FR2621048A1 - Appareil pour maintenir en contact avec un milieu liquide un echantillon biologique sur un support - Google Patents

Abstract

L'invention concerne un appareil destiné à maintenir un échantillon biologique, porté par un support, en contact avec un milieu liquide. Il comprend une chambre dont une première extrémité est ouverte et est conçue pour être reliée à un premier moyen de fermeture 15, et dont la seconde extrémité peut être fermée ou ouverte. Si elle est ouverte, cette seconde extrémité est destinée à être reliée à un second moyen 16 de fermeture. L'appareil comporte des moyens destinés à maintenir constamment le support en contact avec un milieu liquide quelle que soit l'orientation. Domaine d'application : isolement et culture de micro-organismes, etc.

Description

L'invention concerne un appareil pour main-

tenir des échantillons biologiques. L'appareil convient particulièrement au transport ou a l'emmagasinage d'une matière adhérente comprenant des cultures de cellules. De plus, l'appareil est utile pour isoler et cultiver des micro-organismes. Traditionnellement, des procédés pour des tests de confirmation par culture, comprenant l'isolement et l'identification d'un micro-organisme, exigent une inoculation de cultures de cellules avec des spécimens prélevés sur des patients et une incubation pour permettre le développement du micro-organisme. Le micro- organisme est ensuite détecté au moyen de diverses méthodes comprenant une observation de l'effet cytopathologique et des tests de

confirmation d'identité par des antigènes du micro-

organisme. Des cultures de cellules utilisées dans de tels processus peuvent être adhérentes, c'est-à-dire qu'elles se lient directement à un support pendant leur croissance. Ces supports comprennent ceux qui sont intégrés au récipient, par exemple les parois intérieures d'un récipient, tel qu'un tube, une plaque de microtitrage, une fiole ou analogue. Des supports comprennent également des lames ou lamelles de microscope, ou analogues, qui ne font pas

partie intégrante du récipient.

Dans les cas o la matière adhérente est emmagasinée ou transportée, ii est important de le faire sans endommager la matière. Dans certains cas, le support, tel qu'une lamelle, est revêtu de la matière adhérente et est placé dans un récipient qui est rempli d'un fluide, par exemple un milieu de culture de cellules. Il est important de maintenir un contact entre la matière adhérente et le fluide pour assurer que la matière reste viable. Il est donc important de maintenir une colonne de fluide pleine

dans les récipients car, pendant le transport ou l'emma-

gasinage, les récipients risquent d'être renversés ou retournés pendant de longues périodes de temps. Si une colonne de fluide pleine n'est pas maintenue, il est nécessaire d'assurer que les récipients comportant une matière biologique sur les parois ou sur un support, tel qu'une lame ou lamelle, sont maintenus dans une position droite. De plus, des fioles utilisées dans le passé pour le transport ou l'emmagasinage d'échantillons biologiques sont affectées de l'absence d'un mécanisme assurant qu'un support non intégré, qu'elles contiennent, conserve son orientation d'origine pendant le transport ou l'emmagasinage. Si un tel support est retourné de façon que la matière adhérente soit tournée vers le bas, les

opérations suivantes, par exemple un processus d'inocula-

tion, en sont affectées.

Un second domaine à problème concerne la manipulation d'un support ensemencé, c'est-à-dire un support sur lequel une matière biologique est déposée, pendant des processus tels que l'isolement et la culture d'échantillons biologiques sur la matière ensemencée. Par exemple, avant le fixage, certains systèmes nécessitent que le support ensemencé soit retiré du récipient dans lequel il a été transporté ou emmagasiné. Cette manipulation peut impliquer de manoeuvrer une matière infectieuse avant le fixage et il peut donc en résulter des dangers pour la santé. En outre, dans les cas o il est nécessaire d'enlever un support ensemencé du récipient pour colorer la matière biologique, par exemple les cellules, le réactif s'écoule souvent de la surface du support, ce qui nécessite davantage de réactif et davantage de temps pour mener à bien le processus de coloration. De plus, si le support est coloré après avoir été retiré du récipient, il faut faire très attention de colorer uniformément le support. Un recouvrement non uniforme de la surface du support entraîne une diminution de l'intensité de coloration sur des zones faiblement recouvertes et un artefact de "bord séchant" sur la matière adhérente. En outre, si le support est coloré à l'extérieur du récipient, il est rincé en étant immergé dans un bain d'eau. Cette opération nécessite de manipuler le support avec des pinces et de le plonger dans le bain d'eau. Au cours de cette opération, il existe un risque que le support soit brisé ou que la matière adhérente soit endommagée. Un support, tel qu'une lamelle, revêtu d'une culture de cellules adhérente est en général retiré du récipient, tel qu'un tube ou une fiole, par l'utilisation d'une aiguille coudée pour déloger le support du fond du récipient. Cette opération est difficile et est rendue

encore plus difficile par la présence d'un fluide au-

dessous du support. Après que le support a été délogé du fond du récipient, il est en général retiré du récipient

avec une paire de pinces et monté sur une lame de micros-

cope pour être observé. Ce processus demande de l'expé-

rience et une dextérité considérable. Il existe un risque élevé que le support soit brisé ou que la culture de cellules adhérente soit endommagée pendant les opérations d'enlèvement. Un système de culture de cellules appelé "système Gencell" a été utilisé pour transporter des échantillons biologiques. Le système est constitué d'un couvercle, d'une fiole et de deux pièces de matière plastique qui peuvent être insérées dans la fiole. L'une des pièces de matière plastique à insérer est conçue pour supporter une lamelle. Il est nécessaire de manipuler à la main la lamelle avec des pinces pour la retirer des pièces à insérer. Etant donné la position de la lamelle sur les pièces à insérer, la lamelle est souvent retirée de la fiole avant la coloration pour économiser du réactif. Des volumes relativement grands de réactif doivent être utilisés pour colorer uniformément la lamelle si elle n'est

pas retirée de la fiole.

Il existe donc un besoin portant sur un appareil qui maintient un contact entre un milieu fluide et un support revêtu d'une matière adhérente, même si le récipient est basculé ou renversé pendant de longues périodes de temps. De plus, il existe un besoin portant sur un appareil dans lequel un support en cours de transport dans cet appareil conserve son orientation d'origine pendant le transport. Il existe également un besoin portant sur un appareil conçu pour qu'un support puisse en être retiré sans l'utilisation d'un instrument tel qu'une

aiguille ou des pincettes.

Les brevets des Etats-Unis d'Amérique N 2 665 690, N' 4 065 358, N 4 470 505, N 4 342 724 et NO 3 615 222 décrivent des récipients à compartiments multiples. Des récipients et des dispositifs de fermeture sont décrits dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique N 3 432 066, N' 3 540 612 et N' 3 592 349. Les brevets des

Etats-Unis d'Amérique N 4 546 085 et N' 4 321 330 décri-

vent des dispositifs de culture. Divers dispositifs de fermeture sont décrits dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique NO 3 005 564, N' 3 164 279, N' 3 223 269,

N 3 297 184, N' 3 370 732, N' 3 991 895 et Né 4 094 429.

L'invention concerne un appareil pour main-

tenir un échantillon biologique sur un support. Le support peut faire partie intégrante de l'appareil proprement dit, par exemple une paroi latérale intérieure ou le fond de l'appareil. En variante, le support peut ne pas être intégré, c'est-à-dire qu'il peut être séparé de l'appareil

et inséré dans celui-ci, par exemple une lame de micros-

cope, une lamelle ou analogue. L'appareil comprend une chambre dégagée, qui présente des surfaces intérieure et extérieure, avec une première extrémité ouverte et une

seconde extrémité qui peut être ouverte ou fermée.

L'appareil comprend aussi des moyens de fermeture conçus

pour être reliés à la chambre, à la première extrémité.

Comme indiqué, la seconde extrémité de la chambre peut être fermée ou ouverte. Dans une forme préférée de réalisation de l'invention, la seconde extrémité de la chambre est ouverte et l'extrémité ouverte est conçue pour être reliée

à un second moyen de fermeture.

Lorsque l'appareil est assemblé, le premier moyen de fermeture constitue, conjointement avec la chambre, un moyen pour maintenir une colonne de fluide pleine dans l'appareil et pour maintenir le support en contact avec le fluide constamment pendant le transport ou

l'emmagasinage, quelle que soit l'orientation de l'appa-

reil. Lorsque l'appareil est assemblé de façon que le premier moyen de fermeture soit relié fermement à la première extrémité de la chambre, au moins deux joints d'étanchéité sont formés entre la chambre et le premier moyen de fermeture. Au moins le joint d'étanchéité situé le

plus a l'extérieur est étanche aux liquides.

De plus, dans les formes de réalisation o le support n'est pas intégré à l'appareil, après avoir été relié à la seconde extrémité de la chambre, le second moyen de fermeture constitue, conjointement avec la chambre, un moyen pour maintenir l'orientation d'origine du support renfermé dans l'appareil. Par conséquent, l'appareil selon l'invention a pour avantage d'empêcher un support non

intégré de se retourner pendant le transport ou l'emma-

gasinage. Lorsque le second moyen de fermeture est relié fermement & la seconde extrémité de la chambre, au moins un joint étanche aux liquides est formé entre la chambre et le

second moyen de fermeture.

Après que l'appareil a été rempli d'un fluide et que les moyens de fermeture ont été fermement reliés de façon à former des joints étanches aux liquides, l'appareil peut être retourné et la matière adhérente située sur le support n'est pas exposée à l'air. Par conséquent, le retournement de l'appareil pendant le transport ou le stockage n'a pas pour résultat d'endommager la matière adhérente, y compris les cellules. De plus, étant donné qu'une colonne de fluide pleine est formée, l'endommagement de la matière adhérente par un mouvement du fluide dans

l'appareil est impossible.

L'appareil selon l'invention peut être utilisé pour isoler et cultiver des micro-organismes sur un support sans que celui-ci soit enlevé ou détaché de l'appareil. De plus, dans une forme de réalisation de l'invention dans laquelle le support n'est pas formé d'une seule pièce avec l'appareil, le support est libéré et monté sur une surface telle qu'une lame de microscope sans qu'il soit utilisé un

instrument tel qu'une aiguille coudée ou des pincettes.

L'invention sera décrtie plus en détail en regard des dessins annexés à titre d'exemples nullement limitatifs et sur lesquels: la figure 1 est une vue isométrique d'un dispositif selon une forme de réalisation de l'invention; la figure lA est une vue isométrique éclatée du premier moyen de fermeture, du second moyen de fermeture et de la chambre selon la figure 1; la figure 2 est une élévation avec coupe du dispositif, suivant la ligne 2-2 de la figure 1; la figure 2A est une élévation avec coupe du second moyen de fermeture selon une forme de réalisation de l'invention; la figure 3 est une vue isométrique éclatée d'une autre forme de réalisation d'un premier moyen de fermeture, d'un second moyen de fermeture et d'une chambre selon l'invention; la figure 4 est une élévation avec coupe des premier et second moyens de fermeture et de la chambre de la figure 3 dans l'état assemblé; la figure 5 est une vue en plan de dessus du second moyen de fermeture, avec coupe suivant la ligne 5-5 de la figure 4; la figure 6 est une vue isométrique d'une autre forme de réalisation d'un dispositif conforme à l'inven- tion; la figure 7 est une élévation du dispositif, avec coupe suivant la ligne 7-7 de la figure 6; la figure 8 est une élévation, avec coupe, d'un dispositif selon une forme de réalisation de l'invention; et la figure 9 est une vue & échelle agrandie

d'une partie de la figure 8, suivant la ligne tiretée 9-9.

L'appareil,selon l'invention convient au maintien d'une matière biologique sur un support. Il est

particulièrement utile pendant le transport et l'emma-

gasinage de la matière. Le support peut être retiré de façon indépendante de l'appareil, par exemple être une lamelle ou une lame, ou bien il peut être intégré à l'appareil, tel qu'une surface intérieure du fond ou d'une paroi latérale. L'appareil est également utile pour isoler et cultiver des micro-organismes. Sous son aspect le plus large, l'appareil comprend une chambre dégagée qui est ouverte à une première extrémité et qui présente des surfaces intérieure et extérieure. L'appareil comprend aussi un premier moyen conçu pour être relié à la première extrémité de la chambre. La chambre présente également une seconde extrémité. L'appareil comprend en outre un second moyen de fermeture. Le second moyen de fermeture peut être formé d'une seule pièce avec la chambre, à sa seconde extrémité, c'est-à-dire que la seconde extrémité peut être fermée. En variante, la seconde extrémité peut être ouverte et le second moyen de fermeture peut être conçu pour être relié à la seconde extrémité ouverte de la chambre. Le premier moyen de fermeture constitue, conjointement avec la chambre et le second moyen de fermeture, un moyen destiné & maintenir la matière portée par le support constamment en

contact avec un milieu liquide, quelle que soit l'orienta-

tion de l'appareil. Le second moyen de fermeture constitue, conjointement avec la chambre, un moyen pour maintenir l'orientation d'origine d'un support non intégré qui est

enfermé dans l'appareil.

Le mot "support" tel qu'utilisé ici désigne toute surface sur laquelle une matière biologique peut être ensemencée ou à laquelle une telle matière adhère. A titre d'exemple non limitatif, de tels supports comprennent ceux qui sont formés d'une seule pièce avec l'appareil selon l'invention, par exemple la surface intérieure de la paroi inférieure du second moyen de fermeture, la surface ou les surfaces intérieures de la paroi latérale du second moyen de fermeture, la surface ou les surfaces intérieures de la chambre ou de l'élément tubulaire et la surface intérieure de l'extrémité fermée de la chambre ou de l'élément tubulaire. Le mot "support" tel qu'utilisé ici englobe aussi toute surface qui n'est pas réalisée d'une seule pièce avec l'appareil selon l'invention, mais qui peut être insérée dans le second moyen de fermeture ou dans la chambre ou élément tubulaire. A titre d'exemple nullement limitatif, des supports non intégrés comprennent des lames, des plaques, des lamelles, des particules, des perlés et analogues. Les supports peuvent être réalisés à partir de diverses matières comprenant, à titre d'exemple, des métaux tels que l'acier; des matières composites telles que des céramiques ou du verre, ou des matières plastiques telles que du "Nylon", du polypropylène, du polyéthylène, du

polystyrène et analogue.

Dans une forme de réalisation de l'invention, la chambre dégagée est un élément tubulaire qui présente des surfaces intérieure et extérieure ouvertes à des

première et seconde extrémités opposées.

Dans une autre forme de réalisation de l'invention, la chambre dégagée est un élément tubulaire ayant des surfaces intérieure et extérieure ouvertes à une première extrémité. Une seconde extrémité, opposée, est fermée. L'extrémité fermée présente une surface intérieure

et une surface extérieure.

Les moyens destinés à maintenir la matière adhérente sur un support, en contact avec un milieu liquide, comprennent des moyens destinés à former une colonne de fluide pleine dans l'appareil fermé, lesquels moyens comprennent des moyens d'étanchéité placés entre la chambre ou l'élément tubulaire et le premier moyen de fermeture. Ces moyens d'étanchéité comprennent un premier moyen d'arrêt situé sur la surface intérieure de l'élément tubulaire. Le premier moyen d'arrêt est avantageusement proche de la première extrémité de la chambre. Lorsque le premier moyen de fermeture est relié fermement à la chambre ou à l'élément tubulaire, un contact est établi entre le premier moyen de fermeture et le premier moyen d'arrêt. Ce premier moyen d'arrêt est avantageusement un rebord annulaire. Dans une forme préférée de réalisation, le rebord annulaire est biseauté et porte contre une surface biseautée située sur le premier moyen de fermeture lorsque celui-ci est relié fermement à la première extrémité de l'élément tubulaire. L'angle de la surface biseautée sur le

premier moyen de fermeture est généralement d'environ 10-

', avantageusement de 35-50' par rapport à l'horizontale, et l'angle du rebord annulaire biseauté sur l'élément

tubulaire est en général d'environ 5' à 45', avantageuse-

ment de 25 à 40' par rapport à l'horizontale.

Les moyens destinés à maintenir un contact entre la matière biologique et le fluide comprennent aussi la formation d'un second moyen d'étanchéité entre la chambre ou l'élément tubulaire et le premier moyen de fermeture. A titre d'exemple non limitatif, un tel moyen d'étanchéité aux liquides comprend la surface intérieure de la chambre ou de l'élément tubulaire, une surface du premier moyen de fermeture et au moins une bague annulaire située sur la surface intérieure de la chambre ou de l'élément tubulaire, entre le premier moyen d'arrêt et sa première extrémité. Ce moyen d'étanchéité aux liquides peut également comprendre au moins une bague annulaire située sur la surface extérieure de la chambre ou de l'élément tubulaire. Le second moyen d'étanchéité est avantageusement proche de la première extrémité de l'élément tubulaire ou

chambre. Dans une autre forme de réalisation de l'inven-

tion, le second moyen d'étanchéité est au moins une bague annulaire située sur la surface intérieure de la seconde jupe annulaire du premier moyen de fermeture. Un tel moyen est avantageusement proche de la partie supérieure du

premier moyen de fermeture.

Les moyens destinés à maintenir un contact entre la matière biologique et le fluide comprennent aussi, optionnellement, un troisième moyen d'étanchéité entre la chambre ou l'élément tubulaire et le premier moyen de fermeture. A titre d'exemple non limitatif, un tel moyen d'étanchéité comprend au moins une bague annulaire située sur la surface extérieure de la première jupe annulaire du premier moyen de fermeture, au moins une bague annulaire située sur la surface intérieure de la seconde jupe annulaire du premier moyen de fermeture, au moins une bague annulaire située sur la surface intérieure ou sur la

surface extérieure de la chambre ou de l'élément tubulaire.

L'appareil selon l'invention permet à une

colonne de fluide pleine d'être formée afin que l'échantil-

lon maintenu dans cette dernière soit en contact constant avec le fluide, quelle que soit l'orientation donnée & l'appareil. A cet effet, on remplit l'appareil, contenant l'échantillon biologique adhérent, avec un fluide afin que ce dernier dépasse légèrement au-dessus du premier moyen d'arrêt. Le fluide au-dessus du premier moyen d'arrêt est un fluide "excédentaire". Lorsque le premier moyen de fermeture est inséré dans la première extrémité de l'élément tubulaire et qu'il est relié fermement à l'élément tubulaire, le premier moyen d'arrêt porte contre le premier moyen de fermeture pour former un premier moyen d'étanchéité. Dans une forme préférée de réalisation, le premier moyen d'étanchéité comprend la jonction de deux surfaces biseautées. Le premier moyen de fermeture entre également en contact avec l'élément tubulaire pour former un deuxième moyen d'étanchéité, de préférence situé entre le premier moyen d'étanchéité et la première.extrémité de l'élément tubulaire et il forme un joint d'étanchéité. Le fluide excédentaire est chassé au-delà du premier moyen d'étanchéité jusque dans un espace défini entre le premier moyen de fermeture et l'élément tubulaire, par les premier et deuxième moyens d'étanchéité. Etant donné que le fluide excédentaire est retenu à l'intérieur de l'espace, il ne

contamine pas l'échantillon ou l'utilisateur.

L'élément tubulaire comprend optionnellement, sur sa surface extérieure, des moyens de prise. Ces derniers sont généralement placés vers la seconde extrémité de l'élément tubulaire. A titre d'exemple, les moyens de prise comprennent au moins une nervure, une arête, une saillie ou une gorge, une surface gravée en relief ou

texturée, ou analogue.

Le premier moyen de fermeture peut comprendre un bouchon qui établit un contact ferme avec le premier moyen d'arrêt lorsque le premier moyen de fermeture est relié fermement & la première extrémité de l'élément tubulaire. Le bouchon peut être plein ou creux. Dans une forme préférée de réalisation de l'invention, le bouchon comprend un cylindre creux ayant une extrémité ouverte et une extrémité fermée, constituée par un fond ayant des surfaces intérieure et extérieure. Le bouchon comporte une jupe ou paroi latérale s'étendant vers le bas, qui est conçue pour s'ajuster dans la première extrémité ouverte de

l'élément tubulaire. Dans une forme préférée de réalisa-

tion, le bouchon présente une surface biseautée & la jonction du fond et de la jupe. Dans une forme préférée de réalisation, le premier moyen de fermeture comprend une seconde jupe ou paroi annulaire s'étendant vers le bas. La seconde jupe présente des surfaces intérieure et extérieure et elle est reliée à une partie supérieure du premier moyen de

fermeture et s'étend vers le bas de cette partie supé-

rieure, généralement à partir de la périphérie de la partie supérieure. Le diamètre intérieur de la seconde jupe est plus grand que le diamètre extérieur de la première

extrémité de l'élément tubulaire.

La seconde jupe peut être de même longueur que la première jupe, ou bien peut être plus courte ou plus longue que la première jupe. Dans une forme préférée de réalisation du premier moyen de fermeture, la seconde jupe ou jupe extérieure est plus longue que la première jupe ou jupe intérieure. Une telle configuration permet de manipuler l'appareil pour retirer le premier moyen de fermeture de la première extrémité de l'élément tubulaire sans toucher à tout fluide qui adhère au premier moyen de

fermeture.

De plus, le premier moyen de fermeture comprend optionnellement des moyens destinés à le saisir ou le prendre pour aider à retirer le moyen de fermeture de l'élément tubulaire. A titre d'exemple non limitatif, ces moyens de préhension comprennent une surélévation de la surface extérieure de la seconde jupe annulaire, par exemple par un gaufrage ou une texturation, ou par des saillies telles que des nervures ou des arêtes. De la même manière, les moyens de préhension comprennent une gravure en creux de la surface extérieure de la seconde jupe annulaire, par exemple par la réalisation de gorges dans la surface. De plus, les moyens de préhension comprennent une cloison qui est avantageusement plate et verticale et qui est montée ou fixée sur des côtés opposés du cylindre ou bouchon creux. La surface extérieure de la cloison peut être lisse ou texturée, par exemple avec des nervures ou des zones gaufrées pour faciliter la prise. La cloison peut également présenter au moins un trou dans ou à travers sa surface pour permettre l'insertion d'un instrument permettant de saisir le premier moyen de fermeture ou de retirer le premier moyen de fermeture de l'élément tubulaire. Le premier moyen de fermeture possède deux positions de fermeture Par exemple, certains types de matières biologiques exigent une pression partielle accrue d'anhydride carbonique atmosphérique pour favoriser une croissance optimale. Dans ces cas, le premier moyen de fermeture est placé librement sur l'élément tubulaire, permettant à un échange gazeux d'avoir lieu. Dans les cas o il est important d'assurer qu'un joint étanche aux liquides est formé, par exemple pendant le transport de l'appareil selon l'invention ou lorsqu'une matière biologique ou autre ne nécessitant pas d'anhydride carbonique est utilisée, le premier moyen de fermeture est relié fermement à l'élément tubulaire de façon à se trouver

dans la position de fermeture complète.

Dans les formes de réalisation de l'invention dans lesquelles la seconde extrémité de la chambre est fermée, la seconde extrémité fermée est constituée par le second moyen de fermeture. Dans les formes de réalisation de l'invention dans lesquelles la seconde extrémité de la chambre est ouverte, le second moyen de fermeture présente avantageusement une extrémité ouverte, une paroi latérale ayant des surfaces intérieure et extérieure et une extrémité fermée constituée par un fond ayant des surfaces intérieure et extérieure. Dans une forme de réalisation, le

second moyen de fermeture est cylindrique.

Les moyens destinés à maintenir l'orientation d'origine d'un support non intégré, qui peut être inséré dans le second moyen de fermeture, comprennent des moyens destinés à maintenir une certaine distance entre la seconde extrémité ouverte de l'élément tubulaire et la surface intérieure de la paroi de fond du second moyen de fermeture lorsque l'élément tubulaire et le second moyen de fermeture sont reliés fermement. Cette distance est inférieure au diamètre intérieur du second moyen de fermeture, inférieure au diamètre d'un support non intégré et inférieure au diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte de l'élément tubulaire. Le diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte de l'élément tubulaire est également inférieur au diamètre du support non intégré. Ces moyens comprennent, à titre d'exemple non limitatif, un second moyen de butée situé sur la surface extérieure de l'élément tubulaire, à proximité de sa seconde extrémité, comprenant au moins deux saillies discontinues, une bague annulaire, un épaulement annulaire ou analogue. Dans une autre forme avantageuse de réalisation, le second moyen de butée est situé sur la surface intérieure du second moyen de fermeture. Ces moyens consistent à diminuer le diamètre intérieur du second moyen de fermeture afin que la seconde extrémité de la chambre entre en contact avec une partie rétrécie de la surface intérieure du second moyen de

fermeture, un épaulement annulaire, des saillies dis-

continues ou analogues.

Un second moyen de butée est optionnellement disposé sur le second moyen de fermeture. Dans une forme préférée de réalisation, la surface intérieure de la paroi latérale du second moyen de fermeture dépasse ou est rétrécie ou creusée de manière que, lorsque le second moyen de fermeture est relié fermement à la chambre ou à l'élément tubulaire, la paroi latérale constitue un moyen de butée destiné & maintenir la distance entre la seconde extrémité ouverte de la chambre ou de l'élément tubulaire et la surface intérieure de la paroi de fond. Dans cette forme de réalisation, la seconde extrémité de l'élément tubulaire est en contact avec la partie en creux ou en

saillie de la surface intérieure de la paroi latérale.

Dans l'appareil selon l'invention, un joint étanche aux liquides est formé entre la chambre ou l'élément tubulaire et le second moyen de fermeture. Dans des formes de réalisation dans lesquelles le second moyen de fermeture peut être séparé de la chambre, un tel moyen d'étanchéité comprend, à titre d'exemple non limitatif, au moins une bague annulaire, une arête, une saillie ou un épaulement situé sur la surface extérieure de la chambre ou de l'élément tubulaire, près de sa seconde extrémité, ou aumoins une bague annulaire, une arête, une saillie ou un épaulement situé sur la surface intérieure de la paroi latérale du second moyen de fermeture. En variante, le second moyen de fermeture et l'élément tubulaire peuvent former un joint étanche aux liquides par frottement ou ajustement. La surface extérieure du second moyen de fermeture comprend optionnellement des moyens de prise. Ces moyens comprennent, à titre d'exemple non limitatif, un gaufrage, une texturation, des bagues annulaires, des

saillies, des arêtes, des nervures ou des gorges.

Le second moyen de fermeture selon l'invention comprend optionnellement des moyens destinés à libérer un support non intégré de la surface intérieure de sa partie de fond. Par "moyens de libération", on entend tous moyens ou toutes combinaisons de moyens, utilisés seuls ou en combinaison avec une pression, pour réduire l'adhérence d'un support non intégré sur la surface intérieure de la paroi de fond du second moyen de fermeture, y compris des moyens pour soutirer un fluide au-dessous du support. Les moyens de libération comprennent, à titre d'exemple non limitatif, un gaufrage ou une texturation de la surface intérieure de la paroi de fond, au moins une gorge située à la surface intérieure de la paroi de fond, au moins une saillie, telle qu'une colonnette ou une arête, située sur la surface intérieure de la paroi de fond, ou au moins une gorge longitudinale située à la surface intérieure de la paroi latérale du second moyen de fermeture. Dans une autre forme de réalisation, les moyens de libération comprennent

une paroi de fond flexible sur le second moyen de ferme-

ture. Ces moyens permettent au support d'être aisément retiré de la surface intérieure de la paroi de fond par l'application d'une pression, par exemple avec un doigt, le bout d'une pipette, une gomme ou analogue, sur la surface extérieure de la paroi de fond. Dans une autre forme de réalisation, les moyens de libération comprennent une surface biseautée ou un épaulement situé à la jonction de la surface intérieure de la paroi latérale et d'une surface intérieure de la paroi de fond. La hauteur du second moyen de fermeture est avantageusement inférieure au diamètre du support non intégré de manière que, lorsque le second moyen de fermeture est retourné, le support tombe afin que la matière adhérente soit tournée face vers le bas sur un objet sur lequel elle tombe, tel qu'une lame de microscope. L'appareil selon l'invention peut être conçu pour la détection d'un échantillon biologique sans que l'échantillon soit retiré de l'appareil, dans des formes de réalisation dans lesquelles la paroi de fond de l'un des premier et second moyens de fermeture, ou les parois de fond de ces deux moyens, sont composées d'une matière translucide ou transparente. Ainsi, les premier et/ou second moyens de fermeture présentent une clarté optique le long de l'axe vertical de l'appareil. Par exemple, dans une forme de réalisation dans laquelle les parois de fond des premier et second moyens de fermeture sont composées d'une matière transparente ou translucide, l'échantillon peut être observé au moyen de microscopes optiques aussi bien à orientation classique qu'à orientation inversée, sans

endommagement de la matière adhérente. D'autres instru-

ments, par exemple des spectrophotomètres, peuvent être

utilisés pour analyser l'échantillon.

L'appareil selon l'invention peut être réalisé à partir de diverses matières ou de combinaisons de matières comprenant, à titre d'exemple non limitatif, un métal tel que de l'acier, des céramiques, du verre et des

matières plastiques telles que du "Nylon", du poly-

propylène, du polyéthylène, du polystyrène et analogue.

Dans les formes de réalisation dans lesquelles un support qui n'est pas formé de façon intégrée, tel qu'une lamelle

ou une lame, est utilisé, des matières plastiques hydro-

phobes telles que du polypropylène peuvent être avanta-

geuses. Le polypropylène offre d'autres avantages car il peut être optiquement clair, biologiquement inerte et

résistant à l'acétone, souvent utilisé comme fixateur.

Des cellules qui adhèrent au support peuvent être fixées sans être retirées de l'appareil selon l'invention. Ceci élimine toute manipulation inutile et évite les dangers possibles pour la santé, constitués par

la manipulation d'une matière infectieuse avant le fixage.

Si un fixateur est utilisé, il est important de choisir un appareil réalisé en une matière compatible avec le fixateur. Par exemple, le polypropylène et le verre se sont

avérés compatibles avec une fixation à l'acétone.

Dans une forme préférée de réalisation, les cellules peuvent être colorées sans être retirées de l'appareil selon l'invention. Pour réduire le volume de réactif nécessaire à la coloration, l'appareil peut être formé d'une matière hydrophobe, ce qui permet à un support

d'être coloré dans l'appareil en n'utilisant qu'environ 40-

p1, avantageusement 50-75 M1 de réactif. Par consé-

quent, en plus de réduire les manipulations de la matière, l'utilisation de l'appareil pour la coloration apporte une économie de réactif. La matière biologique peut être rincée sans qu'elle soit retirée de l'appareil, ce qui évite de casser un support à insérer ou d'endommager la matière biologique pendant que le support ou cette matière est retiré de l'appareil ou immergé dans un bain d'eau. La matière est rincée par addition de la solution de rinçage, telle qu'une solution de sel tamponnée avec un phosphate, de l'eau désionisée ou distillée, ou analogue, à l'appareil ou au

second moyen de fermeture, et agitation en douceur.

L'appareil conforme à l'invention peut être

mieux illustré en référence aux dessins annexés.

Les figures 1, 1A, 2 et 2A représentent une forme de réalisation de l'invention. En référence à présent aux figures 1, 1A et 2, une chambre dégagée 10 est avantageusement un élément tubulaire ayant des surfaces intérieure 11 et extérieure 12, qui sont ouvertes à des première 13 et seconde 14 extrémités. L'appareil comprend aussi un premier moyen de fermeture 15 et un second moyen de fermeture 16 qui sont conçus pour être reliés à la chambre 10, à ses première et seconde extrémités ouvertes

13 et 14, respectivement.

Le volume particulier du dispositif selon l'invention dépend de l'utilisation prévue de ce dispositif et de la matière biologique transportée, emmagasinée ou analysée. Le dispositif présente avantageusement un diamètre extérieur lui permettant d'être logé dans des godets de centrifugeuse de faible volume, utilisés dans de nombreux laboratoires. Normalement, une capacité de 2 ml à ml est considérée comme étant une gamme pratique lorsque le dispositif est totalement assemblé. La capacité est souvent de 2 ml à 15 ml, et plus habituellement de 2 ml à ml. Après que l'appareil selon l'invention a été assemblé, le premier moyen de fermeture 15 constitue, conjointement avec la chambre 10, des moyens destinés à maintenir un contact entre une matière biologique adhérent à un support et un milieu liquide se trouvant dans

l'appareil, quelle que soit l'orientation de ce dernier.

Ces moyens comprennent des moyens destinés à former une colonne de liquide pleine dans l'appareil, comprenant au moins deux moyens d'étanchéité C et C'. Le premier moyen d'étanchéité C comprend un premier moyen de butée 27 sur la surface intérieure 11 de la chambre 10, conjointement avec

une surface biseautée 37 du premier moyen de fermeture 15.

Le premier moyen de butée 27 peut être un rebord annulaire.

Ce premier moyen de butée 27 peut être biseauté.

Les moyens destinés à maintenir une colonne de

fluide pleine comprennent aussi un second moyen d'étan-

chéité C' destiné à former un joint étanche aux liquides

entre la chambre 10 et le premier moyen de fermeture 15.

Comme représenté, le second moyen C' d'étanchéité comprend, à titre d'exemple non limitatif, au moins une bague annulaire 17 située sur la surface extérieure 12 de la chambre 10, à proximité de sa première extrémité 13, coopérant avec une surface intérieure 39 d'une seconde jupe annulaire 38. Comme montré, l'appareil comprend aussi un moyen facultatif C" d'étanchéité qui, par exemple, est situé à la jonction de la surface intérieure il11 de la chambre 10 et du premier moyen de fermeture 15, entre le premier moyen C d'étanchéité et le second moyen C' d'étanchéité. Le premier moyen de fermeture 15 comprend un bouchon 30 conçu pour établir un contact ferme avec le premier moyen 27 de butée lorsque le premier moyen de fermeture 15 est relié fermement à la chambre 10. Comme montré, le bouchon 30 est creux et présente des extrémités ouverte 32 et fermée 33 et une première jupe annulaire intérieure 36 s'étendant vers le bas, ayant des surfaces intérieure 44 et extérieure 45 conçues pour s'ajuster dans la première extrémité ouverte 13 de la chambre 10. La jupe

annulaire 36 présente des surfaces intérieure et exté-

rieure, respectivement. L'extrémité fermée 33 est formée par une paroi de fond ayant des surfaces intérieure 34 et extérieure 35. Le bouchon 30, tel qu'illustré, peut présenter une surface biseautée 37 conçue pour entrer en contact avec le premier moyen de butée 27 qui, comme indiqué précédemment, peut être biseauté. L'angle de la surface biseautée 37 du premier moyen de fermeture 15 est

en général d'environ 10-60', avantageusement d'environ 35-

50 par rapport à l'horizontale, et l'angle du rebord annulaire biseauté est en général d'environ 5-45 ,

avantageusement d'environ 25-40 par rapport à l'hori-

zontale. Le premier moyen de fermeture 15 comprend une seconde jupe annulaire 38 ayant des surfaces intérieure 39 et extérieure 40. La seconde jupe annulaire 38 est globalement reliée à une partie supérieure 41 du premier moyen de fermeture 15 et s'étend vers le bas de cette partie supérieure. Le diamètre de la seconde jupe annulaire 38 est plus grand que le diamètre extérieur de la première extrémité ouverte 13 de la chambre 10. Les première (intérieure) et seconde (extérieure) jupes annulaires 36 et 38 ont, au choix, la même longueur ou des longueurs différentes. Dans une forme préférée de réalisation telle que représentée, la seconde jupe annulaire 38 est plus

longue que la première jupe annulaire 36.

Le premier moyen 15 de fermeture comprend des moyens de préhension ou de prise 42. Ces moyens de prise 42 sont disposés optionnellement sur la surface extérieure 40 de la seconde jupe annulaire 38 et comprennent, à titre d'exemple, des gorges, des bossages ou au moins. une arête ou nervure comme illustré sur la figure 1A. Ces moyens 42 de prise sont montés, optionnellement, dans le premier moyen de fermeture 15 afin d'être reliés à ou formés d'une seule pièce avec la surface intérieure 44 de la première jupe annulaire 36. Ces moyens comprennent, à titre d'exemple non limitatif, une cloison reliée à des côtés opposés du bouchon 30. La surface de la cloison est optionnellement lisse ou texturée et peut présenter des gorges. La cloison peut également présenter un ou plusieurs trous dans sa surface, comme montré sur la figure 3, afin de permettre l'insertion d'un instrument, tel qu'une

aiguille ou des pincettes.

Pour produire une colonne de fluide pleine à l'intérieur de l'appareil, ce dernier est rempli d'un

fluide afin que le niveau de celui-ci soit légèrement au-

dessus du premier moyen de butée 27. La quantité de fluide au-dessus du premier moyen de butée est égale ou inférieure à la quantité de fluide qui remplit juste l'espace 47. Le premier moyen de fermeture 15 est inséré dans la première extrémité ouverte 13 de l'élément tubulaire 10 de façon que la surface 37 porte contre le premier moyen de butée 27 et forme le moyen d'étanchéité C. Le liquide qui se trouvait au-dessus du premier moyen de butée 27 est introduit à force dans l'espace 47 délimité par le premier moyen d'étanchéité C, la partie inférieure 48 de la surface extérieure 45 de la jupe annulaire 36, une partie 49 de la surface intérieure 11 de l'élément tubulaire 10 et le moyen optionnel C" d'étanchéité. Le liquide excédentaire reste dans l'espace 47 pendant le transport ou l'emmagasinage de l'appareil. Comme mentionné précédemment, l'appareil selon l'invention comprend un second moyen d'étanchéité C' destiné à former un joint étanche aux liquides entre la chambre 10 et le premier moyen 15 de fermeture. Ce moyen,

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comme indiqué ci-dessus, comprend au moins une bague annulaire 17 située sur la surface extérieure 12 de la chambre 10, à proximité de sa première extrémité 13. La bague ou les bagues sont disposées de manière que, lorsque le premier moyen 15 de fermeture est relié fermement à la chambre 10, la bague ou les bagues annulaires soient en contact avec la surface intérieure 39 de la seconde jupe

annulaire 38.

L'appareil selon l'invention comprend des moyens 18 destinés à maintenir l'orientation d'origine d'un support non intégré. Toujours en référence aux figures 1, 1A et 2, dans une forme préférée de réalisation, ces moyens 18 peuvent comprendre un second moyen de butée 19 situé sur la surface extérieure 12 de la chambre 10, vers la seconde extrémité 14, conjointement avec une surface du second moyen 16 de fermeture. Le second moyen de butée 19, comme illustré, comprend un épaulement annulaire situé sur la

surface extérieure 12 de la chambre 10.

Le second moyen 16 de fermeture présente une extrémité ouverte 20, est fermé par une paroi de fond 24 ayant des surfaces intérieure 25 et extérieure 26 et comporte une paroi latérale 21 ayant une surface intérieure 22 et une surface extérieure 23. Cependant, les dimensions du dispositif selon l'invention varient lorsque la chambre 10 est reliée fermement au second moyen 16 de fermeture, la distance entre la seconde extrémité ouverte 14 de la chambre 10 et la surface intérieure 25 de la paroi de fond 24 est inférieure au diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte 14 de la chambre 10 et inférieure au diamètre du support A, et le diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte 14 de la chambre 10 est inférieur au diamètre du support A. Par exemple, dans les cas o la matière adhérente est ensemencée sur un support ayant un diamètre de 12 mm, le diamètre intérieur du second moyen de fermeture est supérieur à 12 mm et le diamètre intérieur de l'élément tubulaire, à sa seconde extrémité, est inférieur

à 12 mm.

La jonction de la surface intérieure 22 de la paroi latérale 21 du second moyen de fermeture 16 et de la surface intérieure 25 de la paroi de fond 24 est optionnel- lement biseautée ou en forme d'épaulement, comme illustré

sur les figures 2 et 2A.

Il est bien entendu que, conformément à l'invention, l'appareil peut être adapté de manière que la

matière biologique soit ensemencée sur la surface inté-

rieure 25 de la paroi de fond 24 du second moyen 16 de fermeture. Dans une telle forme de réalisation, la surface intérieure 25 de la paroi de fond 24 du second moyen 16 de

fermeture est conçue pour être utilisée comme support.

L'appareil selon l'invention comprend faculta-

tivement des moyens 28 de préhension, en plus ou à la place des moyens 42 de prise. Ces moyens 28 de préhension peuvent être situés, soit sur la surface extérieure 12 de la chambre 10, soit sur la surface extérieure 23 de la paroi latérale 21 du second moyen 16 de fermeture, soit encore sur les deux surfaces. A titre d'exemple non limitatif, ces moyens 28 de préhension comprennent des nervures, des arêtes comme montré sur les figures 1 et 1A, des gorges ou des parties gaufrées ou texturées, comme montré sur la

figure 3.

Toujours en référence aux figures 1, 1A, 2 et 2A, l'appareil selon l'invention comprend un moyen d'étanchéité C"''' pour former un joint étanche aux liquides entre le second moyen 16 de fermeture et la chambre 10. A titre d'exemple non limitatif, ce moyen C'''" d'étanchéité comprend au moins une bague annulaire 29 située sur la surface extérieure 12 de la chambre 10, près de sa seconde extrémité 14, conjointement avec une surface intérieure 22

du second moyen 16 de fermeture.

L'appareil selon l'invention comprend option-

nellement des moyens 43 de libération destinés à libérer un support de la surface intérieure 25 de la paroi de fond 24 du second moyen 16 de fermeture. A titre d'exemple non limitatif, les moyens de libération comprennent au moins une gorge 83 située a la surface intérieure 65 de la paroi de fond 64 du second moyen 56 de fermeture, comme illustré sur les figures 4 et 5; au moins une protubérance sur les surfaces intérieures 25 et 125 des parois de fond 24 et 124 du second moyen 16 et 116 de fermeture, comme illustré sur les figures 2A et 7, respectivement; et au moins une gorge 86 située dans une surface intérieure 62 de la paroi latérale 61 du second moyen 56 de fermeture, comme illustré sur la figure 5. Ces moyens 43 de libération comprennent aussi une paroi flexible 24 de fond sur le second moyen 16 de fermeture de façon que la paroi 24 de fond puisse être

distendue pour libérer le support.

Les figures 1, lA, 2 et 5 représentent une autre forme de réalisation de l'invention. Une chambre dégagée 10 est telle qu'illustrée sur les figures 1, 1A et 2, sauf que le second moyen C' d'étanchéité, qui comprend au moins une bague annulaire 17, est situé sur la surface intérieure 11 de la chambre 10 placée à proximité de la première extrémité 13. L'appareil comprend aussi un premier moyen de fermeture 15 tel qu'illustré sur les figures 1, 1A et 2 et un second moyen de fermeture 16 tel qu'illustré sur les figures 1A, 2 et 5, qui sont conçus pour être reliés à la chambre dégagée 10, à ses première et seconde extrémités

ouvertes 13 et 14.

Les figures 3 à 5 représentent une autre forme de réalisation de l'invention. La numérotation utilisée sur les figures 3 & 5 est conçue de façon que le second chiffre de chaque référence numérique soit le même que celui de la référence de l'élément correspondant de l'appareil illustré sur les figures 1, 1A et 2. L'élément

tubulaire 50 présente des surfaces intérieure 51 et -

extérieure 52, qui sont ouvertes a des première et seconde extrémités 53 et 54. L'appareil comprend aussi un premier moyen 55 de fermeture et un second moyen 56 de fermeture, qui sont conçus pour être reliés à l'élément tubulaire 50,

à ses première et seconde extrémités ouvertes 53 et 54.

Après que l'appareil selon l'invention a été assemblé, le premier moyen 55 de fermeture constitue, conjointement avec l'élément tubulaire 50, des moyens

destinés à maintenir un contact entre une matière biologi-

que portée par un support B et un milieu liquide se trouvant dans l'appareil, quelle que soit l'orientation de ce dernier. Le support B peut être à insérer, comme représenté, ou bien, ep variante, il peut être constitué par une ou plusieurs surfaces intérieures du second moyen 56 de fermeture, c'est-à-dire la surface intérieure 62 ou de la paroi latérale 61 ou de la paroi de fond 64,

respectivement, du second moyen 56 de fermeture.

Toujours en référence aux figures 3 à 5, l'élément tubulaire 50 comprend un premier moyen de butée 67 situé sur sa surface intérieure 51. Le premier moyen de butée 67 est un rebord annulaire. Le premier moyen 55 de fermeture comprend un bouchon 70 ayant des surfaces intérieure 84 et extérieure 85, conçues pour entrer en contact ferme avec le premier moyen de butée 67 lorsque le premier moyen 55 de fermeture est relié fermement à l'élément tubulaire 50. Comme représenté, le bouchon 70 est creux et présente des extrémités ouverte 72 et fermée 73 et une jupe 76 s'étendant vers le bas, conçue pour s'ajuster dans la première extrémité ouverte 53 de l'élément tubulaire 50. L'extrémité fermée 73 est formée par une

paroi de fond ayant des surfaces intérieure 74 et exté-

rieure 75. Comme illustré, le bouchon 70 est conçu de façon que la surface extérieure 75 de la paroi de fond 73 soit en contact avec le premier moyen de butée 67 pour former un

premier moyen D d'étanchéité. Un second moyen D' d'étan-

chéité, destiné à former un joint étanche aux liquides entre l'élément tubulaire 50 et le premier moyen 55 de fermeture, comprend au moins une bague annulaire 57 située sur la surface intérieure 51 de l'élément tubulaire 50, à proximité de sa première extrémité 53, conjointement avec une surface extérieure 85 du bouchon 70. Ainsi, la bague ou les bagues annulaires sont disposées de manière que, lorsque le premier moyen 55 de fermeture est relié fermement a l'élément tubulaire 50, la bague ou les bagues annulaires soient en contact avec la surface extérieure 85

du bouchon 70.

Après l'insertion de la seconde extrémité 54 de l'élément tubulaire 50 dans l'extrémité ouverte 60 du second moyen 56 de fermeture, un fluide est versé dans l'appareil selon l'invention de façon que le niveau supérieur du fluide soit légèrement au-dessus du premier moyen de butée 67. Puis le bouchon 70 est inséré dans la première extrémité ouverte 53 de l'élément tubulaire 50. La surface extérieure 75 de la paroi de fond 73 du bouchon 70 établit un contact ferme avec le premier moyen de butée 67 pour former le moyen D d'étanchéité. Le fluide qui se trouvait initialement au-dessus du premier moyen de butée 67 est refoulé dans l'espace 87 délimité par le moyen d'étanchéité D, la partie inférieure 88 de la surface extérieure 85 du bouchon 70 et une partie 89 de la surface intérieure 51 de l'élément tubulaire 50 et le moyen D' d'étanchéité. Le premier moyen 55 de fermeture comprend aussi une partie supérieure 71 qui entre en contact avec la première extrémité ouverte 53 de l'élément tubulaire 50 lorsque le premier moyen 55 de fermeture est relié fermement à l'élément tubulaire 50, formant un moyen

optionnel D" d'étanchéité.

Le premier moyen 55 de fermeture comprend des moyens de prise 82, qui peuvent être montés à l'intérieur du premier moyen de fermeture 55 afin d'être reliés à la surface intérieure 84 du bouchon 70, ou réalisés d'une seule pièce avec cette surface intérieure 84. Ces moyens comprennent, à titre d'exemple non limitatif, une cloison reliée à des côtés opposés du bouchon 70 et qui peut présenter des gorges ou un ou plusieurs trous ménagés dans sa surface, comme montré sur la figure 3, pour permettre l'insertion d'un instrument tel qu'une aiguille ou des pincettes. Le second moyen 56 de fermeture présente une extrémité ouverte 60, est fermé par une paroi de fond 64 ayant des surfaces intérieure 65 et extérieure 66, et comporte une paroi latérale 61 ayant une surface intérieure

62 et une surface extérieure 63.

L'appareil selon l'invention comprend des moyens 58 destinés à maintenir l'orientation d'origine d'un support non intégré B. L'utilisation d'un support non intégré, comme cela est mentionné, est facultative. La matière biologique peut être collée directement sur une ou plusieurs surfaces de l'élément tubulaire 50 ou du second moyen 56 de fermeture. Toujours en référence aux figures 3 à 5, dans une forme préférée de réalisation, ces moyens 58 comprennent un moyen de butée situé sur la surface intérieure 62 de la paroi latérale 61 du second moyen 56 de fermeture. Le moyen de butée, comme illustré, comprend un épaulement annulaire ou un rétrécissement du diamètre intérieur de la paroi latérale 61 de manière que, lorsque l'élément tubulaire 50 est relié fermement au second moyen 56 de fermeture, la seconde extrémité 54 de l'élément tubulaire 50 soit en contact avec l'épaulement annulaire ou la partie rétrécie de la paroi latérale 61 formant le moyen de butée 59. Dans les formes de réalisation dans lesquelles le support B peut être inséré séparément, la distance entre la seconde extrémité ouverte 54 de l'élément tubulaire 50 et la surface intérieure 65 de la paroi de fond 64 est inférieure au diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte 54 de l'élément tubulaire 50, et inférieure au diamètre du support B, et le diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte 54 de l'élément tubulaire 50 est inférieur au diamètre du support B. Toujours en référence aux figures 3-5, l'appareil selon l'invention comprend un moyen D''' d'étanchéité destiné à former un joint étanche aux liquides entre le second moyen de fermeture 56 et l'élément tubulaire 50. A titre d'exemple non limitatif, le moyen D"''' d'étanchéité comprend au moins une bague annulaire 69 située sur la surface intérieure 62 de la paroi latérale 61 du second moyen 56 de fermeture, conjointement avec la

surface extérieure 52 de l'élément tubulaire 50.

L'appareil selon l'invention comprend aussi des moyens 58 de préhension en plus ou à la place des moyens 82 de prise. Ces moyens 68 de préhension peuvent être situés sur la surface extérieure 63 de la paroi latérale 61 du second moyen 56 de fermeture. A titre d'exemple non limitatif, les moyens 68 de préhension comprennent une

partie gaufrée ou texturée, comme montré sur la figure 3.

Comme décrit précédemment, l'appareil selon l'invention comprend optionnellement des moyens 83 de libération destinés à libérer un support non intégré B de la surface intérieure 65 de la paroi de fond 64 du second moyen 56 de fermeture. Comme illustré sur les figures 4 et , les moyens 83 de libération comprennent au moins une gorge située & la surface intérieure 65 de la paroi de fond 64 du second moyen 56 de fermeture, ou au moins une gorge située dans la surface intérieure 62 de la paroi latérale

61 du second moyen 56 de fermeture.

Les figures 6 et 7 illustrent une autre forme

de réalisation de l'invention. La convention de numérota-

tion utilisée sur les figures. 6 et 7 est conçue de façon que les deux derniers chiffres de chaque référence soient les mêmes que les deux chiffres de référence de l'élément correspondant de l'appareil illustré sur les figures 1, lA et 2. En référence à présent aux figures 6 et 7, l'élément tubulaire 110 présente des surfaces intérieure 111 et extérieure 112, qui sont ouvertes à des première et seconde extrémités 113 et 114. L'appareil comprend aussi un premier moyen de fermeture 115 et un second moyen de fermeture 116 qui sont conçus pour être reliés à l'élément tubulaire 110, respectivement, à ses première et seconde extrémités

ouvertes 113 et 114.

L'élément tubulaire 110 comprend un premier moyen de butée 127 situé sur la surface intérieure 111 de cet élément tubulaire 110. Le premier moyen de butée 127 peut être un rebord annulaire qui est biseauté. Le premier moyen de fermeture 115 comprend un bouchon 130 conçu pour entrer en contact ferme avec le premier moyen de butée 127 afin de former un premier moyen E d'étanchéité lorsque le premier moyen de fermeture 115 est relié fermement à l'élément tubulaire 110. Comme représenté, le bouchon 130 présente une extrémité fermée 133 et une partie supérieure fermée 141. Une jupe intérieure 136, ayant des surfaces intérieure et extérieure 144 et 145, respectivement, s'étend vers le bas de la partie supérieure 141 et est conçue pour s'ajuster dans la première extrémité ouverte 113 de l'élément tubulaire 110. L'extrémité fermée 133 est formée par une paroide fond ayant des surfaces intérieure 134 et extérieure 135. Comme illustré, le bouchon 130 est conçu pour entrer en contact avec le premier moyen de butée 127 qui, comme indiqué précédemment, est un rebord annulaire biseauté optionnel, formant un premier moyen d'étanchéité E. Le premier moyen de fermeture 115 comprend une seconde jupe annulaire 138 ayant des surfaces intérieure 139 et extérieure 140. La seconde jupe annulaire 138 est reliée d'une façon générale à la partie supérieure 141 de laquelle elle s'étend vers le bas. Le diamètre de la seconde jupe annulaire 138 est supérieur au diamètre extérieur de la première extrémité ouverte 113 de l'élément

tubulaire 110.

Après l'assemblage de l'appareil selon l'invention, le premier moyen 115 de fermeture constitue, conjointement avec l'élément tubulaire 110, des moyens destinés à maintenir un contact entre un support et un

milieu liquide dans l'appareil, quelle que soit l'orienta-

tion de ce dernier. Ces moyens comprennent le premier moyen E d'étanchéité, comme décrit précédemment, et un second moyen E' d'étanchéité pour former un joint étanche aux liquides entre l'élément tubulaire 110 et le premier moyen de fermeture. Comme représenté dans la présente forme de réalisation, à titre d'exemple non limitatif, le moyen E' d'étanchéité comprend au moins une bague annulaire 117 située sur la surface extérieure 145 de la première jupe

annulaire 136 du premier moyen de fermeture 115, conjointe-

ment avec la surface intérieure 111 de l'élément tubulaire 110. La bague ou les bagues annulaires sont disposées de manière que, lorsque le premier moyen 115 de fermeture est relié fermement à l'élément tubulaire 110, le second moyen

E' d'étanchéité soit formé. -

Comme représenté, l'appareil comprend aussi un moyen facultatif E" d'étanchéité qui, par exemple, est disposé à la jonction de la surface extérieure 112 de l'élément tubullaire 110 et de la surface intérieure 139 de la seconde jupe annulaire 138 du premier moyen 115 de fermeture. Le moyen facultatif E" d'étanchéité peut comprendre au moins une bague annulaire située sur la

surface extérieure 112 ou sur la surface intérieure 139.

L'appareil selon l'invention comprend des moyens 118 destinés à maintenir l'orientation d'origine du support F. Toujours en référence aux figures 6 et 7, dans

une forme préférée de réalisation, ces moyens 118 compren-

nent un second moyen de butée 119 situé sur la surface extérieure 112 de l'élément tubulaire 110 près de sa seconde extrémité 114, coopérant avec une surface du second moyen de fermeture 116. Le second moyen de butée 119, comme illustré, comprend au moins deux saillies discontinues 128' situées sur la surface extérieure 112 de l'élément tubulaire 110. L'appareil selon l'invention comprend aussi

des moyens 128 de préhension.

Le second moyen de fermeture 116 présente une extrémité ouverte 120, est fermé par une paroi de fond 124 ayant des surfaces intérieure 125 et extérieure 126, et

comporte une paroi latérale 121 ayant une surface inté-

rieure 122 et une surface extérieure 123. Lorsque l'élément tubulaire 110 est relié fermement au second moyen de fermeture 116, la distance entre la seconde extrémité ouverte 114 de l'élément tubulaire 110 et la surface intérieure 125 de la paroi de fond 124 est inférieure au diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte 114 de l'élément tubulaire 110 et est inférieure au diamètre du support F, et le diamètre intérieur de la seconde extrémité ouverte 114 de la chambre 110 est inférieur au diamètre du support F. La jonction de la surface intérieure 122 de la paroi latérale 121 du second moyen 116 de fermeture et de la surface intérieure 125 de:la paroi de fond 124 forme facultativement un épaulement 122' comme illustré sur la

figure 7.

Toujours en référence aux figures 6 et 7, l'appareil selon l'invention comprend un moyen E''' d'étanchéité destiné à former un joint étanche aux liquides entre le second moyen de fermeture 116 et l'élément tubulaire 110. A titre d'exemple non limitatif, ce moyen E''"' d'étanchéité comprend au moins une bague annulaire 129 située sur la surface intérieure 122 de la paroi latérale

121 du second moyen 116 de fermeture.

L'appareil selon l'invention comprend option-

nellement des moyens 143 de libération destinés à libérer le support F de la surface intérieure '125 de la paroi de fond 124 du second moyen 116 de fermeture. A titre d'exemple non limitatif, les moyens 143 de libération comprennent au moins une protubérance ou saillie située sur la surface intérieure 125 de la paroi de fond 124 du second

moyen 116 de fermeture, comme illustré sur la figure 7.

Les figures 8 et 9 représentent une autre forme

de réalisation de l'invention. La convention de numérota-

tion utilisée sur les figures 8 et 9 est conçue de façon que les deux deuxièmes chiffres d'une référence numérique soient les mêmes que ceux de la référence numérique liée à l'élément correspondant de l'appareil illustré sur les figures 3 à 5. L'élément tubulaire 150 présente des surfaces intérieure 151 et extérieure 152 qui sont ouvertes à une première extrémité 153 et fermées à une seconde extrémité 154. L'appareil comprend aussi un premier moyen 155 de fermeture qui est conçu pour être relié à l'élément

tubulaire 150, à sa première extrémité ouverte 153.

* Après avoir été relié fermement à l'élément tubulaire 150, le premier moyen 155 de fermeture constitue, conjointement avec l'élément tubulaire 150, des moyens

destinés à maintenir un contact entre une matière biologi-

que située sur la surface intérieure 156 de la seconde extrémité 154 et/ou sur la surface intérieure 151 de l'élément tubulaire 150, et un milieu liquide se trouvant dans l'appareil, quelle que soit l'orientation de ce dernier. Ces moyens comprennent au moins deux moyens

d'étanchéité G et G', respectivement.

L'élément tubulaire 150 comprend un premier moyen de butée 167 situé sur sa surface intérieure 151. Le premier moyen de butée 167 est un rebord annulaire. Le premier moyen de fermeture 155 comprend un bouchon 170 conçu pour établir un contact ferme avec le premier moyen de butée 167 lorsque le premier moyen 155 de fermeture est

relié fermement & l'élément tubulaire 150. Comme repré-

senté, le bouchon 170 est creux et présente des extrémités ouverte 172 et fermée 173 et une jupe 176 s'étendant vers le bas, ayant des surfaces intérieure 184 et extérieure 185. La jupe 176 est conçue pour s'ajuster dans la première

extrémité ouverte 153 de l'élément tubulaire 150. L'extré-

mité fermée 173 du premier moyen 155 de fermeture est formée par une paroi de fond ayant des surfaces intérieure 174 et extérieure 175. Le moyen de fermeture 155 comprend aussi une seconde jupe annulaire 178 s'étendant vers le

bas, ayant des surfaces intérieure 179 et extérieure 180.

Le bouchon 170, comme illustré, est conçu de façon qu'une surface biseautée 177 de ce bouchon 170 entre en contact avec le premier moyen de butée 167 pour former le moyen G d'étanchéité. Le second moyen G' d'étanchéité, destiné à former un joint étanche aux liquides entre l'élément tubulaire 150 et le premier moyen 155 de fermeture, comprend au moins une bague annulaire 157 située sur la surface intérieure 179 de la seconde jupe annulaire 178, en coopération avec la surface extérieure 152 de l'élément tubulaire 150. Comme illustré sur les figures 8 et 9, un moyen optionnel G" d'étanchéité est formé à la jonction de la surface intérieure 151 de l'élément tubulaire 150 et de la surface extérieure 185 du bouchon 170, entre le premier

moyen d'étanchéité G et le deuxième moyen d'étanchéité G'.

Avant l'assemblage de l'appareil selon l'invention pour qu'il soit utilisé, un fluide est versé dans l'appareil de façon que le niveau supérieur du fluide soit légèrement au-dessus du premier moyen de butée 167. Le bouchon 170 est ensuite inséré dans la première extrémité ouverte 153 de l'élément tubulaire 150. La surface biseautée 177 du bouchon 170 établit un contact ferme avec le premier moyen de butée 167 pour former le moyen G d'étanchéité. La surface extérieure 185 du bouchon 170 entre également en contact avec la surface intérieure 151 de l'élément tubulaire 150 pour former le moyen optionnel

G" d'étanchéité. Le fluide qui se trouvait initialement au-

dessus du premier moyen 167 de butée est refoulé à force dans un espace 187 délimité par le moyen G d'étanchéité, une partie inférieure 188 de la surface extérieure 185 du bouchon 170, une partie 189 de la surface intérieure 151 de

l'élément tubulaire 150 et le moyen optionnel G" d'étan-

chéité.

On décrira à présent une procédure pour isoler

et identifier un micro-organisme.

L'appareil selon l'invention est stérilisé, par exemple par l'utilisation d'un autoclave, de rayons gamma ou d'oxyde d'éthylène. Si un support non intégré est utilisé, il doit être inséré dans le second moyen de fermeture avant la stérilisation. Après la stérilisation, le support est ensemencé avec une suspension de cellules sensibles au micro-organisme auquel on s'intéresse, dans un milieu de culture de cellules supportant la croissance. On fait croître les cellules jusqu'à confluence, par exemple

pendant 48 à 72 heures à 35-39'C.

Le second moyen de fermeture et l'élément tubulaire sont remplis du milieu de culture des cellules jusqu'à un point légèrement au-dessus du premier moyen de butée. Le premier moyen de fermeture est relié fermement à l'élément tubulaire de façon que la surface de dessous ou surface biseautée du premier moyen de fermeture soit en contact avec le premier moyen de butée. Tout milieu liquide excédentaire est ainsi refoulé à force dans la partie

supérieure de l'élément tubulaire et retenu.

Les parois de fond des premier et second moyens de fermeture peuvent être parallèles entre elles et composées d'une matière permettant la transmission de la lumière et l'élément tubulaire peut être réalisé sous la forme d'un canal rectiligne pour établir un trajet optique sans obstacle. Ainsi, la monocouche de cellules peut être observée au moyen d'un microscope optique, par mise en place de l'appareil sur un microscope optique retourné, l'appareil étant dans une orientation verticale. Etant donné que l'inversion de l'appareil n'endommage pas la monocouche de cellules, l'appareil peut également être observé avec un microscope optique d'orientation normale,

par retournement de l'appareil.

Le milieu de culture des cellules est retiré, par exemple par aspiration. Un inoculum est ajouté (au

moins environ 0,2 ml d'un fluide contenant le micro-

organisme) à l'appareil. Le premier moyen de fermeture est placé sur l'élément tubulaire et l'appareil peut être centrifugé, si cela est demandé par le protocole. On peut retirer l'appareil de la centrifugeuse en prenant la

cloison avec un instrument tel que des pincettes.

Après la centrifugation, le premier moyen de fermeture est retiré et l'inoculum est soutiré, si cela est demandé par le protocole d'essai. On réalimente la monocouche de cellules en plaçant environ 1,0 ml d'un "milieu d'entretien de la culture des cellules" dans l'appareil. Le premier moyen de fermeture est remis en place et l'appareil est placé dans un incubateur pendant au moins environ 16 à 24 heures, à environ 36- 38'C, pour la

croissance du micro-organisme.

Ensuite, le milieu d'entretien de la culture de cellules est éliminé par aspiration, et la monocouche de cellules est fixée par la mise en place d'un fixateur (par exemple 1,0 ml d'acétone) dans l'appareil, cette opération étant suivie d'un temps de repos (par exemple 10 minutes à la température ambiante). Après le fixage, le fixateur est

éliminé par aspiration.

Avant la coloration, la monocouche de cellules fixées est séchée, de préférence dans l'air. Le second moyen de fermeture peut être retiré de l'élément tubulaire pour accélérer le séchage. En variante, la monocouche de cellules est rincée brièvement avec une solution de sel tamponnée avec un phosphate, ou un fluide similaire, et la solution est éliminée par aspiration avant la coloration. La monocouche de cellules est colorée par l'addition de 40 à 100 ml d'un réactif au second moyen de fermeture. Un recouvrement régulier de la monocouche avec le réactif est réalisé par un tapotement léger du second moyen de fermeture. Apres l'application du réactif, le second moyen de fermeture est placé dans une chambre humide (par exemple une boite de Pétri avec des serviettes en papier saturées d'eau). On laisse la coloration se dérouler dans les conditions de température et de temps prescrites dans le protocole d'essai suivi (par exemple 30 minutes &

-39 C).

Apres la coloration, le réactif est éliminé par aspiration et la matière restante est lavée, par exemple avec une solution de sel tamponnée avec un phosphate ou avec de l'eau désionisée ou distillée. On introduit au

moyen d'une pipette environ 1,0 ml de fluide dans l'appa-

reil et on fait tourbillonner en douceur. Le fluide de lavage est éliminé par aspiration et la matière restante

est séchée, de préférence dans l'air.

Ensuite, si un support à insérer est utilisé, il est retiré du second moyen de fermeture et monté à l'aide d'un milieu de montage approprié. Le support est monté par retournement du second moyen de fermeture et par mise en place de celui-ci sur une surface, par exemple sur une lame de microscope, au-dessus d'une goutte du milieu de montage. Si cela est nécessaire, le support est libéré par tapotement ou distension de la paroi extérieure du fond du

second moyen de fermeture.

Le support monté peut être observé de la façon appropriée pour le protocole d'essai suivi, par exemple avec un microscope optique ou à fluorescence. L'effet cytopathologique ou bien des supports colorés avec une immunoperoxydase, peuvent être observés sans que le support

soit retiré du second moyen de fermeture.

En variante, si le second moyen de fermeture est transparent ou si la matière biologique adhère à une ou plusieurs surfaces de l'appareil, la matière biologique se trouvant sur le support ou dans l'appareil est observée, conformément au protocole, sans que l'échantillon soit

retiré.

En variante, d'autres analyses immunologiques ou chimiques, par exemple des immuno-essais faisant appel à un enzyme, peuvent être effectuées dans l'appareil selon

l'invention. Des instruments tels que des spectrophoto-

mètres peuvent être utilisés, si cela est approprié, pour

la matière soumise à l'essai et conformément au protocole.

Il va de soi que de nombreuses modifications peuvent être apportées à l'appareil décrit et représenté

sans sortir du cadre de l'invention.

Claims (18)

REVENDICATIONS

1. Appareil pour maintenir en contact avec un milieu liquide un échantillon biologique sur un support, caractérisé en ce qu'il comporte une chambre dégagée (10) ayant des surfaces intérieure (11) et extérieure (12) ouvertes a une première extrémité (13) et fermées ou ouvertes à une seconde extrémité opposée (14), un premier moyen de butée (27) étant situé sur la surface intérieure, un premier moyen (15) de fermeture conçu pour être relié de façon étanche à la chambre dégagée, à ladite première extrémité, le moyen de fermeture, après avoir été relié à la première extrémité, constituant, conjointement avec

ladite chambre, des moyens destinés à maintenir l'échantil-

lon en contact avec un milieu liquide quelle que soit l'orientation de l'appareil, pourvu que, lorsque la seconde extrémité est ouverte, l'appareil comprenne un second moyen de fermeture (16) conçu pour être relié à la seconde

extrémité de l'appareil.

2. Appareil selon la revendication 1, carac-

térisé en ce que la chambre est un élément tubulaire.

3. Appareil selon la revendication 2, carac-

térisé en ce que le premier moyen de fermeture comprend un bouchon (30) ayant une partie supérieure, une extrémité fermée (33) formée par une paroi de fond ayant des surfaces intérieure (34) et extérieure (35), et une jupe (36) s'étendant vers le bas et conçue pour s'emboîter dans la

première extrémité de l'élément tubulaire.

4. Appareil selon la revendication 3, carac-

térisé en ce que les moyens destinés à maintenir l'échan-

tillon en contact avec un milieu liquide quelle que soit l'orientation de l'appareil comprennent au moins deux moyens d'étanchéité (C, C') entre l'élément tubulaire et le

premier moyen de fermeture.

5. Appareil selon la revendication 2, carac-

térisé en ce que le support est constitué par une surface

intérieure du second moyen de fermeture.

6. Appareil selon la revendication 2, carac-

térisé en ce que le support n'est pas intégré.

7. Appareil selon la revendication 2, carac-

térisé en ce que l'élément tubulaire est ouvert à ladite seconde extrémité opposée et comprend un second moyen de fermeture (16) conçu pour être relié de façon étanche à la

seconde extrémité de l'élément tubulaire.

8. Appareil selon la revendication 7, carac-

térisé en ce que le second moyen de fermeture constitue, conjointement avec la seconde extrémité de l'élément

tubulaire, des moyens (18) destinés à maintenir l'orienta-

tion d'origine d'un support non intégré.

9. Appareil selon la revendication 8, carac-

térisé en ce que l'élément tubulaire comprend un second moyen de butée (19) situé sur la surface extérieure et le second moyen de fermeture est ouvert à une première extrémité (20) et fermé par une paroi de fond (24) ayant des surfaces intérieure (25) et extérieure (26) à une seconde extrémité opposée, et une paroi latérale (21) ayant des surfaces intérieure (22) et extérieure (23), la distance entre la seconde extrémité ouverte de l'élément tubulaire et ladite surface intérieure de la paroi de fond, lorsque l'élément tubulaire est relié fermement au second moyen de fermeture, étant inférieure au diamètre du support et le diamètre intérieur de l'élément tubulaire, à ladite

seconde extrémité, étant inférieur au diamètre du support.

10. Appareil selon la revendication 8, caractérisé en ce que le second moyen (56) de fermeture est ouvert à une première extrémité et fermé par une paroi (64) de fond, ayant des surfaces intérieure et extérieure, à une seconde extrémité opposée, et une paroi latérale (61) ayant des surfaces intérieure (62) et extérieure, ladite surface intérieure de la paroi latérale étant rétrécie, la distance entre la seconde extrémité ouverte de l'élément tubulaire et la surface intérieure de ladite paroi de fond, lorsque l'élément tubulaire est relié fermement au second moyen de fermeture, étant inférieure au diamètre du support et le diamètre intérieur de l'élément tubulaire, à ladite seconde extrémité, étant inférieur au diamètre du support.

11. Appareil selon l'une quelconque des

revendications 7 à 10, caractérisé en ce que des moyens

destinés à maintenir l'échantillon en contact avec un

milieu liquide comprennent au moins deux moyens d'étan-

chéité (D, D') entre l'élément tubulaire et le premier

moyen de fermeture.

12. Appareil selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il comprend des moyens destinés à détecter l'échantillon biologique sans que le support soit

retiré du second moyen de fermeture.

13. Appareil selon la revendication 7, caractérisé en ce que le premier moyen (115) de fermeture comprend (1) une partie supérieure (141), (2) une première jupe annulaire (136) partant vers le bas de la face inférieure de la partie supérieure et conçue pour être insérée dans la première extrémité (113) du tube (110) et ayant une extrémité fermée (133) formée par une paroi de fond globalement parallèle à la partie supérieure, ladite paroi de fond du moyen de fermeture étant en contact avec le premier moyen d'arrêt (127) lorsque le premier moyen de fermeture est relié fermement au tube, et (3) une seconde jupe annulaire (38) reliée à la périphérie de la partie supérieure du premier moyen de fermeture et s'étendant vers le bas de cette périphérie, cette seconde jupe annulaire ayant un diamètre supérieur au diamètre extérieur de la première extrémité du tube, et en ce que le second moyen (116) de fermeture comprend une structure globalement cylindrique ouverte à une extrémité (120) et fermée par une paroi de fond (124) à une seconde extrémité opposée, et une paroi latérale (121) ayant des surfaces intérieure (122) et extérieure (123), la surface intérieure de la paroi latérale' étant rétrécie, la distance entre la seconde extrémité ouverte et la surface extérieure de la paroi de fond du moyen de fermeture, lorsque le tube est relié fermement au second moyen de fermeture, étant inférieure au diamètre du support et le diamètre intérieur du tube, à ladite seconde extrémitéY ouverte, étant inférieur au diamètre du support de manière que, lorsque l'appareil est assemblé, il comprenne des moyens destinés à maintenir l'échantillon en contact avec une colonne de fluide pleine, quelle que soit l'orientation de l'appareil, et des moyens

pour maintenir l'orientation d'origine du support.

14. Appareil selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il comporte en outre un second moyen de butée (119) situé sur la surface extérieure, à proximité

de la seconde extrémité.

15. Appareil selon la revendication 14, caractérisé en ce que le premier moyen de butée comprend un

rebord annulaire.

16. Appareil selon la revendication 14, caractérisé en ce que le second moyen de butée comprend au

moins deux saillies discontinues (128').

17. Appareil selon la revendication 14, caractérisé en ce que des moyens destinés à maintenir le

support en contact avec ladite colonne de fluide compren-

nent deux moyens d'étanchéité (E, E') entre le tube et le

premier moyen de fermeture.

18. Appareil selon la revendication 14, caractérissé en ce que le second moyen de fermeture comprend des moyens (143) destinés à libérer un support (F)

de la surface intérieure de la paroi de fond.