CS68091A2 - Synthetic polypeptides - Google Patents
Synthetic polypeptides Download PDFInfo
- Publication number
- CS68091A2 CS68091A2 CS91680A CS68091A CS68091A2 CS 68091 A2 CS68091 A2 CS 68091A2 CS 91680 A CS91680 A CS 91680A CS 68091 A CS68091 A CS 68091A CS 68091 A2 CS68091 A2 CS 68091A2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- polypeptide
- gly
- leu
- gln
- ala
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 123
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 106
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 96
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 36
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 25
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 claims description 12
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims description 11
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims description 11
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 9
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 9
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 6
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004030 hiv protease inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 3
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 claims 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 48
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 14
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- -1 His Chemical compound 0.000 description 12
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 7
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 6
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 5
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 5
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 5
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 5
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 5
- LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N peptide a Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCCCC[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C/C=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C\C1=CC=CC=C1 LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N 0.000 description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000013456 study Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- MXHCPCSDRGLRER-UHFFFAOYSA-N pentaglycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O MXHCPCSDRGLRER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N (2s)-2-azanyl-5-[bis(azanyl)methylideneamino]pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N 0.000 description 1
- YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 2-azanyl-3-sulfanyl-propanoic acid Chemical compound SCC(N)C(O)=O.SCC(N)C(O)=O YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 125000003941 D-tryptophan group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010003079 GPGPGP peptide Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108010010369 HIV Protease Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 125000000773 L-serino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])*)C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101710185515 Major outer membrane lipoprotein Lpp Proteins 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004545 gene duplication Effects 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108010043293 glycyl-prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Hematology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Syntetické polypeptidySynthetic polypeptides
Oblast technikyTechnical field
Vynález se týká syntetických polypeptidů, zejménatakových syntetických polypeptidů, které mají trojrozměr-»nou strukturu a/nebo elektrostatický povrch a/nebo jinéfyzikální, chemické a strukturní vlastnosti specifickýchobalových virových bílkovin. Zvláštní důraz je kladen namožnost výroby vakcín, imunologicky účinných léčebných lá-tek, diagnostických a dalších léčebných nebo vědeckýchprostředku v souvislosti s virem lidské imunodeficience(HIV), o němž je známo, že vyvolává syndrom získané defi-cience imunologického systému (AIDS).The present invention relates to synthetic polypeptides, especially synthetic polypeptides, having a three-dimensional structure and / or an electrostatic surface and / or other physical, chemical and structural properties of specific packaging viral proteins. Particular emphasis is being placed on the production of vaccines, immunologically effective therapeutics, diagnostic and other therapeutic or scientific tools for human immunodeficiency virus (HIV) known to induce acquired immune system deficiency syndrome (AIDS).
Dosavadní stav techniky V posledním desetiletí se projevuje AIDS jako závaž-ný lékařský problém na celém světě a je tedy naléhavě nut-né nalézt další látky pro studium, diagnosu, léčbu a/neboprevenci infekce HIV, který je příčinou tohoto onemocnění. V poslední době jsou k dispozici řetězce aminokyselin, kte-ré tvoří bílkoviny virů HIV I a HIVII, tak jak bylo popsá-no například v publikaci Ratner L. a další, Nátuře 313, 277(1985), Neusing M. A. a další, Nátuře 313, 450 (1965),Wain-Hobson S. a další, Cell 40, 9 (19S5). Je tedy možnovyrobit syntetické polypeptidy s antigenními vlastnostmiobalových bílkovin.BACKGROUND OF THE INVENTION In the last decade, AIDS has emerged as a serious medical problem worldwide, and there is an urgent need to find other substances for the study, diagnosis, treatment and / or prevention of HIV infection that causes this disease. More recently, the amino acid chains of HIV I and HIVII proteins are available, as described, for example, in Ratner, L. et al., Nature 313, 277 (1985), Neusing MA et al., Nature 313. , 450 (1965), Wain-Hobson S. et al., Cell 40, 9 (19S5). Thus, it is possible to produce synthetic polypeptides with antigenic properties of the mucosal proteins.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Postatou vynálezu je vývoj syntetických polypeptidů,které mohou vyvolat tvorbu protilátek proti viru HIV, svýhodou tvorbu neutralizujících protilátek, to znamená pro-tilátek, které mohou zabránit vzniku infekce a/nebo omezitdalší nákazu virem HIV pasivní nebo aktivní imunizací. Pa-sivní imunizace těmito protilátkami může představovat vhodný 2 prostředek pro léčbu nemocných IIDS, takže bude možno za- bránit další nákaze a tím zpomalit šíření této choroby.It is an object of the invention to develop synthetic polypeptides that can induce the production of antibodies to HIV, preferably the generation of neutralizing antibodies, i.e. antibodies that can prevent infection and / or reduce further HIV infection by passive or active immunization. The passive immunization with these antibodies may be a useful means of treating IIDS patients, so that further infection can be prevented, thereby slowing the spread of the disease.
Podstatou vynálezu je tedy syntetický polypeptids alespoň jednou antigenní vlastností obalové bílkovinyalespoň jednoho kmene viru lidské imunodeficience (HIV),přičemž tento polypeptid je tvořen řetězcem aminokyselinobecného vzorce I X-R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-Trp-Gly-Accordingly, the present invention provides a synthetic polypeptide having at least one antigenic property of the coating protein of at least one human immunodeficiency virus (HIV) strain, wherein said polypeptide is an amino acid chain of formula I X-R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-Trp-Gly-
Cys-R8-K9-R10-R11-E12-Cys-Y (I) kde znamená Asp nebo Glu, R2 znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Cys-R8-K9-R10-R11-E12-Cys-Y (I) wherein Asp or Glu, R2 is an amino acid residue of the group Gly, Ala,
Pro, Ser, Thr, Asn nebo Gin,Pro, Ser, Thr, Asn, or Gin,
Rj znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,R 1 is an amino acid residue of the group Gly, Ala,
Pro, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn,Lys, His, Gin nebo Arg, R^, R„ a R^ znamenají nezávisle na sobě jakýkoliv zbytekaminokyseliny,Pro, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn, Lys, His, Gln, or Arg, R 1, R 2, and R 4 are independently any amino acid residue,
Rg a Rg znamenají nezávisle na sobě zbytek aminokyselinyze skupiny Gly, Ala, Pro, Ser, Thr nebo Asn, #7 znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Rg and Rg are each independently an amino acid residue of the group Gly, Ala, Pro, Ser, Thr or Asn, # 7 is an amino acid residue of the group Gly, Ala,
Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asn, Gin, Fne, Tyr, Trp,Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asn, Gin, Fne, Tyr, Trp,
Cys, Líet nebo Pro,Cys, Líet or Pro,
Rg a R^p znamenají nezávisle na sobě zbytek aminokyselinyse skupiny Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe,Tyr nebo Trp, R10 znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Lys, Hisnebo Arg a X a Y mohou nezávisle na sobě chybět nebo mohou znamenat 1 nebo větší počet, například tři další zbytky ami- nokyselin. - 3 -R8 and R7p independently represent an amino acid residue of the group Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe, Tyr or Trp, R10 is an amino acid residue of the group Lys, His or Arg and X and Y may be independently of one another or may be 1 or more, for example three additional amino acid residues. - 3 -
Feptidy obecného vzorce I, a to bez obsahu X a Ybude možno využít například pro výrobu protilátek protiHIV. Jsou-li symboly X nebo Y přítomny, může být jejichdélka jakákoliv, s výhodou však méně než 20, ještě výhod-něji méně než 10, například 3 až 6 zbytků aminokyselin.X-free and Y-free peptides of formula I can be used, for example, to produce anti-HIV antibodies. If X or Y are present, their length may be any, but preferably less than 20, more preferably less than 10, for example 3-6 amino acid residues.
Je zřejmé, že řetězec obecného vzorce I může tvořit bílko-vinu, ve které budou tvořit řetězce X a Y převážnou částmolekuly a řetězce, který bude vyvolávat antigenní odpověď,bude například část exponované smyčky na globulární bílko-vině. S výhodou znamená R^ zbytek ze skupiny Gin nebo Thr,R^ zbytek ze skupiny Ser, Asn, Gin, Arg, nebo ala, zbytekze skupiny Leu, Ile, Gin nebo Arg, R^ zbytek Leu nebo Lys,It will be appreciated that the chain of formula (I) may form a protein in which the X and Y chains will be the predominant part of the molecule, and the chain that elicits the antigenic response will be, for example, the portion of the exposed loop on the globular protein. Preferably, R1 is a residue of the group Gln or Thr, R1 is a radical from the group Ser, Asn, Gln, Arg, or ala, a radical of Leu, Ile, Gln or Arg, R6 is Leu or Lys,
Rg zbytek Gly nebo Asn, R? zbytek ze skupiny Gly, Ala, Leu,Ile, Val, Met, Cys, Fne, Tyr, Trp nebo Ser, Ηθ zbytek Sernebo Ala, R^ zbytek Gly nebo Fhe, R^q Arg nebo Lys, R^ zby-tek ze skupiny Leu, His, Ile nebo Gin a R^2 zbytek ze sku-piny Ala, Ile nebo Val. Zbytek cysteinu v polohách 10 a 16je popřípadě vázán intramolekulárním disulfidovým můstkem.Rg rest Gly or Asn, R? a residue of the group Gly, Ala, Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fne, Tyr, Trp or Ser, Ηθ residue Ser or Ala, R R residue Gly or Fhe, R ^ ^ Arg or Lys, R ^ residue from Leu, His, Ile or Gln and R ^ 2 groups are the moiety of Ala, Ile or Val. The cysteine residue at positions 10 and 16 is optionally bound by an intramolecular disulfide bridge.
Výhodná forma polypeptidů podle vynálezu je tvořenařetězcem aminokyselin obecného vzorce II X-Asp-Gln-RyLeu-R^-Gly-R^-Trp-Gly- (II)A preferred form of the polypeptides of the invention is the amino acid chain of formula II X-Asp-Gln-RyLeu-R 1 -Gly-R 1 -Trp-Gly- (II)
Cys-Ser-Gly-Lys-R11-R12-Cys-Y kde R^, R^, ^2’ X a Y význam, uvedený v obecném vzorci I a R,? znamená zbytek aminokyseliny ze skupiny Gly, Ala,Cys-Ser-Gly-Lys-R 11 -R 12 -Cys-Y where R 4, R 6, R 2 ', X' and Y are as defined in Formula I and R 1, R 2 ', means an amino acid residue from the group Gly, Ala,
Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe, Tyr nebo Trp. S výhodou v řetězci obecného vzorce II R^ znamenáSer, Asn, Gin nebo Arg, R^ znamená Leu, His nebo Ile a Mí -4 - 4 - R.^2 znamená Ile nebo Ala. S výhodou znamená P-γ zbytek zeskupiny Ile, Fhe, Met, Val nebo Leu. Ještě výhodněji zna-mená R^ Ser nebo Asn a R^ znamená Lys. Výhodnou formou polypeptidu obecného vzorce II jeřetězec vzorce X-Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-Gly-Ile-Irp-Leu, Ile, Val, Met, Cys, Fhe, Tyr or Trp. Preferably, in the chain of formula (II), R 1 is Ser, Asn, Gln or Arg, R 1 is Leu, His or Ile and M 1 - 4 - R 1 2 is Ile or Ala. Preferably, the P-γ residue is an Ile, Fhe, Met, Val or Leu moiety. More preferably, R 1 is Ser or Asn and R 1 is Lys. A preferred form of the polypeptide of Formula II is the chain of Formula X-Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-Gly-Ile-Irp-
Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y kde X a Y mají svrchu uvedený význam a zbytky cysteinu vpolohách 10 až 18 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly.Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y wherein X and Y are as defined above and cysteine residues at positions 10 to 18 may be linked by disulfide bridges within the molecule.
Další výhodnou formou polypeptidu obecného vzorce IIje řetězec, v němž R^ znamená Gin nebo Arg, R^ je Leu, Rznamená Ile, Fhe a Met, R^^ znamená Leu, His nebo Ile aznamená ála. Výhodný řetězec má vzorec X-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Jle-Trp-Another preferred form of the polypeptide of Formula II is the chain wherein R 1 is Gln or Arg, R 1 is Leu, R 1 is Ile, Fhe and Met, R 4 is Leu, His or Ile. The preferred chain has the formula X-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Jle-Trp-
Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y kde X a Y mají svrchu uvedený význam a cysteinové zbytkyv polohách 10 a 16 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly.Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y wherein X and Y are as defined above and cysteine residues at positions 10 and 16 may be linked by disulfide bridges within the molecule.
Folypeptidy obecného vzorce II napodobují některéepitopy obalové bílkoviny HIV I.Folypeptides of Formula II mimic some of the HIV coat protein epitopes.
Další výhodnou formou polypeptidu podle vynálezuje řetězec aminokyselin obecného vzorce III X-Rl-R2-R3-R4-R5-Asn-Ser-?rp-Gly-Cys~Ala- (III)Another preferred form of the polypeptide of the invention is the amino acid chain of Formula III X-R1-R2-R3-R4-R5-Asn-Ser-rp-Gly-Cys-Ala- (III)
Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y - 5 - kde R^ znamená Glu nebo Asp, R2 znamená Thr nebo Gin, znamená Ser, Asn, Arg, Gin nebo Ala, R^ znamená Leu, Tle, Arg nebo Gin, R^ znamená Lys nebo Leu a X a Y mají svrchu uvedený význam a cysteinové zbytky vpolohách 10 a 16 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly. Výhodnou formou polypeptidu obecného vzorce III jeřetězec aminokyselin obecného vzorce lila X-Glu-Thr-R^-R.-Lys-Arn-Ser-Trp-Gly- 3 4 (lila)Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y-5 - wherein R 1 is Glu or Asp, R 2 is Thr or Gln, is Ser, Asn, Arg, Gln or Ala, R 4 is Leu, Tle, Arg or Gln, R 1 is Lys or Leu and X and Y are as defined above, and cysteine residues at positions 10 and 16 can be linked by disulfide bridges within the molecule. The preferred form of the polypeptide of Formula III is the amino acid chain of Formula IIIa X-Glu-Thr-R 1 -R 1 -Lys-Arn-Ser-Trp-Gly 3 4 (IIIa)
Cys-Ala-Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y kdeCys-Ala-Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y where
Rj znamená zbytek Ser, Asn, Arg, Gin nebo Ala, R4 znamená Leu, Ile, Arg nebo Gin, X a Y mají svrchu uvedený význam a cysteinové zbytky v polohách 10 a 16 mohou být vázány disulfidovýmimůstky uvnitř molekuly. S výhodou znamená R^ zbytek ser v případě, Se R^znamená Ile a znamená-li Rg zbytek Ala, pak R^ znamenáArg nebo Gin, s výhodou Arg.R 1 is Ser, Asn, Arg, Gln or Ala, R 4 is Leu, Ile, Arg or Gln, X and Y are as defined above, and cysteine residues 10 and 16 can be linked by disulfide bridges within the molecule. Preferably R @ 1 is a radical in the case where R @ 6 is Ile and when R @ g is an Ala, R @ 1 is Ar @ g or G @ n, preferably Arg.
Polypeptidy obecného vzorce III jsou příbuzné ně-kterým epitopům obalových bílkovin viru HIV II. Výhodné polypeptidové řetězce podle vynálezu byly voleny na bázi své topografické podobnosti s v-fce než jednou antigenní determinantou obalových b<lkovin viru HIV.The polypeptides of Formula III are related to some epitopes of HIV II envelope proteins. Preferred polypeptide chains of the invention have been selected based on their topographical similarity to that of the single antigenic determinant of the HIV envelope protein.
Například antigenní determinanta, s níž je původně kon- 6 strnován daný polypeptid jako analogický, může také býttopograficky podobná s jednou nebo větším počtem dalšíchoblastí obalové bílkoviny HIV, pravděpodobně následkemduplikace genu nebo z toho důvodu, že polypeptid je ana-logen diskontinuální determinanty nebo také proto, že po-lypeptidy byly konstruovány tak, aby byly polyvalentní.For example, an antigenic determinant with which a given polypeptide is initially conjugated may also beopographically similar to one or more other regions of the HIV envelope protein, possibly due to gene duplication, or because the polypeptide is anaerobic discontinuous determinants or also because that the polypeptides were designed to be polyvalent.
Liskontinuáln< epitop může být složen ze sekvenciálnfíchepitopů, které jsou si velmi blízké, avšak opačného smys-lu a mohou mít samy o sobě význam jako antigeny, polyvalentní polypeptid může obsahovat dva nebo větší počet konti-nuálních nebo diskontinuálních determinantních analogů vjediném polypeptidovém řetězci, takže je prostředkem kvyvolání tvorby celé řady protilátek, které budou rozpozná-vat dvě nebo větší počet determinant v obalové bílkoviněviru HIV.The discontinuous epitope may be composed of sequence epitopes that are very close to each other but may have the same meaning as antigens, the polyvalent polypeptide may comprise two or more continuous or discontinuous determinant analogs in a single polypeptide chain, so is a means of generating a variety of antibodies that will recognize two or more determinants in the HIV envelope protein.
Peptidy podle vynálezu mohou být vyrobeny napří-klad při použití standardního postupu pomocí S-fluorenylmethoxykarbonylové skupiny (F-Moc), například podle publi-kace Atherton E. a Sheppard R. C. (1985), J. Chem. Soc.Chem. Comm. 165 nebo postupem s použitím butyloxykarbonátu(T-Boc). Správnost struktury a čistota, která je obvyklenad 85 % se pečlivě kontroluje, zvláště je nutno dbát správnosti uspořádání vnitřních disulfidových můstků. K tomutoúčelu je možno ožít různé chromatografické analýzy včetněvysokotlaké kapalinové chromatografie a také spektrografic-ké analýzy včetně Ramanovy spektroskopie. Všechny řetězce jsou označovány kódem se třemipísmeny podle I.U.P.A.C. takto: Gly-glycín, Ala-alanin,Val-valin, Leu-leucin, Ile-isoleucin, Ser-serin, Thr--threonin, Asp-kyselina asparagová, Glu-kyselina glutamo-vá, Asn-asparagin, Gln-glutamin, Lys-lysin, His-histidin,Arg-arginin, Phe-fenylalanin, Tyr-tyrosin, Trp-tryptofan,Cys-cystein, Met-methionin a Pro-prolin.For example, the peptides of the invention can be prepared using standard S-fluorenylmethoxycarbonyl (F-Moc) procedures, for example, according to Atherton E. and Sheppard R. C. (1985), J. Chem. Soc.Chem. Comm. 165 or a process using butyloxycarbonate (T-Boc). The accuracy of the structure and the purity of the usual 85% are carefully controlled, especially the proper arrangement of the internal disulfide bridges. Various chromatographic analyzes including high pressure liquid chromatography as well as spectrographic analysis including Raman spectroscopy can be used for this purpose. All strings are labeled with a three letter code according to I.U.P.A.C. as follows: Gly-glycine, Ala-alanine, Val-valine, Leu-leucine, Ile-isoleucine, Ser-serine, Thr-threonine, Asp-aspartic acid, Glu-glutamic acid, Asn-asparagine, Gln-glutamine , Lys-lysine, His-histidine, Arg-arginine, Phe-phenylalanine, Tyr-tyrosine, Trp-tryptophan, Cys-cysteine, Met-methionine and Pro-proline.
Polypeptidy podle vynálezu nebo protilátky protitěmto polypeptidům je možno podávat jako takové nebo spolu - 7 - s dalšími látkami, jako jsou 3 '-azido-3 '-deoxyibyoiáiň.(AZT-zidovudin), které působí na různé úrovái tak, že dojdek interferenci při replikaci genetického materiálu virua/nebo k innibici proteázy HIV, která blokuje činnost en-zymu, který má podstatný význam pro vývoj viru.Polypeptides of the invention or antibodies to these polypeptides may be administered as such or together with other agents such as 3'-azido-3'-deoxyibyloxy (AZT-zidovudine), which act at different levels to interfere with replicating the viral genetic material (s) or the innibition of the HIV protease, which blocks the enzyme activity, which is essential for virus development.
Polypeptidy podle vynálezu je mošno užít k produk-ci protilátek, které budou reagovat s bílkovinami obaluviru, které jsou produkovány širokou škálou kmenů viruHIV I a/nebo HIV II. Analýzy prokázaly, že v případě, žetopografické, elektrostatické a/nebo strukturní vlastnostipolypeptidů podle vynálezu jsou takové, že je vysoce pravdě-podobné, že vyvolají tvorbu protilátek, které budou reagovatzkříženou reakcí s obalovými bílkovinami HIV několika nebomnoha kmenů, může být dosaženo dalšího pokroku tak, že seněkolik různých polypeptidů tohoto typu váže za vzniku vět-šího polypeptidů. Takový polypeptid je možno vyjádřit obec-ným vzorcem IV ΜΑΑλ íiv) kde F a G znamenají nezávisle na sobě polypeptidy obecnýchvzorců I až lila, L znamená vazný řetězec, a, b, c znamenají nezávisle na sobě O nebo 1 a man jsou kladná čísla, například 1 až 10 včetně. L znamená s výhodou krátký, flexibilní úsek poly-peptidového řetězce, například Gly-Gly-Gly-Gly-Gly,Gly-Pro-Gly-Fro-Gly-Pro nebo Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala.The polypeptides of the invention can be used to produce antibodies that will react with envelope proteins that are produced by a wide variety of viruHIV I and / or HIV II strains. Analyzes have shown that in the case of the cytopathic, electrostatic and / or structural properties of the polypeptides of the invention, it is such that it is highly likely to induce the production of antibodies that will react by cross-reacting with the HIV coat proteins of several or many strains. that several different polypeptides of this type bind to form a larger polypeptide. Such a polypeptide may be represented by the general formula (IV): wherein F and G are independently polypeptides of formulas I to IIIa, L is a chain of binding, a, b, c are independently 0 or 1, and m and n are positive numbers, for example, 1 to 10 inclusive. L is preferably a short, flexible segment of the polypeptide chain, for example, Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, Gly-Pro-Gly-Fro-Gly-Pro or Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala.
Je zřejmé, že v každém opakování je možno užít odlišnouvariantu polypeptidů podle vynálezu.It will be appreciated that a variety of polypeptides of the invention may be used in each repeat.
Folyvalentní analogy determinant obecného vzorce IVjsou vlastně pseudohomopolyvalentní vzhledem k tomu, že va-rianty v podstatě téhož analogu determinanty se opakují vjediném řetězci polypeptidu. Mimoto je možno očekávat, žetaké jednoduché imunogenní hoaopolyvalentní polypeptidy,které obsahují mnohočetné kopie téže varianty téhož analo-gu determinanty obecného vzorce I až lila budou účinné vesvrchu uvedeném smyslu.The folyvalent analogs of the determinant of formula IV are actually pseudo-homopolyvalent since the largely identical analog determinants are repeated in a single polypeptide chain. In addition, some simple immunogenic holopolyvalent polypeptides that contain multiple copies of the same variant of the same analogue determinant of Formula I through IIIa are expected to be effective in the above sense.
Pseudohomopolyvalentní imunogenní polypeptidy bu-dou pravděpodobně zvláště cenné jako vakcíny vzhledem ktomu, Že by měly vyvolávat produkci celé řady neutralizu-jících protilátek s podobnou, avšak nikoliv stejnou spe-cifičností, které by zkříženě reagovaly s obalovou bílko-vinou širší škály kmenů HIV a jejich účinnost by tedjr bylazvýšena a za"jištovala ochrannou imunitu. Bude patrně takévýhodné konstruovat heteropolyvalentr.í polypeptidy s obsa-hem jedné nebo většího počtu kopií polypeptidu podle vyná-lezu v jakémkoliv pořadí a mimoto budou obsahovat jeden ne-bo větší počet dalších polypeptidu jako analogů determinant.Tyto polypeptidy je možno vyjádřit obecným vzorcem VPseudohomopolyvalent immunogenic polypeptides are likely to be particularly valuable as vaccines since they should induce the production of a variety of neutralizing antibodies with similar but not the same specificity that would cross-react with the envelope protein of a wider range of HIV strains and their It would also be advantageous to construct heteropolyvalent polypeptides containing one or more copies of the polypeptide of the invention in any order, and in addition to one or more additional polypeptides as analogs. These polypeptides can be represented by the general formula (V)
La-[ (v) kde F znamená polypeptió, kteréhokoliv ze vzorců I až rlj a, G znamená polypeptid obecného vzorce I až lila nebo ještě jiný řetězec, man jsou kladná čísla, například 1 až 10 včetně ad, e znamenají nezávisle na sobě 0 nebo 1. S výhodou znamená L krátký flexibilní úsek poly- peptidového řetězce, například Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, - 9 -La- [(v) wherein F is a polypeptide of any of formulas I to r1j and G is a polypeptide of formula I to IIIa or yet another chain, m and n are positive numbers, e.g. or 1. Preferably, L is a short flexible poly-peptide chain, for example, Gly-Gly-Gly-Gly-Gly, -9-
Giy-Pro-Gly-Pro-GIy-Pro nebo Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala.Ve výhodné formě peptidu obecného vzorce V znamená G poly-peptidový řetězec obecného vzorce I až lila nebo následu-jící řetězec:Gly-Pro-Gly-Pro-Gly-Pro or Gly-Ser-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala. In a preferred form of the peptide of Formula V, G is a peptide peptide of Formula I to IIIa or the following chain:
X-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Gly-Gly-Glu-Leu-Y kde každý ze zbytků Gly může být nahrazen jakoukoliv jinouaminokyselinou a/nebo X a Y mohou nezávisle na sobě chybětnebo mohou znamenat jeden nebo větší počet, například třizbytky aminokyselin nebo může G znamenat ještě jiný poly-peptidcvý řetězec, příbuzný antigenním bílkovinám HIV.X-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Gly-Gly-Glu-Leu-Y wherein each of the Gly residues can be replaced by any other amino acid and / or X and Y may be absent or may be one or more, e.g. or three may be another poly-peptide chain related to HIV antigenic proteins.
Je zřejmé, že podle vynálezu je možno do peptiduzařadit jakékoliv antigenně významné subfragmenty a/nebovarianty svrchu uvedených polypeptidových řetězců, kterési v podstatě udrží strukturu a funkci původního polypeptidu. Zejména je možné nahradit kterýkoliv zbytek zbytkem sesrovnatelnými strukturními a/nebo fyzikálními vlastnostmivčetně substituce vzácnými, avšak přirozeně se vyskytují-cími zbytky, jako D-stereoisomery nebo je možno zařaditsyntetické analogy aminokyselin. Je například možné pro-vést substituci zbytku za jiný zbytek v sestavách, kterébudou dále definovány a které rovněž rvoří podstatu vyná-lezu: sestava 1 - Ala, Val, Leu, Ile, Fhe, Tyr, Trp a Met,sestava 2 - Ser, Thr, Asn, a Gin, sestava 3 - Asp a Glu,sestava 4 - Lys, His a Arg, sestava 5 - Asn a Asp, sesta-va 6 - Glu a Gin, sestava 7 - Gly, Ala, Pro, Ser a Thr.D-stereoisomery všech typů aminokyselin je možno nahraditnapříklad zbytky D-Fne, D-Tyr a D-Trp.It will be appreciated that any antigenically relevant subfragments and / or variants of the above-mentioned polypeptide chains that substantially retain the structure and function of the original polypeptide may be included in the peptide of the invention. In particular, it is possible to replace any residue with residue-comparable structural and / or physical properties, including substitution with rare but naturally occurring residues, such as D-stereoisomers or possibly synthetic amino acid analogues. For example, it is possible to carry out the substitution of a residue for another residue in the kits, which will be further defined and which also form the basis of the invention: Assembly 1 - Ala, Val, Leu, Ile, Fhe, Tyr, Trp and Met, Assembly 2 - Ser, Thr, Asn, and Gin, Set 3 - Asp and Glu, Set 4 - Lys, His and Arg, Set 5 - Asn and Asp, Set 6 - Glu and Gin, Set 7 - Gly, Ala, Pro, Ser and Thr.D-stereoisomers of all amino acid types can be replaced, for example, by D-Fne, D-Tyr and D-Trp residues.
Ve výhodném provedení vynálezu mohou X a Y nezá-visle na sobě obsahovat jeden nebo větší počet segmentůřetězce bílkoviny se schopností účinnosti epitopu proT-buňky. Například segmenty řetězce aminokyselin obecnéhovzorce 1-2-3-4, kde 1 znamená Gly nebo aminokyselinu, 10 - která nese náboj, například Lys, His, Arg, Asp nebo Gly, 2 znamená hydrofobní aminokyselinu, jako Ile, Leu, Val,In a preferred embodiment of the invention, X and Y may independently contain one or more protein chain strand segments capable of pro-cell epitope efficiency. For example, the amino acid chain segments of general formula 1-2-3-4, where 1 is Gly or an amino acid, 10 - which carries a charge, for example Lys, His, Arg, Asp or Gly, 2 is a hydrophobic amino acid such as Ile, Leu, Val,
Met, Tyr, Fhe, Trp nebo Ala, 3 znamená hydrofobní aminoky-selinu ve svrchu uvedeném významu nebo polární aminokyse-linu bez náboje, jako Asn, Ser, Thr, Pro, Gin, nebo Gly a4 znamená polární aminokyselinu, jako Lys, Arg, His, Glu,Asp, Asn, Gin, Ser, Thr nebo Pro se chovají alespoň v ně-kterých případech jako epitopy pro T-buňky, jak bylo po-psáno v Rothbard J. B. a Taylor W. R. (1988), A sequencepattern in common to T-cell epitopes, v EMBO Journal 7 (1),93 - 100. Fodobné segmenty je možno vyjádřit řetězcem1 -2 -3 "4 -5 , kde 1 má obdobný význam jako 1 svrchu, 2* má význam jako 2, 3* a 4' mají význam jako 3 a 5' mávýznam jako 4. Obě formy těchto segmentů jsou zahrnuty dooboru vynálezu a mohou obsahovat jeden nebo větší početepitopň pro T-buňky (s výhodou méně než 5), které mohoubýt svrchu uvedeného typu nebo mohou mít odlišnou struk-turu a mohou být od sebe odděleny dělicími segmenty jaké-koliv délky a jakékoliv struktury, s výhodou obsahují ty-to dělicí,segmenty méně než pět zbytků aminokyselin, na-příklad zbytky Gly, Ala, Pro, Asn, Thr nebo Ser, nebo můžejít o polyfunkční vazné řetězce, jako aminokyseliny s vý-jimkou a-aminokyselin. C— nebo R-terminální vazný řetězecmůže představovat úplnou bílkovinu, takže odpadá nutnostkonjugace s nosnou bílkovinou.Met, Tyr, Fhe, Trp, or Ala, 3 is a hydrophobic amino acid as defined above or a polar, uncharged amino acid such as Asn, Ser, Thr, Pro, Gln, or Gly a4 is a polar amino acid such as Lys, Arg , His, Glu, Asp, Asn, Gln, Ser, Thr or Pro behave in at least some cases as T-cell epitopes as described in Rothbard JB and Taylor WR (1988), A sequencepattern in common T-cell epitopes, in EMBO Journal 7 (1), 93-100. Similar segments can be expressed by a chain of -1 -2 -3 "-4-5, where 1 has the same meaning as 1 above, 2 * has the meaning of 2, 3 * and 4 'are as 3 and 5' as 4. Both forms of these segments are encompassed by the invention and may include one or more T cell epitopes (preferably less than 5) that may be of the above type or may have different structure and can be separated by dividing segments of any length and any structure, with These include those subdivision segments of less than five amino acid residues, such as Gly, Ala, Pro, Asn, Thr or Ser residues, or polyfunctional binding chains, such as amino acids except α-amino acids. The C- or R-terminal backbone may represent a complete protein, so the need for conjugation with the carrier protein is eliminated.
Vynález zahrnuje také deriváty polypeptidů obecné-ho vzorce I, v němž X nebo Y jsou nebo znamenají "retro--inverso" aminokyselinu, to znamená bifunkční amin s funkč·ní skupinou, která odpovídá aminokyselině. Například můžebýt vyjádřen analog podle vynálezu s obsahem retro-inversoaminokyseliny obecným vzorcemThe invention also encompasses derivatives of the polypeptides of formula I wherein X or Y is or is a "retro-inverso" amino acid, i.e., a bifunctional amine having a functional group that corresponds to an amino acid. For example, an analog of the invention containing a retro-inverso amino acid may be represented by the general formula
I i - 11 - r A1-N-C-N-A2 í i iI-11-r Al-N-C-N-A2-i
Η Η H kde R znamená jakoukoliv funkční skupinu, například glycino-vý postranní řetězec a AI a A2 znamenají kopie jednoho se svrchu uvedenýchanalogů (avšak nikoliv nezbytně téhož analogu),které jsou připojeny na K- nebo C-terminální za-končení .Η Η H where R is any functional group, for example, the glycine side chain and A1 and A2 are copies of one of the above-mentioned analogues (but not necessarily the same analogue) that are attached to the K- or C-terminal end.
Popřípadě může struktura obsahovat epitopy pro T--buiňky, jak již bylo uvedeno svrchu.Optionally, the structure may comprise T-cell epitopes as discussed above.
Retro-inverso modifikace peptidů zahrnuje změnujedné nebo většího počtu peptidových vazeb za vzniku analo-gů, které jsou vzhledem k enzymatické degradaci odolnějšínež původní molekula a jsou vhodnou eestou pro vznik roz-větvených imunogenů s obsahem vysoké koncentrace epitopů .The retro-inverso modification of the peptides involves altering one or more peptide bonds to form analogs that are more resistant to the original molecule due to enzymatic degradation and are suitable for generating branched immunogens containing high concentration of epitopes.
Je možno předpokládat možné využití těchto látek pro syn-tézu retro-inverso analogů s krátkým řetězcem a s vysokoubiologickou aktivitou ve velkém měřítku.The use of these compounds for the synthesis of short-chain retro-inverso analogues and large-scale, high-biological activity can be envisaged.
Je nutno uvést, že analogy s obsahem retro-inversoderivátů aminokyselin nelze vyrobit přímo s využitím re-kombinantní DNA. Avšak je možno vyrobit základní analogy,"které je pak možno čistit a chemicky vázat na retro-inver-so aminokyseliny metodami, obvyklými v chemii peptidů.It should be noted that analogs containing retro-inversoderivative amino acids cannot be produced directly using recombinant DNA. However, basic analogs can be made which can then be purified and chemically coupled to retro-in-amino acids by methods known in peptide chemistry.
Vhodným novým postupem pro syntézu na řevné fázi je postup s použitím pryskyřice polyamidového typu, který byl pro retro-inverso peptidy poprán v publikaci Gazerro H., Pinori M. a Verdini A. S. , (1590), A new generál proceduře for the soiid-phase synthesis of retro-inverso peptides, v Innovation 12 and Perspectives in Solid Phase Synthesis, Ed. Roger Epton, SPCC (GB), Ltd, Birmingham, Velká Británie.A suitable new procedure for the synthesis on the solid phase is a process using a polyamide type resin which has been denied for retro-inverso peptides by Gazerro H., Pinori M. and Verdini AS, (1590), A new general procedure for the soiid-phase synthesis of retro-inverso peptides, in Innovation 12 and Perspectives in Solid Phase Synthesis, Ed. Roger Epton, SPCC (GB), Ltd, Birmingham, UK.
Polypeptidy je možno vázat na nosná molekuly buopřes chemická skupiny, a to v rámci polypeptidů nebo přespřidaná aminokyseliny na C- nebo N-terminálním zakončení,tyto skupiny mohou být obklopeny jednou nebo větším počtemdalších aminokyselin nebo odděleně od polypeptidů tak, abybylo možno dosáhnout dobrá imunologické funkce. Sada vazebje vhodná pro tento účel, například je možno zařadit postran-ní řetězce zbytků Tyr, Cys a Lys. Vhodným nosičem je takéčištěný bílkovinný derivát tuberkulinu (PPD) toxoid tetanu,choleratoxin a jeho podjednotka B, ovalbumin, albumin zesera skotu, inhibitor trypsinu ze sojových bobů, muramyl-dipeptidy a jejich analogy a taká Braunův lipoprotein,přesto že je možno užít taká jiné nosiče, jak bude odborní-kům zřejmá, při použití PPD jako nosiče pro polypeptidypodle vynálezu je možno dosáhnout vyššího titru protilátekv případě, že příjemce konjugátu polypeptidů-PPD je jižcitlivý na rubErkulin, například protože byla dříve prove-dena vakcinace BCG. Pro vakcínu v lidském lékařství jenutno uvést, že ve Velké Britanii a dalších státech seběžně vakcinace BCG zdarma provádí a populace je protove své většině citlivá na PPD. Z tohoto důvodu se považujePPD v těchto státech za výhodný nosič.Polypeptides can be linked to a carrier molecule either by a chemical moiety, within a polypeptide, or through an added amino acid at the C- or N-terminal end, which may be flanked by one or more additional amino acids or separately from the polypeptides such that good immunological function can be achieved . A set of linkages is suitable for this purpose, for example, side chains of Tyr, Cys and Lys. A suitable carrier is also a purified tuberculin protein derivative (PPD) tetanus toxoid, choleratoxin and its subunit B, ovalbumin, bovine albumin, soybean trypsin inhibitor, muramyl dipeptides and their analogs, and such Braun lipoprotein, although such other carriers may be used As will be appreciated by those skilled in the art, when using PPD as a carrier for a polypeptide of the invention, a higher antibody titer can be obtained if the recipient of the PPD-polypeptide conjugate is already susceptible to rubricrine, for example, because BCG vaccination has previously been performed. For the human medicine vaccine, it should be noted that BCG is free of charge in the UK and other countries, and the population is mostly PPD-sensitive. For this reason, the PPD in these states is considered a preferred carrier.
Způsob vazby polypeptidů na nosič bude záviset napovaze materiálů, které jsou na sebe vázány. Napříkladzbytek lysinu v nosiči je možno vázat na C-terminální ne-bo jiný cysteinový zbytek v polypeptidů působením N-gamma--maleimidobutyryloxysukcinimidu podle publikace Kitagawa T. a Ackawa T. (1976), J. Biochem. 79 Ž33> Další vaznéreakce a vhodné reakční složky pro tyto reakce byly rov-něž popsány v literatuře.The method of binding the polypeptides to the carrier will depend upon the materials bound together. For example, the lysine residue in the carrier can be bound to the C-terminal or other cysteine residue in the polypeptide by treatment with N-gamma-maleimidobutyryloxy succinimide according to Kitagawa T. and Ackawa T. (1976), J. Biochem. Other ligand reactions and suitable reactants for these reactions have also been described in the literature.
Polypeptidy jako takové nebo vázané na molekulunosiče je možno podávat jakýmkoliv způsobem, jako paren- 13 - terálně do nosu, perorálně, rektálně nebo intravaginálně, popřípadě spolu s běžnými pomocnými látkami jako je hydro-^xid hlinitý jako Freundův úplný nebo neúplný pomocný pro-středek, a/nebo jiná látka, která může způsobit potenciaciimunologického účinku. Vynález rovněž zahrnuje prostředkys obsahem polypeptidů podle vynálezu, z nichž se tyto poly-peptidy uvolňují pomalu, může jít o podkožní implantát neboo depotní formu, jako jsou liposomy, popsané v publikaciAllison A. C. a Gregoriadis G., (1974) Nátuře (Londýn) 252,252 nebo jde o mikrokapsle, vyrobené z kopolymeru kyselinymléčné a kyseliny glykolové podle publikace Gresser J. D. aSanderson J. Ξ. (1984) v Eiopolymer Controlled ReleaseSystems, str. 127 - 138, vyd. D.L. Wise.Polypeptides as such or bound to molecular carriers can be administered by any means, such as parenterally, nasally, orally, rectally or intravaginally, optionally together with conventional excipients such as aluminum hydroxide such as Freund's complete or incomplete adjuvant , and / or other substance that may cause a potentiation effect. The invention also encompasses compositions comprising the polypeptides of the invention, from which the peptides are released slowly, may be a subcutaneous implant or a depot form such as liposomes as described in Allison AC and Gregoriadis G., (1974) Nature (London) 252,252 or these are microcapsules made from a copolymer of lactic acid and glycolic acid according to Gresser JD and Sanderson J. (1984) in Controlled Release Eystemers, pp. 127-138, ed. Wise.
Polypeptidy podle vynálezu je možno syntetizovatjakýmkoliv běžným způsobem, jako přímo při použití manuál-ní nebo automatizované syntézy peptidů nebo nepřímo přessyntézu RNA nebo DNA postupy, které jsou obvyklé v moleku-lární biologii a genetickém inženýrství. Tyto techniky jemožno užít také k výrobě hybridních bílkovin s obsahem jed-noho nebo většího počtu polypeptidů, zařazených do dalšíhopolypeptidového řetězce.The polypeptides of the invention can be synthesized by any conventional means, such as directly using manual or automated peptide synthesis, or indirectly by RNA synthesis or DNA synthesis procedures customary in molecular biology and genetic engineering. These techniques may also be used to produce hybrid proteins containing one or more polypeptides encompassed by another polypeptide chain.
Vynález tedy zahrnuje také molekulu DNA, která jekódem pro alespoň jeden syntetický polypeptid podle vyná-lezu, s výhodou je tato molekula zařazena do vhodného vek-toru pro expresi, schopného replikace v mikroorganismechnebo v buňkách ssavců. Tato DNA může také tvořit část ře-tězce DNA pro delší produkt, to znamená, že k expresi po-lypeptidů podle vynálezu dochází jako části jiných bílkovin,do nichž byly tyto polypeptidy vřazeny genetickým inženýr-stvím. Praktickým popisem těchto technik je publikaceMolecular cloning: a laboratory manual, Sambrook J., FritschΞ. F. a Maniatis T., 2. vydání, 1989.Accordingly, the invention also encompasses a DNA molecule which is a code for at least one synthetic polypeptide of the invention, preferably the molecule is inserted into a suitable expression vector capable of replication in microorganisms or mammalian cells. This DNA may also form part of the DNA strand for a longer product, i.e., the expression of the polypeptides of the invention occurs as part of other proteins into which the polypeptides have been incorporated by genetic engineering. A practical description of these techniques is the Molecular cloning: a laboratory manual, Sambrook J., Fritsch. F. and Maniatis T., 2nd Edition, 1989.
Polypeptidy podle vynálezu je možno použít jako ta-kové nebo vázané na vhodný nosič, jako: 14 - a) peptidové vakciny k zábraně infekce jednim nebo většímpočtem kmenů HIV, b) jako vazné látky například při diagnostice ser nemocných,pozitivních na HIV, c) ke kontrole kvality v testech, například při vazbě proti-látek proti těmto polypeptidům, d) jako antigenní látky pro tvorbu monoklonálních nebopolyklonálnícn protilátek při imunizaci živočichů,tyto protilátky je možno využít například k i) vědeckým studiím viru HIV, ii) jako diagnostický prostředek, například jako částhistocheraických reakčních činidel, iii) k pasivní imunizaci nemocných virem HIV, buS k léčběAIDS nebo v kombinaci s dalšími účinnými látkami, jako AZT a/nebo inhibitory proteázy HIV, a iv) jako prostředek k zacílení účinku jiných-látek, jakojsou ΑΖΪ nebo inhibitor proteázy viru HIV v buňkách,infikovaných virem HIV, u nichž dochází k expresiobalových bílkovin HIV na jejich povrchu, přičemžtyto látky jsou bučí kovalentně vázány nebo jinak spojeny, například ve formě iiposomů, které tyto látky obsahují, tyto prostředky mohou rovněž obsahovatprotilátky, vytvořené proti jakémukoliv polypeptidus antigenním účinkem. Vynález se rovněž týká foremnebo fragmentů, vzniklých genetickým inženýrstvím,zejména oblastí V^ protilátek proti těmto polypepti-dům a humanizovaných forem protilátek, vytvořenýchproti těmto polypeptidům u jiných živočichů, a e) k léčbě infekcí HIV, buč omezením vazby viru HIV na buňky člověka nebo živočichů nebo rozrušením trojroz- měrné organizace viru in vivo, jakož i k vědeckým stu- diím virů HIV in vitro. - 15 -The polypeptides of the invention may be used as such or linked to a suitable carrier, such as: 14 - a) peptide vaccines to prevent infection by one or more HIV strains, b) as binding agents, for example, in the diagnosis of HIV positive patients, c) for quality control in assays, for example, for binding antibodies to these polypeptides, d) as antigenic agents for the production of monoclonal or polyclonal antibodies in immunization of animals, such antibodies can be used, for example, in HIV scientific studies, ii) as a diagnostic means, e.g. as part of histochemical reagents, iii) to passively immunize HIV patients, either to treat AIDS or in combination with other active agents such as AZT and / or HIV protease inhibitors, and iv) as a means to target the action of other agents such as ΑΖΪ or an inhibitor HIV virus proteases in cells infected with HIV HIV expressiobal proteins on their surface, which are either covalently bound or otherwise linked, for example in the form of liposomes containing them, may also contain antibodies generated against any polypeptide by antigenic action. The invention also relates to forms or fragments produced by genetic engineering, in particular V1 antibodies to these polypeptides and humanized forms of antibodies produced against these polypeptides in other animals, and e) to the treatment of HIV infections, either by limiting the binding of HIV to human or animal cells or disrupting the three-dimensional organization of the virus in vivo, as well as the scientific studies of HIV viruses in vitro. - 15 -
Pokud jde o detekci a diagnózu HIV nebo protilátekproti HIV, odborníkům bude zřejmé, že existuje celá radaimunologických zkoušek, které jsou v oboru známy, jako jsoupoužití laminátových struktur, kompetitivní a nekompetitiv-vní zkoušky a přímé a nepřímé značení.With regard to the detection and diagnosis of HIV or HIV antibodies, it will be apparent to those skilled in the art that there are a number of immunoassays known in the art, such as the use of laminate structures, competitive and non-competitive assays, and direct and indirect labeling.
Vynález zahrnuje rovněž sestavu pro průkaz viru HIVnebo protilátek proti tomuto viru, tato sestava obsahujealespoň jeden syntetický polypeptid podle vynálezu.The invention also encompasses an assembly for detecting HIV or antibodies against the virus, which assembly comprises at least one synthetic polypeptide of the invention.
Polyklonální nebo monoklonální protilátky, humani-zované formy těchto protilátek, uvedené například v publi-kaci Thompson K. M. a další, (1936), Immunology 58, 157 až160, protilátky proti jediné doméně, například podle publi-kace Ward S. S., Gussow D., Griffiths A. D., Jones P. aWinter G. (1989), Hature 341, 544 až 546 a protilátky, kte-ré by mohly procházet barierou mezi krevním oběhem v mozkua mimo mozek a které jsou schopné se specificky vázat nasyntetický polypeptid podle vynálezu je možno syntetizovatobvyklým způsobem, tyto protilátky jsou rovněž předmětemvynálezu. Protilátky podle vynálezu je možno užít mimo jinék diagnostice infekce HIV u ssavců tak, že se inkubuje vzo-rek tkáně nebo tělesné tekutiny ssavce s účinným množstvímprotilátky a pak se stanoví, zda došlo ke zkřížené reakcimezi vzorkem a protilátkou, a to jakou rychlostí a v jakémrozsahu. Diagnostická sestavg s obsahem alespoň jedné tako-vé protilátky rovněž tvoří součást vynálezu.Polyclonal or monoclonal antibodies, humanized forms of these antibodies are disclosed, for example, in Thompson KM et al., (1936), Immunology 58, 157-160, antibodies against a single domain, for example, according to Ward SS, Gussow D., Griffiths AD, Jones P. andinter G. (1989), Hature 341, 544-546, and antibodies that could cross the bloodstream barrier in the brain and outside the brain and which are capable of specifically binding the synthetic polypeptide of the invention can be synthesized by the usual methods, these antibodies are also within the scope of the invention. The antibodies of the invention can be used, inter alia, to diagnose HIV infection in mammals by incubating the tissue or body fluid of the mammal with an effective amount of antibody and then determining whether cross-reaction with the sample has occurred, at what rate and in what range . The diagnostic kit comprising at least one such antibody also forms part of the invention.
Vynález se rovněž týká syntetických polypeptidů,určených pro léčbu nebo profylaxi infekce HIV u ssavcůa/nebo ke stimulaci imunologického systému ssavců a/nebok blokování buněčných receptorů pro virus HIV a pro výrobuléků, vhodných k tomuto účelu. Vynález zahrnuje také far-maceutické prostředky, které jako účinnou složku obsahujialespoň jeden polypeptid nebo konjugát polypeptidů a nosičespolu s jedním nebo větším počtem farmaceutických pomocnýchlátek, a/nebo nosičů. Prostředky mohou být určeny' pro per· - 16 orální, rektální, nosní a zejména parenterální podánívčetně podání do centrálního nervového systému.The invention also relates to synthetic polypeptides for the treatment or prophylaxis of HIV infection in a mammal and / or to stimulate the mammalian immunological system and / or blocking cellular receptors for the HIV virus, and for products suitable for this purpose. The invention also includes pharmaceutical compositions comprising at least one polypeptide or conjugate of polypeptides and carrier together with one or more pharmaceutical excipients and / or carriers as an active ingredient. The compositions may be formulated for oral, rectal, nasal and especially parenteral administration, including administration to the central nervous system.
Peptidy podle vynálezu je tedy možno užít k léčběa profylaxi infekce HIV u člověka a/nebo ke stimulaci imu-nologického systému ssavců a/nebo k blokování buněčnýchreceptorů pro virus HIV, v těchto případech se podává účin-né množství těchto polypeptidů jako takových.nebo v kombi-naci s jinými látkami, určenými pro léčbu AIDS, jako jsouAZT a/nebo inhibitory proteázy HIV.Accordingly, the peptides of the invention can be used to treat the prophylaxis of HIV infection in humans and / or to stimulate the mammalian immune system and / or to block HIV cell receptors, in which case an effective amount of such polypeptides is administered. combination with other AIDS treatment agents such as AZT and / or HIV protease inhibitors.
Praktické provedení vynálezu bude osvětleno násle-dujícími příklady, které však vynález nemají omezovat. Příklady provedení vynálezu Příklad 1The invention will now be illustrated by the following non-limiting examples. EXAMPLES Example 1
Byla syntetizována C-terminálně extendovaná formazákladního peptidu a) s řetězcemThe C-terminally extended form of the backbone peptide a) was synthesized with a chain
Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-GIy-Ile-Trp-Asp-Gln-Ser-Leu-Lys-GIy-Ile-Trp-
Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys při použití standardního postupu na pevné fázi (F-moc)a pak byl vytvořen intramolekulární disulfidový můstekmezi oběma cysteinovými zbytky. Peptid byl odštěpen odpryskyřice kyselinou trifluoroctovou a pak byl čištěnfiltrací na gelu, chromatografií na iontoměniči a vysoko-tlakou kapalinovou chromatografií v reversní fázi. Čisto-ta výsledného peptidu byla vyšší než 85 %· Do molekulybyl zařazen G-terainální alaninový zbytek, aby bylo možnosnáze uskutečnit konjugaci. Feptid byl rozpuštěn ve fyziologickém roztoku chloridu sodného s fosfátovým pufrem(PBS, 5 mg/ml) a pak byl přidán stejný objem ovalbuminu - 17 - (5 mg/ml) a pak byl přidán glutaraldehyd v konečná koncen-traci 0,1 %. Saěs konjugátu byla ponechána 30 minut stát apak byla emulgována s Freundovým pomocným činidlem. Každáovce (5 ovcí/skupina) byla imunisovéna 250/Ug peptidu veFreundově úplném pomocném prostředku (FCA) a po 14 dnechbylo podáno ještě stejné množství ve Freundově neúplném po-mocném prostředku (FIA). Další dávky byly podány po 3 až 4týdnech ve FIA. Vzorky krve byly odebrány 7 až 10 dnů poposlední dávce a byly zkoumány na vazbu na obalovou bílkovi-nu HIV.Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys using a standard solid-phase procedure (F-moc) and then creating an intramolecular disulfide bridge between the two cysteine residues. The peptide was cleaved with trifluoroacetic acid and then purified by gel filtration, ion exchange chromatography, and high-pressure reverse phase liquid chromatography. Purity of the resulting peptide was greater than 85%. G-terainal alanine residue was included in the molecule to allow conjugation to take place. The peptide was dissolved in phosphate buffered saline (PBS, 5 mg / ml) and then an equal volume of ovalbumin - 17 - (5 mg / ml) was added, followed by the addition of glutaraldehyde at a final concentration of 0.1%. The sausage conjugate was allowed to stand for 30 minutes and was emulsified with Freund's adjuvant. Each (5 sheep / group) was immunized with 250 µg of peptide in Freund's complete adjuvant (FCA) and after 14 days an equal amount was administered in Freund's incomplete adjuvant (FIA). Additional doses were given after 3-4 weeks in the FIA. Blood samples were collected for 7-10 days last dose and were examined for binding to HIV envelope protein.
Stanovení protilátek proti syntetickému peptidu,které rozpoznávají obalovou bílkovinu HIV bylo provedenopři použití rekombinantního viru vaccinia (například Macket14. a Smitn G. L. (1986), J. gen. Virol. 6? > 2067, obecnámethologie), tento virus byl konstruován tak, aby došlo kexpresi obalové bílkoviny HIV na povrchu infikovaných buněk.Tento postup je výhodný vzhledem k tomu, že vazba na anti-gen je měřena na povrchu buněk, infikovaných virem a z toho-to důvodu může být průkaznější než vazba na antigenv roz-toku, protože některé potenciální epitopy obalové bílkovinymohou být in vivo maskovány v důsledku interakce s fosfoli-pidy v membráně. Ledvinové buňky opic CV1, pěstované v jednévrstvě na mikrotitračních plotnách s 96 vyhloubeními bylyinfikovány rekombinantním virem vaccinia. Tato konstrukceviru obsahovala gen, který je kódem pro obalový glykoproteinHIV a je známo, že k expresi této látky a také ke zpracovánítéto látky dochází na povrchu infikovaných buněk. Byly pro-vedeny zkoušky s antiserem ovcí ve dvojnásobném opakování.Množství 50/ul antisera v různé koncentraci bylo přidáno dovyhloubení a směs byla inkubována 4 hodiny, pak byly buňkydvakrát promyty a bylo přidáno antiserum proti ovčím bílko-vinám, značené peroxidázou. Kladná reakce byla stanovenaodečtením optické hustoty příslušným zařízením.The determination of antibodies against the synthetic peptide that recognize HIV envelope protein was performed using recombinant vaccinia virus (e.g., Macket14 and Smitn GL (1986), J. gen. Virol. 6? 2067, generethethology); coexpression of HIV envelope protein on the surface of infected cells. This approach is advantageous since binding to the anti-gene is measured on the surface of the virus infected cells and may therefore be more prominent than the antigen binding in the flow because some potential coat protein epitopes may be masked in vivo due to interaction with phospholipids in the membrane. CV1 monkey monoclonal kidney cells grown in 96-well microtiter plates were infected with recombinant vaccinia virus. This construction virus contained the gene encoding the envelope glycoprotein HIV and it is known that the expression of this substance and the processing of the substance occurs on the surface of the infected cells. Twice antiserum tests were carried out. The amount of 50 µl of antiserum at different concentrations was added to the digestion and the mixture was incubated for 4 hours, then the cells were washed twice and peroxidase-labeled anti-sheep protein antiserum was added. The positive reaction was determined by subtracting the optical density with the appropriate equipment.
Bylo prokázáno, že antisera proti peptidu majíAntisera have been shown to have anti-peptide
/ X zkříženou reakci a vysokou afinitu k obalové bílkovině 18 HIV, k jejíž expresi dochází na povrchu infikovaných buněk,jak je zřejmé z tabulek 1 a 1A. Tyto výsledky potvrzují, žeuvedené protilátky proti peptidu budou cenné pro výzkum ipro diagnostické líčely.[X] cross-reaction and high affinity for HIV envelope protein 18, which is expressed on the surface of infected cells, as shown in Tables 1 and 1A. These results confirm that the indicated anti-peptide antibodies will be valuable for research and diagnostic purposes.
Tabu lkalTabu lkal
Zkřížená reakce mezi šerem ovcí, imunizovaných konjugátempeptidu (a) a rekombinantní obalovou bílkovinou HIV, kjejíž expresi dochází na povrchu buněk opičích ledvin zkřížená reakce kontrolní buněčná linie buněk opi linie opičích ledvin ledvin s expres obalové bílkoviny _____________________________HIV__________________________________ sérum imunisovaných ovcí - +++ kontrolní sérumCross-reaction between the murine sheep, immunized conjugate peptide (a) and the recombinant HIV coat protein expressed on monkey kidney cell surface cross-reaction control cell line of opi monkey kidney kidney with coat protein expression ________________________________ serum of immunized sheep - +++ control serum
X) '•HX) 'H
Tabulka IATable IA
Typické titry positivních antiser z ovcí, imunisovanýchkonjugátem peptidu (a) při reakci s rekombinantní obalo-vou bílkovinou HIV, k jejíž expresi dochází na povrchubuněk opičích ledvin - 19 -Typical titers of positive antiserum from sheep, immunized with the peptide conjugate (a) in response to recombinant HIV protein, expressed on monkey kidney surfaces - 19 -
Střední hodnota optickéhustoty (ředění sera) vzorek sera (titr) 1_ 50 1_ 250 1 - 1250 1 1 156250 31250 kontrolní sérum ovce 0,344 0,288 0,197 0,012 0,016 sérum ovcí, jímž bylopředem podáno sérum 0,736 0,636 0,432 0,140 0,052 1 : 5000 a peptid (a) Z uvedené tabulky je zřejmé, že i při velkém zředě-ní sera z pokusných ovcí relativně po kontrole je titr pod-statně zvýšen. Příklad 2Mean Optical Density (Sera Dilution) Serum Sample (Titre) 1 50 50 - 1 250 1 1 156250 31250 Sheep Control Serum 0.344 0.288 0.197 0.012 0.016 Sheep Serum Prior to Serum 0.736 0.636 0.432 0.140 0.052 1: 5000 and Peptide (a) It is clear from the table that even with a large dilution of serum from the experimental sheep relative to the control, the titer is substantially increased. Example 2
Jednou z úloh neutralizujících protilátek je inni-bice přenosu viru z infikovaných buněk na buňky neinfiko-vané. Prevence nebo omezení rychlosti přenosů viru z T-bu-něk na makrofágy má podstatný význam, protože takto je mož-no podstatně prodloužit život nemocných s AIDS. Antiseraproti peptidu byla zkoumána na svou schopnost způsobit in-hibici tvorby syncitií in vitro. Jde o velké buňky s mnohajádry, které vzniknou v důsledku tvorby "můstků’’ mezi buň-kami, infikovanými HIV. Hýla syntetizována C-terminálně extendovaná formazákladního peptidu a) s řetězcemOne of the roles of neutralizing antibodies is the introduction of virus transfer from infected cells to non-infected cells. Preventing or limiting the rate of virus transmission from T-cells to macrophages is essential, as this can significantly extend the life of AIDS patients. The antisera to the peptide was investigated for its ability to cause inhibition of syncitia formation in vitro. These are large cells with multiple polymorphisms due to the formation of "bridges" between HIV-infected cells.
Asp-Gln-Ser-L-eu-Lys-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys s intramolekulárním disulfidovým můstkem mezi dvěma cys- teinovýai zbytky. Tato forma bylo syntetizována, čištěna, konjugována a užita k imunizaci skupin ovcí stejně jako 20 - v přikladu 1. Antisera proti peptidu byla užita při pokusuna neutralizaci HIV in vitro. Protilátky proti peptidu bylypřidány ke kultuře lidských T-lyafocytů in vitro, infikova-ných vysoce virulentním kmenem HIV a ke kultuře neinfikova-ných lidských makrofágů. Bylo prokázáno, že antisera protipeptidu způsobují inhibici tvorby syncitií v této směsnépopulaci ϊ-buněk a makrofágů, vystavené ÚSinku virulentní-ho kmene HIVI, což znamená, že došlo k inhibici přenosu in-fekce z T-buněk na makrofágy.Asp-Gln-Ser-L-eu-Lys-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys with an intramolecular disulfide bridge between two cysteine residues. This form was synthesized, purified, conjugated and used to immunize sheep groups as well as 20 - in Example 1. Antisera against peptide was used to try to neutralize HIV in vitro. Antibodies to the peptide were added to a culture of human in vitro lymphocytes infected with a highly virulent HIV strain and to a culture of uninfected human macrophages. The antisera of the peptide have been shown to inhibit the formation of syncitia in this mixed cell-macrophage population, exposed to the secretion of the virulent strain of HIVI, indicating that T-cell infection has been inhibited from transfer to macrophages.
Bylo prokázáno, že protilátky mohou zabránit infek-ci makrofágů virem HIV a jsou tedy v tomto pokusu in vitroneutralizační, kdežto v kontrolní kultuře došlo k infekcimakrofágů, jak je zřejmé z tabulky 2.Antibodies have been shown to prevent HIV infection by macrophages and are therefore vitroneutralized in this experiment, whereas infectious macrophages have occurred in the control culture, as shown in Table 2.
Tanu fcZ. 3.Tanu fcZ. 3.
Neutralizace virulentního kmene HIV v kultuře in vitrolidských ϊ-lymf ocytů., infikovaných HIV a neinfikovanýchmakrofágů. +++ znamená vysokou úroveň infekce, zname- ná účinnou ochranu proti infekci buněčná kultura úroveň mí esceNeutralization of the virulent HIV strain in a culture of vitrolid lymf-lymphocytes infected with HIV and uninfected macrophages. +++ means a high level of infection, meaning effective protection against infection cell culture escalation
T-lynfocyty, infikované virem HIV a neinfikované makrofágy +++ ϊ-lyiafocyty, infikované virem HIV, neinfikované makrofágy a protilátky proti peptidu a) positivní pokusu na tvorbu syncitií byla rovněž vyhodnocenaantisera proti peptidu A. Tento pokus určuje schopnost antisera zabránit přenos živého HIV z infikova-ných na neinfikované buňky a zabránit fúzi buněk, ke kterémůže docházet reaktivitou mezi glykoproteinem viru (gplóO) 21 a molekulou CD4· Stanoveni bylo prováděno detekcí syncitiía stanovením jejich počtu.HIV-infected T-lymphocytes infected with HIV, uninfected macrophages and anti-peptide antibodies)-lymphocytes infected with HIV and non-infected macrophages a) A positive attempt to generate syncitism was also evaluated against peptide A. This experiment determines the ability of antisera to prevent live HIV transmission. from infected to uninfected cells and prevent cell fusion, which may occur by reactivity between the gp110 and CD4 molecules. The assay was performed by syncitia detection and counting.
Fokus byl proveden takto: známá koncentrace buněčnélinie, která produkuje HIV (CD+4) a podporuje aktivní re-plikaci viru se třikrát promyje a pak se přidá zkoumané an-tiserum v různém ředění. Směs se inkubuje 20 minut při tep-lotě 27 °C, pak se buňky smísí v určitém poměru s indikáto-rovou buněčnáu linií CD4+, vysoce infikovatelnou HIV a snad-no vytvářející syncitia. Buňky se denně pozorují a sledujese tvorba těchto velkých buněčných útvarů.The focus was carried out as follows: the known concentration of cellular production that produces HIV (CD + 4) and promotes active viral replication is washed three times and then the aniserum of interest is added at various dilutions. The mixture was incubated for 20 minutes at 27 ° C, then the cells mixed with the CD4 + indicator cell line, a highly infectious HIV and syncitia easily. Cells are observed daily for the formation of these large cell formations.
Jak je zřejmé z tabulky 2» mohou protilátky protipeptidu a) zabránit tvorbě syncitií.As can be seen from Table 2, the antibodies of the peptide may (a) prevent the formation of syncitia.
Tabulka 2Table 2
Inhibice tvorby syncitií mezi buňkami, produkujícími HIVa indikátorovou buněčnou linií antiserem vzorek sera inhibice· tvorby syncitií antiserum proti peptidu a) + (2/5 zvířat) normální sérum ovci Příklad 2 Různá sera nemocných, infikovaných HIV I v různýchstádiích postupu choroby AIDS, od asymptomatických nemocnýchaž k nemocným s plně vyvinutými příznaky byla odebrána tak,aby bylo možno získat representativní obraz reaktivity sertěchto nemocných se syntetickými peptiay při zkoušce ELISA.Inhibition of Syncitia Production between HIVa-producing Antiserum Indicator Cell Line Sera Inhibition of Syncitia Antiserum Antiserum Sera + (2/5 Animal) Normal Serum Sheep Example 2 Various Sera of HIV-infected Patients at Various Stages of AIDS Disease, from Asymptomatic patients with fully developed symptoms were taken to obtain a representative image of the reactivity of these patients with synthetic peptides in the ELISA assay.
Zkouška ELISA může stanovit stupeň reaktivity syn-tetických peptidů (analogických oblasti gpl20 nebo gp41 transmembránové bílkoviny HIV I, s protilátkou proti povr- chovému glykoproteinu HIV I v seru nemocných, která jsou positivní na tento virus. 100 entiser od positivních nemocných bylo uvedenodo reakee se syntetickým peptidem a). Dvě z těchto ser(od asymptomatických nemocných) obsahovala neutralizujícíprotilátky proti HIV a tato sera vykazovala zkříženou re-akci s peptidem a), jak je zřejmé z tabulky 4.The ELISA assay can determine the degree of reactivity of synthetic peptides (analogous to gp120 or gp41 transmembrane protein HIV I, with anti-HIV surface glycoprotein antibody I in a series of patients who are positive for this virus. synthetic peptide a). Two of these ser (from asymptomatic patients) contained neutralizing anti-HIV antibodies and this serum showed cross-reactivity with peptide a) as shown in Table 4.
Tabulka 4Table 4
Zkřížená reakce peptidu a) se dvěma positivními antiseryna HIV od asymptomatických nemocnýchCross-reaction of peptide a) with two positive antiseryne HIVs from asymptomatic patients
Vzorek optická hustota (peptid a)) pufr normální sérum 1/1001/1000 HIV positivní (1) 1/1001/1000 HIV positivní (2) 1/100 0,056 0,476 0,140 s2,02,0>2,0 > >2,0 ί1,37' opakováníSample optical density (peptide a)) buffer normal serum 1/1001/1000 HIV positive (1) 1/1001/1000 HIV positive (2) 1/100 0.056 0.476 0.140 s2.02.0> 2.0>> 2, 0 ,31,37 ování repeat
Claims (25)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB909005829A GB9005829D0 (en) | 1990-03-15 | 1990-03-15 | Synthetic polypeptides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS68091A2 true CS68091A2 (en) | 1991-12-17 |
Family
ID=10672665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS91680A CS68091A2 (en) | 1990-03-15 | 1991-03-15 | Synthetic polypeptides |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0519986A1 (en) |
| JP (1) | JPH05505188A (en) |
| CN (1) | CN1054772A (en) |
| AP (1) | AP211A (en) |
| AU (1) | AU636735B2 (en) |
| BR (1) | BR9106159A (en) |
| CA (1) | CA2078220A1 (en) |
| CS (1) | CS68091A2 (en) |
| FI (1) | FI923800A (en) |
| GB (1) | GB9005829D0 (en) |
| HU (1) | HUT63179A (en) |
| IL (1) | IL97551A0 (en) |
| MX (1) | MX24890A (en) |
| NZ (1) | NZ237417A (en) |
| OA (1) | OA09671A (en) |
| WO (1) | WO1991013909A1 (en) |
| ZA (1) | ZA911886B (en) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2099367A1 (en) * | 1991-11-04 | 1993-05-05 | Dade International Inc. | Synthetic peptides corresponding to portions of hiv-2 virus and methods of using in an improved assay |
| US5395750A (en) * | 1992-02-28 | 1995-03-07 | Hoffmann-La Roche Inc. | Methods for producing proteins which bind to predetermined antigens |
| US5679688A (en) * | 1992-03-11 | 1997-10-21 | Narhex Limited | Quinaldoyl-amine derivatives of oxo-and hydroxy-substituted hydrocarbons |
| US5888992A (en) * | 1992-03-11 | 1999-03-30 | Narhex Limited | Polar substituted hydrocarbons |
| US6071895A (en) * | 1992-03-11 | 2000-06-06 | Narhex Limited | Polar-substituted hydrocarbons |
| MXPA93002392A (en) | 1992-03-11 | 2005-02-04 | Narhex Ltd | Amine derivatives of oxo- and hydroxy-substitued hydrocarbons. |
| GB9208428D0 (en) * | 1992-04-16 | 1992-06-03 | Proteus Molecular Design | Synthetic polypeptides |
| US6511845B1 (en) | 1992-08-07 | 2003-01-28 | Alan R. Davis | Methods for producing an immune response against HIV-1 |
| AU667578B2 (en) | 1992-08-27 | 1996-03-28 | Deakin Research Limited | Retro-, inverso-, and retro-inverso synthetic peptide analogues |
| DE4402756A1 (en) * | 1994-01-31 | 1995-08-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Specific binding substances for antibodies and their use for immunoassays or vaccines |
| AUPM411994A0 (en) * | 1994-02-25 | 1994-03-24 | Deakin Research Limited | Epitopes |
| US6764682B1 (en) | 1994-06-16 | 2004-07-20 | Aventis Pasteur Limited | Adjuvant compositions containing more than one adjuvant |
| US6290971B1 (en) | 1995-06-15 | 2001-09-18 | Aventis Pasteur Limited | Adjuvant compositions comprising a mineral salt and another immunostimulating compound |
| CN1472314A (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-04 | 清华大学 | Immunity expression of AIDS virus O and its use |
| CN100445296C (en) * | 2006-03-31 | 2008-12-24 | 浙江大学 | Polypeptide organic compounds and application in xenogeneic transplantation |
| EP2376089B1 (en) | 2008-11-17 | 2018-03-14 | The Regents of the University of Michigan | Cancer vaccine compositions and methods of using the same |
| GB201612108D0 (en) | 2016-07-12 | 2016-08-24 | Univ Strathclyde | Preperation of non-ionic surfactant vesicles and variants |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8714802D0 (en) * | 1987-06-24 | 1987-07-29 | Proteus Biotech Ltd | Synthetic polypeptides |
| DE3879881D1 (en) * | 1987-11-16 | 1993-05-06 | Hoffmann La Roche | RECOMBINANT HIV-2 POLYPEPTIDE. |
-
1990
- 1990-03-15 GB GB909005829A patent/GB9005829D0/en active Pending
-
1991
- 1991-03-13 JP JP3505817A patent/JPH05505188A/en active Pending
- 1991-03-13 EP EP91906077A patent/EP0519986A1/en not_active Withdrawn
- 1991-03-13 CA CA002078220A patent/CA2078220A1/en not_active Abandoned
- 1991-03-13 AU AU74679/91A patent/AU636735B2/en not_active Ceased
- 1991-03-13 MX MX2489091A patent/MX24890A/en unknown
- 1991-03-13 NZ NZ237417A patent/NZ237417A/en unknown
- 1991-03-13 HU HU922939A patent/HUT63179A/en unknown
- 1991-03-13 WO PCT/GB1991/000392 patent/WO1991013909A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-03-13 BR BR919106159A patent/BR9106159A/en not_active Application Discontinuation
- 1991-03-14 IL IL97551A patent/IL97551A0/en unknown
- 1991-03-14 AP APAP/P/1991/000245A patent/AP211A/en active
- 1991-03-14 ZA ZA911886A patent/ZA911886B/en unknown
- 1991-03-15 CN CN91101549A patent/CN1054772A/en active Pending
- 1991-03-15 CS CS91680A patent/CS68091A2/en unknown
-
1992
- 1992-08-24 FI FI923800A patent/FI923800A/en not_active Application Discontinuation
- 1992-09-11 OA OA60275A patent/OA09671A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| OA09671A (en) | 1993-05-15 |
| BR9106159A (en) | 1993-03-16 |
| CA2078220A1 (en) | 1991-09-16 |
| NZ237417A (en) | 1993-10-26 |
| FI923800A0 (en) | 1992-08-24 |
| HU9202939D0 (en) | 1992-12-28 |
| WO1991013909A1 (en) | 1991-09-19 |
| AU636735B2 (en) | 1993-05-06 |
| MX24890A (en) | 1993-12-01 |
| FI923800A (en) | 1992-08-24 |
| IL97551A0 (en) | 1992-06-21 |
| HUT63179A (en) | 1993-07-28 |
| CN1054772A (en) | 1991-09-25 |
| EP0519986A1 (en) | 1992-12-30 |
| GB9005829D0 (en) | 1990-05-09 |
| JPH05505188A (en) | 1993-08-05 |
| AP211A (en) | 1992-10-21 |
| ZA911886B (en) | 1991-12-24 |
| AU7467991A (en) | 1991-10-10 |
| AP9100245A0 (en) | 1991-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8110203B2 (en) | Adjuvant comprising non-toxic cross-linked muramyl dipeptide (MDP) microparticles derived from Propionibacterium acnes | |
| US5840313A (en) | Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus | |
| AU650911B2 (en) | Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus | |
| CS68091A2 (en) | Synthetic polypeptides | |
| US5346989A (en) | Peptides for use in induction of T cell activation against HIV-1 | |
| EP0636145A1 (en) | Synthetic polypeptides derived from the hiv envelope glycoprotein | |
| EP0693938B1 (en) | Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus | |
| AU2006200454B2 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
| AU1906592A (en) | Peptides for use in induction of t cell activation against hiv-1 | |
| Syennerholm et al. | Vahlne et al. | |
| AU2006200455A1 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
| AU6655300A (en) | Compositions and methods for treating infections | |
| AU2004208648A1 (en) | Compositions and methods for treating infections | |
| MXPA99003380A (en) | Compositions and methods for treating viral infections |