FR2730233A1

FR2730233A1 - TRIARYLOXYACETYL DERIVATIVES OF EPIPODOPHYLLOTOXINS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND THEIR USE AS ANTI-CANCER DRUGS

Info

Publication number: FR2730233A1
Application number: FR9501433A
Authority: FR
Inventors: Thierry Imbert; Yves Guminski; Francois Colpaert; Jean Pierre Tarayre; Bridget Hill
Original assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Current assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Priority date: 1995-02-08
Filing date: 1995-02-08
Publication date: 1996-08-09
Anticipated expiration: 2015-02-08
Also published as: WO1996024602A1; AU4722996A; EP0808319A1; FR2730233B1; CA2212956A1; JPH10513469A

Abstract

Derivatives of general formula (I), wherein R' is methyl or 2-thienyl, R is an acyl group of formula R1OCH2CO, wherein R1 is a phenyl ring ortho-, meta- or para-substituted by one or more substituents X, where X is a formyl, acetyl, cyano or trifluoroacetyl group, and pharmaceutically acceptable salts thereof, are disclosed. A method for preparing said derivatives, their use as a drug, and pharmaceutical compositions containing them, are also disclosed.

Description

La présente invention concerne de nouveaux dérivés acylés de l'étoposide, leur procédé de préparation et leur utilisation à titre de médicament. The present invention relates to novel acylated derivatives of etoposide, to a process for their preparation and to their use as a medicament.

Dans le domaine des composés chimiques ayant pour origine les lignanes naturels, il existe des dérivés hémisynthétiques constituant la classe des épipodophylloïdes, dont fait partie l'éthylidène glucoside de déméthyl. In the field of chemical compounds originating from natural lignans, there are semisynthetic derivatives constituting the class of epipodophylloids, including demethyl ethylidene glucoside.

épipodophyllotoxine (étoposide, R = H, R' = CH3) et le thénylidène glucoside de déméthyl-épipodophyllotoxine (téniposide R = H, R' = 2-thiényl).epipodophyllotoxin (etoposide, R = H, R '= CH3) and the phenylidene glucoside of demethyl-epipodophyllotoxin (teniposide R = H, R' = 2-thienyl).

Ces deux composés sont couramment utilisés en clinique comme agents anticancéreux. These two compounds are commonly used clinically as anticancer agents.

L'étoposide possède des propriétés antitumorales pour traiter différentes formes de cancer, et en particulier le cancer du poumon à petites cellules et le cancer des testicules. L'étoposide comme le téniposide sont considérés comme des inhibiteurs de l'enzyme topoisomérase II liée à 11ADN. Etoposide has antitumor properties to treat various forms of cancer, particularly small cell lung cancer and testicular cancer. Etoposide and teniposide are considered to be inhibitors of the topoisomerase II enzyme linked to 11 DNA.

La topoisomérase II est une enzyme nucléaire qui a la propriété de couper les deux brins de 1'ADN et de les ressouder. Son inhibition par l'étoposide passe par la formation et la stabilisation d'un complexe appelé complexe clivable où 1'ADN et l'enzyme sont liés par liaison covalente. Ce complexe (ADN-enzyme-drogue) stabilisé
empêche ainsi 1'ADN de se relier et conduit par la suite à la mort cellulaire (DNA topoisomérase in cancer, Milan POTMESIL, Kurt M. KOHN, Oxford University
Press 1991, p.230).Topoisomerase II is a nuclear enzyme which has the property of cutting the two strands of DNA and resoldering them. Its inhibition by etoposide involves the formation and stabilization of a complex called a cleavable complex where DNA and the enzyme are covalently bound. This complex (DNA-enzyme-drug) stabilized
thus prevents the DNA from connecting and subsequently leads to cell death (DNA topoisomerase in cancer, Milan POTMESIL, Kurt M. KOHN, Oxford University
Press 1991, p.230).

Il apparaît durant le traitement des patients par l'étoposide un certain nombre d'inconvénients comme avec la plupart des anticancéreux en termes d'effets secondaires indésirables, de mauvaise tolérance, ou même de toxicité reliés à la dose utilisée, comme par exemple, des désordres hématologiques (neutropénie, thrombocytopénie), cardiovasculaires comme l'hypotension, ou également des nausées, vomissements ou encore alopécie, et muscites à fortes doses. L'efficacité anticancéreuse de l'étoposide est donc limitée par ces effets secondaires. During treatment of patients with etoposide, there are a number of disadvantages, as with most anticancer drugs, in terms of adverse side effects, poor tolerability, or even toxicity related to the dose used, such as hematologic disorders (neutropenia, thrombocytopenia), cardiovascular disorders such as hypotension, or also nausea, vomiting or alopecia, and muscitis in high doses. The anticancer efficacy of etoposide is therefore limited by these side effects.

Par ailleurs, il est montré que l'efficacité thérapeutique de l'étoposide est également limitée en termes de survie par augmentation des doses administrées chez la souris dans le modèle de la leucémie P 388 (voir tableau). Furthermore, it is shown that the therapeutic efficacy of etoposide is also limited in terms of survival by increasing the doses administered in mice in the model of P 388 leukemia (see table).

Il est par conséquent nécessaire de rechercher de nouveaux produits provoquant une meilleure survie, quelque soit la dose utilisée, par rapport à l'étoposide. De façon particulièrement inattendue, cette meilleure survie est observée avec les composés de la présente invention dans le test in vivo dans le modèle de la leucémie P388, et montre ainsi leur meilleure efficacité thérapeutique anticancéreuse.
La présente invention concerne donc les dérivés triacylés d'éthylidène ou de thénylidène glucoside de déméthylépipodophyllotoxine de formule I

dans laquelle R représente un groupement acyle de type phénoxy acétyle de formule
R1OCH2CO dans laquelle R1 est un noyau phényle substitué par un ou plusieurs substituants X, X représentant un groupe formyle, acétyle, cyano ou trifluoroacétyle, en position ortho, méta ou para, et R' représente un groupe méthyle ou 2-thiényl, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.It is therefore necessary to look for new products that will improve survival, regardless of the dose used, compared to etoposide. In a particularly unexpected manner, this improved survival is observed with the compounds of the present invention in the in vivo test in the model of P388 leukemia, and thus shows their better anticancer therapeutic efficacy.
The present invention thus relates to the triacyl derivatives of ethylidene or of the phenylidene glucoside of demethylepipodophyllotoxin of formula I

in which R represents a phenyl acetyl type acyl group of formula
R 1 OCH 2 CO wherein R 1 is a phenyl ring substituted by one or more substituents X, X is formyl, acetyl, cyano or trifluoroacetyl, ortho, meta or para, and R 'is methyl or 2-thienyl, and pharmaceutically acceptable salts.

D'une manière préférentielle, R' représente un groupe méthyle. Preferably, R 'represents a methyl group.

Avantageusement, R1 représente un groupe choisi parmi les 2-formyl phényle, 4formyl-phényle, 3-formyl-phényle, 4acétyl phényle, 4cyano phényle, 4 trifluoro acétyl phényle et 2,diformyl phényle. Advantageously, R 1 represents a group chosen from 2-formyl phenyl, 4 formyl-phenyl, 3-formyl-phenyl, 4 acetyl phenyl, 4 cyano phenyl, 4 trifluoro acetyl phenyl and 2, diformyl phenyl.

Des dérivés trisubstitués de formule I où R' = CH3 et R= aryloxyacétyl, sont décrits dans la demande de brevet FR-A-2 699 535. Ces composés, qui ont montré une activité anticancéreuse améliorée par rapport à l'étoposide, ne manifestent pas une survie aussi importante que les nouveaux dérivés selon la présente invention. Trisubstituted derivatives of formula I wherein R '= CH3 and R = aryloxyacetyl are described in patent application FR-A-2,699,535. These compounds, which showed improved anticancer activity compared with etoposide, do not show not as important a survival as the new derivatives according to the present invention.

L'activité particulièrement intéressante observée pour les dérivés selon l'invention apparaît provenir de la substitution du noyau aromatique du groupement R phénoxyacétyle tel qu'elle est définie ciaessus. The particularly interesting activity observed for the derivatives according to the invention appears to come from the substitution of the aromatic ring of the phenoxyacetyl R group as defined above.

La présente invention concerne également les procédés de préparation d'un composé de formule I, pour lequel on fait réagir le dérivé de formule I ci-dessus pour lequel R représente un atome d'hydrogène et R' est défini ci-dessus, avec un précurseur de 1 'acyle R défini auparavant, tel que par exemple l'acide R1 OCH2COOH activé, en particulier un halogénure d'acide R 1OCH2COX, dans lequel X représente un halogène tel que le chlore ou le brome, de préférence le chlore. The present invention also relates to the processes for the preparation of a compound of formula I, for which the compound of formula I above for which R represents a hydrogen atom and R 'is defined above, is reacted with a acyl precursor precursor R defined above, such as for example the acid R1 OCH2COOH activated, in particular an acid halide R 1OCH2COX, wherein X represents a halogen such as chlorine or bromine, preferably chlorine.

Il s'agit d'une manière préférentielle des chlorures des acyles dont les groupes R1 sont définis ci-dessus. This is a preferential chlorides acyl whose R1 groups are defined above.

Les chlorures d'acide utilisés sont préparés par action du chlorure d'oxalyle dans le CH2Cl2 à O C en présence de traces de DMF. Le couplage avec les dérivés de formule I pour lesquels R=H se fait directement dans le même solvant avec un rapport molaire (chlorure d'acideldérivé) de 5 à 8, en présence de pyridine. The acid chlorides used are prepared by the action of oxalyl chloride in CH 2 Cl 2 at 0 ° C. in the presence of traces of DMF. The coupling with the derivatives of formula I for which R = H is carried out directly in the same solvent with a molar ratio (acideldérivé chloride) of 5 to 8, in the presence of pyridine.

On obtient ainsi les dérivés de formule générale I. The derivatives of general formula I are thus obtained.

Les exemples ci-dessous décrivent la préparation de différents composés de formule générale I selon l'invention. The examples below describe the preparation of various compounds of general formula I according to the invention.

EXEMPLE 1 : 4'-Déméthyl 4(2-formyl phénoxy acétyl)4-0-(2,3-bis(2-formyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-ss-D-glucosyl)-épipodophyllotoxine.EXAMPLE 1 4'-Demethyl (2-Formylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis (2-formylphenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) -epipodophyllotoxin.

Dans un ballon tricol de 100 ml, 2,3 g d'acide 2-formyl phénoxy acétique (12,7 mmoles) sont placés en solution dans 50 ml de CH2C12 sous argon à l'abri de l'humidité. Un bain de glace maintient la température du milieu réactionnel à 0 C, puis sont introduits l ml de DMF et 1,78 g de chlorure d'oxalyle (14 mmoles) dans 5 ml de
CH2C12 goutte à goutte. Le milieu est agité 2h à cette température.Cette solution est alors introduite goutte à goutte dans le milieu réactionnel d'un second tricol de 250 ml dans lequel sont placés 1,5 g d'étoposide (2,55 mmoles), 2,1 ml de pyridine dans 50 ml de CH2C12 sous agitation à 0 C. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation 24 h avec retour à température ambiante. Le milieu réactionnel est versé sur une solution d'HCl N (l00 ml) puis la phase organique est décantée, lavée par une solution saturée de Nazi, puis séchée sur Na2SO4 et évaporée. Le résidu est chromatographié sur SiO2 et élué par un mélange éther de pétrole / AcOEt: 60/40 puis 50/50 pour obtenir 710 mg (Rd 25%) de dérivé triacylé qui est cristallisé dans l'éther isopropylique.In a three-necked flask of 100 ml, 2.3 g of 2-formyl phenoxyacetic acid (12.7 mmol) are placed in solution in 50 ml of CH 2 Cl 2 under argon in the absence of moisture. An ice bath maintains the temperature of the reaction medium at 0 ° C., then 1 ml of DMF and 1.78 g of oxalyl chloride (14 mmol) are introduced into 5 ml of
CH2Cl2 drip. The medium is stirred for 2 hours at this temperature. This solution is then introduced dropwise into the reaction medium of a second 250 ml tricol in which 1.5 g of etoposide (2.55 mmol), 2.1 ml of pyridine in 50 ml of CH 2 Cl 2 with stirring at 0 ° C. The reaction mixture is left stirring for 24 h with return to ambient temperature. The reaction medium is poured into a solution of N HCl (100 ml), then the organic phase is decanted, washed with a saturated solution of NaCl, then dried over Na 2 SO 4 and evaporated. The residue is chromatographed on SiO 2 and eluted with a petroleum ether / AcOEt mixture: 60/40 then 50/50 to obtain 710 mg (25% Rd) of triacylated derivative which is crystallized in isopropyl ether.

Anal C56 H20 22: PM= 1074,994
C H
Calc 62,57 4,69
Tr 62,32 4,82 F#135 C
IR v (KBr) cm-l = 1774, 1687, 1601, 1485, 1460.Anal C56 H20 22: MW = 1074.994
CH
Calc 62.57 4.69
Tr 62.32 4.82 F # 135C
IR v (KBr) cm-1 = 1774, 1687, 1601, 1485, 1460.

Spectre de Masse (DCI/NH3) m/e = 1092 (M + NH3) 1H RMN 200 MHz CDC13 # : 1.32 (3H, d, J = 4,9 Hz, H8") ; 2,8 (1H, m, H3); 3,15 (1H, dd, J = 14.1 Hz et 5,1 Hz, H2) : 3,64 (6H, s, OCH3 x 2) ; 5.33 (1H, t, J = 8.6 Hz, H3'') ; 5.65 (1H, s, OCHAO) ; 5.86 (1H, s, OCHBO); 6.24 (2H, s, H2, H6.); 6.49 (1H, s,H8,) 6.46 (1H, d, J = 8.2 Hz,OAr: H ortho) 6.76 (1H, s, H5,) ;6.75 (1H, d, J = 8.2 Hz, OAr: H otho) 6.96-7.01 (4H, m, OAr: 14: H ortho, 3H para) ; 7.33-7.55 (3H, m, OAr: 3H meta) ; 7.79-7.86 (3H, m, OAr: 3H meta); 10.42 (1H, s, CHO); 10.49 (1H, s, CHO); 10.54 (1H, s, CHO).Mass Spectrum (DCI / NH 3) m / e = 1092 (M + NH 3) 1 H NMR 200 MHz CDCl 3: 1.32 (3H, d, J = 4.9 Hz, H 8 -): 2.8 (1H, m, H3) 3.15 (1H, dd, J = 14.1 Hz and 5.1 Hz, H2) 3.64 (6H, s, OCH3 x 2) 5.33 (1H, t, J = 8.6 Hz, H3 ' 5.65 (1H, s, OCHAO) 5.86 (1H, s, OCHBO) 6.24 (2H, s, H2, H6.) 6.49 (1H, s, H8,) 6.46 (1H, d, J = 8.2 Hz, OAr: H ortho) 6.76 (1H, s, H5,) 6.75 (1H, d, J = 8.2 Hz, OAr: H otho) 6.96-7.01 (4H, m, OAr: 14: H ortho, 3H para) 7.33-7.55 (3H, m, OAr: 3H meta); 7.79-7.86 (3H, m, OAr: 3H meta); 10.42 (1H, s, CHO); 10.49 (1H, s, CHO); (1H, s, CHO).

EXEMPLE 2 : 4'-Déméthyl 4'-(4-formyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-formyl phénoxyacétyl)- 4,6-éthylidène- ss-D-glucosyl) épipodophyl lotoxi ne. EXAMPLE 2 4'-Demethyl 4 '- (4-formyl phenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis (4-formylphenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-s-D-glucosyl) epipodophyl lotoxi born.

Par la même méthode que pour l'exemple I mais en utilisant l'acide 4formyl phenoxy acétique en lieu et place de l'acide 2-formyl phenoxy acétique, on obtient le composé triacylé recherché par chromatographie avec élution dans un mélange ether de pétrole / AcOEt 50/50 puis 40/60 et cristallisation dans l'éther éthylique avec un rendement de 60%. By the same method as for Example I but using 4formyl phenoxy acetic acid instead of 2-formyl phenoxy acetic acid, the triacyl compound obtained is obtained by chromatography with elution in a mixture of petroleum ether / AcOEt 50/50 then 40/60 and crystallization in ethyl ether with a yield of 60%.

Anal.: C56 H50 022, 0,55 H2O PM = 1084,884
C H H20
Calc. 62.57 4.69
Tr. 61.54 4.69 0.92%
corrigé 62.00 4.75 0.92% F#140 C
IR v (KBr) cm-1 = 1774, 1691, 1508
Spectre de masse (DCI/NH3) m/e = 1092 (M + NH3) 1H RMN 200 NHz CDCl3 # : 1.31(3H, d, J = 4,8 Hz, H8") : 2.8 (1H, m, H3) : 3.12 (1H, dd, J = 14.1 Hz et 5.08 Hz, H2) ; 3.62 (6H, s, 2 x OCH3) ; 5.30 (1H,t, J = 8.9
Hz, H3,); 5.68 (1H, s, OCHAO) : 5.87 (1H, s, OCHBO) ; 6.22 (2H, s, H2' H6') ; 6.49 (1H, s, H8,) ; 6.75 (1H, s, H5') ; 6.77 (2H, d, J = 7.49 Hz, OAr:: H ortho) 6.91 (2H, d, J = 8.6 Hz, OAr:H ortho) ; 7.04 (2H, d, J = 8.6 Hz, OAr, H ortho) 7.7-7.8 (6H, m, OAr, H méta) ; 9.77 (1H, s, CHO) ; 9.80 (1H, s, CHO) ; 9.85 (1H, s, CHO).Anal .: C56 H50 022, 0.55 H2O MW = 1084.884
CH H20
Calc. 62.57 4.69
Tr. 61.54 4.69 0.92%
corrected 62.00 4.75 0.92% F # 140 C
IR v (KBr) cm-1 = 1774, 1691, 1508
Mass Spectrum (DCI / NH 3) m / e = 1092 (M + NH 3) 1 H NMR 200 NHz CDCl 3:: 1.31 (3H, d, J = 4.8 Hz, H 8 -): 2.8 (1H, m, H 3) 3.12 (1H, dd, J = 14.1 Hz and 5.08 Hz, H2) 3.62 (6H, s, 2 x OCH3) 5.30 (1H, t, J = 8.9
Hz, H3,); 5.68 (1H, s, OCHAO): 5.87 (1H, s, OCHBO); 6.22 (2H, s, H2 'H6'); 6.49 (1H, s, H8,); 6.75 (1H, s, H5 '); 6.77 (2H, d, J = 7.49 Hz, OAr :: H ortho) 6.91 (2H, d, J = 8.6 Hz, OAr: H ortho); 7.04 (2H, d, J = 8.6 Hz, OAr, H ortho) 7.7-7.8 (6H, m, OAr, H meta); 9.77 (1H, s, CHO); 9.80 (1H, s, CHO); 9.85 (1H, s, CHO).

EXEMPLE 3 : 4'-Déméthyl 4'-(3-formyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(3-formyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-ss-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.EXAMPLE 3 4'-Demethyl 4 '- (3-Formylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis (3-formylphenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin .

Par la même méthode que pour l'exemple 1, mais en utilisant l'acide 3formyl phénoxy acétique à la place du 2-formyl phénoxy acétique on obtient le dérivé triacylé avec un rendement de 33% par chromatographie sur SiO2 et élution par un mélange de CH2Cl2 / Acétone 99/1 puis 95/5 et cristallisation dans l'acétate d'éthyle. By the same method as for Example 1, but using 3formylphenoxyacetic acid instead of 2-formylphenoxyacetic acid, the triacylated derivative is obtained with a yield of 33% by chromatography on SiO 2 and elution with a mixture of CH2Cl2 / Acetone 99/1 then 95/5 and crystallization in ethyl acetate.

F 1250C. F 1250C.

Anal. C56H50O22 PM= 1074,994
C H
Calc 62.57 4.69
Tr 62.09 4.70
EXEMPLE 4: 4'-Déméthyl 4'-(4cyano phénoxy acétyl)-40-(2,3-bis-(4-cyano phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-ss-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.Anal. C56H50O22 MW = 1074.994
CH
Calc 62.57 4.69
Tr 62.09 4.70
EXAMPLE 4 4'-Demethyl 4 '- (4cyano phenoxy acetyl) -40- (2,3-bis (4-cyano phenoxy acetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin.

Par la même méthode que pour l'exemple 1 mais en utilisant l'acide 4 cyano phénoxy acétique au lieu de l'acide 2-formyl phénoxy acétique, on obtient après chromatographie sur SiO2 et élution par un mélange éther de pétrole / AcOEt 50/50 et cristallisation dans l'éther isopropylique le dérivé triacylé avec un rendement de 75%. By the same method as for Example 1 but using 4 cyano phenoxy acetic acid instead of 2-formyl phenoxy acetic acid, after chromatography on SiO 2 and elution with a mixture of petroleum ether / AcOEt 50 / 50 and crystallization in isopropyl ether triacylated derivative with a yield of 75%.

F~153 C
Anal.: C56 H47 N3 O19 PM = 1066,01
C H N
Calc 63.09 4.44 3.94
Tr 62.77 4.63 3.82
IR v (KBr) cm-l = 2226, 1774, 1606, 1506, 1485
Spectre de masse (FAB) m/e = 1088 (M + Na)+ 1H 200 MHz RMN # : 1,36 (3H, d, J = 4.9 Hz, H8") ; 2.88 (1H, m, H3) ; 3.15 (1H, dd, J = 5.1 Hz et 14 Hz, H2); 5.31 (1H, t, J = 8.8 Hz, H3") ; 5.76 (1H, s,
OCHAO) ; 5.94 (1H, s, OCHBO) ; 6.27 (2H, s, H2, H6') ; 6.55 (1H, s, H8') ;6.79 (1H, s, H5,) ; 6.75 (2H, d, J = 9 Hz, OAr : Hortho);6.9O(2H,d,J=9Hz, OAr: H ortho); 7.04 (2H, d, J = 9 Hz, OAr: H ortho) ; 7.5 1-7.62 (6H, m, OAr: H méta).F ~ 153 C
Anal .: C56 H47 N3 O19 MW = 1066.01
CHN
Calc 63.09 4.44 3.94
Tr 62.77 4.63 3.82
IR v (KBr) cm-1 = 2226, 1774, 1606, 1506, 1485
Mass Spectrum (FAB) m / e = 1088 (M + Na) + 1H 200 MHz NMR δ: 1.36 (3H, d, J = 4.9 Hz, H 8 -) 2.88 (1H, m, H 3); (1H, dd, J = 5.1Hz and 14Hz, H2) 5.31 (1H, t, J = 8.8Hz, H3-); 5.76 (1H, s,
OCHAO); 5.94 (1H, s, OCHBO); 6.27 (2H, s, H2, H6 '); 6.55 (1H, s, H8 '); 6.79 (1H, s, H5,); 6.75 (2H, d, J = 9Hz, OAr: Hortho), 6.9O (2H, d, J = 9Hz, OAr: H ortho); 7.04 (2H, d, J = 9Hz, OAr: H ortho); 7.5 1-7.62 (6H, m, OAr: H meta).

EXEMPLE 5: 4'-Déméthyl 4'-(4acétyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4acétyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-ss-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.EXAMPLE 5 4'-Demethyl 4 '- (4-acetylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis (4-acetylphenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin.

Par la même méthode que pour l'exemple 1, mais en utilisant l'acide 4 acétyl phénoxy acétique au lieu de l'acide 2-formyl phénoxy acétique, on obtient avec un rendement de 77% par chromatographie sur SiO2 et élution par un mélange heptane / AcOEt 60/40 et cristallisation dans ltéthanol, le dérivé triacylé de l'étoposide. By the same method as for Example 1, but using 4 acetyl phenoxy acetic acid instead of 2-formyl phenoxy acetic acid, is obtained with a yield of 77% by chromatography on SiO 2 and elution with a mixture heptane / AcOEt 60/40 and crystallization in ethanol, the triacylated derivative of etoposide.

F#125 C
Anal C59 H56 022, H20 PM= 1135,105
C H
Calc 63.44 5.05
Tr 62.43 5.15
IR v (KBr) cm-1: 3624, 2920, 1774, 1880, 1601 IH RMN 200 MHz DMSO 6: 1.24 (3H, d, J = 4.8 Hz, He, ; 2.47 (3H, s, COCH3) ; 2.51 (3H, s, COCH3) ; 2.53 (3H, s, COCH3) ; 2.9-3.1 (2H, m, H2 H3); 5.20 (2H, s, OCH2CO) ; 5.3-5.4 (2H, m, H2" H3") : 5.79 (1H, s, OCHAO) ; 5.98 (1H, s, OCHBO) ; 6.29 (2H, s, H2, H6'); 6.52 (1H, s, H8') ; 7.11 (1H, s, H5,); 7.81 (2H, d, J = 8.7 Hz, OAr : H ortho) ; 6.97 (2H, d, J =8.7 Hz, OAr: H ortho) 7.06 (2H, d, J = 8.7 Hz, OAr : H ortho) ; 7.83 - 7.97 (6H, d, J = 8.7 Hz, OAr : H méta).F # 125 C
Anal C59 H56 022, H20 MW = 1135.105
CH
Calc 63.44 5.05
Tr 62.43 5.15
IR v (KBr) cm-1: 3624, 2920, 1774, 1880, 1601 1H NMR DMSO 6: 1.24 (3H, d, J = 4.8Hz, He, 2.47 (3H, s, COCH3); 3H, s, COCH3) 2.53 (3H, s, COCH3) 2.9-3.1 (2H, m, H2H3) 5.20 (2H, s, OCH2CO) 5.3-5.4 (2H, m, H2 "H3") 5.79 (1H, s, OCHAO), 5.98 (1H, s, OCHBO), 6.29 (2H, s, H2, H6 '), 6.52 (1H, s, H8'), 7.11 (1H, s, H5,); 7.81 (2H, d, J = 8.7 Hz, OAr: H ortho); 6.97 (2H, d, J = 8.7 Hz, OAr: H ortho) 7.06 (2H, d, J = 8.7 Hz, OAr: H ortho); 7.83 - 7.97 (6H, d, J = 8.7 Hz, OAr: H meta).

Par la même méthode sont préparés les composés suivants: 4'-Déméthyl 4'-(4-trifluoro acétyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-trifluoro acétyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-ss-D-glucosyl) épipodophyllotoxine. By the same method are prepared the following compounds: 4'-Demethyl 4 '- (4-trifluoroacetylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis (4-trifluoroacetylphenoxyacetyl) -4,6- ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin.

4'-Déméthyl, 4'-(2,4-diformyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(2,4-diformyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-ss-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.4'-Demethyl, 4 '- (2,4-diformylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis (2,4-diformylphenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) ) epipodophyllotoxin.

4'-Déméthyl-4'-(4-formyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-formyl phénoxy acétyl)4,6-thénylidène-ss-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.4'-Demethyl-4 '- (4-formylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis- (4-formylphenoxyacetyl) 4,6-thenylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin.

PARTIE BIOLOGIQUE
Les produits de la présente invention sont testés dans le modèle de la leucémie P 388 in vivo chez la souris. Ce test est couramment utilisé dans le domaine de la recherche de substances anticancéreuses (Protocols for screening chemical agents and natural products against animal tumors and other Biological Systems, R.. Geran,
N.H. Greenberg, M.M. MacDonald, A.M. Schumacher and B.J. Abbott, Catacer
Chemotherapy reports, 1972, 3, N 2).BIOLOGICAL PART
The products of the present invention are tested in the P388 leukemia model in vivo in mice. This test is commonly used in the field of research of anticancer substances (Protocols for screening chemical agents and natural products against animal tumors and other Biological Systems, R. Geran,
NH Greenberg, Messrs. MacDonald, AM Schumacher and BJ Abbott, Catacer
Chemotherapy reports, 1972, 3, N 2).

Cependant, ce modèle expérimental est extrêmement chimio-sensible, et de très nombreux composés manifestent une bonne activité ce qui rend le test peu discriminant
Nous avons donc modifié le protocole du test pour le rendre plus sélectif.However, this experimental model is extremely chemo-sensitive, and very many compounds show a good activity which makes the test less discriminating
So we modified the test protocol to make it more selective.

L'administration des cellules tumorales se fait par voie intraveineuse et non par voie intrapéritonéale. Les cellules tumorales alors se disséminent dans l'organisme très rapidement. L'administration du composé à tester est faite ensuite par voie intrapéritonéale. Deux paramètres sont ainsi définis pour mettre en évidence l'activité des composés : - détermination de la dose efficace 50, qui représente la dose minimum du composé
à administrer pour obtenir une survie significative des animaux par rapport aux animaux témoins; - détermination du temps de survie maximum des animaux quelque soit la dose
administrée.Le fait de pouvoir administrer des doses importantes du composé, et
d'observer une survie importante, permet d'obtenir une mesure de l'efficacité
thérapeutique maximale du produit que l'on peut atteindre.Administration of the tumor cells is intravenous and not intraperitoneally. The tumor cells then spread in the body very quickly. The test compound is then administered intraperitoneally. Two parameters are thus defined to highlight the activity of the compounds: determination of the effective dose 50, which represents the minimum dose of the compound
to be administered to achieve significant survival of the animals as compared to control animals; - determination of the maximum survival time of the animals, whatever the dose
administered.The ability to administer large doses of the compound, and
observe a significant survival, provides a measure of the effectiveness
maximum therapeutic potential of the product that can be achieved.

Il a été trouvé de façon inattendue que les composés de la présente invention provoquent une survie exceptionnellement élevée par rapport aux autres inhibiteurs de topoisomérase II couramment utilisés. Ces résultats se sont avérés suffisamment surprenants pour justifier l'étude comparative avec de nombreux composés de référence quelque soit leur structure chimique comme l'étoposide, l'étopofos, le téniposide, l'amonafide, I'amsacrine, l'intoplicinc, le bisantrène, la daunorubicine, et la doxorubicine. It has been unexpectedly found that the compounds of the present invention cause exceptionally high survival compared to other commonly used topoisomerase II inhibitors. These results proved to be sufficiently surprising to justify the comparative study with numerous reference compounds regardless of their chemical structure such as etoposide, etopofos, teniposide, amonafide, amacafide, intoplicinc, bisantrene , daunorubicin, and doxorubicin.

Origine de la fluneur:
La leucémie P 388 a été chimiquement induite en 1955 par le 3méthylcholanthrène sur une souris DBA/2 (Am. J. Pathol. 33: 603, 1957).Origin of the fluner:
P388 leukemia was chemically induced in 1955 by 3-methylcholanthrene in a DBA / 2 mouse (Am J. Pathol 33: 603, 1957).

Procéd ure pharmxologique:
Les tumeurs sont maintenues par passages hebdomadaires sous forme d'ascite dans le péritoine de souris DBA/2 (lignée d'origine) et les expérimentations sont effectuées sur des souris femelles hybrides CDF1 (Balb/c femelles x DBA/2 mâles) de 20 t 2g (Cancer Chemother. Rep. 3: 9, 1972). Pharmacological procedure:
The tumors are maintained by weekly passages as ascites in the peritoneum of DBA / 2 mice (original line) and the experiments are performed on CDF1 hybrid female mice (Balb / c females x DBA / 2 males) of 20 t 2g (Cancer Chemother Rep. 3: 9, 1972).

Les cellules tumorales sont implantées par voie intraveineuse (106 cellules/souris) au jour 0. Les animaux sont randomisés et répartis par groupe de deux pour chaque série. The tumor cells are implanted intravenously (106 cells / mouse) at day 0. The animals are randomized and divided into groups of two for each series.

Les substances anti-tumorales sont administrées par voie intrapéritonéale (ip) un jour après l'inoculation des cellules leucémiques (traitement aigu). Les solutions sont injectées à raison de 10 ml/kg de souris. Anti-tumor substances are administered intraperitoneally (ip) one day after inoculation of leukemic cells (acute treatment). The solutions are injected at the rate of 10 ml / kg of mouse.

Le critère d'évaluation de l'activité anti-tumorale est la prolongation de survie des animaux traités. 86% des souris témoins meurent le 7ème jour après la greffe tumorale. Une substance sera considérée active si elle induit une survie supérieure à huit jours. The criterion for evaluating the antitumor activity is the prolongation of survival of the treated animals. 86% of the control mice died on the 7th day after tumor transplantation. A substance will be considered active if it induces a survival greater than eight days.

Les résultats biologiques sont résumés dans le tableau suivant:

The biological results are summarized in the following table:

<tb> <SEP> P <SEP> 388 <SEP> Survie
<tb> <SEP> DE50 <SEP> mg/kg <SEP> Maximum <SEP> T/C* <SEP>
<tb> <SEP> (J) <SEP> %
<tb> Animaux <SEP> contrôles
<tb> avec <SEP> administration <SEP> (6-8)
<tb> iv <SEP> des <SEP> cellules <SEP> Médiane <SEP> 7
<tb> tumorales
<tb> Etoposide <SEP> 10 <SEP> 19 <SEP> 271 <SEP>
<tb> Etopofos <SEP> 28 <SEP> 17 <SEP> 242 <SEP>
<tb> Téniposide <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 214 <SEP>
<tb> Intoplicine <SEP> 28 <SEP> 10 <SEP> 142
<tb> Amonafide <SEP> inactif <SEP> (10-160)
<tb> Amsacrine <SEP> inactif <SEP> (10 <SEP> 160) <SEP>
<tb> Bisantrène <SEP> inactif <SEP> (1 <SEP> 160) <SEP> toxique <SEP> à <SEP> 640
<tb> Daunorubicine <SEP> inactif <SEP> (2,5-10) <SEP> toxique <SEP> à <SEP> 40
<tb> Doxofubicine <SEP> 7 <SEP> 13 <SEP> 185
<tb> Composé <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 2 <SEP> 20 <SEP> 48 <SEP> 685
<tb>
*La valeur T/C représente le rapport entre la moyenne du groupe d'animaux traités et la survie moyenne du groupe d'animaux contrôlés.<tb><SEP> P <SEP> 388 <SEP> Survival
<tb><SEP> DE50 <SEP> mg / kg <SEP> Maximum <SEP> T / C * <SEP>
<tb><SEP> (J) <SEP>%
<tb> Animals <SEP> controls
<tb> with <SEP> administration <SEP> (6-8)
<tb> iv <SEP> of <SEP> cells <SEP> Median <SEP> 7
<tb> tumors
<tb> Etoposide <SEP> 10 <SEP> 19 <SEP> 271 <SEP>
<tb> Etopofos <SEP> 28 <SEP> 17 <SEP> 242 <SEP>
<tb> Teniposide <SEP> 20 <SEP> 15 <SEP> 214 <SEP>
<tb> Intoplicin <SEP> 28 <SEP> 10 <SEP> 142
<tb> Amonafide <SEP> inactive <SEP> (10-160)
<tb> Amsacrine <SEP> inactive <SEP> (10 <SEP> 160) <SEP>
<tb> Bisantrene <SEP> Inactive <SEP> (1 <SEP> 160) <SEP> Toxic <SEP> to <SEP> 640
<tb> Daunorubicin <SEP> Inactive <SEP> (2.5-10) <SEP> Toxic <SEP> to <SEP> 40
<tb> Doxofubicin <SEP> 7 <SEP> 13 <SEP> 185
<tb> Compound <SEP> of <SEP> Example <SEP> 2 <SEP> 20 <SEP> 48 <SEP> 685
<Tb>
* The T / C value represents the ratio between the average of the group of animals treated and the average survival of the group of animals controlled.

I1 est ainsi mis en évidence que, d'une part, parmi les produits de référence agissant sur la topoisomérase Il, le composé provoquant la meilleure survie est l'étoposide, et d'autre part, le composé de l'exemple 2 selon l'invention provoque une survie maximale 2,5 fois supérieure à l'étoposide. It is thus demonstrated that, on the one hand, among the reference products acting on topoisomerase II, the compound causing the best survival is etoposide, and on the other hand, the compound of Example 2 according to US Pat. The invention causes a maximal survival 2.5 times greater than etoposide.

Ces résultats montrent donc l'intérêt des produits de l'invention et leur utilité comme agents thérapeutiques anticancéreux provoquant une survie très importante, sur une très large gamme de dose. These results therefore show the interest of the products of the invention and their usefulness as anticancer therapeutic agents causing a very important survival over a very wide dose range.

I1 peut être apprécié au vu de ces résultats l'utilité de ces composés à titre de médicament pour traiter les différentes formes de cancer dans lesquels les inhibiteurs de topoisomérase Il sont utilisés, comme en particulier le cancer du poumon à petites cellules, le cancer des testicules, les tumeurs embryonnaires, les neuroblastomes, le cancer du rein, les lymphômes hodgkiniens et non hodgkiniens, les leucémies aigues et en rechute, les choriocarcinomes placentaires, les adénocarcinomes mammaires, ainsi que pour augmenter l'efficacité thérapeutique des composés inhibiteurs de topoisoméreses pour le traitement des tumeurs réfractaires aux thérapeutiques usuelles: les cancers colorectaux et les mélanomes. It can be appreciated from these results the utility of these compounds as a drug to treat the various forms of cancer in which topoisomerase II inhibitors are used, such as in particular small cell lung cancer, cancer testes, embryonic tumors, neuroblastomas, kidney cancer, Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas, acute and relapsed leukemias, placental choriocarcinomas, mammary adenocarcinomas, as well as to increase the therapeutic efficacy of topoisomeresis-inhibiting compounds for the treatment of tumors refractory to the usual therapeutics: colorectal cancers and melanomas.

La présente invention concerne donc également les dérivés de formule générale I définie auparavant pour leur utilisation à titre de médicament et leur utilisation pour la préparation d'un médicament destiné au traitement anticancéreux, en particulier des différentes formes de cancer dans lesquels les inhibiteurs de la topoisomérase II sont utilisés. The present invention therefore also relates to the derivatives of general formula I defined previously for their use as a medicament and their use for the preparation of a medicament for anticancer treatment, in particular the various forms of cancer in which the topoisomerase inhibitors II are used.

La présente invention concerne enfin les compositions pharmaceutiques comprenant au moins un composé de formule générale I selon l'invention, et un excipient approprié. The present invention finally relates to pharmaceutical compositions comprising at least one compound of general formula I according to the invention, and a suitable excipient.

Les compositions pharmaceutiques peuvent être adaptée pour l'administration par voie injectable ou par voie orale sous forme de capsule, de gélules, de comprimés, à la posologie de 2 à 200 mg/m2 par 24h par voie injectable et de 5 à 400 mg/m2 par 24 h pour la voie orale. The pharmaceutical compositions can be adapted for administration by injection or orally in the form of capsules, capsules, and tablets at a dosage of 2 to 200 mg / m 2 per 24 hours by injection and from 5 to 400 mg / ml. m2 per 24 h for the oral route.

Claims

1. Compounds of formula I

wherein R 'is methyl or 2-thienyl, R is an acyl group of the formula RIOCH2CO, wherein R1 is a phenyl ring substituted by one or more substituents X, ortho, meta or para, X being a formyl group acetyl, cyano or trifluoroacetyl, and their pharmaceutically acceptable salts.

2. Compound of formula I according to claim 1 characterized in that R 'represents a methyl group.

3. Compound of formula I according to claims 1 and 2, characterized in that R1 represents a group chosen from 2-formyl phenyl, 4-formylphenyl, 3formylphenyl, 4acetylphenyl, 4cyanophenyl, 4-trifluoroacetylphenyl and 2,4 diformyl phenyl.

4. Compound of formula I according to one of claims 1 to 3 characterized in that it is chosen from: 4'-Demethyl4 '- (2-formylphenoxyacetyl) 440- (2,3-bis- (2- formyl phenoxy acetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4 '- (4-formylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis- (4-formyl) phenoxy acetyl) -4,6-ethylidene-β-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4 '- (4formylphenoxyacetyl) 440- (2,3-bis (4-formyl phenoxyacetyl) 4,6-thenylidene-s-D -glucosyl) epipodophyllotoxin.

4'-Demethyl4 '- (3-Formylphenoxyacetyl) 440- (2,3-bis (3-formylphenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4 4- (4-acetylphenoxyacetyl) -4-O- (2,3-bis (4-acetylphenoxyacetyl) -4,6-ethylideneglucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4 '- (4-cyanophenoxyacetyl) -4-0- (2,3-bis- (4-cyano phenoxy acetyl) 4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4 '- (4-trifluoroacetylphenoxyacetyl) -4 O- (2,3-bis (4-trifluoro-phenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4 '- (2,4-diformylphenoxyacetyl) -4- O- (2,3-bis (2,4-diformylphenoxyacetyl) -4,6-ethylidene-ss-D-glucosyl) epipodophyllotoxin.

5. Process for the preparation of a compound according to one of Claims 1 to 4, characterized in that a compound of general formula I is reacted.

R 1 OCH 2 CO 2 H wherein R 1 has the characteristics defined in claims 1 or 3 prepared by the action of oxalyl chloride in the presence of DMF.

for which R = H and R 'is defined in claims 1 or 2, in the presence of pyridine with an acid chloride, derived from the acid of formula

6. As a medicament, the compounds of formula I according to one of claims 1 to 4.

7. Pharmaceutical composition characterized in that it comprises at least one compound of formula I according to one of claims 1 to 4, and a suitable excipient.

8. Use of a compound of formula I, according to one of claims 1 to 4, for the preparation of a medicament for anticancer treatment and in particular for treating forms of cancer where topoisomerase II inhibitors are used, for example, small cell lung cancer, testicular cancer, embryonic tumors, neuroblastomas, kidney cancer, placental choriocarcinomas, mammary adenocarcinomas, as well as to increase the therapeutic efficacy of topoisomerase inhibiting compounds for the treatment of tumors refractory to the usual therapeutics: colorectal cancers and melanomas.