CS68091A2 - Synthetic polypeptides - Google Patents

Synthetic polypeptides Download PDF

Info

Publication number
CS68091A2
CS68091A2 CS91680A CS68091A CS68091A2 CS 68091 A2 CS68091 A2 CS 68091A2 CS 91680 A CS91680 A CS 91680A CS 68091 A CS68091 A CS 68091A CS 68091 A2 CS68091 A2 CS 68091A2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
polypeptide
gly
leu
gln
ala
Prior art date
Application number
CS91680A
Other languages
Czech (cs)
Inventor
Robert V Fishleigh
Barry Robson
Original Assignee
Proteus Molecular Design
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Proteus Molecular Design filed Critical Proteus Molecular Design
Publication of CS68091A2 publication Critical patent/CS68091A2/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1063Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011Details
    • C12N2740/10011Retroviridae
    • C12N2740/16011Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16122New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Syntetické polypeptidySynthetic polypeptides

Oblast technikyTechnical field

Vynález se týká syntetických polypeptidů, zejménatakových syntetických polypeptidů, které mají trojrozměr-»nou strukturu a/nebo elektrostatický povrch a/nebo jinéfyzikální, chemické a strukturní vlastnosti specifickýchobalových virových bílkovin. Zvláštní důraz je kladen namožnost výroby vakcín, imunologicky účinných léčebných lá-tek, diagnostických a dalších léčebných nebo vědeckýchprostředku v souvislosti s virem lidské imunodeficience(HIV), o němž je známo, že vyvolává syndrom získané defi-cience imunologického systému (AIDS).The present invention relates to synthetic polypeptides, especially synthetic polypeptides, having a three-dimensional structure and / or an electrostatic surface and / or other physical, chemical and structural properties of specific packaging viral proteins. Particular emphasis is being placed on the production of vaccines, immunologically effective therapeutics, diagnostic and other therapeutic or scientific tools for human immunodeficiency virus (HIV) known to induce acquired immune system deficiency syndrome (AIDS).

Dosavadní stav techniky V posledním desetiletí se projevuje AIDS jako závaž-ný lékařský problém na celém světě a je tedy naléhavě nut-né nalézt další látky pro studium, diagnosu, léčbu a/neboprevenci infekce HIV, který je příčinou tohoto onemocnění. V poslední době jsou k dispozici řetězce aminokyselin, kte-ré tvoří bílkoviny virů HIV I a HIVII, tak jak bylo popsá-no například v publikaci Ratner L. a další, Nátuře 313, 277(1985), Neusing M. A. a další, Nátuře 313, 450 (1965),Wain-Hobson S. a další, Cell 40, 9 (19S5). Je tedy možnovyrobit syntetické polypeptidy s antigenními vlastnostmiobalových bílkovin.BACKGROUND OF THE INVENTION In the last decade, AIDS has emerged as a serious medical problem worldwide, and there is an urgent need to find other substances for the study, diagnosis, treatment and / or prevention of HIV infection that causes this disease. More recently, the amino acid chains of HIV I and HIVII proteins are available, as described, for example, in Ratner, L. et al., Nature 313, 277 (1985), Neusing MA et al., Nature 313. , 450 (1965), Wain-Hobson S. et al., Cell 40, 9 (19S5). Thus, it is possible to produce synthetic polypeptides with antigenic properties of the mucosal proteins.

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Postatou vynálezu je vývoj syntetických polypeptidů,které mohou vyvolat tvorbu protilátek proti viru HIV, svýhodou tvorbu neutralizujících protilátek, to znamená pro-tilátek, které mohou zabránit vzniku infekce a/nebo omezitdalší nákazu virem HIV pasivní nebo aktivní imunizací. Pa-sivní imunizace těmito protilátkami může představovat vhodný 2 prostředek pro léčbu nemocných IIDS, takže bude možno za- bránit další nákaze a tím zpomalit šíření této choroby.It is an object of the invention to develop synthetic polypeptides that can induce the production of antibodies to HIV, preferably the generation of neutralizing antibodies, i.e. antibodies that can prevent infection and / or reduce further HIV infection by passive or active immunization. The passive immunization with these antibodies may be a useful means of treating IIDS patients, so that further infection can be prevented, thereby slowing the spread of the disease.

Podstatou vynálezu je tedy syntetický polypeptids alespoň jednou antigenní vlastností obalové bílkovinyalespoň jednoho kmene viru lidské imunodeficience (HIV),přičemž tento polypeptid je tvořen řetězcem aminokyselinobecného vzorce I X-R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-Trp-Gly-Accordingly, the present invention provides a synthetic polypeptide having at least one antigenic property of the coating protein of at least one human immunodeficiency virus (HIV) strain, wherein said polypeptide is an amino acid chain of formula I X-R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-Trp-Gly-

Cys-R8-K9-R10-R11-E12-Cys-Y (I) kde znamená Asp nebo Glu, R2 znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Cys-R8-K9-R10-R11-E12-Cys-Y (I) wherein Asp or Glu, R2 is an amino acid residue of the group Gly, Ala,

Pro, Ser, Thr, Asn nebo Gin,Pro, Ser, Thr, Asn, or Gin,

Rj znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,R 1 is an amino acid residue of the group Gly, Ala,

Pro, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn,Lys, His, Gin nebo Arg, R^, R„ a R^ znamenají nezávisle na sobě jakýkoliv zbytekaminokyseliny,Pro, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn, Lys, His, Gln, or Arg, R 1, R 2, and R 4 are independently any amino acid residue,

Rg a Rg znamenají nezávisle na sobě zbytek aminokyselinyze skupiny Gly, Ala, Pro, Ser, Thr nebo Asn, #7 znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Rg and Rg are each independently an amino acid residue of the group Gly, Ala, Pro, Ser, Thr or Asn, # 7 is an amino acid residue of the group Gly, Ala,

Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asn, Gin, Fne, Tyr, Trp,Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asn, Gin, Fne, Tyr, Trp,

Cys, Líet nebo Pro,Cys, Líet or Pro,

Rg a R^p znamenají nezávisle na sobě zbytek aminokyselinyse skupiny Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe,Tyr nebo Trp, R10 znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Lys, Hisnebo Arg a X a Y mohou nezávisle na sobě chybět nebo mohou znamenat 1 nebo větší počet, například tři další zbytky ami- nokyselin. - 3 -R8 and R7p independently represent an amino acid residue of the group Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe, Tyr or Trp, R10 is an amino acid residue of the group Lys, His or Arg and X and Y may be independently of one another or may be 1 or more, for example three additional amino acid residues. - 3 -

Feptidy obecného vzorce I, a to bez obsahu X a Ybude možno využít například pro výrobu protilátek protiHIV. Jsou-li symboly X nebo Y přítomny, může být jejichdélka jakákoliv, s výhodou však méně než 20, ještě výhod-něji méně než 10, například 3 až 6 zbytků aminokyselin.X-free and Y-free peptides of formula I can be used, for example, to produce anti-HIV antibodies. If X or Y are present, their length may be any, but preferably less than 20, more preferably less than 10, for example 3-6 amino acid residues.

Je zřejmé, že řetězec obecného vzorce I může tvořit bílko-vinu, ve které budou tvořit řetězce X a Y převážnou částmolekuly a řetězce, který bude vyvolávat antigenní odpověď,bude například část exponované smyčky na globulární bílko-vině. S výhodou znamená R^ zbytek ze skupiny Gin nebo Thr,R^ zbytek ze skupiny Ser, Asn, Gin, Arg, nebo ala, zbytekze skupiny Leu, Ile, Gin nebo Arg, R^ zbytek Leu nebo Lys,It will be appreciated that the chain of formula (I) may form a protein in which the X and Y chains will be the predominant part of the molecule, and the chain that elicits the antigenic response will be, for example, the portion of the exposed loop on the globular protein. Preferably, R1 is a residue of the group Gln or Thr, R1 is a radical from the group Ser, Asn, Gln, Arg, or ala, a radical of Leu, Ile, Gln or Arg, R6 is Leu or Lys,

Rg zbytek Gly nebo Asn, R? zbytek ze skupiny Gly, Ala, Leu,Ile, Val, Met, Cys, Fne, Tyr, Trp nebo Ser, Ηθ zbytek Sernebo Ala, R^ zbytek Gly nebo Fhe, R^q Arg nebo Lys, R^ zby-tek ze skupiny Leu, His, Ile nebo Gin a R^2 zbytek ze sku-piny Ala, Ile nebo Val. Zbytek cysteinu v polohách 10 a 16je popřípadě vázán intramolekulárním disulfidovým můstkem.Rg rest Gly or Asn, R? a residue of the group Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fne, Tyr, Trp or Ser, Ηθ residue Ser or Ala, R R residue Gly or Fhe, R ^ ^ Arg or Lys, R ^ residue from Leu, His, Ile or Gln and R ^ 2 groups are the moiety of Ala, Ile or Val. The cysteine residue at positions 10 and 16 is optionally bound by an intramolecular disulfide bridge.

Výhodná forma polypeptidů podle vynálezu je tvořenařetězcem aminokyselin obecného vzorce II X-Asp-Gln-RyLeu-R^-Gly-R^-Trp-Gly- (II)A preferred form of the polypeptides of the invention is the amino acid chain of formula II X-Asp-Gln-RyLeu-R 1 -Gly-R 1 -Trp-Gly- (II)

Cys-Ser-Gly-Lys-R11-R12-Cys-Y kde R^, R^, ^2’ X a Y význam, uvedený v obecném vzorci I a R,? znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Cys-Ser-Gly-Lys-R 11 -R 12 -Cys-Y where R 4, R 6, R 2 ', X' and Y are as defined in Formula I and R 1, R 2 ', means an amino acid residue from the group Gly, Ala,

Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe, Tyr nebo Trp. S výhodou v řetězci obecného vzorce II R^ znamenáSer, Asn, Gin nebo Arg, R^ znamená Leu, His nebo Ile a Mí -4 - 4 - R.^2 znamená Ile nebo Ala. S výhodou znamená P-γ zbytek zeskupiny Ile, Fhe, Met, Val nebo Leu. Ještě výhodněji zna-mená R^ Ser nebo Asn a R^ znamená Lys. Výhodnou formou polypeptidu obecného vzorce II jeřetězec vzorce X-Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-Gly-Ile-Irp-Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe, Tyr or Trp. Preferably, in the chain of formula (II), R 1 is Ser, Asn, Gln or Arg, R 1 is Leu, His or Ile and M 1 - 4 - R 1 2 is Ile or Ala. Preferably, the P-γ residue is an Ile, Fhe, Met, Val or Leu moiety. More preferably, R 1 is Ser or Asn and R 1 is Lys. A preferred form of the polypeptide of Formula II is the chain of Formula X-Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-Gly-Ile-Irp-

Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y kde X a Y mají svrchu uvedený význam a zbytky cysteinu vpolohách 10 až 18 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly.Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y wherein X and Y are as defined above and cysteine residues at positions 10 to 18 may be linked by disulfide bridges within the molecule.

Další výhodnou formou polypeptidu obecného vzorce IIje řetězec, v němž R^ znamená Gin nebo Arg, R^ je Leu, Rznamená Ile, Fhe a Met, R^^ znamená Leu, His nebo Ile aznamená ála. Výhodný řetězec má vzorec X-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Jle-Trp-Another preferred form of the polypeptide of Formula II is the chain wherein R 1 is Gln or Arg, R 1 is Leu, R 1 is Ile, Fhe and Met, R 4 is Leu, His or Ile. The preferred chain has the formula X-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Jle-Trp-

Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y kde X a Y mají svrchu uvedený význam a cysteinové zbytkyv polohách 10 a 16 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly.Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y wherein X and Y are as defined above and cysteine residues at positions 10 and 16 may be linked by disulfide bridges within the molecule.

Folypeptidy obecného vzorce II napodobují některéepitopy obalové bílkoviny HIV I.Folypeptides of Formula II mimic some of the HIV coat protein epitopes.

Další výhodnou formou polypeptidu podle vynálezuje řetězec aminokyselin obecného vzorce III X-Rl-R2-R3-R4-R5-Asn-Ser-?rp-Gly-Cys~Ala- (III)Another preferred form of the polypeptide of the invention is the amino acid chain of Formula III X-R1-R2-R3-R4-R5-Asn-Ser-rp-Gly-Cys-Ala- (III)

Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y - 5 - kde R^ znamená Glu nebo Asp, R2 znamená Thr nebo Gin, znamená Ser, Asn, Arg, Gin nebo Ala, R^ znamená Leu, Tle, Arg nebo Gin, R^ znamená Lys nebo Leu a X a Y mají svrchu uvedený význam a cysteinové zbytky vpolohách 10 a 16 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly. Výhodnou formou polypeptidu obecného vzorce III jeřetězec aminokyselin obecného vzorce lila X-Glu-Thr-R^-R.-Lys-Arn-Ser-Trp-Gly- 3 4 (lila)Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y-5 - wherein R 1 is Glu or Asp, R 2 is Thr or Gln, is Ser, Asn, Arg, Gln or Ala, R 4 is Leu, Tle, Arg or Gln, R 1 is Lys or Leu and X and Y are as defined above, and cysteine residues at positions 10 and 16 can be linked by disulfide bridges within the molecule. The preferred form of the polypeptide of Formula III is the amino acid chain of Formula IIIa X-Glu-Thr-R 1 -R 1 -Lys-Arn-Ser-Trp-Gly 3 4 (IIIa)

Cys-Ala-Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y kdeCys-Ala-Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y where

Rj znamená zbytek Ser, Asn, Arg, Gin nebo Ala, R4 znamená Leu, Ile, Arg nebo Gin, X a Y mají svrchu uvedený význam a cysteinové zbytky v polohách 10 a 16 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly. S výhodou znamená R^ zbytek ser v případě, Se R^znamená Ile a znamená-li Rg zbytek Ala, pak R^ znamenáArg nebo Gin, s výhodou Arg.R 1 is Ser, Asn, Arg, Gln or Ala, R 4 is Leu, Ile, Arg or Gln, X and Y are as defined above, and cysteine residues 10 and 16 can be linked by disulfide bridges within the molecule. Preferably R @ 1 is a radical in the case where R @ 6 is Ile and when R @ g is an Ala, R @ 1 is Ar @ g or G @ n, preferably Arg.

Polypeptidy obecného vzorce III jsou příbuzné ně-kterým epitopům obalových bílkovin viru HIV II. Výhodné polypeptidové řetězce podle vynálezu byly voleny na bázi své topografické podobnosti s v-fce než jednou antigenní determinantou obalových b<lkovin viru HIV.The polypeptides of Formula III are related to some epitopes of HIV II envelope proteins. Preferred polypeptide chains of the invention have been selected based on their topographical similarity to that of the single antigenic determinant of the HIV envelope protein.

Například antigenní determinanta, s níž je původně kon- 6 strnován daný polypeptid jako analogický, může také býttopograficky podobná s jednou nebo větším počtem dalšíchoblastí obalové bílkoviny HIV, pravděpodobně následkemduplikace genu nebo z toho důvodu, že polypeptid je ana-logen diskontinuální determinanty nebo také proto, že po-lypeptidy byly konstruovány tak, aby byly polyvalentní.For example, an antigenic determinant with which a given polypeptide is initially conjugated may also beopographically similar to one or more other regions of the HIV envelope protein, possibly due to gene duplication, or because the polypeptide is anaerobic discontinuous determinants or also because that the polypeptides were designed to be polyvalent.

Liskontinuáln< epitop může být složen ze sekvenciálnfíchepitopů, které jsou si velmi blízké, avšak opačného smys-lu a mohou mít samy o sobě význam jako antigeny, polyvalentní polypeptid může obsahovat dva nebo větší počet konti-nuálních nebo diskontinuálních determinantních analogů vjediném polypeptidovém řetězci, takže je prostředkem kvyvolání tvorby celé řady protilátek, které budou rozpozná-vat dvě nebo větší počet determinant v obalové bílkoviněviru HIV.The discontinuous epitope may be composed of sequence epitopes that are very close to each other but may have the same meaning as antigens, the polyvalent polypeptide may comprise two or more continuous or discontinuous determinant analogs in a single polypeptide chain, so is a means of generating a variety of antibodies that will recognize two or more determinants in the HIV envelope protein.

Peptidy podle vynálezu mohou být vyrobeny napří-klad při použití standardního postupu pomocí S-fluorenylmethoxykarbonylové skupiny (F-Moc), například podle publi-kace Atherton E. a Sheppard R. C. (1985), J. Chem. Soc.Chem. Comm. 165 nebo postupem s použitím butyloxykarbonátu(T-Boc). Správnost struktury a čistota, která je obvyklenad 85 % se pečlivě kontroluje, zvláště je nutno dbát správnosti uspořádání vnitřních disulfidových můstků. K tomutoúčelu je možno ožít různé chromatografické analýzy včetněvysokotlaké kapalinové chromatografie a také spektrografic-ké analýzy včetně Ramanovy spektroskopie. Všechny řetězce jsou označovány kódem se třemipísmeny podle I.U.P.A.C. takto: Gly-glycín, Ala-alanin,Val-valin, Leu-leucin, Ile-isoleucin, Ser-serin, Thr--threonin, Asp-kyselina asparagová, Glu-kyselina glutamo-vá, Asn-asparagin, Gln-glutamin, Lys-lysin, His-histidin,Arg-arginin, Phe-fenylalanin, Tyr-tyrosin, Trp-tryptofan,Cys-cystein, Met-methionin a Pro-prolin.For example, the peptides of the invention can be prepared using standard S-fluorenylmethoxycarbonyl (F-Moc) procedures, for example, according to Atherton E. and Sheppard R. C. (1985), J. Chem. Soc.Chem. Comm. 165 or a process using butyloxycarbonate (T-Boc). The accuracy of the structure and the purity of the usual 85% are carefully controlled, especially the proper arrangement of the internal disulfide bridges. Various chromatographic analyzes including high pressure liquid chromatography as well as spectrographic analysis including Raman spectroscopy can be used for this purpose. All strings are labeled with a three letter code according to I.U.P.A.C. as follows: Gly-glycine, Ala-alanine, Val-valine, Leu-leucine, Ile-isoleucine, Ser-serine, Thr-threonine, Asp-aspartic acid, Glu-glutamic acid, Asn-asparagine, Gln-glutamine , Lys-lysine, His-histidine, Arg-arginine, Phe-phenylalanine, Tyr-tyrosine, Trp-tryptophan, Cys-cysteine, Met-methionine and Pro-proline.

Polypeptidy podle vynálezu nebo protilátky protitěmto polypeptidům je možno podávat jako takové nebo spolu - 7 - s dalšími látkami, jako jsou 3 '-azido-3 '-deoxyibyoiáiň.(AZT-zidovudin), které působí na různé úrovái tak, že dojdek interferenci při replikaci genetického materiálu virua/nebo k innibici proteázy HIV, která blokuje činnost en-zymu, který má podstatný význam pro vývoj viru.Polypeptides of the invention or antibodies to these polypeptides may be administered as such or together with other agents such as 3'-azido-3'-deoxyibyloxy (AZT-zidovudine), which act at different levels to interfere with replicating the viral genetic material (s) or the innibition of the HIV protease, which blocks the enzyme activity, which is essential for virus development.

Polypeptidy podle vynálezu je mošno užít k produk-ci protilátek, které budou reagovat s bílkovinami obaluviru, které jsou produkovány širokou škálou kmenů viruHIV I a/nebo HIV II. Analýzy prokázaly, že v případě, žetopografické, elektrostatické a/nebo strukturní vlastnostipolypeptidů podle vynálezu jsou takové, že je vysoce pravdě-podobné, že vyvolají tvorbu protilátek, které budou reagovatzkříženou reakcí s obalovými bílkovinami HIV několika nebomnoha kmenů, může být dosaženo dalšího pokroku tak, že seněkolik různých polypeptidů tohoto typu váže za vzniku vět-šího polypeptidů. Takový polypeptid je možno vyjádřit obec-ným vzorcem IV ΜΑΑλ íiv) kde F a G znamenají nezávisle na sobě polypeptidy obecnýchvzorců I až lila, L znamená vazný řetězec, a, b, c znamenají nezávisle na sobě O nebo 1 a man jsou kladná čísla, například 1 až 10 včetně. L znamená s výhodou krátký, flexibilní úsek poly-peptidového řetězce, například Gly-Gly-Gly-Gly-Gly,Gly-Pro-Gly-Fro-Gly-Pro nebo Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala.The polypeptides of the invention can be used to produce antibodies that will react with envelope proteins that are produced by a wide variety of viruHIV I and / or HIV II strains. Analyzes have shown that in the case of the cytopathic, electrostatic and / or structural properties of the polypeptides of the invention, it is such that it is highly likely to induce the production of antibodies that will react by cross-reacting with the HIV coat proteins of several or many strains. that several different polypeptides of this type bind to form a larger polypeptide. Such a polypeptide may be represented by the general formula (IV): wherein F and G are independently polypeptides of formulas I to IIIa, L is a chain of binding, a, b, c are independently 0 or 1, and m and n are positive numbers, for example, 1 to 10 inclusive. L is preferably a short, flexible segment of the polypeptide chain, for example, Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, Gly-Pro-Gly-Fro-Gly-Pro or Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala.

Je zřejmé, že v každém opakování je možno užít odlišnouvariantu polypeptidů podle vynálezu.It will be appreciated that a variety of polypeptides of the invention may be used in each repeat.

Folyvalentní analogy determinant obecného vzorce IVjsou vlastně pseudohomopolyvalentní vzhledem k tomu, že va-rianty v podstatě téhož analogu determinanty se opakují vjediném řetězci polypeptidu. Mimoto je možno očekávat, žetaké jednoduché imunogenní hoaopolyvalentní polypeptidy,které obsahují mnohočetné kopie téže varianty téhož analo-gu determinanty obecného vzorce I až lila budou účinné vesvrchu uvedeném smyslu.The folyvalent analogs of the determinant of formula IV are actually pseudo-homopolyvalent since the largely identical analog determinants are repeated in a single polypeptide chain. In addition, some simple immunogenic holopolyvalent polypeptides that contain multiple copies of the same variant of the same analogue determinant of Formula I through IIIa are expected to be effective in the above sense.

Pseudohomopolyvalentní imunogenní polypeptidy bu-dou pravděpodobně zvláště cenné jako vakcíny vzhledem ktomu, Že by měly vyvolávat produkci celé řady neutralizu-jících protilátek s podobnou, avšak nikoliv stejnou spe-cifičností, které by zkříženě reagovaly s obalovou bílko-vinou širší škály kmenů HIV a jejich účinnost by tedjr bylazvýšena a za"jištovala ochrannou imunitu. Bude patrně takévýhodné konstruovat heteropolyvalentr.í polypeptidy s obsa-hem jedné nebo většího počtu kopií polypeptidu podle vyná-lezu v jakémkoliv pořadí a mimoto budou obsahovat jeden ne-bo větší počet dalších polypeptidu jako analogů determinant.Tyto polypeptidy je možno vyjádřit obecným vzorcem VPseudohomopolyvalent immunogenic polypeptides are likely to be particularly valuable as vaccines since they should induce the production of a variety of neutralizing antibodies with similar but not the same specificity that would cross-react with the envelope protein of a wider range of HIV strains and their It would also be advantageous to construct heteropolyvalent polypeptides containing one or more copies of the polypeptide of the invention in any order, and in addition to one or more additional polypeptides as analogs. These polypeptides can be represented by the general formula (V)

La-[ (v) kde F znamená polypeptió, kteréhokoliv ze vzorců I až rlj a, G znamená polypeptid obecného vzorce I až lila nebo ještě jiný řetězec, man jsou kladná čísla, například 1 až 10 včetně ad, e znamenají nezávisle na sobě 0 nebo 1. S výhodou znamená L krátký flexibilní úsek poly- peptidového řetězce, například Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, - 9 -La- [(v) wherein F is a polypeptide of any of formulas I to r1j and G is a polypeptide of formula I to IIIa or yet another chain, m and n are positive numbers, e.g. or 1. Preferably, L is a short flexible poly-peptide chain, for example, Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, -9-

Giy-Pro-Gly-Pro-GIy-Pro nebo Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala.Ve výhodné formě peptidu obecného vzorce V znamená G poly-peptidový řetězec obecného vzorce I až lila nebo následu-jící řetězec:Gly-Pro-Gly-Pro-Gly-Pro or Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala. In a preferred form of the peptide of Formula V, G is a peptide peptide of Formula I to IIIa or the following chain:

X-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Gly-Gly-Glu-Leu-Y kde každý ze zbytků Gly může být nahrazen jakoukoliv jinouaminokyselinou a/nebo X a Y mohou nezávisle na sobě chybětnebo mohou znamenat jeden nebo větší počet, například třizbytky aminokyselin nebo může G znamenat ještě jiný poly-peptidcvý řetězec, příbuzný antigenním bílkovinám HIV.X-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Gly-Gly-Glu-Leu-Y wherein each of the Gly residues can be replaced by any other amino acid and / or X and Y may be absent or may be one or more, e.g. or three may be another poly-peptide chain related to HIV antigenic proteins.

Je zřejmé, že podle vynálezu je možno do peptiduzařadit jakékoliv antigenně významné subfragmenty a/nebovarianty svrchu uvedených polypeptidových řetězců, kterési v podstatě udrží strukturu a funkci původního polypeptidu. Zejména je možné nahradit kterýkoliv zbytek zbytkem sesrovnatelnými strukturními a/nebo fyzikálními vlastnostmivčetně substituce vzácnými, avšak přirozeně se vyskytují-cími zbytky, jako D-stereoisomery nebo je možno zařaditsyntetické analogy aminokyselin. Je například možné pro-vést substituci zbytku za jiný zbytek v sestavách, kterébudou dále definovány a které rovněž rvoří podstatu vyná-lezu: sestava 1 - Ala, Val, Leu, Ile, Fhe, Tyr, Trp a Met,sestava 2 - Ser, Thr, Asn, a Gin, sestava 3 - Asp a Glu,sestava 4 - Lys, His a Arg, sestava 5 - Asn a Asp, sesta-va 6 - Glu a Gin, sestava 7 - Gly, Ala, Pro, Ser a Thr.D-stereoisomery všech typů aminokyselin je možno nahraditnapříklad zbytky D-Fne, D-Tyr a D-Trp.It will be appreciated that any antigenically relevant subfragments and / or variants of the above-mentioned polypeptide chains that substantially retain the structure and function of the original polypeptide may be included in the peptide of the invention. In particular, it is possible to replace any residue with residue-comparable structural and / or physical properties, including substitution with rare but naturally occurring residues, such as D-stereoisomers or possibly synthetic amino acid analogues. For example, it is possible to carry out the substitution of a residue for another residue in the kits, which will be further defined and which also form the basis of the invention: Assembly 1 - Ala, Val, Leu, Ile, Fhe, Tyr, Trp and Met, Assembly 2 - Ser, Thr, Asn, and Gin, Set 3 - Asp and Glu, Set 4 - Lys, His and Arg, Set 5 - Asn and Asp, Set 6 - Glu and Gin, Set 7 - Gly, Ala, Pro, Ser and Thr.D-stereoisomers of all amino acid types can be replaced, for example, by D-Fne, D-Tyr and D-Trp residues.

Ve výhodném provedení vynálezu mohou X a Y nezá-visle na sobě obsahovat jeden nebo větší počet segmentůřetězce bílkoviny se schopností účinnosti epitopu proT-buňky. Například segmenty řetězce aminokyselin obecnéhovzorce 1-2-3-4, kde 1 znamená Gly nebo aminokyselinu, 10 - která nese náboj, například Lys, His, Arg, Asp nebo Gly, 2 znamená hydrofobní aminokyselinu, jako Ile, Leu, Val,In a preferred embodiment of the invention, X and Y may independently contain one or more protein chain strand segments capable of pro-cell epitope efficiency. For example, the amino acid chain segments of general formula 1-2-3-4, where 1 is Gly or an amino acid, 10 - which carries a charge, for example Lys, His, Arg, Asp or Gly, 2 is a hydrophobic amino acid such as Ile, Leu, Val,

Met, Tyr, Fhe, Trp nebo Ala, 3 znamená hydrofobní aminoky-selinu ve svrchu uvedeném významu nebo polární aminokyse-linu bez náboje, jako Asn, Ser, Thr, Pro, Gin, nebo Gly a4 znamená polární aminokyselinu, jako Lys, Arg, His, Glu,Asp, Asn, Gin, Ser, Thr nebo Pro se chovají alespoň v ně-kterých případech jako epitopy pro T-buňky, jak bylo po-psáno v Rothbard J. B. a Taylor W. R. (1988), A sequencepattern in common to T-cell epitopes, v EMBO Journal 7 (1),93 - 100. Fodobné segmenty je možno vyjádřit řetězcem1 -2 -3 "4 -5 , kde 1 má obdobný význam jako 1 svrchu, 2* má význam jako 2, 3* a 4' mají význam jako 3 a 5' mávýznam jako 4. Obě formy těchto segmentů jsou zahrnuty dooboru vynálezu a mohou obsahovat jeden nebo větší početepitopň pro T-buňky (s výhodou méně než 5), které mohoubýt svrchu uvedeného typu nebo mohou mít odlišnou struk-turu a mohou být od sebe odděleny dělicími segmenty jaké-koliv délky a jakékoliv struktury, s výhodou obsahují ty-to dělicí,segmenty méně než pět zbytků aminokyselin, na-příklad zbytky Gly, Ala, Pro, Asn, Thr nebo Ser, nebo můžejít o polyfunkční vazné řetězce, jako aminokyseliny s vý-jimkou a-aminokyselin. C— nebo R-terminální vazný řetězecmůže představovat úplnou bílkovinu, takže odpadá nutnostkonjugace s nosnou bílkovinou.Met, Tyr, Fhe, Trp, or Ala, 3 is a hydrophobic amino acid as defined above or a polar, uncharged amino acid such as Asn, Ser, Thr, Pro, Gln, or Gly a4 is a polar amino acid such as Lys, Arg , His, Glu, Asp, Asn, Gln, Ser, Thr or Pro behave in at least some cases as T-cell epitopes as described in Rothbard JB and Taylor WR (1988), A sequencepattern in common T-cell epitopes, in EMBO Journal 7 (1), 93-100. Similar segments can be expressed by a chain of -1 -2 -3 "-4-5, where 1 has the same meaning as 1 above, 2 * has the meaning of 2, 3 * and 4 'are as 3 and 5' as 4. Both forms of these segments are encompassed by the invention and may include one or more T cell epitopes (preferably less than 5) that may be of the above type or may have different structure and can be separated by dividing segments of any length and any structure, with These include those subdivision segments of less than five amino acid residues, such as Gly, Ala, Pro, Asn, Thr or Ser residues, or polyfunctional binding chains, such as amino acids except α-amino acids. The C- or R-terminal backbone may represent a complete protein, so the need for conjugation with the carrier protein is eliminated.

Vynález zahrnuje také deriváty polypeptidů obecné-ho vzorce I, v němž X nebo Y jsou nebo znamenají "retro--inverso" aminokyselinu, to znamená bifunkční amin s funkč·ní skupinou, která odpovídá aminokyselině. Například můžebýt vyjádřen analog podle vynálezu s obsahem retro-inversoaminokyseliny obecným vzorcemThe invention also encompasses derivatives of the polypeptides of formula I wherein X or Y is or is a "retro-inverso" amino acid, i.e., a bifunctional amine having a functional group that corresponds to an amino acid. For example, an analog of the invention containing a retro-inverso amino acid may be represented by the general formula

I i - 11 - r A1-N-C-N-A2 í i iI-11-r Al-N-C-N-A2-i

Η Η H kde R znamená jakoukoliv funkční skupinu, například glycino-vý postranní řetězec a AI a A2 znamenají kopie jednoho se svrchu uvedenýchanalogů (avšak nikoliv nezbytně téhož analogu),které jsou připojeny na K- nebo C-terminální za-končení .Η Η H where R is any functional group, for example, the glycine side chain and A1 and A2 are copies of one of the above-mentioned analogues (but not necessarily the same analogue) that are attached to the K- or C-terminal end.

Popřípadě může struktura obsahovat epitopy pro T--buiňky, jak již bylo uvedeno svrchu.Optionally, the structure may comprise T-cell epitopes as discussed above.

Retro-inverso modifikace peptidů zahrnuje změnujedné nebo většího počtu peptidových vazeb za vzniku analo-gů, které jsou vzhledem k enzymatické degradaci odolnějšínež původní molekula a jsou vhodnou eestou pro vznik roz-větvených imunogenů s obsahem vysoké koncentrace epitopů .The retro-inverso modification of the peptides involves altering one or more peptide bonds to form analogs that are more resistant to the original molecule due to enzymatic degradation and are suitable for generating branched immunogens containing high concentration of epitopes.

Je možno předpokládat možné využití těchto látek pro syn-tézu retro-inverso analogů s krátkým řetězcem a s vysokoubiologickou aktivitou ve velkém měřítku.The use of these compounds for the synthesis of short-chain retro-inverso analogues and large-scale, high-biological activity can be envisaged.

Je nutno uvést, že analogy s obsahem retro-inversoderivátů aminokyselin nelze vyrobit přímo s využitím re-kombinantní DNA. Avšak je možno vyrobit základní analogy,"které je pak možno čistit a chemicky vázat na retro-inver-so aminokyseliny metodami, obvyklými v chemii peptidů.It should be noted that analogs containing retro-inversoderivative amino acids cannot be produced directly using recombinant DNA. However, basic analogs can be made which can then be purified and chemically coupled to retro-in-amino acids by methods known in peptide chemistry.

Vhodným novým postupem pro syntézu na řevné fázi je postup s použitím pryskyřice polyamidového typu, který byl pro retro-inverso peptidy poprán v publikaci Gazerro H., Pinori M. a Verdini A. S. , (1590), A new generál proceduře for the soiid-phase synthesis of retro-inverso peptides, v Innovation 12 and Perspectives in Solid Phase Synthesis, Ed. Roger Epton, SPCC (GB), Ltd, Birmingham, Velká Británie.A suitable new procedure for the synthesis on the solid phase is a process using a polyamide type resin which has been denied for retro-inverso peptides by Gazerro H., Pinori M. and Verdini AS, (1590), A new general procedure for the soiid-phase synthesis of retro-inverso peptides, in Innovation 12 and Perspectives in Solid Phase Synthesis, Ed. Roger Epton, SPCC (GB), Ltd, Birmingham, UK.

Polypeptidy je možno vázat na nosná molekuly buopřes chemická skupiny, a to v rámci polypeptidů nebo přespřidaná aminokyseliny na C- nebo N-terminálním zakončení,tyto skupiny mohou být obklopeny jednou nebo větším počtemdalších aminokyselin nebo odděleně od polypeptidů tak, abybylo možno dosáhnout dobrá imunologické funkce. Sada vazebje vhodná pro tento účel, například je možno zařadit postran-ní řetězce zbytků Tyr, Cys a Lys. Vhodným nosičem je takéčištěný bílkovinný derivát tuberkulinu (PPD) toxoid tetanu,choleratoxin a jeho podjednotka B, ovalbumin, albumin zesera skotu, inhibitor trypsinu ze sojových bobů, muramyl-dipeptidy a jejich analogy a taká Braunův lipoprotein,přesto že je možno užít taká jiné nosiče, jak bude odborní-kům zřejmá, při použití PPD jako nosiče pro polypeptidypodle vynálezu je možno dosáhnout vyššího titru protilátekv případě, že příjemce konjugátu polypeptidů-PPD je jižcitlivý na rubErkulin, například protože byla dříve prove-dena vakcinace BCG. Pro vakcínu v lidském lékařství jenutno uvést, že ve Velké Britanii a dalších státech seběžně vakcinace BCG zdarma provádí a populace je protove své většině citlivá na PPD. Z tohoto důvodu se považujePPD v těchto státech za výhodný nosič.Polypeptides can be linked to a carrier molecule either by a chemical moiety, within a polypeptide, or through an added amino acid at the C- or N-terminal end, which may be flanked by one or more additional amino acids or separately from the polypeptides such that good immunological function can be achieved . A set of linkages is suitable for this purpose, for example, side chains of Tyr, Cys and Lys. A suitable carrier is also a purified tuberculin protein derivative (PPD) tetanus toxoid, choleratoxin and its subunit B, ovalbumin, bovine albumin, soybean trypsin inhibitor, muramyl dipeptides and their analogs, and such Braun lipoprotein, although such other carriers may be used As will be appreciated by those skilled in the art, when using PPD as a carrier for a polypeptide of the invention, a higher antibody titer can be obtained if the recipient of the PPD-polypeptide conjugate is already susceptible to rubricrine, for example, because BCG vaccination has previously been performed. For the human medicine vaccine, it should be noted that BCG is free of charge in the UK and other countries, and the population is mostly PPD-sensitive. For this reason, the PPD in these states is considered a preferred carrier.

Způsob vazby polypeptidů na nosič bude záviset napovaze materiálů, které jsou na sebe vázány. Napříkladzbytek lysinu v nosiči je možno vázat na C-terminální ne-bo jiný cysteinový zbytek v polypeptidů působením N-gamma--maleimidobutyryloxysukcinimidu podle publikace Kitagawa T. a Ackawa T. (1976), J. Biochem. 79 Ž33> Další vaznéreakce a vhodné reakční složky pro tyto reakce byly rov-něž popsány v literatuře.The method of binding the polypeptides to the carrier will depend upon the materials bound together. For example, the lysine residue in the carrier can be bound to the C-terminal or other cysteine residue in the polypeptide by treatment with N-gamma-maleimidobutyryloxy succinimide according to Kitagawa T. and Ackawa T. (1976), J. Biochem. Other ligand reactions and suitable reactants for these reactions have also been described in the literature.

Polypeptidy jako takové nebo vázané na molekulunosiče je možno podávat jakýmkoliv způsobem, jako paren- 13 - terálně do nosu, perorálně, rektálně nebo intravaginálně, popřípadě spolu s běžnými pomocnými látkami jako je hydro-^xid hlinitý jako Freundův úplný nebo neúplný pomocný pro-středek, a/nebo jiná látka, která může způsobit potenciaciimunologického účinku. Vynález rovněž zahrnuje prostředkys obsahem polypeptidů podle vynálezu, z nichž se tyto poly-peptidy uvolňují pomalu, může jít o podkožní implantát neboo depotní formu, jako jsou liposomy, popsané v publikaciAllison A. C. a Gregoriadis G., (1974) Nátuře (Londýn) 252,252 nebo jde o mikrokapsle, vyrobené z kopolymeru kyselinymléčné a kyseliny glykolové podle publikace Gresser J. D. aSanderson J. Ξ. (1984) v Eiopolymer Controlled ReleaseSystems, str. 127 - 138, vyd. D.L. Wise.Polypeptides as such or bound to molecular carriers can be administered by any means, such as parenterally, nasally, orally, rectally or intravaginally, optionally together with conventional excipients such as aluminum hydroxide such as Freund's complete or incomplete adjuvant , and / or other substance that may cause a potentiation effect. The invention also encompasses compositions comprising the polypeptides of the invention, from which the peptides are released slowly, may be a subcutaneous implant or a depot form such as liposomes as described in Allison AC and Gregoriadis G., (1974) Nature (London) 252,252 or these are microcapsules made from a copolymer of lactic acid and glycolic acid according to Gresser JD and Sanderson J. (1984) in Controlled Release Eystemers, pp. 127-138, ed. Wise.

Polypeptidy podle vynálezu je možno syntetizovatjakýmkoliv běžným způsobem, jako přímo při použití manuál-ní nebo automatizované syntézy peptidů nebo nepřímo přessyntézu RNA nebo DNA postupy, které jsou obvyklé v moleku-lární biologii a genetickém inženýrství. Tyto techniky jemožno užít také k výrobě hybridních bílkovin s obsahem jed-noho nebo většího počtu polypeptidů, zařazených do dalšíhopolypeptidového řetězce.The polypeptides of the invention can be synthesized by any conventional means, such as directly using manual or automated peptide synthesis, or indirectly by RNA synthesis or DNA synthesis procedures customary in molecular biology and genetic engineering. These techniques may also be used to produce hybrid proteins containing one or more polypeptides encompassed by another polypeptide chain.

Vynález tedy zahrnuje také molekulu DNA, která jekódem pro alespoň jeden syntetický polypeptid podle vyná-lezu, s výhodou je tato molekula zařazena do vhodného vek-toru pro expresi, schopného replikace v mikroorganismechnebo v buňkách ssavců. Tato DNA může také tvořit část ře-tězce DNA pro delší produkt, to znamená, že k expresi po-lypeptidů podle vynálezu dochází jako části jiných bílkovin,do nichž byly tyto polypeptidy vřazeny genetickým inženýr-stvím. Praktickým popisem těchto technik je publikaceMolecular cloning: a laboratory manual, Sambrook J., FritschΞ. F. a Maniatis T., 2. vydání, 1989.Accordingly, the invention also encompasses a DNA molecule which is a code for at least one synthetic polypeptide of the invention, preferably the molecule is inserted into a suitable expression vector capable of replication in microorganisms or mammalian cells. This DNA may also form part of the DNA strand for a longer product, i.e., the expression of the polypeptides of the invention occurs as part of other proteins into which the polypeptides have been incorporated by genetic engineering. A practical description of these techniques is the Molecular cloning: a laboratory manual, Sambrook J., Fritsch. F. and Maniatis T., 2nd Edition, 1989.

Polypeptidy podle vynálezu je možno použít jako ta-kové nebo vázané na vhodný nosič, jako: 14 - a) peptidové vakciny k zábraně infekce jednim nebo většímpočtem kmenů HIV, b) jako vazné látky například při diagnostice ser nemocných,pozitivních na HIV, c) ke kontrole kvality v testech, například při vazbě proti-látek proti těmto polypeptidům, d) jako antigenní látky pro tvorbu monoklonálních nebopolyklonálnícn protilátek při imunizaci živočichů,tyto protilátky je možno využít například k i) vědeckým studiím viru HIV, ii) jako diagnostický prostředek, například jako částhistocheraických reakčních činidel, iii) k pasivní imunizaci nemocných virem HIV, buS k léčběAIDS nebo v kombinaci s dalšími účinnými látkami, jako AZT a/nebo inhibitory proteázy HIV, a iv) jako prostředek k zacílení účinku jiných-látek, jakojsou ΑΖΪ nebo inhibitor proteázy viru HIV v buňkách,infikovaných virem HIV, u nichž dochází k expresiobalových bílkovin HIV na jejich povrchu, přičemžtyto látky jsou bučí kovalentně vázány nebo jinak spojeny, například ve formě iiposomů, které tyto látky obsahují, tyto prostředky mohou rovněž obsahovatprotilátky, vytvořené proti jakémukoliv polypeptidus antigenním účinkem. Vynález se rovněž týká foremnebo fragmentů, vzniklých genetickým inženýrstvím,zejména oblastí V^ protilátek proti těmto polypepti-dům a humanizovaných forem protilátek, vytvořenýchproti těmto polypeptidům u jiných živočichů, a e) k léčbě infekcí HIV, buč omezením vazby viru HIV na buňky člověka nebo živočichů nebo rozrušením trojroz- měrné organizace viru in vivo, jakož i k vědeckým stu- diím virů HIV in vitro. - 15 -The polypeptides of the invention may be used as such or linked to a suitable carrier, such as: 14 - a) peptide vaccines to prevent infection by one or more HIV strains, b) as binding agents, for example, in the diagnosis of HIV positive patients, c) for quality control in assays, for example, for binding antibodies to these polypeptides, d) as antigenic agents for the production of monoclonal or polyclonal antibodies in immunization of animals, such antibodies can be used, for example, in HIV scientific studies, ii) as a diagnostic means, e.g. as part of histochemical reagents, iii) to passively immunize HIV patients, either to treat AIDS or in combination with other active agents such as AZT and / or HIV protease inhibitors, and iv) as a means to target the action of other agents such as ΑΖΪ or an inhibitor HIV virus proteases in cells infected with HIV HIV expressiobal proteins on their surface, which are either covalently bound or otherwise linked, for example in the form of liposomes containing them, may also contain antibodies generated against any polypeptide by antigenic action. The invention also relates to forms or fragments produced by genetic engineering, in particular V1 antibodies to these polypeptides and humanized forms of antibodies produced against these polypeptides in other animals, and e) to the treatment of HIV infections, either by limiting the binding of HIV to human or animal cells or disrupting the three-dimensional organization of the virus in vivo, as well as the scientific studies of HIV viruses in vitro. - 15 -

Pokud jde o detekci a diagnózu HIV nebo protilátekproti HIV, odborníkům bude zřejmé, že existuje celá radaimunologických zkoušek, které jsou v oboru známy, jako jsoupoužití laminátových struktur, kompetitivní a nekompetitiv-vní zkoušky a přímé a nepřímé značení.With regard to the detection and diagnosis of HIV or HIV antibodies, it will be apparent to those skilled in the art that there are a number of immunoassays known in the art, such as the use of laminate structures, competitive and non-competitive assays, and direct and indirect labeling.

Vynález zahrnuje rovněž sestavu pro průkaz viru HIVnebo protilátek proti tomuto viru, tato sestava obsahujealespoň jeden syntetický polypeptid podle vynálezu.The invention also encompasses an assembly for detecting HIV or antibodies against the virus, which assembly comprises at least one synthetic polypeptide of the invention.

Polyklonální nebo monoklonální protilátky, humani-zované formy těchto protilátek, uvedené například v publi-kaci Thompson K. M. a další, (1936), Immunology 58, 157 až160, protilátky proti jediné doméně, například podle publi-kace Ward S. S., Gussow D., Griffiths A. D., Jones P. aWinter G. (1989), Hature 341, 544 až 546 a protilátky, kte-ré by mohly procházet barierou mezi krevním oběhem v mozkua mimo mozek a které jsou schopné se specificky vázat nasyntetický polypeptid podle vynálezu je možno syntetizovatobvyklým způsobem, tyto protilátky jsou rovněž předmětemvynálezu. Protilátky podle vynálezu je možno užít mimo jinék diagnostice infekce HIV u ssavců tak, že se inkubuje vzo-rek tkáně nebo tělesné tekutiny ssavce s účinným množstvímprotilátky a pak se stanoví, zda došlo ke zkřížené reakcimezi vzorkem a protilátkou, a to jakou rychlostí a v jakémrozsahu. Diagnostická sestavg s obsahem alespoň jedné tako-vé protilátky rovněž tvoří součást vynálezu.Polyclonal or monoclonal antibodies, humanized forms of these antibodies are disclosed, for example, in Thompson KM et al., (1936), Immunology 58, 157-160, antibodies against a single domain, for example, according to Ward SS, Gussow D., Griffiths AD, Jones P. andinter G. (1989), Hature 341, 544-546, and antibodies that could cross the bloodstream barrier in the brain and outside the brain and which are capable of specifically binding the synthetic polypeptide of the invention can be synthesized by the usual methods, these antibodies are also within the scope of the invention. The antibodies of the invention can be used, inter alia, to diagnose HIV infection in mammals by incubating the tissue or body fluid of the mammal with an effective amount of antibody and then determining whether cross-reaction with the sample has occurred, at what rate and in what range . The diagnostic kit comprising at least one such antibody also forms part of the invention.

Vynález se rovněž týká syntetických polypeptidů,určených pro léčbu nebo profylaxi infekce HIV u ssavcůa/nebo ke stimulaci imunologického systému ssavců a/nebok blokování buněčných receptorů pro virus HIV a pro výrobuléků, vhodných k tomuto účelu. Vynález zahrnuje také far-maceutické prostředky, které jako účinnou složku obsahujialespoň jeden polypeptid nebo konjugát polypeptidů a nosičespolu s jedním nebo větším počtem farmaceutických pomocnýchlátek, a/nebo nosičů. Prostředky mohou být určeny' pro per· - 16 orální, rektální, nosní a zejména parenterální podánívčetně podání do centrálního nervového systému.The invention also relates to synthetic polypeptides for the treatment or prophylaxis of HIV infection in a mammal and / or to stimulate the mammalian immunological system and / or blocking cellular receptors for the HIV virus, and for products suitable for this purpose. The invention also includes pharmaceutical compositions comprising at least one polypeptide or conjugate of polypeptides and carrier together with one or more pharmaceutical excipients and / or carriers as an active ingredient. The compositions may be formulated for oral, rectal, nasal and especially parenteral administration, including administration to the central nervous system.

Peptidy podle vynálezu je tedy možno užít k léčběa profylaxi infekce HIV u člověka a/nebo ke stimulaci imu-nologického systému ssavců a/nebo k blokování buněčnýchreceptorů pro virus HIV, v těchto případech se podává účin-né množství těchto polypeptidů jako takových.nebo v kombi-naci s jinými látkami, určenými pro léčbu AIDS, jako jsouAZT a/nebo inhibitory proteázy HIV.Accordingly, the peptides of the invention can be used to treat the prophylaxis of HIV infection in humans and / or to stimulate the mammalian immune system and / or to block HIV cell receptors, in which case an effective amount of such polypeptides is administered. combination with other AIDS treatment agents such as AZT and / or HIV protease inhibitors.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno násle-dujícími příklady, které však vynález nemají omezovat. Příklady provedení vynálezu Příklad 1The invention will now be illustrated by the following non-limiting examples. EXAMPLES Example 1

Byla syntetizována C-terminálně extendovaná formazákladního peptidu a) s řetězcemThe C-terminally extended form of the backbone peptide a) was synthesized with a chain

Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-GIy-Ile-Trp-Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-GIy-Ile-Trp-

Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys při použití standardního postupu na pevné fázi (F-moc)a pak byl vytvořen intramolekulární disulfidový můstekmezi oběma cysteinovými zbytky. Peptid byl odštěpen odpryskyřice kyselinou trifluoroctovou a pak byl čištěnfiltrací na gelu, chromatografií na iontoměniči a vysoko-tlakou kapalinovou chromatografií v reversní fázi. Čisto-ta výsledného peptidu byla vyšší než 85 %· Do molekulybyl zařazen G-terainální alaninový zbytek, aby bylo možnosnáze uskutečnit konjugaci. Feptid byl rozpuštěn ve fyziologickém roztoku chloridu sodného s fosfátovým pufrem(PBS, 5 mg/ml) a pak byl přidán stejný objem ovalbuminu - 17 - (5 mg/ml) a pak byl přidán glutaraldehyd v konečná koncen-traci 0,1 %. Saěs konjugátu byla ponechána 30 minut stát apak byla emulgována s Freundovým pomocným činidlem. Každáovce (5 ovcí/skupina) byla imunisovéna 250/Ug peptidu veFreundově úplném pomocném prostředku (FCA) a po 14 dnechbylo podáno ještě stejné množství ve Freundově neúplném po-mocném prostředku (FIA). Další dávky byly podány po 3 až 4týdnech ve FIA. Vzorky krve byly odebrány 7 až 10 dnů poposlední dávce a byly zkoumány na vazbu na obalovou bílkovi-nu HIV.Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys using a standard solid-phase procedure (F-moc) and then creating an intramolecular disulfide bridge between the two cysteine residues. The peptide was cleaved with trifluoroacetic acid and then purified by gel filtration, ion exchange chromatography, and high-pressure reverse phase liquid chromatography. Purity of the resulting peptide was greater than 85%. G-terainal alanine residue was included in the molecule to allow conjugation to take place. The peptide was dissolved in phosphate buffered saline (PBS, 5 mg / ml) and then an equal volume of ovalbumin - 17 - (5 mg / ml) was added, followed by the addition of glutaraldehyde at a final concentration of 0.1%. The sausage conjugate was allowed to stand for 30 minutes and was emulsified with Freund's adjuvant. Each (5 sheep / group) was immunized with 250 µg of peptide in Freund's complete adjuvant (FCA) and after 14 days an equal amount was administered in Freund's incomplete adjuvant (FIA). Additional doses were given after 3-4 weeks in the FIA. Blood samples were collected for 7-10 days last dose and were examined for binding to HIV envelope protein.

Stanovení protilátek proti syntetickému peptidu,které rozpoznávají obalovou bílkovinu HIV bylo provedenopři použití rekombinantního viru vaccinia (například Macket14. a Smitn G. L. (1986), J. gen. Virol. 6? > 2067, obecnámethologie), tento virus byl konstruován tak, aby došlo kexpresi obalové bílkoviny HIV na povrchu infikovaných buněk.Tento postup je výhodný vzhledem k tomu, že vazba na anti-gen je měřena na povrchu buněk, infikovaných virem a z toho-to důvodu může být průkaznější než vazba na antigenv roz-toku, protože některé potenciální epitopy obalové bílkovinymohou být in vivo maskovány v důsledku interakce s fosfoli-pidy v membráně. Ledvinové buňky opic CV1, pěstované v jednévrstvě na mikrotitračních plotnách s 96 vyhloubeními bylyinfikovány rekombinantním virem vaccinia. Tato konstrukceviru obsahovala gen, který je kódem pro obalový glykoproteinHIV a je známo, že k expresi této látky a také ke zpracovánítéto látky dochází na povrchu infikovaných buněk. Byly pro-vedeny zkoušky s antiserem ovcí ve dvojnásobném opakování.Množství 50/ul antisera v různé koncentraci bylo přidáno dovyhloubení a směs byla inkubována 4 hodiny, pak byly buňkydvakrát promyty a bylo přidáno antiserum proti ovčím bílko-vinám, značené peroxidázou. Kladná reakce byla stanovenaodečtením optické hustoty příslušným zařízením.The determination of antibodies against the synthetic peptide that recognize HIV envelope protein was performed using recombinant vaccinia virus (e.g., Macket14 and Smitn GL (1986), J. gen. Virol. 6? 2067, generethethology); coexpression of HIV envelope protein on the surface of infected cells. This approach is advantageous since binding to the anti-gene is measured on the surface of the virus infected cells and may therefore be more prominent than the antigen binding in the flow because some potential coat protein epitopes may be masked in vivo due to interaction with phospholipids in the membrane. CV1 monkey monoclonal kidney cells grown in 96-well microtiter plates were infected with recombinant vaccinia virus. This construction virus contained the gene encoding the envelope glycoprotein HIV and it is known that the expression of this substance and the processing of the substance occurs on the surface of the infected cells. Twice antiserum tests were carried out. The amount of 50 µl of antiserum at different concentrations was added to the digestion and the mixture was incubated for 4 hours, then the cells were washed twice and peroxidase-labeled anti-sheep protein antiserum was added. The positive reaction was determined by subtracting the optical density with the appropriate equipment.

Bylo prokázáno, že antisera proti peptidu majíAntisera have been shown to have anti-peptide

/ X zkříženou reakci a vysokou afinitu k obalové bílkovině 18 HIV, k jejíž expresi dochází na povrchu infikovaných buněk,jak je zřejmé z tabulek 1 a 1A. Tyto výsledky potvrzují, žeuvedené protilátky proti peptidu budou cenné pro výzkum ipro diagnostické líčely.[X] cross-reaction and high affinity for HIV envelope protein 18, which is expressed on the surface of infected cells, as shown in Tables 1 and 1A. These results confirm that the indicated anti-peptide antibodies will be valuable for research and diagnostic purposes.

Tabu lkalTabu lkal

Zkřížená reakce mezi šerem ovcí, imunizovaných konjugátempeptidu (a) a rekombinantní obalovou bílkovinou HIV, kjejíž expresi dochází na povrchu buněk opičích ledvin zkřížená reakce kontrolní buněčná linie buněk opi linie opičích ledvin ledvin s expres obalové bílkoviny _____________________________HIV__________________________________ sérum imunisovaných ovcí - +++ kontrolní sérumCross-reaction between the murine sheep, immunized conjugate peptide (a) and the recombinant HIV coat protein expressed on monkey kidney cell surface cross-reaction control cell line of opi monkey kidney kidney with coat protein expression ________________________________ serum of immunized sheep - +++ control serum

X) '•HX) 'H

Tabulka IATable IA

Typické titry positivních antiser z ovcí, imunisovanýchkonjugátem peptidu (a) při reakci s rekombinantní obalo-vou bílkovinou HIV, k jejíž expresi dochází na povrchubuněk opičích ledvin - 19 -Typical titers of positive antiserum from sheep, immunized with the peptide conjugate (a) in response to recombinant HIV protein, expressed on monkey kidney surfaces - 19 -

Střední hodnota optickéhustoty (ředění sera) vzorek sera (titr) 1_ 50 1_ 250 1 - 1250 1 1 156250 31250 kontrolní sérum ovce 0,344 0,288 0,197 0,012 0,016 sérum ovcí, jímž bylopředem podáno sérum 0,736 0,636 0,432 0,140 0,052 1 : 5000 a peptid (a) Z uvedené tabulky je zřejmé, že i při velkém zředě-ní sera z pokusných ovcí relativně po kontrole je titr pod-statně zvýšen. Příklad 2Mean Optical Density (Sera Dilution) Serum Sample (Titre) 1 50 50 - 1 250 1 1 156250 31250 Sheep Control Serum 0.344 0.288 0.197 0.012 0.016 Sheep Serum Prior to Serum 0.736 0.636 0.432 0.140 0.052 1: 5000 and Peptide (a) It is clear from the table that even with a large dilution of serum from the experimental sheep relative to the control, the titer is substantially increased. Example 2

Jednou z úloh neutralizujících protilátek je inni-bice přenosu viru z infikovaných buněk na buňky neinfiko-vané. Prevence nebo omezení rychlosti přenosů viru z T-bu-něk na makrofágy má podstatný význam, protože takto je mož-no podstatně prodloužit život nemocných s AIDS. Antiseraproti peptidu byla zkoumána na svou schopnost způsobit in-hibici tvorby syncitií in vitro. Jde o velké buňky s mnohajádry, které vzniknou v důsledku tvorby "můstků’’ mezi buň-kami, infikovanými HIV. Hýla syntetizována C-terminálně extendovaná formazákladního peptidu a) s řetězcemOne of the roles of neutralizing antibodies is the introduction of virus transfer from infected cells to non-infected cells. Preventing or limiting the rate of virus transmission from T-cells to macrophages is essential, as this can significantly extend the life of AIDS patients. The antisera to the peptide was investigated for its ability to cause inhibition of syncitia formation in vitro. These are large cells with multiple polymorphisms due to the formation of "bridges" between HIV-infected cells.

Asp-Gln-Ser-L-eu-Lys-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys s intramolekulárním disulfidovým můstkem mezi dvěma cys- teinovýai zbytky. Tato forma bylo syntetizována, čištěna, konjugována a užita k imunizaci skupin ovcí stejně jako 20 - v přikladu 1. Antisera proti peptidu byla užita při pokusuna neutralizaci HIV in vitro. Protilátky proti peptidu bylypřidány ke kultuře lidských T-lyafocytů in vitro, infikova-ných vysoce virulentním kmenem HIV a ke kultuře neinfikova-ných lidských makrofágů. Bylo prokázáno, že antisera protipeptidu způsobují inhibici tvorby syncitií v této směsnépopulaci ϊ-buněk a makrofágů, vystavené ÚSinku virulentní-ho kmene HIVI, což znamená, že došlo k inhibici přenosu in-fekce z T-buněk na makrofágy.Asp-Gln-Ser-L-eu-Lys-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys with an intramolecular disulfide bridge between two cysteine residues. This form was synthesized, purified, conjugated and used to immunize sheep groups as well as 20 - in Example 1. Antisera against peptide was used to try to neutralize HIV in vitro. Antibodies to the peptide were added to a culture of human in vitro lymphocytes infected with a highly virulent HIV strain and to a culture of uninfected human macrophages. The antisera of the peptide have been shown to inhibit the formation of syncitia in this mixed cell-macrophage population, exposed to the secretion of the virulent strain of HIVI, indicating that T-cell infection has been inhibited from transfer to macrophages.

Bylo prokázáno, že protilátky mohou zabránit infek-ci makrofágů virem HIV a jsou tedy v tomto pokusu in vitroneutralizační, kdežto v kontrolní kultuře došlo k infekcimakrofágů, jak je zřejmé z tabulky 2.Antibodies have been shown to prevent HIV infection by macrophages and are therefore vitroneutralized in this experiment, whereas infectious macrophages have occurred in the control culture, as shown in Table 2.

Tanu fcZ. 3.Tanu fcZ. 3.

Neutralizace virulentního kmene HIV v kultuře in vitrolidských ϊ-lymf ocytů., infikovaných HIV a neinfikovanýchmakrofágů. +++ znamená vysokou úroveň infekce, zname- ná účinnou ochranu proti infekci buněčná kultura úroveň mí esceNeutralization of the virulent HIV strain in a culture of vitrolid lymf-lymphocytes infected with HIV and uninfected macrophages. +++ means a high level of infection, meaning effective protection against infection cell culture escalation

T-lynfocyty, infikované virem HIV a neinfikované makrofágy +++ ϊ-lyiafocyty, infikované virem HIV, neinfikované makrofágy a protilátky proti peptidu a) positivní pokusu na tvorbu syncitií byla rovněž vyhodnocenaantisera proti peptidu A. Tento pokus určuje schopnost antisera zabránit přenos živého HIV z infikova-ných na neinfikované buňky a zabránit fúzi buněk, ke kterémůže docházet reaktivitou mezi glykoproteinem viru (gplóO) 21 a molekulou CD4· Stanoveni bylo prováděno detekcí syncitiía stanovením jejich počtu.HIV-infected T-lymphocytes infected with HIV, uninfected macrophages and anti-peptide antibodies)-lymphocytes infected with HIV and non-infected macrophages a) A positive attempt to generate syncitism was also evaluated against peptide A. This experiment determines the ability of antisera to prevent live HIV transmission. from infected to uninfected cells and prevent cell fusion, which may occur by reactivity between the gp110 and CD4 molecules. The assay was performed by syncitia detection and counting.

Fokus byl proveden takto: známá koncentrace buněčnélinie, která produkuje HIV (CD+4) a podporuje aktivní re-plikaci viru se třikrát promyje a pak se přidá zkoumané an-tiserum v různém ředění. Směs se inkubuje 20 minut při tep-lotě 27 °C, pak se buňky smísí v určitém poměru s indikáto-rovou buněčnáu linií CD4+, vysoce infikovatelnou HIV a snad-no vytvářející syncitia. Buňky se denně pozorují a sledujese tvorba těchto velkých buněčných útvarů.The focus was carried out as follows: the known concentration of cellular production that produces HIV (CD + 4) and promotes active viral replication is washed three times and then the aniserum of interest is added at various dilutions. The mixture was incubated for 20 minutes at 27 ° C, then the cells mixed with the CD4 + indicator cell line, a highly infectious HIV and syncitia easily. Cells are observed daily for the formation of these large cell formations.

Jak je zřejmé z tabulky 2» mohou protilátky protipeptidu a) zabránit tvorbě syncitií.As can be seen from Table 2, the antibodies of the peptide may (a) prevent the formation of syncitia.

Tabulka 2Table 2

Inhibice tvorby syncitií mezi buňkami, produkujícími HIVa indikátorovou buněčnou linií antiserem vzorek sera inhibice· tvorby syncitií antiserum proti peptidu a) + (2/5 zvířat) normální sérum ovci Příklad 2 Různá sera nemocných, infikovaných HIV I v různýchstádiích postupu choroby AIDS, od asymptomatických nemocnýchaž k nemocným s plně vyvinutými příznaky byla odebrána tak,aby bylo možno získat representativní obraz reaktivity sertěchto nemocných se syntetickými peptiay při zkoušce ELISA.Inhibition of Syncitia Production between HIVa-producing Antiserum Indicator Cell Line Sera Inhibition of Syncitia Antiserum Antiserum Sera + (2/5 Animal) Normal Serum Sheep Example 2 Various Sera of HIV-infected Patients at Various Stages of AIDS Disease, from Asymptomatic patients with fully developed symptoms were taken to obtain a representative image of the reactivity of these patients with synthetic peptides in the ELISA assay.

Zkouška ELISA může stanovit stupeň reaktivity syn-tetických peptidů (analogických oblasti gpl20 nebo gp41 transmembránové bílkoviny HIV I, s protilátkou proti povr- chovému glykoproteinu HIV I v seru nemocných, která jsou positivní na tento virus. 100 entiser od positivních nemocných bylo uvedenodo reakee se syntetickým peptidem a). Dvě z těchto ser(od asymptomatických nemocných) obsahovala neutralizujícíprotilátky proti HIV a tato sera vykazovala zkříženou re-akci s peptidem a), jak je zřejmé z tabulky 4.The ELISA assay can determine the degree of reactivity of synthetic peptides (analogous to gp120 or gp41 transmembrane protein HIV I, with anti-HIV surface glycoprotein antibody I in a series of patients who are positive for this virus. synthetic peptide a). Two of these ser (from asymptomatic patients) contained neutralizing anti-HIV antibodies and this serum showed cross-reactivity with peptide a) as shown in Table 4.

Tabulka 4Table 4

Zkřížená reakce peptidu a) se dvěma positivními antiseryna HIV od asymptomatických nemocnýchCross-reaction of peptide a) with two positive antiseryne HIVs from asymptomatic patients

Vzorek optická hustota (peptid a)) pufr normální sérum 1/1001/1000 HIV positivní (1) 1/1001/1000 HIV positivní (2) 1/100 0,056 0,476 0,140 s2,02,0>2,0 > >2,0 ί1,37' opakováníSample optical density (peptide a)) buffer normal serum 1/1001/1000 HIV positive (1) 1/1001/1000 HIV positive (2) 1/100 0.056 0.476 0.140 s2.02.0> 2.0>> 2, 0 ,31,37 ování repeat

Claims (25)

- 23 - FATEK ϊ Ο V Ε NÁROKY- 23 - FATEK ϊ Ο V Ε 1. Syntetický polypeptid s alespoň jednou antigenmvlastností obalové bílkoviny alespoň jednoho kmene virulidské imunodéficience HIV·, vyznačující že je tvořen řetězcem aminokyselin obecného vzor- ce i X- Rl~ R 2- Ry Ry Ry Rg - R? - Tr p-Gly -Gys-Hg-Rj-^O-^l-Rlj-Cy-Y (I) kde R„ znamená Asp nebo Glu, znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala.Pro, Ser, Thr, Asn, nebo Gin, znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Pro, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn, Lys, His, Gin neboArg, a E-j^ znamenají nezávisle na sobě jakýkoliv zbytekaminokyseliny, Eg a Eg znamenají nezávisle na sobě zbytek aminokyselinyze skupiny Gly, Ala, Pro, Ser, Thr nebo Asn, znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Val, Leu, Ile, Ser, Zhr, Asn, Gin, Pne, Tyr, Trp,Cys, Met nebo Pro, ri4 '7 Rr xO X a Y E^2 znamenají nezávisle na sobě zbytek aminokyselinyze skupiny Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Phe,Tyr nebo Trp, znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Lys, Hisnebo Arg a mohou nezávisle na sobě chybět nebo mohou znamenatl'nébo větší počet, například tři další zbytkyaminokyselin. 24 -What is claimed is: 1. A synthetic polypeptide having at least one antigenic property of an envelope protein of at least one strain of HIV virulid immunodeficiency, characterized by a chain of amino acids having the formula ## STR2 ## X - R @ 1 --R @ 2 --Ri Ry Ry @ Rg --R @ 2? Tr p-Gly-Gys-Hg-R 1 -O-R 1 -R 1 -Cy-Y (I) wherein R 1 is Asp or Glu, means an amino acid residue from the group Gly, Ala.Pro, Ser, Thr, Asn , or Gln, represents an amino acid residue of the group Gly, Ala, Pro, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn, Lys, His, Gln or Arg, and E 1 'are independently any amino acid residue, Eg and Eg are each independently a residue amino acids of Gly, Ala, Pro, Ser, Thr or Asn mean amino acid residues Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Zhr, Asn, Gln, Pne, Tyr, Trp, Cys, Met or Pro, ri4 R 7, X 10, X and YE 2 are each independently an amino acid residue of the group Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Phe, Tyr or Trp, meaning an amino acid residue of the group Lys, His or Arg and may independently of one another be or may be, or may have, a plurality of, for example, three additional amino acid residues. 24 - 2. Způsob výroby syntetického polypeptidu podlenároku 1, vyznačující se tím, že se zbyt-ky aminokyselin váží chemickým nebo biologickým způsobemnebo rekomoinantni technikou a polypeptid se izoluje. 3·' Způsob podle nároku 2, vyznačuj t i m , že Rg znamená Gin nebo Thr, R^ znamená Ser,Asn, Gin, Ar^ nebo Ala, íb znamená Leu, Ile, Gin nebo Arg,R^ je Leu nebo Lys, R^ je Gly nebo Asn, R? znamená Gly, AI Leu, rle, Val, Met, Cys, Phe, Tyr, Trp nebo Ser, Ηθ znamená Ser nebo Ala, R^ znamená Gly nebo Fhe, R^q zname-ná Arg. nebo Lys, R-jznamená Ala, Ile nebo Val. znamená Leu, His, Ile, Gin a ‘122. A method for producing a synthetic polypeptide according to claim 1, wherein the amino acid residues are chemically or biologically bound or recombinantly isolated and the polypeptide is isolated. 3. The process of claim 2 wherein R8 is Gln or Thr, R1 is Ser, Asn, Gln, Ar3 or Ala, Bb is Leu, Ile, Gln or Arg, R1 is Leu or Lys, R ^ is Gly or Asn, R? is Gly, Al Leu, Rle, Val, Met, Cys, Phe, Tyr, Trp or Ser, Ηθ is Ser or Ala, R, is Gly or Fhe, R R q is Arg. or Lys, R-denotes Ala, Ile or Val. means Leu, His, Ile, Gln, and ‘12 4·. Způsob podle nároku 3, vyznačujícíse t í m , že polypeptid je tvořen řetězcem aminokyselinobecného vzorce II X-Ásp-Gln-R^-Leu-R^-Gly-Ry-Trp-Gly- (II) Cys-Ser-Gly-Lys-R11-R12-Cys-Y kde R-, R^, R-q a R^2 mají význam, uvedený v nároku 3, Ry znamená zbytek Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Phe, Tyr nebo Trp a X a Y mohou nezávisle na sobě chybět nebo znamenat jedennebo větší počet zbytků aminokyselin.4 ·. 4. The method of claim 3, wherein the polypeptide is an amino acid chain of formula II: X-Asp-Gln-R ^ -Leu-R ^ -Gly-Ry-Trp-Gly- (II) Cys-Ser-Gly-Lys -R 11 -R 12 -Cys-Y wherein R-, R 1, R 2 and R 2 'are as defined in claim 3, Ry is a Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Phe, Tyr or Trp residue and X and Y may be absent or represent one or more amino acid residues. 5. Způsob podle nároku 4, vyznačujícíse t i □ , že R^ znamená Ser, Asn, Gin, nebo Arg, R.^znamená Leu, His nebo Ile a R^^ znamená Ile nebo Ala.5. A process according to claim 4, wherein R1 is Ser, Asn, Gln, or Arg, R1 is Leu, His or Ile and R1 is Ile or Ala. 6. Způsob podle nároku 5, vyznačujícíse t i m , že R~ je Ile, Phe, Met, Val nebo Leu. - 25 - '•H6. The method of claim 5 wherein R &lt; 1 &gt; is Ile, Phe, Met, Val or Leu. - 25 - 'H 7. Způsob podle nároku 6, vyznačujícíse tím, že R^ znamená Ser nebo Asn a R^ je Lys.A process according to claim 6 wherein R 1 is Ser or Asn and R 1 is Lys. 8. Způsob podle nároků 2 až 7 , vyznačujc í se t í □ , že polypeptid je možno vyjádřit vzorcem X-Asp-Gln-3er-Leu-Lys-Gly-Ile-Trp- Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y kde X a Y mohou nezávisle na sobe chybět nebo znamenat jedennebo větší počet dalších zbytků aminokyselin.8. The method of claims 2-7 wherein the polypeptide is represented by the formula X-Asp-Gln-3er-Leu-Lys-Gly-Ile-Trp- Gly-Cys-Ser-Gly-Lys- Leu-Ala-Cys-Y wherein X and Y may be absent or represent one or more additional amino acid residues. 9. Způsob podle nároku 4, vyznačujíc! se t í ta , že Rj znamená Gin nebo Arg, R^ je Leu, R?.znamená lie, Rhe a Met, znamená Leu, His nebo Ile a R, znamená Ala , z /A method according to claim 4, characterized in that wherein R 1 is Gln or Arg, R 1 is Leu, R 1 is H, R e and Met, is Leu, His or Ile and R 1 is Ala, z / 10. Způsob podle nároku 9, vyznačujícíse t í m , že polypeptid je možno vyjádřit vzorcem 'A s ρ- LI n- Gln-Le u-Le u~ Oly- Ile-Trp- Gly-Cys-Ser— Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y kde λ Y muiL ’ nezávis' jeuen nebo ve-sx nebo znamenat.uyti<u xUGtiy .. ’. ”10. A method according to claim 9, wherein the polypeptide is represented by the formula &quot; A with &lt; RTI ID = 0.0 &gt; LI &lt; / RTI &gt; n-Gln-Leu-Le-Gly-Lys- Leu-Ala-Cys-Y where λ Y muiL 'is independent of yuu or y-sx or is meant to be xUGtiy. ” 11. Způsob podle nároku 3, vyznač j i cse tím, že polypeptid je tvořen řetězcem aminokyse-lin obecného vzorce III X-R^-í^-Rn-R^-fic-Asn-Ser-Trp-Bly-Cys-Ala- Ph e - Ar g - G1 η - V a i - C y s - Y (III) kde znamená Glu nebo Asp, R, R- E, 26 znamená Tnr nebo Gin, je Ser, Asn, Arg, Gin nebo Ala, znamená Leu, Ile, Arg nebo Gin, znamená Lys nebo Leu a mohou nezávisle na sobě chybět nebo znamenat ječennebo větší počet zbytků aminokyselin.11. A method according to claim 3, wherein the polypeptide is a chain of amino acids of formula (III) XR @ 1 - (R @ 4 -R @ 11 -R @ 4 -F-Asn-Ser-Trp-Bly-Cys-Ala-Ph e). - Ar g - G1 η - V ai - C y - Y (III) where Glu or Asp, R, R - E, 26 represents Tnr or Gln, is Ser, Asn, Arg, Gln or Ala, means Leu, Ile , Arg or Gln, is Lys or Leu, and may be absent from each other or represent a plurality of amino acid residues. 12. Způsob podle nároku 3 nebo 11, vyzná tím, že polypeptid je tvořen řetězcem aminokyselin obecného vzorce lila X-Glu-Thr-Ro-R,-Ly s-Asn-Ser-Tr-p-Gly--> 4 C y s - Ai a- Ph e - Ar g- Gin- V a 1- C y s - Y (lila) kde R3 znamená Ser, Asn R, znamená Leu, Ile 4 X a 1 mohou nezávisle sobě chybět nebo znamenat jedennebo vetší počet zbytků aminokyselin.12. The method of claim 3 or 11, wherein the polypeptide is a chain of amino acids of Formula IIIa X-Glu-Thr-Ro-R, -Ly s-Asn-Ser-Tr-p-Gly - > - Ai and - Ph e - Ar g - Gln - V and 1- C ys - Y (IIIa) where R 3 represents Ser, Asn R, represents Leu, Ile 4 X and 1 may be independently absent or represent one or more amino acid residues . 13. Způsob podle nároku 12, vyznačuji-t í m , že R^ znamená Ser v případě, že zna- mená Ile nebo R~ znamená Ala v případě, že R^ znamená Argnebo GLn.13. The process of claim 12 wherein R1 is Ser when R &lt; 1 &gt; is Ala or R &lt; 1 &gt; is Ala when R &lt; 1 &gt; is Arg or GLn. 14. Způsob podle nároků 2 až 13, v y z n a č u -jící se tím, že cysteincvé zbytky v polohách 10a 16 polypeptidu jsou vázány uvnitř molekuly disulfidovýmimůstky..14. The method of claims 2 to 13, wherein the cysteine residues at positions 10a and 16 of the polypeptide are bound within the molecule by disulfide bridges. 15. Způsob výroby syntetického polypeptidu obecné-ho vzorce IV Cl — r] — CLi—0] — .o a m b n c (IV) - 27 - kde F a G mohou znamenat nezávisle na sobě polypeptid obecné-ho vzorce I až lila, L je vazný řetězec, přičemž různé řetězce L mohou být stejné nebo různé, a, b, c mohou nezávisle na sobě znamenat číslo O nebo 1 aman jsou kladná čísla, vyznačující se timnebo biologicky nebo rekombinantnízbytky a polypeptid se izoluje. že se postupně chemickytechnikou na sebe váží15. A process for the preparation of a synthetic polypeptide of the general formula IV wherein R and G are independently of each other a polypeptide of general formula I to IIIa, L is a binder of formula I to IIIa. a chain, wherein the various L chains may be the same or different, a, b, c may independently be 0 or 1 aman are positive numbers, characterized by biologically or recombinant residues, and the polypeptide isolated. that they are gradually chemically binding to each other 16. Způsob výroby syntetického polypeptidu obecného vzorce V L^-rc-L^-F-tL-Gln-Le (Ví kde ičemž jed..utl4vé řetězce Lo různá, na i 0 nebo 1, je polypeptid podle některého ze vzorců I až lila, je polypeptid podle některého ze vzorců I až lila,nebo jiný řetězec, je vazný řetěze* "n; být sJ jsou in .~"ná číslamohou nezávisle z žt -c chemicky, biolo- vyznaeu^ici se t i agicky nebo rekombinantní technikou váži zbytky aminokyse-lin a výsledný polypeptid se izoluje.16. A process for the production of a synthetic polypeptide of the formula VL @ 1 -rc-L1-F-L1-Gln-Le (where the L1 chain is different, to 0 or 1, the polypeptide of any one of formulas I-IIIa is is a polypeptide according to any one of formulas I to IIIa, or another chain, is a bond chain which is independently bound by chemically, biologically, or by recombinant techniques. amino acid residues and the resulting polypeptide is isolated. 17. Způsob podle nároků 2 až 16, vyznačuj ci se tím, že polypeptid obsahuje retro-inverso aminokyseliny. c i se17. The method of claims 2 to 16, wherein the polypeptide comprises retro-inverso amino acids. c i se 16. Způsob podle nároků 2 až 14, vyznačují- cí m , že polypeptid obsahuje antigenně významný 2δ - subfragment nebo variantu polypeptidu, tak, jak byl popsánv nárocích'2 až 14.16. A method according to claims 2 to 14, wherein the polypeptide comprises an antigenically significant 2δ-subfragment or variant polypeptide as described in claims 2-14. 19. Způsob podle nároků 2 až 18, vyznačujcí se tím, že polypeptid navíc obsahuje alespoň je·den epitop T-buněk.19. The method of claims 2 to 18, wherein the polypeptide further comprises at least a T-cell epitope. 20. Způsob podle nároků 2 až 19, vyznačujc í se tím, že polypeptid je dále vázán na nosič p,vakeinu. '•HO Ol '•H | Íh ·Η 'H20. The method of claims 2 to 19, wherein the polypeptide is further bound to a p, vakein carrier. HO Ol 'H | Íh · Η 'H 21. Způsob výroby vakciny, vyznačujícíse t 1 m , že se misi alespoň jeden syntetický poiypeptpodle nároků 2 až 20, který může vyvolat imunitu protínalspon jednomu kmeni HIV s jedním nebo větším počtem farma-ceuticky přijatelných pomocných látek a/nebo nosičů. HIV, valespoň21. A method for producing a vaccine comprising the step of at least one synthetic polypeptide according to claims 2 to 20, which may elicit immunity to one HIV strain with one or more pharmaceutically acceptable excipients and / or carriers. HIV, at least 22. Sestava pro detekci HIV nebo protilátek protiyznačujicí se tím, že obsahujejeden syntetický polypeptid podle nároků 2 až 19. 23. c í se tnantní DNA. Způsob podle nároků 2 až 19. vy z n a č u jí □ , že se užije postupu s využitím rekombi- 24· Způsob výroby farmaceutického prostředku, v yzradující se tím, Že prostředek obsahujejako svou účinnou složku alespoň ječen polypeptid podlenároků 2 až 20 a jeden nebo větší počet pomocných láteka/nebo nosičů. 25· Použití syntetického polypeptidu , vyrobeného podle nároků 2 až 20 pro výrobu fsrmaceutickýeh prostřed- ků pro léčbu a profylaxi infekce HIV u ssavců a/nebo pro stimulaci imunologického systému ssavců a/nebo pro bloko- váni buněčných receptorů pro virus HIV. 29 -A kit for detecting HIV or antibodies, characterized in that it comprises one synthetic polypeptide according to claims 2-19. A process according to any one of claims 2 to 19, characterized in that a process for the preparation of a pharmaceutical composition is used, characterized in that the composition comprises, as active ingredient, at least one polypeptide of claims 2 to 20 and one or more thereof. a plurality of auxiliary substances / or carriers. Use of a synthetic polypeptide produced according to claims 2 to 20 for the manufacture of pharmaceutical compositions for the treatment and prophylaxis of HIV infection in mammals and / or for stimulating the mammalian immunological system and / or for blocking cellular receptors for HIV. 29 - 26. Způsob výroby protilátek nebo jejich fragmentů,které se mohou vázat na antigen, zejména syntetický poly-peptid, vyrobený podle nároků 2 až 14, vyzná č u j ι-οί se t í m , že se imunizuje ssavec-. syntet ickým poly-peptidem, vyrobeným podle nároků 2 až 21 a protilátky seizolují.26. A method for producing antibodies or fragments thereof that can bind to an antigen, in particular a synthetic polypeptide produced according to claims 2 to 14, wherein the mammal is immunized. the synthetic polypeptide produced according to claims 2 to 21 and the antibodies are isolated. 27. Diagnostická sestava pro detekci HIV nebo pro-tilátek proti HIV, vyznačující se tím, žeobsahuje alespoň jednu protilátku nebo fragment této pro-tilátky, který váže antigen, specificky syntetický poly-peptid podle nároků 2 až |4.27. A diagnostic kit for detecting HIV or anti-HIV antibodies comprising at least one antigen-binding antibody or fragment thereof, specifically a synthetic peptide according to claims 2 to 4. 26.Způsob výroby farmaceutického prostředku, vy-značující se tím, že jako svou účinnou slož-ku obsahuje protilátku nebo fragment této protilátky, kte-rý se specificky váže na syntetický polypeptid, vyrobenýpodle nároků 2 až 14 a jednu nebo větší počet pomociiýchlátek a/nebo nosičů, přijatelných z farmaceutického hle-diska .26. A method of making a pharmaceutical composition comprising, as its active ingredient, an antibody or fragment of the antibody which specifically binds to a synthetic polypeptide produced according to claims 2 to 14 and one or more auxiliaries and / or agents. or carriers acceptable from the pharmaceutical aspect. 29. Způsob podle nároku 24 nebo 26, vyznaču-jící se tím, že se dále mísí ÁZT a/nebo inhibitorproteázy HIV se syntetickým polypeptidem nebo protilátkounebo fragmentem této protilátky, který se váže na antigen.29. The method of claim 24 or 26, further comprising mixing the AZT and / or HIV protease inhibitors with a synthetic polypeptide or antibody or a fragment of the antibody that binds to the antigen. 30. Způsob diagnostiky infekce virem HIV u ssav-ců, vyznačující se tím, že se inkubujevzorek tkáně nebo tělesné tekutiny tohoto sssvce s účinnýmmnožstvím protilátky nebo fragmentu této protilátky, kterýje schopen vazby na antigen a specificky se váže na synte-tický polypeptid, vyrobený podle nároků 2 až 14, načež seprokazuje zda a do jaké míry a/nebo jakou rychlostí do-chází ke vzniku zkřížené reakce mezi uvedeným vzorkem aprotilátkou. 30 -30. A method of diagnosing HIV infection in mammals comprising incubating a sample of tissue or body fluid of said vaccine with an effective amount of an antibody or fragment thereof capable of binding to an antigen and specifically binding to a synthetic polypeptide produced according to the invention. wherein the cross-reaction between said sample and the antibody is established. 30 - 31. Způsob diagnostiky infekce virem HIV nebo pří-tomnosti protilátek proti HIV nebo fragmentů této proti-látky, které jsou schopné se vázat na antigen, vy z n a -Sující se tím, že se inkubuje vzorek tělesnétekutiny s alespoň jedním polypeptidem, který byx. vyrobenzpůsobem podle nároků 2 až 20. 'Zastupuje:31. A method of diagnosing HIV infection or the presence of anti-HIV antibodies or fragments thereof that are capable of binding to an antigen, comprising incubating a sample of a body fluid with at least one polypeptide that is. produced by the method of claims 2 to 20. advokátkaattorney
CS91680A 1990-03-15 1991-03-15 Synthetic polypeptides CS68091A2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB909005829A GB9005829D0 (en) 1990-03-15 1990-03-15 Synthetic polypeptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS68091A2 true CS68091A2 (en) 1991-12-17

Family

ID=10672665

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS91680A CS68091A2 (en) 1990-03-15 1991-03-15 Synthetic polypeptides

Country Status (17)

Country Link
EP (1) EP0519986A1 (en)
JP (1) JPH05505188A (en)
CN (1) CN1054772A (en)
AP (1) AP211A (en)
AU (1) AU636735B2 (en)
BR (1) BR9106159A (en)
CA (1) CA2078220A1 (en)
CS (1) CS68091A2 (en)
FI (1) FI923800A (en)
GB (1) GB9005829D0 (en)
HU (1) HUT63179A (en)
IL (1) IL97551A0 (en)
MX (1) MX24890A (en)
NZ (1) NZ237417A (en)
OA (1) OA09671A (en)
WO (1) WO1991013909A1 (en)
ZA (1) ZA911886B (en)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2099367A1 (en) * 1991-11-04 1993-05-05 Dade International Inc. Synthetic peptides corresponding to portions of hiv-2 virus and methods of using in an improved assay
US5395750A (en) * 1992-02-28 1995-03-07 Hoffmann-La Roche Inc. Methods for producing proteins which bind to predetermined antigens
US5679688A (en) * 1992-03-11 1997-10-21 Narhex Limited Quinaldoyl-amine derivatives of oxo-and hydroxy-substituted hydrocarbons
US5888992A (en) * 1992-03-11 1999-03-30 Narhex Limited Polar substituted hydrocarbons
US6071895A (en) * 1992-03-11 2000-06-06 Narhex Limited Polar-substituted hydrocarbons
MXPA93002392A (en) 1992-03-11 2005-02-04 Narhex Ltd Amine derivatives of oxo- and hydroxy-substitued hydrocarbons.
GB9208428D0 (en) * 1992-04-16 1992-06-03 Proteus Molecular Design Synthetic polypeptides
US6511845B1 (en) 1992-08-07 2003-01-28 Alan R. Davis Methods for producing an immune response against HIV-1
AU667578B2 (en) 1992-08-27 1996-03-28 Deakin Research Limited Retro-, inverso-, and retro-inverso synthetic peptide analogues
DE4402756A1 (en) * 1994-01-31 1995-08-03 Boehringer Mannheim Gmbh Specific binding substances for antibodies and their use for immunoassays or vaccines
AUPM411994A0 (en) * 1994-02-25 1994-03-24 Deakin Research Limited Epitopes
US6764682B1 (en) 1994-06-16 2004-07-20 Aventis Pasteur Limited Adjuvant compositions containing more than one adjuvant
US6290971B1 (en) 1995-06-15 2001-09-18 Aventis Pasteur Limited Adjuvant compositions comprising a mineral salt and another immunostimulating compound
CN1472314A (en) * 2002-07-29 2004-02-04 清华大学 Immunity expression of AIDS virus O and its use
CN100445296C (en) * 2006-03-31 2008-12-24 浙江大学 Polypeptide organic compounds and application in xenogeneic transplantation
EP2376089B1 (en) 2008-11-17 2018-03-14 The Regents of the University of Michigan Cancer vaccine compositions and methods of using the same
GB201612108D0 (en) 2016-07-12 2016-08-24 Univ Strathclyde Preperation of non-ionic surfactant vesicles and variants

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8714802D0 (en) * 1987-06-24 1987-07-29 Proteus Biotech Ltd Synthetic polypeptides
DE3879881D1 (en) * 1987-11-16 1993-05-06 Hoffmann La Roche RECOMBINANT HIV-2 POLYPEPTIDE.

Also Published As

Publication number Publication date
OA09671A (en) 1993-05-15
BR9106159A (en) 1993-03-16
CA2078220A1 (en) 1991-09-16
NZ237417A (en) 1993-10-26
FI923800A0 (en) 1992-08-24
HU9202939D0 (en) 1992-12-28
WO1991013909A1 (en) 1991-09-19
AU636735B2 (en) 1993-05-06
MX24890A (en) 1993-12-01
FI923800A (en) 1992-08-24
IL97551A0 (en) 1992-06-21
HUT63179A (en) 1993-07-28
CN1054772A (en) 1991-09-25
EP0519986A1 (en) 1992-12-30
GB9005829D0 (en) 1990-05-09
JPH05505188A (en) 1993-08-05
AP211A (en) 1992-10-21
ZA911886B (en) 1991-12-24
AU7467991A (en) 1991-10-10
AP9100245A0 (en) 1991-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8110203B2 (en) Adjuvant comprising non-toxic cross-linked muramyl dipeptide (MDP) microparticles derived from Propionibacterium acnes
US5840313A (en) Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus
AU650911B2 (en) Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus
CS68091A2 (en) Synthetic polypeptides
US5346989A (en) Peptides for use in induction of T cell activation against HIV-1
EP0636145A1 (en) Synthetic polypeptides derived from the hiv envelope glycoprotein
EP0693938B1 (en) Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus
AU2006200454B2 (en) Compositions and methods for treating viral infections
AU1906592A (en) Peptides for use in induction of t cell activation against hiv-1
Syennerholm et al. Vahlne et al.
AU2006200455A1 (en) Compositions and methods for treating viral infections
AU6655300A (en) Compositions and methods for treating infections
AU2004208648A1 (en) Compositions and methods for treating infections
MXPA99003380A (en) Compositions and methods for treating viral infections