FI91977B - Menetelmä mikro-organismien määrittämiseksi ja erottamiseksi - Google Patents

Menetelmä mikro-organismien määrittämiseksi ja erottamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI91977B
FI91977B FI910358A FI910358A FI91977B FI 91977 B FI91977 B FI 91977B FI 910358 A FI910358 A FI 910358A FI 910358 A FI910358 A FI 910358A FI 91977 B FI91977 B FI 91977B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
filter
microorganisms
sample
bacteria
liquid
Prior art date
Application number
FI910358A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI910358A (fi
FI91977C (fi
FI910358A0 (fi
Inventor
Helena Marjatta Tuompo
Heljae Benita Glasin
Original Assignee
Orion Yhtymae Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Orion Yhtymae Oy filed Critical Orion Yhtymae Oy
Publication of FI910358A0 publication Critical patent/FI910358A0/fi
Priority to FI910358A priority Critical patent/FI91977C/fi
Priority to US07/740,320 priority patent/US5420017A/en
Priority to EP92101133A priority patent/EP0496410B1/en
Priority to DE69214474T priority patent/DE69214474T2/de
Priority to JP4032921A priority patent/JPH078293A/ja
Priority to AT92101133T priority patent/ATE144289T1/de
Publication of FI910358A publication Critical patent/FI910358A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI91977B publication Critical patent/FI91977B/fi
Publication of FI91977C publication Critical patent/FI91977C/fi
Priority to US08/450,630 priority patent/US5714343A/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/14—Streptococcus; Staphylococcus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/528—Atypical element structures, e.g. gloves, rods, tampons, toilet paper
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2304/00—Chemical means of detecting microorganisms
    • C12Q2304/20—Redox indicators
    • C12Q2304/24—Tetrazolium; Formazan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/90—Developer
    • C12Q2326/92—Nitro blue tetrazolium chloride, i.e. NBT

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Description

91 977
MENETELMÄ MIKRO-ORGANISMIEN MÄÄRITTÄMISEKSI JA EROTTAMISEKSI
5 Keksinnön kohteena on menetelmä, jolla voidaan nopeasti osoittaa mikro-organismien kokonaismäärä nestemäisestä näytteestä. Keksinnölle on tunnusomaista se, mikä määritellään patenttivaatimuksissa.
10 Mikro-organismit voidaan osoittaa biologisista näytteistä suoraan konsentroimalla näytettä erilaisilla suodatinsys-teemeillä ja värjäämällä konsentroitunut bakteerikasvusto erilaisilla mikrobien pintarakenteisiin tarttuvilla väriaineilla kuten safraniinilla tai fuksiinilla. Tällaisia 15 menetelmiä kuvataan mm. patenteissa US-A-4336337 ja EP-A-288621.
Bakteerien nopeaan tunnistamiseen biologisista näytteistä voidaan käyttää myös biokemiallisia reaktioita kuten 20 entsymaattisia osoituksia ja sokerien käyttökykyyn perustuvia menetelmiä. Entsymaattisista reaktioista ovat erityisen nopeita sytokromien ja entsyymien, kuten dehydrogenaasien katalysoimat hapetus-pelkistysreaktiot, joita esiintyy kaikissä soluissa, sekä eläinsoluissa, että bakteereissa.
25 Dehydrogenaasit ovat mitattavissa bakteereja hajottamatta ennestään tunnetulla histokemiallisella menetelmällä, jota on käytetty dehydrogenaasien paikantamiseen mm. leukosyyteistä ja histologisista kudosleikkeistä (Michel, G. et ai., Methods of Enzymatic Analysis, p. 197-232, voi. 1, 30 1983). Tällöin luonnollinen vetyakseptori dehydrogenaasi- reaktiossa korvataan esim. tetratsoliumsuolalla, joka vetyä vastaanottaessaan pelkistyy värilliseksi sinisenvioletiksi ja samalla saostuu liukenemattomaksi. Dehydrogenaasien määritysseokseen voidaan lisätä myös välittäjä, elektronin-35 siirtäjä, kuten fenatsiinimetosulfaatti (PMS), joka nopeuttaa ja vahvistaa reaktiota. PMS välittää NADrlta vedyn tetratsoliumsuolalle, joka puolestaan saostuu värillikseksi 2 91977 formatsaaniksi. PMS voidaan myös korvata muilla vetyaksep-toreilla kuten menadionilla, meldola bluella (C.1.51175; Basic blue 6), tai metoksifenatsiinimetosulfaatilla.
5 Edellä kuvattua menetelmää on käytetty myös bakteerien osoittamisessa. Kun bakteeripitoiseen näytteeseen lisätään hapetus-pelkistysreaktiota mittaava yhdiste kuten trifenyy-litetratsoliumkloridi (TTC) se pelkistyy ja yhdiste muuttuu värittömästä punaiseksi, mikä voidaan todeta visuaalisesti 10 tai kolorimetrisesti mittaamalla. TTC:n lisäksi voidaan käyttää myös muita,nopeampia, tetratsoliumsuoloja kuten jodonitrotetratsoliumia (INT)ja neotetratsoliumkloridia (NTC), sekä siniseksi muuttuvia: blue tetratsoliumia (BT) ja nitroblue tetratsoliumia (NBT) (Histological and His-15 tochemical Methods, Theory and Practice, Chapter 16, p. 258, second edition 1990).
Menetelmä on erityisen sovelias käytettäväksi laitteessa, jossa bakteerit määritetään suoraan biologisista näytteistä 20 keräämällä bakteerit suotimelle, jonka alla on imukykyinen materiaali, kuten US-patentissa 3741877 on esitetty. Jos näytteessä on häiritseviä aineita, niitä ei voida US-patentissa 3741877 esitetyllä menetelmällä poistaa, pesemällä bakteereja ennen määritystä, koska ne valuisivat pois 25 suotimelta. Siksi edellä mainitun patentin mukaista määritysmenetelmää on kehitetty edelleen yhdistämällä siihen bakteereja keräävä ja bakteerien pesua edesauttava keruuosa kuten WO-patentissa 89/01966 aikaisemmin on esitetty. Patenttihakemuksessamme esitetyn keksinnön mukaisessa mene-30 telmässä bakteereja ei tarvitse kasvattaa pesäkkeiksi, kuten US-patentissa 3741877 on esitetty, eikä suodatinta tarvitse irrottaa määritystä varten kuten WO-patentissa 89/01966 on esitetty, vaan bakteerit voidaan määrittää välittömästi suoraan siltä suotimelta, jolle ne on kerätty.
35 Patenttihakemuksessamme esitetty laite koostuu huokoisesta suotimesta, tai useista erilaisen huokoskoon omaavista suotimista, jolle näyte imeytetään ja mikro-organismit
II
91977 3 todetaan välittömästi hapetus-pelkistysreaktiota mittaavan värin avulla suoraan siltä suotimelta, jonka pinnalle bakteerit jäävät. Tällöin muut eri partikkelikoon omaavat solut, kuten leukosyytit, jotka pelkistyvät samoissa 5 olosuhteissa, voidaan erottaa eri suotimelle tai useammalle suotimelle ja määrittää erikseen kyseiseltä suotimelta. Näytteessä mahdollisesti vapaana olevat väriä pelkistävät aineet kuten liukoiset entsyymit, askorbiinihappo, lääkeaineet, pienimolekyyliset sulfhydryyliryhmiä sisältävät 10 molekyylit, kuten glutationi, ja muut mahdolliset pelkistävät aineet menevät sen suotimen läpi, jolle bakteerit jäävät.
Seuraavassa keksintöä kuvataan yksityiskohtaisesti viittaa-15 maila oheisiin piirustuksiin, joissa kuva 1 esittää laitetta, jossa näyte kerätään suotimelle ja kuva 2 toista laitetta, jossa näyte imeytetään suotimeen. Molemmilta laitteilta mikro-organismien kokonaismäärä voidaan todeta suoraan dehydrogenaasien aktiivisuutta mittaavan värin avulla.
20
Kuvassa 1 on esitetty lohkokaavio laitteesta, jossa nestemäinen näyte pipetoidaan esisuotimen 1 päälle, jos näyte on rakeinen, tai sisältää runsaasti leukosyyttejä, muuten esi-suodinta 1 ei tarvita. Keruuosa 2 keskittää näytteen mikro-25 organismit suotimelle 3, jolle bakteerit jäävät. Näyte voi 4 olla etukäteen puskuroitu, tai bakteerit voidaan pestä suo-timella 3 puskuriliuoksella ja välittömästi värjätä dehydrogenaasien osoitusseoksella, jolloin mikro-organismien ympärille muodostuu sinistä formatsaania. Suotimen 3 alla 30 on imukykyistä materiaalia 4, johon näytteen nesteylimäärä imeytyy. Kaikki osat voidaan liittää pohja-osaan 5, jolloin laitteesta muodostuu koottu rasia.
Kuvassa 2 on näytteen kiinteät osat sitova esisuodatin 1 35 ja suodin 3, jota mikro-organismit eivät läpäise, sekä nestettä imevä materiaali 4 asetettu kaikki tukialustalle 2, joka voi olla esimerkiksi muovia. Suotimet 1 ja 3 ja imevä ♦ 91 977 4 materiaali 4 voidaan kiinnittää esimerkiksi kaksipuolisella teipillä tukialustaan 2. Puskuroitu näyte imeytetään esi-suotimeen 1 ja bakteerit kerääntyvät sen ja suotimen 3 rajakohtaan, josta ne voidaan todeta imeyttämällä esisuo-5 timeen 1 dehydrogenaasien osoitusseoksella, jolloin mikro-organismien ympärille muodostuu sinistä formatsaania.
10 ESIMERKKI 1
Bakteerit olivat virtsatieinfektioissa esiintyviä ATCC:n tyyppikantoja tai kliinisiä kantoja, jotka oli saatu Hel-15 singin yliopiston serobakteriologian laitokselta. Gram-negatiivisia bakteereja: Escherichia coli (ATCC 25922) ja useita kliinisiä kantoja, Klebsiella aerogenes (ATCC 13883) , Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Entero-bacter aerogenes (ATCC 13048). Gram-positiivisia bakteere-20 ja: Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus faecium (ATCC 9790), Streptococcus beta-haemolyticus B-ryhmä, Enterococcus sp., Corynebac-terium sp. Kaikki kannat tarkistettiin biokemiallisten 25 reaktioiden ja sokerifermentaatioiden avulla (API-10S, API-Staph, API-Strep., Bio Merieux, Montalieu-Vercieu). Hiivoja oli: Candida albicans (ATCC 28367 ja 36802). Bakteerit kasvatettiin yli yön BHI:ssa (Brain Heart Infusion, Difco, Detroit), 37 °C ja bakteeritiheys säädettiin BHI:sta laimen-30 tantalla 10® kpl/ml steriilillä 0.9 % NaCl, joka vastasi optista tiheyttä 0.400, 650 nm mitattaessa (Perkin Elmer
Spectrophotometer, Norwalk). Pesäkkeiden määrä/ml tarkistettiin tekemällä laimennussarja ja viljelemällä verimal-joilla. Hiivoja kasvatettiin kaksi vuorokautta 37 °C Sa-35 bouraud-maljoilla ja maljalta kerätyistä pesäkkeistä teh tiin suspensio 10® kpl/ml kuten edellä.
»
II
5 91977 Määrityksessä 100 μΐ bakteereja lisättiin 100 μΐ 0.2 M Tris-HCl puskurissa, pH 6.5, pH 7.2, pH 8.5 (Sigma, St. Louis), johon lisättiin 1 % :ksi glukoosia (BDH, Poole), tai fruktoosia (BDH, Poole), tai asetaattia (Merck, Darms-5 tadt), tai glutamiinihappoa (Merck, Darmstadt). Näyte siirrettiin pipetillä suodatuslaitteistolle, johon bakteerit keskittyivät noin halkaisijaltaan 3 mm alueelle suotimen päälle (Schleicher & Schuell lasikuitusuodatin No 8, Das-sel) , tai suodatin (leukosyyttifiltteri, Pali BioSupport 10 Company, Glen Cove) kastettiin näytteeseen ja bakteerit imeytyivät siihen ja kulkeutuivat suodattimena rajakohtaan, jossa on toinen suodatin (Schleicher & Schuell, No 8, Dassel). Bakteerit osoitettiin lisäämällä 100 ui NBT-liuosta (1 mg/ml, Sigma, St Louis), johon oli lisätty 10 ui 15 PMS (lmg/ml, Sigma, St.Louis).
Värin muodostuminen luettiin visuaalisesti eri aikojen kuluttua seuraavasti: 0= väritön, 1= heikko väri, 2= selvä väri, 3= hyvä väri, 4= tumma väri, 5= hyvin tumma väri.
20 ESIMERKKI 2 25
Mikro-organismien osoitus suotimelta eri pitoisuuksissa tehtiin esimerkin 1 mukaan. Lyhyesti, mikro-organismeja sekoitettiin ravistelijassa hetki ja inkuboitiin 30 sekunttia 0.2 M Tris-HCl-puskurissa, eri pH:ssa, jossa oli 1 % 30 glukoosia, siirrettiin suotimelle ja lisättiin NBT-PMS-liuos ja luet-tiin sinisen formatsaanin intensiteetti 30 min kuluttua.
35 6 919 77
Escherichia Escherichia Escherichia Escherichia 5 coli coli a coli b 2956 (ATCC 25922) pH 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 10 bakt.
/ml 107 233 443 444 231 106 222 222 023 111 105 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 15 _ 20 Escherichia Escherichia Klebsiella Enterobacter coli 3338 coli 110515 aerogenes aerogenes (ATCC 13883) (ATCC 13048) pH 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 25_____________ bakt.
/ml 107 4 5 5 2 3 3 5 5 5 5 5 5 106 222 222 445 455 30 105 000 000 233 333
II
35 7 91977
Proteus Pseudomonas Enterococcus Streptococcus 5 mirabilis aerogenes sp. agalactiae pH 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 bakt.
10 /ml 107 5 5 5 4 4 4 5 5 5 5 5 5 106 334 222 333 323 10s 112 122 222 121 15
Streptococ- Streptococ- Staphylococ- Staphylococ-20 cus beta- cus faecium cus aureus cus epider- haemol. B (ATCC 9790) midis pH 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 25 bakt.
/ml 107 5 5 5 4 4 4 3 5 5 4 4 4 106 344 333 233 223 10s 122 122 012 012 3 0 _ 35 91977 8
Corynebacte- Corynebacte- Corynebacte- Corynebacte-5 rium sp. rium sp. rium sp. riuxn sp.
pH 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 bakt.
10 /ml 107 555 444 555 555 106 334 222 333 323 105 111 122 111 111 15
Candida Candida Candida Candida
20 albicans albicans albicans sp. albicans B
(ATCC 28367) (ATCC 36802) pH 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 6.5 7.2 8.5 25 hiiva /ml 107 555 444 355 444 106 233 333 233 223 30 105 122 122 012 Oil
II
35

Claims (6)

91977
1. Menetelmä mikro-organismien kokonaismäärän osoittamiseksi nestemäisestä näytteestä tunnettu sii- 5 tä, että a) mikro-organismit erotetaan suspensiosta suodatinma-teriaalin (3) avulla, jonka huokoskoko on sellainen, että mikrobien läpäisy estyy jolloin ne konsentroitu- 10 vat optimaalisen herkkyyden saavuttamiseksi, mutta riittävä häiritsevien vapaana olevien pelkistävien yhdisteiden poistamiseksi, ja b) osoitetaan mikro-organismien dehydrogenaasientsyy- 15 mien läsnäolo organismeja hajoittamatta käyttämällä dehydrogenaasientsyymin substraattina värittömästä värillisiksi muuttuvia saostuvia redox-yhdisteitä suoraan siltä suotimelta, jolle mikro-organismit suoda tettaessa jäävät. 20
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnet- t u siitä, että nestemäinen näyte on virtsa tai pro-sessineste.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä tunnet tu siitä, että nestemäinen näyte on virtsa.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnet- t u siitä, että redox-yhdiste on saostuva trifenyyli- 30 tetratsoliumkloridi (TTC), jodonitrotetratsolium (INT), neotetratsoliumkloridi (NTC), blue tetratsolium (BT) tai nitroblue tetratsolium (NBT).
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnet- 35. u siitä, että suotimen (3) huokoskoko on 0.75-1.2 μτα. 91977
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnet-t u siitä, että käytetty suodatin on kiinnitetty laitteeseen siten, että se rajoittuu imukykyiseen adsorbenttiin joka imee näytteen nesteylimäärän sekä 5 liukoiset häiritsevät tekijät. 15 20 25 30 II 35 91977
FI910358A 1991-01-24 1991-01-24 Menetelmä mikro-organismien määrittämiseksi ja erottamiseksi FI91977C (fi)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI910358A FI91977C (fi) 1991-01-24 1991-01-24 Menetelmä mikro-organismien määrittämiseksi ja erottamiseksi
US07/740,320 US5420017A (en) 1991-01-24 1991-08-05 Method and kit for the detection of microorganisms
EP92101133A EP0496410B1 (en) 1991-01-24 1992-01-24 A method for the detection of microorganisms
DE69214474T DE69214474T2 (de) 1991-01-24 1992-01-24 Ein Verfahren zum Nachweis von Mikroorganismen
JP4032921A JPH078293A (ja) 1991-01-24 1992-01-24 微生物検出方法
AT92101133T ATE144289T1 (de) 1991-01-24 1992-01-24 Ein verfahren zum nachweis von mikroorganismen
US08/450,630 US5714343A (en) 1991-01-24 1995-07-31 Method and kit for the detection of microorganisms

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI910358A FI91977C (fi) 1991-01-24 1991-01-24 Menetelmä mikro-organismien määrittämiseksi ja erottamiseksi
FI910358 1991-01-24

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI910358A0 FI910358A0 (fi) 1991-01-24
FI910358A FI910358A (fi) 1992-07-25
FI91977B true FI91977B (fi) 1994-05-31
FI91977C FI91977C (fi) 1994-09-12

Family

ID=8531791

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI910358A FI91977C (fi) 1991-01-24 1991-01-24 Menetelmä mikro-organismien määrittämiseksi ja erottamiseksi

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0496410B1 (fi)
JP (1) JPH078293A (fi)
AT (1) ATE144289T1 (fi)
DE (1) DE69214474T2 (fi)
FI (1) FI91977C (fi)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6818417B2 (en) * 2002-08-06 2004-11-16 Nalco Company Method for locating hidden microorganism contaminated surfaces in industrial water systems
GB2409519B (en) * 2003-12-22 2005-11-09 Prail Price Richardson Diagnos Microorganism detector
CH703678B1 (de) * 2004-04-06 2012-03-15 Empa Testmaterialien Ag Verfahren und Einrichtung zum Testen bakterizider Wirkung von Substanzen.
JP5771934B2 (ja) * 2010-10-01 2015-09-02 コニカミノルタ株式会社 細胞染色方法及び細胞染色用キット
CZ2013456A3 (cs) * 2013-06-14 2014-12-29 Metacell, S.R.O. Způsob separace sporadických buněk z tělních tekutin a zařízení pro provádění tohoto způsobu
KR20230002416A (ko) * 2020-03-27 2023-01-05 마이크론브레인 메디컬 씨오., 엘티디. 생물학적 샘플에서 미생물을 농축 및 검출하기 위한 방법 및 장치

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4525453A (en) * 1982-10-26 1985-06-25 Eastman Kodak Company Process for rapidly differentiating between gram-negative and gram-positive microorganisms
EP0288621B1 (en) * 1987-04-27 1993-03-10 Texas BioResource Corporation Method and apparatus for detection and quantitation of bacteria

Also Published As

Publication number Publication date
FI910358A (fi) 1992-07-25
FI91977C (fi) 1994-09-12
DE69214474T2 (de) 1997-05-22
ATE144289T1 (de) 1996-11-15
FI910358A0 (fi) 1991-01-24
EP0496410B1 (en) 1996-10-16
DE69214474D1 (de) 1996-11-21
EP0496410A1 (en) 1992-07-29
JPH078293A (ja) 1995-01-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5420017A (en) Method and kit for the detection of microorganisms
Yamaguchi et al. Flow cytometric analysis of bacterial respiratory and enzymatic activity in the natural aquatic environment
US4336337A (en) Detection of bacteria
US4225669A (en) Staining and analysis of bacteria
US5081017A (en) Method and apparatus for detection and quantitation of bacteria
FI67725C (fi) Foerfarande foer framstaellning av enheter avsedda foer bestaemning av antibiotika- och sulfarester i biologiska vaetskor och framstaellda enheter
Bitton et al. Biochemical tests for toxicity screening
EP1725676B1 (en) Measuring contamination
FI96434B (fi) Laite fluoresenssin vahvistamiseksi ja kinetiikka ja menetelmiä laitteen käyttämiseksi
FI91085B (fi) Menetelmä gram-negatiivisten bakteerien määrittämiseksi ja erottamiseksi
FI91977B (fi) Menetelmä mikro-organismien määrittämiseksi ja erottamiseksi
JPS6382363A (ja) 分析用コバルト（３）試薬組成物
JP2004508833A (ja) バイオマスの検出および測定のための方法
Learoyd et al. An investigation of dye reduction by food‐borne bacteria
WO1988008037A1 (en) Method for the detection of bacteria and fungi
CA1311178C (en) Use of substituted ortho-quinones as electron transfer agents in analytical determinations
EP0255679B1 (en) Composition and method using substituted ortho-quinones as electron transfer agents in analytical determinations
EP0124285A2 (en) Method and device for detecting microorganisms
EP0255087A2 (en) Cobalt(III) reagents in combination with water soluble polymers
EP0288621B1 (en) Method and apparatus for detection and quantitation of bacteria
Reynolds et al. Development of a rapid method for the enumeration of bacteria in potable water
JP2002500020A (ja) 嫌気性細菌の毒性化合物による阻止および殺害を迅速に評価する方法
WO1995014105A2 (en) Antibiotic sensitivity profile
EP4310192A1 (en) Method of determining the existence and/or degree of resistance of microorganisms to antimicrobial agents
CA2395938A1 (en) Diagnostic analytical method and kit

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Owner name: ORION-YHTYMAE OY

BB Publication of examined application