FR2475227A1 - Procede et dispositif pour examiner les changements de parametres de cellules biologiques - Google Patents

Abstract

L'INVENTION CONCERNE UN DISPOSITIF POUR L'EXAMEN DE CELLULES. SELON L'INVENTION, IL COMPORTE UN MOYEN DE MELANGE 38 POUVANT RECEVOIR AU MOINS UNE PARTIE D'UN ECHANTILLON DE CELLULES 22 ET UNE PREMIERE SOLUTION 24 AYANT UNE OSMOLALITE SPECIFIQUE POUR FORMER AVEC LUI UN MELANGE HYPOTONIQUE, CHAQUE CELLULE AYANT UN ETATDE VALEURS DE PARAMETRES D'ORIGINE; UN MOYEN DE TEMPORISATION 48 RELIE AU MOYEN 38 POUR FORCER LES CELLULES A RESIDER DANS LE MELANGE PENDANT AU MOINS UNE COURTE DUREE CONNUE, POUR QU'ELLES PUISSENT ATTEINDRE UN CHANGEMENT D'AU MOINS UNE VALEUR DE PARAMETRE EN COMPARAISON A LA VALEUR D'ORIGINE, LA QUANTITE DE CE CHANGEMENT DEPENDANT DE L'OSMOLALITE DU MELANGE ET DES PROPRIETES INNEES ET ACQUISES DE CHAQUE CELLULE; UN DISPOSITIF DE MESURE 40 RELIE AU MOYEN 38; ET UN MOYEN DE DEFINITION DE DONNEES 48 PERMETTANT DE COMPARER LES DONNEES A CELLES REPRESENTATIVES D'UNE CONDITION PHYSIOLOGIQUE OU DE SANTE CONNUE. L'INVENTION S'APPLIQUE NOTAMMENT A LA BIOLOGIE.

Description

La présente invention concerne un nouveau discrimina-

teur pouvant être employé pour la discrimination et l'examen en domaine médical. Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à un procédé et un dispositif o, dans un mode de réalisation préféré, la résistance électrique de cellules comme des globules rouges du sang,est changée par osmose.Un tel changement des paramètres des cellules produit un groupe de données en rapport, définissant un motif qui est une caractéristique de la santé ou de la condition physiologique de l'être humain ou de l'animal

source de l'échantillon de cellules.

L'étude des cellules des ttres humains pour la discri-

mination médicale, le diagnostic et d'autres buts médicaux est bien connue. Par exemple, le compte des globules rouges du sang, le volume moyen des globules (PiCV), la teneur en hémoglobine et l'hématocrite sont des paramètres des globules rouges du sang qui sont bien connus et couramment

employés dans rl'étude médicale et le soin des patients.

I1 est typique de libérer l'heémoglobine des globules

rouges par la lyse, c'est-à-dire la destruction des globules.

ne telle destruction des globules est accomplie en dissolvant ou en rompant le stroma du globule et est

également appel hêmolyse.

On sait bien que la pression osmotique de solutionr *.J c'est-à-dire leur osmolalité, comme des solutions salines, varie avec la concentration et le type dessolutés, et que la différence entre la pression osmotique dans une cellule ou globule et celle de son environnement force la

cellule à changer de volume et de résistance électrique.

La solution saline physiologique est isotonique et les cellules en suspension dans une telle solution ne gonfleront ni ne rétréciront jamais en dimension ou

en volume, et leur résistance électrique ne changera pas.

L'eau distillée est hypotonique par rapport à la solution isotonique o les globules du sang résident dans le corps humain. Des solutions salines peuvent être isotoniques,

hypotoniques ou hypertoniques, selon leur concentration.

Un examen relativement bien connu mais moins souvent employé des globules rouges est la fragilité osmotique, qui est une mesure du taux d'hémolyse de la cellule ou

du globule à des changements contrôlés de pression osmotique.

Le Fragiligraphe est un instrument qui mesure la fragilité osmotique et, sur une période de l'ordre de 5 minutes, hémolyse un nombre croissant de globules rouges dans un échantillon, mesure optiquement la quantité d'hémoglobine libérée et produit une représentation graphique d'une courbe en dQs d'âne (forme de S) ou de sa dérivée. Le temps est sur l'axe des abscisses de la courbe et la quantité d'hémolyse est en ordonnée. Quelques variations de la forme de la courbe ont été reconnues et mises en

rapport avec des conditions différentes de santé.

Il est nécessaire de comprendre la relation entre la pression osmotique et l'hémolyse pour pouvoir apprécier que la présente invention est basée sur un traitement et une mesure des cellules ou globules ne détruisant pas

le stroma des cellules et différant ainsi de l'hémolyse.

Des instruments de comptage et de mesure des cellules et des particules, dont des exemples sont ceux vendus sous la dénomination commerciale Coulter Counter (marque déposée) par Coulter Electronics, lac, Hialeah, Floride, USA, emploient un moyen électronique de détection qui répond directement à la résistance électrique de chaque cellule pour compter et mesurer chaque cellule et enregistre progressivement les paramètres descellules d'un échantillon de cellules dans une solution isotonique,, Les instruments de mesure de particules du type Coulter Counter, opèrent sur le principe bien connu et bien documenté de la mesure des particules et des cellules employant un trajet avec

une ouverture de détection, ce qui est également révélé -

par les brevets US no 2 656 508 et 3 259 842 au nom de

Coulter. Une forme d'appareil de mesure de MCV particulière-

ment utile avec un instrument Coulter Counter est enseignée dans le brevet US no 3 473 010. La réponse d'un capteur électrique Coulter Counter est influencée au moins par la forme, la déformabilité et le débit de l'article microscopique qui est mesuré tandis qu'il s'écoule à travers le trajet avec ouverture de détection. Comme la

plupart des cellules sont soumises à une certaine déforma-

tion lors de leur passage à travers le trajet à ouverture de détection, la mesure de leur résistance électrique et le volume mesuré enregistré peuvent différer du volume réel. Pour faire la distinction entre le volume réel et le volume mesuré, le terme "volume apparent" sera employé

ici pour indiquer le volume mesuré.

En soumettant des cellules à des solutions ayant diverses concentrationshypotoniques, le paramètre de résistance électrique des cellules change, la résistance croissant jusqu'à une crête puis tombant avec la diminution 'de l'osmolalité. Si la mesure de résistance est utilisée pour définir le volume apparent puis enregistrer la valeur de Y CV, ces trois paramètres donnent des données pouvant e'ee mises en corrélation. Comme les diverses solutions hypotoniques provoqueront des changements de volume des cellules, on obtiendra donc également certaines données de volume réel. Une représentation graphique des changements induitsdes paramètres des cellules, par rapport à la concentration hypotonique, donne des données et un motif ou une courbe caractéristique de la nature de la cellule, d'o certaines interférences peuvent être effectuées concernant la santé ou la condition physiologique du donneur. Les maxima des données et leur distribution autour de ces maxima, et de même l'amplitude, l'emplacement et la forme de la crête de la courbe, ainsi que l'obliquité G0 et la pente des parties de la courbe forent un discriminateur permettant d'effectuer un diagnostic médical, Le dispositif, qui produit la séquence des concentrations hypotoniques et mesurelainsi que met en corrélation les chawgeLqents des paramètres des cellules

avec les concentrations hypotoniques, automatise la méthodo-

logie d'examen des cellules selon la présente invention, et fait partie de cette invention. Un mode de réalisation préféré d'un tel dispositif comprend un instrument de mesure de cellules du type Coulter Counter, qui répond

à la résistance électrique de chaque cellule.

Bien que dans la présente invention on emploie au moins une solution hypotonique pour changer la valeur mesurée du paramètre d'une cellule, on ne-mesure pas l'hémolyse, et il n'y a pas production de courbes de fragilité osmotique. La présente invention offre un nouveau discriminateur à ne pas confondre avec la courbe de fragilité osmotique ni avec la mesure typique de MCV, que l'on obtient habituellement dans un environnement isotonique. L'invention sera mieux comprise et d'autres buts, caractéristiques, détails et avantages de celle-ci

apparaitront plus clairement au cours de la description

explicative qui va suivre faite en référence aux dessins schématiques annexés donnés uniquement à titre d'exemple illustrant plusieurs modes de réalisation de l'invention et dans lesquels: - la figure 1 est un graphique d'un groupe de courbes de la résistance électrique relative de glooules rouges en fonction de l'osmolalité, pour trois conditions physiologiques différentes, l'osmolalité étant indiqué en abscisse et le pourcentage de changement de résistance en ordonnée; - la figure 2 montre un mode de réalisation d'un dispositif pour produire les courbes de la figure I; et - la figure 3 montre un autre mode de réalisation

d'un dispositif pour produire les courbes de la figure 1.

Le procédé pour examiner les changements de paramètres de cellules selon l'invention peut être mis en ouvre aussi bien à la main que semiautomatiquement ou automatiquement. Dans l'examen, on reoonnatt eton emploie le fait que les cellules, par exemple les globules rouges du sang, fonctionnent comme des osmomètres et changent rapidement de volume etde résistance électrique dans une solution hypotonique pour atteindre un nouveau volume et une nouvelle résistance qui sont stables pendant une durée suffisante pour obtenir une mesure des changements des paramètres. La quantité de changement de la cellule dépend principalement de l'osmolalité de la solution hypotonique, des propriétés de la membrane de la cellule

ou du globule et du génotype de la teneur des cellules.

Une expérimentation intensive avec la présente invention a permis de vérifier que des échantillons de sang d'individus normaux et de patients malades donnaient des données replroductlbles, permettant d'obtenir des tableaux et des

courbes, dont un exemple est représenté sur la figure 1.

Une cellule, comme un globule rouge, un- globule

blanc ou une plaquette, îmrergêe dans un électrolyte hypo-

tonique, augmente en résistance raesurée, attejnt une mesure i5 ce résis. ance de c:itte et retourne rapidere:t vers sea résistance d'origine. De façon concomitante, la cellule subit des changements en corrélation, bien que non identiques, de son volume, au moins dans des soldions entre 350 et 140 mOsm/kg. Xérès voir atteint le volume de crête, le volume de la cellule ou du globule se réduit plus rapidement que sa résistance; d'o au moins une

raison pour la différence entre le volume réel et le " volu-

me apparent" comme on l'a décrit ci-dessus. Ces changements dynmaiques induits par voie osmotique dans les paramètres des cellules peuvent être reproduits en mesurant le changementsinduitsà une série d'osmolalités particulières et en les adaptant en un graphique. Le graphique représente les changements dynamiques de la même façon qu'un film de cinéma simule le mouvement. Le motif de changement 0 dynamique a une dimension, une forme et une position caractéristiques chez un individu normal et sain et des différences caractéristiques ou anomalies aux divers états de maladie, dont deux exemples sont indiqués sur

la figure 1.

La figure I montre les courbes 10, 12 et 14, respectivement, représentatives de trois groupes d'individus ayant du sang normal, de ceux ayant une béta-thalassémie

mineure et d'individus ayant une sphérocytose hérédi-tire.

On décrira en détail ci-après la façon de recueillir et de traiter les échantillons de sang pour obtenir ces courbes. Cependant, il est d'abord important d'apprécier que ces courbes et les données en ordonnée et en abscisse définissent un nouveau discriminateur sans ambiguité pour diverses conditions de santé. Comme on peut le voir sur la figure 1, l'échelle des abscisses est en milliosmoles par kilogramme (mOsm/kg), ce qui représente la force osmotique de la solution saline ou du diluant o sont immergées les cellules. L'un de ces diluants est Isoton il

(marque déposée), qui est le diluant "isotonique" typique-

ment utilisé dans le dispositif de comptage et de dimension-

nement électronique de particules Coulter Cournter qui a été employé dans le développement du procédé d'examen selon l'invention, et peut.ttre l'appareil de mesure représenté sur les figures 2 e-t 3. D'autres solutions dont l'osmolalité peut varier peuvent être employées pour s'adapter au dispositif ou à l'utilisation maruelle

du procédé selon l'invention. Lae solution saline physiolo-

gique a une osmolalité de l'ordre de 285 mGsLx/kg et est isotonique. L'axe des ordonnées sur la figure I représente le pourcentage de changement de la résistance électrique de globules rouges du sang,zvec le pourcentage nul CD d'augmentation à l'origine. Comme la lecture de MCV par

un Coulter Counter est basée sur la résistance de l'échan-

tillon de cellules, l'échelle des ordonnées pourrait

être en pourcentage de changement de MCV.

Une inspection rapide de la figure I révèle que les trois courbes 10, 12 et 14 sont différentes à plusieurs points de vue. La courbe 10, qui est typique d'une personne normale, a une crête 16 fortement pointue à environ 95% d'augmentation sur l'axe des ordonnées, qui est proche de 140 mOsm et relativement symétrique par rapport aux côtés avant et arrière et ainsi n'est pas -oblique,. La courbe 12, représentant la béta-thalassémie mineure, présente une crête arrondie 18 de 103% d'augmentation sur l'axe des ordonnées à proximité de 125 mOsm, avec une certaine obliquité vers la droite. La courbe 14 représentative de la sphérocytose héréditaire a une crtte bien plus faible de l'ordre de 58%o sur l'axe des ordonnées à proximité de 165 mOsm. Les c8tés de cette courbe 14 sont bien plus divergents que ceux des courbes 10 et 12. Bien qu'un groupe complet de points de données pour une représentation graphique de ces courbes ou la production d'un tableau numérique représente une meilleure information, quelques points de données peuvent représenter une information suffisante pour certaines discriminations médicales et certains diagnostics. Par exemple, comme la courbe normale a une forte crète à 140 mOsm/kg, un simple outil de discrimination ne nécessitera que quelques mesures à proximite de l'osmolalité de crête. 1Mme une corrélation de l'ordonnée et de l'abscisse pour un seul point peut etre utile pour la discrimination. Le développement des courbes en rapport avec les changements des paramètres des cellules par la méthodologie selon l'invention pour d'autres conditions de santé révèle des gammes importantes

et étroites de mesure utIles dans des buts de discrimination.

On notera que différents instruments, techniques, diluants et autres de mesure pourront produire certains décalages par rapport aux courbes et données représentées

G5 sur la figure I. Ces décalages seront quelque peu générale-

ment uniformes pour toutes les données et les courbes produites par le moyen d'examen spécifique et ainsi les données et courbes de comparaison resteront distinctives les unes des autres. Par exemple, un instrument optique pour mesurer MCV peut "voir" le changement volumique des cellules différemment du capteur électronique de mesure de résistance des cellules à "volume apparent" d'un Coulter Counter. Par conséquent, la donnée d'amplitude pour les courbes obtenues par un moyen optique peut être atténuée en comparaison à celle obtenue par un instrument Coulter Counter. De même,l'expérimentation a montré que, dans des conditions différentes de santé, les cellu!es présentent des tendances et capacités différentes X se dformer, par exemple lors de leu.r passage à travers le capteur d'un analyseur de cellules Coulter Counter,

On pense que cette caractéristique de déformabilité ou tur-

gescence des celluies est un paramètre de discrimination favorisé en employant un instrument du type Coulter Counter pour le procédé pour examiner les changemerints des paramètres

des cellules selon l'invention, -

Une autre variable d'examen-est le piH. On a trouvé que le pH optimal, en utilisant un analyseur de particules Coulter Counter, était 7,4. Un changement du pA- par rapport à la valeur optimale provoque des changements des amplitudes de crête et des décalages des emplacements des crêtes par rapport à l'osmolalité. Si le diluanrt est salin ou que c'est un autre matériau et s'il est tamponr cide fa-on appropriée, comme on le sait, alors mnme à une dilution de 35 mOsm/kg, le pH ne change pas de façon appréciable, Isoton II (marque

déposée) est tampoiniéde façon aporopriée.

On a noté qu'il y avait oertaines condnitions, hémoglobines variables, par exemple, qui sont plus capables d'une identification à des pH autres que 7,4; par consés quent, le contrôle du pH est également un paramètre qui

avorise la méthodologie selon l'invention.

La température et la fraicheur de l'échantillon, 2) comme l'échantillon de sang>peut provoquer certaines différences dans les données obteniues. Pour le sangt une température normale de laboratoire à proximité de 22 C est adéquate. Aussi bien du sang examiné le jour même o il a été prélevé que du sang stocké à 4 C jusqu'a

sa préparation pour l'examen se sont révélés appropriés.

Cependant, des Échantillons de sang plus ancien ont égale-

ment donné des résultats acceptables. On peut employer, dans la méthodologie selon l'invention, aussi bien du sang veineux que capillaire, avec ou sans anti-coagulant, par exemple avec de l'EDTA disodique ou tripotassique ou de l'héparine sodium. Le sang du cordon ombilical, sans nécessiter d'anti-coagulation3 est également acceptable,,

lequel peut être utilisé pour un diagnostic prénatal.

La préparation manuelle des échantillons pour une utilisation dans l'essai ou l'examen selon l'invention peut ttre accomplie en diluant l'échantillon recueilli à plusieurs concentrations différentes d'un diluant, comme

une solution isotonique tamponnée, Isoton Il ou analogue.

Les rapports de concentration ou l'osmolalité équivalente

forme l'abscisse comme cela est représenté sur la figure 1.

Les cellules subissent un changement de paramètre presque immédiatement et sont alors prates à la mesure. Plusieurs "lots" d'échantillons de cellules, chacun dans un diluant a une osi.olalité différente, et ainsi à une résistance électrique iiffJerente selon les caractéristiques des cellules, peuvent tre introduits à la main dans le disposi'!i.f de mesure des cellules et traités séparément et séquentielement par lui. Le groupe de données peut ansi $tre obtenu et représent et il'on peut reproduire !e diagawmne de la résistance électrique en fonction de i'osmolalité ou de la concentration du diluant, comme cela est représenté sur la f-igure 1. Ensuite, la dornnée et/ou

la courbe obtenue-ixuentttre comparée6à une famille pré-

établie de courbes et/ou de domnnées, chacune représentant une condition pbhysiologique ou de santé différente. Cette comparaison peut être utilisée pour la discrimination

et le diagnostic.

La figure 2 illustre un dispositif semi-automatique pour accomplir la méthodologie d'examen de changement de cellules selon l'invention. Les cellules sont les globules rouges du sang, uniquement à titre d'exemple, et ne doivent pas ttre considérées comme limitant le cadre de l'invention. Un échantillon de sang, qui peut être dans une solution isotonique, avec anti-coagulant si nécessaire, se trouve dans un récipient 22. Un certain nomibre de concentrationidifférentes dun diluant, marqu6e par diluant 1, diluant 2, diluant 3,... diluant n, se trouvent dans des récipients séparés 24, 26, 28 et 50. Le nombre de concentrations différentes détermine le nombre de points de représentation de données que l'on peut obtenir. Chaque récipient de diluant alimente une vanne sélectrice 32, permettant de choisir toute concentration de diluant en tout moment. Le moyen pour faire avancer le diluant vers la vanne et pour contrôler la position de sélection de la vanne peut être traditionnel, et n'est pas plus particulièrement représenté. Les lignes 34 et 36 à la sortie du récipient d'êchantillon de sang et de la vanne sélectrice respectivement, alimentent une jonction de mélange 38, emplacement o le diluant hypotonique et les globules rouges se mélangent puis avancent vers le dispositif de mesure c i, sur la figure 2 est indiqué en et est un appareil de mesure de la résistance, mais sur la figure 3 il est indiqué en 40' et dans ce cas, il peut avoir une autre forme d-appareil de mesure de détection de chan&erment des parai:trÉes des cellules. par exemple un dispositif:easurant le volume. Comme on l'a précédemment mentionné, un dispositif de mesure de MCV peut être l'un des ins'a-znents diaalyse de particules Coulter Counter mesura; la valeur de MCV et enregistrant également cette valeur mesurée pour un lot d'échantillons de globules rouges du sang. Un dispositif de lecture 42 pourrait former cette partie d'enregistrement ou pourrait former un moyen de production de courbes commandé par les données à la sortie dfie l'appareil de mesure de résistance

sur une ligne de données 44, en coordination avec l'informa-

tion de sélection de diluant dérivé de la position de

la vanne sélectrice 32 et transporté par la ligne d'infor-

mation 46. Ainsi, le crangement de paramètre des cellules développé par chaque diluant sera obtenu et enregistré

et peut être automatiquement représenté graphiquement.

L'action de sélection de changement de position de la vanne 32 peut être manuelle ou automatisée, par exemple par un entraînement à moteur selon la compétence de l'homme

de l'art.

A cause du grand nombre de globules rouges même dans

un petit échantillon, une fraction, telle que 0,02 micro-

qi litre de sang, peut être diluée par i mi de diluant hypotonique et être amenée à l'appareil de mesure. Le taux d'alimentation de l'échantillon dilué doit être tel qu'un temps court et pouvant être déterminé, par exemple de l'ordre de 4 secondess'6coule avant Que le mélange n'atteignellappareil de mesure 40, pour que les globules rouges aient résidé suffisalmment longtemps dans le mélarre pour avoir atteint un certain changement de paramêtrec comme un changement de volume et de résistance. La longueur d'un conduit 483, reliant la 4onction de mélange 58 au coté d'entrée de l'appareil de mesure peut aider à déterminer le temps écoulé et ainsi donner un retard ou délai constant et pouvant être répété, d'un échantillon à l'autre et d'un lot à l'autre. Chaque lot séparé d'échantillons peut être -traité et enregistré en très peu de secondes Cinq à dix

secondes de donnees se sont révélées suffisantes.

Plutyt que de pré4établir un groupe complet de diluants ayant des différences connues d'osmolalité et/ou de concentration, comme cela a été illustré et décrit en 520 se référant à la figure 2, le dispositif peut être simplifié et encore auntomatisé Sr'emi)loyant que deux diluants, comme le diluant I et le diluant I, comme cela est représenté sur la figure 3. L'un de ces diluants, tel que le diluant I pourrait être isotoniciue et se trouver dans un récipient 50. Un récipient 52 contiendrait le diluantE., qui pourrait être de l'eau distillée. Un agencement de mélange proportionnel, tel qu'une vanne de mélange 54, pouvant être d'une conception traditionnelle, peut recevoir les deux diluants et en mesurer des quantités proportionnelles

pour former, à raison d'Aude à la fois, plusieurs concentra-

tions possibles. Ces dilutions sont transportées une à une par la ligne 36 jusqu'à la jonction declange 38; alors, les globules en lot, ayant de nouveles valeurs de paramèetroesont amends à l'appareil de mesure 40' par le conduit 48. Le fonctionnement de l'appareil 40', du dispositif de lecture 42 et des lignes de données d'information 44 et 46 peuvent être identiques à ce oui a été révélé sur la figure 2. La vanne de mélange proportionnel 54 peut être contrôlée pour développer de nombreuses concentrations différentes sur toute la gamme des osmolalites, ou seulement quelques unes dans une gamme étroite, par exemple à proximité de la crête 16 de la courbenormale 10 sur la

figure 1.

On peut également, pour faire fonctionner l'agencement de mélange proportionnel 54, former une concentration continuellement changeante du mélange. Ainsi, on obtiendra une osmolalité continuellement changeante et des cellules résultantes continuellement changeantes, avec une courbe continue représentée comme sur la figure 1, plutôt qu'un certain nombre de valeurs distinctes de changement des paramètres des cellules. Si les valeurs de changement sont distinctes, il faut des extrapolations manuelles ou automatisées des points de courbe pour obtenir les segments de courbe. Sur la figure 1, sont montrés des points le long des courbes pour indiquer les points de données d'o les courbes pourraient être développées à partir des

valeurs distinctes.

Comme on l'a mentionné précédemment, quelques concentrations choisies, ou une faible gamme de celles-ci

pourraient former une information comme outil de discrimina-

tion. Si l'on considère par exemple la gamme de 120 à 175 mOsm, ou même deux ou trois points proches de 140 mOsm, les différences importantes d'amplitude et de direction relative des segments de courbe autour de ces points seront évidentes. Dans la mise en pratique manuelle du procédé d'examen de changement des paramètres des cellules selon l'invention, ainsi que dans les modes de réalisation représentés sur les figures 2 et 3, des petites gammes ou étendues d'osmolalité et/ou des osmolalités choisies peuvent être obtenues et utilisées dans ces buts de discrimination. La figure 3 illustre également des éléments 56 et 58 de contrôle du pH et de la température qui sont reliés pour être sensibles à ces aspects respectifs de l'échantillon dans j 3 le conduit 48 et par exemple, commander le c.spositif de lecture 42. Ces eléments peuvent eleement 8tre employés dans le mnode de réalisation de la figure 2. Ces éléments pourraient 'aire résonner une alarme, imprimer une condition d'ala-r-me, inhiber la lecture ou mimeó a::rcer 'un processus de compoenisation a&s le oispositi. ie lecture 42 et/ou

l'apparei!7. de mesu-re 4'.

A la lecture de se qui prcède, on peut noter que le procédé d'exanen dochanCement e.:r amè,trescies 0 ce!.uloes;Elon iinve':ïion ne '.'ei-_r oa s la:railité oz'm':tcue ni h1. cicolyse, et çi1lil i domnae pas].;, imtme in,.a.a-,:ion que la mesure È5e a valet?: de dHCV selon l'art ant.rieur dss!obueulo J rouces el ement. dans une solution isotoniri e l T. Lo te a. 'oc é e soú-if d'examen 55 O -i l'in en'::'. oni def l.r.ia,::. t et; ore n u-_.,,ouoau issorin:.:.-mteur po'.:-:'!esi r. <-i.11..s:-; -[le'h-es e'_W.. '-.:.-s.'; <: i. os.ie,! cyiolos; e,'=i( o-coloie, e! e- s le,s e..e lb.!. '. ':. 't c.r:llent l im Cde au:.n. modes de ra io-:.e dér:'-. et rep; sentés qei 1!)n' été donrés qu, i:4i.-;e' ' exemple. Yn par'iecu] ier, elle coraprernu tous les F.moyen.s cons-tituant des équivalents teclr.iques des mioye-:.-3 décrits ainsi cue leurs coinbinaisons si celles-ci sonti e;cutées-suiv son espri.t -t miszs

en.uvre dans l e -cadr e de la protection corme revendiqu.ve.

R E V a H T D I C A ' i 0 -,> S 1. Procédé pour examiner les changements de paramètres des cellules biologiqrues, caractei se en ce qu'il comprend les étapes de: (a) former un mélange hypotonique avec au moins une portion d'un échantillon de cellules et une première solution ayant'ne osmolalitéc spécifique, les cellules dudit échantillon ayant chacune un état de valeur de paramètres d'origine; (b) forcer lesdites cellules à résider dans ledit mélange pendant au moins une courte durée connue, pendant laquelle lesdites cellules atteignent un changement d'au

"toinsunevaleur du...te,'......

loins une valeur d'un.-,. e en co?1,paraison à la valeur d'origine, la qu. antit6 d-dit c..ement dépendant de l'osmolalité du mélange et des propriétés innées et acquises de chaque celule; (c) mesurer %:dit ca"2ement atteint par la cellule;et (d) employer ledit ch.....em.ent- de parE.mètre atteint par la cellule pour définir des pdomnes pouvant être cocrarées à des dodnes e cangement de paramètre de la cellule reprsentative d'une condition comnue de santé

ou physiologique.

2. Procédé selon la rev1r.dication 1, caractérisé en ce qu'on répète les étapes a, b et c au moins une fois, avec une solution ay-ant -une osmolalité différe-nte de celle de la première solution, chaque répétitionutilisant une solution d'une osmolalité diDûrente; et en ce qu'on emploie les mesures ainsi atteintes des changements des para..ètres des cellules pour définir mn groupe de données que l'on peut cormparer à a. moins un groupe de données représentativesd'au moins une condition connue de façon correspondante de santé ou physiologique

Procédé selon l'une quelco7rque des revendications

1 ou. 2, du type o l'étae précitée de mesure est caracté-

risée par le princi-pe de la mesure de résistance de la cellule.

rocédé selon l'une quelconque des revendications

préodeontcs, ca-ractérisé en ce que l'étape précitée de mresurer permet d'obtenir le changement volumique des cellules.

5. Procdé 6 selon l'une quelconque des revendications

précédentes, caractérisé en ce que l'étape précitée.de mesurer permet d'obtenir le volume apparent moyen des

cellules à chaque osmolalité spécifiqcue.

6. Procédé selon l'une quelconque des revendications

précedentes, caractérisé en ce que l'étape précitée de for-mer est ef:ectuee au moyen d'-une solution ayant une osmolalité telle que le changement de paramètre atteint soit proche de celui qui est le changement maximum pouvant

t te attei.nt par l'échantillon précité.

/ Procédé selon l'-ne quelconque des revendications

pr.-eó!dent.s, crarctéerisé en ce que da-2s l'étape précitée de mesure, on etor en corrélation le changement maximum at-tei::t de paramètre de cellule avec l'osmolalité

spécifique de la solution ayant donnrm ce changement maximum.

8. Procédé selon l'unme quelconoque des revendications

precédentes, caractérisé en ce que l'étape d précitée consiste a mettre en corrélation les données de changement de paramè-tres atteintes avec l'état des valeurs des paramètres d'origine afin de dériver le pourcentage de

changement par rapport à l'état de la valeur d'origine.

9. Procédé selon l'une quelconque des revendications

précédentes, caractérisé en ce que chaque solution a un

pH conmlu.

10. Procédé selon l'une quelconque des revendications

précédentes, caractérisé en ce que l'étape d précitée consiste a. former une courbe représentée à partir du

groupe défini précité de données.

1l. Procédé selon l'une quelconque des revendications

précédentes, caractérisé en ce qcue chaque solution hypotonique précitée est formée de la combinaison de deux:

diluants d'une tonicité cî'.?'éente.

12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'au moins l'un des dilu.ants prêcités est suffisamment tamponné pour çue le pH de la solution reste sensiblement inchangé sur une large gamme d'osmolalité

1i3. Procédé selon l'une quelconque des revendications

2 à 12, caractérisé en ce qu'il consiste de plus à entre-

prendre l'étape a selon la revendication 1 au moins une Lois avec une solution essentiellement isotonique, afin de déterminer l'état de valeuis de paramètres d'origine de la cellule; puis à entreprendre les étapes b et c de la revendication i oour obtenir le changement de paramètres de cellules par rapport à l'état de valeursde

paramètres de cellules d'origine.

14. Dispositif pour examiner des cellules, caractérisé par: un moyen de mélange (38) relié pour recevoir une portion d'un échantilon de cellules (22) et une première solution (24; 52) ayant une osmolalité spécifique pour

former un mélange hypotonL..iue, les cellules dudit -

échantillon ayant chacune un état de valeur de paramètres d'origine; tuan moyen de temporisation (48) relié audit moyen de mélange (38) pour forcer les cellules dudit échantillon à résider dans ledit mélange pendant au moins une courte durée connue, pendant laquelle les cellules atteignent un changement d'au moins vune valeur de paramètre en comparaison a leur état de valeursde paramètres d'origine, la quantité dudit changement dépendant de l'osmolalité du mélange et des propriétés innées et acquises de chaquae cellule; un moyen de mesure (40; 40') relié audit moyen de mélange pour mesurer le changement atteint de paramètres de cellules; et un moyen de définition de données (42) pour employer ledit changement de paramètres atteint pour définir des données pouvant être comparées à des données de changement de paramètres de cellules représentatives d'une condition connue desanté ou

physiologique.

15. Dispositif selon la revendication 14, caractérisé

par un moyen de contrôle (52; 54) relié à un moyen d'alimen-

tation en solution (26, 28, 30; 50) pour former au moins une autre solution ayant une osmolalité différente de celle

de ladite première solution,ainsLau moins un autre des change-

mentsde valeursde paramètres peut ttre atteint palr les cellules du mélange précité, et mesuré par le moyen de mesure (40; 40') précité pour définir un groupe de données que l'on peut comparer à au moins un groupe de données de changementsde paramètres des cellules représentatives d'aumoins une condition physiologique ou de santé connue

1C correspondante.

16. Dispositif selon l'une quelconque des revendica-

tions 14 ou 15, caractérisé en ce que le moyen de mesure (40; 40') précité est construit et agencé pour employer

le principe de la mesure de résistance de cellules.

17. Dispositif selon l'une quelconque des revendica-

tions 14 à 16, caractérisé en ce que le moyen de mesure (.0j 4-40') précité est cons..truit et agencé pour obtenir

i.e changement de volume des cellules.

18. Dispositif selon l'une quelconque des revendica-

tions 14 -à 17, caractérisl' en ce que le moyen de mesure (40;40') précité est construit et agencé pour obtenir le volume

moyen apparent des cellules à chaque osmolalité spécifique.

19. Dispositif selon l'une quelconque des revendica-

tions 14 à 18, caractSrisé en ce que le moyen de mesure (40; 40') précité et le moyen de définition de doimées (42) précité en combinaison, sont construits et agencés pour mesurer et mettre en corrélation le changement atteint de paramètres de cellules avec l'osmolalité spécifique

de la solution qui donne ce changement atteint.

20. Dispositif selon l'une quelconque des revendica-

tiPans 14 à 19, caractérisé par un moyen (50) pour amener un diluant essentiellement isotonique au moyen de mélange (D8) précité, ainsi, l'état de valeuz-e paramètres d'origine de l'échantillon de cellules peut être déterniné

par ledit dispositif.

21. Dispositif selon l'une quelconque des revendica-

tions 14 à 20, caractérisé en ce que le moyen de con-trle

247522?

!8 (52; 54) précité est construit et agenco de faon q cue la formation du mélange soit avec uane solution ayant une osmolalité telle que le changemernt atteintî de paramèi.res de cellules soit proche de celi qui i est le chnigement rmaximum pourrnt être atteint par l'tchan.Iillon de celluleso

22. Disposit selon l'une queconue des revendica-

tions 14 à 21, caractérisé en ce que le moyen de contr8le (52, 54) précité- et le moyen de Ginition de données (42) précité sont corntruits et agencés pou riet.re en corrélation le changeont attein.t de d-rar.tree ' e cellules avec l'état de valeur. 'origi de paranètres de cellules

afin de dériver le pourcentage de cha.ngemet -oar rapporT.

à l'état d'origine.

23. Dispositif selon i'tuze i2elconoue des revenCica-

tions 15 à 22, caracté6risé en ce que le roye de contr-83le pr'cité est constl it e- agenc - a on q -enue solution hypotoniqule crGcite soo úorrt e de le ia c-o-n....:cn -9)C to"nic', s dfe+ de deux diluants (50, J2) y'- -':oni'ts' '+érees

24. Dispositif selon l'une d3ue!ccn.%e des revenrLdca-

tions 15 à 22, caractr-.risé en ce que le l:c-yen de contrôlOe (32) précité est construi- ei t agence -de la-on que chaque solution hypotonique (24, 26, _, 30) usse re reçue

d'unme source distincte.