FR2723749A1 - Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine - Google Patents
Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine Download PDFInfo
- Publication number
- FR2723749A1 FR2723749A1 FR9410044A FR9410044A FR2723749A1 FR 2723749 A1 FR2723749 A1 FR 2723749A1 FR 9410044 A FR9410044 A FR 9410044A FR 9410044 A FR9410044 A FR 9410044A FR 2723749 A1 FR2723749 A1 FR 2723749A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- sequence
- coding
- vector
- ach
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 26
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 title claims abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000028973 vesicle-mediated transport Effects 0.000 claims abstract description 8
- 108010058699 Choline O-acetyltransferase Proteins 0.000 claims description 19
- 102100023460 Choline O-acetyltransferase Human genes 0.000 claims description 18
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 16
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 11
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 claims description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 9
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 9
- 101000670886 Rattus norvegicus Vesicular acetylcholine transporter Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims description 5
- 101150054987 ChAT gene Proteins 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims description 3
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 3
- 208000002267 Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis Diseases 0.000 claims description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 2
- 241000724252 Cucumber mosaic virus Species 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 16
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 11
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 9
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 5
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 108091007498 Transmembrane domain 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000002504 synaptic vesicle Anatomy 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 1
- 102100034330 Chromaffin granule amine transporter Human genes 0.000 description 1
- 241000272194 Ciconiiformes Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 101100532034 Drosophila melanogaster RTase gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710086015 RNA ligase Proteins 0.000 description 1
- 101100167372 Rattus norvegicus Chat gene Proteins 0.000 description 1
- 101000906664 Rattus norvegicus Choline O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108091006772 SLC18A1 Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000956 olfactory bulb Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 210000002186 septum of brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- FRGKKTITADJNOE-UHFFFAOYSA-N sulfanyloxyethane Chemical compound CCOS FRGKKTITADJNOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
La présente invention se rapporte à une séquence nucléique codant pour une protéine impliquée dans le transport vésiculaire de l'acétylcholine, à la protéine correspondante et aux séquences promotrices impliquées dans l'expression de ladite protéine. Elle vise également des vecteurs d'expression intégrant ladite séquence et l'utilisation de cette séquence ou desdits vecteurs à des fins thérapeutiques.
Description
La présente invention se rapporte à une séquence nucléique codant pour une
protéine impliquée dans le transport vésiculaire de l'acétylcholine et à la protéine correspondante. Elle vise également des vecteurs d'expression intégrant ladite séquence et l'utilisation de cette séquence ou desdits vecteurs à des fins thérapeutiques. L'acétylcholine, ACh, est un neurotransmetteur synthétisé par l'enzyme choline acétyltransférase, ChAT. Au niveau des extrémités des neurones cholinergiques, la majorité de l'ACh produite, est transportée du cytoplasme à l'intérieur des vésicules synaptiques. L'accumulation de l'ACh, au niveau de ces vésicules, passe par l'activité d'une ATPase qui pompe des ions H+ ce qui génère un gradient électrochimique (Anderson D. C.et al., (1982) Biochemistry 21, 3037-3043). Ce gradient est utilisé par un transporteur pour la capture de l'ACh via un échange de protons (Parsons S.M. et al., (1993), Int. Rev. neurobiol. 35, 279-390). Ce type de mécanisme est comparable à
celui impliqué dans le transport des amines biogènes au sein des vésicules synaptiques.
La compréhension des différents mécanismes de régulation, intervenant au niveau de l'expression de l'ACh, serait particulièrement précieuse sur un plan thérapeutique. Récemment, ont été clonés et séquences des ADNc codant pour des transporteurs vésiculaires de l'ACh chez Caenohabditis elegans et Torpedo (Alfonso
A et al., (1993) Science 261, 617-619; Varoqui H et al., FEBS Letters 342, 97-102).
L'étude des séquences des protéines correspondantes a révélé rexistence de similitudes structurales entre ces deux protéines de même que vis- à-vis de deux transporteurs vésiculaires d'amines biogènes de mammifères, les VMAT1 et VMAT2 (Liu et al., (1992) Cell 70, 539-551). Ces caractéristiques structurales communes sont notamment (i) 12 domaines transmembranaires (TM), (ii) la présence, dans ces domaines transmembranaires, de résidus d'acides aminés chargés qui interviennent vraisemblablement dans le transport de substrat, (iii) une boucle glycosylée localisée entre TM1 et TM2, et (iv) des extrémités C et N terminales cytoplasmiques qui
présentent moins de similitudes que le reste de la protéine.
La présente invention a plus particulièrement pour objet l'isolement, le séquençage et la caractérisation d'une région du gène codant pour la ChAT, capable d'exprimer un transporteur vésiculaire d'ACh ainsi que l'identification de séquences promotrices impliquées dans l'expression de ce transporteur. Elle décrit aussi des cassettes d'expression de ce gêne, des vecteurs le contenant et leur utilisation pour
diriger l'expression de ce transporteur.
Plus précisément, la présente invention se rapporte à une séquence nucléique codant pour une protéine impliquée dans le transport vésiculaire de l'ACh caractérisée en ce qu'elle est localisée au sein du premier intron du gêne codant pour la ChAT, dans
la même orientation transcriptionnelle.
A partir de la région 5' du gène codant pour la ChAT de rat et plus précisément
d'une carte de restriction de cette région, les inventeurs ont isolé un fragment HindiI-
BamHI portant le premier intron de ce gêne et en partie les séquences des deux premiers exons R et N correspondants respectivement aux extrémités 5' et 3' de ce fragment. De manière inattendue, le clonage et le séquencage de ce fragment ont révélé la présence d'une phase ouverte de lecture de 1590 pb, codant pour une protéine de l'ordre de 530 acides aminés soit d'une masse de l'ordre de 56,5kDa et présentant des similitudes, au niveau de sa séquence avec des protéines du type transporteur. Cette protéine a été identifiée comme un transporteur vésiculaire d'ACh
de rat et est désignée ci-après par rVAT.
Cette séquence d'ADN est plus précisément localisée au sein du premier intron du gène codant pour la ChAT, en aval du promoteur de type R du gêne de la ChAT et dans la même orientation transcriptionnelle que le gène ChAT. Elle n'est interrompue
par aucun intron.
Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à une séquence nucléique codant pour un transporteur vésiculaire d'ACh caractérisée en ce qu'elle
comprend tout ou partie de la SEQ ID N 1 ou l'un de ses dérivés.
Préférentiellement, il s'agit de tout ou partie de la séquence SEQ ID N 2 ou
l'un de ses dérivés.
Au sens de la présente invention, le terme dérivé désigne toute séquence différant de la séquence considérée en raison d'une dégénérescence du code génétique, obtenue par une ou plusieurs modifications de nature génétique et/ou chimique, ainsi que toute séquence hybridant avec ces séquences ou des fragments de celles-ci et dont le produit possède l'activité indiquée. Par modification de nature génétique et/ou chimique, on peut entendre toute mutation, substitution, délétion, addition et/ou modification d'un ou plusieurs résidus. De tels dérivés peuvent être générés dans des buts différents, tels que notamment celui d'augmenter l'affinité du polypeptide correspondant pour son(ses) ligand(s), oelui d'améliorer ses niveaux de production, celui d'augmenter sa résistance à des protéases, celui d'augmenter et/ou de modifier son activité, ou celui de lui conférer de nouvelles propriétés pharmacocinétiques et/ou biologiques. Parmi les dérivés résultant d'une addition, on peut citer par exemple les séquences nucléiques chimères comportant une partie hétérologue supplémentaire liée à une extrémité. Le terme dérivé comprend également les séquences homologues à la séquence considérée, issues d'autres sources cellulaires et notamment de cellules d'origine humaine, ou d'autres organismes, et possédant une activité de même type. De
telles séquences homologues peuvent être obtenues par des expériences d'hybridation.
Les hybridations peuvent être réalisées à partir de banques d'acides nucléiques, en utilisant comme sonde la séquence native ou un fragment de celle-ci, dans des conditions de stringence conventionnelles (Maniatis et al., Cf techniques générales de
biologie moléculaire), ou, de préférence, dans des conditions de stringence élevées.
La présente invention entend également couvrir les séquences antisens correspondantes dont l'expression permet de contrôler la transcription d'ARNm cellulaires. De telles séquences peuvent être constituées par tout ou partie de la
séquence nucléique considérée, transcrite dans l'orientation inverse.
Plus préférentiellement, il s'agit de la séquence nucléique codant pour le
transporteur vésiculaire d'ACh de rat, la rVAT.
Compte-tenu de la localisation du gène selon l'invention à savoir dans le premier intron du gène codant pour la ChAT, en aval du promoteur ChAT de type R et dans la même orientation transcriptionnelle, les inventeurs ont cherché à savoir si les ARNms ChAT et VAT pouvaient être exprimés à partir du même promoteur par
épissage alternatif.
Cette hypothèse a été vérifiée expérimentalement Deux formes d'ARNm codant pour le transporteur VAT ont été identifiées. Elles contiennent la séquence de
l'exon R de type R1 ou R2 (de l'ARNm ChAT) (Kengaku et al. Mol. brain Res.18: 71-
76 (1993)) (figure 1) immédiatement suivie de la séquence d'un second exon débutant à 308pb en amont du codon d'initiation de la traduction (de VAT). Outre ces deux ARNm, il existe vraisemblablement au moins une troisième forme d'ARNm VAT apparemment, plus abondante que les deux formes précitées, codant pour le
polypeptide objet de l'invention.
La présente invention a également pour objet des régions promotrices impliquées dans l'expression de VAT et localisées dans le gêne codant pour la ChAT. Il s'agit plus particulièrement de la région promotrice comprenant tout ou partie de la SEQ ID n 3 ou un de ses dérivés. Il peut également s'agir d'une région promotrice
localisée dans la SEQ ID n l.
Au sens de la présente invention, région promotrice, désigne le ou les séquences responsables de l'expression de VAT. Il s'agit en particulier de séquences promotrices, d'activation, de régulation, et/ou de séquences permettant une expression tissu-spécifique. La SEQ ID N 3, est déjà connue pour contrôler l'expression du gène ChAT (Bejanin et al. J. Neurochem.58: 1580-1583 (1992)). De manière inattendue, cette région s'est révélée être également responsable de rexpression du gène codant pour le VAT et plus précisément d'au moins deux types d'ARNm VAT. Il a ainsi été mis en évidence que des ARNm VAT et ChAT peuvent être produits à partir du même
promoteur ChAT de type R, par épissage alternatif.
La présente invention a également pour objet rutilisation de ces régions promotrices pour contrôler et/ou participer à l'expression de gènes. Ces régions promotrices sont également avantageuses pour cibler rexpression d'une proteine dans les neurones cholinergiques. Bien entendu, ces régions promotrices sont particulièrement utiles pour diriger l'expression du gène codant pour le VAT,
expression couplée le cas échéant avec celle d'un autre gène.
L'invention concerne en outre un polypeptide impliqué dans le transport vésiculaire de l'ACh susceptible d'être exprimé par une séquence nucléique telle que décrite précédemment Les polypeptides de l'invention peuvent être obtenus par expression dans un hôte cellulaire d'une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, par synthèse chimique, sur la base de la séquence SEQ ID n 2 en utilisant les techniques connues
de l'homme du métier, ou par une combinaison de ces techniques.
La comparaison de cette protéine avec des protéines déjà connues à titre de transporteur d'ACh, comme celles de Torpedo ou Caenorhabditis elegans a permis de mettre en évidence certaines similitudes. C'est ainsi que la protéine selon l'invention possède environ 77%o d'homologie avec la protéine Torpedo et 56%o d'homologie avec
la protéine Caenorhabditis elegans, sur 352 acides aminés.
Dans le cas des homologies significatives précitées, on note en particulier que les 12 domaines transmembranaires, (TM), représentatifs des transporteurs déjà connus, existent dans la protéine selon l'invention. En particulier, sont présents les résidus d'acide aspartique des domaines transmembranaires 1, 6, 10 et 11 et le résidu lysine du domaine transmembranaire 2, qui, vraisemblablement, interviennent dans la liaison avec le substrat. La divergence importante, entre la protéine selon rinvention et les autres transporteurs connus, existe au niveau de la boucle hautement hydrophile,
située entre les deux premiers domaines transmembranaires et les extrémités N- et C-
terminales. Dans le cas de la présente invention, la boucle intègre deux sites potentiels
de N-glycosylation.
L'ensemble de ces observations démontre l'appartenance de la protéine revendiquée à la famille des transporteurs vésiculaires de neurotransmetteurs à 12
domaines transmembranaires.
Plus précisément, il s'agit d'une protéine qui comprend tout ou partie de la SEQ ID N 1 ou N 2 ou l'un de leurs dérivés. Pour la définition du terme dérivé on se
réferera à la définition soumise précédemment.
Plus préférentiellement, il s'agit du transporteur vésiculaire de l'ACh de rat,
désigné ci-après par rVAT.
Préférentiellement, les séquences nucléiques selon l'invention font partie d'un vecteur. L'emploi d'un tel vecteur permet en effet d'améliorer l'administration de l'acide nucléique dans les cellules à traiter, et également d'augmenter sa stabilité dans lesdites
cellules, ce qui permet d'obtenir un effet thérapeutique durable.
Le vecteur utilisé peut être d'origines diverses, dès lors qu'il est capable de transformer les cellules animales, de préférence les cellules nerveuses humaines. Dans un mode préféré de mise en oeuvre de l'invention, on utilise un vecteur viral, qui peut être choisi parmi les adénovirus, les rétrovirus, les virus adéno-associés (AAV), le virus de l'herpès, le cytomégalovirus (CMV), le virus de la vaccine, etc. Des vecteurs dérivés des adénovirus, des rétrovirus, ou des AAV incorporant des séquences d'acides nucléiques hétérologues ont été décrits dans la littérature [Akli et al., Nature Genetics 3 (1993) 224; Stratford-Perricaudet et al., Human Gene Therapy 1 (1990) 241; EP 185 573, Levrero et al., Gene 101 (1991) 195; Le Gal la Salle et al., Science 259 (1993) 988; Roemer et Friedmann, Eur. J. Biochem. 208 (1992) 211; Dobson et al., Neuron 5 (1990) 353; Chiocca et al., New Biol. 2 (1990) 739; Miyanohara et al.,
New Biol. 4 (1992) 238; WO91/18088].
La présente invention concerne donc également tout virus recombinant comprenant, insérée dans son génome, une séquence nucléique telle que définie avant.
Avantageusement, le virus recombinant selon l'invention est un virus défectif.
Le terme "virus défectif" désigne un virus incapable de se répliquer dans la cellule cible. Généralement, le génome des virus défectifs utilisés dans le cadre de la présente invention est donc dépourvu au moins des séquences nécessaires à la réplication dudit virus dans la cellule infectée. Ces régions peuvent être soit éliminées (en tout ou en partie), soit rendues non-fonctionnelles, soit substituées par d'autres séquences et notamment par l'acide nucléique de l'invention. Préférentiellement, le virus défectif conserve néanmoins les séquences de son génome qui sont nécessaires à
l'encapsidation des particules virales.
Il est particulièrement avantageux d'utiliser les séquences nucléiques de linvention sous forme incorporée à un adénovirus, un AAV ou un rétrovirus
recombinant défectif.
Concernant les adénovirus, il en existe différents sérotypes, dont la structure et les propriétés varient quelque peu, mais qui ne sont pas pathogènes pour l'homme, et notamment les sujets non immuno-déprimés. Par ailleurs, ces virus ne s'intègrent pas dans le génome des cellules qu'ils infectent, et peuvent incorporer des fragments importants d'ADN exogène. Parmi les différents sérotypes, on préfère utiliser dans le cadre de la présente invention les adénovirus de type 2 ou 5 (Ad 2 ou Ad 5). Dans le cas des adénovirus Ad 5, les séquences nécessaires à la réplication sont les régions
E1AetE1B.
Les virus recombinants défectifs de l'invention peuvent être préparés par recombinaison homologue entre un virus défectif et un plasmide portant entre autre la séquence nucléotidique telle que définie ci-avant (Levrero et al., Gene 101 (1991) 195; Graham, EMBO J. 3(12) (1984) 2917). La recombinaison homologue se produit après co-transfection desdits virus et plasmide dans une lignée cellulaire appropriée. La lignée cellulaire utilisée doit de préférence (i) être transformable par lesdits éléments, et (ii), comporter les séquences capables de complémenter la partie du génome du virus défectif, de préférence sous forme intégrée pour éviter les risques de recombinaison. A titre d'exemple de lignée utilisable pour la préparation d'adénovirus recombinants défectifs, on peut mentionner la lignée de rein embryonnaire humain 293 (Graham et al., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59) qui contient notamment, intégrée dans son génome, la partie gauche du génome d'un adénovirus Ad5 (12 %). A titre d'exemple de lignée utilisable pour la préparation de rétrovirus recombinants défectifs, on peut
mentionner la lignée CRIP (Danos et Mulligan, PNAS 85 (1988) 6460).
Ensuite, les virus qui se sont multipliés sont récupérés et purifiés selon les
techniques classiques de biologie moléculaire.
La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins une séquence nucléotidique, un vecteur ou un
polypeptide selon l'invention.
Elle se rapporte également à toute utilisation d'une séquence ou d'un vecteur tels que revendiqués pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée
au traitement des pathologies affectant le système nerveux.
Les exemples et figures présentés ci-après à titre illustratif et non limitatif
mettent en évidence d'autres avantages et caractéristiques de la présente invention.
Figure. 1: Réprésentation schématique de la région 5' du gène ChAT de rat et des différents ARNm ChAT Les boites blanches et noires indiquent respectivement, les exons codants et non codants. R, N et M sont les 3 exons ChAT non codants. La phase ouverte de lecture
de 1590pb, identifiée à partir du séquençage d'un fragment de gène HindII(H)-
BamHI(B) de 3940 pb, est également représentée. Le codon d'initiation potentiel de la traduction, ATG (position + 1) est bordé par une cytosine (position -1) et deux résidus de guanosine (positions -3 et +4) qui concordent avec la séquence consensus de Kozak (Kozak M. J., Cell. Biol. 115, 887-903 1991). l est précédé d'un codon stop en phase situé 726pb en amont. La phase ouverte de lecture, est suivie par des séquences consensus de polyadénylation. La plus probable, désignée par PA (AATAAA), est
située 389pb en aval du codon de terminaison.
Eiggr. 2: Analyse par la technique de Northern de la distribution des ARNm-rVAT dans différents tissus de rat avec une sonde spécifique de la phase ouverte de lecture (position 31-1724 telle que définie en Fig. 1) Ligne 1: ARN poly (A)+ de moelle épinière (1 g); Lignes 2-11: 10 pg de: 2,3: ARN de moelle épinière (2 préparations différentes); 4: ARN de tronc cérébral; : ARN poly (A)+de glande surrénale; 6: ARN du bulbe olfactif 7: ARN de cervelet; 8: ARN de foie; 9: ARN de moelle épinière; : ARN poly(A)+ de la région septale;
11: ARN poly(A)+ de striatum.
Les blots d'ARN sont préparés en présence de marqueurs de poids moléculaires d'ARN (Gibco BRL). Les lignes 1 à 8 et 9 à 11 représentent les résultats des deux expériences indépendantes. Les autoradiographies sont exposées pendant 3 jours à une température de -70 C avec un écran intensifiant Fgigure. 3: Diversité des ARNm-rVAT dans la moelle épinière de rat Y sont représentés les résultats d'analyse par Southern blot des produits d'amplification d'ADNc (lignes 1,2) et des produits SLIC (lignes 3,4). Les boîtes blanches et noires indiquent respectivement les exons non codants et codants. Les oligonucléotides utilisés pour la synthèse de l'ADNc (P), pour l'amplification (deux amorces sens 1,2 en amont et une amorce antisens commune L) et pour l'hybridation des Southern (H), sont schématisés par des flèches. L'ARN poly(A)+ est soumis à une synthèse de premier brin d'ADNc avec/ou comme contrôle sans transcriptase réverse. Les amplifications de l'ADNc (+) ou des contrôles (-) avec la paire d'oligonucléotides L et 1 ou 2 sont représentées respectivement, en lignes 1 et 2. Les amplifications avec des oligonucléotides L et A5'1 de l'ADNc (+) ou des contrôles (-), ligaturés ou non, sont présentées respectivement en lignes 3 et 4. Les barres verticales dans les exons R et rVAT représentent les sites d'épissage déduits des séquences des deux fragments d'ADN obtenus en ligne 1. Le site d'épissage en 5' dans l'exon R correspond à celui représenté en figure 1. La séquence consensus du site d'épissage en 3' est soulignée. La position du nucléotide situé le plus en 5' pour les produits SLIC séquences est indiquée
par un astérisque.
EXEMPLE 1
Synthèse du premier brin d'ADNc (extension d'amorce) et ligation d'un oligonucléotide
à l'ADNc simple brin (SLIC).
L'ARN est extrait de moelle épinière de rat en utilisant la méthode RNAzol
(System Bioprobe). L'ARN poly(A)+ est purifié à raide du kit Dynabeads ) (Dynal).
Le premier brin d'ADNc est synthétisé à partir de 1 Fg d'ARN poly(A)+ dans un tampon de transcription réverse en présence de 100 xg/ml BSA, 15 unités de RNasin (Promega), 14 mM de [3-mercaptoéthanol, lmM de dNTPs, 4 mM de pyrophosphate, 7,5 pM d'oligonucléotide amorce P (Fig. 3) et 40 unités de transcriptase réverse (RTase, Promega). Le mélange réactionnel est incubé 45 minutes à 42 C. Un contrôle est effectué en l'absence de RTAse. ADNc et contrôles sont chauffés 5 minutes à 95 C afin de dénaturer les hétéroduplex ADN-ARN, puis purifiés avec le Kit Prep-A- Gène (Biorad). Dans les expériences de SLIC, un oligonucléotide 50 mer (A5'NV) est ligaturé à l'extrémité 3' du premier brin d'ADNc purifié en utilisant l'ARN ligase de T4 (Boehringer) comme décrit dans la littérature (Dumas et ai., Nucleic Acids Res. 19 5227-5232, 1991). Un contrôle est effectué en absence de l'enzyme. Les produits de ligation et les contrôles sont ensuite purifiés en utilisant le Kit Prep-A-Gène.
EXEMPLE 2.
Expériences d'amplification Les ADNc et les produits de SLIC sont amplifiés dans un Techne Thermal Cycler (30 ou 40 cycles d'amplification respectivement). Chaque cycle consiste en: 45s à 94 C, 45s à 65 C et SOs à 72OC. Les amorces sens utilisées sont les suivantes: oligonucléotides 1 ou 2 pour les ADNc et l'oligonucléotide A5'1 (complémentaire d'une partie de A5'NV) pour les ADNc ligaturés en 3'. Une amorce antisens et commune L, est utilisée. Les produits d'amplification sont séparés sur gel d'agarose à 2% et analysés par la technique de Southern blotting en utilisant roligonucléotide H comme sonde. Les parties du gel contenant les bandes observées sont isolées et l'ADN qu'elles contiennent est purifié, sous cloné dans le plasmide pUC19 (Appligéne) et séquencé sur les deux brins au moyen du kit Sequenase (USB, Amersham). Les séquences et les positions (cf. figure 1) des oligonucléotides utilisés sont:
1 (-1486,5'-CTGTCGCTGCAAGCCAGGACTCT-3')
2 (-410, 5'-TGGAGGAAGAGGCAAGAGCGGA-3')
H (+24, 5'-ACCGGTrGGCGCGGTGGGTrCCAT-3') L (+62, 5'-CACCGCTr CCGACAGTITTGGTG-3')
P (+187, 5'-TGGGCGATATAGTCGG GAACAATG-3')
A5'NV (5'-CTGCATCTATCTAATGCTCCTCTCGCTACCTGCTCACTCTGCGTGA
CATC-3')
A5'1 (5'-GATGTCACGCAGAGTGAGCAGGTAG-3')
EXEMPLE. 3.
Analyse de l'ARN
Les ARN ou ARN poly(A)+ sont préparés à partir des tissus de rat comme décrit ci-
dessus, fractionnés sur gel d'agarose (1 %)/formaldéhyde et transférés sur des membranes de nylon (Hybond N+, Amersham) comme décrit dans la littérature (Faucon Biguet et al., EMBO J., 5 287-291 1986). Les filtres sont hybridés à 42 C,
dans un tampon contenant 50 % (vol/vol) de formamide, à un fragment d'ADN SmaI-
EcoRI (position 31-1724), marqué par amorçage aléatoire (19) avec (a- 32P) dCTP (3000 Ci/mmol; Amersham) et ayant une activité spécifique de 1. 2 x 109 cpm/f4g. Les derniers lavages des filtres sont effectués à 65 C dans la solution 0.1 x SSC/0.1 % SDS. Abréviations utilisées: ChAT: choline acétyltransférase ACh: acétylcholine VMAT: transporteur vésiculaire des monoamines TM: domaine transmembranaire rVAT: transporteur vésiculaire de l'acétylcholine de rat SLIC: ligation du cDNA simple brin 1l
LISTE DE SEOUENCES
(1) INFORMATION GENERALE:
(i) DEPOSANT:
(A) NOM:CNRS
(B) RUE: 15,Anatole-France
(C) VILLE: PARIS
(E) PAYS: FRANCE
(F) CODE POSTAL: 75007
(A) NOM: RHONE-POULENC RORER S.A.
(B) RUE: 20, avenue Raymond ARON
(C) VILLE: ANTONY
(E) PAYS: FRANCE
(F) CODE POSTAL: 92165
(ii) TITRE DE L' INVENTION: Nouveau transporteur véiculaie
d acétyldcholine.
(iii) NOMBRE DE SEQUENCES:3 (iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Tape (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible
(C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS
(D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB)
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR:3926 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: rat
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1:
AAGCTTCCAAGCCACTTGTGAGCCCACTCAGGGTTTGGAGGCGGACGGGGTGGGGGT
GGGGTGGGGAAATGCAGAAAAGTGGGCGGAGGCTCTCAAGAGCCTAGGGAGGATAAG
GTCTGGAAAGAAGAGGACCTGGGAGGAGTTAGATTGAGGAGTGGGAGAGTAGAAGGG
GAGGGAAATAGGCGGGGCTGGAGGCCGGGGAGACCCGCGCACCGAAAAGCCCAAAGG
GAGAGTCCAGGCAGGGGGAGGTCAAAAAGGGTTAGCGTTGACATCCAGGACCCTGGG
TGCAGAGAAAGACTCCTCCTCTCAGTCCTCATACCCTCATAGTTCAGAATTAGCTGC
CAAGACTTTCTGCCTAAGGGCGGTGGGTCGGAACCAGAGCCTGAAGGCTCTGTACCT
CCCCCCTCCCTTCCCGGAGGAGGGGATGGGACGGGCTGGGGGCGGGATTGAGGAAGG
GGGTTGCGTGCGCTGTGCCTCTGGGTCCGGGCTGCGCGTTCCAGCTGCGAGAACAGA
TGGAGGCAGCGCGGCTCACCTCGGGGGCTCCGTGCCCGCTGTGCGCCGAAGTCCAGG
CTGAGGAGGAGGTCTAGAGCCCCCGGCTCTCCCGTCTCCCACCAGGCTGCGGGGAAC
TGGCTGCCGCACCCCTCCTCCAAGTGGGGGTAGAACGGAGTCTCACCCCCATAGGTC
CCAGAACTAAGGGGAACATAGGGCCGGTTCCTCCCACTGCTCAGCCATCCCCAGGGG
CTTGTCTAGGACTATAGCTCTCCAAATCCCCCTTCCCCTGGCTTCCATCCTGGGCGC
ATCTCAGAAGCGGACCCCTGCCCGGACGCGCCCCGCCCCCGGCCCCCGCCCCGACGA
CGTCCTATTAGCATGAGCGACGCCAGTGGCCGGGGCACCACTCGGGGGCCGAGACTC
ACCGCGTCATAGCCCCAAGTGGAGGGAGAAAGAAAAAAAAAGAGGCGGCGGTGGAGG
AAGAGGCAAGAGCGGACGGGCGGGGAGGGCTGGAGAGACGGCGGGCGGCGGCAGCAT
GCCCCTGGGCGGGTGCACACGGCCTCTCTGCACCGCAGGGGCTGCTTCTGCTCTCTC
TGGGCACCACGCGTCCAGTCTCCCGCCTCAGCCCCTCGGCTTGCCGGCCTTTGCGGT
TGCGCTCGAAACATCGTCCACTGGTCCCCGAAGCATCTAAGAGCAGCGGCGCCGCGC
GGGACAATCCTTGCTTTTTTCTGAGCTCGGGGATATGAGCCCCACAGCCACCTGAAG
CGCAGGGGGCGCTACGGCTAGGACCGCGCCCCCGAAGTACCTTATCCTAGCCTCTGC
ACTGCGGGACGCCGACACCCGACTCCGGTGGAGGCATCTTAGGGAAAGCAGCCGGTA
GGGGCATGGAACCCACCGCGCCAACCGGTCAGGCCCGGGCGGCGGCCACCAAACTGT
CGGAAGCGGTGGGAGCCGCGCTACAAGAGCCCCAGAGGCAGCGGCGCCTGGTGCTGG
TCATCGTGTGCGTTGCACTGTTACTGGACAACATGTTGTACATGGTCATCGTGCCCA
TTGTTCCCGACTATATCGCCCACATGCGCGGGGGCAGCGAGGGCCCGACCCTGGTCT
CTGAGGTGTGGGAACCCACTCTGCCGCCGCCCACTCTGGCTAATGCCAGTGCCTACT
TGGCCAACACGTCGGCGTCCCCGACGGCTGCCGGGTCGGCTCGGTCAATCCTGCGAC
CTCGCTACCCCACAGAAAGCGAAGATGTGAAGATAGGTGTGCTGTTTGCCTCCAAGG
CTATCCTGCAGCTTCTGGTGAACCCCTTAAGCGGGCCTTTCATTGATCGCATGAGCT
ACGACGTGCCGCTGCTTATAGGCCTGGGCGTCATGTTCGCCTCCACAGTCATGTTTG
CCTTTGCAGAAGACTATGCCACGCTCTTCGCTGCGCGCAGTCTACAAGGCCTGGGCT
CGGCCTTCGCGGACACGTCTGGCATTGCCATGATCGCCGACAAGTATCCCGAGGAGC
CTGAGCGCAGTCGTGCCCTGGGCGTGGCGCTAGCCTTTATTAGCTTTGGAAGCCTAG
TGGCGCCACCGTTTGGGGGCATCCTCTACGAGTTCGCGGGCAAGCGTGTACCCTTTC
TAGTGCTCGCCGCTGTGTCCCTTTTCGACGCGCTCCTGCTCCTGGCGGTGGCTAAGC
CCTTCTCGGCTGCGGCTCGGGCGCGAGCCAACCTGCCGGTGGGCACACCTATCCATC
GCCTCATGCTAGACCCTTACATCGCTGTGGTAGCCGGCGCGCTCACCACTTGTAACA
TTCCCCTTGCGTTCCTCGAGCCCACCATAGCCACGTGGATGAAGCACACAATGGCCG
CATCCGAGTGGGAGATGGGCATGGTTTGGCTGCCGGCTTTCGTGCCACACGTGTTAG
GCGTCTACCTCACCGTGCGCCTGGCGGCGCGTTATCCACACCTGCAGTGGCTGTACG
GCGCTCTCGGGCTAGCGGTAATTGGAGTGAGCTCTTGCGTCGTACCTGCCTGTCGCT
CATTCGCGCCGTTAGTGGTCTCGCTCTGCGGACTCTGCTTCGGCATCGCGTTAGTGG
ACACAGCGCTCCTACCCACGCTCGCCTTTCTGGTGGACGTGCGCCACGTATCCGTCT
ATGGCAGTGTCTATGCCATAGCTGACATCTCCTATTCTGTGGCCTACGCGCTCGGGC
CCATAGTGGCAGGCCACATCGTTCACTCTCTTGGCTTTGAGCAGCTCAGCCTGGGCA
TGGGCCTGGCCAACCTGCTCTACGCACCAGTCCTTCTTCTTTTGCGCAATGTAGGCC
TCCTTACACGCTCGCGTTCGGAGCGCGATGTGTTGCTTGATGAACCGCCGCAGGGTC
TGTACGACGCGGTGCGCCTGCGTGAGGTGCAGGGCAAGGATGGCGGCGAACCTTGTA
GCCCACCTGGCCCTTTTGACGGGTGCGAGGACGACTACAACTATTACTCCCGCAGCT
AGCAGACCCGCTTCTCCTCCAGGCCACCTACCCGCCCCATTTAGGTCAAGATGGTCA
TTCTGCAAGAGCACTGTCCAACTTTGGCTTGGGGCCCACCTCCTCTAATGAATACCC
TAGCCCCTCGCCCGTCCTGAATTCCTTTGCTGGAATCCCTTCTCCATGACCCCTCCC
AGTCTAGGCCCCTCCCAAACACACTCGTATTCATTGGGGAAATGGAGCAGGGAGGCA
GAAGAAGCTGTTGGGCTCTTGGCAGAGGTGAAGAGGTGTGCGGGTGATCGCCAATCA
CCTACTGAGAGCCCCCAAATAGAGTCATGCATCTGTTTGTCCTTCCTGCGGATCTTT CCAGTGCCAAACTTGGTCTCTGCACTCCGGTGCCTCCGGCCTGAATTAATAAACCAT
ATCTATCTGAGGAGGCCGAGTCTCTTTACTGATGAGGGGTGGGTGGTGTGACACAAG
ACCTAAGCACAGAGAAGGCTGCCTGGGTTTCACAGGTTCAGTCCAGACCTGAGGAGG
AGGGGAAGCCTGAAGCGTCTTTGCTGCCTGGTAAAAGAACCCAAAGGAGGGCTCTCC
CCCATGGATATTCAGAACACACACACACACACACACACTCACACACACACACACACA
CACACACACACACACGAACGATAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGACAGT
CTCTCCCTTCCAAGTCCAGTGTAGCACCTGGAGGTTCCACCCGAGGGAGCCTGAGGA
TCTGCCTGGCCTTGGAGGATAGCTGGCACCAGGAATTTTGGGTGCCAGGACTGGGCT
TTCCTACACAGTGGGAACTCGCTTCATGTTGTCAAGAAAGGGAGCTGTTTTCTGCAG
AGAAGAGGAGGTAGTCCCGTCTTTTAGGGTCCTGGCCTGGGGACAGTGTTCATTAAG
GATTCAGGCTCTTTCTGTGAAGACTGAGAGGACACTTACCTGTGGATCC
(3) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR:1593 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: rat
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:
ATGGAACCCACCGCGCCAACCGGTCAGGCCCGGGCGGCGGCCACCAAACTGTCGGAA
GCGGTGGGAGCCGCGCTACAAGAGCCCCAGAGGCAGCGGCGCCTGGTGCTGGTCATC
GTGTGCGTTGCACTGTTACTGGACAACATGTTGTACATGGTCATCGTGCCCATTGTT
CCCGACTATATCGCCCACATGCGCGGGGGCAGCGAGGGCCCGACCCTGGTCTCTGAG
GTGTGGGAACCCACTCTGCCGCCGCCCACTCTGGCTAATGCCAGTGCCTACTTGGCC
AACACGTCGGCGTCCCCGACGGCTGCCGGGTCGGCTCGGTCAATCCTGCGACCTCGC
TACCCCACAGAAAGCGAAGATGTGAAGATAGGTGTGCTGTTTGCCTCCAAGGCTATC
CTGCAGCTTCTGGTGAACCCCTTAAGCGGGCCTTTCATTGATCGCATGAGCTACGAC
GTGCCGCTGCTTATAGGCCTGGGCGTCATGTTCGCCTCCACAGTCATG'ITGCC T=
GCAGAAGACTATGCCACGCTCTTCGCTGCGCGCAGTCTACAAGGCCTGGGCTCGGCC
TTCGCGGACACGTCTGGCATTGCCATGATCGCCGACAAGTATCCCGAGGAGCCTGAG
CGCAGTCGTGCCCTGGGCGTGGCGCTAGCCTTTATTAGCTTTGGAAGCCTAGTGGCG
CCACCGTTTGGGGGCATCCTCTACGAGTTCGCGGGCAAGCGTGTACCCTTTCTAGTG
CTCGCCGCTGTGTCCCTTTTCGACGCGCTCCTGCTCCTGGCGGTGGCTAAGCCCTTC
TCGGCTGCGGCTCGGGCGCGAGCCAACCTGCCGGTGGGCACACCTATCCATCGCCTC
ATGCTAGACCCTTACATCGCTGTGGTAGCCGGCGCGCTCACCACTTGTAACATTCCC
CTTGCGTTCCTCGAGCCCACCATAGCCACGTGGATGAAGCACACAATGGCCGCATCC
GAGTGGGAGATGGGCATGGTTTGGCTGCCGGCTTTCGTGCCACACGTGTTAGGCGTC
TACCTCACCGTGCGCCTGGCGGCGCGTTATCCACACCTGCAGTGGCTGTACGGCGCT
CTCGGGCTAGCGGTAATTGGAGTGAGCTCTTGCGTCGTACCTGCCTGTCGCTCATTC
GCGCCGTTAGTGGTCTCGCTCTGCGGACTCTGCTTCGGCATCGCGTTAGTGGACACA
GCGCTCCTACCCACGCTCGCCTTTCTGGTGGACGTGCGCCACGTATCCGTCTATGGC
AGTGTCTATGCCATAGCTGACATCTCCTATTCTGTGGCCTACGCGCTCGGGCCCATA
GTGGCAGGCCACATCGTTCACTCTCTTGGCTTTGAGCAGCTCAGCCTGGGCATGGGC
CTGGCCAACCTGCTCTACGCACCAGTCCTTCTTCTTTTGCGCAATGTAGGCCTCCTT
ACACGCTCGCGTTCGGAGCGCGATGTGTTGCTTGATGAACCGCCGCAGGGTCTGTAC
GACGCGGTGCGCCTGCGTGAGGTGCAGGGCAAGGATGGCGGCGAACCTTGTAGCCCA
CCTGGCCCTTTTGACGGGTGCGAGGACGACTACAACTATTACTCCCGCAGCTAG
(4) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR:1902 paires de bases (B) TYPE: acide nucléique (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc (iii) HYPOTHETIQUE: NON (iii) ANTI-SENS: NON (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: rat
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:
AAGCTTTTTGCTGAAGGCGATCCTTCCCTGACTGTGGCCCCATATCCTTCCGATGTA
AAGTCTCTGCCTTCTTATTTGGAAGCTAAAGAATGTCATTTAGGGACCTGGAAGGAG
CCAAACCCATGCCTCCCTCACTCCGATTTTATTTGCCTAGGTGTGTGTGCCACACTG
CACATGGAGTGACACAGGCGTAATGAAACACAAGGGAAAGGGAGGTGGCACGAAGAC
CTCAAAGCAGGTCCCAACAGCCTGGAAACTCAACAAGTGACCATCTCCCTTCTCCAT
GCCTAGTTTCCTATGGGGGTGTGTGATGGGGGTGGGGTGGATAGCATCTACATTGTA
CCAAGATTGAGGAAGGACGGAGTGAGCTCACCCATGGCCCTGGCACGAAACCAGTGG
GTCTGCACCTTATCAGAGAGGAACGGAGGAGCAGAGAGTTGGGTGCGAGTCCCAGAA
TGAATTGGCTTCATTCTCAGGAAGCCATGGATTATTATGTGGGCTGGAGGGCTGAGA
GACAAGGTCTGCCTCTTGCTAGCACTGGGAAGTTTCTTTCCTGAAAGATTCTACTGT
* CCACTAACCACCAGAAAGAAAACTGCTGCCTGCGGTGTTGTCCTGCACCCTGATTTT
ATTCAGTCAGAGCGGCAATATATGAATAAGTAATCACGACCATGTAGGGCAGGAAAT
ACCTCTTTAAAAACCACCAGTGGGATTTTCATAGAAAAGTCAGAGGAACCCAGAGCG
TTCTTAAACTCCAGTGTCTGGAGAGCCAAGCAGGTGACAGACAGAGTTCATGAAGCA
AGCTGAGGGAAAACCCCATCGCTGGAGTGTGTGCTATGAACAAAGGCACCAGGATAA
TATTTAAAGTTGTTTCACCGCACTTTCTGCAAGGTGGATCTTGGTAATCTCTTGATG
AACAGAGGCCAAGTGGGCCAGGGTTAGTGGGGAATGTGGCTTGCCCAATGCTTTCCA
TAGCCATGGCTGTCCCCATAGTTAGGCTTCCTCCCTCATTTTGAGGGCAGCTGGGCC
ACTGCAGGGTATGTGATGGGCAGCTCTCTACTCAGATGAGTCTGTTCCTTTCAGGAG
TACCTGTGTACAGGTTGGGAGGTTGGGCACTAGACCACTTGATTGCTGCCTCTCTCC
CTGACTCTGTTCTCCATCACCTCCTCTTGCAACTGGCTTAAGAACAGAAGCCAGCCA
ATTTTCCAGCTCCTTCTGTATCTTCCACCATCCCAGACAGAGTCCAGGCTCACAATG
CCTACCCAACTGAGGAAGAAATCAGAGAGTCAGGATGCTCCCGGTGTCTGACTGCCC
TTCACAAGACCCTCATGAACACAAGGCAGCAAGCACATGCTATAACAACAACGGCAA
ATGCTAATGATTCACACCACGCGTGTGCCACACCCTAGTTGTACGTACTCCTATTCC
AT'IITTTACAGATAAATAAAGGGGCGGTGGGGGCAGAGGGAGGAAACAACGGCTCCCTT
GGCACTGTTATCTAGTAAGTGGCAGCACTGGGAGCCATCCTATCTGTCTGCATCTGG
AGCTCAAATCGTGATGCCTCCTTCGGTGGAGGAAGGCTAGCTTGGGATATGGAGGCT
ACTGTGACTCCGGAAGACAGAGAAAAGTCCAATCTCAACAACGTCACCACTATCCCC
AATCTCAGCTGACTGGCATCCTCTCTCCTGCCAGTCTGTGGACGGGAACGCGGGCCT
CACGTGCCATCTAGGGTCAAAACTCGTCTGAGGACACACACTGGGCCCAACGCAGAG
GCTGATCTGTTCAGCCTGTCGGCTGCAAGCCAGGACTCTCAGCTTGTGCAGCACCCC
CGGAAGGAAGGTGAGCCTTCCTAAGCCTCTACTGACAGCAAAGCTGCAGAGGCCCTG
CCGCGTGAGACCCAGAAGCTT
Claims (18)
1. Séquence nucléique codant pour une protéine impliquée dans le transport vesiculaire de l'acétylcholine (ACh) caractérisée en ce qu'elle est localisée dans le premier intron du gêne codant pour la choline acétyltransférase (ChAT) et dans la
même orientation transcriptionnelle.
2. Séquence nucléique selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle est
localisée en aval du promoteur de type R du gène de la ChAT.
3. Séquence nucléique codant pour une protéine impliquée dans le transport vésiculaire de l'ACh caractérisée en ce qu'elle comprend tout ou partie de la SEQ ID
N 1 ou l'un de ses dérivés.
4. Séquence nucléique selon la revendication 3 caractérisée en ce qu'elle
comprend tout ou partie de la SEQ ID N 2 ou l'un de ses dérivés.
5. Séquence nucléique selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisée en ce
qu'elle code pour la protéine rVAT.
6. Polypeptide impliqué dans le transport vésiculaire de l'ACh susceptible
d'être exprimé à partir d'une séquence selon l'une des revendications de 1 à 5.
7. Polypeptide selon la revendication 6 caractérisé en ce qu'il comprend tout
ou partie de la SEQ ID N 1 ou N 2 ou l'un de leurs dérivés.
8. Polypeptide selon la revendication de 6 ou 7 caractérisé en ce qu'il s'agit
de la rVAT.
9. Région promotrice susceptible d'exprimer une séquence codante selon
l'une des revendications 1 à 5 et localisée dans le gêne codant pour la ChAT.
10. Région promotrice susceptible d'exprimer une séquence codante selon
l'une des revendications 1 à 5 caractérisée en ce qu'elle est représentée en tout ou
partie par la SEQ ID N 3.
11. Utilisation d'une région promotrice selon la revendication 9 ou 10 pour contrôler l'expression d'au moins une séquence codant pour une protéine impliquée dans le transport vésiculaire de l'ACh et/ou pour cibler l'expression d'une proteine
dans les neurones cholinergiques.
12. Vecteur comprenant une séquence nucléique selon l'une des
revendications 1 à 5.
13. Vecteur selon la revendication 12 caractérisé en ce qu'il s'agit d'un
vecteur viral.
14. Vecteur selon la revendication 13 caractérisé en ce qu'il s'agit d'un vecteur dérivé des adénovirus, des rétrovirus, des AAV, du virus HSV, CMV ou du
virus de la vaccine.
15. Vecteur selon les revendications 13 ou 14 caractérisé en ce qu'il s'agit
d'un virus défectif pour la réplication.
16. Composition pharmaceutique comprenant un ou plusieurs vecteurs selon
l'une des revendications 12 à 14.
17. Composition pharmaceutique comprenant une ou plusieurs séquences
nucléotidiques selon l'une des revendications 1 à 5 ou un polypeptide selon la
revendication 7ou 8.
18. Utilisation d'une séquence selon l'une des revendications 1 à 5 ou d'un
vecteur contenant ladite séquence pour la préparation d'une composition
pharmaceutique destinée au traitement de pathologies affectant le système nerveux.
Priority Applications (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9410044A FR2723749B1 (fr) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine |
US08/793,044 US6235497B1 (en) | 1994-08-16 | 1995-08-10 | Recombinant expression of the rat vesicular acetylcholine transporter |
CA002197497A CA2197497A1 (fr) | 1994-08-16 | 1995-08-10 | Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine |
JP8507069A JPH10503936A (ja) | 1994-08-16 | 1995-08-10 | 新規の小胞アセチルコリン輸送体 |
PCT/FR1995/001073 WO1996005301A1 (fr) | 1994-08-16 | 1995-08-10 | Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine |
EP95927777A EP0773998A1 (fr) | 1994-08-16 | 1995-08-10 | Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine |
AU31693/95A AU3169395A (en) | 1994-08-16 | 1995-08-10 | Novel vesicular acetylcholine carrier |
IL11493395A IL114933A0 (en) | 1994-08-16 | 1995-08-14 | Vesicular transporter of acetylcholine |
ZA956847A ZA956847B (en) | 1994-08-16 | 1995-08-16 | Vesicular acetylcholine transporter |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9410044A FR2723749B1 (fr) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2723749A1 true FR2723749A1 (fr) | 1996-02-23 |
FR2723749B1 FR2723749B1 (fr) | 1996-09-20 |
Family
ID=9466327
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR9410044A Expired - Fee Related FR2723749B1 (fr) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6235497B1 (fr) |
EP (1) | EP0773998A1 (fr) |
JP (1) | JPH10503936A (fr) |
AU (1) | AU3169395A (fr) |
CA (1) | CA2197497A1 (fr) |
FR (1) | FR2723749B1 (fr) |
IL (1) | IL114933A0 (fr) |
WO (1) | WO1996005301A1 (fr) |
ZA (1) | ZA956847B (fr) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060099600A1 (en) * | 2003-06-20 | 2006-05-11 | The Regents Of The University Of California | Novel acetylcholine transporter |
-
1994
- 1994-08-16 FR FR9410044A patent/FR2723749B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-08-10 WO PCT/FR1995/001073 patent/WO1996005301A1/fr not_active Application Discontinuation
- 1995-08-10 AU AU31693/95A patent/AU3169395A/en not_active Abandoned
- 1995-08-10 US US08/793,044 patent/US6235497B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-10 EP EP95927777A patent/EP0773998A1/fr not_active Withdrawn
- 1995-08-10 CA CA002197497A patent/CA2197497A1/fr not_active Abandoned
- 1995-08-10 JP JP8507069A patent/JPH10503936A/ja active Pending
- 1995-08-14 IL IL11493395A patent/IL114933A0/xx unknown
- 1995-08-16 ZA ZA956847A patent/ZA956847B/xx unknown
Non-Patent Citations (10)
Title |
---|
BEJANIN, S. ET AL.: "A unique gene organization for two cholinergic markers, choline acetyltransferase and a putative vesicular transporter of acetylcholine.", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY 269 (35). 21944-21947, 2 September 1994 (1994-09-02) * |
BEJANIN, S. ET AL.: "PROMOTER ELEMENTS OF THE RAT CHOLINE ACETYLTRANSFERASE GENE ALLOWING NERVE GROWTH FACTOR INDUCIBILITY IN TRANSFECTED PRIMARY CULTURED CELLS.", J NEUROCHEM 58 (4). 1992. 1580-1583 * |
DATABASE EMBL 1 August 1994 (1994-08-01), BEJANIN, S. ET AL.: "A unique gene organisation for two cholinergic markers, choline acetyltransferase and a putative vesicular transporter of acetylcholine" * |
ERICKSON, J. ET AL.: "Functional identification of a vesicular acetylcholine transporter and its expression from a "cholinergic" gene locus.", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY 269 (35). 21929-21932, 2 September 1994 (1994-09-02) * |
IVTH EUROPEAN CELL BIOLOGY CONGRESS, PRAGUE, CZECH REPUBLIC, JUNE 26-JULY 1, 1994. * |
J.BIOL.CHEM. 269 (1994),21944-7 * |
KENGAKU, M. ET AL.: "Multiple mRNA species of choline acetyltransferase from rat spinal cord", MOLECULAR BRAIN RESEARCH, vol. 18, no. 1,2, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, pages 71-76 * |
LEVRERO, M. ET AL.: "Defective and nondefective adenovirus vectors for expressing foreign genes in vitro and in vivo", GENE, vol. 101, AMSTERDAM NL, pages 195 - 202, XP023541119, DOI: doi:10.1016/0378-1119(91)90411-4 * |
ROGHANI, A. ET AL.: "Molecular cloning of a putative vesicular transporter for acetylcholine.", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA 91 (22). 10620-10624, 25 October 1994 (1994-10-25) * |
VAROQUI, H. ET AL.: "Cloning and expression of the vesicular acetylcholine transporter.", CELL BIOLOGY INTERNATIONAL 18 (5). 502 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2723749B1 (fr) | 1996-09-20 |
JPH10503936A (ja) | 1998-04-14 |
AU3169395A (en) | 1996-03-07 |
ZA956847B (en) | 1996-03-28 |
EP0773998A1 (fr) | 1997-05-21 |
US6235497B1 (en) | 2001-05-22 |
CA2197497A1 (fr) | 1996-02-22 |
WO1996005301A1 (fr) | 1996-02-22 |
IL114933A0 (en) | 1995-12-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN113544267A (zh) | 使用CRISPR-Cas进行靶向核RNA裂解和聚腺苷酸化 | |
CA2184841C (fr) | Adenovirus recombinants codant pour le facteur neurotrophique des cellules gliales (gdnf) | |
WO1994009130A1 (fr) | Polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique (5ht2c) et utilisations | |
FR2723749A1 (fr) | Nouveau transporteur vesiculaire de l'acetylcholine | |
EP0651801A1 (fr) | Polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique (5ht5a), acides nucleiques codant pour ces polypeptides et utilisations | |
CA2275454A1 (fr) | Polypeptides de la famille "basic helix-loop-helix" bhlh, sequences d'acides nucleiques correspondantes | |
EP1259606B1 (fr) | Compositions utilisables pour reguler l'activite de la parkine | |
FR2762327A1 (fr) | Sequence d'acide nucleique de genes ciita, susceptibles d'etre impliquees dans le controle et la regulation de l'expression de genes codant pour des molecules mhc de type ii et leur utilisation, notamment comme medicament | |
EP0828832A2 (fr) | $g(D)P62, SES VARIANTS, SEQUENCES D'ACIDES NUCLEIQUES LES CODANT, ET LEURS UTILISATIONS EN THERAPIE GENIQUE ANTI-CANCEREUSE | |
CA2153162A1 (fr) | Nouveaux polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique, acides nucleiques codant pour ces polypeptides et utilisations | |
FR2722209A1 (fr) | Recepteur opioide kappa humain, acides nucleiques et utilisations | |
EP0651802A1 (fr) | Polypeptides ayant une activite de recepteur serotoninergique (5ht6), acides nucleiques codant pour ces polypeptides et utilisations | |
WO2001011064A2 (fr) | Polynucleotides dirigeant l'activation de l'expression d'un gene dans le coeur et ses applications a la therapie genique | |
CA2268045A1 (fr) | Polypeptides comprenant des domaines de la proteine gax, impliques dans la repression de transcription et/ou interagissant avec d'autres proteines, acides nucleiques correspondants et leurs utilisations | |
Shum | Downstream targets of the Ewing's sarcoma EWS/FLI-1 fusion gene | |
FR2772045A1 (fr) | Retroelement zam et son integrase | |
Hawkins | The molecular genetics of inherited connective tissue disorders | |
WO2000063402A1 (fr) | Cassette de regulation de l'expression d'un acide nucleique heterologue dans une cellule eucaryote, en particulier musculaire | |
CA2321220A1 (fr) | Utilisation d'elements de regulation negative pour l'expression neurospecifique de transgenes | |
FR2751985A1 (fr) | Gene implique dans le cadasil, methode de diagnostic et application therapeutique | |
WO1999009059A1 (fr) | Gene de la fievre mediterraneenne familiale |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
CD | Change of name or company name | ||
ST | Notification of lapse |