FR2855749A1 - Procede d'obtention d'un principe actif dote de proprietes de photoprotection, principe actif obtenu et compositions l'incluant - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est un procédé d'obtention d'un principe actif doté de propriétés de photoprotection, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :- solubilisation de poudre de Jasminum, plus particulièrement Jasminum officinale, préférentiellement des fleurs, dans une solution hydroglycolique en milieu basique,- hydrolyses enzymatiques successives ou simultanées en sorte d'extraire les composés phénoliques et glucidiques,- séparation des phases soluble et insoluble par décantation, filtration ou centrifugation, et - concentration de la fraction active.L'invention couvre aussi le principe actif obtenu et les utilisations de ce principe actif.
Description
PROCEbE D'OBTENTION b'UN PRINCIPE ACTIF DOTE bE PROPRIETES bE
PHOTOPROTECTION, PRINCIPE ACTIF OBTENU ET COMPOSITIONS L'INCLUANT
La présente invention a trait à un procédé d'obtention d'un principe actif doté de propriétés de photoprotection.
L'invention couvre aussi le principe actif obtenu et les compositions incluant un tel principe actif.
La durée de vie de la population est en constante augmentation et de plus en plus de personnes prennent soin de paraitre aussi jeunes que possible mais un des éléments qui trahit souvent l'âge est l'aspect de la peau.
be ce fait la peau étant un indicateur sans concession, il est très important d'y porter une grande attention et la recherche se penche sur les mécanismes du 10 vieillissement de l'épiderme en se préoccupant bien sûr du derme qui le supporte et qui lui est intrinsèquement lié.
On sait que le vieillissement de la peau est un processus complexe qui a pour origine des facteurs intrinsèques mais aussi des facteurs extrinsèques incluant génétique, expositions aux stress environnementaux, pollution de l'air, tabac, 15 rayonnement solaire, changements hormonaux ou le métabolisme.
On sait que les rayonnements ultraviolets de type B sont impliqués dans les phénomènes de coup de soleil et d'immunosuppression et sont responsables de nombreux cancers cutanés.
Les rayonnements ultraviolets de type A, la plus importante composante du 20 spectre solaire, participent grandement au vieillissement de la peau. Ces UVA provoquent des réactions de photosensibilisation.
Les rayonnements ultraviolets de façon générale provoquent la formation d'espèces chimiques particulières comme les ROS provenant de la définition anglo saxonne de Reactive Oxygen Species.
Ces ROS incluent l'anion superoxyde (02- ) et le radical hydroxyle (OH ) ainsi que 5 des intermédiaires tels que le peroxyde d'hydrogène (H202) et l'oxygène singulet (102).
En situation non exceptionnelle, ces ROS sont produites en continu et éliminées.
En cas de formation en quantité trop importante, sous les effets d'un stress important, il se produit une intoxication massive de la peau, une accumulation 10 d'élastine et une dégradation du collagène à deux niveaux en interstitiel d'abord mais aussi en activant les métalloprotéinases de la matrice de la peau (MMP) et en inactivant les inhibiteurs de ces mêmes métalloprotéinases (TIMP).
De telles espèces ont la particularité de générer d'importants dommages au niveau de la cellule, notamment l'oxydation des protéines, des lipides ou encore 15 des acides nucléiques.
La peau dispose de mécanismes chimiques et enzymatiques pour lutter contre de telles agressions dont les principaux sont: - intervention d'enzymes spécifiques, notamment la superoxyde dismutase (SOD), la glutation peroxydase (GPX) et la catalase, - intervention de molécules chimiques telles que le glutathion (GSH) et/ou les vitamines, et - piégeage des ions métalliques par des réactions de chélation par exemple.
Ces mécanismes sont débordés dans le cas d'intoxication massive et ce d'autant plus facilement que la personne est âgée.
Une solution, retenue dans le cas de la présente invention, consiste à favoriser les mécanismes existants pour protéger efficacement les cellules, donc la peau, contre les agressions du rayonnement solaire.
Cette solution consiste à limiter l'oxydation des protéines, à protéger l'AbN, à limiter les phénomènes inflammatoires.
Ainsi, la voie enzymatique permet grâce à la superoxyde dismutase de catalyser la réduction de l'anion superoxyde en peroxyde d'hydrogène, moins réactif et ce peroxyde d'hydrogène est à son tour converti en eau et oxygène par la catalase.
Quant à la voie chimique, elle consiste à utiliser le glutathion qui est un tripeptide capable de réagir avec le radical hydroxyle ou l'oxygène singulet.
Le glutathion est un excellent réducteur donneur d'hydrogène. Le glutathion participe aussi à la régénération des vitamines, notamment C et E. Malheureusement, il a été constaté que ces mécanismes naturels sont rapidement débordés sous l'action des rayonnements solaires.
L'invention est maintenant décrite en détail d'abord à travers un procédé d'obtention d'un principe actif issu du Jasmninumn, plus particulièrement Jasminum officinale, ensuite à travers une caractérisation du principe actif lui15 même. Les effets de ce principe actif sont ensuite étudiés.
La description est effectuée suivant un mode de réalisation particulier, non limitatif.
1/ PROCEDE b' OBTENTION DU PRINCIPE ACTIF SELON L INVENTION solubilisation de poudre de Jasninumn, plus particulièrement Jasmninutn 20 officinale, préférentiellement des fleurs, dans une solution hydroglycolique en milieu basique. La solution est composée de O à 50% d'un glycol.
- hydrolyses enzymatiques successives ou simultanées en sorte d'extraire les composés phénoliques et glucidiques avec un taux d'enzymes de O à 2% en milieu légèrement acide, - ajout d'un sulfite ou bisulfite dans une plage de O à 5%, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, filtration ou centrifugation, et - concentration de la fraction active.
2/CARACTERISATION DU PRINCIPE ACTIF OBTENU 2-1/ Taux de matière sèche On pèse 10 9 de produit obtenu par le procédé décrit ci-avant.
On le place à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant.
Le taux de matière sèche obtenu est compris entre 20 et 200 9/I plus particulièrement entre 50 et 85 9/1.
2-2/ Mesure du pH Le pH déterminé par mesure potentiométrique conduit à des valeurs comprises 10 entre 4,0 et 8,0, plus particulièrement entre 5, 0 et 6,0.
2-3/ Détermination de la teneur en sucres totaux Le dosage est effectué par la méthode de Dubois (bubois M et aIl, (1956), Analytical Chemistry, 28, n 3 p 350-356).
La mesure est réalisée en mesurant la densité optique de la coloration prise par 15 les sucres réducteurs en présence d'acide sulfurique concentré.
Cette densité optique est rapportée à une gamme étalon de manoseglucosegalactose.
Les résultats obtenus donnent des taux de sucres compris entre 7 et 80 9/I plus particulièrement entre 19 et 33 9/I.
2-4/ Dosage des composés phénoliques Le procédé de mesure consiste à mesurer la densité optique des composés colorés obtenus à partir des composés phénoliques en présence de ferricyanure de potassium.
La densité étant proportionnelle, on rapporte les valeurs par rapport à une 25 gamme étalon.
Les résultats conduisent à des valeurs de composés phénoliques comprises entre 0,3 et 3,8 9/I notamment entre 0,8 et 1,6 9/I.
La caractérisation des composés phénoliques du principe actif est réalisée par HPLC. La manipulation consiste à utiliser une colonne C18 de diamètre de 3pm avec une pré-colonne, un gradient avec les solvants acétonitrile et une solution d'acide formique à 0,05% et un détecteur DAb à 280 nm.
Le chromatogramme HPLC du principe actif indique entre autres la présence majoritaire des composés: flavonol, caféine, hydroxycinnamiques.
3/ EFFETS DU PRINCIPE ACTIF SUR LES DEFENSES CUTANEES NATURELLES 3-1/ Effet sur l'activité de la catalase du stratum corneum, 10 3-1-1/ Sans soumission aux UVA Le principe actif est formulé à 4 % dans un gel émulsionné contre placebo.
L'étude porte sur l'évaluation de l'activité de la catalase avant et après 14 jours de traitement biquotidien sur des volontaires, sans soumission aux UVA.
L'analyse porte sur les variations obtenues sur la zone traitée par le principe 15 actif selon l'invention et sur la zone traitée par le placebo.
Placebo Principe actif JO J14 JO J14 Moyenne 13 12 9 12 Aen% 80 + 33 % Après 14 jours d'application biquotidienne le principe actif selon la présente invention, formulé à 4%, augmente de plus de 30% I'activité de la catalase du 20 stratum corneumn. La différence des résultats entre la zone traitée avec le principe actif et le placebo est statistiquement significative selon le test de Student.
3-1-2/ Après soumission aux UVA La seconde partie de l'étude consiste à soumettre des volontaires à des radiations UVA et ensuite à traiter ou non les zones irradiées avec le principe actif ou le placebo.
Variation taux de catalose J - 3 J0 Variation du taux d'activité catalase après
UVA
Zone non irradiée non traitée 22 + 4 17 + 2 - 24% Zone irradiée non traitée 16 + 3 2 + 0 - 90% - 66% Zone irradiée placebo 23 + 4 3 + 1 - 85%0 - 61% Zone irradiée principe actif 17 + 3 2 + 0 - 87%o - 63%0 On constate que le taux d'activité catalOse diminue irradiation UVA.
d'environ 60% après Après 4 jours et 7 jours de traitement avec le principe actif selon l'invention, on constate une récupération de l'activité de la catalase. L'efficacité réparatrice est la différence entre le pourcentage de récupération du principe actif et du pourcentage de récupération du placebo.
% de récupération Efficacité J - 3 JO J4 J7 activité catalase réparatrice J4 J7 J4 J7 Zone non irradiée 22 17 17 21 et non traitée Zone irradiée non 16 2 3 4 7% 14% traitée Zone irradiée 23 3 4 6 5% 15%/ placebo Zone irradiée 17 2 5 7 20% 33% 15% 18% principe actif 3-2/ Effet du principe actif sur la viabilité cellulaire après agression UV L'étude porte sur l'activité protectrice du principe actif selon l'invention vis-à5 vis des radiations UVA et UVB sur des cultures cellulaires de kératinocytes humains.
On prépare des cultures de kératinocytes que l'on soumet à des rayonnements UVA de 10 J/cm2 et UVB de 0,15 J/cm2, ceci avec des concentrations de 0,25 %; 0,50 %; 1,00 % et 2,00%.
On obtient les résultats suivants Protection cellulaire /témoin en %0 Principe actif à 0,25% 7 + 2 Principe actif à 0,50% 22 + 3 Principe actif à 1,00% 51 + 6 Principe actif à 2,00% 78 + 7 Le principe actif selon la présente invention est particulièrement efficace pour préserver la viabilité cellulaire même après un stress oxydatif important combinant UVA et UVB. Ce taux de préservation atteint 78 % pour 2 % de concentration en principe actif 3-3/ Effet du principe actif sur l'oxydation des protéines L'oxydation des protéines est un indicateur des effets néfastes des radicaux libres sur les protéines, engendrant une perte de fonctionnalité.
Un pool de fibroblastes est divisée en trois cultures subissant des traitements 10 différents: Une première partie des fibroblastes est conservée comme témoin sans irradiation Une deuxième partie est traitée préalablement avec le principe actif selon la présente invention à 1%, puis irradiée.
Une troisième partie est conservée sans traitement, mais irradiée.
Les deux dernières fractions sont soumises à une irradiation par des UVA à raison de 30 J/cm2.
Les protéines oxydées étant caractérisées par des groupements carbonyls, on mesure la substitution de ces groupements par des composés dont on assure la 20 révélation à l'aide de kits adaptés du commerce.
Taux de protéines Taux de protection des oxydées en % protéines en % Témoin non irradié 0 Témoin irradié UVA 124 0 Irradié UVA et traité avec 43 65 + 6 le principe actif 1% Le principe actif assure une protection efficace des cellules contre l'oxydation des protéines puisque dès 1 %, on obtient une réduction de 65% du toux de protéines oxydées.
3-4/ Effet du principe actif sur la protection vis-à-vis des cassures de l'ADN Les radiations UVB ont une action néfaste sur l'ADN, acide désoxyribonucléique.
Cet ADN est susceptible de se reproduire non plus fidèlement mais en générant des erreurs.
Or la préservation de l'intégrité de l'ADN et la réparation des erreurs sont 10 essentiels pour que chaque génération cellulaire soit fidèle à la précédente.
Le présent test consiste à mettre en évidence les capacités du principe actif selon la présente invention à protéger l'ADN des cassures induites par le rayonnement solaire.
On conserve un témoin non traité.
On traite deux fractions avec le principe actif selon l'invention, à 0,5 et 2,0%.
On soumet ces cellules à l'action de radiations UVB.
L'ADN des cellules est extrait et on visualise les cassures après électrophorèse sur gel d'agarose.
On obtient les résultats suivants en comparant avec l'échantillon témoin. 20 Protection de l'ADN / témoin en % Témoin irradié non traité 0 Témoin non irradié et non traité 100 Témoin traité à 0,5% de principe actif 6+2 selon l' invention et soumis aux UVB Témoin traité à 2,0% de principe actif 54 +7 selon l'invention et soumis aux UVB Le principe actif selon Ia présente invention assure la protection de l'ADN des kératinocytes visà-vis des dommages induits par les UVB de 54 %.
3-5/ Effet du principe actif sur la teneur cellulaire en glutathion Le glutathion est une molécule essentielle pour la protection des cellules puisqu'il décompose le peroxyde d'hydrogène en eau et oxygène.
Or cette concentration en glutathion diminue en cas d'irradiation UVB, le but du présent test étant de déterminer dans quelle mesure le principe actif selon la présente invention est apte à rétablir la concentration en glutathion.
Une première série de cultures cellulaires n'est pas soumise à irradiation mais traitée avec le principe actif selon l'invention.
Une seconde série de cultures est soumise à irradiation et traitée préalablement avec le principe actif selon l'invention.
Les résultats obtenus sont récapitulés dans le tableau ci-dessous. 15 Dosage du glutathion (pmol/pc de protéines) Augmentation de la teneur en glutathion / témoin (%) Sans irradiations UV Témoin non traité, sans UV 203 Principe actif à 0,25% sans UV 202 0 Principe actif à 1,00% sans UV 208 2 Avec irradiations UV Témoin non traité, avec UV 108 Principe actif à 0,25% avec UV 156 * 49 Principe actif à 1,00% avec UV 174 + 70 Les irradiations UV provoquent une diminution de Ia teneur en glutathion de 47%.
Le principe actif à 1% selon la présente invention permet ainsi une augmentation de 70% du taux de glutathion après els irradiations UV, cet effet étant dosedépendant.
On constate que le principe actif agit aussi sur le système de défense non enzymatique.
3-6/ Effet du principe actif sur la libération des interleukines-la L'action du principe actif selon la présente invention a été étudié sur des cultures de kératinocytes humains.
On soumet ces kératinocytes aux irradiations UVA et UVB et on observe la 10 capacité du principe actif à limiter l'inflammation générée par les rayonnements.
A cet effet, on dose les interleukines-la libérées à l'aide d'un kit ELISA spécifique.
On obtient les résultats suivants Non irradié UVA (10J/cm2) + UVB (0, 15J/cm2) IL-la (pg/ml) IL-laE (pg/ml) Relargage d'IL-la/témoin Témoin 270 691 Principe actif 0,5% 152 501 - 27% Principe actif 1,0% 142 354 - 49% Principe actif 2,0% 169 180 - 74% Principe actif 5,0% 108 118 - 83% Dès 2% de concentration en principe actif, la réduction de la libération est de 74%, ce qui montre la capacité de ce principe actif à limiter le phénomène d'inflammation. Cet effet est dose-dépendant.
3-7/ Effet du principe actif sur la libération des interleukines-8 Le protocole de test est identique au précédent. Le kit de dosage utilisé est spécifique aux interleukines 8.
Non irradié UVA (10J/cm2) + UVB (0,15J/cm2) IL-8 (pg/ml) IL-8 (pg/ml) Relargage d'IL-8/témoin Témoin 326 1871 Principe actif 1,0% 227 1850 - 2% Principe actif 2,0% 297 620 - 66% Principe actif 5,0% 287 257 - 86% Dès 2% de concentration en principe actif, la réduction de la libération des interleukines-8 est de 66%, ce qui montre la capacité de ce principe actif à limiter le phénomène d'inflammation. Cet effet est dose-dépendant.
Ainsi, on constate que le but poursuivi à savoir lutter contre les effets néfastes des espèces radicalaires est atteint avec le principe actif obtenu par le procédé selon la présente invention.
Ceci est obtenu en favorisant la catalase, enzyme clé de la cascade antiradicalaire et le glutathion, élément central de la lutte endogène chimique. Cet 15 effet protecteur et réparateur est visible puisque le principe actif permet de limiter l'oxydation des protéines et les cassures de l'ADN.
De plus, en inhibant le relargage des médiateurs de l'inflammation, les interleukines-1lca et 8, on a réduit les phénomènes inflammatoires.
Le principe actif peut avantageusement être introduit dans toute formulation galénique adaptée gel, baume, crème, onguent, émulsion, émulsion grasse, solution aqueuse ou alcoolique afin de permettre une apposition dans les meilleures conditions sur la peau des personnes consommatrices. La concentration devra être comprise entre 0,1 et 20% en fonction des besoins.
Claims (12)
1. Procédé d'obtention d'un principe actif doté de propriétés de photoprotection, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: solubilisation de poudre de Jasminum, plus particulièrement Jastninum officinale, préférentiellement des fleurs, dans une solution hydroglycolique en milieu basique, - hydrolyses enzymatiques successives ou simultanées en sorte d'extraire les composés phénoliques et glucidiques, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, filtration ou centrifugation, et - concentration de la fraction active.
2. Procédé d'obtention d'un principe actif selon la revendication 1, caractérisé en ce que le taux d'enzymes est compris entre 0 et 2% en milieu légèrement acide.
3. Procédé d'obtention d'un principe actif selon la revendication 1 ou 2, 15 caractérisé en ce que l'on ajoute du sulfite ou du bisulfite dans une plage de 0 à 5%.
4. Procédé d'obtention d'un principe actif selon la revendication 1, 2 ou 3, caractérisé en ce que la solution hydroglycolique est composée de 0 à 50% d'un glycol.
5. Principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des
revendications 1 à 4, caractérisé en ce que:
- le taux de matière sèche obtenu est compris entre 20 et 200 g/I.
- le pH déterminé par mesure potentiométrique est compris entre 4,0 et 8, 0.
- teneur en sucres totaux compris entre 7 et 80 g/l, et - valeurs de composés phénoliques comprises entre 0,3 et 3,8 g/I.
6. Principe actif selon la revendication 5, caractérisé en ce que: - le taux de matière sèche obtenu est compris entre 50 et 85 g/I.
- le pH déterminé par mesure potentiométrique est compris entre 5,0 et 6, 0.
- teneur en sucres totaux compris entre 19 et 33 g/I.
- valeurs de composés phénoliques comprises entre 0,8 et 1,6 g/I.
7. Utilisation cosmétique du principe actif obtenu selon les revendications ou 6, dosé entre 0,1 et 20% dans une formulation galénique adaptée gel, 10 baume, crème, onguent, émulsion, émulsion grasse, solution aqueuse ou alcoolique afin d'obtenir une photoprotection de la peau.
8. Utilisation cosmétique du principe actif obtenu selon les revendications ou 6, dosé entre 0,1 et 20% dans une formulation galénique adaptée gel, baume, crème, onguent, émulsion, émulsion grasse, solution aqueuse ou alcoolique 15 caractérisée en ce qu'on régénère et on augmente l'activité de la catalase du stratum corneurn.
9. Utilisation cosmétique du principe actif obtenu selon les revendications ou 6, dosé entre 0,1 et 20% dans une formulation galénique adaptée gel, baume, crème, onguent, émulsion, émulsion grasse, solution aqueuse ou alcoolique, 20 caractérisée en ce qu'on protège les cellules contre l'oxydation des protéines.
10. Utilisation cosmétique du principe actif obtenu selon les revendications ou 6, dosé entre 0,1 et 20% dans une formulation galénique adaptée gel, baume, crème, onguent, émulsion, émulsion grasse, solution aqueuse ou alcoolique, caractérisée en ce qu'on préserve l'intégrité de l'ADN des cellules.
11. Utilisation cosmétique du principe actif obtenu selon les revendications ou 6, dosé entre 0,1 et 20% dans une formulation galénique adaptée gel, baume, crème, onguent, émulsion, émulsion grasse, solution aqueuse ou alcoolique, caractérisée en ce qu'on permet à la peau de récupérer un taux de glutathion après irradiation UV.
12. Utilisation cosmétique du principe actif obtenu selon les revendications ou 6, dosé entre 0,1 et 20% dans une formulation galénique adaptée gel, 5 baume, crème, onguent, émulsion, émulsion grasse, solution aqueuse ou alcoolique, caractérisée en ce qu'on réduit la libération des médiateurs de l'inflammation tels que les interleukines-la et les interleukines-8.
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