FR2598082A1 - Agent prophylactique et therapeutique de traitement de desordres hepatiques - Google Patents

Abstract

LA PRESENTE INVENTION A POUR OBJET UN AGENT PROPHYLACTIQUE ET THERAPEUTIQUE DE LUTTE CONTRE LES DESORDRES HEPATIQUES. ELLE EST CARACTERISEE EN CE QUE CET AGENT EST CONSTITUE D'ACIDE CYSTEINEGLUCURONIQUE, DE CYSTEINEGLUCURONOLACTONE OU D'UN SEL PHARMACEUTIQUEMENT ACCEPTABLE DE L'UN OU L'AUTRE DESDITS COMPOSES. ELLE SE RAPPORTE A UN AGENT PROPHYLACTIQUE ET THERAPEUTIQUE DE TRAITEMENT DE DESORDRES HEPATIQUES.

Description

!1

AGENT PROPHYLACTIQUE ET THERAPEUTIQUE DE TRAITEMENT DE DESORDRES HEPATIQUES

La présente invention a pour objet un agent prophylac5 tique et thérapeutique de traitement des désordres hépatiques.

La cystéineglucuronolactone et ses sels sont décrits dans les demandes de brevet japonais mises à la disposition du

public n 71-166189 et n 72-175197, respectivement, mais en ce qui concerne leurs possibles effets, seuls sont envisagés 10 l'effet de la cystéine et celui de la glucuronolactone.

On connait également un procédé de préparation d'acide cystéineglucuronique ou de cystéineglucuronate de sodium qui consiste à faire réagir la cystéine avec l'acide glucuronique ou le gluconate de sodium, mais pour ce qui concerne l'appli15 cation de ces dérivés, il est simplement indiqué qu'on les pense utiles en tant par exemple qu'agents hépatotoniques et thérapeutiques pour le traitement de malaises produits par les

radiations (brevet japonais publié n 62-16735).

En outre, en tant que dérivé présentant l'action de la 20 cystéine, de l'acide glucuronique et du calcium et surmontant l'instabilité de la cystéine est décrit, le cystéineglucuronate de calcium ainsi qu'une de ces méthodes de préparation dans la demande de brevet japonais mise à la disposition du public

n 71-150075 cependant aucune référence autre que celle mention25 née cidessus n'y est faite quant à ses utilisations.

Un médicament anticataracte comprenant un sel d'acide cystéineglucuronique a également été décrit dans la demande de

brevet japonais mise à la disposition du public n 72-18615.

Comme on vient de le mentionner, le brevet japonais publié n 62-16735 ne donne aucune information sur l'application de l'acide cystéineglucuronique autre que du niveau des voeux et les utilisations indiquées ci-dessus. Toute invention utilisable dans le domaine pharmaceutique n'est bien établie qu'après que son utilité pertinente ait été suffisamment démontrée et vérifiée par toute une série d'expériences et de

tests biologiques et l'on ne peut pas dire que les descriptions données par les brevets indiqués ci-dessus enseignent

des utilisations pharmaceutiques au vrai sens du terme.

On doit donc conclure que les effets de la cystéineglucuronolactone, de l'acide cystéineglucuronique et de leurs 10 sels respectifs sur le foie, par exemple, les effets de ces dérivés sur l'hépatite et l'hépatocirrhose aigues ou chroniques

n'ont pas encore été élucidés jusqu'à maintenant.

La présente invention a résolu la question et procure de nouvelles utilisations pour les dérivés mentionnés ci-dessus. 15 Les recherches de la demanderesse dans la pharmacologie de la cystéineglucuronolactone et de l'acide cystéineglucuronique et de leurs sels ont montré que ces substances sont, par administration orale, transportées dans le flux sanguin et qu'elles y sont respectivement décomposées en cystéine et en acide glucuronique et que ces substances exercent une activité inhibitrice manifeste contre les prémices de divers désordres

du foie.

S'appuyant sur les nouvelles constatations ci-dessus, la présente invention a pour objet:

30 35

- un agent prophylactique et thérapeutique de traitement de désordres hépatiques constitué d'acide cystéineglucuronique, de cystéineglucuronolactone ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de l'un ou l'autre dérivé; - une composition prophylactique et thérapeutique de traitement de désordres hépatiques constituée d'une dose efficace du dérivé ou de son sel et d'un support; - une unité de dosage du dérivé ou de son sel à utiliser pour prévenir ou guérir un désordre hépatique, constituée d'une dose quotidienne, de préférence divisée en 1 à 4 prises, du dérivé ou de son sel, la dose quotidienne étant comprise entre 1 et 5 000 mg, de préférence 10 et 2 000 mg pour l'administration par voie orale et entre 1 et 2 000 mg, de préférence 10 et 1 000 mg pour l'administration parentérale; - un procédé de prévention ou de lutte contre les désordres hépatiques qui consiste à administrer par voie orale ou parentérale une dose quotidienne efficace du dérivé ou de son sel à un patient; et - un procédé de suppression de l'élévation du niveau de GOT, GPT, LDT ou ALP dans le sang, ou du niveau de TG ou de HyP dans le foie, qui consiste à administrer par voie orale ou parentérale une dose quotidienne efficace du

dérivé ou de son sel à un patient.

L'acide cystéineglucuronique est un produit de condensation de la cystéine et de l'acide glucuronique que l'on peut obtenir par réaction des deux composés de départ, et milieu aqueux, à un pH compris entre 4 et 10, et qui, contient deux groupes carboxyliques provenant respectivement de la cystéine 15 et de l'acide glucuronique bien que, suivant les conditions de la réaction ci-dessus, on l'obtienne habituellement sous la forme d'un produit de réaction dont l'un des deux groupes carboxyliques a été neutralisé sous la forme de sel comme le représente la formule:

COOM2

CH - NH OH OH OH

CH-CH-CH-CH-CH-COOM

CH2 - OH

dans laquelle: COOM1 signifie un groupe carboxyle transformé en un sel; et COOM2 signifie un groupe carboxyle ou un groupe carboxyle

transformé en un sel.

Lorsque l'on met en oeuvre la réaction de condensation ci-dessus tout en ajustant le pH du mélange réactionnel à l'aide d'hydroxyde ou de carbonate de sodium, de potassium, de

calcium ou de magnésium par exemple, on obtient l'acide cystéineglucuronique sous la forme du sel correspondant.

La cystéineglucuronolactone de la formule indiquée

ci-dessus peut s'obtenir en faisant réagir la cystéine avec la 35 glucuronolactone dans l'eau.

COOH

CH - NH OH OHOH

| CH-CH-CH-CH-CH-CO

CH2- - S -

La neutralisation du produit ci-dessus à l'aide d'hydroxyde ou de carbonate de sodium ou de potassium par exemple

donne le sel correspondant.

Ces sels doivent de préférence être des sels pharmaceu5 tiquement acceptables, par exemple des sels de sodium, potassium, calcium, magnésium et aluminium.

L'agent selon la présente invention peut inhiber la première apparition de désordres du foie aigus et chroniques et supprime ainsi l'augmentation des niveaux de GOT, de GPT et 10 d'hydroxyproline. En outre, il peut inhiber l'évolution de la fibrose hépatique telle qu'on la rencontre par exemple dans la cirrhose du foie et, en outre, elle peut encore supprimer l'augmentation du niveau de TG dans le foie due à l'absorption

de boissons alcooliques.

L'agent selon la présente invention peut être administré

par voie orale ou parentérale.

Pour l'administration orale, la cystéineglucuronolactone et l'acide cystéineglucuronique prennent chacun de préférence la forme d'un sel tel que le sel de calcium ou de magnésium, 20 et on peut les administrer sous une forme de dosage telle que

dragées, pilules, cachets, granulés et solutions.

Pour l'administration parentérale, les sels d'acide cystéineglucuronique se trouvant de préférence sous la forme d'une solution aqueuse d'un sel soluble dans l'eau tel que le 25 sel de sodium ou de potassium, peuvent être administré par voie sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, par

exemple.

Les formes de dosage mentionnées ci-dessus peuvent généralement se préparer sous la forme d'une composition en 30 mélangeant le dérivé selon la présente invention avec un

support convenable de façon classique.

Par exemple, le composé selon la présente invention est mélangé avec un excipient tel que l'amidon ou le lactose et un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium ou le talc et on

transforme le mélange en pastilles pour l'administration orale.

Il est également possible d'obtenir des solutions injectables en dissolvant le composé sous la forme de son sel de sodium ou de potassium dans de l'eau distillée pour constituer

l'agent ou la composition selon la présente invention, en ajustant le pH de la solution au niveau de celui des fluides corporels A l'aide d'hydroxyde ou de carbonate de sodium ou de potassium si nécessaire, en ajoutant en outre un agent pour rendre cette solution isotonique et ensuite en filtrant la solution pour éliminer les micro-organismes.

L'agent ou la composition de lutte contre les désordres hépatiques selon la présente invention peut contenir des ingrédients pharmaceutiquement actifs autres que les composés mentionnés ci-dessus, A moins que ces ingrédients ne conviennent pas aux fins de la présente invention.

L'acide cystéineglucuronique et ses sels qui servent

d'ingrédients de lutte contre les désordres du foie selon la présente invention sont sensiblement non toxiques comme l'indiquent les résultats des tests de toxicité aiguë chez les souris, dont les résultats sont indiqués ci-dessous.

Toxicité aiguë des dérivés selon la présente invention en termes de LD50 (injection intraveineuse) I n I nature * LD50 1

! - I! I

! 1 I sel monosodique I mâle et femelle 2,5 g/kg I! 2 I sel dipotassique I mâle 250 mg/kg I ! 3 I sel de calcium! mâle 100 mg/kg! ! I!I femelle 200 mg/kg! ! 4 I sel de magnésium I mâle 250 mg/kg!

! I! I

* l'espèce du sel d'acide cystéineglycuronique est indiqué.

En se référant au tableau ci-dessus, l'injection n 1

est ajustée à un pH de 7,0 A 7,2 par addition de carbonate de sodium après dissolution de l'échantillon. L'injection n 3 présente une toxicité quelque peu accrue, ce qui est probablement due à des facteurs physiques associées à la faible solubilité du sel de calcium.

Dans le test de toxicité orale aiguë effectué sur des souris, le sel monosodique de l'acide cystéineglucuronique donne une valeur LD50 de 7,5 g/kg et, de même, le sel de calcium correspondant donne une valeur LD50 de 7,5 g/kg.

La dose du composé à utiliser selon l'invention peut

varier en fonction du symptôme et de la voie d'administration.

Pour l'administration orale, on peut généralement administrer le dérivé selon une dose quotidienne comprise entre 1 et 5 000 mg, de préférence 10 et 2 000 mg pour un être humain adulte, et pour une administration par injection, à une dose quotidienne comprise entre 1 et 2 000 mg, de préférence 10 et 1 000 mg. Cette dose quotidienne peut être administrée en une

ou plusieurs prises.

D'autres buts et caractéristiques de l'invention apparaitront & la lecture de la description suivante:

- la figure 1 est une courbe de concentration dans le sang en fonction du temps, du CGCa (cystéineglucuronate de calcium) dans l'expé15 rience décrite dans l'exemple 1; - la figure 2 montre des photographies montrant l'image histologique des hépatocytes (colorés à l'hématoxiline-éosine, x 10) dans une expérience sur des désordres du foie chro20 niques induits par du CC14 décrite dans l'exemple 2 (B); la figure 2(A) représente le groupe témoin et la figure 2(B) représente le groupe traité par le CGCa. Dans les exemples suivants, les propriétés pharmacolo25 giques typiques des dérivés à utiliser selon la présente invention sont illustrées par des résultats de tests effectués sur des lapins et des rats. Il est largement reconnu dans

l'art antérieur que ces animaux sont des modèles fiables des êtres humains en ce qui concerne les activités pharmacologi30 ques pertinentes.

Exemple 1 - Transfert dans le plasma et durée du niveau dans le plasma On étudie sur des lapins le transfert dans le plasma du sel de calcium de l'acide cystéineglucuronique (CGCa) après 35 administration orale et la durée du niveau dans le plasma Méthode de test' On administre à des lapins par voie orale du CGCa à la dose de 500 mg/kg et l'on prend des échantillons de sang après 0, 2, 4, 6,... et 24 heures. Les sérums séparés des échantillons de sang sont débarrassés de leur protéine à l'aide d'acide trichloroacétique et ensuite on détermine la teneur en cystéine libre des sérums ainsi que la cystéine provenant de l'hydrolyse à la suite d'un chauffage. Cette détermination se fait par marquage à la fluorescence et chromatographie liquide

à haute performance (HPLC).

"Résultats des testsw Comme indiqué sur la figure 1, la teneur en cystéine libre dans le plasma commence à augmenter progressivement deux heures après l'administration orale de CGCa et une valeur maximum de 50 gM se maintient pendant une période courant les heures 6 à 10. Après 24 heures, cette teneur se trouve à une

valeur normale (o --o). D'autre part, la courbe décrite par 15 o---o indique la teneur totale en cystéine après hydrolyse.

Donc, la différence entre la valeur (o- o) et la valeur (o- o) correspond à la teneur en cette proportion de cystéine

qui s'est formée par hydrolyse.

Etant donné que, avant l'administation de CGCa, la teneur en cystéine après hydrolyse ne présente pas une augmentation substantielle, cette proportion de cystéine qui s'est formée par hydrolyse après administration de CGCa peut être considérée comme provenant du CGCa. Donc, la teneur en CGCa est en corrélation avec la teneur en cystéine et ainsi, la teneur en cystéine se maintient à des niveaux accrus tant que du CGCa est présent dans le plasma. Etant donné que l'administration de CGCa conduit à une conversion graduelle en cystéine, on peut en conclure que des niveaux augmentés de cystéine dans le sang peuvent être maintenus pendant une période prolongée 30 par comparaison avec l'administration d'une dose équimolaire

de cystéine (A -A).

Exemple 2 - Effet sur les désordres hépatiques induits par le

tétrachlorure de carbone.

On utilise largement le tétrachlorure de carbone (CC14) 35 dans l'étude des désordres hépatiques expérimentaux. On considère que ce désordre est causé par des peroxydes lipidiques provenant d'une liaison covalente de CC13 aux lipides dans

les microsomes du foie.

i t (A)-l Effet sur les désordres hépatiques aigus induits par CC14 "Méthode de test" On utilise des rats mâles de souche Wistar après les avoir fait jeûner. On utilise six groupes: (1) groupe témoin; (2) groupe CGCa I (administration de CGCa 12 heures avant administration de CC14), (3) groupe CGCa II (administration de CGCa 10 heures avant le CC14), (4) groupe CGCa III (administration de CGCa 8 heures avant le CC14), (5) groupe CGCa IV (administration de CGCa 6 heures avant le CC 14) et (6) groupe CGCa V (administration

de CGCa 4 heures avant le CC14).

Dans le groupe témoin, on administre de la carboxyméthylcellulose à 0,5%, à la dose de 20 mg/kg et dans les groupes CGCa I à V, on administre du CGCa par voie orale à la dose de 2,0 g/20 ml (CMC 0,5%)/kg. Le CC14 qui induit les désordres hépatiques est administré par voie intrapéritonéale à chaque groupe à la dose de 0,08 ml/kg (dilué à l'aide d'huile d'olive de façon à donner à la dose un volume de 5 mg/kg) et, après environ 18 heures, on prend des échantillons de sang pour déterminer le s-GOT et le s-GPT. Le programme de test est celui donné dans le tableau suivant: "Résultats du test" Les valeurs de s-GOT et s-GPT obtenues sont indiquées

sur le tableau 1.

Tableau 1 - Valeurs de s-GOT et de s-GPT (en unités de Karmen) ! Groupe I s-GOT! s-GPT! n !

!!! I I

I Contrôle I 1 662,1 + 634,54! 494,8 + 187,07 I 7 1

I I I

I I IGroupe CGCa I I1 134,9 + 361,57! 310,5 + 68,08 *! 8 1

! I! ! !

I Groupe CGCa II I 921,6 + 198,43 * I 308,5 + 42,30 * I 7 1 I I I I I I Groupe CGCa III I 929,0 + 202,14 * I 328,2 + 105,72*! 7 I I I I lI I Groupe CGCa IV I 1 493,3 + 480,60 I 502,4 + 210,66 1 8 f I I - I,! I Groupe CGCa V I 1 453,0 + 515,58 I 516,3 + 166,50 1 8 1 I I I I l Signification de la différence relative au groupe témoin:

* p < 0,05; * 0,05 < p < 0,10.

M Co C.) col LnE Sues np aseuuolllluoqzG I leuoil$idewau$ 4-

4- --------- +

14 --------

14-.... +

4- ------- -

i i'4- " -....-. + 14... i i,*' saeaq si '+' auoar i

I I

I T.......................... + I

-- saaq q __ _______ 4--'I

I _ seanaq a - ___----------------------------------- -

IitO DS.0 + i z sia oia 8- -----------------; 3I 99'393 9 -I IeIovD O D4. i io Ir D IX asanoq O1 4 A; +...........; o %5'0 DW + 1110 %sO 'O 4- - I a4- msainaq ilz * S + sanq 1 +; A e:aM adno!i AI v:0 adnoî0 III e)O) adnoîg II e'0D adnoig I e:DM adno.i uTomu9 adnoîo Lorsque l'on administre du CGCa 8 ou 10 heures avant le CCl4, l'augmentation du s-GOT induite par le CCl est

4' 4

significativement supprimée (p < 0,05), tandis que l'augmentation de sGPT est significativement supprimée 5 par une administration 10 ou 12 heures plus tôt de CGCa

(p < 0,05).

<)-2 Effet sur les désordres hépatiques aigus induits par le Cc'4À On utilise après les avoir fait jeûner des rats Wistar 10 mâle répartis en quatre groupes: (1) groupe témoin, (2) groupe CGCa I, (3) groupe CGCa II et (4) groupe CGCa III. Dans le groupe témoin, on administre par voie orale du CMC 0,5% à la dose de 20 ml/kg et, dans les groupes CGCa I, II et III, on administre du CGCa par 15 voie orale aux doses de 1,02, 1,43 et 2,0 g/20 ml (CMC 0,5%)/kg (rapport commun 1,4), respectivement. Dix heures plus tard, on administre du CCI4 par voie intrapéritonéale à la dose de 0,08 ml/kg. Environ 18 heures

après cela, on prend des échantillons de sang pour 20, déterminer le sGOT et le s-GPT.

"Résultats de test" Les valeurs de s-GOT et s-GPT obtenues sont indiquées

sur le tableau 2.

L'administration de 1,43 g/kg de CGCa supprime de façon 25 significative l'augmentation de s-GPT (p < 0,05) et donne une tendance à la suppression de l'augmentation du s-GOP. Pour une dose de 2,0 g/kg, les augmentations de

s-GOP et s-GPT sont significativement supprimées (p < 0,05).

Tableau 2 - valeurs s-GOT et s-GPT 30 I Groupe! s-GOT I s-GPT n! I _ _ _ _ _ _ _ j _ _ _ _ _ _ _ I _ _ _ _ _ _ _ I 1 I Contrôle i 1 844,9 + 899, 87! 539,2 + 264,99 19!

! _ _ _ _ _ _ I - - _ _ _ _ _ _ I - - _ _ _ _ _ I 1

! Groupe CGCa I I 1 755,6 + 784,49 I 427,2 + 131,72 18 1 I Groupe CGCa II I 1 192,0 + 264,07 ' I 309,5 + 86,25 * I Groupe CGCa III I 1 106,2 + 224, 53 * I 299,9 + 79,85 * I1 8 1

I I --I - -I

(en unités de Karmen) Signification de la différence relative au groupe témoin:

* p < 0,01; * p < 0,05; 0,05 < p < 0,10.

OO > d > 5o0O x '500 a d *: ulow3 adnoi2 el aaA aoualJ jp el ap uoàlwlaljugS I; i i i 01 i i i S0'6 + 9'TLC i 10'6ú O'SZ i 8Z'O +: i 0I X 9'5 + + I0'0 c-0 x9 m' OS'I + O'E 801'0 + Sú0 i ú8'<Z + S'65 i x <115 + L'16<1 i + ú1'LST + 8'8SE i adno eDDD adno20 i 8'81 + 685 i Te(zaiT; 6'%8ç i i i I cLiLs '; g<ici I i i i i i i i i i i i i i i -0T OZ<o; ciú r x L9'9 +; 810<0i S +'7; 6<5 i

) S S1 - 9<I"4 I

<Tp/en) (IP/s) (HdP) (1W/um) (IP/Su) (auOiisuzy-Sui sgilun) i i i i i i i aU aseJ3: U i u el Suep d4i I L1-k Di suqp Ifl& lumqlVi saulqulI$11 diY i 0a9q i d'IVd i BQ'I Hll d3IO0-s Sú 0ú g Ile3O S6'96, + 1T'%6 i (PISaalqOIM S11Uun) i i 1 i 1 ET'VIT + O"S Z i i (uauexl s"lun) i 51'15S + 6'ZIL i (umui s91un) i i i i sulo0w3 adnoao j 91Uff I 01a anbTuiTqooTq uoTeuTwiuaagp.ed sanuaqqo saguuoa 'ú nealqe3 al ans sagnbTpui - ú nealqel luos eDDD adnoi6 ael a uTom94 adnoab al inod sanuaqqo dAH slnaleA sat;a aTiTqDoTq ap sisao sap uellns9a sauuop saq,.sa4 op siellns9,a a-H aelo el upATfns aiog np anbTbolooqed uaexa un a aToj al suep (dAH) auTIoid Axolpqp sTessa sap quamaleg6 aonogxa uo Doa '&aD-S a1o-s np uoT4euTuuaagp el inod adnoia anbeqo ap 6ues np suolIT4ueqog sap allTanDai uo 'PIDD ap uoT4e;sruxwupe a9aTuIap eI sQade sanoC sToal 'sauTewas 0O quepuad (trpaipuaA 3a Xp/eu) auTewas el STO; xnap 6X/ui S ap asop el V uoTInIos el aisxuTuipe uo,l la (A/d) %0I ap uoTleil

-UaDuOD eI V aATIo,p alnq,l ap suep tIDD np inossTp uo eDDD ap %S;a alpnod ua auTbfga ao ap abuelgw un xneuiTue xne auuop uo 'VDED adnoa6 al suep la (Z-ZD suedúer alD) aapnod ua aui6ia un xneUTuP xne auuop uo 'uTouzo4 adnoi6 aIl suva eDgD adnoab al la uTou9q adno6 a l aTfoAeS V 'sadnoi6 xnap ua sT4aedga aS saIw s4ej sap asTi-4n uo.sa ap apoq49N.

elDD ael ed s;TnpuT sanbTuolqD sanbTUd9q saepmosqp sal ans jae; SI 0I S (<)

15 20 25 30 35

Le CGCa supprime de façon significative les élévations du niveau de s-GOT et de s-GPT (p < 0,05) et tend à supprimer une élévation du niveau de LDH (0,05 < p <

0,10).

En outre, le CGCa supprime significativement une élévation du niveau de HyP (p < 0,05). Pathologiquement, le groupe témoin offre une image d'hépatocirrhose caractérisée par une nécrose marquée des hépatocytes et la formation de pseudolobes. Une infiltration cellulaire principalement de lymphocytes est prédominante et l'on constate des vacuoles suggérant une variation graisseuse. D'autre part, dans le groupe CGCa, bien que l'on constate une dégénérescence vacuolaire, la structure lobulaire originale du foie est maintenue sans manifestation d'hépatocirrhose, par exemple par formation de pseudolobes. La nécrose est dispersée et l'infiltration cellulaire est légère lorsqu'on la compare à celle du groupe témoin (figure 2). Les résultats ci-dessus suggèrent que la CGCa supprime une augmentation du niveau de HyP, ce qui est un indicateur de la fuite d'enzymes et de fibrose hépatique, se manifestant toutes deux par une inflammation, une nécrose et une dégénérescence des hépatocytes, et une évaluation histopathologique indique que le CGCa est efficace contre les dommages et la fibrose subie par les hépatocytes.

Dans d'autres expériences dans lesquelles on administre respectivement de la cystéineglucuronolactone (CGL) et du cystéineglucuronate de sodium (CGNa) par voie orale à la dose de 2,0 g/kg 1 heure avant l'administration intrapéritonéale de 0,08 ml/kg de CC14, les suppressions en % de s-GOT et s-GPT obtenues par comparaison avec celles du groupe témoin sont indiquées ci-dessous.

Suppression du s-GOT Suppression du s-GPT CGL.... 35,0% 34,8% CGNa... 37, 2% 39,3% Exemple 3 - Effet sur les désordres hépatiques induits par

1 'acétaminophène.

L'acétaminophène, bien qu'il soit un bon analgésique antipyrétique, occasionne de sévères dommages du foie lors5 qu'on l'administre par doses importantes. On dit que ceci est dû à une nécrose de cellules du foie occasionnée par la liaison covalente aux protéines du foie d'un dérivé arylique, métabolite intermédiaire nuisible, se formant à la suite d'une diminution, liée à la dose d'acétaminophène, du niveau de glutathion dans le foie, d'o une diminution de la capacité à

détoxifier l'acétaminophène par conjugaison.

Dans cette expérience, on teste les effets de la cystéineglucuronolactone et des sels d'acide cystéineglucuronique (groupes GC) sur les désordres hépatiques induits par l'acé15 taminophène en termes d'aptitude à supprimer les augmentations

de niveau dans le sérum du GOT, du GPT, du LDH et de i'ALP.

"Méthode de test"

On utilise des rats mâles SD après 24 heures de jeûne.

Dans les groupes témoins et les groupes normaux, on administre par voie orale 10 ml/kg de CMC à 0,5%, et dans les groupes CG, on administre 500 mg/10 ml/kg des composés respectifs par voie orale. Une heure plus tard, on administre par voie intrapéritonéale 400 mg/15 ml/kg d'acétaminophène au groupe témoin et aux groupes CG, tout en administrant au groupe normal par voie intrapéritonéale 15 ml/kg de solution saline physiologique. Après 24 heures, on sacrifie les rats et on sépare les sérums et on en détermine le GOT, le GPT, le LDH

et 1'ALP.

"Résultats des tests" Les résultats des dosages dans le sérum du GOT, du GPT, du LDH et de l'ALP pour chaque groupe sont indiqués dans le

tableau 4.

Dans les groupes GC, on obtient une suppression significative des désordres hépatiques induits par l'acétaminophène. 35

2598082 14

Tableau 4 - Valeurs de s-GOT, s-GPT, LDH et ALP I t Groupe sa-GOT s-GPT

: I I.

t. ContrOle 1065,0 + 297,7 1 348,4 4. 131,6 ! Groupe CGCC 284,2 + 136,3 *** 121,7 + 33,7* I Croupe CG IA 180,1. 63,0 ***1 78,4. 13,7*** I I t t Groupe CG% 1386,3 + 88,1 *** 1 141,9 + 27,5 ** 10 t t Groupe CCL 185,0 + 83,3 *** 1 85,5 +. 22,7 *** t I I t t t LDH! ALP l! I t t t 2973,4 + 1213, 3 - 14,5 + 18,6 t1 1I t 705,1 + 283,3 ** t 11,4 + 1,52 ** t! t 557,2 + 240,7 *** t 10,4 + 1,22 *** I X I -1 I I ! ! ! ! I

857,5 -+ 296,1 ** 540,3 + 238,1 ***

! I

12,8 + 1,20 * 10,7 + 1,04 ***

! Groupe normal 1 62,0 + 5,37 *** 1 26,1 + 1,35 *** t 1 t l

388,0 + 141,7 ***! 11,5 + 2,26 **

! - Signification des différences 15 pour le groupe témoin: p < 0,001 ** p < 0,01 *p < 0,05 -(CL- cystéineglucuronolactone CGN: cystéineglucuronate de magnésium CORa, cystéineglucuronate de sodium CGCa: cystéineglucuronate de calcium n. - 6-8 GOT, GPT -- en unités Karmen LDH -- en unités Wroblewski ALD -- en unités BL(Bessey-Lovry)

Exemple 4 - Effet sut l'hépatophathie induite par la galactosamine.

L'hépatopathie induite par la galactosamine est causée par l'inhibition des métabolismes des glycoprotéines et des protéines et on l'a utilisé comme modèle expérimental puisqu'elle ressemble pathologiquement à l'hépatite virale. On étudie donc l'effet du CGCa sur l'hépatopathie induite par la galactosamine en utilisant comme indicateur le s-GOT et le s-GPT. "Méthode de test' On utilise des rats mâles Wistar après les avoir fait jeûner. On constitue trois groupes, c'est-à-dire (1) un groupe

normal, (2) un groupe témoin et (3) un groupe CGCa.

On administre par voie orale 20 ml/kg de CMC à 0,5% aux groupes normal et témoin et on administre par voir orale 2,0 g/20 ml/kg de CGCa au groupe CGCa. 15 heures après, on effectue une deuxième administration de la même dose. 5 heures après 5 heures, on administre, par voie intrapéritonéale,

400 mg/4 ml de solution saline physiologique/kg de chlorhydrate de galactosamine aux groupes témoins et CGCa.

24 heures après, on recueille des échantillons de sang. pour en déterminer le s-GOT et le s-GPT.

"Résultats de test"

Les valeurs de s-GOT et s-GPT ainsi obtenues sont indi5 quées sur le tableau 5.

Tableau 5 - valeurs de s-GOT et s-GPT

I I I I 1

I Groupe I s-GOT I s-GPT I n I

_ I I _1

I I I I t I Contrôle I 2938,2 + 1588,77 1 1174,8 + 565,24 I 10 1

II_ I I I!

! I I I!

I Groupe CGCa I 1643,1 + 480,43 * I 702,3 + 223,08 *1 9 1 l I I _ I (en unités de Karmen) de la différence relative au groupe témoin: Signification * p < 0,05 L'administration de chlorhydrate de galactosamine conduit à des élévations des niveaux de s-GOT et s-GPT et l'administration orale de CGCa inhibe significativement ces élévations de 20 niveau (p < 0,05). On peut donc considérer que le CGCa est

efficace contre les désordres hépatiques induits par la galactosamine.

Exemple 5 - Effet sur l'hépatopathie induite par l'alcool.

L'alcool se métabolise in vivo et donne de l'acétaldéhyde 25 dont on connaît la toxicité. Cependant, lorsqu'un composé contenant un groupe SH, l'acétaldéhyde se combine instantanément avec ce composé pour former une thiazoline et il est de

ce fait détoxifié.

Dans cette expérience, on force des rats à absorber de 30 l'alcool par voie orale et l'on examine si le CGCa est efficace dans l'inhibition des désordres hépatiques induits par

l'alcool qui en résulte.

"Méthode de test" On utilise des rats mâles Wistar après les avoir fait 35 jeQner. On constitue trois groupes: (1) groupe témoin,

(2) groupe CGCa, (3) groupe normal.

Les groupes témoins et normaux reçoivent par voie orale ml/kg de CMC à 0, 5% et le groupe CGCa reçoit par voie orale 2,0 g/20 ml/kg. Après 13 heures, on administre par voie orale de l'alcool & 20% à la dose de 5 g/kg. Après 8 heures, on retire le foie

et on examine le TG par la méthode à l'acé-

tylacétone. "Résultats de test" Les niveaux de TG dans le foie ainsi trouvés

sentés sur le tableau 6.

Tableau 6 - Niveaux de TG dans le foie

sont pré-

! ! Groupe ! TG dans le foie

15 20

30 35

I I Contrôle I 1 I Groupe CGCa G I Groupe normal I *.l I

7,8 + 1,93

! 1 I n I

I 1

I 1

I 10 1

1! ! 1

-I

I 9 1

1 1

I I

I 3 I

I I

4,4 + 1,29 *

3,4 + 0,54 **

(en termes de mg/g de foie) la différence relative au groupe témoin: Signification de ** p < 0,01 * p < 0,05 L'administration d'alcool augmente sensiblement le niveau de TG dans le foie par comparaison avec celui du groupe normal (p < 0,01). Au contraire, l'administration de CGCa supprime significativement cette augmentation (p < 0,05). Forme de dosage - Exemple 1 - Dragées cystéineglucuronate de calcium........ 200 mg. cellulose cristalline................. 110 mg hydroxypropylcellulose......

........ 16 mg stéarate de magnésium................. 4 mg..DTD: On forme des dragées de façon conventionnelle en utilisant les ingrédients ci-dessus comme matériaux pour une dragée. On peut les revêtir d'un film ou les revêtir de sucre si nécessaire.

Forme de dosage - Exemple 2 - Granulés cystéineglucuronolactone...........

. lactose............................... amidon...........................DTD: ..... gélatine.............................. mg 100 mg 97 mg 3 mg On prépare les granulés en utilisant les ingrédients ci-dessus dans les proportions indiquées ci-dessus pour que..DTD: les doses ainsi indiquées forment un ensemble.

Forme de dosage - Exemple 3 - Cachets 5. cystéineglucuronate de magnésium.

... 100 mg lactose............................... 50 mg cellulose cristalline................. 95 mg talc.................................. 5 mg On remplit les cachets à l'aide d'un mélange des ingré10 dients cidessus utilisés dans les proportions ci-dessus de telle sorte que les doses ci-dessus correspondent à un cachet rempli. Forme de dosage Exemple 4 - Injections On distribue du cystéineglucuronate monosodique par 15 portions de 50 mg dans des fioles pour solution injectable..DTD: dans des conditions stériles.

Séparément, on prépare un solvant pour injection de façon classique en utilisant les produits suivants: À phosphate disodique mono-acide........ 1,0 g 20. chlorure de sodium.................... 0,8 g eau distillée pour injection..... q.s. pour 100 ml On répartit la solution en portions de 5 ml dans des

ampoules qui sont ensuite scellées.

En accord avec la présente invention, l'acide cystéine25 glucuronique ou la cystéineglucuronolactone administrés par voie orale passe dans le flux sanguin pour y occasionner des diminutions significatives du niveau de GOT et GPT dans des

modèles de désordres hépatiques.

De même, dans les désordres hépatiques induits par le 30 tétrachlorure de carbone, bien que l'image histopathologique du foie dans le groupe témoin manifeste une certaine progression de la fibrose du foie, l'image du groupe CGC2 montre une

suppression de la fibrose.

Dans l'examen biochimique, également, la présente inven35 tion inhibe significativement une élévation de l'hydroxyproline qui est un indicateur de la fibrose du foie et inhibe significativement l'élévation du TG dans le foie due à une

charge alcoolique.

a s 1

15 20

-30 35

Bien entendu, la présente invention n'est pas limitée.ux modes de réalisation décrits et représentés; elle est usceptible de nombreuses variantes accessibles à l'homme de 'art sans que l'on ne s'écarte pour cela de l'esprit de 'invention.

Claims (10)

REVENDICATIONS

1.- Un agent prophylactique et thérapeutique de lutte

contre les désordres hépatiques constitué d'acide cystéineglucuronique, de cystéineglucuronolactone ou d'un sel pharma5 ceutiquement acceptable de l'un ou l'autre desdits composés.

2.- Un agent selon la revendication 1, dans lequel le sel est un sel de sodium, potassium, calcium, magnésium ou aluminium.

3.- Une composition prophylactique et thérapeutique de 10 lutte contre les désordres hépatique constitué d'une dose efficace d'acide cystéineglucuronique, de cystéineglucuronolactone ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de l'un ou

l'autre desdits composés et d'un support.

4.- Une composition selon la revendication 3, dans

lequel le sel est un sel de sodium, potassium, calcium, magnésium ou aluminium.

5.- Une composition selon la revendication 3 ou 4, sous forme de dragées, pilules, granules, cachets ou de solution aqueuse.

6.- Une unité de dosage d'acide cystéineglucuronique, de cystéineglucuronolactone ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de l'un ou l'autre composé utilisable pour la prévention ou pour la lutte contre les désordres hépatiques, qui comprend une dose quotidienne de préférence divisées en une à quatre prises, du composé ou de son sel, cette dose quotidienne étant comprise entre 1 et 5 000 mg, de préférence 10 et 2 000 mg pour l'administration orale et 1 et 2 000 mg, de préférence 10

et 1 000 mg pour l'administration parentérale.

7.- Un procédé de prévention ou de lutte contre les désordres hépatiques qui consiste à administrer par voie orale ou parentérale une dose quotidienne efficace d'acide cystéineglucuronique, de cystéineglucuronolactone ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de l'un ou l'autre desdits composés à

un patient.

8.- Un procédé selon la revendication 7, dans lequel la dose quotidienne efficace est une dose orale de 1 à 5 000 mg

ou une dose parentérale de 1 à 2 000 mg.

15 20 25 30 35

9.- A titre de médicament pour abaisser le niveau de

GOT, GPT, LDH ou ALP dans le sang, ou le niveau de TG ou HyP dans le foie, toute composition formée de doses quotidiennes efficaces d'acide cystéineglucuronique, de cystéineglucuronolactone ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de l'un ou l'autre desdits composés à un patient.

10.- Médicament selon la revendication 9, dans lequel ladite dose quotidienne efficace est comprise entre 1 et 000 mg pour l'administration orale ou 1 et 2 000 mg pour

-l'administration parentérale.