FR2816841A1

FR2816841A1 - Synergistic association of biguanide antidiabetic and sulfonamide antidiabetic used for treating non-insulin dependent diabetes

Info

Publication number: FR2816841A1
Application number: FR0015066A
Authority: FR
Inventors: Nathalie Cugnardey; Nicolas Wiernsperger
Original assignee: LIPHA SAS
Current assignee: Merck Sante SAS
Priority date: 2000-11-22
Filing date: 2000-11-22
Publication date: 2002-05-24
Anticipated expiration: 2020-11-22
Also published as: MXPA03004431A; JP2004513962A; US20040039031A1; AU2002222026A1; NO20032287L; CZ20031449A3; WO2002041879A2; RU2003116890A; PL361189A1; WO2002041879A3; WO2002041897A3; HUP0302620A2; HUP0302620A3; ZA200304766B; AU2002221779A1; BR0115506A; WO2002041897A2; NO20032287D0; CA2429257A1; EP1335731A2

Abstract

An association of a biguanide antidiabetic and a sulfonamide antidiabetic at low doses, together with pharmaceutical excipients, is new.

Description

NOUVELLES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES
A ACTION ANTIDIABETIQUE ET LEUR PROCEDE DE PREPARATION La présente invention se rapporte au domaine de la chimie thérapeutique et plus particulièrement à de nouveaux médicaments pour le traitement du diabète. NEW PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
The present invention relates to the field of therapeutic chemistry and more particularly to new drugs for the treatment of diabetes.

Elle a plus particulièrement pour objet de nouveaux médicaments antidiabétiques formés de deux principes actifs connus dont les effets se potentialisent. More particularly, it relates to new antidiabetic drugs consisting of two known active ingredients whose effects are potentiated.

Elle a spécifiquement pour objet de nouveaux médicaments antidiabétiques constitués d'une association de deux principes actifs efficaces par voie orale, à dose subliminale, formés d'un biguanide antidiabétique et d'un sulfonamide antidiabétique, en association ou en mélange avec un ou plusieurs excipients inertes, pharmaceutiquement acceptables. It specifically relates to novel antidiabetic medicinal products consisting of a combination of two active, orally effective, subliminally active agents consisting of an antidiabetic biguanide and an antidiabetic sulfonamide, in combination or in admixture with one or more excipients. inert, pharmaceutically acceptable.

Plus précisément, l'antidiabétique du type biguanide est choisi parmi la metformine, la buformine ou la phenformine ou un de leurs sels avec un acide minéral ou organique thérapeutiquement compatible. More specifically, the biguanide antidiabetic agent is selected from metformin, buformin or phenformin or a salt thereof with a therapeutically compatible mineral or organic acid.

L'antidiabétique du type sulfonamide répond à la formule générale :

dans laquelle RI représente NH2, CH3, CI, le groupe :

ou encore RI forme avec R2 un groupe : The antidiabetic of the sulfonamide type corresponds to the general formula:

in which R1 represents NH2, CH3, CI, the group:

or else RI forms with R2 a group:

R2 représente H ou NH2 R3 représente un groupe n-butyle-4, un groupe cyclohexyle, un groupe

La matière première principale de ces constituants est celle formée par le glibenclamide :

ou par le Gliclazide :

Cette association présente des qualités assez exceptionnelles, car il est apparu que l'administration conjointe d'un agent antidiabétique du type biguanide et d'un agent antidiabétique du type sulfonamide à des doses faibles où ils ne sont pas actifs, entraîne une réduction sensible de la glycémie.

R 2 is H or NH 2 R 3 is n-butyl-4, cyclohexyl, a group

The main raw material of these constituents is that formed by glibenclamide:

or by Gliclazide:

This association has rather exceptional qualities, because it has appeared that the joint administration of a biguanide-type antidiabetic agent and a sulfonamide-type antidiabetic agent at low doses where they are not active, results in a significant reduction of glycemia.

En particulier, chez des rats rendus diabétiques par destruction des îlots de Langerhans, par administration de streptozotocine, des doses faibles de biguanide (par ex. la metformine) et de sulfamide (par ex. le glibenclamide) améliorent significativement le diabète. In particular, in rats made diabetic by Langerhan islet destruction, by streptozotocin administration, low doses of biguanide (eg metformin) and sulfonamide (eg glibenclamide) significantly improve diabetes.

On connaissait déjà de la littérature le brevet EP 0.974. 356 Al au nom de LIPHA qui décrit un mode de réalisation de comprimés de metformine et de glibenclamide dans lequel on s'assure que la granulométrie des grains de glibenclamide est telle que la biodisponibilité est The patent EP 0.974 was already known from the literature. 356 Al in the name of LIPHA which describes an embodiment of metformin and glibenclamide tablets in which it is ensured that the granulometry of the grains of glibenclamide is such that the bioavailability is

garantie. C'est le cas décrit dans ce document, où au plus dix pour cent des particules ont une granulométrie inférieure à 2 m, et au plus dix pour cent des particules ont une granulométrie supérieure à 60 u. m.

guarantee. This is the case described in this document, where at most ten percent of the particles have a particle size of less than 2 m, and at most ten percent of the particles have a particle size greater than 60 μm.

En outre, pour la réalisation des comprimés, on ajoute au mélange de poudres un agent liant dans la proportion de 2 à 4 %. Cette façon de procéder présente l'inconvénient sérieux de s'assurer d'une telle plage de granulométrie relativement étroite et qui nécessite des moyens particuliers pour être réalisée. In addition, for the production of the tablets, a binding agent in the proportion of 2 to 4% is added to the mixture of powders. This procedure has the serious disadvantage of ensuring such a relatively narrow range of particle size and which requires special means to be achieved.

Le brevet international WO 97/17975 (Gentili S. p. A. ) décrit également une combinaison de glibenclamide et de metformine dont les rapports pondéraux sont de 1 : 100 et en particulier de 5 mg de glibenclamide et de 500 mg de metformine. Ce dosage permet d'administrer en trois fois 15 mg de glibenclamide de 1500 mg de metformine par jour. International patent WO 97/17975 (Gentili S. A.) also describes a combination of glibenclamide and metformin whose weight ratios are 1: 100 and in particular 5 mg of glibenclamide and 500 mg of metformin. This dosage makes it possible to administer three times 15 mg of glibenclamide of 1500 mg of metformin per day.

L'objectif poursuivi est sensiblement différent de l'objet de la présente demande. The objective pursued is substantially different from the subject of the present application.

Le document WO 99/29314 (Bristol Myers Squibb Company) concerne un mélange de metformine sous forme de sel d'acide dibasique (fumarate ou succinate) utilisé isolément ou en combinaison avec un autre agent antidiabétique. Dans ce cas, l'agent antidiabétique décrit est le glyburide. Cette préparation présente une meilleure conservation par suite d'une hygroscopicité plus faible et un meilleur écoulement de la poudre. Cette préparation se distingue en outre par une saveur nettement améliorée par suite d'une moindre solubilité dans l'eau. L'association de ces sels de metformine avec un sulfamide ou une sulfonylurée (gliburide [ou glibenclamide], glimepiride, glipizide, gliclazide ou chlorpropamide,...) agit

sur le canal dépendant de l'ATP des cellules p. Le rapport pondéral du sel de metformine à la sulfonylurée peut varier dans la gamme allant de 300 : 1 à environ 50 : 1. C'est ainsi que les exemples de ce document décrivent une combinaison de 600 mg de fumarate de metformine (2 : 1) et de 5,0 mg de glyburide ou de glipizide. WO 99/29314 (Bristol Myers Squibb Company) relates to a mixture of metformin in the form of dibasic acid salt (fumarate or succinate) used alone or in combination with another antidiabetic agent. In this case, the antidiabetic agent described is glyburide. This preparation has better preservation due to a lower hygroscopicity and a better flow of the powder. This preparation is further distinguished by a significantly improved flavor due to less solubility in water. The combination of these metformin salts with a sulphonamide or a sulphonylurea (gliburide [or glibenclamide], glimepiride, glipizide, gliclazide or chlorpropamide, etc.) acts

on the ATP-dependent channel of p cells. The weight ratio of the metformin salt to the sulfonylurea can vary in the range of from 300: 1 to about 50: 1. Thus, the examples in this document describe a combination of 600 mg of metformin fumarate (2: 1 ) and 5.0 mg of glyburide or glipizide.

Aucune donnée technique sur la réalisation de telles formulations galéniques à l'exception de la conservation à l'humidité n'est fournie. Aucune information n'est fournie sur l'activité antidiabétique d'une telle préparation. No technical data on the realization of such galenic formulations except moisture storage is provided. No information is provided on the antidiabetic activity of such a preparation.

Les compositions selon l'invention entraînent des effets différents. The compositions according to the invention have different effects.

On a pu déterminer au préalable que la dose quotidienne de 0, 5 mg/Kg de glibenclamide se révèle comme inactive. It has been previously determined that the daily dose of 0.5 mg / kg of glibenclamide is found to be inactive.

Aux doses plus fortes déjà actives (I mg/Kg/j) de sulfonamide (ou 2 mg/Kg/j), l'administration de sulfonamide ne modifie pas la glycémie, mais entraîne une augmentation significative de l'insulinémie et une diminution du taux de lactates circulants. At higher already active doses (I mg / kg / day) of sulfonamide (or 2 mg / kg / day), the administration of sulfonamide does not change blood glucose, but leads to a significant increase in insulinemia and a decrease in Circulating lactate levels.

On a pu déterminer que la dose minima active de sulfonamide-comme le glibenclamide-se situe à 2 mg/Kg/j. De même, la dose minima active de biguanide-comme la metformine-se situe à une dose élevée au moins égale à 30 mg/Kg/jour. Cette dose amène une légère baisse de la glycémie, un retour à la normale des triglycérides, une baisse significative des lactates et une remontée de l'insulinémie. It has been determined that the minimum active dose of sulfonamide-such as glibenclamide-is 2 mg / kg / day. Similarly, the active minimum dose of biguanide-like metformin-is at a high dose of at least 30 mg / kg / day. This dose causes a slight drop in blood glucose, a return to normal triglycerides, a significant drop in lactates and a rise in insulinemia.

Dans l'abondante littérature concernant l'activité antihyperglycémiante de la metformine, l'immense majorité des modèles animaux utilisés donne des doses actives comprises entre 100 à 200 mg/kg. Ces doses actives chez l'animal correspondent à l'utilisation thérapeutique confirmée chez l'homme pour équilibrer un diabète, d'une posologie allant de 500 mg à 3 grammes par jour suivant la sévérité du diabète. In the abundant literature concerning the antihyperglycemic activity of metformin, the vast majority of animal models used give active doses of between 100 and 200 mg / kg. These active doses in animals correspond to the therapeutic use confirmed in humans to balance diabetes, a dosage ranging from 500 mg to 3 grams per day depending on the severity of diabetes.

L'invention consiste en ce qu'en utilisant un modèle animal adapté, on indique et on démontre qu'une posologie inférieure à 500 mg par jour pour la metformine peut-être utilisée pour traiter un état diabétique avec des risques réduits au regard de la compliance et de la tolérance. The invention is that by using a suitable animal model, it is indicated and demonstrated that a dosage less than 500 mg per day for metformin can be used to treat a diabetic condition with reduced risks in view of the compliance and tolerance.

On a montré aussi qu'aux doses subliminaires, on observe une synergie entre les effets du biguanide par le sulfonamide. L'association de ces deux types de substances diminue significativement le cholestérol et les triglycérides dont le taux est très augmenté chez les rats traités par la streptozotocine. It has also been shown that at subliminal doses synergism is observed between the effects of biguanide by sulfonamide. The combination of these two types of substances significantly decreases cholesterol and triglycerides, the rate of which is greatly increased in rats treated with streptozotocin.

En outre, le sulfonamide, non seulement diminue les lactates, mais aussi inhibe les effets du biguanide qui a tendance à les augmenter. La somme des diminutions de la glycémie obtenue avec les produits administrés isolément (20 mg/Kg/j) est sensiblement inférieure à celle obtenue avec l'association selon l'invention. In addition, sulfonamide not only decreases lactates, but also inhibits the effects of biguanide which tends to increase them. The sum of the decreases in blood glucose obtained with the products administered alone (20 mg / kg / day) is substantially lower than that obtained with the combination according to the invention.

Produit <SEP> Dose <SEP> Diminution <SEP> de <SEP> la <SEP> glycémie <SEP> ES
<tb> Metformine <SEP> 30 <SEP> mg/Kg/j <SEP> 86, <SEP> 03 <SEP> +4, <SEP> 29
<tb> Glibenclamide <SEP> 2 <SEP> mg/Kg/j <SEP> 93,49 <SEP> 1, <SEP> 15
<tb> Association <SEP> 78, <SEP> 46 <SEP> 0, <SEP> 42
<tb> ** <SEP> p > O, <SEP> OI
<tb>
Il existe donc à ces doses actives une potentialisation des effets des deux antidiabétiques oraux lorsqu'ils sont administrés en association :

effet synergique sur la diminution de la glycémie, effet potentialisateur sur la diminution de la teneur en glycérol et en triglycérides, une augmentation de l'insulinémie propre au sulfonamide, une diminution des lactates, effet propre au Glibenclamide avec suppression des effets propres aux biguanides. Product <SEP> Dose <SEP> Decrease <SEP> of <SEP><SEP> Blood Glucose <SEP> ES
<tb> Metformin <SEP> 30 <SEP> mg / Kg / d <SEP> 86, <SEP> 03 <SEP> +4, <SEP> 29
<tb> Glibenclamide <SEP> 2 <SEP> mg / Kg / d <SEP> 93.49 <SEP> 1, <SEP> 15
<tb> Association <SEP> 78, <SEP> 46 <SEP> 0, <SEP> 42
<tb> ** <SEP>p> O, <SEP> OI
<Tb>
There is therefore at these active doses a potentiation of the effects of the two oral antidiabetic agents when they are administered in combination:

synergistic effect on the reduction of glycemia, potentiating effect on the reduction of the content of glycerol and triglycerides, an increase in insulinemia specific to sulfonamide, a decrease in lactates, specific effect of Glibenclamide with suppression of biguanide-specific effects.

L'utilisation conjointe de ces deux types de molécules est rationnelle lorsque des patients diabétiques non insulinodépendants (DNID) présentent à la fois une hyperglycémie et une faible insulinémie. The joint use of these two types of molecules is rational when non-insulin-dependent diabetic (NIDD) patients have both hyperglycemia and low insulinemia.

En outre, dans le cas d'hyper insulinémie, contrairement à ce que l'on pourrait penser, on constate une disparition de l'hypersécrétion d'insuline au cours de l'évolution du diabète et l'association selon l'invention devient nécessaire. In addition, in the case of hyper insulinemia, contrary to what one might think, there is a disappearance of hypersecretion of insulin during the course of diabetes and the combination according to the invention becomes necessary .

Dans les compositions selon l'invention, le rapport de doses biguanide/sulfonamide varie de 10 : 1 à 45 : 1, et en poids de 50 : 5 mg à 100 : 2,5 mg. Ce rapport s'écarte donc sensiblement de celui décrit dans le brevet international WO 97/17975 (rapport 100 : 1) et dans le brevet international WO 99/29814 (Bristol Myers). In the compositions according to the invention, the ratio of biguanide / sulfonamide doses ranges from 10: 1 to 45: 1, and by weight from 50: 5 mg to 100: 2.5 mg. This ratio therefore deviates substantially from that described in the international patent WO 97/17975 (100: 1 ratio) and in the international patent WO 99/29814 (Bristol Myers).

Ce rapport est donc particulièrement avantageux dans la mesure où il permet d'envisager une diminution importante des doses de biguanide. This ratio is therefore particularly advantageous insofar as it makes it possible to envisage a significant decrease in biguanide doses.

Les compositions selon l'invention se présentent sous l'une des formes adaptées pour l'administration par voie orale, telles que comprimés, comprimés pelliculés, comprimés enrobés, dragées, gélules, capsules, pilules, losanges, tablettes, comprimés sécables en barrettes, granulés, micro granules, microsphères et préparations similaires. The compositions according to the invention are in one of the forms suitable for oral administration, such as tablets, film-coated tablets, coated tablets, dragees, capsules, pills, lozenges, tablets, scored tablets, granules, micro granules, microspheres and similar preparations.

Pour la réalisation de ces formes pharmaceutiques, le biguanide et le sulfonamide sont mêlés à un ou plusieurs excipients pharmaceutiques inertes, non toxiques, solides ou liquides. On citera à cet effet des produits de charge minéraux comme le carbonate de calcium, le carbonate de magnésium, le phosphate tricalcique, le phosphate de magnésium, le Kaolin, le talc, le stéarate de magnésium, le dioxyde de silicium, le dioxyde de titane, le dioxyde de zirconium ou la silice colloïdale. Comme agents de charge organiques, on pourra citer la cellulose et ses dérivés, les alginates, les carrhagénates, les dérivés du Chitosan, les gommes végétales comme la gomme adragante, la gomme guar et ses dérivés, la gomme Xanthane, les amidons, les maltodextrines et les huiles végétales. For the production of these pharmaceutical forms, the biguanide and the sulfonamide are mixed with one or more inert, non-toxic, solid or liquid pharmaceutical excipients. For this purpose, mention may be made of inorganic filler products such as calcium carbonate, magnesium carbonate, tricalcium phosphate, magnesium phosphate, kaolin, talc, magnesium stearate, silicon dioxide and titanium dioxide. , zirconium dioxide or colloidal silica. Organic fillers that may be mentioned include cellulose and its derivatives, alginates, carrageenans, Chitosan derivatives, vegetable gums such as gum tragacanth, guar gum and its derivatives, Xanthan gum, starches and maltodextrins. and vegetable oils.

Les compositions pharmaceutiques contenant l'association biguanide-sulfonamide antidiabétiques sont préparées par les processus actuels connus de l'homme de métier. Ils seront mieux compris sur la base d'un exemple détaillé de réalisation. The pharmaceutical compositions containing the biguanide-sulfonamide antidiabetic combination are prepared by the current processes known to those skilled in the art. They will be better understood on the basis of a detailed example of achievement.

Selon une caractéristique particulière des compositions selon l'invention, une formulation particulièrement avantageuse est celle correspondant à 30 mg/Kg de chlorhydrate de metformine et 2 mg/Kg de Glibenclamide. According to one particular characteristic of the compositions according to the invention, a particularly advantageous formulation is that corresponding to 30 mg / kg of metformin hydrochloride and 2 mg / kg of Glibenclamide.

Comme exposé précédemment, on peut diminuer, grâce aux compositions selon l'invention, les doses de sulfonamide. Les doses de biguanide peuvent être variées dans de larges proportions sans que cela constitue une gène pour la fabrication. As explained above, it is possible to reduce, thanks to the compositions according to the invention, the doses of sulfonamide. The doses of biguanide can be varied in large proportions without this being a gene for manufacturing.

Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. The following examples illustrate the invention without limiting it.

Etude pharmacologique de l'association biguanide-sulfonamide selon l'invention Animaux 40 rats mâles Wistar (Charles River, Saint Aubin les Elbeuf, France), d'un poids moyen de 280 g, sont utilisés dans cette expérimentation. Les animaux sont placés en stabulation pendant une semaine dans une animalerie normalisée dont les paramètres suivants sont contrôlés : - rythme jour/nuit 7MO/19h00 ; - température 22 +/-loC ; - hygrométrie 50 +/-10%. Pharmacological study of the biguanide-sulfonamide combination according to the invention Animals 40 male Wistar rats (Charles River, Saint Aubin les Elbeuf, France), with an average weight of 280 g, are used in this experiment. The animals are housed for one week in a standardized pet shop whose following parameters are controlled: - day / night rhythm 7MB / 19h00; - temperature 22 +/- loC; - Hygrometry 50 +/- 10%.

Les animaux ont accès, ad libitum, à l'eau de boisson et à une alimentation standard UAR A03. Animals have access, ad libitum, to drinking water and a standard UAR A03 diet.

Expérimentation Les quarante rats sont rendus diabétiques par l'administration IP de 50 mg/kg de streptozotocine en solution dans du sérum physiologique (une seule administration). Un diabète non insulinodépendant (DNID) se développe en quinze jours et reste stable durant au

.. moins un mois. Les animaux sont sélectionnés 21 jours après l'administration de STZ, en fonction de la valeur de la glycémie comprise entre 10 et 15 mM, ce qui correspond à un diabète DNID, et de leur insulinémie (valeur comprise entre 15 et 20 U/1). Environ 30 % des rats ont une glycémie plus élevée avec une insulinémie basse (DID), associées à un amaigrissement notable. Ces DID sont éliminés dans cette expérimentation. Restent 24 rats (2 groupes de 12 répartis au hasard). Experimentation The forty rats are made diabetic by the IP administration of 50 mg / kg of streptozotocin dissolved in physiological saline (a single administration). Non-insulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM) develops in 15 days and remains stable during

.. less than a month. The animals are selected 21 days after the administration of STZ, according to the value of the glycemia between 10 and 15 mM, which corresponds to a diabetes NIDDM, and their insulinemia (value between 15 and 20 U / 1 ). About 30% of rats have higher blood glucose levels with low insulinemia (DID), associated with significant weight loss. These DIDs are eliminated in this experiment. There remain 24 rats (2 groups of 12 randomly distributed).

21 jours après l'administration de STZ, les rats sélectionnés sont alors traités soit par du glibenclamide, soit par de la metformine, soit par l'association glibenclamide-metformine selon l'invention. 21 days after the administration of STZ, the selected rats are then treated either with glibenclamide, or with metformin, or with the combination glibenclamide-metformin according to the invention.

1 partie de l'expérimentation 2 lots de six rats prélevés au hasard : - 1 lot reçoit per os 1 mg/kg/j de glibenclamide en deux prises et ce pendant huit jours.

1 part of the experiment 2 batches of six randomly selected rats: - 1 batch receives per os 1 mg / kg / day of glibenclamide in two doses for eight days.

- 1 lot reçoit per os 2 mg/kg/j de glibenclamide en deux prises et ce pendant huit jours. - 1 lot receives per os 2 mg / kg / day of glibenclamide in two doses and this during eight days.

2ère partie de l'expérimentation Les deux autres lots tirés au hasard sont alors traités : - 1 lot reçoit per os 30 mg/kg/j de metformine (sous forme de chlorhydrate) en deux prises et ce pendant huit jours. 30 mg/kg/j est la dose minimale active sur ce modèle et dans les conditions expérimentales définies. 2nd part of the experiment The other two randomly selected batches are then treated: - 1 batch receives per os 30 mg / kg / day of metformin (in hydrochloride form) in two doses for eight days. 30 mg / kg / day is the minimum active dose in this model and in the defined experimental conditions.

- 1 lot reçoit per os l'association metformine 30 mg/kg/j et glibenclamide 2 mg/kg/j (dose minimale active, choisie en fonction des résultats de la première partie) en deux prises quotidienne durant huit jours. - 1 batch receives per os metformin 30 mg / kg / day and glibenclamide 2 mg / kg / day (minimum active dose, chosen according to the results of the first part) twice daily for eight days.

Paramètres biologiques mesurés Pour chaque rat, 100 III de sang sont ponctionnés dans une veine caudale, sur de l'héparine, au temps JO (avant l'administration de STZ) au temps J21 (21 jours après STZ, avant les Measured biological parameters For each rat, 100 III of blood were punctured in a caudal vein, on heparin, at OJ time (before administration of STZ) at time D21 (21 days after STZ, before

traitements) et à J29 (après huit jours de traitement). Les échantillons sont immédiatement centrifugés (10 minutes à 4000 t/min) et le plasma est séparé des hématies. Les échantillons sont congelés jusqu'à la détermination des paramètres biologiques. treatments) and D29 (after eight days of treatment). The samples are immediately centrifuged (10 minutes at 4000 rpm) and the plasma is separated from the red blood cells. The samples are frozen until the biological parameters are determined.

Glycémie, cholestérol, triglycérides, acide lactique Après décongélation des échantillons de plasma, les paramètres ci-dessus sont déterminés par des méthodes enzymatiques, à l'aide d'un automate COBAS (Roche). Glucose, cholesterol, triglycerides, lactic acid After thawing plasma samples, the above parameters are determined by enzymatic methods, using a COBAS (Roche) automaton.

La glycémie est mesurée par la méthode à l'hexokinase ; le cholestérol par la méthode enzymatique-point final de Randox ; les triglycérides par la méthode GPO-PAP ; l'acide lactique par la méthode à la lactico-déshydrogénase. Blood glucose is measured by the hexokinase method; cholesterol by Randox's enzymatic-endpoint method; triglycerides by the GPO-PAP method; lactic acid by the lactic-dehydrogenase method.

Insulinémie L'insuline circulante est mesurée par radio-immuno-essai en utilisant les trousses du CEA. Insulinemia Circulating insulin is measured by radioimmunoassay using CEA kits.

L'homogénie entre insuline humaine et insuline de rat est très grande et les résultats obtenus sont à 95% de leur valeur réelle. The homogeny between human insulin and rat insulin is very large and the results obtained are at 95% of their real value.

Toutes les méthodes sont validées et systématiquement contrôlées avec des étalons. All methods are validated and systematically checked with standards.

Analyse statistique Les moyennes des résultats individuels obtenus sont affectées de l'erreur à craindre sur la moyenne. Statistical analysis The averages of the individual results obtained are affected by the error to be feared on the average.

A JO et J21, après une analyse de variance ANOVA, l'absence de significativité intergroupe est analysée par un test t de Student. At OJ and J21, after an ANOVA analysis of variance, the absence of intergroup significance is analyzed by Student's t-test.

L'efficacité des traitements est évaluées entre J29 et J21 par un test t adapté aux séries appariées (pour chaque rat la valeur à J21 par rapport à J29 sert de témoin). The effectiveness of the treatments is evaluated between J29 and J21 by a t-test adapted to the paired series (for each rat the value at J21 compared to J29 serves as a control).

Résultats 1/Détermination de la dose minimale active de glibenclamide Dans une étude menée également sur des rats DNID, de type STZ, la dose quotidienne de 0,5 mg/kg de glibenclamide s'était révélée inactive. On a donc essayé deux doses plus fortes, soit 1 mg/kg/j soit 2 mg/kg/j. Results 1 / Determination of the minimum active dose of glibenclamide In a study also carried out on STZ-type DNID rats, the daily dose of 0.5 mg / kg of glibenclamide had proved to be inactive. Two higher doses were therefore tried, namely 1 mg / kg / day or 2 mg / kg / day.

On a rassemblé les résultats concernant cette détermination. A JO avant tout traitement, les deux lots de rats sont comparables. De même, à J21, après l'administration de streptozotocine, il n'y a aucune différence entre les lots d'animaux. L'administration de la faible dose de The results regarding this determination were collected. At OJ before any treatment, the two batches of rats are comparable. Similarly, at D21, after streptozotocin administration, there is no difference between batches of animals. The administration of the low dose of

glibenclamide ne modifie pas la glycémie. On observe cependant une augmentation significative de l'insulinémie et une diminution du taux de lactates circulants. Glibenclamide does not affect blood glucose. However, there is a significant increase in insulinemia and a decrease in circulating lactate levels.

La dose plus élevée de glibenclamide diminue significativement la valeur de la glycémie. The higher dose of glibenclamide significantly decreases the value of blood glucose.

Cette diminution significative est observée avec le test t de student pour série appariée (méthode des couples). Avec cette posologie, les taux de lactates restent significativement diminués alors que l'insulinémie est encore plus forte en moyenne (tableau 3). This significant decrease is observed with the student t test for paired series (couples method). With this dosage, lactate levels remain significantly lower while insulinemia is even higher on average (Table 3).

Ces résultats montrent que la dose de 2 mg/kg/j de glibenclamide constitue la dose minimale active. These results show that the dose of 2 mg / kg / day of glibenclamide constitutes the minimum active dose.

Dans ces conditions, on a comparé l'efficacité de cette dose de glibenclamide avec celle de metformine (30 mg/kg/j) et avec l'association de ces deux doses minimales.

Under these conditions, the efficacy of this dose of glibenclamide was compared with that of metformin (30 mg / kg / day) and with the combination of these two minimum doses.

Les résultats sont rassemblés dans le tableau II. The results are collated in Table II.

Tableau 1 Effets du glibenclamide administré pendant huit jours aux doses quotidiennes de 1 ou 2 me/ks/) réparties en deux prises sur les paramètres biochimiques du rat diabétique

Table 1 Effects of glibenclamide administered for eight days at daily doses of 1 or 2 me / ks / divided into two doses on the biochemical parameters of the diabetic rat

<tb>
<tb> Poids <SEP> Glycémie <SEP> Cholestérol <SEP> Triglycérides <SEP> Lactates <SEP> Insulinémie
<tb> (g) <SEP> mM/l <SEP> mM/l <SEP> mM/l <SEP> mM/l <SEP> M/ml
<tb> 1 <SEP> mg/kg/j
<tb> je <SEP> 291 <SEP> 6, <SEP> 39+/-0,17 <SEP> 1, <SEP> 03+/-0, <SEP> 04 <SEP> 0, <SEP> 87+/-0, <SEP> 05 <SEP> 2, <SEP> 19+/-0, <SEP> 07 <SEP> 12, <SEP> 8+/-0,8
<tb> J21 <SEP> 253 <SEP> 14, <SEP> 22+/-0,65 <SEP> 1, <SEP> 65+/-0,08 <SEP> 1, <SEP> 04+/-0,10 <SEP> 2,59+/-0, <SEP> 10 <SEP> 16, <SEP> 7+/-0,8
<tb> J29 <SEP> 262 <SEP> 14, <SEP> 66+/-0,47 <SEP> 1, <SEP> 42+/-0,08 <SEP> 1, <SEP> 04+/-0, <SEP> 10 <SEP> **1, <SEP> 33+/-0, <SEP> 15 <SEP> **19, <SEP> 2+/-0,8
<tb> 2 <SEP> mglkg/j
<tb> JO2826, <SEP> 49+/-0, <SEP> 13 <SEP> 1, <SEP> 04+/-0, <SEP> 02 <SEP> 0, <SEP> 88+/-0, <SEP> 06 <SEP> 2, <SEP> 33+/-0, <SEP> 12 <SEP> 12, <SEP> 7+/-0,6
<tb> J21 <SEP> 253 <SEP> 14, <SEP> 66+/-0,73 <SEP> 1, <SEP> 49+/-0, <SEP> 04 <SEP> 1, <SEP> 01+/-0, <SEP> 05 <SEP> 2, <SEP> 67+/-0, <SEP> 7 <SEP> 17,0+/-1, <SEP> 0
<tb> J29 <SEP> 261 <SEP> 13, <SEP> 70+/-0,66 <SEP> 1, <SEP> 52+/-0,06 <SEP> 0,93+/-0, <SEP> 04 <SEP> **1, <SEP> 38+/-0, <SEP> 13 <SEP> *821,0+/-1, <SEP> 4
<tb>
N=6 par groupe, m+/-ESM** p > 0, 01 test t par séries appariées entre J29 et J21. <Tb>
<tb> Weight <SEP> Glycemia <SEP> Cholesterol <SEP> Triglycerides <SEP> Lactates <SEP> Insulinemia
<tb> (g) <SEP> mM / l <SEP> mM / l <SEP> mM / l <SEP> mM / l <SEP> M / ml
<tb> 1 <SEP> mg / kg / d
<tb> I <SEP> 291 <SEP> 6, <SEP> 39 +/- 0.17 <SEP> 1, <SEP> 03 +/- 0, <SEP> 04 <SEP> 0, <SEP> 87 +/- 0, <SEP> 05 <SEP> 2, <SEP> 19 +/- 0, <SEP> 07 <SEP> 12, <SEP> 8 +/- 0.8
<tb> J21 <SEP> 253 <SEP> 14, <SEP> 22 +/- 0.65 <SEP> 1, <SEP> 65 +/- 0.08 <SEP> 1, <SEP> 04 +/- 0.10 <SEP> 2.59 +/- 0, <SEP> 10 <SEP> 16, <SEP> 7 +/- 0.8
<tb> J29 <SEP> 262 <SEP> 14, <SEP> 66 +/- 0.47 <SEP> 1, <SEP> 42 +/- 0.08 <SEP> 1, <SEP> 04 +/- 0, <SEP> 10 <SEP> ** 1, <SEP> 33 +/- 0, <SEP> 15 <SEP> ** 19, <SEP> 2 +/- 0.8
<tb> 2 <SEP> mglkg / d
<tb> JO2826, <SEP> 49 +/- 0, <SEP> 13 <SEP> 1, <SEP> 04 +/- 0, <SEP> 02 <SEP> 0, <SEP> 88 +/- 0, <SEP> 06 <SEP> 2, <SEP> 33 +/- 0, <SEP> 12 <SEP> 12, <SEP> 7 +/- 0.6
<tb> J21 <SEP> 253 <SEP> 14, <SEP> 66 +/- 0.73 <SEP> 1, <SEP> 49 +/- 0, <SEP> 04 <SEP> 1, <SEP> 01 +/- 0, <SEP> 05 <SEP> 2, <SEP> 67 +/- 0, <SEP> 7 <SEP> 17.0 +/- 1, <SEP> 0
<tb> J29 <SEP> 261 <SEP> 13, <SEP> 70 +/- 0.66 <SEP> 1, <SEP> 52 +/- 0.06 <SEP> 0.93 +/- 0, <SEP> 04 <SEP> ** 1, <SEP> 38 +/- 0, <SEP> 13 <SEP> * 821.0 +/- 1, <SEP> 4
<Tb>
N = 6 per group, m +/- ESM ** p> 0.01 test t in series matched between J29 and J21.

Tableau II Effets des doses minimales actives de metformine et de elibenclamide administrées seules ou en association, sur les paramètres biologiques des rats diabétiques. Traitement sur huit jours en deux prises quotidiennes Table II Effects of the minimum active doses of metformin and elibenclamide administered alone or in combination, on the biological parameters of diabetic rats. Eight-day treatment in two daily doses

<tb>
<tb> Poids <SEP> Glycémie <SEP> Cholestérol <SEP> Triglycérides <SEP> Lactates <SEP> Insulinémie
<tb> (g) <SEP> mM/1 <SEP> mM/1 <SEP> mM/1mM/1 <SEP> U/ml
<tb> Metformine <SEP> seule <SEP> 30 <SEP> mg/kg/j
<tb> J0 <SEP> 288 <SEP> 6, <SEP> 38+/-0, <SEP> 23 <SEP> 1, <SEP> 00+/-0, <SEP> 07 <SEP> 0, <SEP> 96+/-0, <SEP> 12 <SEP> 2,47+/-0,15 <SEP> 12, <SEP> 8+/-0,2
<tb> J21 <SEP> 251 <SEP> 14, <SEP> 41+/-0, <SEP> 36 <SEP> 1, <SEP> 57+/-0,08 <SEP> 1, <SEP> 05+/-0,03 <SEP> 2,53+/-0, <SEP> 09 <SEP> 17, <SEP> 5+/-0,8
<tb> J29 <SEP> 247 <SEP> **12, <SEP> 35+/-0,49 <SEP> 1, <SEP> 48+/-0,06 <SEP> 0,96+/-0, <SEP> 05 <SEP> *2,70+/-0, <SEP> Il <SEP> 17,3+/-0, <SEP> 7
<tb> Glibenclamide <SEP> seul <SEP> 2 <SEP> mg/kg/j
<tb> 02826, <SEP> 49+/-0,) <SEP> 3 <SEP> !, <SEP> 04+/-0, <SEP> 02 <SEP> 0, <SEP> 88+/-0, <SEP> 06 <SEP> 2, <SEP> 33+/-0, <SEP> 12 <SEP> 12, <SEP> 7+/-0,6
<tb> J21 <SEP> 253 <SEP> 14,66+/-0, <SEP> 73 <SEP> 1, <SEP> 49+/-0,04 <SEP> 1, <SEP> 01 <SEP> +/-0, <SEP> 05 <SEP> 2,67+/-0, <SEP> 17 <SEP> 17, <SEP> 0+/-1, <SEP> 0
<tb> J29 <SEP> 261 <SEP> **13,70+/-0, <SEP> 66 <SEP> 1, <SEP> 52+/-0,06 <SEP> 0,93+/-0, <SEP> 04 <SEP> **1, <SEP> 38+/-0,13 <SEP> **21,0+/-1, <SEP> 4
<tb> Association <SEP> Met-Glibenclamide
<tb> je <SEP> 289 <SEP> 6, <SEP> 28+/-0, <SEP> 12 <SEP> 1, <SEP> 03+/-0, <SEP> 05 <SEP> 0, <SEP> 99+/-0, <SEP> 08 <SEP> 2, <SEP> 53+/-0, <SEP> 14 <SEP> 12, <SEP> 5+/-0,8
<tb> J21 <SEP> 251 <SEP> 14, <SEP> 56+/-0,30 <SEP> 1, <SEP> 55+/-0,04 <SEP> 1,07+/-0, <SEP> 06 <SEP> 2,55+/-0, <SEP> 09 <SEP> 17, <SEP> 3+/-1, <SEP> 1
<tb> J29 <SEP> 254 <SEP> **11, <SEP> 42+/-0, <SEP> 23 <SEP> *1, <SEP> 37+/-0,02 <SEP> *0,88+/-0, <SEP> 04 <SEP> **1, <SEP> 29+/-0,06 <SEP> **20, <SEP> 3+/-1, <SEP> 2
<tb> <Tb>
<tb> Weight <SEP> Glycemia <SEP> Cholesterol <SEP> Triglycerides <SEP> Lactates <SEP> Insulinemia
<tb> (g) <SEP> mM / 1 <SEP> mM / 1 <SEP> mM / 1mM / 1 <SEP> U / ml
<tb> Metformin <SEP> only <SEP> 30 <SEP> mg / kg / d
<tb> J0 <SEP> 288 <SEP> 6, <SEP> 38 +/- 0, <SEP> 23 <SEP> 1, <SEP> 00 +/- 0, <SEP> 07 <SEP> 0, <MS> 96 +/- 0, <SEP> 12 <SEP> 2.47 +/- 0.15 <SEP> 12, <SEP> 8 +/- 0.2
<tb> J21 <SEP> 251 <SEP> 14, <SEP> 41 +/- 0, <SEP> 36 <SEP> 1, <SEP> 57 +/- 0.08 <SEP> 1, <SEP> 05 +/- 0.03 <SEP> 2.53 +/- 0, <SEP> 09 <SEP> 17, <SEP> 5 +/- 0.8
<tb> J29 <SEP> 247 <SEP> ** 12, <SEP> 35 +/- 0.49 <SEP> 1, <SEP> 48 +/- 0.06 <SEP> 0.96 +/- 0 , <SEP> 05 <SEP> * 2,70 +/- 0, <SEP> It <SEP> 17,3 +/- 0, <SEP> 7
<tb> Glibenclamide <SEP> alone <SEP> 2 <SEP> mg / kg / d
<tb> 02826, <SEP> 49 +/- 0,) <SEP> 3 <SEP>!, <SEP> 04 +/- 0, <SEP> 02 <SEP> 0, <SEP> 88 +/- 0 , <SEP> 06 <SEP> 2, <SEP> 33 +/- 0, <SEP> 12 <SEP> 12, <SEP> 7 +/- 0.6
<tb> J21 <SEP> 253 <SEP> 14.66 +/- 0, <SEP> 73 <SEP> 1, <SEP> 49 +/- 0.04 <SEP> 1, <SEP> 01 <SEP> +/- 0, <SEP> 05 <SEP> 2.67 +/- 0, <SEP> 17 <SEP> 17, <SEP> 0 +/- 1, <SEP> 0
<tb> J29 <SEP> 261 <SEP> ** 13.70 +/- 0, <SEP> 66 <SEP> 1, <SEP> 52 +/- 0.06 <SEP> 0.93 +/- 0 , <SEP> 04 <SEP> ** 1, <SEP> 38 +/- 0.13 <SEP> ** 21.0 +/- 1, <SEP> 4
<tb> Association <SEP> Met-Glibenclamide
<tb> I <SEP> 289 <SEP> 6, <SEP> 28 +/- 0, <SEP> 12 <SEP> 1, <SEP> 03 +/- 0, <SEP> 05 <SEP> 0, <MS> 99 +/- 0, <SEP> 08 <SEP> 2, <SEP> 53 +/- 0, <SEP> 14 <SEP> 12, <SEP> 5 +/- 0.8
<tb> J21 <SEP> 251 <SEP> 14, <SEP> 56 +/- 0.30 <SEP> 1, <SEP> 55 +/- 0.04 <SEP> 1.07 +/- 0, <SEP> 06 <SEP> 2.55 +/- 0, <SEP> 09 <SEP> 17, <SEP> 3 +/- 1, <SEP> 1
<tb> J29 <SEP> 254 <SEP> ** 11, <SEP> 42 +/- 0, <SEP> 23 <SEP> * 1, <SEP> 37 +/- 0.02 <SEP> * 0, 88 +/- 0, <SEP> 04 <SEP> ** 1, <SEP> 29 +/- 0.06 <SEP> ** 20, <SEP> 3 +/- 1, <SEP> 2
<Tb>

N=6 par groupe, m+/-ESM, *p > 0, 05 **p > 0, 01 test t par séries appariées entre J29 et J21.

N = 6 per group, m +/- ESM, * p> 0.05 ** p> 0.01 test t in series matched between J29 and J21.

Sur la glycémie, on observe une synergie des effets de la metformine par le glibenclamide. On glycemia, we observe a synergy of the effects of metformin by glibenclamide.

L'association des deux substances diminue significativement le cholestérol et les triglycérides, augmentés chez les rats STZ. On retrouve intégralement les effets du glibenclamide sur l'insulinémie et sur les lactates. The combination of the two substances significantly decreases cholesterol and triglycerides, increased in STZ rats. The effects of glibenclamide are found entirely on insulinemia and on lactates.

Dans ce dernier cas, le glibenclamide, non seulement diminue les lactates, mais supprime les effets de la metformine qui a tendance à les augmenter. In the latter case, glibenclamide not only decreases lactates, but suppresses the effects of metformin, which tends to increase them.

L'analyse statistique a porté entre J29 après le traitement et J21. Pour préciser le type de synergie, additive ou potentialisatrice, un test t de student a été pratiqué sur les pourcentages de variation de la glycémie (Tableau III). Des résultats précédents, il est déjà possible d'affirmer qu'il existe une potentialisation des deux substances sur les taux de cholestérol et de triglycérides. De plus, les effets du glibenclamide sur l'insulinémie sont conservés. Enfin, le glibenclamide supprime les effets de la metformine sur les lactates. Statistical analysis was carried out between D29 after treatment and D21. To specify the type of synergism, additive or potentiating, a student's t test was performed on the percentage changes in blood glucose (Table III). From previous results, it is already possible to say that there is a potentiation of both substances on cholesterol and triglyceride levels. In addition, the effects of glibenclamide on insulinemia are preserved. Finally, glibenclamide suppresses the effects of metformin on lactates.

Tableau III Etude de la diminution de la glycémie entre J21 et J29 Les résultats sont exprimés en pourcentage de variation ; les valeurs à J21 étant prises comme égales à 100 %. Table III Study of the decrease in blood glucose between D21 and D29 The results are expressed as a percentage of variation; the values at J21 being taken as 100%.

Metformine <SEP> 30 <SEP> mg/kg/j <SEP> 86,03+/-4, <SEP> 29
<tb> Glibenclamide <SEP> 2 <SEP> mg/kg/j <SEP> 93, <SEP> 49+/-1, <SEP> 15
<tb> Association <SEP> 78,46+/-0, <SEP> 42**
<tb>
N=6 m+/-ESM** p > 0, 01 comparaison entre association et glibenclamide ns entre association et metformine Cette étude démontre qu'il y a bien une synergie des effets de la metformine et du glibenclamide. La somme des diminutions de la glycémie (13,7 % avec la metformine seule et 6,51 % avec le glibenclamide seul) obtenues avec les produits administrés seuls (20,21 %) est légèrement inférieure à celle obtenue avec l'association (21,54 %). Il est cependant difficile d'affirmer qu'il y a une potentialisation des effets. Il existe réellement une synergie au moins additive des effets des deux produits. Metformin <SEP> 30 <SEP> mg / kg / d <SEP> 86.03 +/- 4, <SEP> 29
<tb> Glibenclamide <SEP> 2 <SEP> mg / kg / day <SEP> 93, <SEP> 49 +/- 1, <SEP> 15
<tb> Association <SEP> 78,46 +/- 0, <SEP> 42 **
<Tb>
N = 6 m +/- ESM ** p> 0.01 comparison between association and glibenclamide ns between combination and metformin This study demonstrates that there is indeed a synergy of the effects of metformin and glibenclamide. The sum of the decreases in blood glucose (13.7% with metformin alone and 6.51% with glibenclamide alone) obtained with the products administered alone (20.21%) is slightly lower than that obtained with the combination (21%). , 54%). However, it is difficult to say that there is a potentiation of the effects. There is actually at least an additive synergy of the effects of the two products.

Conclusion L'administration concomitante des deux posologies minimales actives de metformine 30 mg/kg/j et de glibenclamide 2 mg/kg/j pendant huit jours et à raison de deux administrations quotidiennes chez le rat DNID STZ entraîne :

- un effet synergique sur la diminution de la glycémie, - en effet potentialisateur sur la diminution des teneurs en cholestérol et en triglycérides, - une augmentation de l'insulinémie propre au glibenclamide, - une diminution des lactates propre au glibenclamide avec la suppression des effets de la metformine sur ce paramètre. CONCLUSION: The concomitant administration of the two active metformin doses of 30 mg / kg / day and glibenclamide 2 mg / kg / day for eight days and twice daily dosing in the DNID STZ rat results in:

- a synergistic effect on the decrease of the glycemia, - indeed potentiator on the decrease in the contents of cholesterol and triglycerides, - an increase of the insulinemia proper to the glibenclamide, - a decrease of the lactates proper to glibenclamide with the suppression of the effects metformin on this parameter.

Il existe donc globalement une potentialisation des effets des deux antidiabétiques oraux, lorsqu'ils sont administrés en association à des doses minimales actives.Thus, there is overall potentiation of the effects of the two oral antidiabetic agents, when they are administered in combination with minimum active doses.

Claims

1. New antidiabetic medicinal products consisting of the combination of an antidiabetic biguanide and an antidiabetic sulfonamide, at low doses, in combination or in admixture with one or more inert pharmaceutically acceptable excipients.

2. New antidiabetic drugs according to claim 1, wherein the biguanide is selected from the group consisting of metformin, buformin and phenformin, as well as salts with a therapeutically compatible mineral or organic acid.

3. New antidiabetic medicaments according to claim 1, wherein the sulfonamide has the general formula:

wherein R1 is NH2, CH3, Clou the group

or

or else RI forms with R2 a group:

R2 represents H or NH2; R3 represents a n-butyl-4 group, a cyclohexyl group or a group:

4. New antidiabetic drugs according to one of claims 1 to 3, wherein the sulfonamide is glibenclamide.

5. New antidiabetic drugs according to one of claims 1 to 3, wherein the sulfonamide is gliclazide.

6. New antidiabetic medicaments according to one of claims 1 to 5, wherein the dose ratio between biguanide and sulfonamide ranges from 10: 1 to 45: 1.

7. New antidiabetic drugs according to one of claims 1 to 5, wherein the weight ratio of active ingredients ranges from 50: 5 mg to 100: 2.5 mg.

8. New antidiabetic drugs according to one of claims 1 to 7, presented in one of the forms suitable for oral administration.

9. New antidiabetic drugs according to claim 8, wherein the nontoxic solid or liquid inert pharmaceutical excipient is selected from mineral fillers and organic fillers.

10. Process for the preparation of pharmaceutical compositions containing the biguanide-sulfonamide combination, characterized in that it is carried out according to the current processes known in the field of pharmacotechnics.