FR2528181A1 - Dispositif et procede de dosage immunologique - Google Patents

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Abstract

L'INVENTION EST RELATIVE AUX DOSAGES IMMUNOLOGIQUES DANS UN RECIPIENT COMPRENANT UNE OUVERTURE ET RENFERMANT UN MELANGE D'AU MOINS UN LIQUIDE ET UN SOLIDE, A SEPARER AVANT DOSAGE. L'INVENTION PREVOIT D'OBTURER DE FACON ETANCHE L'OUVERTURE DU RECIPIENT PAR UN BOUCHON CREUX 1, RENFERMANT UNE MATIERE 6, QUI ABSORBE LE LIQUIDE DU RECIPIENT LORSQUE CELUI-CI EST RETOURNE, CE QUI PRODUIT LA SEPARATION DES PHASES LIQUIDE ET SOLIDE. L'INVENTION EST APPLICABLE PAR EXEMPLE AUX DOSAGES DES ANTIGENES ET DES ANTICORPS.

Description

La présente invention concerne un dispositif et un proc-dé de dosage
immunologique, en particulier pour les dosages immunologicues qui comportent une
opération de séparation de phases et oui surnt effec-
tués manuellement. Il est bien connu que, dans certains dosages
imiunologiques effectués sur des échantillons liqui-
des, on forme un mélange comprenant un liquide et un solide Le solide peut par exemple comprendre un réactif sous forme non solubilisée, par exemple un réactif lié à un support insoluble, ou bien un produit d'une réaction, par exemple un précipité formé après la réaction primaire, par exemple par addition d'un second anticorps ou de polyéthylène glycol, ou bien un adsorbant pour l'un des constituants du liquide,
par exemple du charbon adsorbant Le liquide réaction-
nel est séparé du solide avant l'achèvement du dosage.
De tels dosages comportent habituellement l'emploi d'un marqueur, par exemple un atome radioactif, et la quantité de substance dosée (normalement un antigène, un haptène ou un anticorps) est déterminée en mesurant la quantité de marqueur subsistant dans le
liquide ou liée au solide.
Dans les dosages de ce type, qui sont effectués manuellement, le solide est habituellement soit des particules finement divisées, soit un déptt sur la paroi du récipient de réaction (habituellement un tube à essai) L'opération de séparation est effectuée par
décantation de la phase liquide du récipient de réaction.
Pour faciliter ceci, dans le cas d'une phase solide particulaire, le mélange peut être centrifugé (après incubation) pour agglomérer les particules au fond du
récipient A titre de variante, habituellement préf 6 ra-
ble, on utilise des particules conportent un mat(riau susceptible d'gtre attiré magnétiquement, de telle sorte nue les rarticules peuvent être sddimentéez et être retenues dans le rc ent de rection, pendant
la d'cantation, par l'aprlicltîor d'un cham man&'tir'ue.
Des problèmes particuliers se prsentent dans le cos de l'utilisati Lon de marcueurs radioactifs, du fait que l'opération de séparation doit être Eîectuêe avec grand soin pour éviter toute contamination du personnel et de l'environnement par la matière radioactive Ainsi, l'opération de d Acantation doit être effectuée avec soin et en prenant des précautions pour éviter tout écoulement et toute contamination d'autres façons En outre, lorsque l'on désire mesurer le marqueur dans la phase 'iquide, le liquide ne peut pas être versé à l'évacuation, mais il doit être conservé jusqu'après
la mesure.
La présente invention permet d'atténuer ou mrme d'éviter complètement un grand nombre de ces problèmes, ce qui permet d'économiser à la fois du temps et du
travail dans la réalisation du dosage Selon une carac-
téristique de la présente invention, un bouchon est prévu pour être appliqué sur l'ouverture d'un récipient, de facon à fermer ce récipient d'une façon étanche pour les liquides, ce bouchon renfermant une matière absorbant les liquides, qui est accessible a un liguide contenu dans le récipient, de telle sorte que, lorsque leréscipient fermé contenant du liquide est retourné, ladite matière absorbe ce liquide La pr Asente invention concerne également un procédé de dosage immunolog-ique, qui utilise un récipient muni d'un tel bouchon, et elle s'étend également au recrtient et au
bouchon nour ce racinient, considérés en eux-mêmes.
óelon la pr'sente invention, le mélan-e réactif final pour le dosage imnunologique (comportant une rhase solide, habituellement un réactif non solubilisé) est formé dons un Cnc"nient ' réactionCe ré-cipient est normnaemrent un etit tube esai comme ceux bien connis pour etre utilisés dons les dosar-es immunologiques menuels), bien:ue d'autres tyaes de r cl ients ' uissent Dtre;Ealemenlft lutilisés I ' 'rité ouvart_ -do tube à essai (ou bien l'ouverture du réci pient) est alors fermée avec un bouchon selon la présente invention, le mélange réactionnel étant ainsi enfermé dans le
tube à essai d'une façon étanche pour les liquides.
Après incubation, l'opération de séparation des phases est effectuée en retournant le tube à essai pour amener la phase liquide en contact avec la matière absurbante contenue dans le bouchon En fait, tout le liquide est absorbé et retenu dans la matière, si bien que, lorsque l'on manipule ensuite le tube à
essai, seule la phase solide reste dans le tube lui-
même, la phase liquide étant retenue dans la matière absorbante contenue dans le bouchon Dans le cas d'un marqueur radioactif, la phase solide ou bien la phase liquide peut être soumise à un comptage en plaçant
le tube à essai dans un compteur approprié.
Comme cela apparaît clairement aux spécialistes, il est important d'éviter que la phase solide ne pénètre dans la matière absorbante En pratique, ceci est obtenu aisément Dans le cas ou la phase solide est sous la forme d'un dép 8 t sur la partie inférieure de
la paroi du tube à essai, il n'y a pas de problème.
Lorsque l'on utilise,comme phase solide, des particules
susceptibles d'gtre attirées magnétiquemert, celles-
ci peuvent être retenues dans le tube lors du retourne-
ment,en utilisant un champ magnétique Des dispositifs prévus à cet effet sont connus et sont décrits par exemple dans le brevet européen N 30 086, auquel on se référera pour davantage de détails Dans le cas de 0 particules non magnétiques, il sera habituellement nécessaire de centrifuger avant le retournement, pour agglomérer les particules (ou les autres solides),
sur le fond du tube à essai.
Selon une caractéristique importante de l'inveln-
tion, lorsque le bouchon a été appliqué sur le tube à essai ou un autre récipient, leurscontenu S y sont
enfermés, et le reste du dosage ainsi que (si le réci-
pient est jetable) l'élimination des réactifs après
le losage peuvent avoir lieu sans ouverture du r'ci-
rient Ceci réduit de façon importante le riscue de contamination et d'écoulement involontaire cui
pourrait affecter la précision du résultat du dosage.
Ces facteurs sont particulièrement importants
lorsoue l'on utilise un marcueur radioactif.
Bien nue le bouchon selon la présente invention puisse être réalisé en n'importe quelle substance appropriée, les bouchons en maatière plastique sont 0 à la fois peu coateux et commodes Dans le cas de bouchons pour tubes à essais et analogues, le bouchon peut avoir la forme d'une capsule dans lacuelle est logée la matière absorbante, cette matière étant exposée aux liquides contenus dans le tube,à travers l'extrémité ouverte du bouchon Le bouchon veut être pourvu d'une ou plusieurs nervures circonfèrentielles destinées à s'appliquer contre la paroi du tube à essai pour former un obturateur à frottement doux, étanche pour les liquides Bien cue des bouchons
à frottement doux soient préférables, d'autres dispo-
sitifs sont également possibles (par exemple des
bouchons à vis etc).
La matière absorbante peut être de différents types, par exemple une matière spongieuse, avec ou
sans absorbants chimiaues; elle est -constituée cepen-
dant de préférence par de la ouate de cellulose, telle oue celle utilisée généralement comme matière
filtrante dans les cigarettes, les pipes, les reser-
voirs de stylographes Une matière filtrante de ce
0 genre est connue sous la marcue déposée "Transorb".
La quantité de matière absorbante doit etre suffisante pour absorber toute la phase liquide hors du récirpient de réaction Pour la plupart des applications,
le volume de la phase liquide dans les dosages imruno-
lo Ficues manuels ne dépassera pas de beaucoup environ rml, et la disposition d'une matière absorbante apnropriée à cet effet, dans un bouchon,ne rose pas de problème Il est prréftrable de prévoir dans la matière absorbante un ou plusieurs canadx al'orn',s
(qui s'étendent en -énéral parallélement à l'ax:e Ion-
gitudinal du tube a essai ou du récipient équivalent), de manière nue le liquide soit certainement absorbé par la matière de façon rapide. Lorsqu'un marqueur radioactif est utilisé dans le dosase, et cue l'on désire soumettre à un comptage
la ohase solide restant dans le récipient après l'opé-
ration de séparation, la matière absorbante peut avantageusement contenir un absorbeur de radioactivité (habituellement un oxyde d'un métal lourd tel aue du trioxyde de bismuth) Ceci réduit le risque que le marqueur radioactif présent dans le liquide absorbé ne contribue au comptage de la radioactivité de la
phase solide.
De nombreux dosages immunologiques Iaanuels sont effectués par séries (voir le brevet européen NO 30086), en disposant une série de tubes à essais sur un support En utilisant un bouchon selon la présente invention sur chaaue tube, l'ensemble du support peut être retourné (après incubation) pour effectuer l'opération de séparation Cette procédure peut être automatisée, de telle sorte que, après un temps donné d'incubation, le support est retourné automatiquement, puis, lorsque le liquide contenu dans chaque tube a Èté absorbé, ledit support est ramené dans sa position normale Les tubes peuvent
être ensuite soumis à un comptage du maraueur radio-
actif C'est une procédure particulièrement avantageuse dans le cas o la phase solide est un dépôt sur la
paroi du tube à essai ou bien des particules suscepti-
bles d'gtre attirées manétiquement Dans ce dernier
cas, des moyens sont pr A-vls pour appliquer automati-
auement un champ mané,tiaue pour produire la sédimen-
tation des particules après l'incubation, mais avant
le retournement dui support.
o i i tre d'xemle, or a d'crit ci-dessous et ii ustrû sch-r:ai-iuement au dessin:nexé une forme
de rè- lsaeion de l'1 nven k,.
La figure 1 est une vue en c Dure lonitudina Le d'une forme de réalisation d'un 'Bceuchon selon la
présent e invention.
La figure 2 est une coupe suivant la ligne
-. de la figure 1.
Sur les figures du dessin, le bouchon selon 0 la présente invention est constitué par un corps moulé Ien matière plastique, en forme de capsule allongée, dont une extrémité, 2, est fermée, l'autre extrémité, 3, étant ouverte Le corps moulé présente
un col 4 destiné à ttre engagé dans l'extrémité ouver-
te d'l-un tube à essai (non représenté) Des nervures circonférentielles, 5, sont prévues pour s'aprlinuer
de façon étanche contre la paroi du tube à essai.
Un filtre allongé, 6, en cellulose, est engagé à friction dans le bouchon; comme visible sur la figure 2, il renferme des canaux allongés, 7, destinés à permettre au liquide de pénétrer dans la matière pour
y être absorbé.
Un rebord annulaire (non représenté) peut 9 tre prévu à l'intérieur de l'extrémité ouverte, 3, du bouchon, pour contribuer à maintenir le filtre, 6,
à l'intérieur dudit bouchon.
252818 'i RE 7 'IV-i D Cz TICNS 1 Dispositif pour des dosages immunologiques dans un récipient, généralement petit et tubulaire, et contenant un liquide à doser, caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement en un bouchon qui peut être monté sur le récipient pour le fermer d'une façon étanche auxliquides,ce bouchon comportant une matière absorbant les liquides et accessible au liquide
contenu dans le récipient, de telle sorte que, lors-
que le récipient fermé, contenant le liquide, est retourné, la matière absorbant les liquides qui se trouvent dans le bouchon, absorbe le liquide et le retient lorsque le récipient fermé est ramené en position droite, ce qui sépare le liquide absorbé de
toute matière solide contenue dans le récipient.
2 Dispositif selon la revendication 1, caractérisé par le fait que le bouchon est un corps creux en matière plastique, dans lequel est logée
la matière absorbant les liquides.
3 Dispositif selon l'une quelconque des
revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que
la matière absorbant les liquides est un tampon de
cellulose ou une matière spongieuse.
4 Dispositif selon l'une quelconque des
revendications I à 3, caractérisé par le fait que la
matière absorbant les liquides contient un absorbeur
de radioactivité.
Dispositif selon l'une quelconque des
revendications I à 4, caractérisé par le fait que la
matière absorbant les liquides comporte un ou plusieurs canaux allongés pour faciliter l'absorption de liquide. 6 Dispositif pour des dosages immunologiques, comprenant en combinaison un récipient, généralement petit et tubulaire, destiné à contenir le liquide à doser, et un bouchon adaotable à l'extrémité ouverte
dudit récipient pour l'obturer de façon étanche au-
liauidesce bouchon étant réalisé selon l'une quelconque 252818 i P 1isroaîti 4 if' selon lr revercli ction, 6, crctrs nr h f'ai t ru e l e r I 'L-î Äe r t e st, un tube -I essai d-nsl'etréit ouverte ducuel le bouchon est àn afrott-emeiit do-i Ox. P Dispositif l Vu ne cuelconque des revend 4 ic-etion S 6 et 7, car-ct risé tar 'Le c'i ue le r 6 ci-rient contient un réactif d J'-nosé sur sa paroi
interr e.
Cprocécdé de dosa Ee utilisant
ufn dispositif selon l'une o-uneconoue des revendica-
tions 6 à 8, et consistant à f'ormner un m 6 lanr'e r 6 actionrnel cor nrenant un solide et un liquide,, puis à séoarer la phase solide de la tha se lijuide,
procédé caractérisé en ce que l'or effectue la S 6 Dara-
ti-on en -retournant le récipient fermé par le bouchon, si bien qlue le liquide est absorbé par la matière absorbant les liouidesqui est contenue dans ledit bouchon, la phase solide étant retenue dans le
récipient.
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