis ou une fraction active dudit extrait cellulaire enrichie en lipopolysaccharides (LPS).

30 Pour préparer l'extrait de bactérie selon l'invention, on peut cultiver lesdites bactéries selon les méthodes connues de l'homme du métier, ou se reporter en particulier à la description de la demande de brevet WO-A-94-02158. On obtient un extrait cellulaire dont on peut séparer le surnageant par exemple par filtration et centrifugation. L'extrait 35 peut être utilisé sous forme aqueuse ou sous forme lyophilisée. Le protocole est décrit plus en détail à l'exemple 1 ci-après. 10 Cet extrait de bactérie peut être refractionné et utilisé pur ou dilué à différentes concentrations.

Dans les compositions selon l'invention, on utilisera généralement de 0,001 à 10%, et en particulier de 0,005 à 2%, en poids d'extrait sec de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante par rapport au poids total de la composition. On utilisera de préférence une quantité allant de 0,01 à 2% en poids d'extrait sec de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante par rapport au poids total de la composition.

Dans des formes d'applications particulières de type balneothérapie, on peut également envisager des applications de lysats bactériens natifs ou reconstitués en des proportions supérieures pouvant atteindre 100%.

Ces compositions peuvent contenir l'extrait de Vitreoscilla filiformis sous forme de dispersion dans un véhicule approprié tel que, par exemple, l'eau, les solvants organiques, les corps gras y compris les huiles, et leurs mélanges, notamment des émulsions.

Une composition particulière selon l'invention comprend un extrait cellulaire de Vitreoscilla filiformis et un acide ascorbique associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.

Acide ascorbique (vitamine C) et dérivés stabilisés par un polymère Des exemples de tels composés sont notamment décrits dans la demande EP- 1 374 852.

On utilise selon l'invention l'acide ascorbique ou un de ses dérivés stabilisés par un polymère, de préférence l'acide ascorbique stabilisé par un copolymère.

Parmi les dérivés de l'acide ascorbique, on peut citer à titre d'exemple et de façon non limitative : les sels ou les esters, en particulier le 5,6-di-O-diméthylsilylascorbate (vendu par la Sté Exsymol sous la référence PRO-AA), le sel de potassuim du dl-alpha-tocopheryl-dl-ascorbyl-phosphate (vendu par la Sté Senju Pharmaceutical sous la référence SEPIVITAL EPC), l'ascorbyl phosphate de magnésium, l'ascorbyl phosphate de sodium (vendu par la Sté Roche sous la référence Stay-C 50) et l'ascorbyl glucoside (vendu par la société Hayashibara), les dérivés silylés, les dérivés phosphoriques, ou des extraits de plantes à forte teneur en acide ascorbique.

La quantité efficace d'acide ascorbique ou de ses dérivés utilisable selon l'invention est bien entendu celle qui est nécessaire, en association avec l'extrait de bactérie filamenteuses non photosynthétique non fructifiante, pour obtenir les effets attendus selon l'invention, à savoir un effet sur la synthèse de collagène. Pour donner un ordre de grandeur, cette quantité représente préférentiellement de 0,001% à 20% du poids total de la composition, préférentiellement de 0,1% à 15% du poids total de la composition et avantageusement de 3% à 10% du poids total de la composition.

Par copolymère d'anhydride maléique, on entend selon l'invention tout polymère obtenu par copolymérisation d'un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et d'un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone comme l'octadécène, l'éthylène, l'isobutylène, le diisobutylène, l'isooctylène, et le styrène, les comonomères anhydride maléique étant optionnellement hydrolysés, partiellement ou totalement. De préférence on utilisera des polymères hydrophiles, c'est à dire des polymères ayant une solubilité dans l'eau supérieure ou égale à 2 g/I.

Des copolymères convenant plus particulièrement à la mise en oeuvre de l'invention sont des copolymères obtenus par copolymérisation d'une ou plusieurs unités anhydride maléique et dont les unités anhydride maléiques sont sous forme hydrolysée, et préférentiellement sous forme de sels alcalins, par exemple sous forme de sels d'ammonium, de sodium, de potassium ou de lithium.

Dans un aspect avantageux de l'invention, le copolymère possède une fraction molaire en unité anhydride maléique comprise entre 0,1 et 1, et plus préférentiellement entre 0,4 et 0,9.

Selon un aspect avantageux de l'invention le rapport molaire entre l'équivalent unité anhydride maléique et l'acide ascorbique ou un de ses dérivés varie entre 0,005 et 10 et préférentiellement entre 0,01 et 1.

La masse molaire moyenne en poids des copolymères d'anhydride maléique sera avantageusement comprise entre 1000 et 500 000 et de préférence entre 1000 et 50 000.

De façon préférentielle on utilisera un copolymère de styrène et d'anhydride maléique dans un rapport 50/50. En particulier, on utilisera un copolymère de styrène et d'anhydride maléique dans un rapport 50/50 sous forme de sel d'ammonium ou de sodium.

On pourra utiliser par exemple, le copolymère styrène/anhydride maléique (50/50), sous forme de sel d'ammonium à 30% dans l'eau vendu sous la référence SMA1000H par la société ATOFINA ou le copolymère styrène/anhydride maléique (50/50), sous forme de sel de sodium à 40% dans l'eau vendu sous la référence SMA1000HNa par la société ATOFINA.

Le copolymère est présent dans la composition selon l'invention en quantité suffisante pour stabiliser l'acide ascorbique ou un de ses dérivés. De préférence le copolymère est présent à une concentration comprise entre 0,1 et 40 % en poids, par rapport au poids total de la phase aqueuse, et plus particulièrement à une concentration comprise entre 0,1 et 10 % en poids, par rapport au poids total de la phase aqueuse.

Galénique Les compositions utilisées selon l'invention sont destinées à une application topique sur la peau et/ou ses phanères et contiennent donc un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec les tissus cutanés.

Ce milieu physiologiquement acceptable peut être plus particulièrement constitué d'eau et éventuellement d'un solvant organique physiologiquement acceptable choisi par exemple parmi les alcools inférieurs comportant de 1 à 8 atomes de carbone et en particulier de 1 à 6 atomes de carbone, comme l'éthanol, l'isopropanol, le propanol, le butanol ; les polyéthylène glycols ayant de 6 à 80 unités oxyde d'éthylène ; les polyols comme le propylène glycol, l'isoprène glycol, le butylène glycol, la glycérine, le sorbitol.

Quand le milieu physiologiquement acceptable est un milieu aqueux, il a généralement un pH compatible avec la peau, allant de préférence de 3 à 9 et mieux de 3,5 à 7,5.

Le milieu physiologiquement acceptable dans lequel les composés selon l'invention peuvent être employés, ainsi que ses constituants, leur quantité, la forme galénique de la composition et son mode de préparation, peuvent être choisis par l'homme du métier sur la base de ses connaissances générales en fonction du type de composition recherchée. De façon préférentielle, la composition cosmétique utilisée selon la présente invention est adaptée à une application topique. La composition selon l'invention peut être une composition de soin ou une composition de maquillage. Pour une application topique sur la peau, la composition peut avoir la forme notamment de solution aqueuse ou huileuse; de dispersion du type lotion ou sérum; d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H); de suspensions ou émulsions de consistance molle, semi-solide ou solide du type crème ou gel, ou encore d'émulsions multiples (E/H/E ou H/E/H), de microcapsules ou microparticules; de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique.

Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse ou d'un gel. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide ou semi-solide, et par exemple sous forme de stick, de masque, de patch ou de lingette imprégnée. Elle peut être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau.

Pour renforcer les effets anti-âge et/ou fermeté et/ou élasticité de la composition selon l'invention, celle-ci peut renfermer, outre l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et l'acide ascorbique ou un de ses dérivés éventuellement stabilisés par des polymères tels que décrits précédemment, au moins un composé choisi parmi : les agents desquamants et/ou hydratants ; les agents dépigmentants ou propigmentants ; les agents anti-glycation ; les agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou épidermiques et/ou empêchant leur dégradation; les agents stimulant la prolifération des fibroblastes et/ou des kératinocytes ou stimulant la différenciation des kératinocytes ; les agents myorelaxants ; les agents anti-pollution et/ou anti-radicalaire et/ ou anti-oxydants ; les agents amincissants ; les agents agissant sur la microcirculation ; les agents agissant sur le métabolisme énergétique des cellules ; les agents tenseurs ; les agent procontractants ; et leurs mélanges.

Ainsi, la composition selon l'invention pourra notamment contenir au moins un actif choisi parmi : les aûhydroxyacides ; l'acide salicylique et ses dérivés tels que l'acide n-octanoyl-5-salicylique ; les Vitamines ; l'HEPES ; la procystéine ; l'O-octanoyl-6-D-maltose ; le sel disodique d'acide méthyl glycine diacétique ; les céramides ; les stéroïdes tels que la diosgénine et les dérivés de la DHEA ; l'acide kojique ; le N-éthyloxycarbonyl-4-paraaminophénol ; les composés de la famille des N-acylamino-amides décrits dans la demande WO-01/94381 et en particulier l'acide {2-[acétyl-(3-trifluorométhyl-phényl)-amino]-3-méthyl-butyrylamino} acétique ; les extraits de myrtille ; les rétinoïdes et en particulier le rétinol et ses esters ; les polypeptides et leurs dérivés acylés ; les phytohormones ; les extraits de levure Saccharomyces cerevisiae ; les extraits d'algues ; les extraits de soja, de lupin, de maïs et/ou de pois ; l'alvérine et ses sels, en particulier le citrate d'alvérine ; le resvératrol ; les caroténoïdes et en particulier le lycopène ; le tocophérol et ses esters ; le co-enzyme Q10 ou ubiquinone, l'idébénone ; les xanthines et en particulier la caféine et les extraits naturels en contenant ; les extraits de petit houx et de marron d'Inde ; et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.

La composition selon l'invention peut en outre contenir au moins un filtre UVA et/ou UVB. Les filtres solaires peuvent être choisis parmi les filtres organiques, les filtres inorganiques et leurs mélanges. Comme exemples de filtres organiques actifs dans l'UV-A et/ou l'UV-B, on peut citer notamment, désignés ci-dessous par leur nom CTFA :

- les dérivés de l'acide para-aminobenzoïque : PABA, Ethyl PABA, Ethyl Dihydroxypropyl 35 PABA, Ethylhexyl Diméthyl PABA vendu notamment sous le nom ESCALOL 507 par ISP, Glyceryl PABA, PEG-25 PABA vendu sous le nom UVINUL P25 par BASF,30 - les dérivés salicyliques : Homosalate vendu sous le nom EUSOLEX HMS par RONA/EM INDUSTRIES, Ethylhexyl Salicylate vendu sous le nom NEO HELIOPAN OS par HAARMANN et REIMER, Dipropyleneglycol Salicylate vendu sous le nom DIPSAL par SCHER, TEA Salicylate, vendu sous le nom NEO HELIOPAN TS par HAARMANN et REIMER, - les dérivés du dibenzoylméthane : Butyl Methoxydibenzoylmethane vendu notamment sous le nom commercial PARSOL 1789 par HOFFMANN LA ROCHE, Isopropyl Dibenzoylmethane, - les dérivés cinnamiques : Ethylhexyl Methoxycinnamate vendu notamment sous le nom commercial PARSOL MCX par HOFFMANN LA ROCHE, Isopropyl Methoxy cinnamate, Isoamyl Methoxy cinnamate vendu sous le nom commercial NEO HELIOPAN E 1000 par HAARMANN et REIMER, Cinoxate, DEA Methoxycinnamate, Diisopropyl Methylcinnamate, Glyceryl Ethylhexanoate Dimethoxycinnamate, - les dérivés de 13,13'-diphénylacrylate: Octocrylene vendu notamment sous le nom commercial UVINUL N539 par BASF, Etocrylene, vendu notamment sous le nom commercial UVINUL N35 par BASF, - les dérivés de la benzophénone : Benzophenone-1 vendu sous le nom commercial UVINUL 400 par BASF, Benzophenone-2 vendu sous le nom commercial UVINUL D50 par BASF, Benzophenone-3 ou Oxybenzone, vendu sous le nom commercial UVINUL M40 par BASF, Benzophenone-4 vendu sous le nom commercial UVINUL MS40 par BASF, Benzophenone-5, Benzophenone-6 vendu sous le nom commercial HELISORB 11 par NORQUAY, Benzophenone-8 vendu sous le nom commercial SPECTRA-SORB UV-24 PAR AMERICAN CYANAMID, Benzophenone-9 vendu sous le nom commercial UVINUL DS-49 par BASF, Benzophenone-12, - les dérivés du benzylidène camphre : 3-Benzylidene camphor, 4-Methylbenzylidene camphor vendu sous le nom EUSOLEX 6300 par MERCK, Benzylidene Camphor Sulfonic Acid, Camphor Benzalkonium Methosulfate, Terephthalylidene Dicamphor Sulfonic Acid, Polyacrylamidomethyl Benzylidene Camphor, - les dérivés du phényl benzimidazole : Phenylbenzimidazole Sulfonic Acid vendu notamment sous le nom commercial EUSOLEX 232 par MERCK, Benzimidazilate vendu sous le nom commercial commercial NEO HELIOPAN AP par HAARMANN et REIMER, - les dérivés de la triazine : Anisotriazine vendu sous le nom commercial TINOSORB S 35 par CIBA GEIGY, Ethylhexyl triazone vendu notamment sous le nom commercial UVINUL T150 par BASF, Diethylhexyl Butamido Triazone vendu sous le nom commercial UVASORB HEB par SIGMA 3V, - les dérivés du phényl benzotriazole : Drometrizole Trisiloxane vendu sous le nom SILATRIZOLE par RHODIA CHIMIE , - les dérivés anthraniliques : Menthyl anthranilate vendu sous le nom commercial NEO HELIOPAN MA par HAARMANN et REIMER, - les dérivés d'imidazolines : Ethylhexyl Dimethoxybenzylidene Dioxoimidazoline Propionate, - les dérivés du benzalmalonate : Polyorganosiloxane à fonctions benzalmalonate vendu sous la dénomination commerciale PARSOL SLX par HOFFMANN LA ROCHE, les dérivés d'Hexyl benzoate : diethylamino hydroxybenzoyl hexyl benzoate ou Uvinul A Plus de BASF et leurs mélanges.

Les filtres UV organiques plus particulièrement préférés sont choisis parmi les composés suivants : - Ethylhexyl Salicylate, - Butyl Methoxydibenzoylmethane, - Ethylhexyl Methoxycinnamate, - Octocrylene, -Phenylbenzimidazole Sulfonic Acid, - Terephthalylidene Dicamphor Sulfonic,. - Benzophenone-3, - Benzophenone-4, - Benzophenone-5, -4-Methylbenzylidene camphor, - Benzimidazilate, - Anisotriazine, -Ethylhexyl triazone, - Diethylhexyl Butamido Triazone, - Methylene bis-Benzotriazolyl Tetramethylbutylphenol, - Drometrizole Trisiloxane, et leurs mélanges.

Les filtres inorganiques utilisables dans la composition selon l'invention sont en particulier les nanopigments (taille moyenne des particules primaires : généralement entre 5 nm et 100 nm, de préférence entre 10 nm et 50 nm) d'oxydes métalliques enrobés ou non comme par exemple des nanopigments d'oxyde de titane (amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), de fer, de zinc, de zirconium ou de cérium. Des agents d'enrobage sont par ailleurs la silice, l'alumine, et/ou le stéarate d'aluminium. De tels nanopigments d'oxydes métalliques, enrobés ou non enrobés, sont en particulier décrits dans les demandes de brevets EP-A-0518772 et EP-A-0518773.

De façon connue, la composition de l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans les domaines cosmétique et dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les pigments, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés, et par exemple de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse ou dans la phase aqueuse. Ces adjuvants, ainsi que leurs concentrations, doivent être tels qu'ils ne nuisent pas auxpropriétés avantageuses de l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante.

Comme huiles utilisables dans la composition de l'invention, on peut citer par exemple : - les huiles hydrocarbonées d'origine animale, telles que le perhydrosqualène ; - les huiles hydrocarbonées d'origine végétale, telles que les triglycérides liquides d'acides gras comportant de 4 à 10 atomes de carbone et la fraction liquide du beurre de karité ; - les esters et les éthers de synthèse, notamment d'acides gras, comme les huiles de formules R'COOR2 et R'OR2 dans laquelle R' représente le reste d'un acide gras comportant de 8 à 29 atomes de carbone, et R2 représente une chaîne hydrocarbonée, ramifiée ou non, contenant de 3 à 30 atomes de carbone, comme par exemple l'huile de Purcellin, l'isononanoate d'isononyle, le myristate d'isopropyle, le palmitate d'éthyl-2-hexyle, le stéarate d'octyl-2-dodécyle, l'érucate d'octyl-2-dodécyle, l'isostéarate d'isostéaryle ; les esters hydroxylés comme l'isostéaryl lactate, l'octylhydroxystéarate, l'hydroxystéarate d'octyldodécyle, le diisostéaryl-malate, le citrate de triisocétyle, les heptanoates, octanoates, décanoates d'alcools gras ; les esters de polyol, comme le dioctanoate de propylène glycol, le diheptanoate de néopentylglycol et le diisononanoate de diéthylèneglycol ; et les esters du pentaérythritol comme le tétraisostéarate de pentaérythrityle ; - les hydrocarbures linéaires ou ramifiés, d'origine minérale ou synthétique, tels que les huiles de paraffine, volatiles ou non, et leurs dérivés, la vaseline, les polydécènes, le polyisobutène hydrogéné tel que l'huile de parléam ; - les alcools gras ayant de 8 à 26 atomes de carbone, comme l'alcool cétylique, l'alcool stéarylique et leur mélange (alcool cétylstéarylique), l'octyldodécanol, le 2-butyloctanol, le 2-hexyldécanol, le 2-undécylpentadécanol, l'alcool oléique ou l'alcool linoléique ; - les huiles fluorées partiellement hydrocarbonées et/ou siliconées comme celles décrites dans le document JP-A-2-295912 ; - les huiles de silicone comme les polyméthylsiloxanes (PDMS) volatiles ou non à chaîne siliconée linéaire ou cyclique, liquides ou pâteux à température ambiante, notamment les cyclopolydiméthylsiloxanes (cyclométhicones) telles que la cyclohexasiloxane ; les polydiméthylsiloxanes comportant des groupements alkyle, alcoxy ou phényle, pendant ou en bout de chaîne siliconée, groupements ayant de 2 à 24 atomes de carbone ; les silicones phénylées comme les phényltriméthicones, les phényldiméthicones, les phényltriméthylsiloxydiphényl-siloxanes, les diphényl-diméthicones, les diphénylméthyldiphényl trisiloxanes, les 2-phényléthyltriméthyl-siloxysilicates, et les polyméthylphénylsiloxanes ; - leurs mélanges.

Comme émulsionnants et coémulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple les émulsionnants H/E tels que les esters d'acide gras et de polyéthylène glycol, notamment le stéarate de PEG-100, et les esters d'acide gras et de glycérine tels que le stéarate de glycéryle, ainsi que les émulsionnants E/H tels que le poly(méthylcétyl)(diméthyl)méthylsiloxane oxyéthyléné disponible sous la dénomination commerciale ABIL WE09 auprès de la société Degussa Goldschmidt ou le mélange de stéarate d'éthylène glycol acétyle et de tristéarate de glycéryle commercialisé par la société Guardian sous la dénomination commerciale UNITWIX.

Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer en particulier les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras, la silice hydrophobe et les polyéthylènes.

Comme charges qui peuvent être utilisées dans la composition de l'invention, on peut citer par exemple, outre les pigments, la poudre de silice ; le talc ; l'amidon réticulé par l'anhydride octénylsuccinique commercialisé par la société National Starch sous la dénomination DRY FLO PLUS (28-1160) ; les particules de polyamide et notamment celles vendues sous la dénomination ORGASOL par la société Atochem ; les poudres de polyéthylène ; les micro-sphères à base de copolymères acryliques, telles que celles en copolymère diméthacrylate d'éthylène glycol/ methacrylate de lauryle vendues par la société Dow Corning sous la dénomination de POLYTRAP ; les poudres expansées telles que les microsphères creuses et notamment, les microsphères commercialisées sous la dénomination EXPANCEL par la société Kemanord Piast ou sous la dénomination MICROPEARL F 80 ED par la société Matsumoto ; les microbilles de résine de silicone telles que celles commercialisées sous la dénomination TOSPEARL par la société Toshiba Silicone ; et leurs mélanges. Ces charges peuvent être présentes dans des quantités allant de 0 à 20 % en poids et de préférence de 1 à 10 % en poids par rapport au poids total de la composition ou de la préparation selon l'invention.

L'invention porte également sur l'utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et d'au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique ou un de ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans une composition contenant un milieu physiologiquement acceptable, comme association destinée à améliorer la protection et/ou la stimulation de la synthèse de collagène.

Par `améliorer la protection', on entend selon l'invention prévenir et/ou lutter plus efficacement contre la dégradation du collagène.

En particulier, cette association permet d'obtenir un effet synergique sur la protection et/ou la stimulation de la synthèse de collagène.

L'invention porte également sur l'utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et d'au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique ou un de ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans une composition contenant un milieu physiologiquement acceptable, comme association destinée à prévenir et/ou lutter contre la perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau.

En particulier, cette association est destinée à prévenir et/ou traiter la peau molle et/ou flasque et autres signes cutanés du vieillissement.

Par `signes cutanés du vieillissement', on entend notamment selon l'invention un amincissement de la peau et en particulier du derme, la formation de rides et ridules, l'aspect d'une peau sèche et/ou rugueuse, une diminution de la souplesse et/ou de la tonicité et/ou de la fermeté et/ou de l'élasticité de la peau.

L'invention porte également sur l'utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et d'au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique ou un de ses dérivés, comme association destinée à prévenir et/ou traiter la formation des vergetures.

L'invention concerne également l'utilisation cosmétique, dans une composition contenant au moins un milieu physiologiquement acceptable, d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante comme agent destiné à sensibiliser les cellules de la peau, et en particulier les fibroblastes, à l'action d'un agent augmentant la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation.

L'agent augmentant l'expression de la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation peut être présent dans la même composition que l'extrait de bactérie ou dans une composition distincte qui peut être appliquée avant, simultanément ou après ladite composition contenant l'extrait de bactérie.

Par `sensibiliser les cellules de la peau', on entend selon l'invention la capacité dudit extrait de bactérie à rendre les cellules de la peau, et en particulier les fibroblastes, plus réceptives à l'action d'autres actifs et en particulier à un agent augmentant la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation, tel que l'acide ascorbique ou un de ses dérivés.

On dira que ledit extrait de bactérie est capable de potentialiser et/ou augmenter la réponse des cellules cutanées à l'agent augmentant la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation.

La Demanderesse a en effet montré que l'on pouvait augmenter, en particulier de façon synergique, la synthèse de collagène, en associant au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et un acide ascorbique ou un de ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène.

Comme autre actif connu pour augmenter la synthèse de collagène et/ou prévenir sa dégradation, susceptible d'être utilisé selon l'invention, outre l'acide ascorbique ou l'un de ses dérivés éventuellement associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs comonomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, on peut également citer : les extraits de Centella asiatica ; les asiaticosides et dérivés ; les peptides de synthèse tels que la iamin, le biopeptide CL ou le palmitoyloligopeptide ou le Palmitoyl pentapeptide- 3 commercialisé par la société SEDERMA ; les peptides extraits de végétaux, tels que l'hydrolysat de soja commercialisé par la société COLETICA sous la dénomination commerciale Phytokine ; les hormones végétales telles que les auxines ; les lignanes et leurs dérivés ; l'acide cinnamique et ses dérivés tels que ceux décrits dans la demande EP-0 938 891 ; les composés hydroxystilbènes et leurs dérivés, en particulier le 3,4',5-trihydroxystilbène ou resvératrol, tels que décrits dans la demande EP-0 953 346 ; les rétinoïdes et dérivés, les oligopeptides et les lipopeptides, les lipoaminoacides, un extrait de malt; les extraits de myrtille ou de romarin ; le lycopène ; les isoflavones, leurs dérivés ou les extraits de soja, de trèfle rouge, de lin, de kakkon ou de sauge en contenant; la dipalmitoyl hydroxyproline, et leurs mélanges.

L'association selon l'invention permet en outre de diminuer la quantité nécessaire d'acide ascorbique ou un de ses dérivés pour obtenir un même effet sur la synthèse de collagène.

De préférence, l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante utilisable selon l'invention est choisi parmi un extrait cellulaire, le surnageant dudit extrait cellulaire et une fraction active dudit extrait cellulaire enrichie en lipopolysaccharides.

Les extraits de bactérie utilisables selon l'invention sont décrits précédemment dans la description.

En particulier, l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante est un extrait de Vitreoscilla filiformis, de préférence un extrait cellulaire de Vitreoscilla filiformis.

De préférence, l'extrait de bactérie est présent dans la composition en une quantité allant de 0,001 à 10%, en particulier de 0, 005 à 2%, en poids d'extrait sec de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante par rapport au poids total de la composition.

L'acide ascorbique et ses dérivés sont également décrits précédemment.

Parmi les dérivés de l'acide ascorbique, on peut citer à titre d'exemple et de façon non limitative : les sels ou les esters, en particulier le 5,6-di-O-diméthylsilylascorbate (vendu par la Sté Exsymol sous la référence PRO-AA), le sel de potassuim du dl-alphatocopheryl-dl-ascorbyl-phosphate (vendu par la Sté Senju Pharmaceutical sous la référence SEPIVITAL EPC), l'ascorbyl phosphate de magnésium, l'ascorbyl phosphate de sodium (vendu par la Sté Roche sous la référence Stay-C 50) et l'ascorbyl glucoside (vendu par la société Hayashibara) ; les dérivés silylés ou phosphoriques ; des extraits végétaux riches en acide ascorbique.

L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique de la perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau, comprenant l'application sur la peau, d'une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et au moins un acide ascorbique ou un de ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.

Le procédé est notamment destiné à prévenir et/ou traiter la peau molle et/ou flasque et autres signes cutanés du vieillissement.

Par `signes cutanés du vieillissement', on entend notamment selon l'invention un amincissement de la peau et en particulier du derme, la formation de rides et ridules, l'aspect d'une peau sèche et/ou rugueuse, une diminution de la souplesse et/ou de la tonicité et/ou de la fermeté et/ou de l'élasticité de la peau. Dans le cadre de ce procédé, la composition peut être, par exemple, une composition de soin ou une composition de maquillage.

L'invention porte également sur un procédé cosmétique pour prévenir et/ou traiter la 10 formation des vergetures comprenant l'application sur la peau, d'une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et au moins un acide ascorbique ou un de ses dérivés.

15 Les compositions selon l'invention sont avantageusement destinées à être appliquées sur les zones du visage et/ou du corps, en particulier les zones marquées par une perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau, et/ou sur les personnes présentant une perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau.

En particulier, la composition pourra être appliquée sur le visage, le ventre et les cuisses.

L'application des compositions selon l'invention pourra être réalisée de façon quotidienne, le matin et/ou le soir.

L'invention va maintenant être décrite en référence aux exemples suivants donnés à titre illustratif et non limitatif. Dans ces exemples, sauf indication contraire, les quantités sont exprimées en pourcentages pondéraux.

EXEMPLES Exemple 1 ù Préparation d'un extrait de Vitreoscilla filiformis a) Extrait cellulaire et surnageant 20 25 30 35 La souche de Vitreoscilla fil/for/mis (ATCC 15551) est mise en culture selon le procédé décrit dans la demande de brevet WO-A-94-02158. Il s'agit d'un procédé de culture en continu. La culture s'effectue à 26 C durant au moins 48 heures jusqu'à l'obtention d'une concentration cellulaire convenable correspondant à une densité optique à 600 nm supérieure ou égale à 1,5. On repique la souche à 2 % V/V dans du milieu neuf durant 48 heures environ jusqu'à l'obtention d'une culture stable. Un Erlenmeyer de 1 litre contenant 200 ml de milieu neuf est alors ensemencé avec 4 ml de la culture précédente. La culture en Erlenmeyer s'effectue à 26 C sur une table de culture agitée à 100 tours/minutes. Le pied de cuve ainsi obtenu sert d'inoculum à un fermenteur de 50 litres. La croissance s'effectue à 26 C, pH 7, 100 tours/minute et pO2>_ 15 %. Après 30 heures de croissance, la biomasse est transférée dans un fermenteur de 3000 litres utiles, pour être cultivée dans les mêmes conditions. Après 48 heures de croissance on récolte les cellules en continu. La biomasse est alors concentrée 50 fois environ par centrifugation. Les cellules obtenues sont alors congelées au fur et à mesure de la culture continue. Ces cellules peuvent être utilisées en l'état après décongélation (extrait cellulaire non stabilisé) ou bien être stabilisées par autoclavage à 121 C durant 20 à 40 minutes (extrait cellulaire stabilisé). Les cellules ont alors éclaté durant la stérilisation en libérant le cytosol et en agglomérant les protéines ainsi que les parois. Le produit obtenu est alors biphasique. La phase liquide surnageante peut être filtrée à 0,22 m pour éliminer les particules (`surnageant'). L'extrait de bactérie, sous forme d'extrait cellulaire (stabilisé ou non) ou de surnageant, est utilisable en l'état (forme aqueuse) ou peut être lyophilisé suivant les techniques classiques (forme lyophilisée).

Selon un autre mode de réalisation, on prépare un extrait contenant des lipopolysaccharides, tel que décrit ci-dessous. b) Fraction active contenant des Iipopolvsaccharides (LPS) (M. A Apicella, J. McLeod Gritliss, and H. Schneider, 1994 Methods in enzymology, Vol 235, (242-252))

Différentes méthodes permettent d'isoler la fraction d'intérêt contenant les lipopolysaccharides : - la méthode modifiée phénol-eau (Johnson et Perry, 1975, Can J. Microbial, 22, p 29) décrite dans le paragraphe 1 ci-dessous ; - la méthode de Darveau et Hancock (1983, J.Bact. 155, p 831) qui utilise le SDS pour solubiliser les lipopolysaccharides, ce qui permet de les séparer du peptidoglycane insoluble, cette méthode est décrite dans le paragraphe 2 ci-dessous. Les protéines sont éliminées de la fraction contenant les lipopolysaccharides par une digestion enzymatique (Pronase), la fraction de lipopolysaccharides est ensuite précipitée à l'éthanol. -la méthode d'extraction utilisant la protéinase K décrite dans le paragraphe 3 ci-dessous. 1. Technique au phénol modifiée 1.1. Préparation des lipopolysaccharides bruts A 5 g de bactéries Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551) congelées ou séchées à l'acétone sous forme de poudre sont ajoutés 25 ml de tampon 50 mM phosphate de Na pH 7 contenant 5 mM EDTA, le mélange est agité. Sont alors réalisées les étapes suivantes : - ajout de 100 mg de lysozyme, agitation pendant 1 nuit a 4 C, puis incubation à 37 C pendant 20 min ; - centrifugation pendant 3 min à basse vitesse, -ajustement du volume à 100 ml avec de tampon 50 mM phosphate de Na pH 7 contenant 20 mM MgCl2 ; - ajout de Rnase, Dnase (à 1 pg/ml), incubation pendant 60 min à 37 C puis pendant 60 min a 60 C ; - la suspension bactérienne est placée dans un bain à 70 C, on lui ajoute un volume égal de phénol 90% (w/v) préchauffé à 70 C, - elle est refroidie par agitation pendant 15 min dans un bain glacé, - centrifugation à 18.000g pendant 15 min à 4 C. Une interface marquée se fait entre les phases aqueuse et phénolique. La phase aqueuse contient les lipopolysaccharides, après dialyse contre de l'eau, cette phase est lyophilisée.

1.2. Purification des lipopolysaccharides bruts 20 à 35 mg des lipopolysaccharides/ml d'eau distillée sont centrifugés à basse vitesse (1100 g, 5 min). Le surnageant obtenu est alors centrifugé a haute vitesse (105.000g, 16h, 4 C). Le culot est suspendu dans de l'eau, la centrifugation est répétée jusqu'à obtenir des lipopolysaccharides purifiés. Le culot final est resuspendu dans de l'eau et lyophilisé. 2. Méthode au SDS A 500 mg de cellules bactériennes de Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551) séchées, sont ajoutés 15 ml de tampon 10 mM Tris-HCI pH 8,2 mM MgCl2, 100 pg/ml Dnase et 25 pg/ml Rnase. On soumet le mélange sous une presse de French 2 fois, 15.000 psi, puis sonication, 2 fois à 6 W, 30 sec. On applique ensuite les étapes suivantes : - ajout de Dnase 200 pg final et Rnase 50 pg final, incubation 37 C 2 h, - ajout de 5 ml 0,5M EDTA dans 10 mM Tris-HCI pH 8, 2,5 ml 20% SDS dissous dans 10 mM Tris-HCI et 2,5 10 mM Tris-HCI pH 8. Le volume final obtenu est de 25 ml contenant 0,1 M EDTA; 2% SDS et 10 mM Tris-HCI pH 9,5, le mélange est vortexé et centrifugé à 50000g pendant 30 min à 20 C.

Le surnageant est décanté. Le sédiment qui contient le peptidoglycane est écarté. La pronase est ajoutée au surnageant a une concentration finale de 200 pM, suit une incubation à 37 C pendant 1 nuit, sous agitation (si un précipité se forme, l'enlever en centrifugeant 1000g 10 min). Les lipopolysaccharides sont précipités à l'éthanol 95% (v/v) contenant 0,376M de MgCl2 -70 C, puis centrifuger (12.000g, 15 min, 4 C). Le culot obtenu est suspendu dans 25 ml 2% SDS, 0,1 M EDTA, 10 mM Tris- HCI pH 8, soniqué puis incubé à 85 C, 10 à 30 min. Après refroidissement, la solution est ajustée à pH 9.5. La Pronase est ajoutée à 25 pg/ml, incubation à 37 C, 1 nuit, sous agitation.

Les lipopolysaccharides sont à nouveau précipités à l'éthanol 95% (v/v) contenant 0,376M de MgCl2, puis centrifugés (12.000g 15 min 4 C). Pour enlever les cristaux insolubles Mg 2±EDTA, le culot est resuspendu dans 15 ml de tampon 10 mM Tris-HCI pH 8, soniqué et centrifugé (1.000g , 5 min). Le surnageant est alors centrifugé (200.000g, 2h 15 C) en présence de 25 mM MgCl2. Le culot qui contient les lipopolysaccharides est suspendu dans de l'eau distillée.

3. Extraction des lipopolysaccharides utilisant la protéinase K (Zanen and, 1988, FEMS Microbiology Letters 50, 85-88).

A 1,5 g de cellules de Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551) lyophilisées, sont ajoutés 30 ml de tampon contenant 2% SDS, 5% 2-mercaptoéthanol, 10% glycérol, et 0,25M Tris-HCI pH 6,8. Le mélange est incubé 15 à 30 min, 100 C, centrifugé (10,000 g, 30 min, 4 C). Le surnageant (20 ml) est récupéré, on ajoute 12 mg de protéinase K, on incube a 60 C pendant 1 h et on précipite les lipopolysaccharides à l'éthanol 95% (v/v) contenant 0,376M de MgCl2, -20 C pendant une nuit, reprécipiter les lipopolysaccharides à l'éthanol 95% (v/v) dans les mêmes conditions que précédemment, le culot obtenu est suspendu dans 10 ml d'eau, dialysé puis lyophilisé.

Exemple 2 : Mise en évidence de l'effet de l'association entre un extrait de bactérie et la vitamine C SMA sur la synthèse de collagène L'étude a été réalisée à partir d'un pool de fibroblastes dermiques humains normaux. Ces cellules ont été cultivées à 37 C et 5% de CO2 dans un milieu DMEM additionné de L-glutamine (2 mM), d'un mélange pénicilline/streptomycine (50 Ul/ml, 50 pg/ml) et de sérum de veau foetal SVF (10 %). Une étude de cytotoxicité préalable par un test du MTT a été réalisée afin de définir les concentrations à tester non cytotoxiques.

A 80 % de confluence, le milieu de culture a été remplacé par du milieu DMEM à 1 % de SVF contenant ou non (témoin) les produits ou mélanges à l'essai ou les références (vitamine C). Les cellules ont ensuite été incubées à 37 C pendant 72 heures. Chaque condition expérimentale a été réalisée en triplicata. Après incubation, les milieux ont été prélevés et le dosage procollagène type I a été réalisé sur un échantillon de milieu à l'aide d'un kit de dosage ELISA spécifique et selon les directives du fournisseur (Procollagen Type I C-peptide EIA Kit, Bio-Whittaker MK 101).

Les résultats de cette étude sont reportés dans le tableau ci-dessous. Traitement Concentration Procollagène sd n % du p (ng/ml) témoin Témoin -94 9 6 100 - TGFI3 10 ng/ml 1506 287 3 1599 P<0.01 Vitamine C 20 pg/ml 2247 218 3 2385 P < 0.01 Extrait de 0.01 % 104 11 3 110 P > 0.05 bactérie* Vitamine C 0.1 % 2437 226 3 2587 P < 0.01 SMA** Mélange Plancton 3366 435 3 3572 P < 0.01 extrait de (0.01 % et bactérie*/ vitamine C vitamine C SMA 0.1 %) SMA** *= extrait cellulaire de Vitreoscilla filiformis préparé selon l'exemple 1 a. **= acide ascorbique à 5%/ copolymère styrène/anhydride maléique à 1% (50/50), sous forme de sel de sodium à 40% dans l'eau.

La vitamine C à 20 pg/ml stimule fortement la synthèse fibroblastique de pro-collagène I ; ce résultat valide l'essai. La vitamine C SMA à 0.1% (p/v) stimule également fortement la synthèse fibroblastique de pro-collagène I. On observe dans ces deux conditions un effet maximal correspondant à une augmentation de plus de 2200 % de la synthèse basale de pro-collagène I. C'est un effet maximal qui peut difficilement être amélioré par des concentrations supérieures de vitamine C SMA. L'extrait de Vitreoscilla filiformis, à la concentration de 0.01 % n'a pas d'effet intrinsèque sur la synthèse de collagène.

En revanche, associé à la vitamine C SMA, il permet de stimuler nettement la synthèse de collagène (augmentation de 3200 %, significativement supérieure à celle obtenue en absence de plancton). Cet extrait de bactérie est donc capable de potentialiser l'action de la vitamine C SMA sur la synthèse de collagène.

Exemple 3 : Formulations

Crème H/E On prépare la composition suivante de manière classique pour l'homme du métier. Phase A Eau 18,33 g25 Glycérine

Phase B Sorbitan tristéarate PEG-40 stéarate Cetyl alcohol Glyceryl stéarate Myristyl myristate Ethylhexyl palmitate Hydrogenated polyisobutène Shorea robusta seed butter Butyrospermum parkii (shea butter) fruit Cyclopentasiloxane Phenoxyéthanol3g

0,68 g 1,5 g 3g 2,25 g 1,5 g 1,5 g 2,5 g 1,5 g 0,5 g 7,5 g 1g Phase C Eau 43,94 g Acide ascorbique 5 g Hydroxyde de potassium (50% solution) 1,5 g Copolymère styrène/anhydride maléique, sel de sodium à 40% dans l'eau (SMA1000HNA ATOFINA) 1 g Extrait cellulaire de Vitreoscilla filiformis préparé selon l'exemple 1 1 g

On obtient une crème riche et douce qui permet de lutter contre la perte de fermeté et/ou 25 d'élasticité de la peau.

Claims (22)

REVENDICATIONS

1. Composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, (i) au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et (ii) au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique et ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs comonomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.

2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante est choisi parmi un extrait cellulaire, le surnageant dudit extrait cellulaire ou une fraction active dudit extrait cellulaire enrichie en lipopolysaccharides.

3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante est un extrait de Vitreoscilla filiformis.

4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait cellulaire de Vitreoscilla filiformis et un acide ascorbique associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.

5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait de bactérie est présent dans la composition en une quantité allant de 0,001 à 10%, en particulier de 0,005 à 2%, en poids d'extrait sec de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante par rapport au poids total de la composition.

6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'acide ascorbique ou un de ses dérivés est présent dans la composition en une quantité allant de 0,001% à 20% du poids total de lacomposition, préférentiellement de 0,1% à 15% du poids total de la composition et avantageusement de 3% à 10% du poids total de la composition.

7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les unités anhydride maléique du copolymère sont sous forme hydrolysée, et sous forme de sels alcalins.

8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le copolymère est un copolymère de styrène et d'anhydride maléique dans un rapport 50/50.

9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le copolymère est un copolymère de styrène et d'anhydride maléique dans un rapport 50/50 sous forme de sel d'ammonium ou de sodium.

10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le rapport molaire entre l'équivalent unité anhydride maléique et l'acide ascorbique ou un de ses dérivés varie entre 0,005 et 10.

11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le copolymère est présent à une concentration comprise entre 0,1 et 40 % en poids de la phase aqueuse. 25

12. Utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et d'au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique ou un de ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la 30 vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans une composition cosmétique, comme association destinée à améliorer la protection et/ou la stimulation de la synthèse de collagène.

13. Utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non 35 photosynthétique non fructifiante et d'au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique ou un de ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou20plusieurs co-monomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans une composition cosmétique, comme association destinée à prévenir et/ou lutter contre la perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau.

14. Utilisation cosmétique selon l'une des revendications 12 ou 13, comme association destinée à prévenir et/ou lutter contre les signes cutanés du vieillissement. 10

15. Utilisation cosmétique d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et d'au moins un agent choisi parmi l'acide ascorbique ou un de ses dérivés, dans une composition cosmétique, comme association destinée à prévenir et/ou traiter la formation des vergetures. 15

16. Utilisation cosmétique, dans une composition contenant au moins un milieu physiologiquement acceptable, d'au moins un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante, comme agent destiné à sensibiliser les cellules de la peau à l'action d'un agent augmentant la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation présent dans la même composition ou dans une 20 composition distincte.

17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée en ce que l'agent augmentant la synthèse de collagène et/ou prévenant sa dégradation est choisi parmi l'acide ascorbique ou un de ses dérivés, les extraits de Centella asiatica ; les 25 asiaticosides et dérivés ; des peptides de synthèse tels que la iamin, le biopeptide CL, le palmitoyloligopeptide, le Palmitoyl pentapeptide- 3; des peptides extraits de végétaux tels que des hydrolysats de soja ; les auxines; les lignanes et leurs dérivés ; les rétinoïdes et dérivés, les oligopeptides et les lipopeptides, les lipoaminoacides, un extrait de malt; les extraits de myrtille ou de romarin ; le 30 lycopène ; les isoflavones, leurs dérivés ou les extraits de soja, de trèfle rouge, de lin, de kakkon ou de sauge en contenant; la dipalmitoyl hydroxyproline, et leurs mélanges.

18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 12 à 17, caractérisée en ce 35 que l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante est choisi parmi un extrait cellulaire, le surnageant dudit extrait cellulaire et une fraction active dudit extrait cellulaire enrichie en lipopolysaccharides.5

19. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 12 à 18, caractérisée en ce que l'extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante est un extrait de Vitreoscilla filiformis.

20. Procédé de traitement cosmétique de la perte de fermeté et/ou d'élasticité de la peau, comprenant l'application sur la peau, d'une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et au moins un acide ascorbique ou un de ses dérivés associé à au moins un copolymère d'anhydride maléique comportant un ou plusieurs co-monomères anhydride maléique et un ou plusieurs comonomères choisis parmi l'acétate de vinyle, l'alcool vinylique, la vinylpyrrolidone, les oléfines comportant de 2 à 20 atomes de carbone, et le styrène, dans un milieu physiologiquement acceptable comprenant une phase aqueuse.

21. Procédé selon la revendication 20 visant à prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement.

22. Procédé cosmétique visant à prévenir et/ou traiter la formation de vergetures comprenant l'application sur la peau, d'une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante et au moins un acide ascorbique ou un de ses dérivés.