FR2696075A1 - Utilisation d'un ecdystéroïde pour la préparation de compositions cosmétique ou dermatologiques, ou pour la préparation d'un milieu de culture de cellules de peau, et compositions ainsi obtenues. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une compositions cosmétique ou dermatologique, ainsi qu'un milieu de culture de cellules. Cette composition et ce milieu contiennent un ecdystéroïde, un dérivé d'ecdystéroïde ou un extrait végétal ou animal en contenant. Cette composition est destinée notamment à donner à la peau un aspect plus lisse et plus doux, à renforcer la fonction de barrière hydrique de la peau, ainsi que la cohésion des cellules de l'épiderme. Cette composition peut également être utilisée pour embellir l'aspect de la chevelure. Le milieu de culture peut être utilisé avantageusement dans le cadre d'une culture en masse de kératinocytes.

Description

Utilisation d'un ecdystérolde pour la préparation de compositions

cosmétiques ou dermatologiques destinées notamment à renforcer la fonction de barrière hydrique de la peau, ou pour la préparation d'un milieu de culture de cellules de peau, et compositions ainsi

obtenues.

La sation d'un cosmétiques fonction de d'un milieu compositions

présente invention concerne essentiellement l'utili-

ecdystéro;de pour la préparation de compositions ou dermatologiques destinées notamment à renforcer la barrière hydrique de la peau, ou pour la préparation de culture de cellules de peau ainsi que les

ainsi obtenues.

Les ecdystéroides sont un groupe de 2,3,14-trihydroxy-

6-7-6-kétostéroldes On peut citer l'c-ecdysone ou ( 2 p,3 p,14 c-

22 lRl, 25-pentahydroxy-7-cholestène-6-one); la 2-déoxyecdysone ou ( 3 p,14 p,22 ERl,25-tétrahydroxy-5 p-7-cholestène-6-one), l'ecdystérone

ou p-ecdysone ou 2 p,3 p,14 m,20 p,22,25-hexahydroxy-7-cholestène-6-

one; la p-ecdysone-22-acétate ou 20-hydroxyecdysone-22-acétate ou 7cholestène-2 p,3 p,14,20,22 ERl,25-hexol-6-one-22-acétate; la hydroxyecdystérone ou 5 P,7- cholestène 2 p,3 p,5 c,14,20,22 lRl 25-

heptahydroxy-6-one; la P-2-déoxyecdysone ou 3 P,14,20,22 ERl 25-

pentapentahydroxy-5 p,7-cholestène-6-one Les ecdystéroldes, et en particulier l'ecdystérone (dans certains cas appelée p-ecdysone ou encore crustecdysone), sont bien connus dans la littérature et

cités dans le Merck Index, 10 e édition, 1983, page 505, n 3 470.

On sait que les ecdystéroides, et en particulier l'ecdy-

stérone, jouent un rôle important aussi bien dans le règne animal chez les insectes que dans le règne végétal Chez les insectes, ces

hormones jouent un rôle clé dans la croissance et la reproduction.

L'ecdystérone intervient en particulier dans les différentes méta-

morphoses jusqu'à la formation de l'insecte adulte (voir publica-

tion du CNRS: Biologie 1990, "Enjeux et Problématiques" de A. Berkaloff et al) Chez les plantes, l'activité de ces substances n'est pas totalement élucidée Elles semblent agir sur la floraison (CIENCIA

e Cultura ( 1980), volume 32, n 10, pages 1384-1390).

IL a maintenant été découvert que les ecdystéroldes, en particulier l'ecdystérone et ses dérivés acy Lés, notamment

acétylés, régu Lent La différenciation des kératinocytes.

Cette différenciation se traduit en particulier, au niveau de l'épiderme, par une plus grande cohésion cellulaire, par une régulation de la transformation des kératinocytes en cornéocytes par perte du noyau et augmentation de la cornéification cellulaire, par une augmentation du nombre de couches de cornéocytes formant la couche cornée, l'ensemble de ces phénomènes contribue à donner à la peau un aspect plus lisse et plus doux, à renforcer la fonction protectrice de la peau vis-à-vis du milieu extérieur et à renforcer la barrière hydrique empêchant la perte excessive d'eau par l'épiderme; et, au niveau des follicules pileux, à réguler, voire à augmenter, la synthèse par les kératinocytes de la kératine, constituant principal de la tige

pilaire du cheveu.

L'homme de l'art pourra se reporter à ce sujet à l'article de Eckert et Rorke publié dans la revue Environment

Health Perspective, volume 30, ( 1989), page 109-116.

Ainsi, la présente invention a pour but principal de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de réguler ou favoriser la différenciation des kératinocytes et, de ce fait, destinée en particulier à traiter les

désordres cutanés s'accompagnant de dérèglement de la différencia-

tion des kératinocytes, tels que psosiasis, à restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de l'épiderme, notamment par l'amélioration ou le renforcement de la couche cornée et la fonction de barrière hydrique, conduisant ainsi à un effet hydratant, en particulier en empêchant la perte excessive d'eau par l'épiderme, dont une application avantageuse est le traitement des peaux ichtyosiques ainsi que le traitement des peaux psoriasiques, et améliorer la qualité des cheveux, en embellissant

ainsi l'aspect de la chevelure.

La présente invention a encore pour but principal de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de favoriser, d'accélérer et d'améliorer la différenciation de cellu Les de peau, notamment de kératinocytes,

lors de leur culture dans un mi Lieu de culture.

La présente invention résout pour la première fois ces problèmes techniques de manière satisfaisante et utilisable à L'éche L Le industrie L Le pour la préparation de compositions cosmétiques ou dermato Logiques, ou pour la préparation de milieux de culture notamment en masse de ce L Lu Les de peaux, ainsi que pour

cette culture.

Ainsi, se Lon un premier aspect, La présente invention concerne L'utilisation d'au moins un ecdystéroide ou d'au moins un dérivé d'ecdystérolde ou d'au moins un extrait végéta L ou animal contenant ledit ecdystéroide ou Ledit dérivé d'ecdystérolde, pour La préparation d'une composition cosmétique ou dermato Logique destinée à traiter Les désordres cutanés s'accompagnant de déréglements de la différenciation des kératinocytes, tels que le psoriasis, à restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de la peau, notamment par l'améLioration ou le renforcement de la couche cornée et la fonction de barrière hydrique, ainsi que la cohésion des cellules de l'épiderme, ou encore améliorer la qualité constitutive des cheveux; ou pour la préparation d'un milieu de culture de cellules ou de tissus, notamment pour la culture en masse de cellules de peau, en

particulier de kératinocytes.

Selon un autre mode de réalisation particulier, on utilise une combinaison de plusieurs ecdystéroides ou dérivés d'ecdystéroldes, ou bien une combinaison d'au moins un

ecdystérolde et d'un extrait végétal ou animal en contenant.

Selon un mode de réalisation particulier, l'ecdystérolde précité est l'ecdystérone, ou un dérivé d'ecdystérone, notamment un

dérivé acy Lé, hydroxy Lé ou désoxy Lé de celle-ci.

Selon une variante de réalisation préférée, le dérivé

acy Lé précité est un mono ou un multiacétate d'ecdystérone.

Selon un mode particulièrement avantageux de l'invention, le dérivé de l'ecdystérone est choisi parmi le groupe consistant du

bêta-ecdysone-2-acétate, le bêta-ecdysone-3-acétate, le bêta-

ecdysone-2,3-diacétate, le bêta-ecdysone-2,3,22-triacétate, le bêta-ecdysone-2,3,22,25-tétraacétate; la 5-hydroxyecdystérone et

la 2-déoxyecdystérone.

Selon une autre caractéristique particulière de l'inven-

tion, L'extrait précité végéta L ou animal contenant L'ecdystérolde, de préférence l'ecdystérone, est un extrait d'Achyranthes bidentata, de Paris axialis, de Paris fargesii, de Paris dunniana, de Paris vietnamensis, de Paris polyphylla, de Polypodium vulgare, de Cyanotis arachnoidea, d'Ajuga decumbens, de Pfaffia paniculata, de Pfaffia iresinoides, de Vitex glabrata, d'Achyrantes aspera, de Sesuvium portulacastrum, de Serratula sogdiana, de Rhaponticum integrifolium, de Rhaponticum (ou Leuzea) carthamoides, de Silene tatarica, de Silene otites, de Silene scabrifolia, de Silene nutans, de Silene brahuica, de Silene traemixta, de Silene dioca, de Lychnis flos-cuculi, d'Ajuga iva, de Serratula tinctoria, de

Cyathula officinalis, de Cyathula capitata, ou de Bombyx mori.

Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, les extraits de plantes préférés sont les extraits de Polypodium vulgare, d'Ajuga decumbens, Cyanotis arachnoidea, d'Achyrantes

bidentata et de Rhaponticum (ou Leuzea) carthamoides.

Selon une autre variante de réalisation avantageuse, on utilise une combinaison consistant de l'ecdystérone, et d'au moins

l'un de ses mono ou multiacétates, en particulier le 2 ou le 3-

acétate, ou un extrait végétal contenant une telle combinaison On

a en effet observé que les dérivés acétate d'ecdystérolde en com-

binaison avec l'ecdystérone renforcent les activités précités de

l'invention Cette activité est encore renforcée avec la combinai-

son complémentaire avec l'ajugastérone C éventuellement sous sa

forme 2 ou 3-monoacétate.

Selon une autre caractéristique particulière de l'inven-

tion, l'ecdystéro;de ou son dérivé, ou l'extrait végétal ou animal en contenant, peut être incorporé au moins en partie dans des liposomes. Il est à noter que par l'expression "incorporé au moins en partie dans des liposomes", on entend que l'ecdystéro;de ou son dérivé, ou l'extrait végétal ou animal en contenant, est combiné à

des liposomes quelle que soit la forme de cette combinaison.

Autrement dit, dans le cadre de l'invention, l'ecdystéroide ou ses dérivés ou l'extrait végéta L ou animal en contenant, peut être totalement encapsulé, partiellement encapsulé, ou être à

l'extérieur simplement en présence des liposomes.

La préparation des liposomes contenant au moins en partie au moins un ecdystérolde selon l'invention peut être réalisée selon l'un des procédés connus pour incorporer des

substances actives, notamment des stéroïdes, dans des liposomes.

Selon un mode de réalisation préféré, selon la présente invention, on utilise un procédé d'atomisation des constituants de

la phase lipidique, permettant d'obtenir une poudre lipidique faci-

lement dispersible dans une solution aqueuse pour former des lipo-

somes par exemple selon le procédé décrit dans le document US-A-4 508 703 La suspension de liposomes ainsi obtenue peut être homogénéisée au moyen d'ultrasons, ou dans le cas d'une production

de masse, au moyen d'une homogénéisation sous pression, conformé-

ment au procédé décrit dans US-A-4 621 023.

Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'ecdystérolde ou son dérivé ou un extrait végétal ou animal en contenant est incorporé dans la phase lipidique des liposomes On dissout ainsi l'ecdystérolde ou son dérivé, ou un extrait le contenant, avec les constituants de la phase lipidique, avant atomisation, dans une solution organique contenant au moins un lipide amphiphile, tel que la lécithine de soja, et éventuellement un composé hydrophobe lipophile tel que le cholestérol ou le p-sitostérol De préférence, le solvant est choisi parmi le dichlorométhane, le chloroforme ou le méthanol, ou l'un de leurs mélanges. La solution organique peut avantageusement contenir un

agent anti-oxydant tel que l'x-tocophérol.

La poudre lipidique obtenue est dispersée dans un milieu aqueux convenable, par exemple une solution tampon PBS, une solution de glucose ou une solution de chlorure de sodium On

obtient ainsi une suspension de liposomes.

Selon un mode de réalisation avantageux, surtout dans le cas d'une composition de liposomes, après avoir éventuellement homogénéisé la composition obtenue, Les compositions de liposomes sont gélifiées par méLange avec un gel, tel qu'un gel de polymère vinylique, en particulier commercialisé sous la

dénomination commerciale Carbopol)940 Cette procédure de géLifi-

cation est également décrite dans US-A-4 508 703, en particulier

dans les exemples.

Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la concentration de l'ecdystérolde est comprise entre 0,001 et 30 % en poids, et de préférence entre 0,01 et 10 % en poids, de la phase

lipidique desdits liposomes.

Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'ecdystérolde ou son dérivé ou un extrait végétal ou animal en contenant est au moins partiellement inclus dans de la cyclodextrine Pour ce faire, on pourra procéder de manière bien

connue à L'homme de l'art Par exemple, on solubilise la cyclodex-

trine dans un tampon aqueux, par exemple du type PBS On ajoute ensuite, sous agitation à la température ambiante un ecdystérolde ou son dérivé ouun extrait végétal ou animal en contenant, en quantité équimoléculaire On poursuit l'agitation jusqu'à obtention d'une solution limpide On utilise ensuite cette solution pour la préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention On procède de même dans le cas d'une combinaison comme précédemment décrit Grâce à cette inclusion dans la cyclodextrine, on améliore de manière inattendue considérablement l'activité de l'ecdystérolde ou de son dérivé, ou d'un extrait végétal ou animal en contenant La proportion de cyclodextrine et d'ecdystérolde ou son dérivé ou un extrait végétal ou animal en contenant, dans

la solution de solubilisation peut varier dans de larges limites.

De préférence, cette concentration sera comprise, pour la cyclodex-

trine entre 0,1 % et 5 % en poids, et pour l'ecdystérolde entre

0,01 % et 2 % en poids.

Les ecdystéroldes ou leurs dérivés, de préférence l'ecdystérone ou ses dérivés, sont obtenus sous forme iso Lée, ou sous forme d'un extrait à partir de toutes sources nature L Les disponibles, ou encore par un procédé de synthèse chimique Les principales sources naturelles d'ecdystéroides sont les insectes et surtout un grand nombre de plantes, telles que Les plantes précitées Ega Lement, un certain nombre de procédés de synthèse ont

été mis au point.

Extraction à partir d'insectes

La quantité d'ecdystérolde, en particulier d'a ou P-ecdy-

sone, présente dans les insectes est extrêmement faible Chez le papillon Bombyx mori, elle est par exemple de 5 10-6 % en poids d'insecte (voir A Butenandt et al, Z Naturforsch B, 9, 389,

( 1954)).

L'extraction d'ecdystérolde à partir d'insectes ne peut

donc généralement pas constituer un procédé d'obtention industriel.

Cependant, dans le document Hunger-Ricci CH-A-478 565, on

décrit l'extraction d'ecdystérone à partir de nymphes ou de chry-

sa Lides, destinée à la préparation de compositions cosmétiques.

Extraction à partir de plantes La concentration en ecdystéroldes, en particulier en

ecdystérones, varie d'une variété à l'autre Par exemple, la con-

centration en ecdystérone est de 0,025 % dans les graines d'Achy-

ranthes aspera et de 0,35 % dans la plante Sesuvium portula-

castrum Les pourcentages sont des pourcentages en poids de

matière sèche.

Parmi les plantes pouvant être utilisées pour l'extraction des ecdystéroldes, en particulier de l'ecdystérone,

on peut citer: Serratula sogdiana et Rhaponticum integri-

folium, qui présentent l'avantage de pouvoir être cultivées (voir Horticultural Abs O C 051-01546 en référence à Rastitel'nye

Resursy, ( 1980), volume 16, n 2,pages 193-198 (en Russe)).

On peut citer également les extractions à partir de: Serratula tinctoria (HUT-029 390); Serratula inermis (SU-1 146 050); Achyranthes fauriei, (FR-1 525 385); Cyathula (FR-1 525 385); Polypodium vulgare (US Patent n 3 527 777; Cyanotis arachnoidea (C A 89 176 352, référence à La publication de Nien Schui Lin et al acta chimica

sinica, 1978, volume 36, n 2, pages 137-141.

Ajuga decumbens (JP-46-014 665); Pfaffia iresinoides (Derwent 88-045806 ou

JP-63 002 928);

Pfaffia paniculata (Derwent 84-052423 ou JP-59-010 600); Graine de Kaladana (DE-2 201 991); Ipomea petaloidea (DE-2 834 703);

Silenes (HUT 029 390 et SU 924 051).

Ces sources d'ecdystéroides sont données sans caractère

limitatif et ne sont pas exhaustives.

Certains extraits peuvent contenir, outre l'ecdystérone,

éga Lement des dérivés acéty Lés (C A 89-176352).

On peut également obtenir les ecdystéroides selon l'invention par synthèse chimique (voir par exemple US-A-3 354 152,

US-3 354 154, US-3 378 549, US-3 455 905, FR-1 494 371;

US-3 440 241; FR-1 524 924; US-3 378 549 et FR-A-1 498 237).

Un exemp Le de procédé général d'extraction d'ecdysté-

roide, de préférence d'ecdystérone, à partir de plantes est décrit dans Chem Parm Bull ( 1969) 17 ( 2) 340-2 par S Imai et al. On fait macérer la plante fraîche dans 5 fois son poids de méthanol, on homogénéise et on filtre On recommence une deuxième fois cette opération On concentre les extraits, on ajoute

de l'eau jusqu'à former une solution méthanol-eau à 30 %.

Cette solution est extraite à l'hexane La fraction mé-

thanolique à 30 % est concentrée à nouveau et extraite à l'acétate d'éthyle La fraction aqueuse est extraite au n-butanol L'extrait butanolique est alors concentré par évaporation, puis traité par

chromatographie sur gel de silice par un méLange chloroforme-

méthanol On obtient ainsi l'ecdystérone, après recristallisation dans un méLange éthanol-acétate d'éthyle sous forme d'aiguilles incolores.

IL est possible également d'obtenir des dérivés mono-

acéty Lés d'ecdystéroides par des voies chimiques bien connues de L'homme de L'art Par exemple, l'ecdystérolde est mis en présence d'un mélange 1: 5 en poids d'acide acétique et de pyridine, à température ambiante On laisse réagir généralement pendant une durée de 30 min à 1 h La réaction est alors arrêtée par addition de méthanol On obtient ainsi un méLange de différents monoacétates de l'ecdystérolde, que l'on peut ensuite séparer de manière classique par chromatographie Par ce procédé, il est par exemple possible de préparer des monoacétates d'ecdystérone, respectivement

en position 2, 3, 22 et 25.

Par ailleurs, un certain nombre d'ecdystéroldes sont disponibles dans le commerce Par exemple l'ecdystérone, la - hydroxyecdystérone, la 2-désoxyecdystérone, l'ecdystérone 22- acétate, l'o-ecdysone et la 2-déoxy-o-ecdysone sont disponibles chez SIGMA sous les références SIGMA H 5142, SIGMA P 9531, SIGMA

D 7775, SIGMA H 5267, SIGMA E 9004, SIGMA D 7900.

Les compositions selon l'invention précédemment décrites, contenant un ecdystérolde, de préférence l'ecdystérone, ou ses dérivés, éventuellement sous forme au moins en partie incorporée dans des phases lamellaires lipidiques hydratées ou dans des liposomes peuvent se présenter sous différentes formes utilisables en cosmétique ou en dermatologie Par exemple, ces compositions

peuvent être des gels, des crèmes, des laits ou des lotions.

Ces compositions, appliquées sur les zones à traiter de la peau, ont pour effet de réguler la différenciation des kératinocytes, favorisant ainsi la formation ou la restauration d'un épiderme de bonne qualité, notamment au niveau de la couche cornée, en particulier en ce qui concerne sa composition et son organisation structurale Ceci permet à l'épiderme, d'une part, notamment par une cohésion cellulaire renforcée, de posséder des propriétés de protection optimale vis-à-vis des milieux environnants, et d'autre part de traiter les désordres de l'épiderme s'accompagnant d'un dérèglement de la différenciation

des kératinocytes.

Ainsi, les compositions selon l'invention permettent en particulier de restaurer, de préserver et de renforcer la fonction de barrière cutanée protectrice de l'épiderme, en particulier de barrière hydrique, et d'obtenir ainsi notamment un effet hydratant

en empêchant La perte excessive d'eau par l'épiderme Les compo-

sitions selon l'invention peuvent donc avantageusement être utilisées pour le traitement des peaux sèches, quel que soit le degré de sécheresse, y compris les peaux ichtyosiques, et le

traitement des peaux psoriasiques.

Selon un deuxième aspect, l'invention concerne aussi une compositon cosmétique ou dermatologique destinée à traiter les

désordres cutanés s'accompagnant de dérèglements de la différen-

ciation des kératinocytes, te Ls que le psoriasis, à restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de la peau, notamment le renforcement ou l'améLioration de la couche cornée et la fonction de barrière hydrique, ainsi que la cohésion des

cellules de l'épiderme, ou encore à améliorer la qualité constitu-

tive des cheveux, caractérisée en ce qu'elle contient, à titre d'agent actif, un ecdystérolde ou un dérivé d'ecdystérolde, ou un extrait végétal ou animal contenant ledit ecdystérolde ou ledit

dérivé d'ecdystéroide, tel que défini précédemment.

Selon un autre mode de réalisation particulier, la composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention présente un pouvoir hydratant, notamment en empêchant une perte excessive d'eau par l'épiderme, et peut être destinée au

traitement des peaux sèches, notamment des peaux ichtyosiques.

Selon un autre mode de réalisation particulier, la compo-

sition cosmétique ou dermatologique selon l'invention permet de restaurer la différenciation normale des kératinocytes, et peut

être destinée au traitement des peaux psoriasiques.

Dans ce cadre, habituellement l'ecdystérolde ou le dérivé d'ecdystérolde est incorporé dans un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable Egalement, l'ecdystérolde ou le

dérivé d'ecdystéroique précité, ou un extrait de plante en conte-

nant, peut être incorporé dans des phases lamellaires lipidiques hydratées ou des liposomes, comme cela a été décrit pour le premier

aspect précédent.

Selon un troisième aspect, l'invention concerne encore un milieu de culture de cellules ou de tissus, notamment pour la culture en masse de ce Llules de peau, caractérisé en ce qu'i L comprend une quantité efficace pour favoriser, accélérer ou améliorer La différenciation des cellules de peau, en particulier des kératinocytes, d'au moins un ecdystéroide ou d'au moins un dérivé d'ecdystéroide ou d'au moins un extrait végéta L ou animal

en contenant.

Selon un quatrième aspect, l'invention concerne encore un procédé pour favoriser, accélérer ou améliorer la différenciation des cellules de peau, en particulier des kératinocytes, notamment dans le cadre d'une culture en masse de cellules de peau, pour la production de peau artificielle ou pour la préparation de modèles de peau reconstituée, caractérisé en ce que l'on utilise un milieu de culture tel que défini dans le cadre d'une utilisation

précédente, ou dans la description suivante prise dans son

ensemble.

Ce procédé selon l'invention dit de différenciation cellulaire présente notamment un grand intérêt industriel On citera par exemple: la production de médiateurs biochimiques par traitement

de culture en masse de kératinocytes dans des bioréacteurs.

La préparation de peau artificielle en vue de réaliser

des greffes de peau, le procédé de l'invention étant particulière-

ment avantageux dans le cas d'auto-greffes de grands brûlés, grâce

au gain de temps qu'il procure dans la préparation d'une peau arti-

ficielle En particulier, l'accélération et l'amélioration de la différenciation des kératinocytes se traduit par la formation plus

rapide d'une couche cornée, de bonne qualité.

La réalisation de modèles de peau comprenant de la peau reconstituée, destinée par exemple à évaluer la pénétration cutanée ou la toxicité de substances ou compositions appliquées par voie topique, lorsqu'elles sont destinées en particulier à un traitement

local ou à un traitement systémique (transderm, notamment).

Selon une variante de réalisation particulière, ce procédé de culture comprendra généralement la préparation d'un milieu de culture pour la croissance de kératinocytes humains comprenant un milieu de base nutritif DMEM (Gibco\C, un facteur de croissance épidermique ("EGF"), 10 % de sérum de veau foetal, de

l'isoprotéréno L et/ou de La forskoline, ainsi que de l'hydrocor-

tisone Dans le cadre de l'invention, ce milieu comprend aussi un ecdystéroide ou un dérivé d'ecdystéroide ou un extrait végétal ou

animal en contenant tel que décrit dans la description précédente

ou suivante, par exemple la p-ecdysone, ou l'un de ses dérivés, en particulier acétate, généralement à une concentration de 0,01 à

0,5 % en poids.

Dans ce procédé, on réalise une culture en masse de

cellules de peau en inoculant des kératinocytes afin de les immo-

biliser sur des supports tels que fibres creuses, des microbilles, ou des matrices microporeuses et cela à l'aide du milieu de culture ci- dessus On peut assurer une perfusion du milieu afin d'avoir un apport suffisant à la croissance et la différenciation même

lorsque la biomasse est importante.

Le milieu de culture selon l'invention peut avantageu-

sement être utilisé pour la culture en masse de cellules de peau,

en particulier de kératinocytes, pour la production de peau arti-

ficielle ou pour la préparation de modèles de peau reconstituée.

Dans le cadre de l'utilisation dans un milieu de culture, selon une variante de réalisation particulière, on peut utiliser de 0,01 à 0,5 % en poids d'ecdystéroide, de dérivé d'ecdystérolde ou d'extrait de plantes en contenant, par rapport au poids total du

milieu de culture final.

D'autre part, selon un mode de réalisation particulière-

ment avantageux, on peut introduire dans la composition cosmétique ou dermatologique un principe actif complémentaire, en particulier

un principe actif à effet hydratant tel que l'acide hyaluronique.

Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique pour restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de la peau incluant la fonction de barrière hydrique, pour restaurer, préserver et/ou renforcer la couche cornée, et pour améliorer la qualité constitutive des cheveux, caractérisé en ce qu'on applique sur des zones concernées de la peau ou du cuir chevelu d'une personne concernée, une quantité cosmétiquement efficace d'une composition contenant au moins un ecdystéroide, ou au moins un dérivé d'ecdystéroide, ou au moins un extrait végétal ou animal en contenant, en particulier à une concentration comprise entre 0,0001 et 5 %, de préférence entre 0,01 et 1 %, en poids par rapport au

poids total de la composition.

De préférence, dans les différents aspects précé-

dents de l'invention, la concentration en poids d'ecdystéroide, de dérivés d'ecdystéroide ou d'un extrait de plante en contenant dans la composition cosmétique ou dermatologique finale, est comprise entre 0,0001 et 5 %, de préférence encore entre 0,01 et 1 % en

poids par rapport au poids total de la composition.

D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'inven-

tion apparaîtront à la lumière de la description explicative qui va

suivre faite en référence à plusieurs exemples de réalisation de l'invention donnés simplement à titre d'illustration et qui ne

sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention.

Dans les exemples, les pourcentages sont donnés en poids,

sauf indication contraire.

EXEMPLE 1

Test d'activité sur la différenciation des kératinocytes Pour la présente étude, on utilise un prélèvement de peau effectué lors d'une opération de chirurgie esthétique de type

"lifting" sur le visage d'une femme de 42 ans.

Au jour J = -2, on ensemence six boites de Petri avec cellules de kératinocytes isolées à partir de ce prélèvement

dans un milieu de culture classique pour la culture des kératino- cytes, bien connu de l'homme de l'art.

Au jour J = O et au jour J = 7, le milieu de culture est renouvelé par un milieu identique sur trois des six boites qui constituent des boîtes témoins non traitées, et, sur les trois boites restantes, qui constituent les boîtes traitées, on renouvelle avec un milieu identique, mais dans lequel on a dissous

250 pg/ml d'ecdystérone.

Au jour J = 12, on réalise une numération cellulaire ainsi qu'une inclusion des cel Lules en résine époxy après fixation

et marquage des structures cellulaires à l'acétate d'uranyle.

On réalise une coupe de chacun des blocs de résine ainsi obtenus sous forme de coupes ultrafines, par exemple à l'aide d'un dispositif connu sous le nom de microtome et que l'on observe au

microscope électronique à transmission.

On a répertorié au tableau I suivant cette observation pour chacune des trois zones de la culture témoin, d'une part, et

de la culture traitée par l'ecdystérone, d'autre part.

TABLEAU I

On constate du tableau I ci-dessus qu'avec l'utilisation d'ecdystérone, selon la présente invention, on obtient une culture

constituée de nombreuses couches de kératinocytes très différen-

ciés, ce qui démontre l'effet régulateur d'un ecdystérolde tel que l'ecdystérone sur la différenciation des kératinocytes, de façon

hautement significative.

Témoin Ecdystérone

Zone Signes de dégénérescence Couche cornée plus impor-

supé Pas d'enveloppe cornée autour tante rieure des cellules des couches supé Nombreux cornéocytes avec rieures cellulaires les plus une enveloppe cornée différenciées épaisse Pas de grains de kératohyaline Desmosomes différenciés Granules de kératohyaline Moins d'organelles Zone Quelques tonofilaments Filaments de kératine inter Grands espaces intercellulaires Beaucoup de tonofilaments édiaire Quelques desmosomes Espaces intercellulaires ________ 1 ______réduits Zone Quelques hémidesmosomes Filaments de cytokératine basale Nombreux hémidesmosomes Ega Lement, en raison de L'effet de norma Lisation de La

différenciation des kératinocytes, Les compositions se Lon L'inven-

tion contenant un ecdystérolde, tel que précédemment défini, per-

mettent de maintenir un bon état de L'épiderme de La peau "nor-

ma Le", notamment par Le maintien de sa soup Lesse et de son rôLe

fonctionne L, en particu Lier son rôLe de barrière de protection.

Les compositions de L'invention peuvent ainsi être uti-

Lisées avantageusement pour L'hydratation de La peau, pour La pré-

vention et Le traitement des peaux sèches présentant différents degrés de sécheresse, y compris Les peaux ichtyosiques, ou pour Le

traitement des peaux psoriasiques.

IL est à noter en effet que Le phénomène des peaux sèches ou du psoriasis est accompagné d'un trouble de différenciation des kératinocytes En particu Lier, Les kératinocytes psoriasiques sont pauvrement déve Loppés et immatures, Le nombre et La tai L Le des tonofi Laments sont a Ltérés, certaines ce L Lu Les de La couche cornée contiennent encore des organe L Les, voire un noyau, ce qui montre que La différenciation ne s'est pas faite correctement On observe éga Lement, dans Le cas de ces affections, d'importants espaces

interce L Lu Laires.

Dans Le cas des peaux sèches, en particu Lier de L'ichtyose, La différenciation des kératinocytes est imparfaite, s'accompagnant de ma Lformation des grains de kératohya Line et des desmosomes L'épiderme présente une kératinisation anorma Le, ce qui entraîne une perturbation des propriétés de barrière, notamment de

barrière hydrique, et une perte d'éLasticité.

On donne maintenant divers exemp Les de compositions cos-

métiques ou dermato Logiques industrie L Lement uti Lisab Les.

EXEMPLE 2

Composition dermatologique pour la restauration de la barrière hydrique de l'épiderme Ecdystérone 0,5 g Cremophor RH 4 1 g Carbomer 98 0,2 g -VCroe 98 0,2 g Triéthanolamine 0,18 g PEG 6-32 stéarate 7 g Cétyl alcool 2 g Huiles végétales 25 g Excipient aqueux parfumé q s p 100 g On méLange les composants ci- dessus de manière classique pour obtenir une émulsion traitante appliquée matin et soir en massant légèrement les zones à traiter Cette émulsion s'utilise

comme crème de jour et/ou de nuit.

EXEMPLE 3

* Composition dermatologique pour le traitement de peaux psoriasiques Ecdystérone-2-acétate 0,3 g Gel de Carbopol 98 È)à 2 % 35 g Excipient aqueux parfumé q s p 100 g On introduit l'ecdystérone-2-acétate dans l'excipient aqueux pour le dissoudre, puis on ajoute le gel de Carbopol de

manière à obtenir une composition gélifiée que l'on applique loca-

lement sur les lésions pendant 6 semaines.

EXEMPLE 4

Composition cosmétique pour maintenir un état d'hydratation satisfaisant de l'épiderme Ecdystérone 0, 18 g c-bisabolol 0,1 g Acide hyaluronique 1 g Urée 3 g Excipient cosmétiquement acceptable sous forme d'un lait pour le corps q s p 100 g

Appliquer le lait sur les zones à traiter, en particu-

lier sur les jambes après l'épilation Cette composition permet en particulier de renforcer la fonction de barrière hydrique cutanée de l'épiderme par l'améLioration de La cohésion interce Llulaire épidermique Elle permet ainsi à la peau de conserver un état

d'hydratation satisfaisant.

EXEMPLE 5

Composition cosmétique liposomale pour rééquilibrer la desquamation de la couche cornée de l'épiderme, et redonner un épiderme lisse Ecdystérone 0,1 g Lécithine de soja 2 g p-sitostérol 0,2 g Emulsion crème cosmétique à base de squalane de type huile dans eau, q s p 100 g Dans une première étape, on prépare une suspension aqueuse de liposomes encapsulant l'ecdystérone dans la phase lipidique desdits liposomes Pour cela, on procède de la manière suivante. On dissout 0,1 g d'ecdystérone du commerce, 2 g de lécithine de soja et 0,2 g de P-sitostérol dans 50 ml d'un mélange 4:1 de dichlorométhane et de méthanol Cette solution est évaporée sous pression réduite ( 200 mm de mercure environ) dans un ballon rotatif porté à 45 C Le film lipidique obtenu est repris par 25 ml d'une solution aqueuse de phosphate monopotassique à 0,2 g/L et de phosphate disodique à 1,44 g/l, sous agitation pendant 1 h. On obtient ainsi environ 25 ml d'une suspension de liposomes encapsulant l'ecdystérone que l'on soumet ensuite à une

homogénéisation aux ultrasons ( 15 min, 150 W, 4 C).

Dans une deuxième étape, on incorpore de manière classique la suspension de liposomes obtenue à l'excipient

émulsionné, pour obtenir la crème selon l'invention.

On peut appliquer quotidiennement la crème sur le visage

en cas de peau rugueuse ou desquamant par écailles.

Cette composition renforce La cohésion de La couche cornée, régu Larise Le détachement des ce L Lu Les mortes, en Leur

donnant ainsi L'aspect d'un épiderme plus Lisse.

EXEMPLE 6

Préparation d'un extrait de la plante Rhaponticum carthamoides On réduit en poudre 250 g de racines sèches de la plante Rhaponticum carthamoides, que l'on extrait avec 2,5 I de méthanol

pendant 2 h à l'ébullition au reflux.

Après une filtration soignée pour éLiminer toute parti-

cule solide, on évapore le solvant jusqu'à l'obtention d'un produit sec dénommé "extrait de la plante Rhaponticum carthamoides selon

l'invention", à l'état dit sec.

Cet extrait brut peut être employé dans la préparation des formulations cosmétiques et/ou pharmaceutiques ainsi que pour

la préparation d'un milieu de culture.

EXEMPLE 7

Préparation d'un extrait de la plante Achyranthes bidentata On procède comme décrit à l'exemple 6, si ce n'est que

l'on utilise des racines sèches de la plante Achyranthes bidentata.

Le produit obtenu est dénommé "extrait de la plante

Achyranthes bidentata selon l'invention", à l'état sec.

Cet extrait brut peut être employé dans la préparation des formulations cosmétiques et/ou pharmaceutiques ainsi que pour

la préparation de milieux de culture.

EXEMPLE 8

Composition cosmétique contenant un extrait de plante Rhaponticum

carthamoides, destinée au traitement préventif des peaux sèches.

Extrait de Rhaponticum carthamoides obtenu à l'exemple 6 0,5 g Excipient émulsion crème de type huile dans eau, qsp 100 g On incorpore de manière classique L'extrait de Rhaponticum carthamoides dans L'excipient ému Lsion crème, pour

obtenir La crème se Lon L'invention.

On peut appliquer quotidiennement La crème sur Les

parties du corps que L'on souhaite traiter.

EXEMPLE 9

Composition cosmétique contenant un extrait de p Lante Achyranthes

bidentata, destinée au traitement des peaux ichtyosiques.

G Lycéro L 3 g Acide hya Luronique I g, Extrait d'Achyranthes bidentata obtenu à L'exemp Le 7 0,2 g Excipient ému Lsion crème de type hui Le dans eau, q s p 100 g On incorpore de manière classique L'extrait d'Achyranthes bidentata ainsi que Le g Lycéro L et L'acide hya Luronique, à

L'excipient ému Lsion crème pour obtenir La crème se Lon L'invention.

On app Lique quotidiennement cette crème sur Les zones souhaitées de La peau, jusqu'a obtention d'une peau beaucoup p Lus

Lisse grâce à une action sur Les cornéocytes conduisant à un ren-

forcement de Leur enveloppe cornée et à une mei L Leure cohésion

entre eux.

EXEMPLE 10

Composition cosmétique pour rééquilibrer L'état de La peau, conte-

nant une combinaison d'ecdystérodide Au préa Lab Le, on prépare La combinaison d'ecdystérolde suivante environ 85 % d'ecdystérone;

environ 13 % d'un méLange racémique contenant Le 2 et 3-mono-

acétate d'ecdystérone; environ 2 % d'ajugastérone C. L'ecdystérone est disponible dans le commerce Ses dérivés 2 ou 3-acétate peuvent être préparés par voie chimique, suivant un procédé classique d'acétylation ménagée, en présence d'un mélange acide acétique-pyridine, comme cela a été décrit plus haut L'ajugastérone C peut être obtenue par extraction à partir de plante, en particulier de l'espèce Ajuga, par exemple suivant le procédé décrit dans le document JP 71- 028038 à partir de la plante

Ajuga decumbens.

Ces produits sont solubilisés dans un mélange hydro- alcoolique à 50 % La solution est ensuite évaporée à sec

pour donner la combinaison précitée sous forme de poudre.

Ensuite, cette combinaison est introduite dans un excipient émulsion crème de type huile-dans-eau, cosmétiquement acceptable par exemple en quantité suffisante pour obtenir une concentration de 0, 05 % en ecdystéroide, par rapport au poids total

de la composition cosmétique ainsi préparée.

EXEMPLE 11

Composition cosmétique à effet hydratant et régénérant contenant une combinaison d'ecdystéroide et de cyclodextrine Les ecdystéroides de la combinaison préparée à l'exemple 10 sont dispersés à la concentration de 1 % dans une solution aqueuse contenant 2,5 % de cyclodextrine, sous agitation jusqu'à obtention d'une solution limpide Les ecdystéroldes sont de cette manière inclus dans les molécules de cyclodextrine Cette solution de cyclodextrine incluant les ecdystéroldes est ajoutée à un excipient émulsion crème de type huile- dans-eau en quantité suffisante pour former une émulsion contenant 0,1 % en poids d'ecdystérolde. Cette composition peut être appliquée quotidiennement sur

les zones souhaitées de la peau pour renforcer son état d'hydrata-

tion et obtenir une peau beaucoup plus lisse.

EXEMPLE 12

Préparation d'un milieu de culture et son utilisation pour la culture en masse de cellules de peau Pour la préparation de ce milieu de culture ainsi que pour son utilisation pour la culture en masse de cellules de peau, l'homme de l'art pourra se reporter notamment à l'article de Philip C Familletti et al dans Biotechnology, volume 6, janvier 1988, pages 41 à 44 ainsi qu'aux références citées dans cet article, en particulier Arathoon et al dans la revue Science ( 1986), 232, pages 1390 et suivantes; l'article de Ku, K et al. dans la revue Biotechnology Bioeng ( 1981), 23, pages 79 et suivantes. Ainsi, on prépare un milieu de culture optimal pour la croissance de kératinocytes humains comprenant un milieu de base nutritif DMEM (Gibco), du facteur de croissance EGF, 10 % de sérum de veau foetal, de l'isoprotérénol et/ou de la forskoline, ainsi

que de l'hydrocortisone.

Ce milieu comprendra avantageusement de la 20-hydroxy-

ecdysone ou l'un de ses dérivés à la concentration de 0,001 à

0,1 %.

On réalise une culture en masse de cellules de peau en inoculant des kératinocytes afin de les immobiliser sur des supports tels que fibres creuses, des microbilles, ou des matrices

microporeuses et cela à l'aide du milieu de culture décrit précé-

demment Une perfusion en milieu dans un système à perfusion du type de celui décrit par Sylvie Guichard-Balestrini dans la revue Biofutur, le supplément n 56, avril 1987, pages 2 à 14, sera

assuré afin d'avoir un apport suffisant à la croissance etla diffé-

renciation même lorsque la biomasse est importante.

En fin de culture, on récupère les substances secrétées par les cellules de kératinocytes contenant principalement des lipides, des sources de matières premières pour la formulation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques à application topique

sur l'épiderme ou le cuir chevelu.

Grâce au produit de l'invention, il est possible de traiter des cultures de peau reconstituées, en particulier des cultures de kératinocytes ou de ce L Lu Les épidermiques cultivées sur un support approprié, tel qu'un support co L Lagénique (contenant ou non des fibrob Lastes), par exemp Le décrit dans La document La Recherche, ( 1987), 185, p 149-159 et dans Br J Dermato L 1986, 114,

91-101, ou un support constitué par du derme excisé.

Grâce à L'uti Lisation de La composition se Lon L'inven-

tion, on obtiendra une épidermisation plus rapide et plus comp Lète Ceci permettra dans des déLais plus courts de fournir une sorte de pansement biologique au médecin pour les autogreffes, par exemple dans le cas de brûLures étendues L'invention permettra également de réaliser de façon industrielle et concurrentielle des peaux reconstituées de bonne qualité pour réaliser des tests de

pénétration ou de tolérance.

Naturellement, l'invention comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que

leurs diverses combinaisons.

Claims (19)

REVENDICATIONS

1 Utilisation d'au moins un ecdystérolde ou d'au moins un dérivé d'ecdystérolde ou d'au moins un extrait végétal ou animal contenant ledit ecdystérolde ou ledit dérivé d'ecdystérolde pour la préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique destinée à traiter les désordres cutanés s'accompagnant de dérèglements de la différenciation des kératinocytes, tels que le psoriasis, à restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de la peau, notamment par l'amélioration ou le renforcement de la couche cornée et la fonction de barrière hydrique, ainsi que la cohésion des cellules de l'épiderme ou encore améliorer la qualité constitutive des cheveux; ou pour la préparation d'un milieu de culture notamment pour la culture de cellules ou de tissus, en masse de cellules de peau, en

particulier de kératinocytes.

2 Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'on utilise une combinaison de plusieurs ecdystéroldes ou dérivés d'ecdystéroîdes, ou bien une combinaison d'au moins un

ecdystérolde et d'un extrait végétal ou animal en contenant.

3 Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'ecdystéroide précité est l'ecdystérone, ou un dérivé d'ecdystérone, notamment un dérivé acylé, hydroxylé

ou désoxylé de celle-ci.

4 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3,

caractérisée en ce que le dérivé acylé d'ecdystérolde précité est

un mono ou un multiacétate d'ecdystérone.

Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4,

caractérisée en ce que l'ecdystérolde précité est un dérivé d'ecdystérone choisi parmi le bêta-ecdysone-2-acétate, le bêta-ecdysone-3-acétate, le bêta-ecdysone-2,3-diacétate, le

bêta-ecdysone-2,3,22-triacétate, le bêta-ecdysone-2,3,22,25-tétra-

acétate, la 5-hydroxy-ecdystérone et la 2-désoxyecdystérone.

6 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5,

caractérisée en ce que l'extrait précité contenant l'ecdystéro;de, de préférence l'ecdystérone, ou le dérivé d'ecdystéro;de est un extrait d'Achyranthes bidentata, de Paris axialis, de Paris fargesii, de Paris dunniana, de Paris vietnamensis, de Paris polyphylla, de Polypodium vulgare, de Cyanotis arachnoidea, d'Ajuga decumbens, de Pfaffia paniculata, de Pfaffia iresinoides, de Vitex glabrata, d'Achyrantes aspera, de Sesuvium portulacastrum, de Serratula sogdiana, de Rhaponticum integrifolium, de Rhaponticum (ou Leuzea) carthamoides, de Silene tatarica, de Silene otites, de Silene scabrifolia, de Silene nutans, de Silene brahuica, de Silene traemixta, de Silene dioca, de Lychnis flos-cuculi, d'Ajuga iva, de Serratula tinctoria, de Cyathula officinalis, de Cyathula

capitata, ou de Bombyx mori.

7 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6,

caractérisée en ce que l'extrait précité contenant l'ecdystéroide, de préférence l'ecdystérone, ou le dérivé d'ecdystéro;de est un extrait de Polypodium vulgare, d'Ajuga decumbens, de Cyanotis arachnoidea, d'Achyrantes bidentata et de Rhaponticum (ou Leuzea) carthamoides.

8 Utilisation selon l'une des revendications précédentes,

caractérisée en ce que l'on utilise une combinaison consistant d'ecdystérone, et d'au moins l'un de ses mono ou multiacétates, en particulier le 2 ou le 3-acétate, ou un extrait végétal contenant

ladite combinaison.

9 Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que la combinaison précitée d'ecdystérolde comprend en outre de

l'ajugastérone C ou son 2 ou 3-monoacétate.

Utilisation selon l'une des revendications 1 à 9,

caractérisée en ce que l'ecdystéro;de précité ou le dérivé de

celui-ci ou l'extrait végétal ou animal le contenant est incor-

poré, au moins en partie, dans des liposomes.

11 Utilisation selon une des revendications 1 à 9, carac-

térisée en ce que l'ecdystéroîde précité ou le dérivé de celui-ci ou l'extrait végétal ou animal le contenant est inclus au moins en

partie dans de la cyclodextrine.

12 Utilisation selon l'une des revendications 1 à 11,

caractérisée en ce que la concentration en poids de l'ecdystéro;de, du dérivé d'ecdystéro;de ou de l'extrait végétal ou animal en contenant, est comprise entre 0,0001 et 5 % en poids, de préférence entre 0,01 et 1 %, par rapport au poids total de La

composition finale.

13 Utilisation selon L'une des revendications 1 à 12,

caractérisée en ce qu'e L Le comprend en outre un principe actif complémentaire, en particu Lier un principe actif à effet hydratant,

tel que L'acide hyaluronique.

14 Uti Lisation selon l'une des revendications 1 à 13,

caractérisée en ce que La composition cosmétique ou dermato Logique précitée est destinée au traitement des peaux sèches, des peaux ichtyosiques, ou au traitement des peaux psoriasiques; ou

améliorer la qualité constitutive des cheveux.

Utilisation selon l'une des revendications 1 à 14,

caractérisée en ce que le milieu de culture est utilisé pour favoriser la différenciation de kératinocytes, en particulier dans le cadre d'une culture en masse de cellules de peau, notamment pour

la production de peaux artificielles ou de modèLes de peaux recons-

tituées. 16 Composition cosmétique ou dermatologique destinée à traiter les désordres cutanés s'accompagnant de déréglements de la différenciation des kératinocytes, tels que le psoriasis, à restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de la peau, notamment le renforcement ou l'améLioration de la couche cornée et la fonction de barrière hydrique, ainsi que la cohésion

des cellules de l'épiderme, ou encore améliorer la qualité consti-

tutive des cheveux, caractérisée en ce qu'elle contient,à titre d'ingrédient actif, un ecdystérolde ou un dérivé d'ecdystéroide, ou un extrait végétal ou animal contenant ledit ecdystérolde ou ledit dérivé d'ecdystérolde, éventuellement incorporé dans un excipient

cismétiquement ou dermatologiquement acceptable.

17 Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce qu'il s'agit d'une composition cosmétique ou dermatologique présentant un pouvoir hydratant, notamment en empêchant une perte

excessive d'eau par l'épiderme, et pouvant être destinée au traite-

ment des peaux sèches, notamment des peaux ichtiosiques, ou pour restaurer la différenciation normale des kératinocytes, et pouvant

être destinée au traitement des peaux psoriasiques.

18 Composition selon une des revendications 16 à 17,

caractérisée en ce que La composition est telle que définie à l'une

quelconque des revendications 1 à 15.

19 Milieu de culture de cellules ou de tissus, notamment pour la culture en masse de cellules de peau, caractérisé en ce qu'il comprend une quantité efficace pour favoriser, accélérer ou améliorer la différenciation des cellules de peau, en particulier des kératinocytes, d'au moins un ecdystéroide ou d'au moins un dérivé d'ecdystéroide ou d'au moins un extrait végétal ou animal

en contenant.

Milieu de culture selon la revendication 19, carac-

térisé en ce qu'il comprend de 0,01 à 0,5 % en poids d'ecdystérolde ou d'un dérivé d'ecdystérolde ou d'extrait végétal ou animal en

contenant, par rapport au poids final dudit milieu de culture.

21 Milieu de culture selon la revendication 19 ou 20, caractérisé en ce qu'il est préparé à partir d'une composition

telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 12.

22 Procédé pour favoriser, accélérer ou améliorer la

différenciation des cellules de peau, en particulier des kérati-

nocytes, notamment dans le cadre d'une culture en masse de cellules de peau, pour la production de peau artificielle ou pour la préparation de modèles de peau reconstituée, caractérisé en ce que l'on utilise un milieu de culture tel que défini à l'une des

revendications 19 à 21.

23 Procédé selon la revendication 22, caractérisé en ce qu'on utilise une concentration en poids d'ecdystérolde, de dérivés d'ecdystéroide ou de l'extrait végétal ou animal en contenant, compris entre 0,01 et 0, 5 % en poids, par rapport au poids total du

milieu de culture final.

24 Procédé de traitement cosmétique pour restaurer, préserver et/ou renforcer la fonction protectrice de la peau incluant la fonction de barrière hydrique, pour restaurer, préserver et/ou renforcer la couche cornée, et pour améliorer la qualité constitutive des cheveux, caractérisé en ce qu'on applique sur des zones concernées de La peau ou du cuir chevelu d'une personne concernée, une quantité cosmétiquement efficace d'une composition contenant au moins un ecdystéroide, ou au moins un dérivé d'ecdystéroide, ou au moins un extrait végéta L ou animal en contenant, en particulier à une concentration comprise entre 0,0001 et 5 %, de préférence entre 0,01 et 1 %, en poids par rapport au

poids total de La composition.