FR2646080A1

FR2646080A1 - Composition cosmetique contenant des composes obtenus par culture de cellules, notamment de fibroblastes ou de keratinocytes

Info

Publication number: FR2646080A1
Application number: FR8905341A
Authority: FR
Inventors: Etienne Soudant; Elisabeth Picard; Roland Roguet
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 1989-04-21
Filing date: 1989-04-21
Publication date: 1990-10-26
Anticipated expiration: 2009-04-21
Also published as: DE69000452D1; CA2015050A1; AU619399B2; ATE82114T1; DE396442T1; DE69000452T2; FR2646080B1; JPH0368506A; ES2018646A4; AU5371090A; GR900300180T1; EP0396442B1; EP0396442A1

Abstract

Composition cosmétique, pour le traitement de la peau et des cheveux, contenant des substances protectrices, synthétisée par des cellules cultivées in vitro en réponse à au moins une agression telle que rayonnement ultra-violet, variations de température, champ électromagnétique, agent chimique ou carence en élément normalement présent dans le milieu de culture. La composition contient le milieu de culture contenant ou non les cellules, les cellules, ou la solution obtenue par éclatement des cellules. Ces compositions protègent in vivo la peau et les cheveux contre les agressions subies par les cellules in vitro.

Description

!

COMPOSITION COSMETIQUE CONTENANT DES COMPOSES

OBTFNUS PAR CULTURE DE CELLULES, NOTAMMENT DE

FIBROBLASTES OU DE KERATINOCYTES.

La présente invention concerne une composi-

tion contenant des composés obtenus par culture de cellules. On a déjà décrit, dans le document,

FR-A-2 585 567 une composition constituée par une cul-

ture de cellules dans un milieu de croissance approprié, convenant aux traitements cosmétiques; les cellules sont, de préférence,- des fibroblastes et des kératinocytes; elles peuvent être humaines, animales

despécifiées; ou mêmes végétales, vivantes ou mortes.

On connaît aussi, par le document EP-A-0 272 920, une composition cosmétique contenant un milieu de culture obtenu après séparation des cellules, qui y

ont été cultivées.

Ces compositions cosmétiques contenant des cellules cultivées avec leur milieu de croissance, ou

contenant uniquement le milieu de croissance de cel-

lules permettent de transmettre à la peau des vecteurs cellulaires dans un environnement de croissance et,

par conséquent, de stimuler les phénomènes de crois-

sance de la peau mais n'ont aucun rôle de protection

de la peau.

La présente invention concerne une composi-

tion cosmétique qui permet de protéger la peau ou les cheveux contre les agressions de toute nature, telles que les radiations ultra-violettes, les écarts de

température, la sécheresse de l'air et la pollution.

Selon la présente invention, on introduit,

dans une composition cosmétique destinée à cette pro-

tection, des substances protectrices synthétisées par des cellules cultivées in vitro, qui ont été agressées

pendant ladite culture in vitro.

En effet, il est connu que, dans toutes les situations d'agression que rencontre, par exemple, la

peau, celle-ci doit préserver son équilibre biolo-

gique. Elle synthétise alors des substances servant à

son adaptation, de manière à maintenir son rôle pro-

tecteur. Toutefois, ces substances ne suffisent pas à elles seules à protéger la peau et l'agression a, dans tous les cas, des effets négatifs, qui s'expliquent, notamment, par le temps de latence qui s'écoule entre l'agression et la synthèse des substances protectrices par la peau. Les phénomènes sont de même nature pour les cheveux. L'application d'une composition cosmétique selon l'invention permet à la peau et/ou aux cheveux d'être en contact, au moment de l'agression in vivo, avec les substances protectrices

préparées in vitro par culture de cellules. On a con-

staté que les substances synthétisées in vitro pouvaient être utilisées in vivo par la peau ou les

cheveux par application externe. En outre, on a con-

staté que les substances synthétisées in vitro avaient une durée de vie suffisante pour pouvoir être utilisées dans des compositions cosmétiques et que, de plus, elles sont compatibles avec les différents composés généralement utilisés dans les compositions cosmétiques. La présente invention a donc pour objet une composition cosmétique contenant, dans un support cosmétiquement acceptable, au moins un composé obtenu

par culture de cellules animales, notamment de fibrob-

lastes ou de kératinocytes, caractérisée par le fait que ledit composé est une substance protectrice de la peau ou des cheveux, synthétisée par lesdites cellules en réponse à au moins une agression, -lorsqu'elles sont

cultivées in vitro.

Les substances protectrices sont, de préférence, utilisées sans séparation ou purification préalable, sous forme d'un principe actif constitué

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par le milieu de culture et/ou les cellules cultivées

et/ou la solution obtenue après éclatement des cel-

lules cultivées. Le milieu de culture et/ou la solu-

tion obtenue après éclatement des cellules sont avan-

tageusement concentrées pour augmenter leur teneur en

substances protectrices.

La composition peut, avantageusement, con-

tenir en mélange des principes actifs obtenus en réponse à plusieurs agressions. On peut, par exemple,

introduire dans la composition un mélange des prin-

cipes actifs obtenus par culture de cellules avec agression par action de rayons ultra-violets et par

culture de cellules agressées par des chocs ther-

miques. L'agression est, de préférence, constituée

par l'action d'un rayonnement ultra-violet, de varia-

tions de température, d'un champ électromagnétique, d'un agent chimique, et/ou d'une carence en élément normalement présent dans le milieu de culture. Selon l'invention, on peut soumettre les cellules in vitro à plusieurs agressions successives. Il est également possible de soumettre les cellules à des agressions

simultanées (paf exemple agression chimique et agres-

sion thermique). Dans le cas d'agressions multiples, le principe actif obtenu contient directement, sans

qu'il soit nécessaire de faire des mélanges, des sub-

stances obtenues en réponse aux différentes agres-

sions. Selon l'agression subie par les cellules, différentes substances protectrices ou mélanges de

substances protectrices sont synthétisées. Ces sub-

stances ou mélanges de substances n'ont, le plus souvent, pas été isolés et ne sont pas toujours bien connus. Les substances protectrices sont, soit excrétées dans le milieu de culture, soit localisées dans la cellule. Ces substances protectrices peuvent être des molécules riches en énergie, des substances immunorégulatrices, des substances aptes à stimuler la croissance des cellules et/ou des molécules de réparation. On sait que des cultures de cellules épider-

miques soumises à l'action de radiations ultra-

violettes synthétisent, entre autres, un facteur "hormone-like": l'E.T.A. F.(Epidermal cell-derived Thymocyte Activating Factor), qui peut être assimilé à I'interleukine-1 (voir les articles: "The Journal of Investigative Dermatology", volume 81, n' 6, 1983; "British Journal of Dermatology", 1985, 113, supplément 28; et "Arch. Dermatol. Res.", 1988, 280, 71-76). D'autres cytokines sont également produites par les cellules épidermiques, en particulier l'interleukine-3 et l'ENKAF (Epidermal cellderived

Natural Killer cell Augmenting Factor).

L'agression thermique conduit, de façon con-

nue, à la synthèse de protéines particulières dites "de choc thermique". En effet, lorsque les cellules en culture sont soumises à une élévation brutale de la température, de nombreuses protéines cellulaires sont

dénaturées. Les protéines "de choc thermique" inter-

viennent alors pour limiter cette dénaturation, dégradent éventuellement les protéines anormales et protègent les structures cellulaires, telles que, par

exemple, le cytosquelette.

L'agression électromagnétique donne des sub-

stances protectrices, qui augmentent la perméabilité des membranes et stimulent certaines voies métaboliques telles que la synthèse de l'adénosine triphosphate. Selon l'agression subie par les cellules, différentes autres substances peuvent être

synthétisées.

Selon la présente invention, on cultive, de préférence, des cellules extraites de la peau humaine,

de la gaine d'un cheveu humain ou d'un cil et, notam-

ment, des kératinocytes ou des fibroblastes. Les cel-

lules sont, avantageusement, prélevées chez la per-

sonne destinée à utiliser la composition cosmétique. On peut ainsi obtenir des compositions personnalisées, dont l'application présente une très grande sécurité et une grande innocuité et qui diminue les risques

d'allergies. Selon l'invention, il peut être avan-

tageux de faire des prélèvements chez l'individu

jeune, puis de congeler les cellules après leur multi-

plication et de les conserver durant plusieurs années.

Elles seront remises en culture après décongélation dans les mêmes conditions que les cellules fraîchement

prélevées.

Selon la présente invention, les cellules sont mises en culture, puis subissent l'agression (ou les agressions) choisie(s), de préférence lorsqu'elles ont atteint la confluence. La culture peut s'effectuer en présence de précurseurs des substances qui seront synthétisées suite à l'agression. On peut citer comme précurseurs, à titre d'exemple, les acides aminés, les

bases nucléiques et le pyruvate de sodium.

On décrit ci-après, à titre d'exemple, un protocole de culture de kératinocytes humains et de

fibroblastes humains.

a) Protocole de culture de kératinocytes humains. Dans le cas o l'on cultive des kératinocytes provenant d'épiderme de peau, la peau est, par exemple, obtenue par une technique classique de chirurgie esthétique. Après avoir été dégraissé,

l'épiderme est isolé par trypsinisation et les cel-

lules sont mises en culture dans un milieu contenant,

par exemple, 10 % de sérum de veau foetal, des anti-

biotiques, du pyruvate et de la glutamine.

Dans le cas o on cultive des kératinocytes

provenant de la gaine du cheveu, on récolte les folli-

cules pileux au stade anagène par arrachage ou à la suite d'intervention de chirurgie esthétique. Ils sont cultivés soit sur une membrane de cristallin de boeuf, soit sur collagène dans un milieu Eagle's modifié ou un milieu de Mac Coy, supplémenté en sérum de veau foetal (10 %), glutamine, antibiotiques, fongicides,

insuline, toxine cholérique et EGF (facteur de crois-

sance épidermique).

Les kératinocytes peuvent également provenir

de la gaine du cil.

b) Protocole de culture de fibroblastes humains. Les fibroblastes sont isolés à partir de la peau glabre de scalp. Apres avoir éliminé l'hypoderme et l'épiderme, le derme est incubé dans une solution d'antibiotiques puis lavé au "Phosphate Buffer Saline" (PBS) et traité à la collagénase à 37'C. Apres avoir filtré puis centrifugé la suspension cellulaire, le culot est mis en culture dans un milieu complet de

culture à raison de 2.10 cellules/cm.

Le milieu de culture est, de préférence, constitué de milieu Eagle's modifié Dulbecco supplémenté avec du sérum de veau foetal (10 %), de-la pénicilline, de la streptomycine, du fongizone et de

la glutamine.

Il est possible de cultiver simultanément

des fibroblastes et des kératinocytes.

Selon les protocoles décrits ci-dessus, les cellules sont ensuite laissées à incuber dans une étuve régulée en température à 37'C, en atmosphère à % de C02 et à 95 % d'humidité relative. Différents protocoles d'application de différentes agressions sont donnés ci-dessous à titre

d'exemples:

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1) Agression aux ultra-violets.

A confluence, le milieu de culture est éliminé, le tapis cellulaire est lavé par une solution saline tamponnée, puis les cellules sont soumises aux rayons ultra-violets. Les doses des rayons ultra-violets généralement appliquées varient entre 0,2 m.J/cm2 et 75 kJ/cm2, et en particulier elles sont les suivantes, pour les kêratinocytes: U.V.B.:! à 100 mJ/cm2 pour les fibroblastes: U.V.A.: 2 à 75 kJ/cm2 U.V.B.: 5 à 30 mJ/cm2 U.V.C. : 0,2 à 0,5 mJ/cm2

Après irradiation, un milieu de culture con-

tenant, ou non, du sérum de veau foetal, des facteurs de croissance et/ou des antibiotiques, est ajouté aux cellules et laissé en contact avec celles-ci pendant un temps qui peut varier de 12 à 48 heures, période pendant laquelle les cellules répondent à l'agression

par la synthèse de nouvelles molécules.

2) Agression par la température.

La température est une agression que l'on

peut facilement faire subir à des cellules en culture.

Le procédé suivant a été décrit par Nancy C. COLLIER et Milton J. SCHLESINGER dans "The Journal of Cell

Biology", vol. 103, Octobre 86.

A confluence, le milieu de départ, qui se

trouve à 37-C, est remplacé par un autre milieu con-

tenant de l'HEPES (acide N'-2-hydroxyéthylpipérazine-

N-éthane sulfonique). Les fibroblastes sont placés dans un bain-marie thermostaté A 45 C sous agitation pendant des temps variant de 30 min. à 3 heures. Le milieu est ensuite remplacé par du milieu Eagle's modifié, contenant ou non du sérum de veau foetal, puis laissé au contact des cellules pendant 12 à 48

2646080,

heures. Les cellules peuvent subir plusieurs chocs

thermiques successifs.

3) Agression électromagnétique.

On soumet le milieu de culture à un champ magnétique homogène inférieur à 20 Gauss, avec un pic d'une durée de 5 millisecondes et une fréquence inférieure à 100 Hertz. Ledit champ magnétique est

obtenu par l'utilisation d'une paire de bobines.

d'Helmotz entourant les cultures cellulaires à conflu-

ence. Le milieu de culture est changé avant passage dans le champ électromagnétique. La durée d'application du champ peut aller de I à 4 jours. Un procédé de ce type est décrit par BERG dans la revue

"Studia Biophysica", volume 119, 1987, numéros 1-3.

4) Agression chimique.

L'agression chimique peut être obtenue à

l'aide de détergents, de métaux lourds ou de sels.

) Agression par carence. Elle est obtenue en éliminant du milieu de culture des éléments normalement présents tels que des acides aminés, des vitamines, des sucres, des bases nucléiques, des facteurs de croissance, des lipides du

sérum de veau foetal et-le sérum lui-mBme.

Lorsque les cultures ont subi l'agression ou les agressions désirées, les substances protectrices, qui ont été produites en réponse à ladite (auxdites) agression(s), sont récupérées; elles sont contenues dans les cellules elles-mêmes (comme c'est le cas par exemple des protéines de choc thermique) et/ou dans le milieu de culture (comme c'est le cas par exemple des

cytokines et des facteurs de croissance).

Dans le cas o l'on souhaite récupérer les

cellules, le milieu de culture est éliminé par aspira-

tion. Les cellules sont rincées, puis grattées de leur support et récupérées dans du "phosphate buffer

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saline". Elles sont ensuite broyées ou lyophilisées, et introduites dans des compositions cosmétiques. Si

l'on veut isoler des cellules les substances protec-

trices synthétisées, on les fait éclater par différentes techniques connues telles que sonication, choc osmotique, potter. La suspension obtenue est alors centrifugée, et,-selon le cas, le surnageant et/ou le culot sont récupérés comme principe actif pour Otre incorporé dans les compositions cosmétiques

selon l'invention.

Dans le'cas o on désire récupérer le milieu de culture, on effectue une centrifugation après aspiration du milieu, afin d'éliminer les cellules présentes. Il est ensuite possible de concentrer le surnageant par évaporation de manière à potentialiser

les effets des substances présentes.

Selon l'invention, le support cosmétiquement acceptable de la composition peut contenir, outre le ou les principe(s) actif(s) ci-dessus défini(s), au moins un composé cosmétiquement actif utilisable, de façon connue, comme constituant d'une composition cosmétique. La composition cosmétique peut être sous forme de crème, lait, lotion, ou sérum. Dans le cas o on prépare une crème, on peut introduire de 0,1 à 30 % en poids de principe(s) actif(s) dans la composition cosmétique. Dans le cas o la composition cosmétique est de type sérum, les quantités de principe(s) actif(s) introduites peuvent être très supérieures,

notamment comprises entre 30 et 100 %.

On appliquera, en général matin et soir, 1 à 2 mg/cm en moyenne de composition, cette quantité étant plus faible (0,02 mg/cm2 environ) dans le cas de

sérum ou de lait.

Les exemples donnés ci-dessous, à titre purement illustratif et non limitatif, permettront de

mieux comprendre l'invention.

EXEMPLE 1

On décrit ci-après un procédé de préparation

d'un principe actif contenant des substances protec-

trices. S 1. Mise en culture de kératinocytes Dans un premier stade, on cultive des kêratinocytes, qui proviennent d'une plastie mammaire

d'une femme de 40 ans.

Après avoir été découpé par un électrokératome de 0,3 mm, l'épiderme est séparé du derme supérieur par immersion dans une solution de trypsine ayant une concentration de 0,20 %. L'épiderme et le trypsinisat sont alors récoltés, soumis à une agitation pendant 1 minute, puis à une filtration à

travers deux couches de gaze stérile.

Les kératinocytes sont alors ensemencés dans un milieu Eagle's modifié Dulbecco, contenant en poids % de sérum de veau foetal, 1 X d'acides aminés non essentiels, I % de pyruvate de Na et des antibiotiques (Pénicilline: 75 U.l./ml, streptomycine: 75 1g/ml et

fongizone: 8,7 Fg/ml).

2. Irradiation aux U.V.

Dans un second stade, on soumet les cellules à l'action de rayons ultraviolets. Pour ce faire,

après 5 jours, le milieu de culture défini sous 1 ci-

dessus est éliminé, le tapis cellulaire est lavé par une solution saline tamponnée, puis les cellules sont irradiées par des UVA à raison de 300 mJ/cm2. Le milieu de culture est ensuite prélevé tous les jours

pendant 5 jours. Il est alors soumis à une centrifuga-

tion à 1000 g pendant 10 minutes, de façon à séparer

les cellules du milieu de culture.

Le milieu ou surnageant est concentré par

évaporation et on obtient un premier principe actif.

Les cellules séparées par centrifugation sont rincées, frottées de leur support, puis mises en suspension dans de l'eau distillée de façon à les faire éclater. La solution obtenue après éclatement

constitue un second principe actif.

On mélange à parties égales les deux prin-

cipes actifs et on utilise le mélange dans les exem-

ples 2 à 9 donnés ci-après, pour illustrer les compo-

sitions selon l'invention.

EXEMPLE 2 - Crème solaire La formulation est donnée en % en poids: Principe actif de l'exemple 1 12 Huile de vaseline 34 Beurre de cacao 2 Myristate d'isopropyle 10 Cire d'abeille 3 Lanolate de magnésium 2,4 Alcool de lanoline 0,6 Poudre de polyéthylene 10 Antioxydant (butyl hydroxyanisole + butyl hydroxytoluène) 0,01 Filtre solaire vendu sous la dénomination commerciale "Parsol Ultra" par la Société "Givaudan" 5 Parfum 1 Conservateur 0,3 Eau déminéralisée q.s.p. 100 Cette composition protège la peau vis-à-vis des rayonnements U.V. qui l'agressent. Elle contribue à limiter la formation des radicaux libres et leurs conséquences au niveau cutané, et elle atténue

l'augmentation du réseau microdépressionnaire.

EXEMPLE 3 - Emulsion huile dans l'eau La formulation est donnée en % en poids Principe actif de l'exemple 1 30 Stéarate de glycérol 2 Monostéarate de sorbitan A 20 moles d'oxyde d'éthylene commercialisé sous la dénomination "Tween 60" 1 Alcool cétylique 0,5 Acide stéarique 1,4 Triéthanolamine 1,1 Mélange d'acides carboxyvinyliques commercialisé sous la dénomination "Carbopol 940" 0,4 Fraction liquide de graisse de karité 8 Huile de germes de mals 6 Perhydrosqualene de synthèse 10 Antioxydant (butyl hydroxyanisole + butyl hydroxytoluène) 0,015 Parfum 1 Conservateur 0,3 Eau déminéralisée q.s.p. 100 Cette composition, utilisée en particulier chez des personnes dont la peau est à tendance sèche, procure une bonne hydratation du Stratum Cornéum et protège la peau vis-à-vis de variations notables d'humidité. Elle améliore de ce fait l'élasticité cutanée. EXEMPLE 4 - Crème de soins constituée par une émulsion eau dans l'huile La formulation est donnée en % en poids: Principe actiTf (a) 25 Monoisostéarate de sorbitan 5 Cire microcristalline 1 Huile de-vaseline 5 Huile de germes de mais 7 Huile de soja 7 Esters d'acides gras en C8 - C18 et d'alcools gras en C12 - C18 1

12 C18

Gel de montmorillonite modifiée organiquement et d'huile neutre (triglycêrides d'acides caprylique et caprique) 5 Propylène glycol 3 Antioxydant (butyl hydroxyanisole + butyl hydroxytolu1ne) 0,01 Conservateur 0,3 Eau déminéralisée q.s.p. 100 EXEMPLE 5 - Crème de soins constituée par une émulsion eau dans l'huile La formulation est donnée en % en poids: Principe actif (a) 15 Lanolate de magnésium 14,4 Alcool de lanoline 3,6 Myristate d'isopropyle - 8 Huile de paraffine 18 Huile de tournesol 22 Antioxydant (butyl hydroxyanisole + butyl hydroxytoluène) 0, 01 Ozokérite 4 Conservateur,'s Eau déminéralisée q.s.p. 100 (a) Le principe actif de ces deux émulsions a été obtenu à partir d'une culture de kératinocytes soumise à une agression par la température selon le procédé-suivant: les kératinocytes ont été cultivés à

37'C et à confluence le milieu de culture a été rem-

placé par un milieu contenant de l'acide N'-2-

hydroxyéthylpipérazine N-éthane sulfonique; ils ont été ensuite placés dans un bain-marie thermostaté à 45'C sous agitation pendant 2 heures; ce milieu a ensuite été remplacé par du milieu Eagle's modifié

contenant du sérum de veau foetal, puis laissé au con-

tact des cellules pendant 36 heures.

Les deux émulsions huile dans l'eau des exempleF 4 et 5 protègent la peau contre les phénomènes de sécheresse, notamment.en favorisant la

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cohésion cellulaire altérée lors de var.iations de température. EXEMPLE 6 - Crème teintée La formulation est donnée en % en poids: Principe actif (b) 7 Glycérides partiels d'acides gras 8 Alcool cétylique 0,5 Décylester d'acide oléique 8 Huile de vaseline 4 Perhydrosqualène 16 Ether polyglycolique d'alcool gras saturé 4 Silicate de magnésium et d'aluminium 0,7 Poudre de polyéthylène vendue sous la dénomination commerciale "Polymist B6" par la Société "Allied Chemicals" 4 Oxydes de fer 2,2 Conservateur 0,3 Eau déminéralisée q.s.p. 100 (b) Le principe actif de cette crème a été obtenu à partir d'une culture de kératinocytes soumise

à une agression à l'aide d'un détergent.

L'application régulière de cette crème per-

met d'améliorer le teint, qui a tendance à ternir avec l'âge, et ceci d'autant plus que la peau se trouve

dans un environnement pollué.

EXEMPLE 7 - Lait corporel La formulation est donnée en % en poids Principe actif (c) 10 Stéarate de glycérol 2 Monostéarate de sorbitan à moles d'oxyde d'éthylène 1 Acide stéarique 1,4 Triéthanolamine 0,9 Mélange d'acides carboxy-vinyliques commercialisé sous la dénomination commerciale "Carbopol 940" 0,2 Huile de jojoba 3 Huile de vaseline 8 Antioxydant (butyl hydroxyanisole + butyl hydroxytoluène) 0,01 Parfum 1 Conservateur 0,3 Eau déminéralisée q.s.p. 100 (c) Le-principe actif de ce lait a été obtenu à partir d'une culture de fibroblastes soumise

à une agression par carence en vitamines.

Le lait, appliqué sur le corps entier, per-

met de limiter les effets de carence ou sub-carence

qui se manifestent au cours du vieillissement.

EXEMPLE 8 - Crème de soins On fabrique une dispersion aqueuse de vésicules lipidiques par le procédé décrit dans le brevet français 2 315 991 A partir des substances suivantes: Lipide amphiphile non-ionique de formule générale:

{ R OCH-CH - OH

L 2 2

CH2CHJ

dans laquelle R est un radical hexadécyle et f a une valeur statistique moyenne égale à 3 3,8 g p-sitostérol 3,8 g Dicétyl phosphate 0,4 g Conservateur 0,3 g Eau déminéralisée 27,6 g Principe actif (d) 20 g On ajoute à la dispersion de vésicules obtenue dans la première phase, les substances suivantes: Huile de tournesol 35 g Parfum 0,6 g Mélange d'acides carboxyvinyliques commercialisé sous la dénomination commerciale "Carbopol 940" 0,2 g Triéthanolamine 0,2 g Eau déminéralisée 8,1 g (d) Le principe actif de cette crème a été obtenu à partir d'une culture de fibroblastes soumise A une agression électromagnétique. On a soumis le milieu de culture à un champ magnétique de 15 Gauss ayant une fréquence de 50 Hertz, avec un pic d'une durée de 5 millisecondes obtenu à l'aide d'une paire de bobines de Helmotz. La durée d'application est de 3 jours. Les propriétés restructurantes de cette

crème permettent d'atténuer les marques de vieillisse-

ment telles que les rides.

EXEMPLE 9 - Sérum La formulation est donnée en % en poids: Hydroxypropylméthylcellulose 0,3 Gomme de xanthane 0,2 Polyethylene glycol éther du méthyl ' glucose dénommé Méthyl gluceth-20 dans le "CTFA Cosmetic Dictionary" 1982 publié par "The Cosmetic Toiletry and Fragrance Association" 1 Méthyl parahydroxybenzoate 0,15 Propyl parahydroxybenzoate 0,05

Parfum q.s.

Principe actif (e) q.s.p. 100 (e) Le principe actif de ce sérum a été obtenu à partir d'une culture de kératinocytes et de fibroblastes, soumise à une agression simultanée par

carence en vitamines et aux ultra-violets.

Cette composition améliore la tonicité cutanée. Dans tous ces exemples de formulation, le

S principe actif utilisé peut être remplacé par un prin-

cipe actif obtenu à partir d'une culture de cellules

soumise à une autre agression.

Claims

REVENDICATIONS

1 - Composition cosmétique contenant, dans

un support cosmétiquement acceptable, au moins un com-

posé obtenu par culture de cellules animales, caractérisée par le tait que ledit composé est une substance protectrice de la peau ou des cheveux synthétisée par lesdites cellules en réponse à au moins une agression, lorsqu'elles sont cultivées in vitro. 2 - Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que les cellules animales, qui produisent la (ou les) substance(s) protectrice(s), sont des cellules extraites de la peau

humaine, de la gaine d'un cheveu humain ou d'un cil.

3 - Composition selon la revendication 2, caractérisée par le fait que les cellules de la peau

humaine sont des kératinocytes et/ou des fibroblastes.

4 - Composition selon l'une des revendica-

tions 2 ou 3, caractérisée par le fait que les cel-

lules productrices de substances) protectrice(s) sont

prélevées chez la personne destinée à utiliser la com-

position cosmétique.

- Composition selon la revendication 4, caractérisée par le fait que les cellules prélevées sont congelées et conservées durant plusieurs années

avant remise en culture.

6 - Composition selon l'une des revendica-

tions 1 à 5, caractérisée par le fait que l'agression est choisie dans le groupe formé par les actions d'un rayonnement ultra-violet, de variations de température, d'un champ électromagnétique, d'un agent chimique et/ou d'une carence en élément normalement

présent dans le milieu de culture.

7 - Composition selon l'une des revendica-

tions 1 à 6, caractérisée par le fait qu'elle contient des principes. actifs obtenus en réponse à plusieurs agressions.

8 - Composition selon l'une des revendica-

tions 1 à 7, caractérisée par le fait que les cellules utilisées sont mises en culture,de préférence jusqu'à confluence, et subissent ensuite l'agression (ou les

agressions) choisie(s).

9 - Composition selon la revendication 8, caractérisée par le fait que la culture s'effectue en présence de précurseurs des substances qui seront

synthétisées suite à l'agression.

- Composition selon l'une des revendica-

tions 1 b 9, caractérisée par le fait que les sub-

stances protectrices sont utilisées, sans séparation ou purification préalable, sous forme d'un principe actif constitué par le milieu de culture et/ou les cellules et/ou une solution obtenue après éclatement

des cellules.

11 - Composition selon la revendication 10, caractérisée par le fait que le milieu de culture et/ou la solution obtenue par éclatement des cellules

sont concentrées.

12 - Composition selon l'une des revendica-

tions I à 11, caractérisée par le fait que son support cosmétiquement acceptable contient au moins un composé

cosmétiquement actif.

13 - Composition selon l'une des revendica-

tions 1 à 12, caractérisée par le fait qu'elle est

sous forme de crème, lait, lotion ou sérum.

14 - Composition selon la revendication 13, présentée sous forme de crème, caractérisée par le fait qu'elle contient de 0,1 à 30 % 'en poids de principe(s) actif(s) tel(s) que défini(s) à l'une des

revendications 10 ou 11.

- Composition selon la revendication 13,

présentée sous forme de sérum, caractérisée par le.

fait qu'elle contient de 30 à 100 X en poids de principe(s) actif(s) tel(s) que défini(s). l'une des

revendications 10 ou il.