FR2686600A1 - Complexes organometalliques de l'inositol et de ses derives, leur preparation et composition pharmaceutique contenant ces complexes ou leurs composants. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne des complexes organométalliques de l'inositol et de ses dérivés. Ces dérivés sont obtenus par réaction de 0,1 à 6 mol d'au moins un dérivé métallique dans lequel le métal est à un degré d'oxydation au moins égal à 3 et appartient à la famille du vanadium, du niobium, du chrome, du molybdène, du sélénium, de l'étain et de l'antimoine avec 1 mol d'un ligand constitué d'inositol, d'un phosphate d'inositol, ou d'un de leurs dérivés. L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques renfermant ces complexes.

Description

Complexes organométalliques de l'inositol et de ses dérivés, leur préparation et composition pharmaceutique contenant ces complexes ou leurs composants.

La présente invention concerne à titre de produits industriels nouveaux des complexes organométalliques de l'inositol et de ses dérivés.

Elle concerne également un procédé de préparation de ces complexes. Elle concerne aussi leur utilisation pour la fabrication de compositions thérapeutiques renfermant ces complexes, en particulier des compositions thérapeutiques destinées au traitement des maladies métaboliques et des maladies en relation avec le système immunitaire, tout particulièrement du diabète et des pathologies associées.

De nombreux travaux ont été effectués concernant l'activité du vanadium dans le traitement de l'hyperglycémie. Il s'agit pour l'essentiel de documents de littérature scientifique où il n'est question que de dérivés minéraux du vanadium.

Le brevet européen EP-0 264 278 décrit des compositions à activité insulino-mimétique contenant des vanadates et des peroxovanadates minéraux.

Le brevet européen EP-0 305 264 décrit des composés organo minéraux de vanadyle obtenus à partir d'esters en C6-C10 de la cystéine . Pour les composés décrits dans ce document la dose hypoglycémiante est de 4,3 mg de vanadium/kg et la durée d'action est de 6 heures environ.

Le brevet japonais JP 2 292 217 decrit une activité anti-diabétique pour 7 complexes vanadyle-dioxo (tartrate, gluconate, malonate, oxalate, lactate, salycilate et acétyl-acétonate), ainsi que pour 2 complexes vanadyle-monoamino-monothio : le complexe de l'ester méthylique de la cystéine avec le vanadyle et celui de la 2-amino-éthane-thiol.

Par ailleurs, la Demanderesse a décrit dans ses demandes internationales W091/07406 et W091/13892 ainsi que dans sa demande française non encore publiée et déposée sous le numéro 91 06174 des complexes organano-métalliques de métaux de transition à structures porphyriniques utiles notamment dans le traitement de l'hyperglycémie.

La synthèse de dérivés ou de complexes du vanadium et du niobium est bien connue : par exemple elle peut se faire suivant les méthodes répertoriées par Léopold Gmelins, et décrites dans la collection Handbuch der anorganischen Chemie, Vanadium (System
Nummer 48), Verbindungen, Verlag Chemie-GMBH, Weinheim/Bergstrasse, en particulier Teil B Leiferung 2, 1967, aux pages 688-819 pour ce qui est des complexes organiques (pages 719-789 pour les complexes de V4, pages 790-819 pour les complexes de V5) et dans Handbuch der anorganischen Chemie, 8 Auflage, Niobium (System Nummer 49), Teil
B4, Verbindungen, VerlagChemie-GMBH, Weinheim/Bergstrasse, 1973, en particulier aux pages 334-472 pour ce qui est des complexes organiques du niobium.

Une mise au point bibliographique avec 198 références sur "The Bioinorganic Chemistry of Vanadium" a été effectuée récemment par Dieter Rehder, (Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1991, 30, 148-167).

Il est connu, et cela ressort tout particulièrement bien de la publication ci-dessus, que les dérivés du vanadium en solution aqueuse existent sous la forme de plusieurs espèces en équilibre. Ainsi, le vanadate, où le vanadium est au degré d'oxydation 5, en fonction du pH et de la concentration, peut se trouver sous plusieurs formes monomériques (polycoordonnée avec du solvant ou des ligands), ou polymériques, avec une ou plusieurs charges.

Ainsi, avec des dérivés hydroxylés de la forme HO-R, le vanadate forme spontanément des mono-, des di- et des tri-esters (CR0) Vo(OH) ) qui cohabitent en équilibre. La géométrie de
x 3-x coordination est également très diverse, le degré de coordination allant généralement de 4 à 7 (parfois 8) et un même ligand pouvant coordiner le métal en position axiale ou équatoriale et donnant lieu à des pyramides tétragonales, des bipyramides trigonales, pentagonales ou octahédrales, etc.

Il en est de même pour le vanadyle, dans lequel le vanadium se trouve au dégré d'oxydation 4, comme l'ont montré en particulier J. Costa Pessoa et al., Polyhedron, 1988, 7, 1245-1262 et
Polyhedron, 1989, 8, 1173-1199, en fonction du pH et de la concentration si on note LH un amino-acide comme la sérine (alanine, thréonine, etc.) et M le métal (VO dans ce cas), il peut coexister une ou plusieurs des espèces suivantes : MLH, ML, MLH 2
MLH ML2H2, ML2H, ML2, ML2H1, ML2H~2, M2L2H, M2L2H3, etc., ainsi que quelques produits d'hydrolyse ou d'hydratation.

L'inositol et ses dérivés ont beaucoup de fonctions biologiques aussi bien dans le règne végétal qu'animal. Ainsi, l'acide phytique (l'hexaphosphate d'inositol) est le principal transporteur de phosphate pour les végétaux. L'inositol intervient à de nombreux stades dans le métabolisme animal, en particulier dans le métabolisme du glucose. Le phosphatidylinositol est un important constituant membranaire. L'inositol tri-phosphate, un second messager des signaux de transduction cellulaire, a été breveté pour de nombreuses pathologies CEP-O 359 256 et EP-O 359 260) dont les complications du diabète (EP-O 359 257). Un brevet Américain US 2 465 733, de 1949 décrivait déjà l'utilisation de sels métalliques (calcium, fer, cuivre, magnésium) de l'acide phytique comme agent nutritionnel, couplé à la lécithine.

Toutefois, aucun complexe du vanadium, du niobium, de l'étain, de l'antimoine, du molybdène, du chrome ou du sélénium avec l'inositol n'a encore été décrit.

La demanderesse a préparé ces complexes et découvert que les complexes du vanadium, du niobium, de l'étain, de l'antimoine, du molybdène, du chrome, du sélénium avec des dérivés de l'inositol ou de phosphates d'inositol bénéficient d'une grande biodisponibilité et, par conséquent, sont actifs à plus faibles doses.

La présente invention concerne donc à titre de produits industriels nouveaux des complexes organométalliques de l'inositol et de ses dérivés, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par réaction de 0,1 à 6 mol d'au moins un dérivé métallique, dans lequel le métal est à un degré d'oxydation au moins égal à 3 et appartient à la famille du vanadium, du niobium, du chrome, du molybdène, du sélénium, de l'étain et de l'antimoine avec 1 mol d'un ligand cons titué d'inositol ou d'un de ses dérivés, ledit dérivé d'inositol répondant à la formule

où R1, R2, R3, R4, R5, R6 sont identiques ou différents et représentent - de l'hydrogène, - une chaîne hydrocarbonée aliphatique linéaire ou ramifiée conte
nant de 1 à 30 atomes de carbone, de préférence 16 à 20 et conte
nant de 0 à 6 insaturations, ladite chaîne étant liée à un oxy
gène du cycle inositol par un groupement -CH2 ou un groupement
carbonyle -CO, - une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée contenant jusqu'à
30 atomes de carbone et incluant au moins un cycle aromatique, ou
hétéroaromatique, ladite chaîne étant liée à un oxygène du cycle
inositol par un groupement -CH2 ou un groupement carbonyle -CO, - une chaîne contenant jusqu'à 50 atomes de carbone, linéaire
ou ramifiée ou renfermant au moins un cycle à 3 à 8 chaînons
saturé, insaturé ou aromatique, ladite chaîne contenant de O à
10 insaturations et de O à 10 hétéroéléments, en particulier de
l'oxygène, du soufre ou de l'azote et ladite chaîne comportant 0
à 10 ramifications en C1-C6 contenant des fonctions conférant un
caractère hydrosoluble, par exemple des fonctions acide, sulfate,
phosphate, alcool, amine, amide, éther, - un groupement

dans lequel Y1 et Y2 sont identiques ou différents :
de l'hydrogène,
. un métal alcalin,
. un groupement NH4,
Y1 et Y2 forment ensemble un groupement phénylène,
une chaîne hydrocarbonée aliphatique linéaire ou ramifiée con
tenant de 1 à 30 atomes de carbone, de préférence 16 à 20 et
contenant O à 6 insaturations,
- une chaîne hydrocarbonée contenant jusqu'à 30 atomes de carbone
et incluant au moins un cycle aromatique ou hétéroaromatique,
. une chaîne contenant jusqu'à 50 atomes de carbone, linéaire
ou ramifiée ou renfermant au moins un cycle à 3 à 8 chaînons
sature, insaturé ou aromatique, ladite chaîne contenant de O à
10 insaturations et de O à 10 hétéroéléments, en particulier de
l'oxygène, du soufre ou de l'azote et ladite chaîne comportant
0 à 10 ramifications en C1-C6 contenant des fonctions conférant
un caractère hydrosoluble, par exemple des fonctions acide,
sulfate, phosphate, alcool, amine, amide, éther,
Par "complexes" dans la présente demande, on entendra les produits de complexation du dérivé de l'inositol et du dérivé métallique ; ce sont en général des mélanges puisqu'il est connu que, d'une façon générale,les dérivés métalliques, en particulier ceux du vanadium comme cela a été exposé précédemment, conduisent à des mélanges de complexes correspondant à la fixation par des liaisons à 1 et/ou 2 électrons d'un nombre variable d'hétéroétomes suivant le ligand envisagé et dont la disposition spatiale autour du métal et le degré de coordination du métal peuvent varier.

Selon une première variante de l'invention, le dérivé d'inositol est l'inositol lui-même.

Selon une autre variante de l'invention, le dérivé d'inositol est un phosphate d'inositol. On citera, par exemple, les monophosphates, les triphosphates et l'hexaphosphate d'inositol.

Selon une autre variante de l'invention, le dérivé d'inositol consiste en un produit dans lequel au moins un des groupements OH est transformé en ester ou en éther par l'intermédiaire d'un groupement comportant une chaine hydrocarbonée linéaire ou ramifiée contenant 1 à 30 atomes de carbone et contenant avantageusement de O à 6 insaturations.

Parmi les esters, on citera les esters de l'acide linoléique, y-linolénique.

A titre d'exemples de dérivés sous forme d'éthers, on citera les glucosylinositols, les hexaéthylèneglycols d'inositol.

Selon une autre variante de l'invention,cette chaîne peut être également une channe hydrocarbonée contenant jusqu'à 30 atomes de carbone et renfermant au moins un cycle aromatique ou hétéroaromatique, par exemple un cycle benzénique ou un cycle pyridinique.

Selon d'autres variantes, l'une au moins des chaînes R1,
R2, R3, R4, R5 ou R6 contenant jusqu'à 30 atomes de carbone peut renfermer de O à 10 hétéroatomes en particulier de l'oxygène, du soufre ou de l'azote et/ou porter des ramifications contenant des fonctions conférant à la partie de ces chaînes portant lesdites ramifications un certain caractère hydrosoluble : il peut s'agir en particulier de fonctions acide, sulfate, phosphate, alcool, amine, amide, éther.

Selon d'autres variantes de l'invention, le dérivé d'inositol est un dérivé d'un phosphate d'inositol, c'est-à-dire qu'au moins un des groupements OR1, OR2, OR3, OR4, OR5 ou OR6 est de la forme

Selon une variante, Y1 et/ou Y2 sont de l'hydrogène, un métal alcalin ou un groupement NH4
Selon d'autres variantes, Y1 et/ou Y2 sont constitués d'une channe hydrocarbonée linéaire ou ramifiée contenant 1 à 30 atomes de carbone et contenant avantageusement de O à 6 insaturations.

A titre d'exemples de telles chaînes, on citera des groupements alkyle, alcényle, propyle, isopropyle, phytyle, linoléyle, linolényle.

Selon une autre variante de l'invention, cette chaîne peut être également une channe hydrocarbonée contenant jusqu'à 30 atomes de carbone et renfermant au moins un cycle aromatique, par exemple un cycle benzénique ou pyridinique.

Selon d'autres variantes de l'invention, Y1 et/ou Y2 sont un enchaînement renfermant au moins un hétéroatome, en particulier de l'oxygène, du soufre ou un groupement amine ou portant des ramifications contenant des fonctions conférant à la partie de ces chaînes portant lesdites ramifications un certain caractère hydrosoluble : il peut s'agir en particulier de fonctions acide, sulfate, phosphate, alcool ou amine.

A titre d'exemples, Y1 et/ou Y2 peuvent être des groupements éthanolamine, choline, sérine.

Selon une variante de la présente invention, le rapport en nombre de moles du dérivé métallique au dérivé d'inositol est compris entre 0,1 et 6, avantageusement entre 1 et 3.

Le métal se trouve à un degré d'oxydation au moins égal à 3.

Avantageusement, lorsque le métal est du vanadium, il est au degré d'oxydation 4 ou 5, préférentiellement au degré d'oxydation 4.

Lorsque le métal est le niobium, il est au degré d'oxydation 4 ou 5, préférentiellement au degré d'oxydation 5.

Lorsque le métal est le chrome, il est préférentiellement au degré d'oxydation 3.

Lorsque le métal est le molybdène, il est généralement au degré d'oxydation 3 à 6, de préférence 3.

Lorsque le métal est le sélénium, il est généralement au degré d'oxydation 4 ou 6, de préférence 4.

Lorsque le métal est l'antimoine, il est généralement au degrés d'oxydation 3, 4 ou 5, de préférence 5.

Lorsque le métal est l'étain, il est généralement au degré d'oxydation 4.

Selon un deuxième objet, la présente invention concerne la préparation des complexes précédemment définis.

Les dérivés d'inositol précédemment définis, lorsqu'ils ne sont pas commerciaux, sont aisément synthétisés à partir de l'inositol ou du phosphate d'inositol par des méthodes connues de l'homme du métier.

Lorsque le dérivé d'inositol portant les fonctions ramifications ou hétéroatomes désirés n'est pas disponible dans le commerce, l'homme du métier peut le préparer en suivant les méthodes classiques de synthèse, protection et déprotection des groupements fonctionnels. De telles méthodes sont en particulier décrites dans Peptide Chemistry, 1988, M. BODANSZKY, Berlin Spinger ainsi que dans Protective Goups in Organic Synthesis, T.W. Greene,
Wiley Interscience 1980 et dans Protective Goups in Organic
Chemistry, J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973).

Ainsi :
a) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une chaîne hydrocarbonée ramifiée, on peut par exemple :
- sur une fonction acide du substrat, effectuer le couplage d'un alcool ramifié (comme le phytol, le géraniol, le farnésol, etc.), ou d'une amine primaire ou secondaire au moyen d'un agent de couplage comme la DCC, ou, dans le cas des alcools gras, par estérification en milieu déshydratant (enlèvement azéotropique de l'eau),
- sur une fonction amine ou alcool du substrat, effectuer le couplage d'un acide ramifié au moyen d'un agent de couplage comme la DCC, ou par réaction avec un anhydride d'acide,
- sur une fonction amine (ou une fonction alcool transformée en alcoolate) du substrat, effectuer le couplage au moyen d'un dérivé halogéné ramifié (comme le bromure de farnésyl ou de géranyl, etc.),
b) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une chaîne ayant des fonctions éther ou thioéther, on peut, par exemple, estérifier une fonction acide du substrat, par exemple par I'hexa éthylèneglycol, ou alkyler une fonction amine du substrat par une chaîne halogénée polythioéther,
c) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une chaîne ayant des fonctions alcools, on peut, par exemple, hydrater en alcool ou oxyder en diol la ou les insaturations d'une chaîne hydrocarbonée insaturée du substrat, par exemple la double liaison + d'un dérivé oléylamine par H30 ou par K Mn 04.

On peut également coupler suivant a) une chaîne contenant, outre une fonction alcool, amine ou acide libre, une ou plusieurs fonctions OH protégées, par exemple par des groupements méthoxyéthoxyéthyle, puis libérer les fonctions alcool par des
++ ions Zn .

d) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une chaîne ayant des fonctions sulfates ou phosphates, on peut, par exemple, transformer un dérivé alcool obtenu suivant c) au moyen d'un Cl
PO(OR)2 ou d'un Cl-S02(0R), R étant, par exemple, un Me, Et,
Benzyl,
e) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une chaîne ayant des fonctions sulfonates ou phosphonates, on peut, par exemple, transformer une fonction alcool ou amine du substrat au moyen de Cl-CH2-CH2PO(ONa)2 ou de CI-CH2-CH2SO2 (0Na),
f) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une channe ayant des fonctions acides, on peut, par exemple, coupler suivant a) une chaîne contenant, outre une fonction alcool, amine ou acide libre, une ou plusieurs fonctions COOH protégées sous forme d'ester tertio-butylique, puis libérer les fonctions COOH en milieu acide,
g) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une chaîne ayant des fonctions amines, on peut, par exemple, coupler suivant a) une chaîne contenant, outre une fonction alcool, amine ou acide libre, une ou plusieurs fonctions amine primaire ou amine secondaire protégées, par exemple, par des groupements t-butyloxycarbonyl (BOC), puis libérer les fonctions amine en milieu acide.

Dans le cas d'amines tertiaires celles-ci n'ont pas besoin d'être protégées, par exemple, on peut coupler de I'EDTA (par l'une quelconque de ses fonctions acide) sur une fonction amine du substrat, ou encore faire un ester de la tétrakis-(2-hydroxypropyl)-éthylène- diamine sur une fonction acide du substrat,
h) lorsque l'on désire obtenir un dérivé avec une channe ayant des fonctions thiols, on peut, par exemple, coupler suivant a) une channe contenant, outre une fonction alcool, amine ou acide libre), une ou plusieurs fonctions thiols protégées par des groupements Me3SiCH2CH2-, puis libérer ces fonctions SH par des ions F
Les complexes, objet de la présente invention, sont préparés aisément par simple mise en contact des dérivés d'inositol précédemment définis avec les dérivés métalliques, soit en solution, soit à l'état solide ou dispersé dans un solvant organique.

La réaction de complexation sera avantageusement réalise dans un solvant commun des deux réactifs, avantageusement dans l'eau ou un mélange hydroalcoolique lorsque les deux réactifs sont solubles dans un tel milieu.

On pourra donc avantageusement, si le dérivé métallique et le dérivé d'inositol sont solubles dans un tel milieu, faire la réaction dans l'eau ou un mélange hydroalcoolique, par exemple un mélange contenant de 100 à 70 % d'eau pour 0 à 30 % d'alcool.

L'alcool entrant dans la constitution du milieu alcoolique sera un alcool en C1 à C4, linéaire ou ramifié, avantageusement de l'alcool éthylique.

On pourra aussi faire réagir le dérivé métallique avec une suspension d'inositol dans un agent organique.

A titre d'exemple d'agents organiques utilisables pour mettre l'inositol ou ses dérivés en suspension, on choisira le THF, les éthers, les alcanes en C5-C8, le DMF, avantageusement le THF ou le DMF.

Le dérivé métallique sera avantageusement un oxyde, un halogénure, un oxyhalogénure, un sulfate, ou un métallate, par exemple un métallate de métal alcalin ou d'ammonium du métal considéré, un acétylacétonate, un acétate ou un hydrate ou un complexe avec un solvant de ces dérivés métalliques.

A titre d'exemples de dérivés métalliques utilisés pour la préparation des complexes selon l'invention, on citera en désignant - par X un halogène, - par acac un groupement acétylacétonate, et - par OAc le groupement acétate
Sn(S04)2, SnX4, SnO2, Sn(OAc)4, Sn(acac)2Br2,
VOSO4, VCl4, VOICI2, VO(OAc)2, VO(acac)2, VOCAL V205,
Na3V04, K3VO4, NaV03, H4NV03,
NbCl4, NbCl5, Nb2O5,
CrCl3, Cr(OAc)3, Cr203, Cr2(S04)3, KCr(SO4)2, Cr(acac)3
SbX3, Sb203, Su204, Sb205
SeX4, SeOCl2,
Moco5, Mo2O5, Mol3, MoO2(acac)2, - ainsi que leurs hydrates, par exemple VOS04,5H20 ou leurs com
plexes avec un solvant, par exemple avec l'eau, le THF, par
exemple NbCl4,THF, l'éther l'éthylène glycol, etc.

Les proportions entre le dérivé métallique et le dérivé d'inositol sont celles exposées précédemment, c'est-à-dire 0,1 à 6 moles de dérivé métallique par mole de dérivé d'inositol, avantageusement de 1 à 3 moles de dérivé métallique par mole de dérivé d'inositol.

Selon un autre objet, l'invention concerne des compositions pharmaceutiques renfermant les exemples précédemment décrits comme principe actif.

Comme on l'a vu précédemment, et comme cela ressort des exemples qui suivent, ces complexes se forment très aisément.

Ainsi, selon une variante de l'invention, elle concerne également les compositions pharmaceutiques contenant le mélange de dérivé métallique et le dérivé d'inositol dans les proportions où ils forment les complexes selon l'invention, lesdits complexes se forment alors in vivo au cours de l'administration de la composition pharmaceutique.

Selon un autre objet, la présente invention concerne l'utilisation des complexes définis précédemment pour la fabrication de médicaments utiles en particulier dans le traitement ou la prévention des maladies métaboliques et de maladies en relation avec le système immunitaire, par exemple de maladies auto-immunes, syndromes immuno-déficients, cancers, etc.

Parmi ces maladies, on citera plus particulièrement - le diabète, l'hypercholestérolémie, l'hypertriglycéridémie,
l'hyperlipidémie ainsi que les complications associées à ces
pathologies.

A titre d'exemples de pathologies associées, on citera l'hypertension artérielle, l'arthériosclérose, l'insuffisance car diaque, l'ischémie périphérique ou des pathologies oculaires évoluant vers la cécité - les syndromes immunodeficients (SIDA) - les différents cancers.

Les dérivés préférés pour le traitement du diabète et des différentes pathologies associées seront les dérivés organométalliques de la présente invention, dans lesquels le métal est V,
Nb, Cr ou Mo, plus particulièrement V ou Nb.

Les dérivés préférés pour préparer des compositions utilisables en cancérologie seront les complexes de la présente invention, dans lesquels le métal est V, Nb, Se, Sb, Sn.

Les compositions pharmaceutiques renfermant les complexes de l'invention pourront se trouver sous différentes formes.

Les complexes de l'invention seront incorporés dans un excipient, véhicule ou support pharmaceutiquement acceptable.

Comme excipients, véhicules ou supports pharmaceutiquement acceptables, on peut utiliser tout excipient, véhicule ou support bien connu de l'homme de l'art. On peut citer par exemple, et de façon non limitative : le lactose, l'amidon de mais, le glucose, la gomme arabique, l'acide stéarique ou le stéarate de magnésium, la dextrine, le mannitol, le talc, des huiles d'origine naturelle, riches en acides gras insaturés essentiels, etc. En particulier, si cela s'avère éventuellement nécessaire, on peut utiliser d'autres additifs bien connus de l'homme de l'art tels que des stabilisants, des desséchants, des liants, des tampons de pH, etc.

Un avantage des complexes selon l'invention est qu'ils pourront être utilisés directement sans purification préalable autre que l'élimination du solvant.

Les compositions de l'invention peuvent être administrées de différentes manières, en particulier par voie orale, permuqueuse (linguale, nasale, oculaire).

Elles peuvent être également sous forme injectable et destinées à une injection sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse.

Elles peuvent également être utilisées sous forme de patchs.

Les complexes organométalliques selon l'invention représentent avantageusement de 5 à 80 % par rapport au poids total de la préparation pharmaceutique, ce qui correspond à une teneur totale de métal de 10 à 20 000 nanomoles pour une dose.

Les exemples qui suivent sont donnés à titre illustratif et nullement limitatif de l'invention. Ils illustrent la synthèse des complexes de l'invention, la préparation de compositions pharmaceutiques les comprenant et l'effet biologique de ces dérivés.

EXEMPLES
Exemple 1
Préparation de complexes 1/1 d'inositol et de vanadium 4 :
Dans 20 ml d'eau distillée, on dissout 10 mmol de
VOS04,5H20 (2,53 g), puis on ajoute à cette solution 10 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H) (1,8 g). Après évaporation de l'eau sous vide à 450C, il est obtenu un solide bleu foncé hygroscopique.

Exemple 2
Préparation de complexes 1/1 d'inositol et de vanadium 5 :
Dans un mélange de 20 ml de cyclohexane et 20 ml de THF anhydres sous azote, on suspend 1,8 g = 10 mmol d'inositol (R1 =
R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H) et on refroidit le tout à -10 C par un bain glace-alcool. On ajoute alors goutte à goutte, sous agitation rapide, 6,25 ml d'une solution de n-butyl lithium 1,6N, puis on laisse remonter la température à 250C et on poursuit l'agitation de la suspension durant 1 h. On refroidit à nouveau la solution à -10 C, et on introduit lentement, sous azote 10 mmol d'oxytrichlorure de vanadium (1,73 g) dissous dans 100 ml d'hexane, on poursuit l'agitation entre -5 et -100C durant 2 h, puis à température ambiante toute la nuit.Après évaporation des solvants sous vide à 350C, et séchage des produits obtenus à la pompe à palettes, il est obtenu un solide.

Exemple 3
Préparation de complexes 1/3 d'inositol et de vanadium 5
Dans un mélange de 50 ml de cyclohexane et 50 ml de THF anhydre, on dissout 30 mmoles de triéthylamine (4,18 ml) sous azote, et on suspend 1,8 g = 10 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H), puis on refroidit le tout à o -10 C par un bain glace/alcool. On ajoute alors goutte à goutte, sous agitation rapide, 19 ml d'une solution de n-butyl lithium 1,6N, puis on laisse remonter la température à 250C et on poursuit l'agitation de la suspension durant 3 h.On refroidit à nouveau la solution à -100C, et on introduit lentement, sous azote, 30 mmol d'oxytrichlorure de vanadium (2,8 ml) dissous dans 100 ml d'hexane, on poursuit l'agitation entre O et -120C durant 4 h, puis à température ambiante toute la nuit. On évapore les solvants sous vide à 40 C, et on sèche les produits obtenus à la pompe a palettes.

Exemple 4
Préparation de complexes 2/1 de vanadium 5 avec un mélange commercial dwinositol-1w4*5-triphosphate et d'inositol-2,4,5- tri phosphate :
On utilise dans ce mélange un mélange commercial d'inositol tri phosphate contenant les deux formes indiquées ci-dessus.

Dans 50 ml d'eau distillée où l'on a suspendu 4 mmol d'orthovanadate de sodium (0,735 g), on additionne 2 mmol d'inositol triphosphate (R1 ou R2 2 P03H2 ; R2 ou R1 = H, R4 = R5 = P03H2 ; R6 = R3 = H).

Exemple 5
Préparation de complexes 1/1 de vanadium 4 avec un mélange commercial d'inositol-1,4,5-triphosphate et d'inositol-2,4,5tri phosphate)
On utilise dans ce mélange un mélange commercial d'inositol triphosphate contenant les deux formes indiquées ci-dessus.

Dans 50 ml d'eau distillée où l'on a suspendu 2 mmol de sulfate de vanadyle (0,506 g), on additionne 2 mmol d'inositol triphosphate (R1 ou R2 = P03K2 ; R2 ou R1 = H, 4 = R5 PO3K2 ; R6 = R3 = H).

Exemple 6
Préparation de complexes 1/1 d'inositol hexaphosphate et de vanadium 4 :
Dans 100 ml d'eau distillée où l'on a mis en suspension 10 mmol du sel de sodium de l'acide phytique (R1 = R2 = R3 = R4 =
R5 = R6 = PO Na ) on additionne 10 mmol de sulfate de vanadyle (2,53 g) dissous dans 20 ml d'eau. il précipite immédiatement un dérivé bleu qui est isolé par filtration sur fritté.

Exemple 7
Préparation de complexes 1/1 d'inositol hexaphosphate et de vanadium 5 :
Dans 100 ml d'eau distillée où l'on a dissous 2,5 mmol d'acide phytique (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = P03H2) on addi- tionne 2,5 mmol de vanadate de sodium dissous dans 50 ml d'eau.

On évapore l'eau à 65 C sous le vide de la trompe à eau ; on obtient un dérivé blanc.

Exemple 8
Préparation de complexes 1/3 d'inositol hexaphosphate et de vanadium 4 :
Dans 100 ml d'eau distillée où l'on a dissous 0,5 mmol du sel de sodium de l'acide phytique (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = P03Na2) on additionne 1,5 mmol de sulfate de vanadyle (0,38 g) dissous dans 5 ml d'eau. il précipite immédiatement un dérivé bleu ciel qui est isolé par filtration sur fritté.

Exemple 9
Préparation de complexes de phosphatidylinositol et de vanadium 4 :
Dans 95 ml d'eau distillée où l'on a suspendu 10 g de phosphatidylinositol commercialement disponible et extrait de grains de soja, on additionne 1,5 mmol de sulfate de vanadyle (0,38 g) dissous dans 5 ml d'eau.

Exemple 10
Préparation de complexes de phosphatidylinositol et de vanadium 5 :
Dans 85 ml d'eau distillée où l'on a suspendu 10 g de phosphatidylinositol commercialement disponible et extrait de grains de soja, on additionne 1,5 mmol de vanadate de sodium dissous dans 15 ml d'eau.

Exemple 11
Préparation de complexes 1/1 de monophosphate d'inositol et de vanadyle :
Dans 35 ml d'eau distillée où l'on a dissous 5 mmol d'inositol monophosphate (R1 1 PO3Na2, R2 2 R3 = R4 = R5 = R6 = H), on additionne 5 mmol de sulfate de vanadyle (1,265 g) dissous dans 15 ml d'eau. On évapore l'eau à 500C sous le vide de la trompe à eau ; on obtient un dérivé gris-bleu.

Exemple 12
Préparation de complexes du vanadium avec les inositol mono(phospho di-benzyle) :
On dissout 2 mmol d'inositol penta-acétate (R1 = R2 =
R3 = R4 = R5 = Acétyl ; R6 = H) et 0, 25 ml de Et3N dans 50 ml de
THF anhydre, sous azote sec et on refroidit à -780C. On ajoute ensuite 1 mmol de PCl3 en solution dans 20 ml de THF. Après 2 h
o d'agitation entre -70 et -60 C, on additionne un excès d'alcool benzylique, on laisse réagir 3 heures, puis on additionne 3 mmol d'hydroperoxyde de tertiobutanol à -78 C. On laisse remonter lentement la température à 25 C, puis on évapore le THF, et on ajoute une solution aqueuse de HCl 1N.L'inositol mono(phospho di-benzyle) obtenu (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = H ; R6 = PO(OBz)2 où
Bz désigne un groupement benzyle) est précipité par addition d'un mélange propanol-acétone. Le produit est filtré et lavé à l'acétone. Il est ensuite complexe par du sulfate de vanadyle en solution aqueuse.

Exemple 13
Préparation de complexes 1/1 d'inositol et de niobium :
Dans 50 ml d'eau distillée, on dissout 0,9 g = 5 mmol d'inositol (R1 2 R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H), puis on ajoute à cette solution 5 mmol du complexe de tétrachlorure de niobium avec le THF (1,895 g). Après évaporation de l'eau sous vide à 55 C, il est obtenu un solide hygroscopique.

Exemple 14
Préparation de complexes 1/1 d'inositol hexaphosphate et de niobium :
Dans 10 ml de THF anhydre où l'on a suspendu 2,5 mmol du sel de sodium de l'acide phytique (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = PO3Na2), on additionne 2,5 mmol de pentachlorure de niobium Nb(Cl)5 (0,675 g) dissous dans 15 ml de THF. La solution jaune devient blanche et il demeure une poudre blanche en suspension. Après 2 h d'agitation, on ajoute 15 ml de MeOH. Puis on évapore les solvants au rotavapor.

Exemple 15
Préparation de complexes du vanadium avec les inositol mono(phosphoro phenylène)
On suspend 5 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 =
R6 = H) et 0,3 ml de pyridine dans 50 ml de THF anhydre, sous azote sec et on refroid à -780C. On ajoute ensuite 1 mmol de CIPO2C6H4 (1,2-phénylène phosphochlorhydrate). Après 3 heures d'agitation à -78 C, on additionne 5 mmol de sulfate de vanadyle dissous dans de la DMF, et on laisse alors remonter lentement la température à 25 C, puis on évapore les solvants.

Exemple 16
Préparation de complexes du vanadium avec les mono esters de l'acide linoléique et de l'inositol.

On dissout dans 20 ml de THF anhydre à -100C sous azote, 5 mmol d'acide linoléique et 0,5 ml de pyridine, puis on ajoute 30 mmol de chlorure d'oxalyle (ClCOCOCl) et on agite à cette tempé rature pendant 1 heure. Puis on laisse remonter lentement la température à 250C et on évapore sous vide le solvant et l'excès d'agent chlorant. On redissout le chlorure d'acide obtenu dans 50 ml de
THF anhydre et on refroidit le tout à -25 C. On ajoute alors en une seule fois 2,5 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H).

On chauffe alors au reflux du THF durant 1,5 h. Après évaporation du THF sous vide, le p-roduit obtenu (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = H,
R6 = linoéate) est dissous dans une solution eau-éthanol à laquelle on additionne 5 mmol de sulfate de vanadyle dissous dans de d'eau. On évapore les solvants à sec sous vide de la trompe à eau à 450C.

Exemple 17
Préparation de complexes du vanadium avec les inositol diéthylphosphates :
On suspend 10 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 =
R6 = H) et 1 ml de Et3N dans 60 ml de THF anhydre, sous azote sec et on refroidit à -150C. On ajoute ensuite 10 mmol de ClOP(OEt)2 o (diéthylchlorophosphate). Après 30 min d'agitation à -15 C, on chauffe au reflux du THF durant 2 heures. Après évaporation du THF sous vide, on dissout le produit obtenu (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 =
H ; R6 = OP(OEt)2) dans 50 ml d'un mélange 90 eau/10 éthanol, et on additionne 10 mmol de sulfate de vanadyle dissous dans 50 ml d'eau.

Exemple 18
Préparation de complexes d'inositol avec du niobium et du vanadium
Dans 30 ml d'eau on dissout 20 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H) à chaud, puis on y ajoute successivement 2 mmol de NbCl4 et 2 mmol de VOSO On chauffe ce mélange à 700C durant 1 h, puis on complète la solution à 100 ml.

Exemple 19
Préparation de complexes d'inositol et de molydène VI
On met en suspension dans de l'eau 5 mmol d'acétyl acétonate de molybdène (MoO2(acac)2), on y dissout 2,5 mmol d'ino sitol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = H). Après une nuit d'agitation, la solution est colorée en orange. On chauffe au reflux durant 30 min, il apparaît alors un précipité orange brun. On évapore l'eau sous vide à 500C puis on sèche le solide orange obtenu à la pompe à palettes.

Exemple 20
Préparation de complexes d'inositol et de molybdène III
On dissout dans de l'eau 5 mmol de chlorure de molybdène (MoCl3) et on y ajoute 20 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 =
R5 = R6 = H). Après une nuit d'agitation on évapore l'eau sous vide à 650C, puis on sèche le solide très hygroscopique obtenu à la pompe à palettes.

Exemple 21
Préparation d'un complexe d'inositol niacinate et de vanadium 4
On dissout dans 20 ml de DMF 4 mmol d'inositol hexa(3 pyridine)carboxylate (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 6 R6 5 OC-C H N) et on y ajoute 1 mmol de tétrachlorure de vanadyle (VCl4) dans de la DMF.

Après 2 h d'agitation, on évapore le solvant sous vide de la pompe à palettes à 550C.

Exemple 22
Préparation de complexes d'acide phytique et de sélénium.

On suspend dans 30 ml d'eau 5 mmol du sel de sodium de l'acide phytique (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = PO3Na2), puis on y ajoute 5 mmol de chlorure de sélénium (SeCl4). On chauffe sous agitation à 50 0C durant 1 h, puis on évapore l'eau sous vide à 65 C, puis on sèche le solide obtenu à la pompe à palettes.

Exemple 23
Préparation de complexes d'acide phytique et de l'antimoine
On dissout à chaud dans 100 ml d'eau 5 mmol du sel de sodium de l'acide phytique (R1 2 R2 4 R3 5 R4 6 R5 3 R6 = PO3Na2), puis on y ajoute 2,5 mmol d'oxyde d'antimoine (Sb205). On chauffe sous agitation à reflux durant 12 h, puis on évapore l'eau sous vide et on sèche le solide obtenu à la pompe à palettes.

Exemple 24
Préparation de complexes d'inositol et de l'antimoine
On suspend 6 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 =
R6 = H) et 0,2 ml de ET N dans 50 ml de THF anhydre, sous azote sec 3 et on refroidit à -10 C. On ajoute ensuite 1 mmol de tri bromure d'antimoine, SbBr3. Après 3 h d'agitation à 0 C, on laisse alors remonter lentement la température à 250C, puis on évapore le solvant.

Exemple 25
Préparation de complexes d'inositol et d'étain
On suspend 25 mmol d'inositol (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 =
R6 = H) et 0,5 ml de pyridine dans 50 ml de dichlorométhane anhydre, sous azote sec et on refroidit à -150C. On ajoute ensuite 2,5 mmol de bromure d'étain (SnBr4), et on chauffe à 350C durant 12 h. Puis on évapore le solvant au rotavapor.

Exemple 26
Préparation de complexes d'acide phytique et d'étain
On dissout à chaud dans 100 ml d'eau 5 mmol du sel de sodium de l'acide phytique (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R6 = PO3Na2), puis on ajoute 5 mmol de sulfate d'étain (Sn(S04)2). On chauffe sous agitation à reflux durant 2 h, puis on évapore l'eau sous vide et on sèche le solide obtenu à la pompe à palettes.

Exemple 27
Préparation d'un complexe d'inositol et de chrome III
On dissout dans 20 ml d'eau 5 mmol d'alun de chrome (CrK(s04)2,12H2o) et on y ajoute 30 mmol d'inositol (R1 = R2 =
R3 = R4 = R5 = R6 = H). Après 2 h d'agitation à 400C, on évapore l'eau sous vide à 65 C, puis on sèche le solide rouge-mauve obtenu à la pompe à palettes.

Exemple 28
Formulation dans n'importe quel diluant ou excipient pharmaceutiquement acceptable : a) Exemple de composition pour administration par voie orale :
Un complexe de métal préparé suivant l'un quelconque des exemples 1 à 27 est mélangé dans un broyeur, à raison de 10 à 5 000 nanomoles de métal (de préférence de 20 à 250 nanomoles), à un polymère de sucre, par exemple du dextran ou de la cellulose, avec du stéréate de zinc, en quantités suffisantes pour réaliser un comprimé de 100 milligrammes, qui est ensuite enrobé de gomme arabique et de sorbitan monostérate. Avantageusement, on peut préparer des gelules gastrorésistantes à base de gélatine, de dioxyde de titane et d'ester de cellulose.

b) Exemple de composition pour administration par injection :
Un complexe de métal préparé suivant l'un quelconque des exemples 1 à 27 et qui est soluble dans l'eau, est dissous à raison de 20 à 10 000 nanomoles de métal (de préférence de 50 à 500 nanomoles), dans 1 à 10 millilitres d'eau désionisée stérile (de préférence de 2 à 4 millilitres), puis il est ajusté en pH et en sels minéraux de manière à être le plus proche possible du sérum physiologique (pH 7,4 et 9 g/l), par des acides des bases, ou des sels minéraux constitués d'éléments qu'on trouve dans le sang, de préférence H+, HO , Na+, Cl c) Exemple de composition pour application locale ::
Un complexe de métal préparé suivant l'un quelconque des exemples 1 à 27 précédents est émulsifié, micronisé ou suspendu à raison de 0,1 à 100 micromoles de métal (de préférence de 2 à 20 micromoles), dans une émulsion d'eau, de glycérol, de mono-, diet triglycérides d'acides gras, et d'alcools gras.

Exemple 29
Détermination d'un effet hypoglycémiant :
L'injection de 60 mg/kg de streptozotocine par voie intraveineuse chez le rat provoque, dans les 24 h suivant l'injec tion, l'induction d'un diabète sucré stable, irréversible et sensible à I 'insuline. L'hyperglycémie consécutive peut être réduite par l'administration de substances à propriétés hypoglycémiantes.

a) Protocole
Les tests ont été réalisés sur des rats mâles de souche Wistar (6 par lot), provenant du centre d'élevage de la
Faculté de Pharmacie de Montpellier.

Les animaux sont maintenus en observation pendant 4 j avant le début des essais. En début d'essai les animaux pèsent en moyenne 180 g. Pendant la période d'observation les animaux, répartis par cage de 3, reçoivent nourriture et eau de boisson ad libitum et sont soumis à une température comprise entre 21 et 230C et à un cycle jour/obscurité de 12 h.

Dans tous les essais, le diabète a été induit par injection de streptozotocine SIGMA en tampon citrate à pH 4,5.

Les animaux d'un poids moyen de 180 g sont anesthésiés à l'éther. Une injection intraveineuse de streptozotocine est pratiquée au niveau de la veine du pénis ; une glycémie de contrôle est effectuée 72 h après l'administration de la streptozotocine ; seuls les animaux présentant une glycémie supérieure ou égale à 3 g/l (en moyenne 3,8 g/l) sont sélectionnés et soumis au traitement par la substance testée.

Les complexes testés ont été administrés dans les conditions suivantes d'injection :
- pour les dérivés du vanadium, des doses correspondant à 2 mg de metal ont été administrées deux fois par jour les deux premiers jours et des doses correspondant à 2 mg de métal ont été administrées les 13 jours suivants,
- pour les dérivés du niobium, on a administré des doses correspondant à 120 micromoles de métal les deux premiers jours et 60 micromoles les 13 jours suivants.

Le contrôle de la glycémie est effectué le matin à 9 h, moment de la journée où la glycémie des rats diabtiques témoins ou traités, soumise à de grandes variations durant la journée, est la plus élevée. Des rats diabétiques ne reçoivent que l'excipient (sérum physiologique) et servent de témoins diabétiques ; enfin des rats "témoins blancs" de même poids, n'ayant pas reçu d'injection de streptozotocine sont conserves afin de comparaison des consommations d'eau et de nourriture.

b) Résultats
Le contrôle quotidien de la glycémie ne nous a pas permis de mettre en évidence l'effet hypoglycémiant durant les deux premiers jours du traitement. Une chute importante et significative de la glycémie par rapport à celle des rats témoins apparaît dès les jours suivants et se maintient dans la plupart des cas même après arrêt du traitement. Celle-ci est accompagnée d'une réduction également significative de la polyphagie et de la polydipsie, qui elles se manifestent dès les premiers jours. Les consommations de nourriture et d'eau recouvrent des valeurs tendant à se rapprocher de celles des rats témoins non diabétiques.

On notera que les valeurs données dans les exemples sont des moyennes obtenues pour l'ensemble d'un lot.

Comme, dans certains cas, un ou deux animaux du lot ne sont pas corrigés, ces moyennes sont légèrement supérieures aux paramètres correspondant des sujets sains.

On donne en annexe les consommations d'eau, de nourriture et l'évolution de la glycémie des rats traités par les complexes des exemples 1, 2, 4, 8 et 14.

Les résultats sont représentes, pour chaque exemple, sous forme de diagramme-barre ; la barre noire correspondant aux résultats obtenus avec les témoins diabétiques et la barre hachurée correspondant aux résultats obtenus avec les rats traités par les complexes selon l'invention.

Les figures la, lb et lc représentent respectivement les variations de consommation d'eau, de nourriture et les variations du taux de glycémie au cours du temps pour un lot de rats diabétiques traités par le produit de Exemple 1 en comparaison avec les résultats obtenus pour un lot de rats diabétiques non traités.

Les figures 2a, 2b et 2c représentent respectivement les variations de consommation d'eau, de nourriture et les variations du taux de glycémie au cours du temps pour les rats diabétiques traités par le produit de l'exemple 2 en comparaison avec les résultats obtenus pour un lot de rats diabétiques non traités.

Les figures 3a, 3b et 3c représentent respectivement les variations de consommation d'eau, de nourriture et les variations du taux de glycémie au cours du temps pour un lot de rats diabetiques traités par le produit de l'exemple 4 en comparaison avec les résultats obtenus pour un lot de rats diabétiques non traités.

Les figures 4a, 4b et 4c représentent respectivement les variations de consommation d'eau, de nourriture et les variations du taux de glycémie au cours du temps pour un lot de rats diabétiques traités par le produit de l'exemple 8 en comparaison avec les résultats obtenus pour un lot de rats diabétiques non traités.

Les figures Sa, 5b et 5c représentent respectivement les variations de consommation d'eau, de nourriture et les variations du taux de glycémie au cours du temps pour un lot de rats diabétiques traités par le produit de l'exemple 14 en comparaison avec les résultats obtenus pour un lot de rats diabétiques non traités.

On a constaté une très nette diminution de la consommation d'eau et de nourriture accompagnée d'une chute importante de la glycémie.

Tout comme l'homme, les rats diabétiques développent des désordres métaboliques (hypercholestérolémie, hyperlipidémie, hypertriglycéridémie...) ainsi que des pathologies telles qu'hypertension artérielle, arthérosclérose, insuffisance cardiaque, ischémie périphérique, ou encore des pathologies oculaires évoluant vers la cécité.

On a montré que sur des rats traités, devenus normoglycémiques, n'apparaissaient pas les désordres et complications ci-dessus décrites.

Par ailleurs, l'évolution pondérale ainsi que celle du ratio consommation de nourriture/prise de poids mettent clairement en évidence un effet hypoglycémiant qu'aucun traitement actuel du diabète ne procure puisqu'en particulier il se prolonge dans la majorité des cas après arrêt du traitement.

Par ailleurs, il est à noter que l'observation des paramètres subjectifs, tels que l'aspect des animaux et leur comportement, montre également l'effet positif du traitement.

La mesure du taux de cholestérol et de triglycérides met également en évidence un retour vers la normale.

Exemple 30
Détermination d'un effet anticancéreux
L'étude est effectuée sur le produit de l'exemple 18.

L'étude est effectuée sur des souris femelles CF1 auxquelles sont injectées en intrapéritonéal environ 6.106 cellules d'une ascite tumorale d'Ehrlich.

24 heures après, elles reçoivent une administration intrapéritonéale du composé de l'exemple 18 à des doses allant de 5 à 100 mg/kg.

Le traitement est poursuivi chaque jour à heure fixe pendant 14 jours.

Chaque série de test pour une dose est effectuée sur un lot de 6 animaux.

Chaque série de test pour une dose comporte un lot de souris témoins.

L'évaluation de la croissance tumorale est suivie par la courbe de poids des animaux et leur temps de survie.

Pour chaque lot sont notés : - le nombre d'animaux morts pendant la durée de l'expérimentation
qui a été fixée à 30 jours - le nombre d'animaux survivants à 30 jours - le temps de survie moyen par lots (en jours)

<tb> Dose <SEP> Nombre <SEP> Nombre <SEP> Nombre <SEP> Temps <SEP> de
<tb> mg/kg <SEP> d'animaux <SEP> d'animaux <SEP> d'animaux <SEP> survie <SEP> moyen
<tb> <SEP> testés <SEP> morts <SEP> survivants <SEP> (jours)
<tb> Témoins <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 14,3
<tb> 5 <SEP> mg <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> O <SEP> 14,8
<tb> 15 <SEP> mg <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> 1 <SEP> 18,2
<tb>

<tb> Dose <SEP> Nombre <SEP> Nombre <SEP> Nombre <SEP> Temps <SEP> de
<tb> mg/kg <SEP> d'animaux <SEP> d'animaux <SEP> d'animaux <SEP> survie <SEP> moyen
<tb> <SEP> testés <SEP> morts <SEP> survivants <SEP> (jours)
<tb> 30 <SEP> mg <SEP> 6 <SEP> 4 <SEP> 2 <SEP> 21
<tb> 45 <SEP> mg <SEP> 6 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 23,4
<tb> 60 <SEP> mg <SEP> 6 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 25,8
<tb> 80 <SEP> mg <SEP> 6 <SEP> 4 <SEP> 2 <SEP> 20,2
<tb> 100 <SEP> mg <SEP> ~ <SEP> <SEP> 6 <SEP> ~ <SEP> <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 12
<tb>
Cette étude montre que le produit obtenu à l'exemple 18 présente une importante activité anticancéreuse sur une tumeur transplantee, avec une activité de l'ordre de 60 à 80 % de rémission aux doses comprises entre 45 et 80 mg/kg.

Exemple 31
Essai pharmacologique
A - Recherche d'une activité immuno-modulatrice
Le complexe obtenu à l'exemple 18 est soumis à des essais de mise en évidence d'activité immunomodulatrice, selon la procédure suivante.

1 - Protocole
Les effets recherchés seront testés et in vitro sur les cellules impliquées dans la réponse immune (lymphocytes - monocytes et macrophages).

I. Cellule (cellules humaines) :
Paramètres et fonctions cellulaires étudiés : - Marqueurs membranaires, - Activation lymphocytaire et prolifération lymphocytaire, - Métabolisme oxydatif des monocytes.

1. Marqueurs membranaires :
L'expression d'antigènes membranaires sera étudiée en cytomètre de flux en présence et en absence de chacun des produits.

Protocole utilisé :
A partir du sang périphérique prélevé sur EDTA ou héparine, séparation de la population lymphocytaire.

Marqueurs étudiés - CD3 - CD4 - CD8 - 84 pour les lymphocytes, - M02 pour les monocytes
Ces marqueurs sont repérés par les anticorps monoclonaux correspondants qui, après fixation, sont visualisés par un anticorps anti-Igl humain conjugué à un fluochrome (GAM-FITC).

L'étude de la répartition des cellules portant les marqueurs est faite au cytomètre de flux (COULTER Epics profile) - les doses testes : Dilutions finales 1/20 - 1/100
* durée d'incubation :
- courte TO-730 min - T60 min
- longue TO 18 h - 24 h.

Matériel nécessaire : - cytofluomètrie de flux (COULTER epics profile), - incubateur à C02, - réactifs
milieu RPMI
- marqueurs lymphocytaires :
* anticorps monoclonaux anti CD3
* anticorps monoclonaux anti CD4
* anticorps monoclonaux anti CD8
* anticorps monoclonaux anti B4
* anticorps anti M02
* GAM FITC.

2. Activateur et prolifération lymphocytaire
Les lymphocytes humains sont recueillis du sang périphérique par centrifugation sur gradient de Ficoll.

2.1 Activation
L'activation est testée dans deux circonstances : - effet d'activation directe du produit sur les cellules, - effet modulateur du produit vis-à-vis de l'activation par des
substances activatrices = PHA - conA - PMA (phorbo myristate
acetate).

Dans les deux cas, l'activation est appréciée par l'apparition des marqueurs membranaires de l'activation des lymphocites : - CD25 (ou récepteur de l'I12), - antigène HLA-DR : jet2.

Ces deux marqueurs sont évalués en cytomètrie de flux.

Protocole :
Les cellules sont : - d'une part mises en présence des 2 doses de chaque produit pen
dant 24 h et testées ensuite par comparaison avec des cellules
non traitées, - d'autre part, cultivées en présence de PHA, de conA et PMA avec
ou sans produit pendant 24 h.

L'incubation à lieu a 370C en atmosphère humide avec 5 % de
C02. Les résultats sont appréciés au cytomètre de flux.

Matériel nécessaire : - cytofluorimètre de flux, - incubateur à C02, - milieu RPMI, - milieu Ficoll-hypaque, - Réactifs :
* phytohémagglutinine
* PMA
* anticorps monoclonal anti CD25
* anticorps monoclonal anti I2 2.2 Prolifération :
Les lymphocytes activés peuvent, ou non, proliférer sous l'effet de certaines drogues.

Comme l'activation, la prolifération sera testée dans les 2 circonstances : - prolifération directe sous l'effet du produit, - modulation par chaque produit de la prolifération obtenue par les
mitogènes PHA et conA.

Le protocole est le même que ci-dessus.

La prolifération est évaluée au 4e jour d'incubation par incorporation dans le noyau des cellules proliférantes de précurseur radioactif du DNA (thymidine tritiée) : l'importante prolifération est indiquée par la radioactivité appréciée dans l'extrait cellulaire obtenue au 5e jour de l'incubation.

Matériel nécessaire : - incubateur à C02, - extracteur d'ADN type SKATRON, - compteur isotypique à scintillation liquide, - Réactifs :
* milieu RPMI
* Ficoll hypaque
* sérum foetal de veau
* PHI
* thymidine tritiée 3. Métabolisme oxydatif des monocytes :
L'activation des monocytes macrophages stimule leur métabolisme oxydatif qui peut facilement être étudié par cytomètrie de flux en mettant à profit l'oxydation du dichlorofluorescéine dont seule la forme oxydée est fluorescente, donc seule les cellules activées deviennent fluorescentes et sont repérées par le cytomètre de flux.

Par ce moyen, il sera donc possible d'étudier - l'activation directe des cellules par le produit, - l'effet modulateur du produit sur leur activation par PMA.

Protocole
Les leucocytes séparés du sang périphérique sont d'abord mises en contact avec DCF puis : - soit avec seulement le produit : à différentes concentrations des
cellules non traitées par PMA de témoins positifs, - soit avec le produit et PMA les contacts sont faits en bain-marie
thermostaté en agitation continue et les lectures sont faites au
cytomètre de flux toutes les 5 min et jusqu a 1 h 30, le burst
oxydatif n'excédant pas cette durée.

Les cinétiques d'activation sont ensuite comparées :
Matériel nécessaire : - cytofluorimètre de flux, - bain-marie thermostaté à agitation continue, - Réactifs :
* Ficoll hypaque * dichlorofluorescéine,
* PMA.

2 - Résultat 2-1 Effet du produit de l'exemple 18 sur le marqueur d'activation
CD25 récepteur d'IL2 :
Le produit de l'exemple 18 (500 pq), incubé avec les lymphocytes séparés par gradient de Ficoll et activés par la PHA (Phyto hémagglutinine) pendant 24 h, montre un effet inhibiteur sur l'apparition des récepteurs d'1L2.

Résultats exprimés en % de récepteurs d'IL2 (CD25)

<tb> <SEP> 1er <SEP> sujet <SEP> 2e <SEP> sujet
<tb> cellules <SEP> 0,5 <SEP> % <SEP> 4,5 <SEP> Y <SEP>
<tb> cellules <SEP> + <SEP> PHA <SEP> 22,5 <SEP> % <SEP> 14,5 <SEP> %
<tb> cellules <SEP> + <SEP> PHA <SEP> + <SEP> produit <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 18 <SEP> 3,6 <SEP> % <SEP> 3,8 <SEP> %
<tb> 2-2 Effet du produit de l'exemple 18 sur la prolifération des
lymphocytes mis en culture avec la lectine PHA pendant 72 h :
Le produit de l'exemple 18, en solution à 5 g pour 100 ml, mis en contact avec les lymphocytes séparés par gradient de Ficoll et cultivés avec la lectine PHA pendant 72 h, montre une inhibition importante de la prolifération lymphocytaire.

Après incorporation de thymidine tritiée, les résultats sont exprimés en nombre de coups par minute (cpm).

<tb>

<SEP> 1er <SEP> sujet <SEP> 2e <SEP> sujet
<tb> cellules <SEP> seules <SEP> 780 <SEP> cpm <SEP> 195 <SEP> cpm
<tb> cellules <SEP> + <SEP> PHA <SEP> 47 <SEP> 748 <SEP> cmp <SEP> 50 <SEP> 849 <SEP> cpm
<tb> cellules <SEP> + <SEP> PHA <SEP> + <SEP> produit <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 18 <SEP> 11 <SEP> 000 <SEP> cpm <SEP> 695 <SEP> cpm
<tb> 2-3 Effet du produit de l'exemple 18 sur l'expression des Ag
membranaires lymphocytaires :
Le produit de l'exemple 18 (500 ug) incubé pendant 1 h avec les lymphocytes séparés par gradient de Ficoll, ne donne pas de modification significative au niveau de l'expression des Ag lym- phocytaires des 2 sujets étudiés.

Résultats exprimés en pourcentage :

<tb> <SEP> fer <SEP> sujet <SEP> 2e <SEP> sujet
<tb> <SEP> cellules <SEP> cellules <SEP> + <SEP> produit <SEP> cellules <SEP> cellules <SEP> +produit
<tb> <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 18 <SEP> de <SEP> l'exemple <SEP> 18
<tb> CD2 <SEP> 81 <SEP> 79 <SEP> 83,4 <SEP> 82
<tb> CD19 <SEP> 6,2 <SEP> 6,8 <SEP> 3,2 <SEP> 3,1
<tb> CD4 <SEP> 40 <SEP> 43,5 <SEP> 48,6 <SEP> 50
<tb> CD8 <SEP> 42,8 <SEP> 50 <SEP> 24 <SEP> 21,6
<tb> 2H <SEP> 4 <SEP> 28 <SEP> 31,4 <SEP> 65,2 <SEP> 62,4
<tb> 48 <SEP> 4 <SEP> ~ <SEP> <SEP> 72 <SEP> 69f,9 <SEP> 54,2 <SEP> 55
<tb> 2-4 Effet du produit de l'exemple 18 sur le métabolisme oxydatif
des leucocytes humains, étudié en cytométrie de flux
L'étude cinétique des leucocytes humains, en présence de dichloro fluorescine, marqueur de l'H202 intracellulaire, et sti mulés par le Phorbol myristate acétate, montre un métabolisme oxydatif diminué au cours du temps lorsque le produit de l'exemple 18 leur est ajouté, comme cela résulte des courbes de la figure 6. A la figure 6, les courbes

représentent la réponse immunitaire à l'action de stimulation causée par le Phorbol myristate acétate seul, respectivement pour les polynucléaires, les monocytes et les lymphocytes, tandis que les courbes

représentent les réponses immunitaires respectivement causées par le Phorbol myristate acétate en présence du produit de l'invention de l'exemple 18.

On constate une diminution très significative de la réponse immunitaire.

Claims (24)

REVENDICATIONS

1. Complexes organométalliques de l'inositol et de ses dérivés, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par réaction de 0,1 à 6 mol d'au moins un dérivé métallique dans lequel le métal est à un degré d'oxydation au moins égal à 3 et appartient à la famille du vanadium, du niobium, du chrome, du molybdène, du sélénium, de l'étain et de l'antimoine avec 1 mol d'un ligand constitué d'inositol ou d'un de ses dérivés, ledit dérivé d'inositol répondant à la formule

où R1, R2r R3, R4, R5, R6 sont identiques ou différents et représentent :: - de l'hydrogène, - une chaîne hydrocarbonée aliphatique linéaire ou ramifiée conte

nant de 1 à 30 atomes de carbone, de préférence 16 à 20 et conte

nant de O à 6 insaturations, ladite chaine étant liée à un oxy

gène du cycle inositol par un -CH2 ou un carbonyle -CO, - une chaîne hydrocarbonée contenant jusqu'à 30 atomes de carbone

et incluant au moins un cycle aromatique, ou hétéroatomique,

ladite chaine étant re-liée à un oxygène du cycle inositol par un

groupement -CH2 ou -CO, - une chaîne contenant jusqu'à 50 atomes de carbone,linéaire ou

ramifiée ou renfermant au moins un cycle à 3 à 8 chainons

sature, insaturé ou aromatique, ladite chaîne contenant de O à

10 insaturations et de O à 10 hétéroéléments, en particulier de

l'oxygène, du soufre ou de l'azote et ladite chaine comportant 0

à 10 ramifications en C1-C6 contenant des fonctions conférant un caractère hydrosoluble, par exemple des fonctions acide, sulfate, phosphate,alcool, amine, amide, éther, - un groupement

dans lequel Y1 et Y2 sont identiques ou

différents et représentent

- de l'hydrogène,

- un métal alcalin,

- un groupement NH4,

. ensemble un groupement phénylène,

I une chaîne hydrocarbonée aliphatique linéaire ou ramifiée con

tenant de 1 à 30 atomes de carbone, de préférence 16 à 20 et

contenant de O à 6 insaturations,

. une chaîne hydrocarbonée contenant jusqu'à 30 atomes de carbone

et incluant au moins un cycle aromatique ou hétéroaromatique,

- une chaîne contenant jusqu'a 50 atomes de carbone,linéaire ou

ramifiée ou renfermant au moins un cycle à 3 à 8 chaînons

saturé, insaturé ou aromatique, ladite chaîne contenant de O à

10 insaturations et de O à 10 hétéroéléments, en particulier de

l'oxygène, du soufre ou de l'azote et ladite chaîne comportant

O à 10 ramifications en C -C contenant des fonctions conférant

un caractère hydrosoluble, par exemple des fonctions acide,

sulfate, phosphate,alcool, amine, amide, éther,

2.Complexes selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils résultent de la réaction 1 à 3 mol de dérivé métallique par mole de dérivé d'inositol.

3. Complexes selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisés en ce que le métal est constitué par du vanadium au degré d'oxydation 4 ou 5, du niobium au degré d'oxydation 4 ou 5, du chrome au degré d'oxydation 3, du molybdène au degré d'oxydation 3 ou 6, du sélénium au degré d'oxydation 4 ou , de l'antimoine au degré d'oxydation 3, 4 ou 5 ou de l'étain au degré d'oxydation 4.

4. Complexes selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que ledit dérivé métallique est un oxyde, un ha logé- nure, un oxyhalogénure, un sulfate, ou un métallate, par exemple un métallate de métal alcalin ou d'ammonium du métal considéré, un acétyl acétonate, un acétate ou un hydrate ou un complexe avec un solvant de ces dérivés métalliques.

5. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le ligand est l'inositol.

6. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le dérivé d'inositol est un phosphate d'inositol.

7. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que l'un au moins des groupements R1, R2, R3, R4, R5,

R6 est constitué d'une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée contenant 1 à 30 atomes de carbone et contenant avantageusement de

O à 6 insaturations, reliée à un oxygène du cycle inositol par un -CH2 ou un -CO.

8. Complexes selon l'une des revendications I à 4, caractérisés en ce que l'un au moins des groupements R1, R2, R3, R4, R5,

R6 est une chaîne hydrocarbonée contenant jusqu'à 30 atomes de carbone et renfermant au moins un cycle aromatique, ou hétéroaromatique reliée à un oxygène de I'inositol par un -CH2 ou un -CO.

9. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que l'un au moins des groupements R1, R2, R3, R4, R5,

R6 renferme des hétéroéléments, en particulier de l'oxygène, du soufre ou un groupement amine, ou porte des ramifications contenant des fonctions conférant à la partie de ces chaînes portant lesdites ramifications un certain caractère hydrosoluble, en particulier des fonctions acide, sulfate, phosphate, alcool, amine, éther, amide.

10. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le dérivé d'inositol est un phosphate d'inositol contenant au moins un groupe PO(OY)2 dans lequel Y est de l'hydrogène, un métal alcalin ou un groupement NH4.

11. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le dérivé d'inositol contient au moins un groupement PO(OY)2 dans lequel Y est constitué d'une chaîne hydrocarbonée linéaire ou ramifiée contenant 1 à 30 atomes de carbone et contenant avantageusement de O à 6 insaturations.

12. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le dérivé d'inositol contient au moins un groupement PO(OY)2 dans lequel Y est une chaîne hydrocarbonée contenant jusqu'à 30 atomes de carbone et renfermant au moins un cycle aromatique, par exemple un cycle benzénique ou un cycle pyri inique

13. Complexes selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le dérivé d'inositol contient au moins un groupement PO(OY)2 dans lequel Y est un enchaînement renfermant au moins un hetéroélement, en particulier de l'oxygène, du soufre ou un groupement amine ou portant des ramifications contenant des fonctions conférant à la partie de ces channes portant lesdites ramifications un certain caractère hydrosoluble, en particulier des fonctions acide, sulfate, phosphate, alcool, amine, amide, éther.

14. Procédé de préparation de complexes selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir le dérivé métallique et I'inositol ou son dérivé soit dans un solvant commun, soit dans un milieu où l'inositol ou son dérivé est mis en suspension et à éliminer ledit solvant ou l'agent de suspension.

15. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que le solvant commun est de l'eau ou un milieu hydroalcoolique.

16. Utilisation des complexes selon les revendications 1 à 13 ou obtenus selon le procédé de l'une des revendications 14 ou 15 comme principe actif pour la fabrication d'un médicament, en particulier utile dans le traitement ou la prévention des maladies du métabolisme ou des troubles du système immunitaire.

17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée en ce que le médicament est utile pour le traitement ou la prévention du diabète, des troubles de la glycémie et des complications associés.

18. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend, à titre de principe actif, un complexe tel que défini dans les revendications 1 à 13 ou obtenu dans l'une des revendications 14 à 15, ledit complexe étant incorporé dans un excipient, véhicule ou support pharmaceutiquement acceptable.

19. Composition pharmaceutique selon la revendication 18, caractérisée en ce qu'elle est utile dans le traitement du diabète et des pathologies associées et en ce que le dérivé métallique est un dérivé du vanadium, du chrome, du niobium ou du molybdène.

20. Composition pharmaceutique selon la revendication 18, caractérisée en ce qu'elle est utile dans le traitement des cancers et des syndromes immunodéficients et en ce que le dérivé métallique est un dérivé du vanadium, du niobium, du sélénium, de l'antimoine ou de l'étain.

21. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 18 à 20, caractérisée en ce qu'elle comprend une teneur en complexe organométallique de 5 à 80 % par rapport au poids total de la composition pharmaceutique.

22. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 18 à 21, caractérisée en ce que le complexe organométallique est un complexe de vanadium ou de niobium.

23. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 18 à 22, caractérisée en ce qu'elle est réalisée pour une formulation orale, permuqueuse, injectable ou destinée à une administration transcutanée.

24. Composition pharmaceutique contenant un mélange de 0,1 à 6 mol d'au moins un dérivé métallique dans lequel le métal est à un degré d'oxydation au moins égal à 3 et appartient à la famille du vanadium, du niobium, du chrome, du molybdène, du séléniunium, de l'étain et de l'antimoine avec 1 mol d'un ligand constitué d'inositol ou d'un de ses dérivés, ledit dérivé d'inositol répondant à la formule

où R1, R2, R3, R4, R5, R6 ont les significations données à la revendication 1.