FR2791684A1

FR2791684A1 - Composition cosmetiques ou dermopharmaceutiques contenant le tripeptide n-n-biotinyl-gly-his-lys pour prevenir, reduire ou supprimer la chute des cheveux ainsi que pour favoriser leur repousse

Info

Publication number: FR2791684A1
Application number: FR9903997A
Authority: FR
Inventors: Karl Lintner
Original assignee: Sederma SA
Current assignee: Sederma SA
Priority date: 1999-03-30
Filing date: 1999-03-30
Publication date: 2000-10-06
Anticipated expiration: 2019-03-30
Also published as: AU3171000A; FR2791684B1; WO2000058347A1

Abstract

Le brevet décrit la préparation, les activités du nouveau tripeptide N-Biotinyl-Gly-His-Lys ainsi que son utilisation dans des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques.Ce tripeptide peut être obtenu par synthèse, par biotechnologie ou par hydrolyse ménagée de protéines végétales. Utilisées par voie topique, ces compositions sont avantageusement utilisées pour prévenir, supprimer ou réduire la chute des cheveux, ainsi que pour favoriser leur repousse.

Description

La médiatisation de notre Société, par le biais de la publicité, du cinéma et de la télévision, impose de plus en plus une image exacerbée de la jeunesse corporelle, et de ses caractéristiques morphologiques, qui devient une sorte d'idéal dont tout un chacun essaye de se rapprocher.

La chevelure, composante importante de cette image, fait partie des caractéristiques physiques que tout individu expose au regard des autres.

En effet, à tout âge, l'aspect idéal de la chevelure peut être altéré par de nombreux dysfonctionnements physiologiques ou pathologiques. L'exemple le plus connu en est la perte progressive et/ou locale de cheveux dont la calvitie est l'ultime étape.

Les hommes étant préférentiellement touchés par la calvitie à tout âge, le rôle des hormones androgènes a été très rapidement suspecté et démontré (par exemple Jahoda C. A. (1998) Exp. Dermatol.7:235-248) et confirmé par la perte de cheveux observée chez les femmes après la ménopause et son cortège de dérèglements hormonaux (par exemple Rubin M. B. et al. (1997) Postgrad Med.102:129-131).

Depuis, un nombre important de dysfonctionnements physiologiques ou pathologiques ont été identifiés : psychologiques aussi bien chez la femme que chez l'homme (par exemple : T. F. (1993) J Am. Acad Dermatol.29:568- 575); conséquences d'actes médicaux banals (par exemple Wise R.P. et al. (1997) J.A.M.A.279:117-118); facteurs génétiques liés, ou non, à d'autres pathologies spécifiques comme les risques d'infarctus (par exemple Herrera C.R. et al. (1995) Am. J. Epidemiol.142:828.833) ou de cancer de la prostate (par exemple : H.J. et al. (1998) Endocrine9:39-43).

Par ailleurs, la chimiothérapie est bien connue pour provoquer des alopécies rapides et totales par le biais d'un mécanisme, maintenant identifié, qui aboutit à une accélération de l'apoptose du follicule pileux (par exemple Cece R. et al. (1996) Lab. Invest.75:601-609).

A ce jour, pour corriger l'aspect de l'alopécie, de nombreuses solutions ont été utilisées : application locale d'extraits végétaux ou minéraux de toute sorte, traitement hormonal par voie topique ou générale, prothèse et autres postiches ou perruques, implants, autogreffes.

Récemment, un type de traitement pharmacologique est apparu avec une nouvelle classe de molécules : activateurs des canaux potassiques qui, à l'origine, étaient destinés aux traitements de problèmes cardio-vasculaires et non capillaires (par exemple Buhl A.E. (1993) J Invest. Dermatol.101:148S-152S).

L'industrie cosmétique est donc tout à fait dans son rôle quand elle recherche en permanence de nouveaux concepts et produits capables de prévenir, réduire ou supprimer la chute des cheveux ou de favoriser leur repousse.

L'objet de cette demande de brevet réside dans la découverte, et dans la démonstration, qu'une nouvelle approche du problème de régulation de la perte des cheveux et de leur repousse peut être proposée.

Pour comprendre l'intérêt de notre découverte, quelques rappels succincts du mécanisme et la physiologie de la formation du cheveu (dans Dermatologie, Collection Consultation, Dr Michel Jossey, M.A. Editions Paris, 1993:107-114) sont donnés ci-après.

Le cheveu se compose d'une racine et d'une tige.

La première est formée de plusieurs couches de kératine et son extrémité inférieure se renfle en forme de bulbe, encapuchonnant ainsi la papille, riche en vaisseaux sanguins et en terminaisons nerveuses. La racine, ou follicule pileux, est ancrée dans le maillage du tissu cutané constitué par différents types de collagènes : types I, II, II V et XI, formes fibrillaires, comblent les espaces vides alors que le type IV forme les réseau en feuillet de la lame basale et que le type VII constitue les fibrilles d'ancrage des épithéliums squameux stratifiés (par exemple Albert B et al., Biologie Moléculaire de la cellule, 3ème éd., Médecine Science, Flammarion ed., Paris, 1997:979-980).

La tige, ou partie libre du cheveu est constituée de kératine et peut être comparée à un ongle (phanère).

A la naissance, nous possédons environ 100. 000 follicules pilo-sébacés et comme il ne peut en apparaître d'autres au cours de la vie, il est naturel que ce nombre diminue avec l'âge.

A l'exception du caniche et du mouton mérinos, les poils des mammifères évoluent cycliquement. Chez l'Homme, chaque follicule évolue indépendamment de son voisin selon trois grands phases: # Anagène, ou phase de croissance, qui dure environ deux ans et qui concerne, à un moment donné, environ 75 % du cuir chevelu. Le cheveu anagène a une tige foncée, de grande taille, à l'extrémité proximale rectiligne et au bulbe pigmenté.

# Catagène qui dure environ 2 semaines et touche 5 % des cheveux. Elle correspond à l'arrêt des divisions cellulaires. Le cheveu, de couleur légèrement foncé, présente alors une extrémité proximale arrondie en massue.

# Télogène qui dure de 3 à 4 mois et concerne environ 20 % des cheveux. C'est une phase de repos et de mort qui entraîne obligatoirement la chute du cheveu.

Après ce cycle, le cheveu tombé est remplacé par un autre, à la condition que le follicule soit resté actif et donc, qu'il soit maintenu dans un contexte tissulaire et physiologique normal ou pour le moins satisfaisant.

Pour cela, il est au moins deux conditions essentielles qui paraissent évidentes: # le follicule pileux doit baigner dans un environnement riche en vaisseaux sanguins pour être alimenté correctement et donc, recevoir les nutriments dont il a besoin et éliminer les catabolites produits par son métabolisme, # le follicule pileux doit être bien ancré dans le tissu cutané grâce à une maillage efficace établi par des molécules de constitution telles les collagènes, notamment ceux des types I, II, III et IV (par exemple Almond-Roesler N. et al.

(1997) Arch. Derm Res. 289 :698-704).

L'objet de cette demande de brevet réside dans la découverte, et dans la démonstration, que les conditions optimales pour maintenir le follicule pileux du cheveu dans un milieu favorable à sa survie étaient obtenues par l'utilisation topique de notre nouvelle molécule, le N-Biotinyl-Glycine-Histidine-Lysine (ou N- Biotinyl-GIy-His-Lys ou encore le N-Biotinyl-G-H-K).

Ce N-Biotinyl-G-H-K est obtenu par le greffage d'une molécule de biotine sur la partie N-terminale du tripeptide Gly-His-Lys, créant ainsi une nouvelle molécule.

De manière surprenante, et faisant partie intégrante de notre demande de brevet comme activité inventive, nous avons découvert que l'effet contre la chute des cheveux et favorable sur leur repousse avec notre nouveau produit obtenu par greffage de la biotine sur le tripeptide Gly-His-Lys, est largement supérieur à celui que l'on pouvait espérer par la simple additivité des effets connus pour le seul G-HK et pour la seule biotine, mais que l'on avait ainsi créé une très forte synergie imprévisible même par l'homme de l'art.

Un intérêt supplémentaire apporté par le greffage d'une Biotine sur le tripeptide Gly-His-Lys réside dans une meilleure pénétration cutanée du produit vers le follicule pileux et dans une meilleure stabilité du produit après son incorporation dans la grande diversité galénique de produit final auquel il est destiné.

Séquence Gly-His-Lys - Résumé des connaissances (littérature - brevets) A ce jour la séquence Gly-His-Lys est décrite dans la littérature comme favorisant la formation de néo-vaisseaux, effet angiogénique très général comme par exemple: # Peptides contenant la séquence Gly-His-Lys et synthèse du collagène de type I:
Sage E.H. et al. (1994) J. Hypertens.12:S145-S152, # Séquence Gly-His-Lys et néovascularisation : K. S. et al. (1984) Cancer
Res.44:1579-1584, # Séquence Gly-His-Lys + Cu++ et synthèse de collagène : F. X. et al.

(1988) FEBS 1988 :343-346, Cette séquence a fait l'objet de brevets parmi lesquels on peut citer: # WO 89/12441 (1989) : compositions cosmétiques destinées à épaissir le tissu adipeux sous-cutané des animaux à sang chaud et/ou la peau en général, # Parmi d'autres séquences peptidiques, N-acylées on non, en 1990, nous avions décrit (FR90/13349) le Gly-His-Lys utilisable dans des préparations cosmétiques, sans toutefois en revendiquer d'activité physiologique particulière.

Depuis le dépôt de notre brevet, certains documents ont revendiqués, pour le tripeptide Gly-His-Lys, une activité cosmétique générale: * en excluant la possibilité de N-acylation par un acide palmitique (FR-95 13543 du 15/11/95),

# en mentionnant qu'un tripeptide, non N-acylé, devant contenir toute association possible d'acides aminés se trouvant dans la thymuline ou dans la thymopoïétine
AA (FR-95 13544) sans que la séquence Gly-His-Lys soit mentionnée, glycosylée et de préférence liée à un atome métallique comme le zinc, # en ne décrivant que l'utilisation de la 3-méthyl-L-His, liée ou non à une autre molécule indéterminée pour faciliter le passage transcutané, en utilisation topique contre les altérations du collagène dues aux UV (WO 90/06102), # en ne mentionnant qu'une séquence peptidique de 1 à n acides aminés dont l'un est obligatoirement un His, pouvant être greffée à une chaîne d'acide gras de 6 à
24 carbones, et revendiquant des activités émulsifiante, antioxydante, bactéricide, chélatante ou comme filtre solaire (JP 24655/91).

Cette même séquence Gly-His-Lys est utilisée de manière plus ou moins spécifique (brevet FR95/13543 du 15. 11.95) dans des médicaments et compositions pour le traitement préventif et curatif des rides du visage, du cou et des mains, sousforme de lotions, gels en application locale, ainsi que comme agent d'activation et de potentialisation des mécanismes physiologiques de coopérations cellulaires.

Ce brevet revendique également l'utilisation de la séquence Gly-His-Lys seule ou en association avec des activateurs de l'aMSH, pour l'accélération de la mélanogénèse ....obtention d'un bronzage naturel et d'une protection totale contre les radiations solaires (UV).

Tous ces documents font donc référence à des domaines très éloignés du problème posé et résolu dans cette demande de brevet.

Biotine - Résumé des connaissances (littérature - brevets) La biotine est une vitamine du groupe B, appelée également vitamine H ou Bios II, qui a été isolée par Kôgl F. et Tonnis B. en 1936 à partir du jaune d'oeuf.

Elle stimule directement la différentiation des kératinocytes et doit être apportée par l'alimentation car l'organisme humain ne peut la synthétiser.

La carence en biotine se traduit chez l'animal et chez l'Homme, par des symptômes comme : alopécie, dermatite, anémie, hypercholestérolémie et troubles de l'appareil reproducteur.

Les utilisations de la biotine peuvent être regroupées en deux groupes : médicales et comme co-réactif (avec l'avidine) dans des réactions de type ELISA qui servent à mesurer différents constituants biochimiques.

Parmi les applications médicales de la Biotine, on peut citer parmi d'autres très nombreux exemples: # Comme constituant d'un mélange à utiliser dans l'alopécie et dans l'activation de la pousse des cheveux ou l'entretien des phanères, composé d'autres produits comme un extrait végétal (par exemple brevet W09713492 ou US5750107) ou animal (par exemple US5827510), # Comme ajout dans la ration de personnes présentant des symptômes de retard mental, de comas d'acidose cétonique, de Candidoses chronique et d'alopécie (par exemple Munnich et al. (1980) Ann. Med. Interne - Paris 131 :435-437, # Comme traitement oral du syndrome de Dupré, dit du cheveu incoiffable (par exemple Shelley W. B. et al. J. Am. Acad. Dermatol. 13 :97-102.

Parmi les méthodes diagnostiques, on peut citer les kits commerciaux de différentes marques comme Boërhinger, Sigma ...., ainsi que des applications plus ponctuelles (Bettens F. et al. (1991) Eur. J Clin. Chem. Clin. Biochem. 29 :685-688; Chevrier D. et al. (1995), FEMS Immunol. Med Microbiol. 10:245-50 1; (Chomel J. J. et al., J Virol. Method 68:97-104).

Tous ces documents font référence soit à des domaines très éloignés du problème posé et résolu dans cette demande de brevet, soit à des solutions différentes puisque si la biotine est mentionnée pour le même type de problème, elle fait partie d'une association de produits dont on ne peut préciser pour chacun l'exacte contribution vis-à-vis de l'activité finale revendiquée.

L'objet de notre découverte est donc que nous avons réuni trois caractéristiques dans la seule et unique nouvelle molécule N-Biotinyl-Gly-His-Lys: # l'action propre du tripeptide sur: > la néoformation de vaisseaux sanguins ou sur le maintien du follicule pileux dans un contexte très bien vascularisé pour lui assurer un métabolisme

performant et donc un fonctionnement correct assurant la survie ou la repousse du poil, > la synthèse d'un collagène de qualité assurant un ancrage correct du follicule pileux dans la matrice cutanée, # l'action propre de la Biotine sur l'apport en vitamine et cofacteur enzymatique à l'endroit même de son utilisation et où sa carence se traduit macroscopiquement par la perte et/ou par l'absence de repousse des cheveux, # le greffage de ces deux molécules en une seule qui, # améliore l'ancrage du follicule pileux grâce à l'augmentation de la synthèse de collagène, > augmente la stabilité de ces deux molécules dans le produit final, > augmente la biodisponibilité dans l'environnement ciblé qu'est le follicule pileux, > simplifie le travail de l'homme de l'art en formulation galénique car il n'a plus qu'une seule molécule à incorporer dans une composition complexe au lieu de deux ainsi que par la grande stabilité du Biotinyl-Gly-His-Lys, > crée une synergie évidente par rapport aux activités propres constatées pour la
Biotine et pour le tripeptide Gly-His-Lys lorsqu'il sont utilisés soit seul soit en association entre eux.

Le N-Biotinyl-Gly-His-Lys, objet de cette demande de brevet, peut être obtenu soit par synthèse chimique classique (en phase hétérogène ou en phase homogène), soit par synthèse enzymatique (Kullman et al., J. Biol. Chem. 1980, 255, 8234) à partir des acides aminés constitutifs ou de leurs dérivés, puis par le greffage sur la partie N-terminale de la Glycine du tripeptide Gly-His-Lys par une molécule de Biotine.

La petite taille du tripeptide Gly-His-Lys permet d'en faire la synthèse industrielle, à un coût avantageux et son greffage avec la Biotine représente un faible surcoût par rapport à la synergie ainsi créée. Sa grande activité démontrée en autorise l'utilisation commerciale dans un grand nombre de produits cosmétiques ou dermopharmaceutiques financièrement acceptables.

Le tripeptide Gly-His-Lys peut être obtenu également par fermentation d'une souche de bactéries, modifiées ou non par génie génétique, pour produire les séquences recherchées ou leurs différents fragments.

Le tripeptide Gly-His-Lys peut être obtenu par extraction de protéines d'origine animale ou végétale, préférentiellement végétale, susceptibles de contenir ces séquences au sein de leur structure, suivie d'une hydrolyse contrôlée, enzymatique ou non, qui libère le fragment peptidique de séquence Gly-His-Lys dans les plantes qui sont susceptibles de contenir ces séquences au sein de leur structure.

L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces fragments peptidiques.

A partir de ce tripeptide obtenu selon un quelconque procédé mentionné ci-dessus, il est facile pour l'homme de l'art de réaliser le produit de l'invention en greffant, par n'importe quel procédé, une molécule de biotine sur la partie N-terminale de la glycine du tripeptide. Sans être exhaustifs, à titre d'exemple, nous indiquons, ciaprès deux possibilités.

L'accrochage de la biotine sur les fonctions amines d'un peptide se fait par réaction d'esters activés de la biotine (par exemple : ester de paranitrophenyl ou ester de Nhydroxy-succinimide), ou par tout autre forme d'activation de la biotine (EtOCOCI, DCC, TBTU, BOP, ...). La réaction est alors suivie d'une purification par les méthodes classiques de la chimie des peptides, par exemple la cristallisation, la chromatographie.

L'accrochage peut également se faire directement pendant la synthèse en phase solide du peptide (LobI et al : Biochem. , 1988,170, p1055-1060). Dans ce cas, on utilise un excès de réactif et augmente le temps de couplage pour compenser la faible réactivité. La dernière étape de clivage du peptide n'est pas modifiée du fait de la présence de la biotine sur le peptide.

Dans les deux cas, en raison de la faible solubilité da la biotine dans les solvants organiques classiques, la réaction doit se faire dans le diméthylformamide (DMF).

Enfin, il est également possible, sans perdre l'activité revendiquée dans ce brevet, d'estérifier le groupe carboxyle du N-Biotinyl-Gly-His-Lys pour en augmenter la stabilité et la disponibilité tissulaire par facilitation du passage de la barrière lipidique cutanée de ce type de structure essentiellement hydrophile.

A titre d'exemple illustrant l'invention, on cite quelques formules cosmétiques représentatives mais non limitatives de l'invention: Exemple n 1: Gel > Carbopol 1342R 0,3 > Propylène glycol 2,0 > Glycérine 1,0 Vaseline blanche 1,5 Cylomethicone 6,0 > Alcool cétylique 0,5 LubrajelR MS 10 Triéthanolamine 0,3 > N-Biotinyl-Gly-His-Lys 0,0005 Eau, conservateurs, parfum qsp 100 g.

Exemple n 2: Crème > BrijR 721 2. 4 VolopoR S72 2. 6 Prostéayl-15 Cire d'abeille 0.5 > AbilR ZP 2434 3. 0 > Propylène glycol 3.0 CarbopolR 941 0.25 Triéthanolamine 0.25 > N-Biotinyl-Gly-His-Lys 0,005 > Eau, conservateurs, parfums qsp 100 g Exemple n 3: Lotion capillaire contre la chute des cheveux Ethanol DEBIOO 10 > Castor oil 1.5 > Incronam 30 1. 0 > Croduret 40 1. 0 > PVP k90 0. 4 Crotéine K 0. 3

> Gafquat 755N 0. 2 N-Biotinyl-Gly-His-Lys 0,010 > Eau, conservateurs, parfums qsp 100 g Exemple n 4: Shampooing contre la chute des cheveux Empicol EBS3/M 43. 0 > Incronam 30 10. 0 > Empilan CDE 3. 0 Castor oil 1. 5 > Citrol EGMS 2. 0 > Acide lactique => pH 6.5-7.0 > N-Biotinyl-Gly-His-Lys 0,005 Eau, conservateurs, parfums qsp 100 g Les activités décrites au début de cette demande sont illustrées par les exemples suivants.

Exemple n 5 : Augmentation de la synthèse de collagène: in vitro La méthode choisie est une variante de celle décrite par Augustin C. et al. (Skin Pharmacol. (1997) 10 :63-70) ce que nous avons utilisé des explants de peau humaine au lieu de fibroblastes pulmonaires humains, ceci afin de rendre nos résultats directement exploitables en cosmétologie.

Ces explants, provenant de plastie mammaire, sont incubés, pendant 72 heures en présence de 3H-proline, avec le N-Biotinyl-Gly-His-Lys sous trois concentrations finales dans le milieu de culture (1.10-4%, 3.10-4% et 1.10-3 %; soit 1, 3 et 10 ppm).

Les explants sont alors lavés, le derme et l'épiderme de chaque explant sont séparés, homogénéisés et lysés. La mesure de l'incorporation de 3H-proline est alors réalisée dans chaque lysat. Les essais sont faits en triplicate.

Parallèlement des contrôles négatifs sont réalisés dans le mêmes conditions mais en l'absence du tripeptide. Des contrôles, positifs, quant à eux, sont réalisés en remplaçant le tripeptide testé par de la vitamine C.

En présence de 1, 3 ou 10 ppm du N-Biotinyl-Gly-His-Lys, l'incorporation de 3Hproline qui traduit la synthèse de collagène, est augmentée de respectivement 12,5

0,8 %, 36,3 2,2 % et 65,1 3,2 % par rapport à ce qui est constaté dans les expériences témoins (sans le N-Biotinyl-Gly-His-Lys).

Dans les mêmes conditions, le produit de référence, l'acide ascorbique, à la concentration de 0.5mM, augmente la synthèse du collagène de 37,4 ( 4,4) %.

Enfin, et ceci est très important dans l'application capillaire car facilitant l'ancrage du follicule, une mesure complémentaire a été réalisée en utilisant un anticorps polyclonal anti-collagène IV ( Rockland 600-401-106) et un conjugué antiimmunoglobulines de lapin-péroxydase (Tébu <L42007). S'il y a production, et donc, présence de collagène IV en fin d'incubation avec le N-Biotinyl-Gly-His-Lys, il y a formation d'un complexe dont l'activité péroxydasique peut être quantifiée sur film Kodak MP par la méthode ECL ("enhanced chimiluminescence", Amersham).

Dans cette expérience complémentaire, en présence des concentrations de NBiotinyl-Gly-His-Lys testées précédemment (1,3 et 10 ppm), la synthèse de collagène IV a été augmentée de respectivement 21,29 et 37% par rapport aux expériences témoins, donc sans N-Biotinyl-Gly-His-Lys, augmentations comparables à celles obtenues avec la vitamine C dans les mêmes conditions.

Exemple n 6 : Effet sur la chute et la repousse de cheveux: in vivo L'étude portant sur 15 volontaires de sexe masculin, âgés de 26 à 50 ans et présentant des problèmes capillaires, a commencé par la coupe des cheveux, très près de la peau, sur une zone de quelques centimètres carrés.

Une microphotographie de la zone ainsi délimitée est alors réalisée.

Trois jours plus tard, une nouvelle macrophotographie de la même zone est prise sous le même angle.

Pendant les onze semaines suivantes, à l'exclusion de tout produit cosmétique autre que leur shampooing habituel, les quinze volontaires ont utilisé quotidiennement une lotion contenant 10 ppm de N-Biotinyl-Gly-His-Lys.

A la fin de cette période, le même protocole que précédemment a été utilisé : des cheveux, très près de la peau, sur une zone de quelques centimètres carrés suivie de la prise d'une microphotographie de la zone ainsi délimitée immédiatement et 3 jours après.

Après analyse de ces images, comme une certaine repousse naturelle a eu lieu pendant cette période, il est possible de dénombrer la répartition des cheveux en groupes anagène, catagène et télogène. Comme les photos sont superposables, il est possible de distinguer les endroits où les cheveux ont poussé (anagène), où les cheveux n'ont pas subi de changement (catagène) et les endroits où les cheveux ont disparu (télogène).

Le tableau suivant montre les pourcentages des cheveux présents dans les 3 phases (moyenne SEM) pour chaque groupe, avant et après onze semaines de traitement.

Il est à noter, d'une part que les pourcentages obtenus avant le traitement correspondent aux fourchettes des valeurs trouvées dans la littérature, ce qui valide le panel choisi et la méthode de mesure et que, d'autre part cette amélioration a été constatée chez les 15 volontaires de l'étude.

Anagène Catagène Télogène Avant le traitement 72,6 3,38 19,9 0,3 4,2 1,73 Après le traitement 86,6 2,91 12,5 3,02 0,9 + 1,24 Ces résultats vont dans le sens d'une amélioration de la santé des cheveux puisque l'on observe une diminution des scores des deux phases de latence et de perte de cheveux (respectivement - 37 % et-78 % pour les groupes catagène et télogène) alors que la phase de repousse des cheveux augmente (groupe anagène : 19 %).

Le traitement informatique des microphotographies précédentes permet de mesurer deux autres paramètres significatifs : volume capillaire apparent et la vitesse de repousse des cheveux Le tableau suivant montre les différences (Après traitement - Avant traitement) entre les variations observées pendant les 2 périodes de trois jours (unités arbitraires, moyenne SEM) sur ces deux paramètres : capillaire apparent et vitesse de la repousse des cheveux pour chaque groupe.

Volume apparent Vitesse de repousse Avant le traitement 4500 569 7,4 1,8 Après le traitement 7600 634 9,9 2,7

Ces résultats montrent clairement l'amélioration de la santé des cheveux puisque l'on observe une augmentation du volume apparent (+ 68,8%) et de la vitesse ce repousse des cheveux (+ 33,8 %).

Les deux derniers exemples démontrent clairement l'efficacité in vitro et, plus important encore pour le problème posé ici, in vivo, du N-Biotinyl-Gly-His-Lys sur l'ensemble des mécanismes qui entretiennent l'environnement du bulbe pileux dans les meilleurs conditions possibles et qui se traduit par l'amélioration de la qualité et de la quantité des cheveux.

Sur la base des résultats montrés dans les exemples 5 et 6, l'effet bénéfique sur la synthèse de collagène de qualité et sur la tonicité cutanée autorise l'utilisation du NBiotinyl-Gly-His-Lys pour tous les soins de la peau en général comme, par exemple, lorsque l'on recherche un effet antirides, raffermissant, tonifiant, sans que cette liste soit limitative.

Les mêmes tests ont été réalisés sur la Biotine seule ou sur le tripeptide Gly-HisLys seul. Les résultats ne sont pas montré ici mais, l'examen des chiffres montre la présence d'une synergie importante créée par le greffage de la Biotine sur le tripeptide. Par exemple, dans le cas de l'exemple sur la synthèse de collagène, en présence de respectivement 5 ppm du tripeptide Gly-His-Lys ou de 5 ppm de Biotine (ce qui représente approximativement la contribution de chaque molécule dans 10 ppm de Biotinyl-G-H-K), les augmentations étaient de 18,2 0,3% et 4,1
0,2 %. A partir de ces résultats, sur la base de l'additivité des effets, il était possible de s'attendre à une augmentation d'environ 22 % or, le résultat trouvé dans l'exemple N 3 est de 65,2 3,2% soit environ 3 fois la valeur attendue, ce qui correspond bien à la création d'une forte synergie entre les effets propres des deux molécules par leur greffage chimique.

Le N-Biotinyl-Gly-His-Lys peut être utilisé à des concentrations variant entre 0,5 et 1000 ppm (p/p), préférentiellement entre 1 et 20 ppm (p/p) dans le produit cosmétique ou dermopharmaceutique fini.

Le N-Biotinyl-Gly-His-Lys peut être utilisé sous forme de solution, de dispersion, d'émulsion, ou encapsulé dans des vecteurs comme les macro-, micro- ou nanocapsules, des liposomes ou des chylomicrons, ou inclus dans des macro-,

micro- ou nanoparticules, ou dans des microéponges, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux.

Le N-Biotinyl-Gly-His-Lys peut être utilisé dans toute forme galénique: émulsions H/E et E/H, laits, lotions, pommades, lotions capillaires, shampooings, savons, poudres, sticks et crayons, sprays, huiles corporelles.

Le N-Biotinyl-Gly-His-Lys peut être utilisé avec tout autre ingrédient habituellement utilisé : d'extraction et/ou de synthèse, polymères gélifiants et viscosants, tensioactifs et émulsifiants, principes actifs hydro- ou liposolubles, extraits végétaux, extraits tissulaires, extraits marins, filtres solaires, antioxydants.

Sur la base des résultats montrés dans les exemples 5 et 6, l'effet bénéfique sur la synthèse de collagène de qualité et donc sur la tonicité cutanée, autorise l'utilisation du N-Biotinyl-Gly-His-Lys pour tous les soins de la peau en général comme, par exemple, lorsque l'on recherche un effet antirides, raffermissant, tonifiant, sans que cette liste soit limitative ; que pour prévenir, réduire ou supprimer la chute des poils et des cheveux ainsi que pour favoriser leur repousse.

Le N-Biotinyl-Gly-His-Lys est utilisé dans les applications cosmétiques et dermopharmaceutiques pour tous les soins de la peau (antirides, raffermissant, tonifiant....), sans que cette liste soit limitative ; particulièrement pour prévenir, réduire ou supprimer la chute des poils et des cheveux ainsi que pour favoriser leur repousse.

Le N-Biotinyl-Gly-His-Lys est utilisé soit seul, soit préalablement incorporé dans des préparations cosmétiques ou dermopharmaceutiques dans la préparation d'un médicament, pour tous les soins de la peau (antirides, raffermissant, tonifiant....), sans que cette liste soit limitative, et particulièrement pour prévenir, réduire ou supprimer la chute des poils et des cheveux ainsi que pour favoriser leur repousse.

Claims

Biotine sur la partie N-terminale du tripeptide Gly-His-Lys, créant ainsi une synergie par rapport à la simple additivité des effets propres de ces deux produits.

Revendications 1. Produit N-Biotinyl-Gly-His-Lys obtenu par le greffage d'une molécule de
2. Produit selon la revendication 1, estérifié sur le groupe carboxyle de la lysine.
3. Utilisation du biotinyl-tripeptide selon les revendications 1 à 2 dans des compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques.
4. Compositions cosmétiques dermopharmaceutiques selon la revendication 3 caractérisées en ce que le tripeptide Gly-His-Lys est obtenu par synthèse chimique, par voie enzymatique, par fermentation ou par extraction de protéines d'origine végétale.
5. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 4 caractérisées en ce que le tripeptide Gly-His-Lys est utilisé par synthèse peptidique classique en phase homogène ou hétérogène ou par synthèse enzymatique à partir des acides aminés constitutifs.
6. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 5 caractérisées en ce que le N-Biotinyl-Gly-His-Lys selon les revendications 1 à 2 est obtenu soit # par greffage de la biotine sur le tripeptide par réaction d'esters activés de la biotine (par exemple : ester de paranitrophenyl ou ester de N-hydroxy- succinimide), ou par tout autre forme d'activation de la biotine (EtOCOCI,

DCC, TBTU, BOP, ...); la réaction étant alors suivie d'une étape de purification réalisée par exemple par cristallisation ou par chromatographie, # par accrochage de la biotine sur la partie N-terminale de la Glycine directement pendant la synthèse en phase solide du tripeptide ; présence d'un excès de réactif ; dernière étape de clivage du peptide n'étant pas modifiée du fait de la présence de la biotine sur le peptide; sachant que dans les deux cas, en raison de la faible solubilité da la biotine dans les solvants organiques classiques, la réaction doit se faire dans le diméthylformamide (DMF).

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7. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 6 caractérisées en ce que le N-Biotinyl-Gly-His-Lys selon les revendications 1 à 2 est utilisé à des concentrations variant entre 0,5 et 1000 ppm (p/p), préférentiellement entre 1 et 20 ppm (p/p) dans le produit fini.
8. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 7 caractérisées en ce que le N-Biotinyl-Gly-His-Lys selon les revendications 1 à 2 est utilisé sous forme de solution, de dispersion, d'émulsion, ou encapsulé dans des vecteurs comme les macro-, micro- ou nanocapsules, des liposomes ou des chylomicrons, ou inclus dans des macro-, micro- ou nanoparticules, ou dans des microéponges, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux.
9. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 8 caractérisées en ce que le N-Biotinyl-Gly-His-Lys selon les revendications 1 à 2 est utilisé dans toute forme galénique : émulsionsH/E et

E/H, laits, lotions, pommades, lotions capillaires, shampooings, savons, poudres, sticks et crayons, sprays, huiles corporelles.
10. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 9 caractérisées en ce que le N-Biotinyl-Gly-His-Lys selon les revendications 1 à 2 est utilisé avec tout autre ingrédient habituellement utilisé: lipides d'extraction et/ou de synthèse, polymères gélifiants et viscosants, tensioactifs et émulsifiants, principes actifs hydro- ou liposolubles, extraits végétaux, extraits tissulaires, extraits marins, filtres solaires, antioxydants.
11. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 10 destinées aux soins de la peau, pour obtenir un effet antirides, raffermissant, tonifiant et particulièrement pour prévenir, réduire ou supprimer la chute des poils et des cheveux ainsi que pour favoriser leur repousse.
12. Compositions cosmétiques ou dermopharmaceutiques selon les revendications

3 à 10 utilisées pour la préparation de médicament destiné aux soins de la peau, pour obtenir un effet antirides, raffermissant, tonifiant et particulièrement

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pour prévenir, réduire ou supprimer la chute des poils et des cheveux ainsi que pour favoriser leur repousse.
13. Utilisation du seul N-Biotinyl-Gly-His-Lys selon les revendications 1 à 2, obtenu selon les revendications 4 à 6 à des concentrations selon la revendication 7, pour la préparation d'un médicament destiné aux soins de la peau, pour obtenir un effet antirides, raffermissant, tonifiant et particulièrement pour prévenir, réduire ou supprimer la chute des poils et des cheveux ainsi que pour favoriser leur repousse.