FI94352B - A method for preparing peptides that inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens - Google Patents
A method for preparing peptides that inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens Download PDFInfo
- Publication number
- FI94352B FI94352B FI885630A FI885630A FI94352B FI 94352 B FI94352 B FI 94352B FI 885630 A FI885630 A FI 885630A FI 885630 A FI885630 A FI 885630A FI 94352 B FI94352 B FI 94352B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- thr
- ser
- tyr
- peptide
- asn
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 title description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 20
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 18
- KVPFYRAFNZKJSD-CPXLMRBJSA-N (2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KVPFYRAFNZKJSD-CPXLMRBJSA-N 0.000 claims description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N L-alanyl-L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 claims 1
- PZHJLTWGMYERRJ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PZHJLTWGMYERRJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 28
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 25
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 25
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 23
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 19
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 13
- 108010071384 Peptide T Proteins 0.000 description 13
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 11
- 101710090322 Truncated surface protein Proteins 0.000 description 10
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- 108070000030 Viral receptors Proteins 0.000 description 4
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010083930 HIV Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000006481 HIV Receptors Human genes 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 238000001739 density measurement Methods 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- PZUOEYPTQJILHP-STHAYSLISA-N (2r,3s)-2-amino-3-hydroxybutanamide Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(N)=O PZUOEYPTQJILHP-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- MRXDGVXSWIXTQL-HYHFHBMOSA-N (2s)-2-[[(1s)-1-(2-amino-1,4,5,6-tetrahydropyrimidin-6-yl)-2-[[(2s)-4-methyl-1-oxo-1-[[(2s)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]pentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]carbamoylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C=O)C1NC(N)=NCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MRXDGVXSWIXTQL-HYHFHBMOSA-N 0.000 description 1
- IWHCAJPPWOMXNW-ZESMOPTKSA-N (2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-aminopropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)pr Chemical compound C[C@@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 IWHCAJPPWOMXNW-ZESMOPTKSA-N 0.000 description 1
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N (7-aminophenothiazin-3-ylidene)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[NH2+])C=C2SC3=CC(N)=CC=C3N=C21 PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N Asn-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- OLVPQBGMUGIKIW-UHFFFAOYSA-N Chymostatin Natural products C=1C=CC=CC=1CC(C=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(C1NC(N)=NCC1)NC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OLVPQBGMUGIKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEFJQIDDEAULHB-QWWZWVQMSA-N D-alanyl-D-alanine Chemical compound C[C@@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C)C([O-])=O DEFJQIDDEAULHB-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102100038609 Lactoperoxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- -1 N-protected amino Chemical class 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 102000001490 Opioid Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010093625 Opioid Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000341971 Peplis Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 108010086192 chymostatin Proteins 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 238000001446 dark-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000001652 frontal lobe Anatomy 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 210000003715 limbic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000000118 neural pathway Anatomy 0.000 description 1
- 230000010004 neural pathway Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000003399 opiate peptide Substances 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 108010078940 peptide T (4-8) Proteins 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- IWHCAJPPWOMXNW-LYKMMFCUSA-N peptide t Chemical group C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 IWHCAJPPWOMXNW-LYKMMFCUSA-N 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 210000003523 substantia nigra Anatomy 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000002723 toxicity assay Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70514—CD4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
9435294352
Menetelmä peptidien valmistamiseksi, jotka estävät sitoutumista T-4-reseptoreihin ja toimivat immunogeeneinäA method for preparing peptides that inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens
Keksinnön lyhyt kuvaus 5 Tämä keksintö liittyy synteettisesti tuotettuihin lyhyisiin peptidijaksoihin, jotka estävät HTLV-III/LAV:n (mitä seuraavassa kutsutaan HIV:ksi) sitoutumista ihmisen soluihin tekemällä toimintakyvyttömäksi solun pinnan re-septorikohtia ja siten ehkäisten viruksen tartuntakyvyn 10 ihmisen T-soluja kohtaan. Samalla kun nämä peptidit ehkäisevät tartuntakykyä, ne myös aiheuttavat HIV-viruksen vaippaproteiiniin kohdistuvien vasta-aineiden tuotannon. Tästä johtuen näillä peptideillä on käyttöä rokotteina estämään hankitun immuunikato-oireyhtymän (AIDS) kehitty-15 mistä.Brief Description of the Invention This invention relates to synthetically produced short peptide sequences that inhibit the binding of HTLV-III / LAV (hereinafter referred to as HIV) to human cells by inactivating cell surface receptor sites and thereby preventing viral infectivity to human T cells. . While these peptides inhibit infectivity, they also cause the production of antibodies to the HIV envelope protein. Consequently, these peptides have utility as vaccines to prevent the development of acquired immune deficiency syndrome (AIDS).
Keksinnön taustaBackground of the invention
Useat tutkijat ovat raportoineet AIDS (HIV)-viruksen täydellisen nukleiinihappojärjestyksen. (Katso Lee Ratner ja muut, Nature 313 s. 277, tammikuu 1985; Muesing 20 ja muut, Nature 313, s. 450, helmikuu 1985; ja Wain-Habson ja muut Cell 40, sivut 9-17, tammikuu 1985. ) Vaippagee-niä on erityisesti yhdistetty antigeenisyyteen ja tartu-tuntakykyyn. Vaipan alueen tiedetään myös sisältävän alueita, jotka ovat hyvin vaihtelevia. HIV-viruksen vaipan 25 glykoproteiinin on osoitettu liittyvän kovalenttisella si doksella ihmisen, rotan ja apinan aivojen kalvoihin ja immuunijärjestelmän soluihin.Several researchers have reported the complete nucleic acid sequence of the AIDS (HIV) virus. (See Lee Ratner et al., Nature 313, p. 277, January 1985; Muesing 20 et al., Nature 313, p. 450, February 1985; and Wain-Habson et al., Cell 40, pp. 9-17, January 1985.) Napppagee in particular, they have been associated with antigenicity and adhesion. The envelope region is also known to include regions that are highly variable. The HIV envelope glycoprotein has been shown to be covalently linked to human, rat, and monkey brain membranes and immune system cells.
Sen ymmärtäminen, että virukset voivat osoittaa valikoivuutta soluja ja kudoksia kohtaan kiinnittymällä so-30 lukalvon pinnan reseptorien erittäin spesifisiin aluei siin, on rohkaissut tutkijoita etsimään aineita, jotka * voisivat sitoutua solukalvojen virusreseptorikohtiin ja näin ehkäistä tietyn viruksen sitoutuminen näihin soluihin. Aikaisemmin on osoitettu (Epstein ja muut Nature 318, 35 sivut 663 - 667), että vaccinia-viruksen erityisten resep- 2 ο λ τ ς ο s ^ O L· torien välittämä tartuntakyky voidaan osoittaa tulevan tehottomaksi synteettisten peptidien avulla.The understanding that viruses can show selectivity for cells and tissues by attaching to highly specific regions of cell membrane surface receptors has encouraged researchers to look for agents that * could bind to cell membrane viral receptor sites and thus prevent a particular virus from binding to these cells. It has previously been shown (Epstein et al., Nature 318, 35 pages 663-667) that the infectivity mediated by specific receptors for vaccinia virus can be shown to be ineffective with synthetic peptides.
HIV-viruksen on osoitettu sitoutuvan pintamolekyy-liin, joka tunnetaan CD4- tai T4-alueena, mikä esiintyy 5 monissa eri HIV-tartunnalle alttiissa soluissa, mukaanlukien T-lymfosyytit ja makrofagit. (Katso Shaw ja muut [Science 226, sivut 1165 - 1171], missä on tarkasteltu HTLV-III:n valikoivuutta).The HIV virus has been shown to bind to a surface molecule known as the CD4 or T4 region, which is present in many different cells susceptible to HIV infection, including T lymphocytes and macrophages. (See Shaw et al. [Science 226, pp. 1165-1171] for a review of HTLV-III selectivity).
Immunopuutoksesta aiheutuvien oireiden lisäksi 10 AIDS-potilaat osoittavat hermopsykologisia vaurioita. Keskushermostolla ja immuunijärjestelmällä on suuri määrä yhteisiä spesifisiä solupinnan tunnistusmolekyylejä, jotka toimivat hermopeptidien välittämän solujen välisen yhteydenpidon reseptoreina. Hermopeptidit ja niiden reseptorit 15 ovat osoittautuneet huomattavan pysyviksi kehityksen kuluessa ja ovat säilyneet lähes muuttumattomassa muodossa yksisoluisissa eliöissä sekä korkeammissa eläimissä. Lisäksi keskushermostossa ja immuunijärjestelmässä havaitaan yhteiset DC4 (T4) solupinnan tunnistusmolekyylit, jotka 20 toimivat HIV:n vaipan glykoproteiinin (gp 120) reseptoreina. Koska samat suuressa määrin säilyneet hermopeptideistä koostuvat tietoa kuljettavat aineet yhdistävät immuuni- ja aivotoiminnan reseptoreilla, jotka ovat huomattavassa määrin samankaltaisia HIV:n reseptoreiden kanssa, on väitet-25 ty, että se hyvin samanlainen aminohappojärjestys, joka HIV:n glykoproteiini 120:11a on erään lyhyen peptidin kanssa, joka tunnistettiin aiemmin muussa yhteydessä Epstein-Barr -viruksen vaippa-alueelta, saattaa merkitä sellaisen ydinpeptidin olemassaoloa, joka on oleellinen virusresep-30 toriin sitoutumiselle. Esitettiin väittämät, että tällaista peptidiä voitaisiin hyödyntää estämään HIV:a tartutta-’ masta soluja siten, että peptidi liittyy reseptorisoluihin ja on esteenä HIV gp 120 liittymiselle, että tällaiset reseptorikohtiin sitoutuvat peptidit aiheuttaisivat pepti-35 dijaksoja kohtaan suunnattujen vasta-aineiden tuotannon, 94552 3 ja että näitä peptidejä voitaisiin käyttää tarjoamaan immunologinen perusta AIDS:n torjumiseksi.In addition to the symptoms of immunodeficiency, 10 AIDS patients show neuropsychological damage. The central nervous system and immune system share a large number of specific cell surface recognition molecules that act as receptors for neuropeptide-mediated intercellular communication. Neuropeptides and their receptors have been shown to be remarkably stable during development and have remained in almost unchanged form in unicellular organisms as well as in higher animals. In addition, common DC4 (T4) cell surface recognition molecules that act as receptors for the HIV envelope glycoprotein (gp120) are detected in the central nervous system and immune system. Because the same highly conserved neuropeptide transporters combine immune and brain function with receptors that are substantially similar to HIV receptors, it has been argued that the very similar amino acid sequence that HIV glycoprotein 120 has in a batch of with a short peptide previously identified elsewhere in the envelope region of the Epstein-Barr virus may indicate the existence of a core peptide essential for binding to the viral receptor. It has been argued that such a peptide could be utilized to prevent HIV from infecting cells by binding to receptor cells and preventing the incorporation of HIV gp120, such that such receptor-binding peptides would result in the production of antibodies to peptide-35 sequences, 94552 3 and that these peptides could be used to provide an immunological basis for combating AIDS.
Tarkoitus Tämän keksinnön kohteena oli valmistaa peptidejä, 5 jotka voisivat parantaa AIDS:n estämällä HIV:n (AIDS viruksen) sitoutumisen reseptorikohtiin aivojen kalvoihin ja immuunijärjestelmän soluihin.Object of the present invention was the preparation of peptides that could cure AIDS by inhibiting the binding of HIV (AIDS virus) to receptor sites on membranes in the brain and cells of the immune system.
Tämän keksinnön kohteena oli myös valmistaa peptidejä käytettäväksi rokotteina sellaisten vasta-aineiden 10 synnyttämiseksi, jotka suojaisivat HIV:lie (AIDS-viruksel-le) mahdollisesti altistuvia henkilöitä AIDS:n kehittymistä vastaan.It was also an object of the present invention to provide peptides for use as vaccines for generating antibodies that would protect individuals potentially exposed to HIV (AIDS virus) against the development of AIDS.
Keksinnön yksityiskohtainen kuvausDetailed description of the invention
Tunnistettiin oktapeptidi HIV:n vaipan glykoprote-15 Unissa (gp 120) tietokoneavusteista analyysia käyttäen. Tämän peptidin, joka nimettiin "peptidi T":ksi korkean treoniinisisältönsä perusteella, on osoitettu estävän gp 120:n sitoutumisen aivon kalvoihin. Peptidin aminohappo-järjestys on Ala-Ser-Thr-Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr. Myöhempi 20 analyysi paljasti samantyyppisiä pentapeptidejä, joilla on samanlaiset sitoutumisominaisuudet.The octapeptide was identified in HIV envelope glycoprotein-15 Un (gp120) using computer-aided analysis. This peptide, designated "peptide T" based on its high threonine content, has been shown to inhibit the binding of gp120 to brain membranes. The amino acid sequence of the peptide is Ala-Ser-Thr-Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr. Subsequent analysis revealed pentapeptides of the same type with similar binding properties.
Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen peptidin valmistamiseksi, jolla on kaava I: 25 X-R*-Ser-Thr-Thr-Thr-Asn-Tyr-Rb-X (I) jossa kaavassaThe invention relates to a process for the preparation of a therapeutically useful peptide of formula I: wherein X-R * -Ser-Thr-Thr-Thr-Asn-Tyr-Rb-X (I)
Ra on aminopään pääteryhmä Ala- tai D-Ala-,Ra is the amino-terminal end group Ala or D-Ala,
Rb on karboksipään pääteryhmä -Thr tai -Thr-amidi, 30 ja X on Cys tai toinen tai molemmat X:t puuttuvat, * tai peptidin valmistamiseksi, jolla on kaava II: X-R1-R2-R3-R4-R5-X (II) 35 jossa kaavassaRb is a carboxy-terminal end group -Thr or -Thr-amide, and X is Cys or one or both of X are absent, * or to prepare a peptide of formula II: X-R1-R2-R3-R4-R5-X ( II) 35 in which formula
O A KOO A KO
✓ Lt o D L✓ Lt o D L
4 R1 on aminopään pääteryhmä Thr-, Ser-, Asn-,4 R1 is the amino terminus of Thr, Ser, Asn,
Leu-, Ile-, Arg- tai Glu-, R2 on Thr, Ser tai Asp, R3 on Thr, Ser, Asn, Arg, Gin, Lys tai Trp, 5 R4 on Tyr, ja R5 on karboksipään pääteaminohapporyhmä, vastaava D-aminohappo, vastaava amidijohdannainen tai R5 puuttuu, ja X on Cys tai toinen tai molemmat X:t puuttuvat, edellyttäen kuitenkin, ettei peptidi ole Ser-Thr-10 Asn-Tyr-Thr, tai niiden fysiologisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi .Leu, Ile, Arg or Glu, R2 is Thr, Ser or Asp, R3 is Thr, Ser, Asn, Arg, Gln, Lys or Trp, R4 is Tyr, and R5 is the carboxy-terminal terminal amino acid group corresponding to D- amino acid, the corresponding amide derivative, or R 5 is absent, and X is Cys or one or both Xs are absent, provided, however, that the peptide is not Ser-Thr-10 Asn-Tyr-Thr, or physiologically acceptable salts thereof.
R5 on mieluimmin karboksipään pääteryhmä -Thr, Arg tai Gly tai näiden johdannainen. Peptidi, joka päättyy 15 R4:ään (tyrosiiniin), säilyttää tässä käsitellyn ryhmän si- toutumisominaisuudet. Tämän keksinnön mukaisesti valmistetut aktiiviset yhdisteet voivat esiintyä peptidien fysiologisesti hyväksyttävinä suoloina.R5 is preferably a carboxy-terminal end group -Thr, Arg or Gly or a derivative thereof. A peptide terminating in R4 (tyrosine) retains the binding properties of the group discussed herein. The active compounds prepared according to the present invention may exist as physiologically acceptable salts of the peptides.
Tämän ryhmän peptidien on havaittu sitoutuvan T4-20 virusreseptoreihin.Peptides in this group have been found to bind to T4-20 viral receptors.
Kaikkein ensisijaisimmat peptidit, sekä ylläkuvattu peptidi T, ovat seuraavanlaisia kaavan (I) mukaisia okta-peptidejä: D-Ala-Ser-Thr-Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr j a 25 D-Ala-Ser-Thr-Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr-amidi ja seuraavanlaisia kaavan (II) mukaisia pentapeptidejä: Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr Thr-Thr-Ser-Tyr-Thr Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr 30 ja niiden analogeja, joilla aminopään pääteryhmänä on D-Thr ja/tai karboksipään pääteryhmänä amidijohdannainen.The most preferred peptides, as well as the peptide T described above, are the following octa-peptides of formula (I): D-Ala-Ser-Thr-Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr and D-Ala-Ser-Thr-Thr-Thr -Asn-Tyr-Thr-amide and the following pentapeptides of formula (II): Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr Thr-Thr-Ser-Tyr-Thr Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr 30 and their analogs having the amino terminus is D-Thr and / or the carboxy terminus is an amide derivative.
* Esitettyjä yhdisteitä voi olla edullista muunnella menetelmillä, joiden tiedetään edistävän molekyylien pääsyä aivoveriesteen läpi. Asetylointi on osoittautunut eri-35 tyisen käyttökelpoiseksi peptidien sitoutumisaktiivisuuden li 94552 5 parantajaksi. Amino- ja karboksipäiden kohdat ovat ensisijaisia modifiointikohtia. Tämän keksinnön peptidejä voi myös modifioida avaruusrakenteeltaan rajoitetuiksi pysyvyyden parantamiseksi ja suun kautta tapahtuvan annostelun 5 edistämiseksi.* It may be advantageous to modify the disclosed compounds by methods known to promote the passage of molecules through the cerebral blood barrier. Acetylation has proven to be a particularly useful enhancer of peptide binding activity li 94552 5. Amino and carboxy terminus sites are the preferred sites for modification. The peptides of this invention may also be modified to be spatially limited to improve stability and promote oral administration.
Jäljempänä käytetään seuraavia lyhenteitä:The following abbreviations are used below:
Aminohappo Kolmikirjaiminen Yksikirjaiminen _ koodi_ koodi_Amino acid Three-letter One-letter _ code_ code_
10 arginiini arg R10 arginine arg R
asparagiini asn Nasparagine asn N
asparagiinihappo asp Daspartic acid asp D
kysteiini cys Ccysteine cys C
glysiini gly Gglycine Gly G
15 seriini ser S15 serine ser S
treoniini thr Tthreonine thr T
tyrosiini tyr Ytyrosine tyr Y
Ellei muuten ole osoitettu, ovat aminohapot tietenkin 20 luonnollisissa L-stereoisomeerisissa muodoissa.Unless otherwise indicated, the amino acids are, of course, in the 20 natural L-stereoisomeric forms.
Kahdentoista pentapeptidin aminohappojärjestysten vertailu on esitetty taulukossa 1. Vaikka historiallisesti aluksi suorittamamme tietokonehaku paljasti peptidi T:n (ARV-eristyksen sisältämä peptidi) olevan asianomainen 25 jakso, uusien virusperäisten amihohappojaksojen tultua saataville kävi selväksi, että asianomainen bioaktiivinen jakso voisi olla lyhempi pentapeptidi, joka nimellisesti koostuu peptidistä T (4-8), tai jakso TTNYT. Vertaamissamme eristyksissä (taulukko 1) huomattavaa homologiaa ha-30 valttiin vain tällä lyhyemmällä alueella. Suurin osa muutoksista on seriinin (S) ja treoniinin (T), kahden toisiaan läheisesti muistuttavan aminohapon, vaihtuminen kes-* kenään. Peptidi T:n asemassa 7 oleva tyrosiini on kaikkien näiden muotojen muuttumattomana säilyvä piirre, mikä viit-35 taa siihen, että se voi olla bioaktiivisuudelle välttämätön. Asemassa 5 esiintyvät korvaustapahtumat käsittävät • 6 94352 T:n, G:n, R:n ja S:n. Asemat 4 ja 6 rajattiin ensin käsittämään (yhtä poikkeusta lukuunottamatta) S:n, T:n ja N:n, jotka kaikki ovat aminohappoja, joilla on varauksettomat polaariset, avaruusrakenteeltaan läheisesti samanlaiset 5 ryhmät. Viiden eri AIDS-virus eristysvalmisteen kesken suoritettu jaksojen yhtäläisen yhdenmukaisuuden määrittäminen paljastaa, että alue, joka sijaitsee peptidi T-jakson vieressä ja johon tämä itse kuuluu, on hyvin muuntele-vaa. Tällainen muuntelevuus voi viitata alakantojen kehit-10 tymiseen sellaisen voimakkaan toiminnan (toimintojen) monimuotoisuuden lisääntymisen välityksellä, joka on alttiina valintatapahtumille, ja joka sijoittuu tälle alueelle. Opiaattipeptidien tavoin nämä peptidi T:n analogit näyttävät esiintyvän monissa muodoissa, muistuttaen met- ja 15 leu-enkefaliineja. Nämä pentapeptidijaksot, jotka esiintyvät näissä useissa eri AIDS-viruseristysvalmisteissa, ovat biologisesti aktiivisia ja kykenevät vuorovaikutukseen CD4 reseptorin - aiemmin laajemmalti tunnettu T-aut-tajasolujen pinta"markkeeri" ominaisuudestaan - vastavai-20 kuttajana.A comparison of the amino acid sequences of the twelve pentapeptides is shown in Table 1. Although historically our computer search initially revealed peptide T (a peptide contained in ARV isolation) to be the relevant sequence, it became clear that new viral amino acid sequences could be shorter pentapept. consists of peptide T (4-8), or the sequence TTNYT. In the isolations we compared (Table 1), considerable homology to ha-30 was achieved only in this shorter region. Most of the changes are the exchange of serine (S) and threonine (T), two closely related amino acids. Tyrosine at position 7 of peptide T is an unchanged feature of all these forms, suggesting that it may be necessary for bioactivity. The substitution events occurring at position 5 include • 6 94352 T, G, R, and S. Positions 4 and 6 were first delimited to include (with one exception) S, T, and N, all of which are amino acids having uncharged polar, closely spaced 5 groups in space structure. Determining the uniformity of the sequences between the five different AIDS virus isolation products reveals that the region adjacent to the peptide T sequence, to which it itself belongs, is highly variable. Such variability may indicate the development of sub-strains through a strong increase in the diversity of activity (ies) that is exposed to selection events and that is located in this area. Like opiate peptides, these peptide T analogs appear to exist in many forms, resembling met and Leu encephalins. These pentapeptide sequences, which are present in these various AIDS virus isolation preparations, are biologically active and capable of interacting with the CD4 receptor - previously more widely known as a "marker" of the surface of helper T helper cells - as an antagonist.
ENV-jakson vertailu useista AIDS viruseristysval- misteista 5 O Λ l L 0 7Comparison of the ENV cycle for several AIDS virus isolation products 5 O Λ l L 0 7
Taulukko 1.Table 1.
Eristysvalmiste Jakso Viite peptidi T ASTTTNYT Pert, C.B., ja muut PNAS (painossa) 10 1ARV (195-199) TTNYT Willey, R.L. ja muut LAV TTSYT PNAS 83, s.5083, 1986Isolation Preparation Section Reference Peptide T ASTTNYT Pert, C.B., and Others PNAS (w / w) 10 1VAR (195-199) TTNYT Willey, R.L. and others LAV TTSYT PNAS 83, p.5083, 1986
Z3 SSTYRZ3 SSTYR
NY5 NTSYTNY5 NTSYT
15 B10(HTLV-III) TTSYT Starcich, B.R., ja muut WMJ-1 SSTYR Cell, 45, s. 637, 198615 B10 (HTLV-III) TTSYT Starcich, B.R., and others WMJ-1 SSTYR Cell, 45, p. 637, 1986
HAT-3 NTSYGHAT-3 NTSYG
Peräkkäiset eris-tysvalmisteet STNYRSuccessive insulation products STNYR
20 WMJ-1 SSTYR Hahn, B.L. ja muut WMJ-2 SSRYR Science 232 s. 1548, WMJ-3 SSTYR 198620 WMJ-1 SSTYR Hahn, B.L. and others WMJ-2 SSRYR Science 232 p. 1548, WMJ-3 SSTYR 1986
TTSYSTTSYS
25 1 Numerot viittaavat aminohappojen suhteellisiin paikkoi hin ARV env -jaksossa (9).25 1 The numbers refer to the relative positions of the amino acids in the ARV env sequence (9).
Seitsemästä aminohaposta koostunut peptidi CYS-THR-THR-ASN-TYR-THR-CYS on myös aktiivinen. Kysteiinien lisäys ydinjaksoon ei merkittävästi heikennä aktiivisuutta. Pep-30 tidit syntetoitiin Peninsula Laboratories -yhtiön toimittamana palveluna keksinnön tekijöiden ja valmistajan väli-* sen luottamuksenisuussopimuksen alaisuudessa. KäytettiinThe seven amino acid peptide CYS-THR-THR-ASN-TYR-THR-CYS is also active. The addition of cysteines to the core does not significantly impair activity. Pep-30s were synthesized as a service provided by Peninsula Laboratories under a confidentiality agreement between the inventors and the manufacturer. was used
Merrifieldin kiinteän faasin peptidisynteesiä. (Katso US-patentti n:o 35311258, mikä liitetään tähän hakemukseen 35 viittaamalla.) Syntetoidut peptidit ovat ensisijaisessa 8 O A ZlZ O S Lt ^ U L· asemassa. Vaikkakin peptidi T ja tähän osana kuuluva pen-tapeptidi voitaisiin eristää viruksesta, Merrifieldin mukaan syntetoidut peptidit eivät sisällä jäämiä soluista tai viruksista. Tämän johdosta kontaminaatioita kohtaan 5 syntyneitä reaktioita ei tapahdu, kun käytetään syntetoi-tuja peptidejä.Merrifield solid phase peptide synthesis. (See U.S. Patent No. 3,531,1258, which is incorporated herein by reference.) The synthesized peptides are in the primary 8 O A ZlZ O S Lt ^ U L · position. Although peptide T and the pentapeptide included in it could be isolated from a virus, the peptides synthesized according to Merrifield do not contain residues from cells or viruses. As a result, reactions to site 5 contamination do not occur when synthesized peptides are used.
Tässä esitettyjä peptidejä voidaan tuottaa tavanomaisilla peptidisynteesimenetelmillä. Sekä kiinteän että nestemäisen faasin menetelmiä voidaan käyttää. On havait-10 tu Merrifieldin kiinteän faasin olevan erityisen käyttökelpoinen. Tässä menetelmässä peptidi syntetoidaan vaiheittain ketjun karboksipään ollessa kovalenttisesti liitetty liukenemattomaan kantajaan. Synteesin välivaiheiden aikana peptidi pysyy kiinteässä faasissa ja on siten hel-15 posti käsiteltävissä. Kiinteä kantajafaasi on kloromety-loitu styreeni-divinyylibentseeni-kopolymeeri. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään.The peptides disclosed herein can be produced by conventional peptide synthesis methods. Both solid and liquid phase methods can be used. The solid phase of Merrifield has been found to be particularly useful. In this method, the peptide is synthesized stepwise with the carboxy terminus of the chain covalently attached to an insoluble support. During the intermediate steps of the synthesis, the peptide remains in the solid phase and is thus easily handled. The solid support phase is a chloromethylated styrene-divinylbenzene copolymer. The method according to the invention is characterized by what is stated in claim 1.
Karboksipään pääteaminohapon N-suojatun muodon, 20 esim. t-butoksikarbonyyli (Boc-) -suojatun aminohapon, annetaan reagoida klorometyloidun styreeni-divinyylibent-seeni-kopolymeerihartsin klorometyyliryhmän kanssa, jolloin syntyy hartsin suojattu aminoasyylijohdannainen, missä aminohappo on liittynyt hartsiin bentsyyliesterinä. Tä-25 män suojaus poistetaan ja sen annetaan reagoida seuraavan aminohapon suojatun muodon kanssa, mistä syntyy hartsiin liittynyt suojattu dipeptidi. Aminohappoa käytetään tavallisesti aktivoidussa muodossaan, esim. käyttämällä karbo-di-imidiä tai aktiivista esteriä. Nämä vaiheet toistetaan 30 ja peptidiketju kasvaa ryhmä kerrallaan kondensoitumalla aminopäästään haluttujen N-suojattujen aminohappojen kans-! sa kunnes haluttu peptidi on koottu kantajaan. Peptidi- hartsi käsitellään sitten vedettömällä fluorivetyhapolla, mikä katkaisee koottua peptidiä kantajaan yhdistävän este-35 risidoksen halutun peptidin vapauttamiseksi. Samalla voi- 9 94552 9 daan tavanomaisin menetelmin vapauttaa aminohappojen sivu-ketjujen funktionaaliset ryhmät, jotka on täytynyt suojata synteesivaiheiden ajaksi. Amidiryhmän karboksi-päässään sisältävän peptidin synteesi voidaan suorittaa tavanomai-5 sesti 4-metyylibentshydrylamiinihartsia käyttäen.The N-protected form of the terminal end amino acid of the carboxy terminus, e.g. This is deprotected and reacted with the protected form of the next amino acid to give the resin-associated protected dipeptide. The amino acid is usually used in its activated form, e.g. using a carbodiimide or active ester. These steps are repeated and the peptide chain grows group by group by condensation at its amino terminus with the desired N-protected amino acids. until the desired peptide is assembled on a support. The peptide-resin is then treated with anhydrous hydrofluoric acid, which cleaves the barrier bond connecting the assembled peptide to the support to release the desired peptide. At the same time, the functional groups of the amino acid side chains which have had to be protected during the synthetic steps can be liberated by conventional methods. The synthesis of a peptide containing an amide group at its carboxy terminus can be carried out conventionally using 4-methylbenzhydrylamine resin.
Valmistettavien yhdisteiden havaittiin tekevän solujen reseptorikohtia toimintakyvyttömiksi ja ehkäisevän HIV-viruksen tartuntakykyä soluja kohtaan apinan, rotan ja ihmisen aivojen kalvoissa ja immuunijärjestelmän soluissa.The compounds to be prepared were found to deactivate cellular receptor sites and prevent the infectivity of the HIV virus against cells in monkey, rat and human brain membranes and immune system cells.
10 On kehitetty farmaseuttinen valmiste, joka koostuu keksinnön peptidiyhdisteestä yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai täyteaineen kanssa, joka soveltuu ihmis- tai eläinlääketieteelliseen käyttöön. Tällaiset valmisteet voidaan asettaa käytettäväksi tavanomaisesti 15 sekoitettuna yhteen tai useampaan fysiologisesti hyväksyt tävään kantajaan tai täyteaineeseen. Valmisteet voivat vaihtoehtoisesti sisältää lisäksi yhtä tai useampaa muuta terapeuttista ainetta, joka voi haluttaessa olla muu viruksia kohtaan vaikuttava aine.A pharmaceutical preparation has been developed comprising a peptide compound of the invention in association with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient suitable for human or veterinary use. Such preparations may be conventionally formulated in admixture with one or more physiologically acceptable carriers or excipients. Alternatively, the compositions may additionally contain one or more other therapeutic agents, which may be other viral agents if desired.
20 Keksinnön mukaisesti valmistetut peptidit voidaan siten muokata käyttökokoonpanonsa puolesta suun kautta, suuontelon kautta, ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti, paikallisesti tai peräsuolen kautta tapahtuvaa annostelua varten.20 in accordance with the invention, the peptides can be made to customize the composition to use on behalf of the oral, buccal, parenteral, topical or administration through the rectum.
. 25 Farmaseuttiset aineet voivat myös sisältää muita aktiivisia ainesosia, kuten antimikrobiaalisia aineita tai säilöntäaineita.. The pharmaceutical agents may also contain other active ingredients, such as antimicrobial agents or preservatives.
Valmisteet voivat sisältää 0,001 - 99 % aktiivista ainesta.The preparations may contain 0.001 to 99% of active ingredient.
30 Ruiskuttamalla tai infuusion kautta tapahtuvaa annostelua varten aikuisen, ruumiinpainoltaan noin 70-ki-* loisen ihmisen päivittäisannos vaihtelee noin 0,2 - 10 mg:aan, mieluummin 0,5-5 mg:aan, joka voidaan antaa esimerkiksi yhdestä neljään annoksena riippuen annostustiestä 35 ja potilaan kunnosta.For administration by injection or infusion, the daily dose for an adult human of about 70 kg body weight will range from about 0.2 to 10 mg, preferably from 0.5 to 5 mg, which may be administered, for example, in one to four doses depending on the route of administration. 35 and the condition of the patient.
10 9435210 94352
Esitettiin väittämä, että affiniteettivakiot ovat samanlaisia kuin morfiineilla. Tämän affiniteetin perusteella ehdotettiin päiväannokseksi 0,33 - 0,0003 mg/kg. Tämä on osoittautunut tehokkaaksi. Veressä saavutettavaksi 5 pitoisuudeksi ehdotetaan 10'6 - 10'11 molaarista veressä olevaa pitoisuutta. Apinoilla 3 mg/kg päivässä saavutetaan seerumissa olevaksi pitoisuudeksi 150 x 10'9 M. Tämä pitoisuus on 15 kertaa suurempi kuin mikä on tarpeen 10‘8 M pitoisuuden saavuttamiseksi. Kädellisillä tarvitaan yleensä 10 ihmisillä käytettyä annosta 10 kertaa suurempi annos.It was argued that affinity constants are similar to those of morphines. Based on this affinity, a daily dose of 0.33 to 0.0003 mg / kg was proposed. This has proven to be effective. A concentration of 10'6 to 10'11 molar in the blood is proposed to be achieved in the blood. In monkeys, a serum concentration of 150 x 10'9 M is reached at 3 mg / kg / day, which is 15 times higher than that required to reach a concentration of 10'8 M. In primates, a dose 10 times the human dose is usually required.
Esitettiin edelleen rokotevalmiste, joka sisältää tämän keksinnön mukaisesti valmistetun peptidin AIDS-vi-rusinfektiota kohtaan saatavan suojan aikaansaamiseen. Rokote tulee sisältämään immunogeenisesti tehokkaan määrän 15 peptidiä, esim. 1 μg - 20 mg/kg saajan painoa, liitettynä vaihtoehtoisesti valkuaisaineeseen, kuten ihmisen seerumin albumiiniin sopivassa kantaja-aineessa, esim. steriilissä vedessä, saliinissa tai puskuroidussa saliinissa. Voidaan käyttää tehosteaineita kuten alumiinihydroksidigeeliä. 20 Annosteluna voi olla ruiskeen anto, esim. lihakseen, vatsaonteloon, ihon alle tai suoneen. Annostelu voi tapahtua kerran tai useita kertoja, esim. 1-4 viikon välein.Further provided was a vaccine composition comprising a peptide prepared in accordance with the present invention for providing protection against AIDS virus infection. The vaccine will contain an immunogenically effective amount of 15 peptides, e.g. 1 μg to 20 mg / kg of recipient weight, optionally coupled to a protein such as human serum albumin in a suitable carrier, e.g. sterile water, saline or buffered saline. Boosters such as aluminum hydroxide gel can be used. The administration may be by injection, for example, intramuscularly, intraperitoneally, subcutaneously or intravenously. Dosing can take place once or several times, e.g. every 1-4 weeks.
Peptidiin voidaan myös lisätä antigeenisyyden edistämiseksi ravusta peräisin olevia antigeenisiä jaksoja, 25 tai muiden selkärangattomien valkuaisaineita.Crab-derived antigenic sequences, or other invertebrate proteins may also be added to the peptide to promote antigenicity.
Kokeelliset menetelmät 1a koetulokset Gp 120:n leimaus radioaktiivisella merkkiaineella, kalvojen valmistus aivoista, gp 120:n sitoutuminen ja ristiinsitominen reseptoriin, ja T4-antigeenin 30 immunosaostus HIV:n HTLV-IIIb kantaa lisättiin H9 soluissa ja gp • 120 eristettiin immuuniaffiniteettikromatografiaa ja pre- paratiivista NaDodS04/PAGE:a käyttämällä. Puhdistettu gp 120 leimattiin 125I:lla kloramiini-T-menetelmällä.Experimental Methods 1a Experimental Results Radiolabeling of gp120, preparation of membranes from the brain, binding and cross-linking of gp120 to the receptor, and immunoprecipitation of T4 antigen HIV strain HTLV-IIIb was added in H9 cells and gp • 120 was isolated by immunoaffinity chromatography. using parative NaDodSO 4 / PAGE. Purified gp120 was labeled with 125 I by the chloramine-T method.
94552 1194552 11
Tuoreet ihmisen, apinan ja rotan pikkuaivot homogenoitiin nopeasti (Polytron, Brinkmann Instruments) 100 tilavuudessa jääkylmää Hepes (pH 7,4)-puskuria. Sentrifugoi-malla (15 000 x g) kerätyt kalvot pestiin alkuperäisen 5 puskuriliuoksen tilavuudessa ja käytettiin tuoreeltaan tai varastoitiin -70 °C:ssa. Aivojen kalvot ja pitkälle puhdistetut T-solut (viite 16; lahjoitus Larry Wahl'ilta) esi-inkuboitiin ennen käyttöä 15 - 30 min fosfaatilla puskuroidussa suolaliuoksessa (PBS). 20 mg:n erä (märkäpaino 10 alussa) aivoista peräisin olevia kalvoja (noin 100 pg proteiinia) inkuboitiin 28000 cpm:n erän kanssa 125I-gp 120:a 1 tunnin ajan 37 °C:ssa 200 pl:ssa (lopullinen tilavuus) 50 mM Hepes -puskuriliuosta, joka sisälsi 0,1% naudan seerumin albumiinia ja peptidaasi-inhibiittoreita basitrasii-15 ni (0,005 %), aprotiniini (0,005 %), leupeptiini (0,001 %) ja kymostatiini (0,001 %). Inkubointiseokset suodatettiin nopeasti tyhjiön avulla ja radioaktiivisuus laskettiin reseptoriin kiinnittyneen materiaalin määrän määrittämiseksi .Fresh human, monkey, and rat cerebellum were rapidly homogenized (Polytron, Brinkmann Instruments) in 100 volumes of ice-cold Hepes (pH 7.4) buffer. The membranes collected by centrifugation (15,000 x g) were washed in a volume of the original buffer solution and used fresh or stored at -70 ° C. Brain membranes and highly purified T cells (Ref. 16; donation from Larry Wahl) were preincubated for 15-30 min in phosphate buffered saline (PBS) before use. A 20 mg aliquot (wet weight at the beginning of 10) of brain-derived membranes (approximately 100 pg protein) was incubated with a 28,000 cpm aliquot of 125 I-gp 120 for 1 hour at 37 ° C in 200 μl (final volume). mM Hepes buffer containing 0.1% bovine serum albumin and the peptidase inhibitors basitrazine-15 (0.005%), aprotinin (0.005%), leupeptin (0.001%) and chymostatin (0.001%). The incubation mixtures were rapidly filtered under vacuum and the radioactivity was counted to determine the amount of material attached to the receptor.
20 Immuunisaostus20 Immunoprecipitation
Immuunisaostumat valmistettiin inkuboimalla (yön yli 4 °C:ssa) 0,5 % Triton-X-100/PBS -liuoksella liukoiseksi tehtyjä, laktoperoksidaasi/glukoosioksidaasi/125I jodat-tuja aivojen kalvoja tai ehjiä T-soluja ilmoitettujen mo-. . 25 noklonaalisten vasta-aineiden kanssa, joita käytettiin 10 pg reaktiota kohti. Kiinteän faasin immunoadsorbenttia (Immunobeads, Bio-Rad) käytettiin immuuni-kompleksien saostamiseen ennen niiden erottelua NaDodS04/PAGE: 11a. Verrokki-inkuboinnit eivät sisältäneet primäärisiä monoklo-30 naalisia vasta-aineita tai sisälsivät alaryhmän verrokkina olevan monoklonaalisen vasta-aineen (0KT8).Immunoprecipitates were prepared by incubating (overnight at 4 ° C) with 0.5% Triton-X-100 / PBS solubilized lactoperoxidase / glucose oxidase / 125 I iodinated membranes or intact T cells as indicated. . With 25 noclonal antibodies used per 10 pg reaction. A solid phase immunoadsorbent (Immunobeads, Bio-Rad) was used to precipitate immune complexes before separation by NaDodSO 4 / PAGE. Control incubations did not contain primary monoclonal antibodies or contained a subset of control monoclonal antibody (0KT8).
««
Kemiallinen hermoanatomia ja tietokoneavusteinen tiheysmittaus 25 pm kryostaattileikkeet tuoreena pakastetuista 35 ihmisen, apinan ja rotan aivoista kiinnitettiin sulatta- 9 4 · b 12 s maila ja kuivattiin gelatiinilla päällystetyille objekti-laseille, ja reseptorit saatettiin havaittaviksi viitteessä (18) kuvatulla tavalla. Inkuboinnit ilman T4, T4A, T8 ja Tll vastaan suunnattuja vasta-aineita (10 pg/ml) tai 5 näiden kanssa suoritettiin yön yli 0 °C:ssa RPMI-liuokses-sa, sidottiin ristiin antigeeneihinsä ja saatettiin havaittaviksi 125I:lla leimatulla vuohen hiirtä vastaan suunnatulla vasta-aineella. Objektilasille kiinnitettyjen ku-dosleikkeiden inkuboinnit antigeenireseptorin leimaamisek-10 si 125I-gp 120:11a suoritettiin 5 ml:n objektilasisäiliöis-sä leimaamattoman gp 120:n kanssa (1 μΜ) tai ilman tätä tai 0KT4A monoklonaalisen vasta-aineen kanssa (10 pg/ml) (Ortho Diagnostics) tai ilman tätä.Chemical Nerve Anatomy and Computer-Aided Density Measurement 25 μm cryostat sections from freshly frozen 35 human, monkey, and rat brains were attached to a thawed 9 4 · b 12 s racket and dried on gelatin-coated slides, and the receptors were detected as described in reference (18). Incubations without or against antibodies against T4, T4A, T8 and T11 (10 pg / ml) were performed overnight at 0 ° C in RPMI solution, cross-linked to their antigens and detected in 125 I-labeled goat mice. with an antibody directed against. Incubations of slide sections attached to slides for antigen receptor labeling with 125 I-gp 120 were performed in 5 ml slide wells with or without unlabeled gp 120 (1 μ 1) or with 0KT4A monoclonal antibody (10 pg / ml). ) (Ortho Diagnostics) or without this.
T-lvmfosvvttien alaryhmien erottaminen 15 T-solujen alaryhmät saatiin käsittelemällä Percoll- tiheysgradientissa puhdistettuja ääreisverenkierron T-so-luja spesifisillä monoklonaalisilla vasta-aineilla (T4 tai T8), joiden pitoisuus oli 10 pg/ml. Käsiteltyjä soluja seisotettiin 30 min 4 °C:ssa muovisella petrimaljalla, jon-20 ka pintaan oli kiinnitetty vuohen [F(ab')2] hiirtä vastaan kohdistettua immunoglobuliinia (Sero Lab, Eastbury, MA). Tämän jälkeen poistettiin vapaaksi jääneet solut, ja ne pestiin ja niiden reaktiivisuus tutkittiin virtaussytomet-rilla. Erotetuissa T4 ja T8 solupopulaatioissa on muita 25 T-solujen alaryhmiä < 5 % kontaminaatiotasolla. Solut vil-jeltiin sitten fytohemagglutiniinin (1 pg/ml) läsnäollessa ja altistettiin HIV:lie kuten jäljempänä kuvataan. Tartunnan saaneiden solujen ilmiasun luonne selvitettiin, kun solujen toksisuusmääritykset tehtiin.Separation of T-lvmfosvvtt subgroups T-cell subgroups were obtained by treating peripheral blood T cells purified in a Percoll density gradient with specific monoclonal antibodies (T4 or T8) at a concentration of 10 pg / ml. The treated cells were allowed to stand for 30 min at 4 ° C in a plastic petri dish with immunoglobulin against a goat [F (ab ') 2] mouse attached to the surface (Sero Lab, Eastbury, MA). The remaining cells were then removed and washed and examined for reactivity with a flow cytometer. The separated T4 and T8 cell populations have other 25 T cell subsets at <5% contamination level. The cells were then cultured in the presence of phytohemagglutinin (1 pg / ml) and exposed to HIV as described below. The nature of the appearance of infected cells was elucidated when cell toxicity assays were performed.
30 Virustartunta30 Virus infection
Tartuntaan käytetty HTLV-virus eristettiin inter-leukiinia 2 (IL-2) vaativasta viljellystä T-solulinjasta, joka oli eristetty tuoreesta AIDS-potilaan materiaalista ja siirrostettu HuT 78:aan, permissiiviseen solulinjaan, 35 joka on riippumaton IL-2:sta. 1 13 g a 1 ςο s Lr yj D £.The HTLV virus used for infection was isolated from a cultured T cell line requiring interleukin 2 (IL-2) isolated from fresh AIDS patient material and inoculated into HuT 78, a permissive cell line 35 that is independent of IL-2. 1 13 g a 1 ςο s Lr yj D £.
Piirrosten kuvausDescription of the drawings
Kuva IA osoittaa 125I-gp 120: n ristiinsitoutumisen aivon kalvoihin ja T-soluihin. (a) yksinomaan 125I-gp 120; (b) apina; (c) rotta; (d) ihmisen aivot; ja (e) ihmisen 5 T-solut.Figure 1A shows the cross-linking of 125 I-gp120 to brain membranes and T cells. (a) 125 I-gp 120 alone; (b) monkeys; (c) rat; (d) the human brain; and (e) human 5 T cells.
Kuvat IB ja 1C osoittavat 125I-leimattujen apinan aivojen kalvojen ja vastaavasti ihmisen T-solujen immuuni-saostuksen; (f,i) verrokki ilman primääristä vasta-ainetta; (g,j) monoklonaalinen vasta-aine OKT4; (h,k) 0KT8 mo-10 noklonaalinen vasta-aine.Figures IB and 1C show the immunoprecipitation of 125 I-labeled monkey brain membranes and human T cells, respectively; (f, i) a control without a primary antibody; (g, j) monoclonal antibody OKT4; (h, k) 0KT8 mo-10 noclonal antibody.
Kuvassa 2A nähdään tuoreisiin rotan pikkuaivojen kalvoihin kohdistuneen spesifisen 125I-gp 120:n sitoutumisen syrjäytyminen. Kukin määritys tehtiin kolmesti; tulokset yhdestä kolme kertaa samanlaiset tulokset antaneesta 15 kokeesta on esitetty. Sellaisen spesifisen sitoutumisen aste, joka oli syrjäytettävissä 10 pg/ml 0KT4:a ja 4A:a, vaihteli 27 ja 85 % välillä kokonaissitoutumisesta, joka esitetyssä kokeessa oli 2201 ± 74 cpm.Figure 2A shows the displacement of specific 125 I-gp120 binding to fresh rat cerebellar membranes. Each assay was performed in triplicate; results from one of 15 experiments giving similar results three times are presented. The degree of specific binding that was displaceable by 10 pg / ml 0KT4 and 4A ranged from 27 to 85% of the total binding, which was 2201 ± 74 cpm in the presented experiment.
Kuva 2B osoittaa, että peptidi T ja sen synteetti-20 set analogit tekevät viruksen tartuntakyvyn tehottomaksi.Figure 2B shows that peptide T and its synthetic analogues render viral infectivity ineffective.
Kukin määritys tehtiin kahdella rinnakkaiskokeella. Tulokset edustavat yhtä koetta, joka toistettiin kolmasti samanlaisin tuloksin.Each assay was performed in two replicates. The results represent one experiment that was repeated three times with similar results.
Esimerkki 1 25 125I-gp 120:n sitoutuessa spesifisesti pääkalloapa- nan, rotan tai ihmisen aivojen kalvoihin saadaan yksi ra-dioaktiivisesti leimautunut, noin 180 Kd:n ristiinsitoutu-mistuote, jota ei voi erottaa vastaavasta ihmisen T-soluihin sitoutuneesta tuotteesta (kuva IA). Tämä tulos osoit-30 taa, että gp 120 voidaan kytkeä noin 60 Kd:n proteiiniin; reagoimaton 125I-gp 120 kulkeutuu ilman kalvoja ajetun verrokin vieressä (kanava a).Example 1 Specific binding of 125 I-gp120 to membranes of skull, rat or human brain yields one radiolabeled, approximately 180 Kd cross-linking product that is indistinguishable from the corresponding product bound to human T cells (Figure 1A). ). This result indicates that gp120 can be coupled to a protein of about 60 Kd; the unreacted 125I-gp 120 travels next to the membrane-free control (channel a).
Radioaktiivisella jodilla leimattujen ihmisen aivojen kalvojen immuunisaostus 0KT4:lla ja 0KT8:lla (10 pg/ 35 ml)(kuva IB) osoittaa, että aivojen kalvot sisältävät T4- « 14 94252 antigeenin, joka on kooltaan noin 60 Kd, eikä sitä voi erottaa ihmisen T-lymfosyyteistä tunnistetusta vastaavasta antigeenistä (kuva 1C); tätä vastoin 0KT8:lla suoritetussa immunosaostuksessa saostuu T-lymfosyyteistä (kuva 5 1C) pienen (noin 30 Kd) molekyylipainon omaava proteiini, jota ei esiinny aivojen kalvoissa (kuva IB), mikä viittaa siihen, että aivojen T4 ei ole peräisin näihin paikallistuvista lymfosyyteistä. Samanlaisia tuloksia (tuloksia ei esitetty) on saatu apinan ja rotan pikkuaivojen kalvoja 10 käyttämällä. Nämä tulokset osoittavat, että T4-antigeeni toimii virusreseptorina ja se on hyvin säilynyt 60 Kd:n molekyyli, joka on yhteinen immuunijärjestelmälle ja keskushermostolle .Immunoprecipitation of radiolabeled human brain membranes with 0KT4 and 0KT8 (10 pg / 35 ml) (Figure IB) indicates that the brain membranes contain T4-> 14 94252 antigen, which is approximately 60 Kd in size, and cannot be distinguished from human The corresponding antigen identified from T lymphocytes (Figure 1C); in contrast, immunoprecipitation with 0KT8 precipitates a low molecular weight (approximately 30 Kd) protein from T lymphocytes (Fig. 5 1C) that is not present in brain membranes (Fig. IB), suggesting that brain T4 is not derived from these localized lymphocytes. Similar results (data not shown) have been obtained using monkey and rat cerebellar membranes 10. These results indicate that the T4 antigen acts as a viral receptor and is a well-conserved 60 Kd molecule common to the immune system and central nervous system.
Sen seikan toteaminen, että Epstein-Barr ja HTLV-15 III/LAV omaavat lähes identtiset oktapeptidijaksot, johti "peptidi T"n synteesiin ja tutkimiseen. Kuva 2 osoittaa, että 125I-gp 120: n sitoutuminen vastavalmistettuihin rotan aivojen kalvoihin tapahtuu suurella affiniteetilla (0,1 nM:n alue) ja että tämä on kyllästyvää. Spesifisyyden 20 (kuva 2B) osoittaa estyminen 0KT4:lla ja 0KT4A:lla, mutta ei 0KT3:lla (0,1 pg/ml). Peptidi T ja kaksi sen synteettistä analogia estivät merkittävästi 125I-gp 120:n sitoutumisen 0,1 nM:n alueella (kuva 2C) (mutta tähän yhteyteen kuulumaton oktapeptidi aine P (1-8) ei tätä tehnyt). Ase-25 maan 8 tehty D-threoniiniamidikorvaus aiheutti ainakin 100-kertaisen reseptoriin kohdistuvan sitoutumisaktiivi-suuden katoamisen. Klassinen (L-ala):n korvaus (D-ala):lla johti pysyvästi vaikutuskykyisempään, nähtävästi enemmän peptidaasia kohtaan resistenttiin analogiin kuin peptidi 30 T; C-pään päätetreoniini tuottaa pysyvästi jonkinverran lisääntyneen vaikutuskyvyn (kuva 3).The finding that Epstein-Barr and HTLV-15 III / LAV have nearly identical octapeptide sequences led to the synthesis and study of "peptide T". Figure 2 shows that the binding of 125 I-gp 120 to freshly prepared rat brain membranes occurs with high affinity (0.1 nM range) and that this is saturable. Specificity 20 (Figure 2B) is indicated by inhibition by 0KT4 and 0KT4A, but not by 0KT3 (0.1 pg / ml). Peptide T and two of its synthetic analogs significantly inhibited 125 I-gp120 binding in the 0.1 nM range (Figure 2C) (but this was not done by the octapeptide agent P (1-8), which is not included herein). Replacement of D-threoninamide by gun-25 in country 8 resulted in at least a 100-fold loss of receptor binding activity. The substitution of classical (L-domain) by (D-domain) resulted in a permanently more potent, apparently more peptidase-resistant analog than peptide 30 T; The C-terminal terminal threonine produces a permanently somewhat increased potency (Figure 3).
·* Kun testattiin synteettisten peptidien kykyä eh käistä virusten tartunta ihmisen T-soluihin, kokeiden suorittajat eivät tienneet sitoutumiskokeiden tuloksia. Ta-35 solia 10"7 kolme sitoutumismäärityksessä aktiivista pep- li 15 94 «'s? / » w tidiä vähentävät havaittavaa käänteistranskriptaasitasoa lähes 9-kertaisesti. Vähemmän aktiivinen sitoutumisen syr-jäyttäjä (D-thre) -peptidi T osoittautui niinikään virustartunnan estoltaan suuresti heikentyneeksi, ja merkittä-5 vän eston aikaansaamiseksi sitä tarvittiin 100 kertaa suurempi pitoisuus. Näin ollen ei ainoastaan neljän peptidin luokkien välinen järjestys ((D-( Ala ^-peptidi T-amidi > (D-(Ala ^-peptidi T > peptidi T > (D-(Thr)8-peptidi T-amidi), vaan myös näiden reseptoriin sitoutumisen ja virus-10 tartunnan esto korreloi läheisesti toisiaan (kuva 3).· * When testing the ability of synthetic peptides to prevent the infection of viruses into human T cells, the experimenters did not know the results of the binding experiments. Ta-35 sol 10 "7 three pepli 15 94« 's? / »W tid active in the binding assay reduce the observed level of reverse transcriptase almost 9-fold. The less active binding displacement (D-thre) peptide T also proved to be highly inhibitory of viral infection. 100-fold higher concentration was required to achieve significant inhibition. Thus, not only the order of the four peptide classes ((D- (Ala ^ -peptide T-amide> (D- (Ala ^ -peptide T> peptide T > (D- (Thr) 8-peptide T-amide), but also their inhibition of receptor binding and viral-10 infection are closely correlated (Figure 3).
Esimerkki 2Example 2
Noin 60 Kd:n proteiini, joka on samanlainen ellei identtinen ihmisen T-solujen T4-antigeenin kanssa, esiintyi ilmeisen säilyneessä molekulaarisessa muodossa ihmisen 15 aivoista valmistetuissa kalvoissa; lisäksi radioaktiivi-sesti merkitty HIV:n vaipan glykoproteiini (125I-gp 120) voidaan ristiinsitoa kovalenttisesti kolmen nisäkkään aivojen molekyyliin, jota kokonsa ja immuuni-saostusominai-suuksiensa puolesta ei voida erottaa T4-antigeenista.A protein of about 60 Kd, similar if not identical to human T cell T4 antigen, was apparently present in preserved molecular form in membranes prepared from human brain; in addition, the radiolabeled HIV envelope glycoprotein (125I-gp120) can be covalently cross-linked to a three-mammalian brain molecule that cannot be distinguished from the T4 antigen in terms of size and immunoprecipitation properties.
20 Käyttämällä menetelmää, jolla aivojen leikkeistä havaitaan vasta-ainetta sitoneet reseptorit, esitettiin aivojen T4:n hermoanatornisen jakautuman muodostama hahmo, joka on tihein kuorikerroksen hermosyiden pääteverkossa ja joka on järjestynyt analogisesti kaikilla kolmella nisäkkäällä. 25 Myös radioaktiivisesti leimattu HIV-viruksen vaipan glyko-proteiinin sitoutuminen tuotti vastaavanlaisen hahmon peräkkäisissä leikkeissä, mikä viittaa siihen, että T4 oli HIV -reseptori.Using a method of detecting antibody-binding receptors in brain sections, a pattern formed by the neural anatomical distribution of brain T4 was presented, which is the densest in the end network of neural cells in the cortex and is arranged analogously in all three mammals. 25 Radiolabeled HIV envelope glycoprotein binding also produced a similar pattern in successive sections, suggesting that T4 was the HIV receptor.
Esimerkki 3 30 Kemiallinen hermoanatornia, tietokoneavusteinen ti- heysmittausExample 3 30 Chemical nerve annihilation, computer-assisted density measurement
Tuoreena jäädytettyjen ihmisen, apinan ja rotan aivojen 25 mikronin kryostaattileikkeet kiinnitettiin sulattamalla ja kuivattiin geelipäällysteisille objektila-35 seille ja reseptorit saatettiin havaittaviksi julkaisussa * 16 9 45b 225 micron cryostat sections of fresh frozen human, monkey, and rat brains were thawed and dried on gel-coated slides, and the receptors were detected in * 16 9 45b 2
Herkenham ja Pert, J. Neurosci., 2, sivut 1129 - 1149 (1982). Inkuboinnit T4:a, T4A:a, T8:a ja Tiira kohtaan suunnattujen vasta-aineiden kanssa (10 pg/ml) ja ilman näitä suoritettiin yön yli 0 °C:ssa RPMI:ssa, ristiinsidot-5 tiin antigeeneihinsa ja saatettiin havaittaviksi 125I-vuohen hiirtä vastaan suunnatulla vasta-aineella. 125I-gp 120:11a tapahtuvaa antigeenin/reseptorin leimaamista varten suoritetut objektilasille kiinnitettyjen kudosleikkeiden inkuboinnit suoritettiin 5 ml:n objektilasisäiliöissä käyttäen 10 (10"6 leimaamatonta gp 120:a tai 0KT4A (10 pg/ml) monoklo- naalista vasta-ainetta tai jättäen nämä pois, kuten yllä on kuvattu kalvojen käytön yhteydessä.Herkenham and Pert, J. Neurosci., 2, pp. 1129-1149 (1982). Incubations with and without antibodies to T4, T4A, T8, and Tiira (10 pg / ml) were performed overnight at 0 ° C in RPMI, cross-linked to their antigens, and detected in 125 I with an antibody directed against a goat mouse. Incubations of slide-attached tissue sections for antigen / receptor labeling with 125 I-gp 120 were performed in 5 ml slide wells using 10 (10 "6 unlabeled gp120 or 0KT4A (10 pg / ml) monoclonal antibody or leaving these out, as described above in connection with the use of films.
Suoritettiin tietokoneavusteinen autoradiografia-filmin muunnos kvantitatiivisiksi värikuviksi. Apinan ai-15 vojen leikkeiden kanssa rinnan suoritettu valotus tunnetun radioaktiivisuuslisäyksen sisältäviä standardeja käyttämällä antoi tulokseksi lineaarisen kuvaajan (4 = > 0,99) log 0D:n ja cpm:n suhteen, josta radioaktiivisuuden suhteellinen pitoisuus voidaan mielekkäästi ekstrapoloida. 20 Aivoleikkeiden solujen värjäys tioniinilla suoritettiin klassisilla menetelmillä ja reseptorit saatettiin havaittaviksi värjätyssä kudoksessa.A computer-aided conversion of autoradiography film to quantitative color images was performed. Exposure in parallel with monkey ai-15 sections using standards with known radioactivity enhancement resulted in a linear plot (4 => 0.99) of log 0D and cpm from which the relative concentration of radioactivity can be meaningfully extrapolated. Staining of brain sections with thionine was performed by classical methods and receptors were detected in the stained tissue.
Esimerkki 4Example 4
On suoritettu kokeita T4-antigeenin jakautuman mää-25 rittämiseksi pääkalloapinan aivojen etuosasta takaosaan ulottuvassa sarjassa tai pitkin vaakatasoa tehdyissä leikkeissä. Nämä kokeet osoittavat, että T4 monoklonaalisen vasta-aineen sitoutumista aivorungon (esim. substantia nigraan) soluarkkitehtuuriin nähden mielekkäille alueille 30 tapahtuu havaittavan suurissa määrissä, mutta silmiinpistävä kuorikerrokseen rikastuva esiintymishahmo näkyy her-mostoakselin jokaisella tasolla. 0KT8, T-lymfosyyttiä kohtaan suunnattu monoklonaalinen vasta-aine samasta alaryhmästä kuin OKT4, ei muodosta minkäänlaista tunnistettavaa 35 hahmoa. Aivojen kuorikerroksen kaikkein ylimmät pintaker- * 94552 17 rokset sisältävät yleensä T4-antigeenin tiheimmän pitoisuuden; isojen aivojen kuorikerroksen otsalohko ja limbis-tä järjestelmää ympäröivä kuorikerroksen osa mantelitumak-keen yläpuolella sisältävät erityisen paljon reseptoreita, 5 jotka paikallistuvat kaikkialle sisäisiin kerroksiin. Reseptorien tihein pitoisuus kohdistuu aivotursoalueelle apinan, rotan ja ihmisen aivoissa. Filminkehitysliuokseen kastettujen pääkalloapinan leikkeiden pimeäkenttämikrosko-pointi paljasti, että reseptorien tiheimmän leimautumisen 10 vyöhyke sijaitsee hammaspoimun molekulaarisessa kerroksessa ja itse aivotursossa (joka sisältää hyvin vähän neuroneja). Reseptorit siis näyttävät sijoittuvan juuri sopivasti kattamaan hermosyiden pääteverkkoaluetta (hermopäätteiden ja viejähaarakkeiden hermojatkoksia) tai sijoittu-15 vat johonkin erityiseen värjäytymättömään tähtitukikudok-sen solujen alaryhmään.Experiments have been performed to determine the distribution of T4 antigen in a series extending from the anterior to posterior part of the skull monkey's brain or in horizontal sections. These experiments show that binding of the T4 monoclonal antibody to areas relevant to the cellular structure of the brainstem (e.g., substantia nigra) occurs at detectably high levels, but a striking cortex-enriching presence is seen at each level of the germ axis. 0KT8, a monoclonal antibody directed against T lymphocytes from the same subgroup as OKT4, does not form any identifiable 35 characters. The uppermost surface layers of the cerebral cortex generally contain the densest concentration of T4 antigen; the frontal lobe of the cerebral cortex and the part of the cortex surrounding the limbic system above the tonsil nucleus contain a particularly large number of receptors located 5 throughout the inner layers. The densest concentration of receptors targets the area of edema in the monkey, rat, and human brains. Dark field microscopy of skull monkey sections dipped in film development solution revealed that the zone of densest labeling of receptors is located in the molecular layer of the tooth fold and in the cortex itself (which contains very few neurons). Thus, the receptors appear to be precisely located to cover the terminal network of neural pathways (nerve extensions of nerve terminals and export branches) or to be located in a specific subtype of stained cells in the star support tissue.
On tehty määrityksiä, joista ilmenee näyttöä kemiallisen hermoanatomian spesifisyydelle ja joista saadut tulokset osoittavat, että T4 ja viruksen vaipan proteiinin 20 tunnistava molekyyli eivät poikkea toisistaan. Rotan aivojen vaakatason suuntaisissa leikkeissä paljastui hahmoltaan hyvin samanlainen isojen aivojen kuorikerrokseen/ai-votursoon keskittyvä reseptorijakautuma riippumatta siitä, käytettiinkö havaittavaksi saattamiseen 0KT4 tai 125I-gp 25 120. Lisäksi tällaista hahmoa ei havaittu, kun inkubointi ‘ 1 tapahtui leimaamattoman gp 120:n (1 μΜ), 0KT4A:n (10 μg/ ml) tai 0KT4:n (10 pg/ml). Mitään tunnistettavaa hahmoa ei saatu rotan aivoista muilla toisia ihmisen T-solujen antigeenejä kohtaan suunnatuilla hiiren monoklonaalisilla vas-30 ta-aineilla, 0KT8 ja 0KT11 mukaanlukien, kun havaittavaksi saattaminen suoritettiin 125I-vuohen anti-hiiri IgG sekundaarisella vasta-aineella, samoin kuin pelkkää sekundaarista vasta-ainetta käyttämällä ei löytynyt toistettavasti havaittavaa antigeeniä/reseptoria.Assays have been performed that provide evidence for the specificity of the chemical nerve anatomy and the results show that the molecule recognizing T4 and the viral envelope protein 20 do not differ. Horizontal sections of rat brain revealed a very similar pattern of receptor distribution in the cerebral cortex / cerebral cortex of the brain, regardless of whether 0KT4 or 125I-gp 25120 was used for detection. μKT), 0KT4A (10 μg / ml) or 0KT4 (10 pg / ml). No identifiable figure was obtained from rat brain with other murine monoclonal antibodies directed against other human T cell antigens, including 0KT8 and 0KT11, when detected with 125 I-goat anti-mouse IgG secondary antibody, as well as secondary antibody alone. no reproducibly detectable antigen / receptor was found using the antibody.
3535
Claims (11)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI943795A FI99115C (en) | 1986-06-03 | 1994-08-18 | Peptides reactive with antibodies to antigen binding to T-4 receptors and their diagnostic use |
Applications Claiming Priority (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US86991986A | 1986-06-03 | 1986-06-03 | |
| US86991986 | 1986-06-03 | ||
| US87858686A | 1986-06-26 | 1986-06-26 | |
| US87858686 | 1986-06-26 | ||
| US4814887A | 1987-05-11 | 1987-05-11 | |
| US4814887 | 1987-05-11 | ||
| PCT/US1987/001270 WO1987007613A1 (en) | 1986-06-03 | 1987-05-27 | Small peptides which inhibit binding to t-4 receptors and act as immunogens |
| US8701270 | 1987-05-27 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI885630A0 FI885630A0 (en) | 1988-12-02 |
| FI885630A FI885630A (en) | 1988-12-02 |
| FI94352B true FI94352B (en) | 1995-05-15 |
| FI94352C FI94352C (en) | 1995-08-25 |
Family
ID=27367286
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI885630A FI94352C (en) | 1986-06-03 | 1988-12-02 | A method for preparing peptides that inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2680011B2 (en) |
| KR (1) | KR930008448B1 (en) |
| AU (1) | AU604719B2 (en) |
| CA (1) | CA1341066C (en) |
| DE (1) | DE3787927T2 (en) |
| DK (1) | DK173667B1 (en) |
| ES (1) | ES2061497T3 (en) |
| FI (1) | FI94352C (en) |
| HU (1) | HUT48907A (en) |
| IE (1) | IE61725B1 (en) |
| IL (1) | IL82719A (en) |
| MX (1) | MX172337B (en) |
| NO (1) | NO176022C (en) |
| NZ (1) | NZ220485A (en) |
| PT (1) | PT84992B (en) |
| WO (1) | WO1987007613A1 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7700115B2 (en) * | 2005-06-23 | 2010-04-20 | Rapid Pharmaceuticals Ag | Therapeutic peptides and vaccines |
| CN101088557A (en) | 2006-06-12 | 2007-12-19 | 天津市扶素生物技术有限公司 | Medicine composition for preventing and treating HIV infection and its application |
-
1987
- 1987-05-27 HU HU873289A patent/HUT48907A/en unknown
- 1987-05-27 CA CA000538202A patent/CA1341066C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-05-27 AU AU75408/87A patent/AU604719B2/en not_active Ceased
- 1987-05-27 JP JP62503520A patent/JP2680011B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-05-27 KR KR1019880700115A patent/KR930008448B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-05-27 WO PCT/US1987/001270 patent/WO1987007613A1/en active IP Right Grant
- 1987-05-28 IE IE138887A patent/IE61725B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-05-28 NZ NZ220485A patent/NZ220485A/en unknown
- 1987-05-29 IL IL82719A patent/IL82719A/en not_active IP Right Cessation
- 1987-06-02 PT PT84992A patent/PT84992B/en unknown
- 1987-06-03 MX MX006751A patent/MX172337B/en unknown
- 1987-06-03 DE DE87304939T patent/DE3787927T2/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-06-03 ES ES87304939T patent/ES2061497T3/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-02-02 DK DK198800532A patent/DK173667B1/en active IP Right Grant
- 1988-02-03 NO NO880479A patent/NO176022C/en unknown
- 1988-12-02 FI FI885630A patent/FI94352C/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU7540887A (en) | 1988-01-11 |
| KR930008448B1 (en) | 1993-09-04 |
| KR880701247A (en) | 1988-07-26 |
| JPH01502659A (en) | 1989-09-14 |
| AU604719B2 (en) | 1991-01-03 |
| FI885630A0 (en) | 1988-12-02 |
| NO880479D0 (en) | 1988-02-03 |
| WO1987007613A1 (en) | 1987-12-17 |
| IE61725B1 (en) | 1994-11-30 |
| DK53288A (en) | 1988-02-02 |
| HUT48907A (en) | 1989-07-28 |
| NO176022B (en) | 1994-10-10 |
| NZ220485A (en) | 1989-08-29 |
| NO176022C (en) | 1995-01-18 |
| DK173667B1 (en) | 2001-05-28 |
| MX172337B (en) | 1993-12-14 |
| PT84992A (en) | 1987-07-01 |
| CA1341066C (en) | 2000-08-01 |
| ES2061497T3 (en) | 1994-12-16 |
| NO880479L (en) | 1988-02-03 |
| JP2680011B2 (en) | 1997-11-19 |
| PT84992B (en) | 1990-03-08 |
| IE871388L (en) | 1987-12-03 |
| DE3787927T2 (en) | 1994-03-03 |
| IL82719A (en) | 1992-11-15 |
| DE3787927D1 (en) | 1993-12-02 |
| DK53288D0 (en) | 1988-02-02 |
| FI885630A (en) | 1988-12-02 |
| FI94352C (en) | 1995-08-25 |
| IL82719A0 (en) | 1987-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hussey et al. | A soluble CD4 protein selectively inhibits HIV replication and syncytium formation | |
| US5276016A (en) | Small peptides which inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens | |
| US5603933A (en) | CD4 peptides for binding to viral envelope proteins | |
| WO1989003222A1 (en) | Soluble human cd4 fragments and uses therefor | |
| EP0249390A2 (en) | Synthetic peptides related to the HIV glycoprotein gp 120 | |
| HU214439B (en) | Method for the production of monoclonal antibodies and peptids useful in treating hiv infections and for the production of pharmaceutical compositions and vaccines | |
| AU626865B2 (en) | Peptides that block the binding of hiv-1 to the cd4 receptor protein | |
| CS68091A2 (en) | Synthetic polypeptides | |
| US7374875B2 (en) | Peptides having affinity for the gp120 viral protein and use thereof | |
| EP0249394B1 (en) | Small peptides which inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens | |
| US5346989A (en) | Peptides for use in induction of T cell activation against HIV-1 | |
| FI94352B (en) | A method for preparing peptides that inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens | |
| AU2787489A (en) | Anti-retroviral agent | |
| AU1906592A (en) | Peptides for use in induction of t cell activation against hiv-1 | |
| AP96A (en) | Small peptides which inhibit binding to T-4 receptors and act as immunogens. | |
| FI99115B (en) | Peptides which react with antibodies directed against an antigen which is bound at T4 receptors, and the diagnostic use thereof | |
| NO880446L (en) | SMALL PEPTIDES INHIBITING BINDING TO T-4 RECEPTORS. | |
| JP3725899B2 (en) | Multi-branched peptide constructs for use against HIV | |
| JP3725899B6 (en) | Multi-branched peptide constructs for use against HIV | |
| EP0925309A1 (en) | Use of proteins as anti-retroviral agents | |
| WO1991013911A1 (en) | Peptide inhibitor of human immunodeficiency virus infection blocks virus interactions with a novel cellular receptor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: THE UNITED STATES OF AMERICA, AS |
|
| MA | Patent expired |