JPH05505188A - synthetic polypeptide - Google Patents
synthetic polypeptideInfo
- Publication number
- JPH05505188A JPH05505188A JP3505817A JP50581791A JPH05505188A JP H05505188 A JPH05505188 A JP H05505188A JP 3505817 A JP3505817 A JP 3505817A JP 50581791 A JP50581791 A JP 50581791A JP H05505188 A JPH05505188 A JP H05505188A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- ala
- hiv
- leu
- gln
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 148
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 126
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 119
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 53
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 31
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 15
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 13
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 8
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 239000004030 hiv protease inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 13
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 5
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 claims 3
- 229940122440 HIV protease inhibitor Drugs 0.000 claims 2
- 229910020788 La—F Inorganic materials 0.000 claims 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims 1
- 238000003491 array Methods 0.000 claims 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 16
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 15
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 10
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 9
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Chemical group NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 5
- -1 9-fluorenyl Chemical group 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000017960 syncytium formation Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 2
- 108010003079 GPGPGP peptide Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010066342 Virus Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000018265 Virus Receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 229940047091 other immunostimulants in atc Drugs 0.000 description 2
- MXHCPCSDRGLRER-UHFFFAOYSA-N pentaglycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O MXHCPCSDRGLRER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000014599 transmission of virus Effects 0.000 description 2
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N (2s)-2-azanyl-5-[bis(azanyl)methylideneamino]pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000948258 Gila Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012375 Ion exchange chromatography - high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101800005164 Peptide V Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N famotidine Chemical compound NC(N)=NC1=NC(CSCCC(N)=NS(N)(=O)=O)=CS1 XUFQPHANEAPEMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 208000033065 inborn errors of immunity Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000005088 multinucleated cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 101150034067 nit gene Proteins 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- NJPPVKZQTLUDBO-UHFFFAOYSA-N novaluron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(OC(F)(F)F)F)=CC=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F NJPPVKZQTLUDBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940072273 pepcid Drugs 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 125000000864 peroxy group Chemical group O(O*)* 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 208000028529 primary immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 102220204631 rs769160861 Human genes 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.
Description
【発明の詳細な説明】 合成ポリペプチド 本発明は、合成ポリペプチドに関するものである。本発明は特に、ウィルスエン ベロープ蛋白質の特異的部位の三次元構造及び／又は静電気的な表面及び／又は 他の物理数、化学的及び構造上の性質を模した合成ポリペプチドに関する。後天 性免疫不全症候群（Ａ Ｉ Ｄ Ｓ）の原因として知られる、ヒト免疫不全ウィ ルス（ＨＩ Ｖ）に関するワクチン、免疫学的に活性のある治療薬、診断法及び 他の医学的又は化学的作用物のデザインは特に興味深い。[Detailed description of the invention] synthetic polypeptide The present invention relates to synthetic polypeptides. The present invention particularly Three-dimensional structure and/or electrostatic surface of specific site of envelope protein and/or It relates to synthetic polypeptides that mimic the physical numerical, chemical and structural properties of others. Acquired Human immunodeficiency syndrome (AIDS) is known as a cause of Vaccines, immunologically active therapeutic agents, diagnostic methods and The design of other medical or chemical agents is of particular interest.
過去１０年の間に、ＡＩＤＳは、医学的に重要な問題として世界中に出現し、病 気の原因であるＨＩＶによる感染の研究、診断、治療及び／又は予防の為の作用 物質が現在、緊急に必要となっている。ＨＩＶ Ｉ及びＨＩＶ■ウィルスによっ て産生される蛋白質のアミノ酸配列の（１９８５）； （Ｖａｉｎ−Ｈｏｂｓｏ ｎ、 Ｓ、ら、Ｃｅ１ｌ ４０．９ （１９８５）参照のこと］、ウィルスエン ベロープ蛋白質の抗原性を模した、合成ポリペプチドを発明することが可能にな ってきた。Over the past decade, AIDS has emerged as a medically important problem worldwide. Actions for research, diagnosis, treatment and/or prevention of infection by HIV, which is the cause of The substance is now urgently needed. Due to HIV I and HIV■ virus (1985) of the amino acid sequence of the protein produced by Vain-Hobso. n, S. et al., Ce1l 40.9 (1985)], virus en It is now possible to invent synthetic polypeptides that mimic the antigenic properties of envelope proteins. I came.
本発明の目的は、ＨＩＶウィルスに対する抗体、最も好ましくは中和力の高い抗 体、すなわち受動的又は能動的な免疫化により、ＨＩＶウィルスの感染を妨げる 、及び／又は拡散を制限する抗体の産生を引き出すことのできる合成ポリペプチ ドの開発である。そのような抗体を用いた受動的な免疫化は、個体内及び個体間 のウィルスの拡散を抑制し、ひいては病気の広がりを遅らせる或いは止める、Ａ ＩＤＳ患者の効果的な治療法を構成するであろう。The object of the present invention is to obtain antibodies against the HIV virus, most preferably antibodies with high neutralizing power. prevents infection of the HIV virus by immunizing the body, either passively or actively , and/or synthetic polypeptides capable of eliciting the production of diffusion-limiting antibodies. This is the development of Passive immunization with such antibodies results in both intra- and inter-individual A. to suppress the spread of the virus and thus slow or stop the spread of the disease. It would constitute an effective treatment for IDS patients.
本発明は、少なくとも１つの系統のヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ Ｖ）のエンベ ロープ蛋白質の少なくとも１つの抗原的性質を有する、式（Ｉ）： Ｘ−Ｒ，−Ｒ２−Ｒ３−Ｒ４−Ｒ，−Ｒ６−Ｒ＝−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｒ ８−Ｒ９−Ｒ１゜−Ｒ１１−Ｒ１□−Ｃｙｓ−Ｙ （Ｉ ）（式中、Ｒ１は、４ ｓｐ又はＧｌｕであり、Ｒ２はＧｌｙ、 Ａｌａ 。The present invention relates to human immunodeficiency virus (HIV) envelopes of at least one strain of human immunodeficiency virus (HIV). having at least one antigenic property of a rope protein, formula (I): X-R, -R2-R3-R4-R, -R6-R=-Trp-Gly-Cys-R 8-R9-R1゜-R11-R1□-Cys-Y (I) (wherein R1 is 4 sp or Glu, and R2 is Gly, Ala.
Ｐｒｏ ５Ｓｅｒ 、 Ｔｈｒ 、 Ａｓｎ又はＧｌｎから選ばれるアミノ酸残 基であり、Ｒ３はＧｌｙ、＾ｌａ、 Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、 Ｔｈｒ 。Amino acid residue selected from Pro 5Ser, Thr, Asn or Gln group, and R3 is Gly, ^la, Pro, Ser, Thr.
＾ｓｐ、 Ｇｌｕ、 Ａｓｎ、 ＬｙｓＳＨｉｓＳＧｉｎ又はＡｒｇから選ばれ るアミノ酸残基であり、Ｒ４、Ｒ３及びＲ１１は、互いに独立にどのアミノ酸残 基でもよく、Ｒ，及びＲ８は、ｃｒｙ 。Selected from ^sp, Glu, Asn, LysSHisSGin or Arg R4, R3 and R11 independently represent which amino acid residue It may be a group, and R and R8 are cry.
ＡｌａＳＰｒｏ、 Ｓｅｒ、、Ｔｈｒ又はＡｓｎから互いに独立に選ばれるアミ ノ酸残基であり、Ｒ７はＧｌｙＳＡｌａＳＶａｌＳＬｅｕ。Amino acids independently selected from AlaSPro, Ser, Thr, or Asn. R7 is GlySAlaSValSLeu.
１１ｅＳＳｅｒ、 Ｔｈｒ、 Ａｓｎ、 Ｇ１ｎ５’Ｐｈｅ 、 ＴｙｒＳＴｒ ｐＳＣｙｓ 。11eSSer, Thr, Asn, G1n5'Phe, TyrSTr pSCys.
Ｎｅｔ又はＰｒｏから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ９及びＲ＋２はＧｌｙ、 ＡｌａＳＬｅｕ、 ｌ１ｅＳＶａｌ、Ｍｅｔ、 Ｃｙｓ、 Ｐｈｅ 。Amino acid residues selected from Net or Pro, R9 and R+2 are Gly, AlaSLeu, l1eSVal, Met, Cys, Phe.
Ｔｙｒ又はＴｒｐから互いに独立に選ばれるアミノ酸残基であり、Ｒ＋。はＬｙ ｓ、口ＩＳ又はＡｒｇから選ばれるアミノ酸残基であり、Ｘ及びＹは、互いに独 立に欠失しているか又は独立に１つ以上の、例えば３つの付加的アミノ酸残基で ある） のアミノ酸配列から実質的に成る合成ポリペプチドを提供する。Amino acid residues selected independently from Tyr or Trp, R+. is Ly is an amino acid residue selected from s, IS, or Arg, and X and Y are mutually unique. deleted or independently with one or more, e.g. three additional amino acid residues be) A synthetic polypeptide consisting essentially of the amino acid sequence is provided.
前記の式（Ｉ）によるペプチドトでＸ及びＹを有さないものは、例えば、ＨＩＶ に対する抗体産生において、もちろん有用である。しかしながら、Ｘ又はＹが存 在する場合には、どのような長さでもよいが、２０アミノ酸未満が好ましく、１ ０未満、例えば３乃至６がより好ましい。Peptides according to the above formula (I) which do not have X and Y are e.g. Of course, it is useful in producing antibodies against. However, if X or Y exists If present, it may be of any length, but preferably less than 20 amino acids, with 1 Less than 0, for example 3 to 6, is more preferred.
式（Ｉ）による配列が、Ｘ及びＹをもつある蛋白質を構成し、その蛋白質の抗原 配列をもつ主要部分が、例えば、球状蛋白質上に露出しているループの部分であ るということが、もちろん高く評価されるであろう。The sequence according to formula (I) constitutes a protein having X and Y, and the antigen of that protein The main part with the sequence is, for example, a loop part exposed on a globular protein. Of course, this will be highly appreciated.
好ましくは、Ｒ２はＧｉｎ又はＴｈｒから選ばれ、ｉはＳｅｒ ５Ａｓｎ、 Ｇ ｉｎ 、 Ａｒｇ又はＡｌａから選ばれ、Ｒ４はＬｅｕ 、 Ｉｌｅ 。Preferably, R2 is selected from Gin or Thr, and i is Ser5Asn, G selected from in, Arg or Ala, and R4 is Leu, Hele.
Ｇｉｎ又はＡｒｇから選ばれ、Ｒ９はＬｅｕ又はＬｙｓであり、Ｒ６はＧｕｙ又 はＡｓｎであり、Ｒ７はＧｌｙ ５ＡｌａＳＬｅｕ、 Ｉｌｅ、 Ｖａｌ 。selected from Gin or Arg, R9 is Leu or Lys, and R6 is Guy or is Asn, and R7 is Gly5AlaSLeu, Ile, Val.
ＭｅｔＳＣｙｓ、、Ｐｈｅ、 Ｔｙｒ、 Ｔｒｐ又はＳｅｔから選ばれ、Ｒ８は Ｓｅｒ又はＡｌａであり、Ｒ９はＧｕｙ又はＰｈｅであり、ＲＩＯはＡｒｇ又は Ｌｙｓであり、Ｒ１１はＬｅｕＳＨｉｓ、 ｌ１ｅＳＧｉｎから選ばれ、ＲＩ２ はＡｌａ 、 Ｉｌｅ又はＶａｌから選ばれる。１０位と１６位のＣｙｓ残基は 、分子内ジスルフィド結合により、任意に結合している。Selected from MetSCys, Phe, Tyr, Trp or Set, R8 is Ser or Ala, R9 is Guy or Phe, RIO is Arg or Lys, R11 is selected from LeuSHis, l1eSGin, and RI2 is selected from Ala, He or Val. Cys residues at positions 10 and 16 are , optionally linked by intramolecular disulfide bonds.
本発明によるポリペプチドの１つの好ましい形は、式（）： Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｉｎ −Ｒｓ −Ｌｅｕ−Ｒｓ −Ｇｌｙ−Ｒ７−Ｔｒｐ−Ｇｌ ｙ−Ｃｙｓ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｒ＋ ＋ −Ｒｌ ２−Ｃｙｓ−Ｙ （ ＩＩ ）（式中、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｘ及びＹは上記にのように定義 され、Ｒ７はＧｌｙＸＡｌａＳＬｅｕ、 Ｉｌｅ、 Ｖａｌ。One preferred form of the polypeptide according to the invention has the formula (): X-Asp-Gin-Rs-Leu-Rs-Gly-R7-Trp-Gl y-Cys-3er-Gly-Lys-R+ + -Rl 2-Cys-Y ( II) (wherein R3, R6, R11, R12, X and Y are defined as above and R7 is GlyXAlaSLeu, Ile, Val.
１［ｅｔ、 Ｃｙｓ 、 ＰｂｅＳＴｙｒ又はＴｒｐから選ばれるアミノ酸残基 である） のアミノ酸配列から成る。Amino acid residue selected from 1[et, Cys, PbeSTyr or Trp ) It consists of the amino acid sequence of
式（ＩＩ）による配列においては、Ｒ３はＳｅｒ、 Ａｓｎ５Ｇｉｎ及びＡｒｇ から選ばれ、Ｒ１１はＬｅｕ、 Ｈｉｓ又はＩｌｅから選ばれ、ＲＨ２はＩｌｅ 又はＡｌａであることが好ましい。Ｒ７はＩｌｅ、 Ｐｈｅ 。In the arrangement according to formula (II), R3 is Ser, Asn5Gin and Arg R11 is selected from Leu, His or He, and RH2 is selected from Ile. or Ala is preferable. R7 is Ile, Phe.
Ｍｅｔ 、 Ｖａｌ又はＬｅｕから選ばれるのが有利である。Ｒ１はＳｅｒ又は Ａｓｎであり、Ｒ３はＬｙｓであることがさらに好ましい。Advantageously, it is chosen from Met, Val or Leu. R1 is Ser or More preferably, R3 is Asn and R3 is Lys.
本発明によれば、式（ＩＩ）の好ましい形は、配列：Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−３ｅ ｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｉ １ｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−３ｅｒ−Ｇ ｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｙ（式中、Ｘ及びＹは上記のように定 義され、１０位及び１６位のＣｙｓ残基は分子内ジスルフィド結合により任意に 結合している）。According to the invention, a preferred form of formula (II) has the sequence: X-Asp-Gln-3e r-Leu-Lys-Gly-I 1e-Trp-Gly-Cys-3er-G ly-Lys-Leu-Ala-Cys-Y, where X and Y are defined as above. Cys residues at positions 10 and 16 are optionally linked by intramolecular disulfide bonds. combined).
から成る。Consists of.
式（Ｉ［）のポリペプチドのもう１つの好ましい形は、Ｇｌｎ又はＡｒｇから選 ばれるＲ３を含み、Ｒ３はＬｅｕであり、ＬはＩｌｅ ５Ｐｈｅ及びＭｅｔから 選ばれ、ＲｚはＬｅｕ、 Ｈｉｓ又はＩｌｅから選ばれ、Ｒ１□は、４１ ａで ある。好ましい配列は、式： ％式％ （式中、Ｘ及びＹは上記のように定義され、１０位と１６位のＣｙｓ残基は分子 内ジスルフィド結合によって任意に結合している） を有する。Another preferred form of the polypeptide of formula (I[) is selected from Gln or Arg. R3 is Leu and L is from Ile5Phe and Met. selected, Rz is selected from Leu, His or He, and R1□ is 41a. be. A preferred arrangement is of the formula: %formula% (In the formula, X and Y are defined as above, and Cys residues at positions 10 and 16 are optionally linked by internal disulfide bonds) has.
式（ｎ）によるポリペプチドは、ＨＩＶＩエンベロープ蛋白質の、あるエピトー プ（抗原決定基）部位に似ている。The polypeptide according to formula (n) has certain epitopes of the HIVI envelope protein. It is similar to the epitope (antigenic determinant) site.
本発明によるポリペプチドのもう一つの好ましい形は、式（■）： χ−Ｒ，４２−Ｒ，−Ｒ４−Ｒ，−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ− Ａｌａ−Ｐｂｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｙ （ｍ ）（式中、Ｒ１ はＧｌｕ又はＡｓｐであり、Ｒ２はＴｈｒ又はＧｉｎであり、Ｒ３はＳｅｒ、 ＡｓｎＳＡｒｇ、 Ｇｉｎ又はＡｌａから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ４はＬｅ ｕＳＩｌｅｌＡｒｇ又はＧｉｎから選ばれるアミノ酸であり、Ｒ５はＬｙｓ又は Ｌｅｕであり、Ｘ及びＹは、上記のように定義され、１０位と１６位のＣｙｓ残 基は、分子内ジスルフィド結合により任意に結合している）。Another preferred form of the polypeptide according to the invention has the formula (■): χ-R, 42-R, -R4-R, -Asn-3er-Trp-Gly-Cys- Ala-Pbe-Arg-Gln-Val-Cys-Y (m) (wherein R1 is Glu or Asp, R2 is Thr or Gin, R3 is Ser, An amino acid selected from AsnSArg, Gin or Ala, and R4 is Le is an amino acid selected from uSIleIArg or Gin, and R5 is Lys or Leu, X and Y are defined as above, with Cys residues at positions 10 and 16. The groups are optionally linked by intramolecular disulfide bonds).
のアミノ酸配列から成る。It consists of the amino acid sequence of
式（Ｉ［［）によるポリペプチドの好ましい形態は、式（Ｈａ）のアミノ酸配列 から実質的に成る。A preferred form of the polypeptide according to formula (I[[) has the amino acid sequence of formula (Ha) consisting essentially of
式（ｍ）によるポリペプチドの好ましい形は式（■ａ）のアミノ酸配列から実質 的に成る。A preferred form of the polypeptide according to formula (m) consists essentially of the amino acid sequence of formula (■a). Become a target.
Ｘ−Ｇｌｕ−Ｔｂｒ−Ｒ３−Ｒ４−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ− Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｙ （ＩＩＩ ａ ）（式中、Ｒ３はＳｅｒ、 ＡｓｎＳＡｒｇ、 Ｇｌｎ又はＡｌａから選ばれる アミノ酸残基であり、Ｒ４はＬｅｕ、 ｌ１ｅ１．〜ｒｇ又はＧｌｎから選ばれ るアミノ酸残基てあり、ＸとＹは上記のように定義され、１０位と１６位のＣｙ ｓ残基は、分子内ジスルフィド結合により任意に結合している）。Ｒ４が１１ｅ の場合には、Ｒ３はＳｅｔが好ましく、Ｒ３がＡ１ ａの場合にはＲ４はＡｒｇ 又はＧｉｎだか、Ａｒｇの方が好ましい。X-Glu-Tbr-R3-R4-Lys-Asn-5er-Trp-Gly- Cys-Ala-Phe-Arg-Gln-Val-Cys-Y (III a ) (wherein R3 is selected from Ser, AsnSArg, Gln or Ala Amino acid residues, R4 is Leu, l1e1. ~selected from rg or Gln There are amino acid residues, X and Y are defined as above, and Cy at positions 10 and 16 s residues are optionally linked by intramolecular disulfide bonds). R4 is 11e In this case, R3 is preferably Set, and when R3 is A1a, R4 is Arg Alternatively, Gin or Arg is more preferable.
式■によるポリペプチドは、ＨＩＶｎのエンベロープ蛋白質のあるエピトープに 似ている。A polypeptide according to the formula resemble.
本発明による好ましいポリペプチド配列は、ＨＩＶエンベロープ蛋白質の１つ以 上の抗原決定基に対する地形学的類似性に基づいて選ばれる。例えば、ある特定 のポリペプチドがもともとその類似物であるべくデザインされている抗原決定基 がＨＪＶエンベロープ蛋白質の１つ以上の部位にも地形学的類似性を示すかもし れない。それはおそらく、祖先遺伝子の複製によるものか、又はそのポリペプチ ドが、１つの不連続の決定基の類似物であるか、又はそのポリペプチドが多価で あるようにデザインされてきた為であろう。不連続なエピトープは、独立して抗 原として重要である、密に向かい合った、つながったエピトープから成ると考え られる。そして多価であるポリペプチドとは、２つ以上の（連続又は不連続の） 決定基類似物を１本のポリペプチド鎖の中にもっており、それゆえにＨＩＶエン ベロープ蛋白質上の２つ以上の決定基を認識するある範囲の抗体の産生を同時に 引きおこす方法を供給する。Preferred polypeptide sequences according to the invention include one or more of the HIV envelope proteins. selected based on topographical similarity to the antigenic determinants above. For example, a certain antigenic determinant of which the polypeptide was originally designed to be an analogue may also show topographical similarity to one or more regions of the HJV envelope protein. Not possible. It is probably due to duplication of an ancestral gene or its polypeptide is an analog of one discrete determinant, or the polypeptide is multivalent. Probably because it was designed that way. Discontinuous epitopes are independently It is thought to consist of closely facing and connected epitopes that are fundamentally important. It will be done. And a polypeptide that is multivalent is defined as a polypeptide containing two or more (consecutive or discontinuous) polypeptides. have determinant analogs in one polypeptide chain and therefore simultaneous production of a range of antibodies that recognize two or more determinants on envelope proteins Provide a method to trigger it.
本発明によるペプチドは、例えば標準的な９−フルオレニルーチメル力ルボニル （Ｆ４ｏｃ）化学反応（例えばＡｔｈｅｒｔｏｎ、 Ｅ、及び５ｈｅｐｐａｒｄ 、 Ｒ，Ｃ，（１９８５）、Ｊ。The peptides according to the invention can be used, for example, in the standard 9-fluorenyl thimeryl carbonyl (F4oc) Chemical reactions (e.g. Atherton, E, and 5heppard , R.C. (1985), J.
Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、Ｃｈｅｍ、 Ｃｏｍｍ、 １６５参照）又は標準的なブチ ルオキシカルボネート（Ｔ−Ｂｏｃ）化学反応で合成される。構造の正しさと精 製のレベル（通常８５％を超える）は、綿密にチェックされるべきであり、内部 のジスルフィド結合が存在する場合には、その配置の正しさに、特別な注意がな される。この目的の為、例えば、高速液体クロマトグラフィーを含む種々のクロ マトグラフィーによる分析、及びラーマンの分光学を含む分光写真分析術が使わ れる。Chem, Soc, Chem, Comm, 165) or standard Synthesized by T-Boc chemical reaction. Correctness and precision of structure The level of production (usually above 85%) should be checked closely and internal Special attention should be paid to the correct positioning of disulfide bonds, if any. be done. For this purpose, various chromatographies including, for example, high performance liquid chromatography are used. Spectrophotographic techniques, including chromatographic analysis and Raman spectroscopy, are used. It will be done.
本明細書に出てくる配列は、すべて、以下に定義されるアミノ酸残基に対する３ 文字コードの標準的な１、 Ｕ、 Ｐ、 Ａ、 Ｃ，の略号を用いて示されてい る。ＧＬＹ−グリシン、Ａｌａ−アラニン、Ｖａｌ−バリン、Ｌｅｕ−０イシン 、ｌ１ｅ−イソロイシン、５ｅｒ−セリン、Ｔｈｒ−トレオニン、Ａｓｐ−アス パラギン酸、Ｇｌｕ−グルタミン酸、Ａｓｎ−アスパラギン、Ｇｌｎ−グルタミ ン、Ｌｙｓ−リジン、口１ｓ−ヒスチジン、Ａｒｇ−アルギニン、Ｐｈｅ−フェ ニルアラニン、Ｔｙｒ−チロシン、Ｔｒｐ−トリプトファン、Ｃｙｓ−システィ ン、１ｉｅｔ−メチオニン、Ｐｒｏ−プロリン。All sequences appearing herein refer to the three amino acid residues defined below. They are indicated using the standard letter code abbreviations of 1, U, P, A, and C. Ru. GLY-Glycine, Ala-Alanine, Val-Valine, Leu-0 Isine , l1e-isoleucine, 5er-serine, Thr-threonine, Asp-as Partic acid, Glu-glutamic acid, Asn-asparagine, Gln-glutami Lys-lysine, 1s-histidine, Arg-arginine, Phe-phenyl Nylalanine, Tyr-tyrosine, Trp-tryptophan, Cys-cysti ion, 1iet-methionine, Pro-proline.
本発明によるポリペプチド或いはそれに対する抗体は、単独に、又は、ウィルス の遺伝物質の複製を妨害することによって異なるレベルで作用する、３′ −ア ジド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴ）［シトプシン（Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ ）及び／又は、ウィルスの成長にとって必須な酵素の働きをブロックするような ＨＩＶＩロテアーゼ阻害剤と共に投与される。The polypeptide according to the present invention or an antibody against it can be used alone or against a virus. 3'-A, which act at different levels by interfering with the replication of genetic material in Zido-3'-deoxythymidine (AZT) [cytopsin ) and/or that block the function of enzymes essential for virus growth. Administered with an HIV rotease inhibitor.
本発明によるポリペプチドは、ＨＩＶＩ及び／又はＨＩＶ ＩＩの広い範囲の系 統によって産生されるエンベロープ蛋白質と交叉反応する抗体を作る為に使用さ れる。The polypeptide according to the invention can be applied to a wide range of strains of HIVI and/or HIV II. used to make antibodies that cross-react with envelope proteins produced by It will be done.
本発明者らの分析では、この発明によるポリペプチドの構造上、地形掌上、静電 気的性質は、いくつかの或は多くの系統のＨＩ Ｖエンベロープ蛋白質と交叉反 応をする抗体の産生を引きおこすと考えられるので、いくつかの−異種のポリペ プチドを１つの大きなポリペプチドに結合させることにより更に利点が生じるこ とを示してきた。Our analysis shows that the polypeptides of this invention are structurally, topographically, and electrostatically The chemical properties are cross-reactive with the HI V envelope protein of some or many strains. Some heterologous polypeptides are thought to trigger the production of antibodies that respond to Further advantages may arise from linking the peptides into one large polypeptide. I have shown that.
そのようなポリペプチドは、一般式（■）：［Ｌ、−Ｆｌ 、 ｊＬ、−Ｇｌ 、、−Ｌ、 （ＩＶ ）（式中、Ｆ及びＧは、互いに独立に、式Ｉ乃至ｍａのい ずれか１つのポリペプチドで、Ｌは連結配列で、ａ、 ｂ及びＣは、互いに独立 に０又は１であり、ｍ及びｎは、各々例えば１から１０までの正の数である）を 有する。しはなるべく短く、例えば限りなく Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ −Ｇｌｙ、 Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ又はＧｌ”／− ５ｅｒ−＾１ａ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａのような構造的に曲げやすい ポリペプチド鎖の部分である。各々の反復が、本発明によるポリペプチドの異な る変形を任意に生じることは明かであろう。式■で定義した多価の決定基類似物 は、偽ホモポリバレントであり、そこでは、本質的には同じ決定基類似物の変形 体が１本のポリペプチド鎖の中に反復している。更に、式Ｉから■ａのうちのい ずれか１つによる決定基類似物の同一変異体の多数のコピーを含むホモポリバレ ントなポリペプチド免疫原もまた有効であると考えられ、本発明の範囲に含まれ ている。Such polypeptides have the general formula (■): [L, -Fl, jL, -Gl ,, -L, (IV) (wherein F and G are each independently of the formula I to ma Any one polypeptide, L is a linking sequence, and a, b, and C are independent of each other. is 0 or 1, and m and n are each positive numbers from 1 to 10, for example). have be as short as possible, for example, as long as possible Gly-Gly-Gly-Gly -Gly, Gly-Pro-Gly-Pro-Gly-Pro or Gl"/- Structurally easy to bend like 5er-^1a-Gly-5er-Gly-Ala It is part of a polypeptide chain. Each repeat represents a different polypeptide according to the invention. It will be obvious that such deformations may occur arbitrarily. Multivalent determinant analogs defined by formula ■ is pseudohomopolyvalent, in which variants of essentially the same determinant analog The bodies are repeated in one polypeptide chain. Furthermore, from formula I, Homopolyvalve containing multiple copies of the same variant of a determinant analog by any one Other polypeptide immunogens are also considered effective and are within the scope of the invention. ing.
偽ホモポリバレントな免疫原性のあるポリペプチドは、それらが似ているけれど も同じではないという基本的な特異性を有する一連の（中和）抗体の産生を引き おこし、それらの抗体がＨＩ Ｖのより広い範囲の系統からのエンベロープ蛋白 質と交叉反応し、予防免疫を与える上でより効果的であるという点で、ワクチン として特に価値があることが期待される。本発明によるポリペプチドのうちの１ つと、決定基類似物の他の１つ以上のポリペプチド類似物との１つ以上のコピー （どの順番でもよい）を含むヘテロポリバレントなポリペプチドを組立てること にも利益があるであろう。本発明において供給されたそのようなポリペプチドは 次の一般式（Ｖ）。Pseudohomopolyvalent immunogenic polypeptides are polypeptides that are similar but triggers the production of a range of (neutralizing) antibodies with different basic specificities. , and those antibodies contain envelope proteins from a wider range of strains of HIV. vaccines in that they cross-react with quality and are more effective in providing preventive immunity. expected to be of particular value. One of the polypeptides according to the invention and one or more copies of the determinant analog with one or more other polypeptide analogs. (in any order) assembling a heteropolyvalent polypeptide containing There will also be benefits. Such polypeptides provided in the present invention are The following general formula (V).
Ｌ６−＋ａ−Ｌ）＋ｍ−Ｆ−ｔＬ、−ＧＬ−Ｌｅ （■）（式中、Ｆは、式Ｉ乃 至Ｈａのいずれか１つによるポリペプチドであり、Ｇは、式■乃至Ｈａのいずれ か１つのポリペプチド、又は他の配列であり、ｍ及びｎは、各々１． ＴＬＪ至 １０の正の数であり、ｄ及びｅは互いに独立に０又は１である） を有する。“Ｌ”は好ましくは短く、例えば、限りなくＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ −Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、 Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ又はＧ ｌｙ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａのような構造的に曲げ やすい、ポリペプチド鎖の部分である。ペプチドＶの好ましい形に於ては、Ｇは 式■乃至Ｈａ又は配列・Ｘ−Ｇｉｎ−Ｇｌ、ｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌ ｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｙ（式中、Ｇｌｙは各々独立に他のどんなアミノ 酸にも置き換えられ、またＸ及びＹは互いに独立に０又は１つ以上（例えば３つ ）のアミノ酸残基であり、又はＧは、ＨＩＶＩ来の抗原蛋白質に関連した他のポ リペプチド配列であるのうちのいずれか１つである）のうちのいずれか１つであ る。上に定義したポリペプチド配列の抗原として重要ないかなるサブフラグメン ト及び／又は抗原として重要ないかなる変異体も、元のポリペプチドの一般的な 形と機能を保っているものは、本発明の範囲に含まれることが理解されるべきで ある。特に、特定の残基を、珍しい（しかし、天然の、例えばＤ−立体異性体） 或いは合成のアミノ酸類似物による置換を含めて、匹敵する構造及び／又は物理 的性質をもつ残基による置換が含まれる。例えば、以下に定義するように、同一 セットの１つの残基を、別のものに置き換えることは、この発明の範囲に含まれ る。セット１−．４１ａ％Ｖａｌ、Ｌｅｕ、 Ｉｌｅ、 Ｐｈｅ、 Ｔｙｒ、 Ｔｒｐ又はｋ［ｅｔ ；セット２ＳｅｒｓＴｈｒ 、 Ａｓｎ又はＧｉｎ ；セ ット３−Ａｓｐ又はＧｌｕ ；セット４−Ｌｙｓ 、 Ｈｉｓ又はＡｒｇ ；セ ット５−Ａｓｎ又はＡｓｐ ；セット５−Ｇｌｕ又はＧｉｎ ；セット７−Ｇｌ ｙＳＡｌａ％Ｐｒｏ。L6-+a-L)+m-F-tL, -GL-Le (■) (wherein F is Formula I A polypeptide according to any one of formulas 1 to Ha, and G is any one of formulas or one polypeptide, or other sequence, and m and n are each 1. To TLJ is a positive number of 10, and d and e are 0 or 1 independently of each other) has. “L” is preferably short, e.g., infinitely Gly-Gly-Gly -Gly-Gly, Gly-Pro-Gly-Pro-Gly-Pro or G Structurally bent like ly-3er-Ala-Gly-5er-Gly-Ala It is easily the part of the polypeptide chain. In a preferred form of peptide V, G is Formula ■~Ha or sequence ・X-Gin-Gl, n-Glu-Lys-Asn-Gl y-Gly-Glu-Leu-Y (wherein each Gly independently represents any other amino acid) It can also be replaced with an acid, and X and Y are independently 0 or 1 or more (for example, 3 ), or G is another point related to the antigenic protein from HIVI. any one of the following: Ru. Any subfragment of the polypeptide sequence defined above that is of antigenic importance. Any variant of antigenic and/or antigenic importance is a general variant of the original polypeptide. It should be understood that those that retain form and function are within the scope of the present invention. be. In particular, certain residues can be expressed as rare (but naturally occurring, e.g. D-stereoisomers) or comparable structural and/or physical equivalents, including substitutions with synthetic amino acid analogs. This includes substitutions with residues that have the following properties. For example, the same It is not within the scope of this invention to replace one residue of the set with another. Ru. Set 1-. 41a% Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp or k[et ; Set 2SersThr , Asn or Gin ; Set 3-Asp or Glu; Set 4-Lys, His or Arg; Set 5-Asn or Asp; Set 5-Glu or Gin; Set 7-Gl ySAla%Pro.
Ｓｅｒ又はＴｈｒｏすへてのアミノ酸タイプのＤ−立体異性体、例えばＤ−Ｐｈ ｅ、、Ｄ−Ｔｙｒ及びＤ−Ｔｒｐか置換される。D-stereoisomers of Ser or Thro amino acid types, e.g. D-Ph e, , D-Tyr and D-Trp are substituted.
本発明を好ましい実施態様では、Ｘ及びＹは、もし存在する場合には、Ｔ−細胞 エピトープとして作用する能力を有する蛋白質鎖の１つ以上の部分を独立に含ん でいるで１はＧｌｙ又は電荷を持つアミノ酸（例えばＬｙｓ、 Ｈｉｓ ｓＡｒ ｇ 、 Ａｓｐ又はＧｌｕ）であり、２は疎水性アミノ酸（例えばｌ１ｅＳＬｅ ｕ、 Ｖａｌ、 Ｍｅｔ、 Ｔｙｒ、 Ｐｈｅ、 ＴｒｐＳＡｌａ）であり、３ は疎水性アミノ酸（上に定義した）又は電荷を持たない極性のあるアミノ酸（例 えばＡｓｎ 、 Ｓｅｒ ５Ｔｈｒ 、 Ｐｒｏ 。In a preferred embodiment of the invention, X and Y, if present, are independently comprises one or more parts of a protein chain that have the ability to act as an epitope 1 is Gly or a charged amino acid (e.g. Lys, His, sAr g, Asp or Glu), and 2 is a hydrophobic amino acid (e.g. l1eSLe u, Val, Met, Tyr, Phe, TrpSAla), and 3 is a hydrophobic amino acid (as defined above) or an uncharged polar amino acid (e.g. For example, Asn, Ser 5Thr, Pro.
Ｇｉｎ ５Ｇｌｙ）のいずれかであり、４は極性のあるアミノ酸（例えばＬｙｓ 、 Ａｒｇ ５Ｈｉｓ 、 Ｇｌｕ 、 Ａｓｐ 、 Ａｓｎ ５Ｇｉｎ ％ Ｓｅｒ 、 Ｔｈｒ 、 Ｐｒｏ）である］であるアミノ酸配列の部分は少なく ともいくつかの例に於て、Ｔ細胞エピトープとして作用するようである（Ｒｏｔ ｈｂａｒｄ、 Ｊ、 Ｂ、及びＴａｙｌｏｒ。Gin, 5Gly), and 4 is a polar amino acid (e.g. Lys , Arg 5His, Glu, Asp, Asn 5Gin% There are few parts of the amino acid sequence that are Ser, Thr, Pro). Both appear to act as T cell epitopes in some instances (Rot hbard, J., B., and Taylor.
１、 Ｒ，（１９８８） 、Ａ ５ｅｑｕｅｎｃｅ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ ｃ ｏｍｍｏｎ ｔ。1, R, (1988), A 5 sequence pattern in c ommont.
τ−ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ５Ｔｂｅ Ｅｌ［ＢＯＪｏｕｒｎａｌ ７（ １）：９３−１００）。同様に、１’ −２’ −３’ −４’−５’配列でも 良く、その場合には、１′は先に定義したよう（こ１に相当し、２′は２に、３ ′と４′は３に、５′は４に相当する（同書）。どちらの形も本発明の範囲に含 まれており、１つ以上のＴ細胞エピトープ（好ましくは５つ未満）は、上記のよ うに定義されるか、又は池の構造をもち、ある長さと組成を持つスペーサ一部分 によって分離されており、スペーサーの長さはアミノ酸残基５つ未満が好ましく 、例えばＧｌｙ 、 Ａｌａ ５Ｐｒｏ ５Ａｓｎ 。τ-cell epitopes 5Tbe El[BOJournal 7( 1):93-100). Similarly, in the 1'-2'-3'-4'-5' arrangement Well, in that case, 1' corresponds to 1, 2' corresponds to 2, and 3 as defined earlier. ' and 4' correspond to 3, and 5' corresponds to 4 (ibid.). Both forms are within the scope of the invention. rare and one or more T cell epitopes (preferably less than 5) are a portion of a spacer defined as a pond or having a pond structure and having a certain length and composition The length of the spacer is preferably less than 5 amino acid residues. , for example, Gly, Ala 5Pro 5Asn.
Ｔｈｒ 、 Ｓｅｒから選ばれる残基から成るか又は、非α−アミノ酸のような 多機能リンカ−を含んでいる。Ｃ−又はＮ−末端のリンカ−が、完全な蛋白質の 代理となり得るので、キャリヤー蛋白質へ結合させる必要は取り除かれる。さら に、本発明の範囲に含まれることは、式１によるポリペプチドの誘導体であり、 それに於てＸ又はＹは「レトロインパーツＣｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ） （ 逆反転）コなアミノ酸すなわちアミノ酸に相当する機能グループをもつ三機能ア ミンであるか、又はそれを含む。例えば、本。Consists of residues selected from Thr, Ser, or non-α-amino acids such as Contains a multifunctional linker. A C- or N-terminal linker connects the complete protein. Since it can be a surrogate, the need for binding to a carrier protein is obviated. Sara Also included within the scope of the invention are derivatives of polypeptides according to formula 1, In that case, X or Y is "Retro-in parts (Cretro-inverso)" ( trifunctional amino acids with functional groups corresponding to amino acids is or contains min. For example, books.
発明によるｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏなアミノ酸を含む類似物は式：［式中、 Ｒは例えばグリシンの側鎖のような官能基であり、Ａ１及びＡ２は、各々Ｎ−又 はＣ−末端で結合されており、それぞれユニに定義した類似物の１つのコピー（ しかし必ず同じというのではない）であることが望ましい］になる。Ｔ細胞エピ トープは前に論じたように任意に含まれている。Analogs containing retro-inverso amino acids according to the invention have the formula: R is a functional group such as the side chain of glycine, and A1 and A2 are each N- or are linked at the C-terminus, each with one copy of the uni-defined analogue ( However, it is not necessarily the same). T cell epi Taupe is optionally included as previously discussed.
ポリペプチドのｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏな修飾は、】一つ以上のペプチド結 合の反転を含み、そのため元の分子よりも酵素による分解に対してより抵抗性の ある類似物が作り出され、大きな免疫原に対する媒介として、高濃度のエピトー プを含む分岐した免疫原の生産の為の都合のよい手順を提供する。これらの化合 物を生物学的に活性のある短鎖のペプチドのｒｅｔｒｏ−ｉｎｙｅｒｓｏな類似 物の多量の溶液での合成に用いることには、大きな可能性がある。Retro-invergo modification of a polypeptide is the addition of one or more peptide bonds. contains a reversal of the combination and is therefore more resistant to enzymatic degradation than the original molecule. Certain analogs have been created to target high concentrations of epitopes as vectors for large immunogens. provides a convenient procedure for the production of branched immunogens, including immunogens. These compounds Retro-inyerso analogs of biologically active short-chain peptides There is great potential for its use in the synthesis of large amounts of compounds in solution.
注意しなければならないのは、ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏなアミノ酸誘導体を 組みこむ類似物は、ＤＮＡ組換えシステムを使って直接できるものではないとい うことである。しかしながら、基本となる類似物はでき、次いで精製し、標準的 なペプチド／有機化学を使って化学的にｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏなアミノ酸 に結合することができる。What you have to be careful about is using retro-invergo amino acid derivatives. It is said that the analogs to be incorporated cannot be created directly using DNA recombination systems. That is true. However, basic analogues can be made and then purified and standard chemically retro-invergo amino acids using peptide/organic chemistry can be combined with
ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｇｏなペプチドのポリアミドタイプの樹脂における固相 合成法に関する実用的で便利な新しい方法が最近記載されている［Ｇａｚｅｒｒ ｏ、 Ｈ，、Ｐｉｎｏｒｉ、 １１． ＆Ｖｅｒｄｉｎｉ、 Ａ、Ｓ、（１９９ ０）、Ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｌ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒｔｈｅ ５ｏ ｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓ。Solid phase of retro-invergo peptides in polyamide type resins Practical and convenient new methods of synthesis have recently been described [Gazerr o, H,, Pinori, 11. &Verdini, A.S. (199 0), A new general procedure for the 5o lid-phase 5 synthesis of retro-invers.
ｐｅｐｔｉｄｅｏＩｎｎｏｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ ５ｏｌｉｄＰｈａｓｅ ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｅｄ、 Ｒｏｇｅｒ Ｅｐ ｔｏｎ、 ５ＰＣＣ（ＩＪＫ）Ｌｔｄ。PeptideoInnovation and Perspectives in 5solidPhase 5ynthesis, Ed, Roger Ep ton, 5PCC (IJK) Ltd.
Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、 ＬＨ：ｌ。Birmingham, LH:l.
ポリペプチドは、それ自身の化学的基を介して、又はＣ−又はＮ−末端へ加えら れた付加的なアミノ酸を介して、キャリヤー分子に任意に結合され、そして、そ れらのペプチドの免疫学的機能を最適にする為に、ポリペプチドがポリペプチド 自身から分離されたり又は１つ以上の付加的なアミノ酸によって囲まれたりする 。多数の連結が適しており、例えばＴｙｒ、 Ｃｙｓ及びＬｙｓ残基の側鎖の使 用が含まれる。適したキャリヤーには、例えばツベルクリンの精製蛋白質誘導体 （ＰＰＤ）、破傷風ト干ソイド（変性毒素）、コレラトキシン及びそのＢサブユ ニット、卵アルブミン、ウシ血清アルブミン、大豆トリプシンインヒビター、ム ラミルジペプチド及びそれらの類似物、Ｂｒａｕｎのリポ蛋白質が含まれるが、 しかし他の適当なキャリヤーも熟練者には容易に明かになるであろう。The polypeptide can be added via its own chemical group or to the C- or N-terminus. optionally linked to the carrier molecule via an additional amino acid, and In order to optimize the immunological function of these peptides, separated from itself or surrounded by one or more additional amino acids . A number of linkages are suitable, for example the use of side chains of Tyr, Cys and Lys residues. Includes usage. Suitable carriers include, for example, purified protein derivatives of tuberculin. (PPD), tetanus toxoid (denatured toxin), cholera toxin and its B subunits Nit, egg albumin, bovine serum albumin, soybean trypsin inhibitor, mucin including ramyl dipeptides and their analogs, Braun's lipoproteins, However, other suitable carriers will be readily apparent to those skilled in the art.
本発明によるポリペプチドに対するキャリヤーとしてＰＰＤを使用する場合には 、もしポリペプチド−ＰＰＤ結合体の受容者が、例えば、早い時期のＢＣＧワク チンのおかげで、既にツベルクリン感受性になっているならば、より高い力価の 抗体が得られる。ヒトのワクチンの場合には、英国及び他の多くの国に於て人々 は慣例的にＢＣＧの予防接種を受けており、従ってほとんどがＰＰＤ感受性にな っていることは注目に値する。故に、ＰＰＤはそれらの国に於ては好ましいキャ リヤーとしての使用が期待される。When using PPD as a carrier for the polypeptide according to the invention , if the recipient of the polypeptide-PPD conjugate, e.g. If you are already tuberculin sensitive because of the Antibodies are obtained. In the case of human vaccines, people in the UK and many other countries are routinely vaccinated with BCG and therefore most are susceptible to PPD. It is worth noting that Therefore, PPD is the preferred carrier in those countries. Expected to be used as a rear.
ポリペプチドのキャリヤーへの結合の方式は、結合される物質の性質に依存する 。例えば、キャリヤーにあるリジン残基は、ポリペプチドのＣ−末端又は他のシ スティン残基に、Ｎ−γ−マレイミドブチリルオキシースクシニミドで処理する ことにより結合される（Ｋｉｔａｇａｗａ。The mode of binding of the polypeptide to the carrier depends on the nature of the substance being bound . For example, a lysine residue on a carrier may be present at the C-terminus of a polypeptide or at another Stine residues are treated with N-γ-maleimidobutyryloxy-succinimide. (Kitagawa).
Ｔ、及びＡｃｋａｗａ、 Ｔ、（１９７６） Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ７９． ２３３） 、他の結合反応及び試薬はこの文献に記載されている。T. and Ackawa, T. (1976) J. Biochem, 79. (233), other coupling reactions and reagents are described in this document.
単独の、或いはキャリヤー分子に結合されたポリペプチドは、慣習的なアジュバ ント（水酸化アルミニウム又はフロイントの完全又は不完全アジュバントのよう な）及び／又は他の免疫賦活剤を用いて、または用いずに、いかなる経路からで も投与される（例えば、非経口的に、又は鼻から、経口で、直腸から、腟内から ）。本発明には、皮下への植えこみ或いは、例えばリポソームを含む貯蔵所（Ａ ｌｌｉｓｏｎ、Ａ、Ｃ，及びＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、 Ｇ、（１９７４）Ｎａ ｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ） ２５２．２５２）或いは、乳酸とグリコール酸のコ ポリマーから製造された生物に分解されるマイクロカプセル（Ｇｒｅｓｓｅｒ、 Ｊ、 Ｄ、 ａｎｄ ５ａｎｄｅｒｓｏｎ、 Ｊ、 Ｅ。Polypeptides alone or conjugated to carrier molecules can be prepared using conventional adjuvants. (such as aluminum hydroxide or Freund's complete or incomplete adjuvant) by any route, with or without the use of other immunostimulants) and/or other immunostimulants. may also be administered (e.g., parenterally or nasally, orally, rectally, intravaginally) ). The invention involves subcutaneous implantation or, for example, liposome-containing reservoirs (A llison, A.C., and Gregoriadis, G. (1974) Na ture (London) 252.252) or a combination of lactic acid and glycolic acid. Biodegradable microcapsules made from polymers (Gresser, J, D, and 5 anderson, J, E.
（１９８４） Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅ１ｅａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ ”Ｐ、１２７−１３８． Ｅｄ、 Ｄ、Ｌ、Ｗｉｓｅ）のよ うな、ゆっくりと放出される形のポリペプチドの形成も含まれている。(1984) Biopolymer Controlled Re1ease Systems” P, 127-138. Ed, D, L, Wise) This also includes the formation of slow-release forms of the polypeptide.
本発明によるポリペプチドがいかなる通常の方法でも、すなわち、前述したよう に手動又は自動的にペプチドを合成する技術を用いて直接的に、或いはＲＮＡ及 びＤＮＡ合成によって間接的に、そして分子生物学と遺伝子工学の従来の技術に よって合成されることは理解されるべき事である。これらの技術は、他のポリペ プチド配列に挿入された１つ以上のポリペプチドを含む雑種蛋白質を産生ずる為 に使われる。Polypeptides according to the invention may be prepared in any conventional manner, i.e. as described above. directly using techniques that manually or automatically synthesize peptides, or using RNA and and indirectly through DNA synthesis and traditional techniques of molecular biology and genetic engineering. Therefore, it should be understood that they are synthesized. These techniques to produce a hybrid protein containing one or more polypeptides inserted into a peptide sequence. used for.
本発明のもう１つの面は、従って、本発明による台足ポリペプチドの少なくとも １つをコードし、微生物又番−補乳類の細胞内における複製が可能な、適当な発 現ベクターに好ましくは取り込まれるＤＮＡ分子を供給することである。そのＤ ＮＡもまた、より長い産物のＤＮＡ鍾の一部であり、例えば、そのポリペプチド は遺伝子工学によってその中に挿入された他の蛋白質の一部として発現される。Another aspect of the invention therefore provides at least one of the pedestal polypeptides according to the invention. an appropriate expression that encodes one and is capable of replicating within the cells of the microorganism or complement. The present vector is preferably provided with a DNA molecule that is incorporated into the vector. That D NA is also part of the DNA chain of a longer product, e.g. is expressed as part of another protein inserted into it by genetic engineering.
それらの技術に対する実用的な手引き書の１つがＳａｍｂｒｏｏｋ、 Ｊ、、Ｆ ｒ１ｔｓｈ、 Ｅ、 Ｆ、及びＭａｎｉａｔｉｓ。One practical guide to these techniques is Sambrook, J., F. r1tsh, E, F, and Maniatis.
Ｔ、による″蓋ｏ１ｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ １ａｂｏｒａｔｏｒ ｙ ｍａｎｕａｌ ’（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、 １９８９）である。T, ``lid o1ecular cloning: a 1aborator y manual' (2nd Edition, 1989).
本発明によるポリペプチドは、単独に或いは適切なキャリヤーと結合して以下の ように利用される。The polypeptide according to the invention can be used alone or in combination with a suitable carrier to: used as such.
（ａ）１つ以上の系統のＨＩＶの感染を防ぐ為に使用するペプチドワクチンとし て、 （ｂ） 例えばＨＩＶＩ性患者からの血清の分析におけるリガンドとして、 （Ｃ） 例えば、ポリペプチドに対して引き起こされた抗体の結合レベルの検査 における品質をコントロールする薬剤として、 （ｄ） 適当な動物を免疫することによって、モノクローナル又はポリクローナ ル抗体を生産する為の抗原物質として。これらの抗体の用途は、（１）ＨＩＶウ ィルスの科学的研究用に、（ｉｉ）診断用の薬剤として、例えば組織化学用の薬 剤の一部とし戊 で、（ｉｉｉ） ＨＩ Ｖ患者の受動的な免疫化のために。(a) as a peptide vaccine used to prevent infection with one or more strains of HIV; hand, (b) As a ligand in the analysis of serum from, for example, HIV patients, (C) For example, testing the level of binding of antibodies raised against polypeptides As a drug to control the quality of (d) Monoclonal or polyclonal production by immunizing appropriate animals. as an antigenic substance for producing antibodies. The uses of these antibodies are (1) HIV (ii) as a diagnostic agent, e.g. for histochemistry; (iii) for passive immunization of HIV patients;
；Ｉ Ａ Ｉ Ｄ Ｓの治療として、単独に、又は他の、例えり ばＡＺＴ及び ／又はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤の二 ような薬剤との組み合わせで、（１ｖ） 他の薬剤（倒置 えばＡＺＴ又はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤）の標≠ 的を細胞 表面にＨＩＶニンヘロープ蛋白質を発現老 しているＨＩＶ惑染細胞にしぼる為 の手段として。; for the treatment of IAIDS, alone or with other agents, such as AZT and / or in combination with drugs such as HIV protease inhibitors (1v) Target cells for other drugs (e.g. AZT or HIV protease inhibitors) To target aging HIV-infected cells that express HIV ninherope protein on the surface as a means of
Ｄ それらの薬剤は、共有結合又は他の方法、例えば、それらの薬剤を含み、抗 原ポリペプチドに対して産生された抗体を組みこんでいるリポソームに於けるよ うな方法で会合している。本発明は更に、１ ポリペプチドに対して産生された 抗体の遺伝子工学によって得られた形成いは特にｖＨ部分のような１ サブコン ポーネントを供給し、文献の中に述べられている技術を用いて、最初はそのポリ ペプチド５ に対して他の動物で作られた抗体の人体に適応させた形を供給する 。D. Those agents may be linked covalently or otherwise, e.g. in liposomes incorporating antibodies raised against the original polypeptide. We meet in a different way. The present invention further provides: 1. Forms obtained by genetic engineering of antibodies or particularly one subcomponent such as the vH portion. initially develop the policy using techniques described in the literature. Provides a human-adapted form of antibody produced in other animals against Peptide 5 .
７ （ｅ） ＨＩ Ｖウィルスの、ヒト又は動物細胞への結合を−置換すること による、又は生体内でのウィルスの三次元構造の構築を妨げることによるＨＩＶ 感染の治療。同様に、生体外におけるＨＩＶウィルス頁 の科学的研究を助ける 。7 (e) Displacing the binding of the HI V virus to human or animal cells HIV by or by interfering with the construction of the three-dimensional structure of the virus in vivo. Treatment of infection. Similarly, it aids scientific research of the HIV virus in vitro. .
ＨＩＶ又はＨＩ Ｖに対する抗体の、検出及び診断に関す しては、熟練者は種 々の免疫学的検定技術に気付くであろうが、それらの中でもよく知られているの は、サンドイッチアッセイ、競合及び非競合アッセイ、直接及び間接標識化であ る。Regarding the detection and diagnosis of HIV or antibodies to HIV, the skilled person You will be aware of various immunoassay techniques, but the most well-known are are sandwich assays, competitive and non-competitive assays, direct and indirect labeling. Ru.
本発明のもう一つの面は、ＨＩＶ又は、本発明による合成ポリペプチドの少なく とも一つを含む、ＨＩＶに対する抗体を検出するためのキットを供給することで ある。Another aspect of the invention is that HIV or at least one of the synthetic polypeptides according to the invention By supplying kits for detecting antibodies against HIV, including one be.
ポリクローナル又はモノクローナル抗体の調整、それら抗体の、人体に適応させ た形は例えばＴｈｏｍｐｓｏｎ、 Ｋ。Preparation of polyclonal or monoclonal antibodies, adaptation of these antibodies to the human body For example, Thompson, K.
麓、ら（１９８６）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５８．１５７−１６０参照のこと 、単一ドメイン抗体（例えばＷａｒｄ、 Ｅ、 Ｓ、、 Ｇｕｓｓｏｙ、 Ｄ、 。See Fumoto, et al. (1986), Immunology 58.157-160. , single domain antibodies (e.g. Ward, E, S, Gussoy, D, .
Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、 Ａ、 Ｄ、、 Ｊｏｎｅｓ、 Ｐ、 ａｎｄ １ｉｎｖ ｅｒ、 Ｇ、 （１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１．５４４−５４６参照）は、 血液脳関門を横切る抗体であり、本発明による合成ポリペプチドに得意的に結合 するものは、従来の方法で調整されており、それらの抗体は、本発明の一部をな すものと考えられる。本発明による抗体は、とりわけ哺乳類のＨＩＶ感染の診断 法に使われ、それは、哺乳類の組織又は体液の標本をここに記載した有効な量の 抗体とインキユベーし、上記の標本と上記の抗体との間に、交叉反応がおきるか どうか、もし必要ならどの程度に及び／又はどんな速さで起こるのかを決定する 。Griffiths, A, D, Jones, P, and 1inv er, G. (1989) Nature 341.544-546) is An antibody that crosses the blood-brain barrier and binds favorably to the synthetic polypeptides of the present invention. have been prepared using conventional methods, and those antibodies form part of the present invention. It is considered to be a problem. The antibodies according to the invention are particularly useful for the diagnosis of HIV infection in mammals. method, which involves preparing a specimen of mammalian tissue or body fluid in an effective amount as described herein. Is there a cross-reaction between the above specimen and the above antibody when incubating with the antibody? Determine whether, if necessary, to what extent and/or how quickly. .
本発明のもう一つの面は、合成ポリペプチドを哺乳類の）（ＩＶ感染の治療又は 予防に使うこと及び／又は哺乳類の免疫系の刺激に使うこと及び／又は細胞の、 ＨＩＶウィルス受容体のブロックに使うことであり、さらに、それらの使用に適 した薬剤の調製に使用することである。一つ或いはそれ以上の調剤学的に認容で きるアジュバント、キャリアー及び／又は賦形剤とともに、活性成分として、少 なくとも一つのポリペプチド又は、ここに記したようなポリペプチド−キャリア ー複合体を含有する薬剤組成物が含まれる。これらの組成物は、経口用、直腸、 算用又は特に非経口的投与（中枢神経内投与を含む）用に、処方される。Another aspect of the invention provides synthetic polypeptides for the treatment of IV infections (in mammals) or for prophylactic use and/or for stimulation of the mammalian immune system and/or for cellular It is used to block HIV virus receptors and is also suitable for these uses. It is used in the preparation of certain drugs. one or more pharmaceutically acceptable As an active ingredient, a small amount of at least one polypeptide or polypeptide-carrier as described herein - Includes pharmaceutical compositions containing the conjugate. These compositions are suitable for oral, rectal, It is prescribed for administration or especially for parenteral administration (including intracentral nervous system administration).
本発明はさらに、哺乳類のＨＩＶ感染を治療及び／又は予防する方法、及び／又 は哺乳類の免疫系を刺激す。The present invention further provides methods for treating and/or preventing HIV infection in mammals, and/or stimulates the mammalian immune system.
法及び／又は細胞のＨＩＶウィルス受容体をブロックする方法を供給し、それは さきに定義したようなポリペプチドのを動量の単独投与、又はＡＺＴ及び／又は ＨｉＶプロテアーゼ阻害剤のようなＡＩＤＳの他の薬剤と組み合わせた投与を含 む。provides a method and/or method for blocking an HIV virus receptor in a cell, the method comprising: Single administration of a polypeptide as defined above, or AZT and/or including administration in combination with other drugs for AIDS, such as HiV protease inhibitors. nothing.
以下の実施例は本発明を例示することを意図したものであり、どのようにも制限 されない。The following examples are intended to illustrate the invention and are not intended to be limiting in any way. Not done.
実施例１ 配列： Ａｓｐ−Ｇｌｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ− Ｃｙｓ−３ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｃｙｓを有する基本的なペ プチド（ａ）の、Ｃ−末端を延長した形を標準的な、固相Ｆ−ｍｏｃ方法論を用 いて合成され、分子内ジスルフィド結合を二つのシスティンの間に形成した。そ のペプチドを、トリフルオロ酢酸の存在下に樹脂から外し、それに続くペプチド の精製を、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー及び逆相高速液体クロマト グラフィーにより行った。得られたペプチドの純度は、８５％を超えていた。Ｃ −末端には、コンジュゲーションを助けるためにアラニンが含まれていた。その ペプチドを、リン酸緩衝溶液（Ｐ Ｂ Ｓ 、 ５ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、同量 の卵アルブミン（５ｍｇ／ｍｌ）と混合し、グルタルアルデヒドを加えて最終的 な濃度を０．１％（ｆ／Ｖ）とした。コンジュゲート混合物は、フロインドアジ ュバントと乳化する前に３０分間静置した。各々のヒツジ（５匹／グループ）は 、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）中の２５０μｇのペプチドで免疫され 、続いて（１４日後）さらに、同量をフロイント不完全アジュバント（Ｆ Ｉ Ａ）で免疫性を試−験（ｃｈａｌｌａｎｇｅ） した。さらに、３〜４週間ごと にＦＩＡを用いて免疫性試験を行った。免疫性試験の後７〜１０日ごとに血液標 本が採られ、ＨＩＶエンベロープ蛋白質に対する結合性が分析された。Example 1 array: Asp-Gln-3er-Leu-Lys-Gly-11e-Trp-Gly- A basic pair with Cys-3er-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys The C-terminally extended form of peptide (a) was prepared using standard, solid-phase F-moc methodology. It was synthesized using a molecule that forms an intramolecular disulfide bond between two cysteines. So of the peptide is removed from the resin in the presence of trifluoroacetic acid and the subsequent peptide Purification is performed by gel filtration, ion exchange chromatography and reversed phase high performance liquid chromatography. This was done by graphing. The purity of the obtained peptide was over 85%. C -The end contained an alanine to aid in conjugation. the Dissolve the peptide in phosphate buffer solution (PBS, 5 mg/ml) and add the same amount of egg albumin (5 mg/ml) and added glutaraldehyde for final preparation. The concentration was set to 0.1% (f/V). The conjugate mixture is The mixture was allowed to stand for 30 minutes before being emulsified with the adsorbent. Each sheep (5 animals/group) , immunized with 250 μg of peptide in complete Freund's adjuvant (FCA). Then (after 14 days), the same amount was added with Freund's incomplete adjuvant (FI). A) immunity was challenged. Additionally, every 3-4 weeks An immunological test was conducted using FIA. Blood samples every 7-10 days after immunity test The book was collected and analyzed for binding to HIV envelope proteins.
ＨＩＶエンベロープ蛋白質を認識する抗−合成ペプチド抗体の測定は、牛痘ウィ ルスの組換え体（例えば、Ｍａｃｋｅｔ、 Ｍ、及びＳｍ１ｔｈ、 Ｇ、 Ｌ、 （１９８６）、Ｊ、 ｇｅｎ。Measurement of anti-synthetic peptide antibodies that recognize HIV envelope proteins was performed using cowpox virus. recombinants of Russ (e.g., Macket, M, and Sm1th, G, L, (1986), J. gen.
Ｖｉｒｏｌ、 ６７、２０６７を一般的な方法論として参照のこと）を使って行 われたが、それは、感染した細胞の表面にＨＩＶエンベロープ蛋白質を発現する ように構築されたウィルスである。この分析法が好ましいのは、抗原の結合がウ ィルス感染した細胞の表面で測定されるからであり、そのため液相の抗原への結 合よりも、もっと正確に表わせるからである（例えば、エンベロープ蛋白質上の ある種の有力なニピトープは、生体内では、膜のリン脂質との相互作用によって マスクされるため）。９６−ウェルのマイクロプレートに単相培養してＣＶＩサ ル腎臓細胞を増殖させ、組換え牛痘ウィルスで感染させた。このウィルス構築物 は、ＨＩＶエンベロープ糖蛋白質をコードする遺伝子を含んでおり、それはプロ セスを受けて感染細胞の表面に発現されることが知られている。ヒツジからの抗 血清は、２回ずつ分析した。種々に希釈した抗血清の一定量５０μ！ずつをウェ ルに添加し、洗浄（２回）の前に４時間インキュベートし、２番目のペルオキシ ダーゼで標識した抗−ヒツジ抗血清を添加した。マイクロプレートリーダーで、 光学濃度を読み取って、陽性のウェルを判定した。抗−ペプチド抗血清は、感染 細胞の表面に発現されているＨＩＶエンベロープ蛋白質と、高い親和性で交叉反 応することがわかった。（表１及びＩＡ参照）これらの結果は、これらの抗−ペ プチド抗体が、研究用手段及び診断薬として、価値があることを確かなものとし ている。Virol, 67, 2067 for a general methodology). However, it expresses HIV envelope proteins on the surface of infected cells. It is a virus constructed in such a way. This assay is preferred because antigen binding is This is because it is measured on the surface of virus-infected cells, and therefore binding to the antigen in the liquid phase is not possible. This is because it can be expressed more accurately than a combination (e.g., Certain potent nipitopes are released in vivo by interaction with membrane phospholipids. masked). CVI support by monophasic culture in a 96-well microplate. kidney cells were grown and infected with recombinant cowpox virus. This viral construct contains the gene encoding the HIV envelope glycoprotein, which is a protein It is known that it is expressed on the surface of infected cells upon infection. Antibiotics from sheep Serum was analyzed in duplicate. A fixed amount of 50μ of variously diluted antisera! Zuzuwowe incubate for 4 hours before washing (2 times) and add a second peroxy Dase-labeled anti-sheep antiserum was added. with a microplate reader, Positive wells were determined by reading the optical density. Anti-peptide antiserum can be used to prevent infection. Cross-reacts with high affinity to HIV envelope protein expressed on the surface of cells. I found out that it works. (See Table 1 and IA) These results demonstrate that these anti- Ensure the value of peptide antibodies as research tools and diagnostic agents. ing.
来の血清と、サル腎臓細胞の表面に発現された組換えＨＩＶエンベロープ蛋白質 との間の交叉反応 交叉反応 対照としての、 ＨＩｖエンベロープ サル腎臓腎臓細胞量白質を発現してい るサル腎臓細胞系 免疫したヒラ ジ田来の血清 −十二工 対照血清 − 由来の陽性抗血清の、サル腎臓細胞表面上に発現された組換えＨＩＶエンベロー プ蛋白質と反応したときの代表的な力価 光学濃度の平均値 （血清の希釈） １１５０００に希釈 上記の表は、テストしたヒツジ由来の血清を、相当希釈しても、（対照に比較し て）力価の大きな増加があることを示している。human serum and recombinant HIV envelope protein expressed on the surface of monkey kidney cells. cross-reaction between cross reaction HIv envelope as a control Monkey Kidney Kidney Cells Expressing White Matter monkey kidney cell line immunized gila Ji Taku's Serum - Twelve Techniques Control serum - Recombinant HIV envelope expressed on the surface of monkey kidney cells of positive antiserum derived from Typical titer when reacting with protein Average value of optical density (Dilution of serum) diluted to 115,000 The table above shows that the serum from the sheep tested was significantly diluted (compared to the control). ) indicating a large increase in titer.
実施例２ 中和抗体の一つの役割は、感染細胞から非感染細胞へのウィルスの伝達である。Example 2 One role of neutralizing antibodies is the transmission of virus from infected cells to uninfected cells.
Ｔ細胞からマクロファージへのウィルスの伝達を妨げたり、速度を遅らせること は、極めて重大である。というのは、それによってＡＩＤＳｖＡ者を延命させる ことができ得る。この能力について、抗−ペプチド抗血清を、生体外でのシンシ チウム形成の阻害能で分析した。シンシチウムとは、多核の巨大細胞の事で、Ｈ ＩＶ感染細胞間の「ブリッジ」形成の結果できる。Interfering with or slowing down the transmission of virus from T cells to macrophages is extremely important. This is because it prolongs the lives of people with AIDS. You can get it. In this capacity, anti-peptide antisera were synthesized in vitro. It was analyzed for its ability to inhibit tium formation. A syncytium is a giant multinucleated cell. This results from the formation of "bridges" between IV-infected cells.
配列： Ａｓｐ−Ｇｌｎ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｉ １ｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ −Ｃｙｓ−５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−を有する基本的 なペプチド（ａ）の、Ｃ−末端を延長した形で、二つのシスティン残基の間に分 子内ジスルフィド結合を含んでいるものを合成し、精製し、コンシュケートし、 実施例１に記載したようにヒツジのグループを免疫する為に使用した。抗ペプチ ド抗血清を生体外ＨＩＶ中和アッセイに用いた。抗−ペプチド抗体を悪性の系統 のＨＩＶに感染したヒトＴリンパ球及び感染していない、ヒトマクロファージの 生体外培養に導入した。array: Asp-Gln-3er-Leu-Lys-Gly-I 1e-Trp-Gly -Cys-5er-Gly-Lys-Leu-Ala-Cys- The C-terminally extended form of peptide (a) is divided between two cysteine residues. Synthesize, purify, and concatenate those containing intramolecular disulfide bonds, It was used to immunize groups of sheep as described in Example 1. anti pepti The antiserum was used for in vitro HIV neutralization assays. Anti-peptide antibodies to malignant strains of HIV-infected human T lymphocytes and uninfected human macrophages. introduced into in vitro culture.
抗−ペプチド抗血清は、ＨＩＶ Ｉの悪性系統にさらされたＴ細胞及びマクロフ ァージの混合集団内において、シンシチウム形成を阻害することがわかった。す なわち、それらは、Ｔ細胞からマクロファージへのＨＩＶウイルスの伝達を阻害 したことになる。Anti-peptide antisera are effective against T cells and macrophages exposed to malignant strains of HIV I. It was found to inhibit syncytium formation within a mixed population of phages. vinegar That is, they inhibit the transmission of the HIV virus from T cells to macrophages. That means you did it.
表２に示したように、対照の培養においてはマクロファージは感染してしまうの に対して、抗体は、マクロファージのＨＩＶによる感染を防ぐことがわかり、そ れ故、この生体外での分析において、中和作用のあることがわかった。As shown in Table 2, in the control culture, macrophages were not infected. In contrast, antibodies were found to protect macrophages from infection with HIV; Therefore, in this in vitro analysis, it was found that it has a neutralizing effect.
表２ ＨＩＶ感染したヒトＴリンパ球及び非感染ヒトマクロファージの、生体外 培養における、ＨＩＶ悪性系の中和。ｒ＋＋＋Ｊは高いレベルの感染を示し、「 −」は、感染に対する有効な防御を表している。Table 2 In vitro analysis of HIV-infected human T lymphocytes and uninfected human macrophages Neutralization of HIV malignancy in culture. r+++J indicates a high level of infection, −” indicates effective protection against infection.
ＨＩＶ惑染Ｔリンパ球及び 非感染マクロファージのみ ＋＋＋ ＨＩＶ感染Ｔリンパ球、 非感染マクロファージ 及び抗−ペプチド（ａ）抗体 − 又、ペプチド（ａ）に陽性な抗血清をシンシチウム分析法で評価した。この分析 法は、抗血清が、感染細胞から非感染細胞への生きたウィルスの広がりを防ぐ能 力及び、ウィルス糖蛋白質（ｇ ｐ １６０）とＣＤ４分子との間の反応性を介 する細胞間の融合を防ぐ能力を測定するものである。測定は、シンシチウムの検 出及び計数によって行われた。HIV-infected T lymphocytes and Non-infected macrophages only +++ HIV-infected T lymphocytes, non-infected macrophages and anti-peptide (a) antibody- In addition, antisera positive for peptide (a) were evaluated by syncytium analysis. This analysis The method is based on the ability of the antiserum to prevent the spread of live virus from infected cells to uninfected cells. mediated the reactivity between the viral glycoprotein (gp160) and the CD4 molecule. It measures the ability to prevent fusion between cells. The measurement is based on syncytium detection. This was done by counting and counting.
シンシチウム分析法は、以下のように行なわれた：既知の濃度の活性のウィルス の複製を維持している細胞系であるＨＩＶ生産細胞（ＣＤ＋４）を、３回洗浄し 、テストした抗血清と混合し、特定の希釈度で使用した。The syncytium assay was performed as follows: known concentrations of active virus. HIV-producing cells (CD+4), a cell line that maintains replication, were washed three times. , mixed with the tested antisera and used at specific dilutions.
３７℃で３０分間インキュベートした後、それらの細胞を、指標となり、ＨＩＶ 感染及びシンシチウムの誘導に高い感受性のあるＣＤＪ＋細胞と、特定の割合で 混合した。After incubation for 30 minutes at 37°C, the cells were labeled with CDJ+ cells are highly susceptible to infection and syncytial induction, and a certain proportion of Mixed.
細胞を毎日観察してシンシチウム形成を調べた。Cells were observed daily to examine syncytium formation.
表３に示したように、ペプチド（ａ）に対する抗体は、シンシチウム形成を阻害 することがわかった。As shown in Table 3, antibodies against peptide (a) inhibited syncytium formation. I found out that it does.
血清試料 シンシチウムの阻害 抗−ペプチド（ａ）抗血清 ＋ （３１５匹）正常ヒツジ血清 一 実施例３ 後天性免疫不全症候群（Ａ Ｉ Ｄ Ｓ）の、無徴候から全徴候に至るまでのい ろいろな段階にある、ＨＩＶ感染した個体からの血清パネルを、それらの患者由 来の血清の、ＥＬ Ｉ ＳＡにおける合成ペプチドとの反応性の代表像を作るた めに得た。Serum sample syncytium inhibition Anti-peptide (a) antiserum + (315 animals) normal sheep serum - Example 3 Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) symptoms range from no symptoms to full symptoms. Serum panels from HIV-infected individuals at various stages were collected from those patients. In order to create a representative image of the reactivity of recent serum with synthetic peptides in EL ISA. I got it for a while.
ＥＬ Ｉ ＳＡ法は、合成ペプチド（ＨＩＶ−１の経膜的な蛋白質ｇ ｐ１２０ 又はｇｐ４１の部分の類似物）の、ＨＩＶ−１陽性個体の血清中に存在するＨＩ Ｖ−１表面糖類蛋白質に対する抗体との反応の程度を測定するものである。The EL I SA method uses a synthetic peptide (HIV-1 transmembrane protein g p120 or analogs of parts of gp41) present in the serum of HIV-1 positive individuals. This test measures the degree of reaction with antibodies against V-1 surface saccharide proteins.
ＨＩＶ陽性個体１００人の血清を、合成ペプチド（ａ）と反応させた。表４に示 したように、これらの血清のうちの二つ（無徴候の個体由来）が、ＨＩＶ中和抗 体を含みペプチド（ａ）と交叉反応をした。Serum from 100 HIV positive individuals was reacted with synthetic peptide (a). Shown in Table 4 As shown, two of these sera (from asymptomatic individuals) had HIV-neutralizing antibodies. It cross-reacted with peptide (a).
ＨＩＶ陽性抗血清との交叉反応性 試 料 光学濃度ＯＤペプシド（ａ） 緩衝液 ０．０５６ 正常血清 １／１００ ０．４７６ １／１０００ ０．１４０ ＨＩＶ陽性（１） Ｌ’１００ ＞２．０１／１０００ ＞２．０ ＥＩＩＶ陽性（２） １．／’１００ ＞２．０ ）＞２．０ ） ＜り返し １．３７ ） 要 約 書 開示された合成ポリペプチドは、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ Ｖ）の少なくと も１つの系統のエンベロープ蛋白質の少なくとも１つの抗原性を含む。好ましい 配列は、Ｘ−Ａｓｐ−Ｇ Ｉｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ ｌｙ−Ｉ １ ｅ−Ｔｒｐ−Ｇ ｌ ｙ−Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ｇ ｌ ｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｌ ａ−Ｃｙｓ−Ｙ （式中、Ｘ及びＹは各々独立に欠失しているか又は独立に１つ 以上の付加的なアミノ酸残基であり、１０位と１６位のＣｙｓ残基は分子内ジス ルフィド結合により任意に結合している）である。そのようなポリペプチドはＨ ＩＶ感染の診断、治療及び予防に用いられる。前記ペプチドと特異的に結合する 、抗体及びそれの結合フラグメントも特許請求するものである。Cross-reactivity with HIV-positive antiserum Sample Optical density OD Pepcid (a) Buffer 0.056 Normal serum 1/100 0.476 1/1000 0.140 HIV positive (1) L’100>2.01/1000>2.0 EIIV positive (2) 1. /'100>2.0)>2.0)<return 1.37) Summary book The disclosed synthetic polypeptides contain at least one human immunodeficiency virus (HIV). also contains at least one antigenicity of one family of envelope proteins. preferable The sequence is X-Asp-G In-5er-Leu-Lys-G ly-I 1 e-Trp-G l y-Cys-8er-G l y-Lys-Leu-Al a-Cys-Y (wherein, X and Y are each independently deleted, or independently one These are additional amino acid residues, and the Cys residues at positions 10 and 16 are intramolecular dis- optionally bonded by a rufidic bond). Such a polypeptide is H Used in the diagnosis, treatment and prevention of IV infections. specifically binds to the peptide , antibodies and binding fragments thereof are also claimed.
補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法＄１８４条の８）平成４年 ９月１４日Copy and translation of amendment) Submission (Patent Act $184-8) September 14, 1992
Claims (1)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9005829.8 | 1990-03-15 | ||
| GB909005829A GB9005829D0 (en) | 1990-03-15 | 1990-03-15 | Synthetic polypeptides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05505188A true JPH05505188A (en) | 1993-08-05 |
Family
ID=10672665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3505817A Pending JPH05505188A (en) | 1990-03-15 | 1991-03-13 | synthetic polypeptide |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0519986A1 (en) |
| JP (1) | JPH05505188A (en) |
| CN (1) | CN1054772A (en) |
| AP (1) | AP211A (en) |
| AU (1) | AU636735B2 (en) |
| BR (1) | BR9106159A (en) |
| CA (1) | CA2078220A1 (en) |
| CS (1) | CS68091A2 (en) |
| FI (1) | FI923800A0 (en) |
| GB (1) | GB9005829D0 (en) |
| HU (1) | HUT63179A (en) |
| IL (1) | IL97551A0 (en) |
| MX (1) | MX24890A (en) |
| NZ (1) | NZ237417A (en) |
| OA (1) | OA09671A (en) |
| WO (1) | WO1991013909A1 (en) |
| ZA (1) | ZA911886B (en) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0565704A4 (en) * | 1991-11-04 | 1995-10-25 | Baxter Diagnostics Inc | Synthetic peptides corresponding to portions of hiv-2 virus and methods of using in an improved assay |
| US5395750A (en) * | 1992-02-28 | 1995-03-07 | Hoffmann-La Roche Inc. | Methods for producing proteins which bind to predetermined antigens |
| US5888992A (en) * | 1992-03-11 | 1999-03-30 | Narhex Limited | Polar substituted hydrocarbons |
| CA2130754C (en) * | 1992-03-11 | 2005-02-08 | Damian W. Grobelny | Amine derivatives of oxo- and hydroxy-substituted hydrocarbons |
| US6071895A (en) * | 1992-03-11 | 2000-06-06 | Narhex Limited | Polar-substituted hydrocarbons |
| ATE253050T1 (en) | 1992-03-11 | 2003-11-15 | Narhex Ltd | AMINE DERIVATIVES OF OXO- AND HYDROXY-SUBSTITUTED HYDROCARBONS |
| GB9208428D0 (en) * | 1992-04-16 | 1992-06-03 | Proteus Molecular Design | Synthetic polypeptides |
| US6511845B1 (en) | 1992-08-07 | 2003-01-28 | Alan R. Davis | Methods for producing an immune response against HIV-1 |
| CN1091138A (en) | 1992-08-27 | 1994-08-24 | 迪金研究有限公司 | Vaccine |
| DE4402756A1 (en) * | 1994-01-31 | 1995-08-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Specific binding substances for antibodies and their use for immunoassays or vaccines |
| AUPM411994A0 (en) * | 1994-02-25 | 1994-03-24 | Deakin Research Limited | Epitopes |
| US6764682B1 (en) * | 1994-06-16 | 2004-07-20 | Aventis Pasteur Limited | Adjuvant compositions containing more than one adjuvant |
| US6290971B1 (en) | 1995-06-15 | 2001-09-18 | Aventis Pasteur Limited | Adjuvant compositions comprising a mineral salt and another immunostimulating compound |
| CN1472314A (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-04 | 清华大学 | Immunity expression of AIDS virus O and its use |
| CN100445296C (en) * | 2006-03-31 | 2008-12-24 | 浙江大学 | Polypeptide organic compounds and application in xenogeneic transplantation |
| WO2010057197A1 (en) | 2008-11-17 | 2010-05-20 | The Regents Of The University Of Michigan | Cancer vaccine compositions and methods of using the same |
| GB201612108D0 (en) | 2016-07-12 | 2016-08-24 | Univ Strathclyde | Preperation of non-ionic surfactant vesicles and variants |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8714802D0 (en) * | 1987-06-24 | 1987-07-29 | Proteus Biotech Ltd | Synthetic polypeptides |
| ES2054769T3 (en) * | 1987-11-16 | 1994-08-16 | Hoffmann La Roche | RECOMBINANT HIV-2 POLYPEPTIDES. |
-
1990
- 1990-03-15 GB GB909005829A patent/GB9005829D0/en active Pending
-
1991
- 1991-03-13 NZ NZ237417A patent/NZ237417A/en unknown
- 1991-03-13 EP EP91906077A patent/EP0519986A1/en not_active Withdrawn
- 1991-03-13 JP JP3505817A patent/JPH05505188A/en active Pending
- 1991-03-13 MX MX2489091A patent/MX24890A/en unknown
- 1991-03-13 HU HU922939A patent/HUT63179A/en unknown
- 1991-03-13 CA CA002078220A patent/CA2078220A1/en not_active Abandoned
- 1991-03-13 WO PCT/GB1991/000392 patent/WO1991013909A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-03-13 AU AU74679/91A patent/AU636735B2/en not_active Ceased
- 1991-03-13 BR BR919106159A patent/BR9106159A/en not_active Application Discontinuation
- 1991-03-14 ZA ZA911886A patent/ZA911886B/en unknown
- 1991-03-14 IL IL97551A patent/IL97551A0/en unknown
- 1991-03-14 AP APAP/P/1991/000245A patent/AP211A/en active
- 1991-03-15 CN CN91101549A patent/CN1054772A/en active Pending
- 1991-03-15 CS CS91680A patent/CS68091A2/en unknown
-
1992
- 1992-08-24 FI FI923800A patent/FI923800A0/en not_active Application Discontinuation
- 1992-09-11 OA OA60275A patent/OA09671A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA911886B (en) | 1991-12-24 |
| HUT63179A (en) | 1993-07-28 |
| CA2078220A1 (en) | 1991-09-16 |
| FI923800A (en) | 1992-08-24 |
| CS68091A2 (en) | 1991-12-17 |
| GB9005829D0 (en) | 1990-05-09 |
| AU636735B2 (en) | 1993-05-06 |
| AP211A (en) | 1992-10-21 |
| MX24890A (en) | 1993-12-01 |
| HU9202939D0 (en) | 1992-12-28 |
| CN1054772A (en) | 1991-09-25 |
| AU7467991A (en) | 1991-10-10 |
| AP9100245A0 (en) | 1991-04-30 |
| IL97551A0 (en) | 1992-06-21 |
| FI923800A0 (en) | 1992-08-24 |
| OA09671A (en) | 1993-05-15 |
| NZ237417A (en) | 1993-10-26 |
| EP0519986A1 (en) | 1992-12-30 |
| BR9106159A (en) | 1993-03-16 |
| WO1991013909A1 (en) | 1991-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5019387A (en) | Production of antibodies to HIV | |
| US5013548A (en) | Production of antibodies to HIV | |
| EP0550599B1 (en) | Peptides for use in vaccination and induction of neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus | |
| JPH05505188A (en) | synthetic polypeptide | |
| JP2003529319A (en) | Methods of eliciting broadly neutralizing antibodies targeting HIV-1 gp41 | |
| EP0939835A1 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
| JPH089636B2 (en) | HTLV-III / LAV virus-related peptide | |
| US5346989A (en) | Peptides for use in induction of T cell activation against HIV-1 | |
| JPH07505878A (en) | Synthetic polypeptide derived from HIV envelope glycoprotein | |
| JPS61246200A (en) | Peptide useful for vaccination against intestinal virus | |
| KR100887591B1 (en) | Method For Obtaining Antigenic Structures Enhancing Specific Cross Reactivity | |
| JP4391827B2 (en) | Immunogenic preparation of variable peptide epitope and method for producing the same | |
| JPH06510025A (en) | Peptides used to induce T cell activation against HIV-1 | |
| JPH09500096A (en) | Peptides used for vaccination against human immunodeficiency virus and induction of neutralizing antibodies | |
| JPH07502729A (en) | Methods and compositions for inducing an immune or anti-infective response | |
| JPH07502493A (en) | Peptides corresponding to antigenic determinants of HTLV | |
| AU2006200455A1 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
| AU2004201321A1 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
| MXPA99003380A (en) | Compositions and methods for treating viral infections |