FI95512C - Menetelmä hemoglobiinin mittaamiseksi - Google Patents

Description

, 95512

Menetelmä hemoglobiinin mittaamiseksi Tämä keksintö koskee yksinkertaista menetelmää hemo-globiinikonsentraation mittaamiseksi kokoverinäytteessä 5 ja tarkemmin menetelmää, jonka voi nopeasti suorittaa suhteellisen taitamaton henkilö.

Kaksi mittausta, jotka usein suoritetaan kokoverestä ovat hematokriitti ja hemaglobiini. Hematokriitti on tilavuusprosentti, jonka verran tiivistyneitä punaisia veri-10 soluja on sentrifugoidussa kokoverinäytteessä, ja hemoglobiinipitoisuus on hemoblogiinin paino kokoveriyksikköä kohden. Hemoglobiinin numeerista suhdetta hemotokriittiin kutsutaan keskimääräiseksi korpuskulaariseksi hemoglobiini-konsentraatioksi (MCHC) ja normaaleissa henkilöissä se on lä-15 hellä 33,9 %. Kun henkilö kärsii tietyistä sairauksista, suhde voi kuitenkin vaihdella noin 38 %:sta aina 26 %:iin asti. Niinpä sekä hematokriitin että hemoglobiinin määritys on tärkeää anemian tai muiden veren häiriöiden toteamiseksi ja diagnosoimiseksi.

Suuressa laboratoriossa hematokriitti- ja hemoglobii-20 nimittaukset tehdään samanaikaisesti automaattisessa analysaattorissa, mutta pienellä klinikalla tai lääkärin vastaanotolla ne on tehtävä erikseen käyttäen kahta eri menetelmää. Hematokriitti voidaan nykyisin määrittää pieni lasiputki antikoaguloidulla kokoverellä sulkien putken toi-• 25 sen pään ja sentrifugoimalla putkea punaisten verisolujen tiivistämiseksi. Tiivistyksen jälkeen, joka kestää noin 3-5 minuuttia pienessä sentrifugissa, tiivistetyn puna-solupylvään ja koko täyttömäärän pituus mitataan ja hematokriitti ilmaistuna prosenttiosuutena lasketaan. Voidaan 30 havaita, että putken valmistamiseen tai mittausten tekoon ' tarvitaan vain vähän taitoa. US-patentit no 4027660, an nettu 7.6.1977 S.C. Wardlaw et ai; 4181609, annettu 1.1.1980 S.C. Wardlaw et ai; ja 4558947, annettu 17.12.1985 S.C. Wardlaw, ja muut kuvaavat menetelmää, jossa antikoa-35 guloitu verinäyte imetään kapillaariputkeen, putkeen verinäytteen joukkoon pannaan uimuri ja verinäytettä sentrifu- 95512 2 goidaan, jolloin uimuri asettuu punasolukerroksen päälle "buffy coat’in" pidentämiseksi verinäytteessä ("buffy coat” on valkosoluista ja verihiutaleista koostuva kerros, joka muodostuu sentrifugoidun, antikoaguloidun koko-5 verinäytteen punasolukerroksen yläosaan). Tätä sinänsä tunnettua menetelmää voidaan käyttää myös hematokriitin määrittämiseen, kun laskettaessa verikomponenttien kokonaispituutta otetaan huomioon verinäytteen osan laajeneminen uimurin takia, muuttaen kokonaispituutta pienemmäk-10 si mittauslaitteella uimurin läsnäolon kompensoimiseksi.

Toisaalta hemoglobiinikonsentraation mittaus on varsin paljon monimutkaisempi. Tämän testin suorittamiseksi pienellä klinikalla tai lääkärin vastaanotolla verinäytteen on oltava tarkemmin laimennettu suhteessa 15 1:250 tai 1:500 riippuen käytetystä laitteistosta. Lai mennus tehdään ottamalla tarkkaan pieni näyte verestä pipettiin ja panemalla se astiaan, joka sisältää ainetta, joka liuottaa punaiset verisolut sekä syanidia, joka muuttaa hemoglobiinin helpommin mitattavaan muotoon. Tämä 20 seos pannaan kolmen - kymmenen minuutin seisotuksen jälkeen fotometriin, jossa valon imeytymistä 560 nm:ssä (vihreä) verrataan standardiliuosten vastaavaan. Näistä vertailuista voidaan laskea hemoglobiinikonsentraatio. Tästä menetelmästä on olemassa useita julkaistuja muun-25 nelmia, mutta toistaiseksi kaikki kelvolliset menetelmät vaativat valon imeytymisen tarkkaa mittaamista tähän tarkoitukseen valmistetulla instrumentilla. Lisäksi tarve käsitellä tarkasti pieniä näytemääriä vaatii suurempaa taitoa kuin hematokriitin määritys ja on siksi myös ana-30 lyysivirheiden lähde.

Keksintö koskee menetelmää punaisten verisolujen hemoglobiinikonsentraation mittaamiseksi antikoaguloidus-ta kokoverinäytteestä. Menetelmälle on tunnusomaista, että siihen kuuluu seuraavat vaiheet: 3 95512 a) otetaan putki; b) vedetään verinäyte putkeen; c) asetetaan uimuri putkeen verinäytteeseen, jolloin uimuri on valmistettu materiaalista, joka kelluu ve- 5 rinäytteen punasolukerroksessa, kun putkea sentrifugoi-daan verinäytteen ja uimurin ollessa sen sisällä; d) sentrifugoidaan verinäytettä, uimuria ja putkea, jolloin punaiset verisolut, valkoiset verisolut ja plasma kerrostuvat tiheyksiensä mukaisesti; 10 e) mitataan uimurin sen osan pituus, joka on upon nut punasolukerroksen yläpinnan alapuolelle; ja f) lasketaan hemoglobiinikonsentraatio punasolu-kerroksen yläpinnan alapuolelle uponneen uimurin osan pituuden funktiona.

15 Keksinnön mukaisessa menetelmässä hemoglobiinin mittaamiseksi verinäytteestä käytetään suunnilleen samaa välineistöä, jota nykyään käytetään hematokriitin mittaamiseen. Menetelmä perustuu havaintoon, että tiivistettyjen punasolujen hemoglobiinikonsentraatio on kääntäen 20 verrannollinen syvyyteen, johon aiempien menetelmien uimuri uppoaa punasolukerrokseen. Mittauslaitteen mikroprosessori voidaan ohjelmoida muuntamaan ylimääräiset sy-vyysmittaukset hemoglobiinikonsentraatioksi. Tämän keksinnön menetelmän suorituksen vaiheet ovat seuraavat. Ko-25 koverinäyte vedetään sentrifugiputkeen, edullisesti ka-pillaariputkeen, antikoaguloidaan ja uimuri asetetaan putkeen. Kun putken pohja on tukittu, näytettä sentrifugoidaan niin, että veri kerrostuu punasolu-, "buffy coat" ja plasmakerroksiin. Sentrifugoinnin aikana uimuri 30 asettuu punasolukerrokseen. Hematokriitti mitataan sinänsä tunnetun menetelmän mukaisesti.

Hemoglobiini mitataan seuraavasti. Kuten yllä on mainittu, punaisten verisolujen MCHC on niiden hemoglobiinikonsentraatio, normaalisti noin 340 g/1. Siksi noin 35 1/3 kustakin solusta on hemoglobiinia, loppu on vettä ja 95512 4 pieni pitoisuus suoloja ja pieniä proteiineja, joiden konsentraatio on suhteellisen vakio. Tästä seuraa, että miltei ainoa vaikuttaja eri potilaiden punasolujen ti-heyseroihin on solujen hemoglobiinikonsentraatio. Siksi 5 tiivistettyjen punaisten verisolujen tiheys on verrannollinen MCHC:hen ja jos tämä arvo (MCHC) voidaan saada tarkasti, hemoglobiinikonsentraatio voidaan laskea seuraavasti : 10 Hemoglobiini = Hematokriitti x MCHC.

Käytettävään laitteistoon kuuluu läpinäkyvä sisä-läpimitaltaan vakio putki, johon pannaan hartsiuimuri. Antikoaguloitua verta vedetään putkeen joko kapillaari-15 sesti tai heikolla imulla. Tarkka määrä ei ole kriittinen kunhan verta on tarpeeksi kelluttamaan uimuri. Putken toinen pää suljetaan ja putkea sentrifugoidaan suunnilleen 10000 G:ssä suunnilleen viisi minuuttia. Tämä on samaa luokkaa kuin yleensä käytetään standardihematokriit-20 timääritykseen. Kun sentrifugointi on valmis, uimuri, jonka ominaispaino on plasman ja tiivistyneiden punaisten verisolujen ominaispainojen välissä kelluu osittain tiivistyneiden punaisten verisolujen pinnalla. Hematokriitti mitataan putkessa olevan verinäytteen pituuden (tiivisty-25 neiden punaisten verisolujen, "buffy coat'in" ja plasman yhteispituuden) ja pelkän tiivistyneen punasolupylvään pituuden suhteena. Uimurin tilavuus täytyy tietysti ottaa huomioon tätä laskelmaa tehtäessä. Koska uimurin syvyys on kääntäen verrannollinen tiivistyneiden punaisten 30 verisolujen tiheyteen, punasolujen tiheys voidaan laskea ja muuntaa hemoglobiiniarvoksi seuraavasti.

• ·«

Tasapainon saavuttaneeseen kelluvaan kappaleeseen, kuten tässä keksinnössä käytettyyn uimuriin, vaikuttavien kellumisvoimien summa on nolla. Kellumisvoimat kolmefaa-35 sisessa systeemissä kuten meidän, joka koostuu sylinteri- 95512 5 mäisestä muoviuimurista; tiivistyneistä punaisista verisoluista; ja plasmasta, voidaan ilmaista seuraavasti: (Dr-Df) X Lr + (Dp-Dj) x Lp = 0 5 jossa Dr on tiivistyneiden punaisten verisolujen tiheys;

Df on muoviuimurin tiheys; Lr on tiivistyneisiin punaisiin verisoluihin uponneen uimurin osan pituus; Dp on plasman tiheys; ja Lf on plasmassa olevan uimurin osan 10 pituus.

Viimemainitussa yhtälössä tiivistyneiden punaisten verisolujen tiheys ei ole tunnettu. Muoviuimurin tiheys ja pituus tunnetaan ja ne syötetään mikroprosessorin muistiin. Samoin plasman tiheys tunnetaan ja se syötetään 15 mikroprosessorin muistiin. Punaisiin verisoluihin uponneen uimurin osan pituus mitataan ja syötetään sitten mikroprosessorille. Mikroprosessori laskee plasmassa olevan uimurin osan pituuden vähentämällä punaisiin verisoluihin uponneen uimurinosan pituuden uimurin kokonaispi-20 tuudesta. Mikroprosessori voi siis ratkaista yhtälön punaisten verisolujen tiheyden (Dr) suhteen.

Kun Dr on laskettu, voi mikroprosessori laskea MCHC:n ratkaisemalla seuraavan yhtälön: 25 MCHC = (Dr + K.) + K0 MCHC-vakiot KQ ja K. voidaan määrittää empiirisesti ottamalla useiden erilaisten näytteiden punasolutiheysmit-taukset ja korreloimalla tiheys MCHC:n kanssa määritetty-30 nä tavanomaisilla mittauksilla. Bestfit korrelaatioyhtä- ·’ lön kulmakerroinvakiota (K ) ja siirtymävakiota (K ) käy- tetään sitten MCHC:n laskemiseen punasolutiheydestä. Kun K, ja K0 on laskettu, niitä ei muuteta elleivät välineistön kriittiset parametrit, esim. uimurin tiheys jne., 35 muutu.

95512 6 MCHC:stä voidaan määrittää hemoglobiinikonsentraa-tio kuten edellä on kuvattu, eli hemoglobiini = hematok-riitti x MCHC.

Sen vuoksi tämän keksinnön eräs tavoite on tarjota 5 parannettu menetelmä kokoverinäytteen hemoglobiinipitoi suuden mittaamiseksi.

Tämän keksinnön lisätavoite on tarjota kuvatunlainen menetelmä, jossa hemoglobiinipitoisuus mitataan sen funktiona, kuinka syvälle uimuri uppoaa tiivistyneeseen 10 punasolukerrokseen sentrifugoidussa putkessa olevassa verinäytteessä .

Tämän keksinnön tavoite on lisäksi tarjota kuvatunlainen menetelmä, jossa hemoglobiini- ja hematokriit-timittaukset voidaan tehdä helposti käyttäen automaattis-15 ta laskentalaitetta tai ilman sitä.

Nämä ja muut tämän keksinnösn edut selviävät tarkemmin seuraavasta yksityiskohtaisesta kuvauksesta, kun niiden yhteydessä katsotaan oheisia piirustuksia, joissa: kuva 1 on sivukuva lasiputkesta, jossa on sentri-20 fugoitu verinäyte ja uimuri, joka on asettunut sentrifu-goidun verinäytteen punasolukerrokseen; ja kuva 2 on putken poikkileikkauskuva putkesta otettuna kuvan 1 linjaa 2-2 pitkin.

Viitaten piirroksiin, putki 2 on edullisesti lasi-25 nen kapillaariputki, jonka sisäpinnalla voi olla antikoa-gulanttipinnoitus. Putken 2 pohja suljetaan savitulpalla 4 tai muovitulpalla, joka voidaan napsauttaa putken 2 pään yli sen jälkeen kun verinäyte on vedetty putkeen 2. Uimuri 6 pannaan putkeen 2 ja kun verinäytettä sentrifu-30 goidaan putkessa 2, uimuri 6 asettuu punasolukerrokseen, ’ ' jota kuvataan numerolla 8. Uimurin 6 yläpuolella on plas- makerros 10. Uimurin 6 aksiaalinen pituus L on ennalta määrätty ja mittausta tekevä henkilö mittaa etäisyyden Lr, joka on uimurin 6 sen osan pituus, joka on uponnut 35 punasolukerrokseen. Piirroksissa esitetyssä uimurissa on 11 95512 7 ulokkeellinen poikkileikkaus. Tämä aiheuttaa pienemmän poikkileikkauspinta-alan uimurille 6, niin että havaittu sentrifugoidun verinäytteen ja erityisesti "buffy coat'in" aksiaalinen pituus ei pitene merkittävästi.

5 Ulokkeet 7 uimurissa 6 pitävät yllä koaksiaalista suhdetta putkeen 2. Kuten edellä mainittiin, ulokkeellinen poikkileikkaukseltaan pienennetty uimuri ei ole oleellinen hematokriitti- ja hemoglobiinimittausten suorittamiseen. Tässä toteutuksessa uimurin poikkileikkausala ei 10 saisi olla yli 2/3 putken sisäpoikkileikkauksesta.

Testissä käytetyn veren on oltava antikoaguloitua niin, että punasolut ja plasma erottuvat. Tämä saadaan aikaan vetämällä veri antikoagulanttia sisältävään astiaan ennen veren ottamista putkeen, tai lisäämällä anti-15 koagulanttia kuten hepariinia tai vastaavaa itse läpinäkyvään putkeen. Tämä sallisi putken täyttämisen suoraan sormihaavasta.

Voidaan huomata, että tämä menetelmä ei vie enempää aikaa eikä vaadi enempää taitoa kuin pelkän hemato-20 kriitin mittaus. Voidaan myös huomata, että optista lukijaa, kuten sellaista, joka on kuvattu US-patentissa no 4 156 570, annettu toukokuussa 1978 S.C. Wardlawille; tai US-patentissa no 4 558 947, annettu joulukuussa 1985 S.C. Wardlawille (jotka kokonaisuudessaan mainitaan tässä läh-25 teinä), voitaisiin käyttää lukemaan pituudet ja automaattisesti laskemaan tulokset. Koska tämä menetelmä luottaa kahteen perusmittaukseen (pituus ja tiheys), testi ei vaadi standardointia.

Keksinnön menetelmän suorittamiseksi käytettäväksi 30 välineistöksi on kaksi yleistä toteutustapaa. Ensimmäinen .* ' on piirrosten ja ylläolevan kuvauksen mukainen ja toinen • · on identtinen laitteen kanssa, joka on kuvattu patentissa no 4 077 396, annettu maaliskuussa 1978 S.C. Wardlawille et ai (jonka kuvaus kokonaisuudessaan mainitaan tässä 35 lähteenä), siinä että käytetään "buffy coat'ia" laajenta- 95512 8 vaa uimuria. Viimemainitussa tapauksessa laajentuneiden "buffy coat"-kerrosten kelluntavaikutukset on otettava huomioon, lukemat voidaan kuitenkin laskea mikroprosessorilla, joka on sopivasti ohjelmoitu kuten jäljempänä ku-5 vataan.

Kuin uimuri on riittävän suuri "buffy coat"-mit-tausten suorittamiseksi kuten on kuvattu edellämainituis-sa Wardlawille yksin ja muiden kanssa annetuissa US-pa-tenteissa, kelluntavaikutus, jonka "buffy coat" lisää ui-10 muriin voidaan kompensoida seuravasti. Kun käytetään sel laista uimuria, "buffy coat'in" kolme solukomponenttia lisäävät muoviuimuriin kohdistuvia kelluntavoimia ja ne on siksi otettava huomioon laskettaessa punasolujen tiheyttä. Siksi käytetään seuraavaa yhtälöä: 15 (Dr-Df) x Lr + (Dg-Df) X Lg + (DlB-Df) x Lln + (0pi_Df) x Lpl + (Dp—Df) x Lp = 0, jossa Dp, Dr, Df, Lp, Lr ja Lf ovat kuten yllä; 20 Lpl on uimurin verinäytteen verihiutalekerroksessa olevan osan pituus;

Lnl on uimurin verinäytteen monosyytti/lymfosyyttikerrok-sessa olevan osan pituus;

Lg on uimurin verinäytteen granulosyyttikerroksessa ole-. 25 van osan pituus;

Dg on granulosyyttisolukerroksen tiheys;

Dlm on lymfosyytti/monosyyttisolukerroksen tiheys; ja Dpl on verihiutalekerroksen tiheys.

Käytetty instrumentti on sovitettu käytettäväksi 30 valkosolukomponenttimääriä, kuten on kuvattu edelläkuva- tussa aiemmassa tiedossa. Niinpä mikroprosessorilla on yllä kuvattu syöttötieto ja siihen syötetään myös granu-losyytti-, lymfosyytti/monosyytti- ja verihiutaletihey-det. Mittauksen aikana mitataan uimurin osat, jotka ovat 35 granulosyytti-, lymfosyytti/monosyytti- ja verihiutale- 95512 9 kerroksissa ja syötetään mikroprosessoriin. Mikroprosessori laskee Lf:n arvon uimurin kokonaispituuden ja uimu-rin punasoluissa, granulosyyteissä, lymfosyyteissä/mono-syyteissä ja verihiutaleissa olevien osien yhteispituuden 5 erotuksena. Kun Dr on laskettu, hemoglobiiniarvot lasketaan kuten ensimmäisessä esimerkissä on kuvattu.

Tätä menetelmää testattiin määrittämällä 100 potilaan hemoglobiini ja hematokriitti. Keksinnöllä saadut tulokset olivat lähes identtiset niihin verrattuna, jotka 10 saatiin sairaalan laboratoriossa käyttäen automaattisia analysaattoreita (suhteellinen keskivirhe 2,7 %).

Voidaan helposti huomata, että tämän keksinnön menetelmä tuottaa nopeasti ja helposti hematokriitti- ja hemoglobiinimittaukset antikoaguloidusta kokoverinäyt-15 teestä. Menetelmän voi suorittaa suhteellisen taitamaton henkilö ja se voidaan suorittaa yhdestä verinäytteestä. Menetelmä on erityisen sopiva pienille klinikoille ja lääkärin vastaanotolle, mutta sitä voidaan käyttää myös suuremmissa laboratorioissa ja sairaaloissa.

20 Koska monia muutoksia ja muunnelmia voidaan tehdä kuvattuihin keksinnön toteutuksiin poikkeamatta keksinnön ideasta, ei ole tarkoitus rajoittaa keksintöä muuten kuin oheisilla patenttivaatimuksilla.

• • ·

Claims (15)

10 95512

1. Menetelmä punaisten verisolujen hemoglobiini-konsentraation mittaamiseksi antikoaguloidusta kokoveri- 5 näytteestä, tunnettu siitä, että siihen kuuluu seuraavat vaiheet: a) otetaan putki; b) vedetään verinäyte putkeen; c) asetetaan uimuri putkeen verinäytteeseen, jol- 10 loin uimuri on valmistettu materiaalista, joka kelluu verinäytteen punasolukerroksessa, kun putkea sentrifugoi-daan verinäytteen ja uimurin ollessa sen sisällä; d) sentrifugoidaan verinäytettä, uimuria ja putkea, jolloin punaiset verisolut, valkoiset verisolut ja 15 plasma kerrostuvat tiheyksiensä mukaisesti; e) mitataan uimurin sen osan pituus, joka on uponnut punasolukerroksen yläpinnan alapuolelle; ja f) lasketaan hemoglobiinikonsentraatio punasolu-kerroksen yläpinnan alapuolelle uponneen uimurin osan pi- 20 tuuden funktiona.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että punasolukerroksen kokonaispituus mitataan verinäytteen hematokriittiluvun laskemiseksi ja kokoveren hemoglobiinikonsentraatio lasketaan • 25 kertomalla laskettu hematokriittiluku verinäytteen keski määräisellä korpuskulaarisella hemoglobiinikonsentraa-tiolla.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että verinäytteen keskimääräinen 30 korpuskulaarinen hemoglobiinikonsentraatio määritetään kaavoista: (Dr-Df) x Lr + (Dp-Df) x Lp = 0; ja

35 MCHC = (Dr x K,) + K0; 95512 11 joissa Dr on punaisten verisolujen tiheys; Df on uimurin tiheys; Dp on plasman tiheys; Lr on punaisiin verisoluihin uponneen uimurin osan 5 pituus; Lp on plasmakerroksessa olevan uimurin osan pituus ; MCHC on korpuskulaarinen hemoglobiinikonsentraa- tio; ja

10 K0 ja K, ovat empiirisesti määritettyjä vakioita.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että uimuri on aksiaalisesti pidentynyt ja sen aksiaalinen vakiopoikkileikkaus on minimaalinen niiden solukerrosten pidentymisen minimoimisek- 15 si, joihin uimuri asettuu.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että uimurin poikkileikkaus on ulokkeellinen, mikä minimoi solukerrosten laajenemisen, mutta aiheuttaa uimurin koaksiaalisen sijainnin putkessa.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaikki laskelmat suorittaa ennalta ohjelmoitu mikroprosessori.

7. Menetelmä punaisten verisolujen hemoglobiini-konsentraation mittaamiseksi antikoaguloidusta kokoveri-25 näytteestä, tunnettu siitä, että siihen kuuluu seuraavat vaiheet: a) otetaan verinäyte putkeen; c) asetetaan uimuri putkeen verinäytteeseen, jolloin uimuri on valmistettu materiaalista, joka kelluu ve-30 rinäytteen punasolukerroksessa, kun putkea sentrifugoi- daan verinäytteen ja uimurin ollessa sen sisällä, ja jolloin uimuri pystyy laajentamaan sentrifugoidun verinäytteen "buffy coat" kerrosta riittävästi, jotta siihen saadaan muodostettua kvantitatiivisesti mitattavissa olevat 35 valkosolu- ja verihiutalekerrokset; „ 95512 d) sentrifugoidaan verinäytettä, uimuria ja putkea, jolloin punaiset verisolut, valkoiset verisolut ja verihiutaleet kerrostuvat tiheyksiensä mukaisesti; e) mitataan uimurin sen osan pituus, joka on upon-5 nut punasolukerroksen yläpinnan alapuolelle; f) mitataan uimurin sen osan pituus, joka on "buffy coat'in" granulosyyttikerroksessa; g) mitataan uimurin sen osan pituus, joka on "buffy coat'in" monosyytti/lymfosyyttikerroksessa; 10 h) mitataan uimurin sen osan pituus, joka on "buffy coat'in" verihiutalekerroksessa: i) lasketaan hemoglobiinikonsentraatio punasolu-kerroksen yläpinnan alapuolelle uponneen uimurin osan pituuden funktiona korjattuna sen kelluntavaikutuksen suh- 15 teen, jonka laajentunut "buffy coat" kohdistaa uimuriin.

8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että punasolukerroksen kokonaispituus mitataan verinäytteen hematokriittiluvun laskemiseksi ja kokoveren hemoglobiinikonsentraatio lasketaan 20 kertomalla laskettu hematokriittiluku verinäytteen keskimääräisellä korpuskulaarisella hemoglobiinikonsentraa-tiolla.

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että verinäytetteen keskimäärä!- • 25 nen korpuskulaarinen hemoglobiinikonsentraatio määrite tään kaavoista: a) (Dr-Df )xLr+ (Dg-Df )xLg+ ( Dln-Df )xLln+ ( Dpl-Df )x LPi+(Dp-Df )xLp=0; 30 .. jossa Dr on punaisten verisolujen tiheys; Df on uimurin tiheys; Dg on granulosyyttitiheys; Dln on lymfosyytti/monosyyttitiheys;

35 Dpl on verihiutaleiden tiheys; 13 95512 Dp on plasman tiheys; Lr on punasolukerroksessa olevan uimurin osan pituus; Lg on granulosyyttikerroksessa olevan uimurin osan 5 pituus; L1b on lymfosyytti/monosyyttikerroksessa olevan uimurin osan pituus; L , on verihiutalekerroksessa olevan uimurin osan pl pituus; ja

10 Lp on plasmakerroksessa olevan uimurin osan pi tuus; ja b) MCHC = (Dr x K.) + Kq, jossa; MCHC on korpuskulaarinen hemoglobiinikonsentraa- tio; ja

15 Kg ja K, ovat empiirisesti määritettyjä vakioita. > · 14 95512