CA2212956A1

CA2212956A1 - Epipodophyllotoxin triaryloxyacetyl derivatives, method for preparing same, and use of said derivatives as cancer drugs

Info

Publication number: CA2212956A1
Application number: CA002212956A
Authority: CA
Inventors: Thierry Imbert; Yves Guminski; Francis Colpaert; Jean-Pierre Tarayre; Bridget Hill
Original assignee: Individual
Current assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Priority date: 1995-02-08
Filing date: 1996-02-07
Publication date: 1996-08-15
Also published as: AU4722996A; FR2730233B1; JPH10513469A; WO1996024602A1; EP0808319A1; FR2730233A1

Abstract

Derivatives of general formula (I), wherein R' is methyl or 2-thienyl, R is an acyl group of formula R1OCH2CO, wherein R1 is a phenyl ring ortho-, meta- or para-substituted by one or more substituents X, where X is a formyl, acetyl, cyano or trifluoroacetyl group, and pharmaceutically acceptable salts thereof, are disclosed. A method for preparing said derivatives, their use as a drug, and pharmaceutical compositions containing them, are also disclosed.

Description

WO 96/2460 WO 96/2460

2 PCTIFR96/00201 DERIVES TRIARYLOXYACETYL D'EPIPODOPIIYLLOTOXINES, LEUR PROCEDE DE PREPARATION E=I' LEUR UTILISATION
COMME MEDICAMENTS ANTICANCEREUX

La présente invention concerne de nouveaux dérivés acylés de = l'étoposide, leur procédé de préparation et leur utilisation à titre de médicament.
Dans le domaine des composés chimiques avant pour origine les lignanes naturels, il existe des dérivés hémisynthétiques constituant la classe des épipodophylloïdes, dont font partie l'éthylidène glucoside de déméthyl-épipodophvllotoxine (étoposide, R = H, R' = CH3) et le thénylidène glucoside de déméthyl-épipodophyllotoxine (téniposide R = H, R' = 2-thiényl).
Ces deux composés sont couramment utilisés en clinique comme agents anticancéreux.
L'étoposide possède des propriétés antitumorales pour traiter différentes formes de cancer, et en particulier le cancer du poumon à petites cellules et le cancer des testicules. L'étoposide comme le téniposide sont considérés comme des inhibiteurs de l'enzyme topoisomérase Il liée à 1'ADN.
La topoisomérase II est une enzyme nucléaire qui a la propriété de couper les deux brins de l'ADN et de les ressouder. Son inhibition par l'étoposide passe par la formation et la stabilisation d'un complexe appelé
complexe clivable où l'ADN et l'enzyme sont liés par liaison covalente. Ce complexe (ADN-enzyme-drogue) stabilisé empéche ainsi l'ADN de se relier et conduit par la suite à la mort cellulaire (DNA topoisomérase in cancer, NIilan POTMFSIL, Kurt M. KOHN, O.xford University Press 1991, p. 230).
Il apparaît, durant le traitement des patients par l'étoposide, un certain nombre d'inconvénients comme avec la plupart des anticancéreux en termes d'effets secondaires indésirables, de mauvaise tolérance, ou même de toxicité, reliés à la dose utilisée, comme par exemple, des désordres hématologiques (neutropénie, thrombocytopénie), cardiovasculaires comme l'hypotension, ou également des nausées, vomissements ou encore alopécie, et muscites à fortes doses. L'efficacité anticancéreuse de l'étoposide est donc limitée par ces effets secondaires.
= Par ailleurs, il est montré que l'efficacité thérapeutique de l'étoposide est également limitée en termes de survie par augmentation des doses administrées chez la souris dans le modèle de la leucémie P 388 (voir tableau).

~
Il est par conséquent nécessaire de rechercher de nouveaux produits provoquant une meilleure survie, quelle que soit la dose utilisée, par rapport à l'étoposide. De façon particulièrement inattendue, cette meilleure survie est observée avec les composés de la présente invention dans le test in vivo dans le modèle de la leucémie P 388, et montre ainsi leur meilleure efficacité thérapeutique anticancéreuse.
La présente invention concerne donc les dérivés triacylés d'éthylidène ou de thénylidène glucoside de déméthyl-épipodophyllotoxine de formule I

Rô O

R O

O
O ~ _ ~,~\\
= O

OR

dans laquelle R représente un groupement acyle de type phénoxy acétyle de formule R1OCH?CO, dans laquelle R1 est un noyau phényle substitué par un ou plusieurs substituants X, X représentant un groupe formyle, acétyle, cyano ou trifluoroacétyle, en position ortho, méta ou para, et R' représente un groupe méthyle ou 2-thiényl, et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
D'une manière préférentielle, R' représente un groupe méthyle.
Avantageusement, R1 représente un groupe choisi parmi les 2-formyl phényle, 4-formyl phényle, 3-formyl phényle, -I-acétyl phényle, 4-cyano phényle, 4-trifluoro acétyl phényle et 2,4-diformyl phényle.
Des dérivés trisubstitués de formule I où R' = CH3 et R
aryloxyacétyl, sont décrits dans la demande de brevet FR-A-2 699 535. Ces composés, qui ont montré une activité anticancéreuse améliorée par rapport à l'étoposide, ne manifestent pas une survie aussi importante que les nouveaux dérivés selon la présente invention. 2 PCTIFR96 / 00201 TRIARYLOXYACETYL DERIVATIVES OF EPIPODOPIIYLLOTOXINS, THEIR PREPARATION PROCESS E = THEIR USE
AS ANTI-CANCER DRUGS

The present invention relates to new acylated derivatives of = etoposide, their preparation process and their use as drug.
In the field of chemical compounds before for origin the natural lignans, there are hemisynthetic derivatives constituting the class epipodophylloids, of which ethylidene glucoside demethyl-epipodophvllotoxin (etoposide, R = H, R '= CH3) and thenylidene glucoside of demethyl-epipodophyllotoxin (teniposide R = H, R '= 2-thienyl).
These two compounds are commonly used clinically as anticancer agents.
Etoposide has anti-tumor properties to treat different forms of cancer, and in particular small lung cancer cells and testicular cancer. Both etoposide and teniposide are considered inhibitors of DNA-linked topoisomerase II enzyme.
Topoisomerase II is a nuclear enzyme which has the property of cut the two strands of DNA and reweld them. Its inhibition by etoposide goes through the formation and stabilization of a complex called cleavable complex where DNA and enzyme are linked by covalent bond. This stabilized complex (DNA-enzyme-drug) thus prevents DNA from connecting and subsequently leads to cell death (DNA topoisomerase in cancer, NIilan POTMFSIL, Kurt M. KOHN, O. Oxford University Press 1991, p. 230).
It appears, during the treatment of patients with etoposide, a a number of disadvantages as with most anticancer drugs terms of unwanted side effects, poor tolerance, or even toxicity, related to the dose used, such as disorders hematological (neutropenia, thrombocytopenia), cardiovascular like hypotension, or also nausea, vomiting or alopecia, and muscites in high doses. The anti-cancer efficacy of etoposide is therefore limited by these side effects.
= Furthermore, it is shown that the therapeutic efficacy of etoposide is also limited in terms of survival by increasing doses administered to mice in the P 388 leukemia model (see board).

~
It is therefore necessary to seek new products causing better survival, whatever the dose used, through compared to etoposide. Particularly unexpectedly, this better survival is observed with the compounds of the present invention in the test in vivo in the P 388 leukemia model, and thus shows their best anticancer therapeutic efficacy.
The present invention therefore relates to triacylated derivatives ethylidene or thenylidene glucoside demethyl-epipodophyllotoxin of formula I

Rô o RO

O
O ~ _ ~, ~ \\
= O

GOLD

in which R represents an acyl group of phenoxy acetyl type of formula R1OCH? CO, in which R1 is a phenyl ring substituted by one or several substituents X, X representing a formyl, acetyl, cyano or trifluoroacetyl, in ortho, meta or para position, and R 'represents a group methyl or 2-thienyl, and their pharmaceutically acceptable salts.
Preferably, R 'represents a methyl group.
Advantageously, R1 represents a group chosen from the 2-formyl phenyl, 4-formyl phenyl, 3-formyl phenyl, -I-acetyl phenyl, 4-cyano phenyl, 4-trifluoro acetyl phenyl and 2,4-diformyl phenyl.
Trisubstituted derivatives of formula I where R '= CH3 and R
aryloxyacetyl, are described in patent application FR-A-2 699 535. These compounds, which have shown improved anticancer activity compared with etoposide, do not show as much survival as new derivatives according to the present invention.

3 L'activité particulièrement intéressante observée pour les dérivés selon l'invention apparaît provenir de la substitution du noyau aromatique du groupement R phénoxyacétyle telle qu'elle est définie ci-dessus.
La présente invention concerne également les procédés de préparation d'un composé de formule I, pour lequel on fait réagir le dérivé de formule I ci-dessus pour lequel R représente un atome d'hydrogène et R' est défini ci-dessus, avec un précurseur de l'acyle R défini auparavant, tel que par exemple l'acide R1OCH,COOH activé, en particulier un halogénure d'acide RIOCHZCOX, dans lequel X représente un halogène tel que le chlore ou le brome, de préférence le chlore.
Il s'agit d'une manière préférentielle des chlorures des acyles dont les groupes R1 sont définis ci-dessus.
Les chlorures d'acide utilisés sont préparés par action du chlorure d'oxalyle dans le CH2C12 à O C en présence de traces de DMF. Le couplage avec les dérivés de formule I pour lesquels R = H se fait directement dans le même solvant avec un rapport molaire (chlorure d'acide/dérivé) de 5 à 8, en présence de pyridine.
On obtient ainsi les dérivés de formule générale I.
Les exemples ci-dessous décrivent la préparation de différeiits composés de formule générale I selon l'invention.

EXEMPLE 1 : 3 The particularly interesting activity observed for derivatives according to the invention appears to come from the substitution of the aromatic nucleus of the phenoxyacetyl group R as defined above.
The present invention also relates to the methods of preparation of a compound of formula I, for which the derivative of formula I above for which R represents a hydrogen atom and R 'is defined above, with a precursor of the acyl R defined previously, such as for example acid R1OCH, activated COOH, in particular an acid halide RIOCHZCOX, in which X represents a halogen such as chlorine or bromine, preferably chlorine.
It is preferably a chlorides of acyls which the R1 groups are defined above.
The acid chlorides used are prepared by the action of the chloride of oxalyl in CH2C12 to OC in the presence of traces of DMF. Coupling with derivatives of formula I for which R = H is made directly in the same solvent with a molar ratio (acid chloride / derivative) of 5 to 8, in presence of pyridine.
The derivatives of general formula I are thus obtained.
The examples below describe the preparation of different compounds of general formula I according to the invention.

EXAMPLE 1:

4'-Déméthyl 4-(2-formyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(2-formyl phéno\y acétyl)-4,6-éthylidène-(3-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.
Dans un ballon tricol de 100 ml, 2,3 g d'acide 2-formyl phénoNy acétique (12,7 mmoles) sont placés en solution dans 50 ml de CH ?Cl 7 sous argon à l'abri de l'humidité. Un bain de glace maintient la température du milieu réactionnel à 0 C, puis sont introduits 1 ml de DMF et 1,78 g de chlorure d'oxalyle (14 mmoles) dans 5 ml de CH 7C 1 Z goutte à goutte. Le milieu est agité

2 h à cette température. Cette solution est alors introduite goutte à goutte dans le milieu réactionnel d'un second tricol de 250 ml dans lequel sont placés 1,5 g d'étoposide (2,55 mmoles), 2,1 ml de pyridine dans 50 ml de CH?C17 sous agitation à 0 C. Le milieu réactionnel est laissé sous agitation 24 h avec retour à température ambiante. Le milieu réactionnel est versé sur une solution d'HCl N (100 ml) puis la phase organique est décantée, lavée par une solution saturée de NaCI, puis séchée sur Na7SO4 et évaporée. Le résidu est chromatographié sur SiO2 et élué par un mélange éther de pétrole / AcOEt 60/40 puis 50/50 pour obtenir 710 mg (Rd 25 %) de dérivé triacylé qui est cristallisé dans l'éther isopropylique.
Anal. : C56 H20 022 PM = 1074,994 C H
Calc. 62,57 4,69 Tr. 62,32 4,82 IR V(KBr) cm-1 = 1774, 1687, 1601, 1485, 1460.
Spectre de Masse (DCI/NH3) m/e = 1092 (M + NH3) 1H RMN 200 MHz CDC13 b: 1,32 (3H, d, J= 4,9 Hz, H8") ; 2,8 (1H, m, H3) ; 3,15 (1H, dd, J= 14,1 Hz et 5,1 Hz, H2) ; 3,64 (6H, s, OCH3 x 2) ; 5,33 (1H, t, J= 8,6 Hz, H3") ; 4'-Demethyl 4- (2-formyl phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (2-formyl pheno \ y acetyl) -4,6-ethylidene- (3-D-glucosyl) epipodophyllotoxin.
2.3 g of 2-formylphenoNy acid in a 100 ml three-necked flask acetic acid (12.7 mmol) are placed in solution in 50 ml of CH? Cl 7 under argon away from moisture. An ice bath maintains the temperature of the reaction medium at 0 ° C., then 1 ml of DMF and 1.78 g of chloride of oxalyl (14 mmol) in 5 ml of CH 7C 1 Z drop by drop. The middle is restless 2 h at this temperature. This solution is then introduced dropwise in the reaction medium of a second 250 ml three-necked flask in which are placed 1.5 g of etoposide (2.55 mmol), 2.1 ml of pyridine in 50 ml of CH 2 C 17 under stirring at 0 C. The reaction medium is left stirring for 24 h with return at room temperature. The reaction medium is poured onto a solution of HCl N (100 ml) then the organic phase is decanted, washed with a solution saturated with NaCl, then dried over Na7SO4 and evaporated. The residue is chromatographed on SiO2 and eluted with a petroleum ether / AcOEt mixture 60/40 then 50/50 to obtain 710 mg (Rd 25%) of triacylated derivative which is crystallized from isopropyl ether.
Anal. : C56 H20 022 PM = 1074.994 CH
Calc. 62.57 4.69 Tr. 62.32 4.82 IR V (KBr) cm-1 = 1774, 1687, 1601, 1485, 1460.
Mass spectrum (DCI / NH3) m / e = 1092 (M + NH3) 1H NMR 200 MHz CDC13 b: 1.32 (3H, d, J = 4.9 Hz, H8 "); 2.8 (1H, m, H3); 3.15 (1H, dd, J = 14.1 Hz and 5.1 Hz, H2); 3.64 (6H, s, OCH3 x 2); 5.33 (1H, t, J = 8.6 Hz, H3 ");

5,65 (1H, s, OCHAO) ; 5,86 (1H, s, OCHBO) ; 6,2-1 (2H, s, H?' H6') ; 6,49 (1H, s,H8') ; 5.65 (1H, s, OCHAO); 5.86 (1H, s, OCHBO); 6.2-1 (2H, s, H? 'H6'); 6.49 (1H, s, H8 ');

6,46 (1 H, d, J= 8,2 Hz, OAr : H ortho) ; 6,76 (1 H, s, H;') ; 6,75 (1 H, d, J= 8,2 Hz, OAr : H ortho) ; 6,96-7,01 (4H, m, OAr : H ortho, 3H para) ; 7,33-7,55 (3H, m, OAr :
3H meta) ; 7,79-7,86 (3H, m, OAr : 3H meta) ; 10,42 (1H, s, CHO) ; 10,49 (1H, s, CHO) ; 10,54 (1H, s, CHO).

EXEMPLE 2 :
4'-Déméthyl 4'-(4-formyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-formvl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-(3-D-glucosvl) épipodophvllotoxine.
Par la même méthode que pour l'exemple 1, mais ei1 utilisant l'acide 4-formvl phenoxy acétique en lieu et place de l'acide 2-formvl phenoxy acétique, on obtient le composé triacylé recherché par chromatographie avec élution dans un mélange éther de pétrole / AcOEt 50/50 puis 40/60 et cristallisation dans l'éther éthylique avec un rendement de60%.
Anal. : C56 H50 022 0,55 H20 PI`1= 108-4,88-1 C H H, 0 Calc. 62,57 4,69 Tr. 61,54 4,69 0,92 %
corrigé 62,00 4,75 0,92 %

IR v(KBr) cm-1 = 177-4, 1691, 1508 Spectre de masse (DCI/NH3) m/e = 1092 (NI + NH3) IH RMN 200 MHz CDC13 6: 1,31(3H, d, J= 4,8 Hz, Hs") ; 2,8 (1H, m, H3) ; 3,12 (1H, dd, J= 14,1 Hz et 5,08 Hz, H2) ; 3,62 (6H, s, 2 x OCH3) ; 5,30 (1H, t, J= 8,9 Hz, H3') 5,68 (1H, s, OCHAO) ; 5,87 (1H, s, OCHBO) ; 6,22 (2H, s, H2' He') ; 6,49 (IFI, s, H8') 6,75 (1H, s, H5') ; 6,77 (2H, d, J= 7,49 Hz, OAr : H ortho) ; 6,91 (2H, d, J=
8,6 Hz, 5 OAr : H ortho) ; 7.04 (2H, d, J= 8,6 Hz, OAr : H ortho) ; 7,7-7,8 (6H, m, OAr : H
méta) ; 9,77 (1H, s, CHO) ; 9,80 (1 H, s, CHO) ; 9,85 (1 H, s, CHO).

EXEMPLE 3 :
4'-Déméthyl 4'-(3-formyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(3-formyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-p-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.
Par la même méthode que pour l'exemple 1, mais en utilisant l'acide 3-formyl phénoxy acétique à la place du 2-formyl phénoxv acétique on obtient le dérivé triacylé avec un rendement de 33 % par chromatographie sur SiO? et élution par un mélange de CH,C1? / Acétone 99/1 puis 95/5 et cristallisation dans l'acétate d'éthyle.
F - 125 C.
Anal. : C56 H50 022 PI`-i = 1074,994 C H
Calc. 62,57 4,69 Tr. 62,09 4,70 EXEMPLE 4 :
4'-Déméthyl 4'-(4-cyano phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-cyano phénox\-acétyl)-4,6-éthylidène-l3-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.
Par la même méthode que pour l'exemple 1, mais en utilisant l'acide 4-cyano phénoxy acétique au lieu de l'acide 2-formyl phénoxy acétique, on obtient après chromatographie sur SiO2 et élution par un mélange éther de pétrole / AcOEt 50/50 et cristallisation dans l'éther isopropylique le dérivé triacylé avec un rendement de 75 Anal. : C56 H47 N3 Oi,) PNI = 1066,01 C H N
Calc. 63,09 4,44 3,94 Tr. 62,77 4,63 3,82 IR v(Kl3r) cm-1 = 2226, 1774, 1606, 1506, 1485 Spectre de masse (FAB) m/e = 1088 (M + Na)+
1H200MHzRMNb:1,36(3H,d,J=4,9Hz,H8");2,88(1H,m,H3);3,15 (1H,dd,J
=5,1Hzet14Hz,HZ); 5,31 (1H,t,J=8,8Hz,H3");5,76(1H,s,OCHAO);5,94(1H,s, OCHBO) ; 6,27 (2H, s, H 2' H6') ; 6,55 (1H, s, H8') ; 6,79 (1H, s, HS') ; 6,75 (2H, d, J= 9 Hz, OAr : H ortho ); 6,90 (2H, d, J= 9 Hz, OAr : H ortho ); 7,04 (2H, d, J= 9 Hz, OAr :
H ortho) ; 7,5 1-7,62 (6H, m, OAr : H méta).

EXEMPLE 5 :
4'-Déméthyl 4'-(4-acétyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-acétyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-R-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.
Par la même méthode que pour l'exemple 1, mais en utilisant l'acide 4-acétyl phénoxy acétique au lieu de l'acide 2-formyl phénoxy acétique, on obtient avec un rendement de 77 % par chromatographie sur Si0? et élution par un mélange heptane / AcOEt 60/40 et cristallisation dans l'éthanol, le dérivé triacylé de l'étoposide.

Anal. : C59 H56 022 H20 PM = 1135,105 C H
Calc. 63,44 5,05 Tr. 62,43 5,15 IR v (KBr) cm-1= 3624, 2920, 1774, 1880, 1601 1HRMN200NIHzDNISO6:1,24(3H,d,J=4,8Hz,H8");2,47(3H,s,COCH3);2,51 (3H,,s, COCH 3) ; 2,53 (3H, s, COCH3) ; 2,9-3,1 (2H, m, H7 H3) ; 5,20 (2H, s, OCH2CO) ;
5,3-5,4 (2H, m, H2" H3") ; 5,79 (1 H, s, OCH AO) ; 5,98 (1 H, s, OCHBO) ; 6.29 (2H, s, H Z' H6');6,52(1H,s,H8');7,11 (1H,s,H5');7,81 (2H,d,J=8,7Hz,OAr:Hortho);
6,97 (2H, d, J= 8,7 Hz, OAr : H ortho) ; 7.06 (2H, d, J= 8,7 Hz, OAr : H
ortho) ; 7,83-6.46 (1H, d, J = 8.2Hz, OAr: H ortho); 6.76 (1H, s, H; '); 6.75 (1 H, d, J = 8.2 Hz, OAr: H ortho); 6.96-7.01 (4H, m, OAr: H ortho, 3H para); 7.33-7.55 (3H, m, OAr:
3H meta); 7.79-7.86 (3H, m, OAr: 3H meta); 10.42 (1H, s, CHO); 10.49 (1H, s, CHO); 10.54 (1H, s, CHO).

EXAMPLE 2:
4'-Demethyl 4 '- (4-formyl phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (4-formvl phenoxy acetyl) -4,6-ethylidene- (3-D-glucosvl) epipodophvllotoxin.
By the same method as for example 1, but ei1 using 4-formvl phenoxy acetic acid in place of 2-formvl acid phenoxy acetic, the triacylated compound sought after is obtained chromatography with elution in a petroleum ether / AcOEt mixture 50/50 then 40/60 and crystallization from ethyl ether with a yield by 60%.
Anal. : C56 H50 022 0.55 H20 PI`1 = 108-4.88-1 CHH, 0 Calc. 62.57 4.69 Tr. 61.54 4.69 0.92%
corrected 62.00 4.75 0.92%

IR v (KBr) cm-1 = 177-4, 1691, 1508 Mass spectrum (DCI / NH3) m / e = 1092 (NI + NH3) 1 H NMR 200 MHz CDC13 6: 1.31 (3H, d, J = 4.8 Hz, Hs "); 2.8 (1H, m, H3); 3.12 (1H, dd, J = 14.1 Hz and 5.08 Hz, H2); 3.62 (6H, s, 2 x OCH3); 5.30 (1H, t, J = 8.9 Hz, H3 ') 5.68 (1H, s, OCHAO); 5.87 (1H, s, OCHBO); 6.22 (2H, s, H2 'He'); 6.49 (IFI, s, H8 ') 6.75 (1H, s, H5 '); 6.77 (2H, d, J = 7.49 Hz, OAr: H ortho); 6.91 (2H, d, J =
8.6 Hz, 5 OAr: H ortho); 7.04 (2H, d, J = 8.6 Hz, OAr: H ortho); 7.7-7.8 (6H, m, OAr: H
meta); 9.77 (1H, s, CHO); 9.80 (1H, s, CHO); 9.85 (1H, s, CHO).

EXAMPLE 3:
4'-Demethyl 4 '- (3-formyl phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (3-formyl phenoxy acetyl) -4,6-ethylidene-pD-glucosyl) epipodophyllotoxin.
By the same method as for example 1, but using 3-formyl phenoxy acetic acid in place of 2-formyl phenoxv acetic the triacylated derivative is obtained with a yield of 33% by chromatography on SiO? and elution with a mixture of CH, C1? / Acetone 99/1 then 95/5 and crystallization from ethyl acetate.
F - 125 C.
Anal. : C56 H50 022 PI`-i = 1074.994 CH
Calc. 62.57 4.69 Tr. 62.09 4.70 EXAMPLE 4:
4'-Demethyl 4 '- (4-cyano phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (4-cyano phenox \ -acetyl) -4,6-ethylidene-13-D-glucosyl) epipodophyllotoxin.
By the same method as for example 1, but using 4-cyano phenoxy acetic acid instead of 2-formyl phenoxy acid acetic, obtained after chromatography on SiO2 and elution with a petroleum ether / AcOEt 50/50 mixture and crystallization from ether isopropyl the triacylated derivative with a yield of 75 Anal. : C56 H47 N3 Oi,) PNI = 1066.01 CHN
Calc. 63.09 4.44 3.94 Tr. 62.77 4.63 3.82 IR v (Kl3r) cm-1 = 2226, 1774, 1606, 1506, 1485 Mass spectrum (FAB) m / e = 1088 (M + Na) +
1H200MHzRMNb: 1.36 (3H, d, J = 4.9Hz, H8 "); 2.88 (1H, m, H3); 3.15 (1H, dd, J
= 5.1 Hz and 14 Hz, HZ); 5.31 (1H, t, J = 8.8Hz, H3 "); 5.76 (1H, s, OCHAO); 5.94 (1H, s, OCHBO); 6.27 (2H, s, H 2 'H6'); 6.55 (1H, s, H8 '); 6.79 (1H, s, HS '); 6.75 (2H, d, J = 9 Hz, OAr: H ortho); 6.90 (2H, d, J = 9 Hz, OAr: H ortho); 7.04 (2H, d, J = 9 Hz, OAr:
H ortho); 7.5 1-7.62 (6H, m, OAr: H meta).

EXAMPLE 5:
4'-Demethyl 4 '- (4-acetyl phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (4-acetyl phenoxy acetyl) -4,6-ethylidene-RD-glucosyl) epipodophyllotoxin.
By the same method as for example 1, but using 4-acetyl phenoxy acetic acid instead of 2-formyl phenoxy acid acetic, obtained with a yield of 77% by chromatography on Si0? and elution with a heptane / AcOEt 60/40 mixture and crystallization in ethanol, the triacylated derivative of etoposide.

Anal. : C59 H56 022 H20 PM = 1135.105 CH
Calc. 63.44 5.05 Tr. 62.43 5.15 IR v (KBr) cm-1 = 3624, 2920, 1774, 1880, 1601 1HRMN200NIHzDNISO6: 1.24 (3H, d, J = 4.8Hz, H8 "); 2.47 (3H, s, COCH3); 2.51 (3H ,, s, COCH 3); 2.53 (3H, s, COCH3); 2.9-3.1 (2H, m, H7 H3); 5.20 (2H, s, OCH2CO);
5.3-5.4 (2H, m, H2 "H3"); 5.79 (1H, s, OCH AO); 5.98 (1H, s, OCHBO); 6.29 (2H, s, H Z ' H6 '); 6.52 (1H, s, H8'); 7.11 (1H, s, H5 '); 7.81 (2H, d, J = 8.7Hz, OAr: Hortho);
6.97 (2H, d, J = 8.7 Hz, OAr: H ortho); 7.06 (2H, d, J = 8.7 Hz, OAr: H
ortho); 7.83-

7,97 (6H, d, J= 8,7 Hz, OAr : H méta).
Par la même méthode sont préparés les composés suivants = -4'-Déméthyl 4'-(4-trifluoro acétyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-tri-fluoro acétyl phénoxy acétvl)-4,6-éthylidène-r,-D-glucosyl) épipodophyllo-toxine = -1'-Déméthyl, 4'-(2,4-diform\,l phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(2,-1-diformyl phénoxy acétyl)-4,6-éthylidène-R-D-glucosyl) épipodophyllotoxine = 4'-Déméthyl-4'-(4-formyl phénoxy acétyl)-4-0-(2,3-bis-(4-formyl phénoxy acétyl)--4,6-thénylidène-p-D-glucosyl) épipodophyllotoxine.

PARTIE BIOLOGIQUE
Les produits de la présente invention sont testés dans le modèle de la leucémie P 388 in vivo chez la souris. Ce test est couramment utilisé dans le domaine de la recherche de substances anticancéreuses (Protocols for screening chemical agents and natural products against animal tumors and = other Biological Systems, R. Geran, N.H. Greenberg, M.M. MacDonald, A.M.
Schumacher and B.J. Abbott, Cancer Chemotherapy reports, 1972, 3, N 2).
Cependant, ce modèle expérimental est extrêmement chimio-sensible, et de très nombreux composés manifestent une bonne activité ce qui rend le test peu discriminant.
Nous avons donc modifié le protocole du test pour le rendre plus sélectif. L'administration des cellules tumorales se fait par voie intraveineuse et non par voie intrapéritonéale. Les cellules tumorales alors se disséminent dans l'organisme très rapidement. L'administration du composé à tester est faite ensuite par voie intrapéritonéale. Deux paramètres sont ainsi définis pour mettre en évidence l'activité des composés :
- détermination de la dose efficace 50, qui représente la dose minimum du composé à administrer pour obtenir une survie significative des animaux par rapport aux animaux témoins ;
- détermination du temps de survie maximum des animau.\, quelle que soit la dose administrée. Le fait de pouvoir administrer des doses importantes du composé, et d'observer une survie importante, permet d'obtenir une mesure de l'efficacité thérapeutique maximale du produit que l'on peut atteindre.
Il a été trouvé de façon inattendue que les composés de la présente invention provoquent une survie eaceptionnellement élevée par rapport aux autres inhibiteurs de topoisomérase II couramment utilisés. Ces résultats se sont avérés suffisamment surprenants pour justifier l'étude comparative avec de nombreux composés de référence, quelle que soit leur structure chimique comme l'étoposide, l'étopofos, le téniposide, l'amonafide, l'amsacrine, l'intoplicine, le bisantrène, la daunorubicine, et la doxorubicine.
Origine de la tumeur:
La leucémie P 388 a été chimiquement induite en 1955 par le 3-méthylcholanthrène sur une souris DBA/2 (Am. J. Pathol. 33 : 603, 1957). 7.97 (6H, d, J = 8.7 Hz, OAr: H meta).
By the same method are prepared the following compounds = -4'-Demethyl 4 '- (4-trifluoro acetyl phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (4-tri-fluoro acetyl phenoxy acetvl) -4,6-ethylidene-r, -D-glucosyl) epipodophyllo-toxin = -1'-Demethyl, 4 '- (2,4-diform \, l phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (2, -1-diformyl phenoxy acetyl) -4,6-ethylidene-RD-glucosyl) epipodophyllotoxin = 4'-Demethyl-4 '- (4-formyl phenoxy acetyl) -4-0- (2,3-bis- (4-formyl phenoxy acetyl) - 4,6-thenylidene-pD-glucosyl) epipodophyllotoxin.

ORGANIC PART
The products of the present invention are tested in the model of P 388 leukemia in vivo in mice. This test is commonly used in the area of research into anticancer substances (Protocols for screening chemical agents and natural products against animal tumors and = other Biological Systems, R. Geran, NH Greenberg, MM MacDonald, AM
Schumacher and BJ Abbott, Cancer Chemotherapy reports, 1972, 3, N 2).
However, this experimental model is extremely chemo-sensitive, and many compounds show good activity which makes the test not very discriminating.
So we changed the test protocol to make it more selective. The administration of tumor cells is done by intravenous and not intraperitoneally. The tumor cells then spread in the body very quickly. Administration of the test compound is then done intraperitoneally. Two parameters are thus defined to highlight the activity of the compounds:
- determination of the effective dose 50, which represents the minimum dose of compound to be administered to obtain significant survival of the animals compared to control animals;
- determination of the maximum survival time of animals. \, whatever the administered dose. Being able to administer large doses of compound, and to observe a significant survival, makes it possible to obtain a measure of the maximum therapeutic efficacy of the product that can be achieve.
It has been unexpectedly found that the compounds of this invention cause exceptionally high survival compared to other commonly used topoisomerase II inhibitors. These results are were surprising enough to warrant the comparative study with many reference compounds, whatever their structure chemical like etoposide, etopofos, teniposide, amonafide, amsacrine, intoplicin, bisantrene, daunorubicin, and doxorubicin.
Origin of the tumor:
P 388 leukemia was chemically induced in 1955 by 3-methylcholanthrene in a DBA / 2 mouse (Am. J. Pathol. 33: 603, 1957).

8 Procédure pharmacologique :
Les tumeurs sont maintenues par passages hebdomadaires sous forme d'ascite dans le péritoine de souris DBA/2 (lignée d'origine) et les expérimentations sont effectuées sur des souris femelles hybrides CDFl (Balb/c femelles x DBA/2 mâles) de 20 :t 2 g (Cancer Chemother. Rep. 3 : 9, 1972).
Les cellules tumorales sont implantées par voie intraveineuse (106 cellules/souris) au jour 0. Les animaux sont randomisés et répartis par groupe de deux pour chaque série.
Les substances antitumorales sont administrées par voie intrapéritonéale (ip) un jour après l'inoculation des cellules leucémiques (traitement aigu). Les solutions sont injectées à raison de 10 ml/kg de souris.
Le critère d'évaluation de l'activité antitumorale est la prolongation de survie des animaux traités. 86 % des souris témoins meurent le 7ème jour après la greffe tumorale. Une substance sera considérée active si elle induit une survie supérieure à huit jours. 8 Pharmacological procedure:
The tumors are maintained by weekly passages under form of ascites in the peritoneum of DBA / 2 mice (original line) and experiments are performed on CDFl hybrid female mice (Balb / c females x DBA / 2 males) of 20: t 2 g (Cancer Chemother. Rep. 3: 9, 1972).
Tumor cells are implanted intravenously (106 cells / mice) on day 0. The animals are randomized and distributed by group of two for each series.
Antitumor substances are administered by the intraperitoneal (ip) one day after inoculation of leukemia cells (acute treatment). The solutions are injected at the rate of 10 ml / kg of mouse.
The criterion for evaluating anti-tumor activity is the prolonged survival of treated animals. 86% of control mice die the 7th day after the tumor transplant. A substance will be considered active if it induces survival greater than eight days.

9 Les résultats biologiques sont résumés dans le tableau suivant Survie P 388 Maximum T/C*
DEso mg/kS (J) 46 Animaux contrôlés avec administration iv des (6-8) cellules tumorales Médiane 7 Etoposide 10 19 271 Etopofos 28 17 242 Téniposide 20 15 214 Intoplicine 28 10 142 Amonafide inactif (10-160) Amsacrine inactif (10-160) Bisantrène inactif (10-160) toxique à 640 Daunorubicine inactif (2,5-10) toxique à 40 Doxorubicine 7 13 185 Composé de l'exemple 18 - - 285 (FR-A-2 699 535) Composé de l'exemple 19 - - 164 (FR-A-2 699 535) Composé de l'exemple 1 - - 500 Composé de l'exemple 2 20 48 685 Composé de l'exeinple 5 - - 357 * La valeur T/C représente le rapport entre la moyenne du groupe d'animaux traités et la survie moyenne du groupe d'animaux contrôlés.
Il est ainsi mis en évidence que, d'une part, parmi les produits de référence agissant sur la topoisomérase 11, le composé provoquant la meilleure survie est l'étoposide, et d'autre part, le composé de l'exemple 2 selon l'invention provoque une survie maximale 2,5 fois supérieure à
l'étoposide. Les composés selon l'invention présentent également une survie mwdmale jusqu'à 4 fois supérieure à celle des composés décrits dans FR-A-2 699 535.
Ces résultats montrent donc l'intérêt des produits de l'invention et leur utilité comme agents thérapeutiques anticancéreux provoquant une survie très importante, sur une très large gamme de dose.

Il peut être apprécié au vu de ces résultats l'utilité de ces composés à titre de médicament pour traiter les différentes formes de cancer dans lesquels les inhibiteurs de topoisomérase Il sont utilisés, comme en particulier le cancer du poumon à petites cellules, le cancer des testicules, 5 les tumeurs embryonnaires, les neuroblastomes, le cancer du rein, les lymphômes hodgkiniens et non hodgkiniens, les leucémies aiguës et en rechute, les choriocarcinomes placentaires, les adénocarcinomes mammaires, ainsi que pour augmenter l'efficacité thérapeutique des composés inhibiteurs de topoisomérases pour le traitement des tumeurs 9 The biological results are summarized in the following table Survival P 388 Maximum T / C *
DEso mg / kS (J) 46 Animals checked with iv administration of (6-8) Median tumor cells 7 Etoposide 10 19 271 Etopofos 28 17 242 Teniposide 20 15 214 Intoplicin 28 10 142 Inactive amonafide (10-160) Inactive Amsacrine (10-160) Bisantrene inactive (10-160) toxic at 640 Daunorubicin inactive (2.5-10) toxic to 40 Doxorubicin 7 13 185 Compound of Example 18 - - 285 (FR-A-2 699 535) Compound of example 19 - - 164 (FR-A-2 699 535) Compound of example 1 - - 500 Compound of Example 2 20 48 685 Composed of exeinple 5 - - 357 * The T / C value represents the ratio between the group average of treated animals and the average survival of the group of animals controlled.
It is thus highlighted that, on the one hand, among the products of reference acting on topoisomerase 11, the compound causing better survival is etoposide, and on the other hand, the compound of Example 2 according to the invention causes a maximum survival 2.5 times greater than etoposide. The compounds according to the invention also have a mwdmale survival up to 4 times that of the compounds described in FR-A-2 699 535.
These results therefore show the advantage of the products of the invention and their usefulness as anti-cancer therapeutic agents causing very important survival, over a very wide dose range.

It can be appreciated in view of these results the usefulness of these compounds as a medicine to treat different forms of cancer in which topoisomerase II inhibitors are used, as in especially small cell lung cancer, testicular cancer, 5 embryonic tumors, neuroblastomas, kidney cancer, Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas, acute leukemias and in relapse, placental choriocarcinomas, adenocarcinomas as well as to increase the therapeutic efficacy of topoisomerase inhibitor compounds for the treatment of tumors

10 réfractaires aux thérapeutiques usuelles : les cancers colorectaux et les mélanomes.
La présente invention concerne donc également les dérivés de formule générale I définie auparavant pour leur utilisation à titre de médicament et leur utilisation pour la préparation d'un médicament destiné
au traitement anticancéreux, en particulier des différentes formes de cancer dans lesquels les inhibiteurs de la topoisomérase II sont utilisés.
La présente invention concerne enfin les compositions pharmaceutiques comprenant au moins un composé de formule générale I
selon l'invention, et un excipient approprié.
Les compositions pharmaceutiques peuvent être adaptées pour l'administration par voie injectable ou par voie orale sous forme de capsule, de gélules, de comprimés, à la posologie de 2 à 200 mg/m 2 par 24 h par voie injectable et de 5 à 400 mg/m2 par 24 h pour la voie orale. 10 refractory to usual therapies: colorectal cancers and melanomas.
The present invention therefore also relates to derivatives of general formula I defined previously for their use as medicament and their use for the preparation of a medicament intended anticancer treatment, in particular of the different forms of cancer in which topoisomerase II inhibitors are used.
The present invention finally relates to the compositions pharmaceuticals comprising at least one compound of general formula I
according to the invention, and a suitable excipient.
The pharmaceutical compositions can be adapted for administration by injectable or oral route in capsule form, capsules, tablets, at a dosage of 2 to 200 mg / m 2 per 24 h per channel injectable and 5 to 400 mg / m2 per 24 h for the oral route.

Claims

11

1. Compounds of formula I

in which R' represents a methyl or a 2-thienyl, R
represents an acyl group of formula R1OCH7CO, wherein R1 is a phenyl ring substituted by one or more substituents X, in position ortho, meta or para, X representing a formyl, acetyl, cyano or trifluoroacetyl, and their pharmaceutically acceptable salts.

2. Compound of formula I according to claim 1, characterized in that R' represents a methyl group.

3. Compound of formula I according to claims 1 and 2, characterized in that R1 represents a group chosen from 2-formyl phenyl, 4-formyl phenyl, 3-formyl phenyl, 4-acetyl phenyl, 4-cyano phenyl, 4-trifluoro acetyl phenyl and 2,4-diformyl phenyl.

4. Compound of formula I according to one of claims 1 to 3, characterized in that it is chosen from:
4'-Demethyl-4'-(2-formyl phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(2-formyl phenoxy acetyl)-4,6-ethylidene-.beta.-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4'-(4-formyl phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(4-formyl phenoxy acetyl)-4,6-ethylidene-.beta.-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4'-(4-formyl phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(4-formyl phenoxy acetyl)-4,6-thenylidene-.beta.-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4'-(3-formyl phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(3-formyl phenoxy acetyl)-4,6-ethylidene-.beta.-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4'-(4-acetyl phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(4-acetyl phenoxy acetyl)-4,6-ethylidene-.beta.-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4'-(4-cyano phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(4-cyano phenoxy acetyl)-4,6-ethylidene-.beta.-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4'-(4-trifluoro acetyl phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(4-trifluoro phenoxy acetyl)-4,6-ethylidene-.beta.-D-glucosyl) epipodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4'-(2,4-diformyl phenoxy acetyl)-4-0-(2,3-bis-(2,4-diformyl phenoxy acetyl)-4,6-ethylidene-.beta.-D-glucosyl)epipodophyllotoxin.

5. Process for the preparation of a compound according to one of claims 1 to 4, characterized in that a compound of general formula I

wherein R = H, and R' is defined in claims 1 or 2, in the presence of pyridine with an acid chloride, derived from the acid of formula R1OCH,CO2H, where R1 has the characteristics defined in the claims 1 or 3, prepared by the action of oxalyl chloride in the presence of DMF.

6. As a medicament, the compounds of formula 1 according to one of claims 1 to 4.

7. Pharmaceutical composition characterized in that it comprises at least one compound of formula I according to one of the claims 1 to 4, and a suitable excipient.

8. Use of a compound of formula I, according to one of claims 1 to 4, for the preparation of a medicament intended for cancer treatment, and in particular to treat the forms of cancer where topoisomerase II inhibitors are used, such as by example, small cell lung cancer, testicular cancer, embryonic tumors, neuroblastomas, kidney cancer, Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas, acute leukaemias, and in relapse, placental choriocarcinomas, adenocarcinomas breasts, as well as to increase the therapeutic efficacy of topoisomerase inhibitor compounds for the treatment of tumors refractory to the usual therapies: colorectal cancers and melanomas.