FI87795C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara polypeptider - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara polypeptider Download PDFInfo
- Publication number
- FI87795C FI87795C FI873632A FI873632A FI87795C FI 87795 C FI87795 C FI 87795C FI 873632 A FI873632 A FI 873632A FI 873632 A FI873632 A FI 873632A FI 87795 C FI87795 C FI 87795C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- leu
- thr
- ser
- gly
- cycle
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 53
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 16
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 2
- HHSJMSCOLJVTCX-ZDLURKLDSA-N L-Glutaminyl-L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O HHSJMSCOLJVTCX-ZDLURKLDSA-N 0.000 claims 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 34
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 abstract description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 abstract description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 abstract description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 abstract description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 abstract description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000001184 hypocalcaemic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 60
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 60
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 description 27
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 16
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 14
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 14
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 14
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 14
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1 LQNUZADURLCDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 11
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 8
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 7
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- -1 benzyl ester Chemical class 0.000 description 7
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 7
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N (2s,3r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 5
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YFKBXYGUSOXJGS-UHFFFAOYSA-N 1,3-Diphenyl-2-propanone Chemical compound C=1C=CC=CC=1CC(=O)CC1=CC=CC=C1 YFKBXYGUSOXJGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 4
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 4
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 4
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 4
- 229960003773 calcitonin (salmon synthetic) Drugs 0.000 description 4
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N cyclohexylamine Chemical compound NC1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 108010068072 salmon calcitonin Proteins 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 3
- 101000741447 Gallus gallus Calcitonin Proteins 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000035563 calcemia Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 3
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- ATVFTGTXIUDKIZ-YFKPBYRVSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O ATVFTGTXIUDKIZ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ZAVSPTOJKOFMTA-SFHVURJKSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-(4-phenylmethoxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C1=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 ZAVSPTOJKOFMTA-SFHVURJKSA-N 0.000 description 2
- DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- AQTUACKQXJNHFQ-LURJTMIESA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanedioic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O AQTUACKQXJNHFQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N (2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- LLHOYOCAAURYRL-RITPCOANSA-N (2s,3r)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C LLHOYOCAAURYRL-RITPCOANSA-N 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N Asp-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 2
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound ClCCl.OC(=O)C(F)(F)F KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- OWFXIOWLTKNBAP-UHFFFAOYSA-N isoamyl nitrite Chemical compound CC(C)CCON=O OWFXIOWLTKNBAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000005297 pyrex Substances 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 2
- 108010071635 tyrosyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTFYOALQRQBBDG-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)C(NC(=O)OC(C)(C)C)COCC1=CC=CC=C1 NTFYOALQRQBBDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxo-4-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- VKCARTLEXJLJBZ-YFKPBYRVSA-N (3s)-4-amino-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(N)=O)CC(O)=O VKCARTLEXJLJBZ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- XCDPRIRQWJOLPB-QMMMGPOBSA-N (4-nitrophenyl) (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoate Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XCDPRIRQWJOLPB-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- UGVJVLFIDOUOIT-VIFPVBQESA-N (4-nitrophenyl) (2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoate Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UGVJVLFIDOUOIT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWYHVMDKERUNLM-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichloro-1-[(2,4-dichlorophenyl)methoxymethyl]benzene Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1COCC1=CC=C(Cl)C=C1Cl NWYHVMDKERUNLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPTUXCUWQIBZIF-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CPTUXCUWQIBZIF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 238000005684 Liebig rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 241000125258 Scandix pecten-veneris Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000003217 Tetany Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- YIXYJZHPCDLFAW-UHFFFAOYSA-N [methoxy-[methoxy(phenyl)methoxy]methyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OC)OC(OC)C1=CC=CC=C1 YIXYJZHPCDLFAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 230000001760 anti-analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N chloroform;hexane Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCCCCC OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 1
- 206010016165 failure to thrive Diseases 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical compound O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- ODWNMLQSQNQLNP-UHFFFAOYSA-N n',n'-bis(methylamino)propane-1,3-diamine Chemical compound CNN(NC)CCCN ODWNMLQSQNQLNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- ZHCAAFJSYLFLPX-UHFFFAOYSA-N nitrocyclohexatriene Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=C=C[CH]1 ZHCAAFJSYLFLPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N pivalic acid Chemical compound CC(C)(C)C(O)=O IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000711 polarimetry Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007940 sugar coated tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 108010036320 valylleucine Proteins 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/585—Calcitonins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Obesity (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
1 87795
Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten polypep-tidien valmistamiseksi.
Keksintö koskee menetelmää uusien, terapeuttisesti 5 käyttökelpoisten polypeptidien valmistamiseksi, joilla on kaava (IA):
Cys-Asn-A3-Leu-Ser-Thr-Cys-A8-Leu-Gly- AU~A12-A13-Gln*A15-A16_A17_LyS-A19-A20- ( IA ) 10 Thr-A22-Pro-A24-Thr-A26-A27-Gly-A29-Gly-A31-
Pro-NH2 jossa A3 = Ser, Gly tai Ala A8 = Vai tai Leu 15 An = Lys tai Thr A12 = Leu tai Tyr A13 = Ser tai Thr A15 = Glu tai Asp A16 = Leu tai Phe 20 A17 = His tai Asn A19 = Leu tai Phe . A20 = Gin tai His , A22 = Tyr tai Phe A24 = Arg tai Gin -’25 A26 = Asp, Asn tai Ala A27 = Vai, Thr tai Ile A29 = Ala, Ser tai Vai A31 = Thr, Vai tai Ala 30 tai kaava (lB): • -(CH2)5 -, CO-Asn-A'2-Leu-Ser-Thr-NHCHCO-A'7-Leu-Gly-A'io-A,u-A,i2-Gln-A'14-A'15-A'16-Lys-A'18- (IB) 35 A'19-Thr-A'21-Pro-A'23-Thr-A'25-A'26-Gly-A'28- .··. Gly-A130-Pro-NH2 2 87795 t r ,.r> i jossa A'2 = Ser, Gly tai Ala A'7 = Vai tai Leu A' 10 = Lys tai Thr A'n = Leu tai Tyr 5 A112 = Ser tai Thr A' 14 = Glu tai Asp A' 15 = Leu tai Phe A'i6 = His tai Asn A' 18 = Leu tai Phe 10 A' 19 = Gin tai His A' 21 = Tyr tai Phe A' 23 = Arg tai Gin A'25 = Asp, Asn tai Ala A'26 = Vai, Thr tai Ile 15 A' 2g = Ala, Ser tai Vai A'30 = Thr, Vai tai Ala jolloin kaavan (IB) mukaiset yhdisteet sisältävät α-amino-korkkihappoa (Asu), jossa ω -karboksyyli on liittynyt 20 Asn:n aminoryhmään.
Kaavan (IB) mukaiset tuotteet ovat rakenteellisia analogeja · luonnon peptideille, joita K. Jost ja J. Rudinger esitti- I vät aivolisäkkeen hermolohkon tapauksessa (Collect. Czech.
; Chem. Comm., 1967, 32, 1229).
‘ 25 Kaavojen (IA) ja (IB) mukaiset tuotteet voidaan ryhmitellä uudelleen seuraavaksi kaavaksi: D-A’7-Leu-Gly-A' 10-A'n-A' 12-Gln-A ' 14-A ' 15-A ' 16-Lys-A'18-A' 19-Thr-A' 21-Pro-A' 23-Thr-A ’ 25-A' 26-GLY-A ’ 28-Gly-A' 30-Pro NH2 30 jossa symboleilla A'7, A'10, A'u< A'12, A'14, A'15, A'16 ^ 18, A 19' A 21/ A 23' ^ 25' ^ 26' ^28' 3a ^ ' 30 on edellä annettu merkitys ja D esittää: - joko radikaalia Cys-Asn-A3-Leu-Ser-Thr-Cys-, jossa symbolilla A3 on edellä annettu merkitys, ;-·f 35 - tai radikaalia: 3 87795 I-(CH2)5-1 CO-Asn-A' 2-Leu-Ser-Thr-NHCHCO- jossa symbolilla A'2 on edellä annettu merkitys.
5 Keksinnön kohteena ovat erityisesti yhdisteet, jotka vastaavat yleisiä kaavoja (IA) ja (IB), kuten edellä määriteltiin, joissa A8 ja A'7 esittävät valii-nia.
Keksinnön kohteena ovat tarkemmin yhdisteet, jot-10 ka vastaavat seuraavia yleisiä kaavoja (IA) ja (IB): - Cys - Asn - Ser - Leu - Ser5 - Thr - Cys - Vai - Leu -Gly10 - Lys - Leu - Ser - Gin - Glu15 - Leu - His -
Lys - Leu - Gln20 - Thr - Tyr - Pro - Arg - Thr2b -1 15 Asp - Vai - Gly - Ala - Gly30 - Thr - proamidi |- (CH2 ) 5-1 - CO-Asn-Ser-Leu-Ser-Thr5-NH-CH-CO-Val-Leu-Gly-Lys10-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu15-His-Lys-Leu-Gln-Thr20-Tyr-Pro-Arg- 20 Thr-Asp25-Val -Gly-Ala-Gly-Thr30-proamidi . - Keksinnön mukaiset polypeptidit alentavat kalsemiaa h ja fosfatemiaa; ne hidastavat luiden haurastumista, kiih- ; dyttävät uusien luiden muodostumista, lisäävät kalsiumin 25 absorboitumista suolessa ja alentavat kalkkivirtsaisuutta.
: · Ne sitovat kalsiumia solujen sisällä. Niillä on tärkeä tu- : ·· lehduksenvastainen ja kipua lievittävä vaikutus.
Nämä ominaisuudet puolustavat aikaisemmin määriteltyjen kaavojen (ΙΛ) ja (IB) mukaisten polypeptidien käyt-: -.:30 töä lääkkeinä.
•Lääkkeiden pääindikaatioita ovat Pagetin sairaus, eri syistä johtuvat osteoporoosit (tavallinen, huokosten -·_ pehmentymisestä johtuva, kortisoniperäinen, loukkaantumi sen jälkeinen, liikkumattomuudesta johtuva ja idiopaatti-·-··* 35 nen), renaalinen luun kasvuhäiriö, murtumat, hyperkalse- 4 37795 miat, luu-nivelkivut, erityisesti ne, jotka johtuvat luun metastaaseista, spasmofilia ja kalkkiaineenvaihdunnan aiheuttama häiriö normaalikalsemiassa.
Lääkekäyttöä varten muodostetaan farmaseuttisia 5 koostumuksia, jotka sisältävät vaikuttavana perusaineena ainakin yhtä aikaisemmin määriteltyä tuotetta.
Nämä farmaseuttiset koostumukset voivat olla esimerkiksi kiinteitä tai nestemäisiä ja ne ovat farmaseuttisissa muodoissa, joita nykyään käytetään ihmisten lää-10 kintään, kuten esimerkiksi yksinkertaiset tai sokeripääl-lysteiset tabletit, kapselit, rakeet, liposomit, aerosolit, peräpuikot, injektoitavat valmisteet; ne valmistetaan tavallisten menetelmien mukaan. Vaikuttava aine tai aineet voidaan liittää täyteaineisiin, joita tavallisesti käyte-15 tään näissä farmaseuttisissa koostumuksissa, kuten talkki, arabikumi, laktoosi, tärkkelys, magnesiumstearaatti, kaakaovoi, vesipitoiset tai vedettömät apuaineet, eläin- tai kasvialkuperää olevat rasva-aineet, parafiinijohdannaiset, glykolit, erilaiset kostuttavat, dispergoivat tai emulgoi-20 vat aineet, ja säilöntäaineet.
Erityisesti voidaan muodostaa farmaseuttisia koos-• tumuksia, kuten edellä on määritelty, jotka on tarkoitettu ... parenteraalisesti annettavaksi, oraalisesti annettavaksi liposomien muodossa, tai nenän kautta annettavaksi jauhe-'*·· 25 tussa muodossa.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien polypepti-dien valmistamiseksi on tunnusomaista, että tarvittavat Y.: aminohapot, peptidit tai niiden yhdistelmät kondensoidaan kaavojen (IA) ja (IB) mukaisten aminohapposekvenssien jär- - -.:30 jestyksessä, ja valmistettaessa kaavan (IB) mukaisia tuot- -'· teitä, yhdistetään kiinteäfaasimenetelmä sekvenssin 10 - 31 saamiseksi ja klassinen nestefaasimenetelmä sekvenssin 1-9 saamiseksi.
Kuten aikaisemmin esitettiin, kaavan (IA) mukaisten — '35 peptidien ja kaavan (IB) mukaisten tuotteiden sekvenssin 10 5 87795 - 31 synteesit suoritetaan käyttäen kiinteätaasimenetel-mää. Tämä tuo käytettäväksi bentsyylihydryyliaminohartsin käytön (P.G. Piettä ja G.R. Marshall,, Chem. Commun., 1970, 650), jonka valmistus ja käyttö on kuvattu (P. Ri-5 vaille, A. Robinson, M. Kamen ja G. Milhaud, Helv., 1971, 54, 2772).
Kaavan (IÄ) mukaisten tuotteiden edullisessa valmistusmenetelmässä ryhmä Ν-α-butyylioksikarbonyyli (t-Boc) suojaa aminohappojen α-aminoryhmää. Aminohappojen la-10 teraaliset ryhmät suojataan muodossa: 1) bentsyyliesterinä asparagiinihapon ja glutamiinihapon karboksyyliketjuun, 2) bentsyylieetterinä seriinin ja treoniinin hydroksyyliin ja 2,4-diklooribentsyylieetterinä tyrosiiniin, 15 3) metoksibentsyylieetterinä kysteiinin sulfhydryyliryh- mään, 4) dinitro-2,4-fenyylinä histidiinin imidatsoliin, 5) bentsoksikarbonyyliryhmänä lysiinin ?-aminoryhmään.
Eri aminohapot liitetään peptidiketjuun disyklo-20 heksyylikarbodi-imidillä (DCCI) ja hydroksibentsotriatso- lilla (HOBT) antamalla proliinin suhteen ylimäärän suojat- . tuja aminohappoja ensin reagoida peräkkäin hartsiin kiin- .1 / nitettynä. Reaktion annetaan jatkua kaksi tuntia. t-Boc- ryhmät poistetaan trifluorietikkahapolla metyleenikloridi-25 liuoksessa; metyleenikloridilla pesemisen jälkeen neutra- - lointi suoritetaan trietyyliamiinilla tai di-isopropyyli- : ·· etyyliamiinilla (DIEA) samassa liuottimessa.
Asparagiini ja glutamiini liitetään paranitrofenyy-liestereidensä muodossa liuoksessa dimetyyliformamidissa *·_: 30 (DMF). Jos kontrollikoe ninhydriinin kytkemiseksi Kaise- rin ja Colescottin menetelmän mukaan on positiivinen, seos käsitellään pivaliinihapolla (1 %); jos tässä kokeessa si-·· ninen väri vielä pysyy, DMF/1 % AcOH-seos kyllästetään urealla. Kuitenkin, vaikka tämä koe olisi negatiivinenkin -- ‘35 (ei siniseksi värjäytymistä), kukin kytkentä voidaan tois- 6 87795 taa kaksi kertaa systemaattisesti. Jos kytkentä ei ole totaalinen 48 tunnin reaktion jälkeen, kuten on asianlaita asemassa 20 olevan glutamiinin suhteen, reagoimaton treo-niini asetyloidaan asetyyli-imidatsolilla metyleeniklori-5 dissa tai etikkahapolla ja DCCIrllä.
Lopuksi histidiinin imidatsolia suojaava ryhmä poistetaan, kun peptidi on edelleen hartsiin kiinnittyneenä, pHrssa 8, merkaptoetanolilla DMF-liuoksessa. Peptidi erotetaan hartsista käsittelemällä nestemäisellä vetyfluo-10 ridihapolla anisolin ja metioniinin läsnäollessa. Kaikki suojaryhmät poistetaan tämän tapahtuman aikana.
Peptidit puhdistetaan geelisuodatuksella. Pääpiik-kejä vastaavat fraktiot kootaan, lyofilisoidaan, siirretään jälleen puskuriin pH:ssa 8 ja hapetetaan 24 tuntia 15 ilmavirralla tarkoituksena muodostaa disulfidisilta kahden kysteiinijäännöksen väliin.
Fraktio, joka vastaa piikkiä, jolla on haettu biologinen aktiivisuus, puhdistetaan jälleen ioninvaihtohart-silla CMC 32 happoeluointigradientilla. Saatu peptidi on 20 homogeeninen paperielektroforeesissa ja selluloosakromato- grafiässä.
. - Kaavan (IB) mukaisten tuotteiden sekvenssi 10 - 31 saadaan samoissa olosuhteissa, jotka aikaisemmin esitettiin kaavan (IA) mukaisten tuotteiden valmistukselle. Se 25 mitä esitettiin glutamiinille asemassa 20 kaavan (IA) mukaisissa tuotteissa, pätee tietenkin asemaan 19 kaavan . *** (IB) mukaisissa tuotteissa.
Kaavan (IB) mukaisten tuotteiden edullisessa valmistusmenetelmässä sekvenssin 1-9 synteesi suoritetaan 30 nestemäisessä väliaineessa. Fragmentti:
(CH^L.COOR
H-Asn-Λ ’ ,-Leu-Ser-Thr -NH-CH-OO
7 87795 jossa symbolilla A'2 on edellä annettu merkitys ja R = esteri, kondensoidaan syklisoinnin jälkeen tripeptidin A'7-Leu-Gly kanssa. Käytetään peptidien synteeseissä yleensä käytettäviä suojaryhmiä.
5 Kaavan (IB) mukainen peptidi saadaan sitten seuraa vasti :
Edelläoleva suojattu nonapeptidi muutetaan N-hyd-roksisukkiini-imidiesteriksi, kytketään sitten fragmentin 10 - 31 kanssa hartsiin kiinnittyneenä DMF-väliaineessa 10 30 °C:ssa. Peptidi erotetaan hartsista käsittelemällä nes temäisellä vetyfluoridihapolla dimetyylisulfidin ja p-kre-solin läsnäollessa (J.P. Tam, W.H. Heathand ja R.B. Merri-field, J.A.C.S.,.1983, 105, 6442). Kaikki suojaryhmät poistetaan tämän tapahtuman aikana.
15 Peptidit puhdistetaan geelisuodatuksella
Tuotteiden biologinen aktiivisuus määritetään käyttäen urosrottia joiden paino on 100 - 120 g ja joita on pidetty ilman ruokaa 16 tuntia. Aktiivisuus on ilmaistu MRC-yksiköissä alkaen kalsemian vähenemisestä, mitattuna 20 tunti tutkittavan peptidin suoneen injektoinnin jälkeen sopivasti 0,1N natriumasetaattipuskuriin pHrssa 6 ja 0,1 % albumiiniin laimennettuna, verrattuna sopivasti laimennetun "Research Standard B":n aktiivisuuteen. Esimerkin 1 ; peptidin biologinen aktiivisuus on suurempi kuin 4000 MRC- - 25 yksikköä mg:aa kohti ja esimerkin 2 peptidin aktiivisuus on suurempi kuin 4500 MRC-yksikköä mg:aa kohti. Tämän aktiivisuuden huomioon ottaen tavanomainen annos voi olla : esim. 1 - 100 MAC-yksikköä päivää kohti lihaksensisäisesti tai ihonalaisesti annettuna, vaihdellen käytetyn tuotteen, 30 käsiteltävän potilaan jo kyseessä olevan taudin mukaan. ·“' Esimerkin 1 mukaisen yhdisteen aktiivisuus on ver- rattu lohen kalsitoniini-aktiivisuuteen in vitro-kokeella, ··· jossa luukudoskato-aktiivisuus määritetään kvantitatiivi sesti mittaamalla 1uunäytteiden kuoppien lukumäärää ja —'35 pinta-alaa. Mitä enemmän kalsitoniini kokeessa vähentää s 87795 näiden kuoppien lukumäärää ja pinta-alaa, sitä aktiivisempi se on. Kokeen suorittamiseksi vastasyntyneiden rottien pitkät luut poistettiin, raaputettiin skalpellilla ja näytteet kerättiin puskuroituun Hepes-liuokseen. Näin saa-5 tu luukudossuspensio saatetaan välittömästi kosketukseen muiden luunäytteiden kanssa. Inkuboinnin jälkeen 37 °C:ssa kukin luunäyte siirretään steriiliin astiaan ja inkuboi-daan 18 h kalsitoniinin tai liuottimen läsnäollessa. Kuoppien lukumäärä ja pinta-ala määritetään pyyhkäisyelektro-10 nimikroskoopilla. Tulokset on laskettu luukudoskato-aktii-visuutena prosenttina kontrollinäytteen arvosta. Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
' Kuoppien lukumäärä Kuoppien pinta-ala 15 luunäytteessä luunäytteessä (% kontrollista) (% kontrollista)
Lohen kalsito-niini 20 (0,1 pg/ml) 35 % 40 %
Esimerkin 1 mukainen tuote (0,1 pg/ml) 26 % 21 % : 25 __,
Tuloksista ilmenee, että esimerkin 1 mukainen modifioitu kanan kalsitoniini on aktiivisempi kuin lohen kalsitonii-ni. Kuoppien lukumäärän väheneminen on suurempi uuden kal-30 sitoniinin ollessa kyseessä kuin tunnetun lohen kalsitoniinin ollessa kyseessä; 26 % kontrollin kuopista ja vastaavasti 35 %. Ero on siis 35-%:inen. Pinta-alan pienenemisen suhteen vastaavat luvut ovat 21 % ja 40 %, mikä vastaa 90-%:ista eroa.
35 Alan kirjallisuuden perusteella (Nieto, Moya and R- ··_ Candela, Biochim. Biophys. Acta, 322, 1973, 383 - 391) tiedetään, että kanan kalsitoniinilla ja lohen kalsitonii-··- nilla on hyvin samantyyppiset ominaisuudet. Tämän keksin- 9 37795 nön mukaisesti saatu yhdiste on siten aktiivisempi myös kanan kalsitoniiniin nähden.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1 5 Seuraavan kaavan (IA) mukaisen peptidin valmis taminen
Cys - Asn - Ser - Leu - Ser5 - Thr - Cys - Vai - Leu -Gly10 - Lys - Leu - Ser - Gin - Glu15 - Leu - His -10 Lys - Leu - Gln20 - Thr - Tyr - Pro - Arg - Thr25 - (IA) Asp - Vai - Gly - Ala - Gly30 - Thr -proamidi
Lateraalisia ryhmiä sisältävät t-Boc-aminohapot tulevat BACHEMilta (Dubendorf, Sveitsi) tai valmistetaan labora-15 toriossa Schnabelin menetelmällä (E. Schnabel, Liebigs Ann. Chem. 702, 188, 1967) autotitrauslaitteessa. Niiden puhtaus määritetään polarimetrialla, sulamispisteen avulla j a ohutkerrossilikageelikromatografiällä.
Puhdistetun peptidin hydrolyysi suoritetaan sulje-20 tussa putkessa vakuumissa 6N HC1-väliaineessa (110 °C, 24 tuntia).
I. Sekvenssin synteesi / a) Hartsin valmistus (P. Rivaille, A. Robinson, M. Kamen ja G. Milhaud, Helv., 1971, 54, 2772).
• 25 Bentsyyliketohartsi 2 litran kolmikaulapullossa, joka on varustettu sekoittajalla, annetaan 50 g:n polystyreeniä, jossa on 1 % divinyylibentseeniä Bio-rad SX2 (200 - 400) turvota 2 tuntia 350 ml:ssa nitrobentseeniä. Toisessa pullossa liuote-30 taan 66 g A1C13 300 mlraan nitrobentseeniä, johon on lisätty 80 ml bentsoyylikloridia. Seos kaadetaan ensimmäiseen pulloon hyvin sekoittaen ja pidetään 2 tuntia ympäristön lämpötilassa. Jos hartsi turpoaa liikaa, lisätään nitrobentseeniä (noin 100 ml). Seos suodatetaan, pestään diok-....:35 saanilla (3 x), etikkahapolla (3 x), metanolilla (3 x) ja • · · 10 37755 lopuksi vuorotellen CH2Cl2:lla ja CH2OH:lla tarkoituksena tehdä hartsi sellaiseksi, että se turpoaa ja supistuu kulloinkin jättäen riittävän kosketusajan. Seos kuivataan ek-sikaattorissa vakuumissa koko yön (saanto 75 g).
5 Bentshydryyliamiinihartsi 1 litran pullossa, johon on kiinnitetty "Dean Stark" ja sekoittaja, kuumennetaan 500 g ammoniumformiaat-tia 120 - 130 °C:seen 1-2 tunniksi. Hartsi (50 g) lisätään kerralla ja lämpötilan annetaan nousta 160 - 165 °C:- 10 seen puolen tunnin kuluessa tehokkaasti sekoittaen, joka lämpötila sitten pidetään 6 tuntia. Seos pestään vedellä, käsitellään sitten kuten edellä bentsyyliketohartsin tapauksessa. Vakuumissa kuivattua hartsia kuumennetaan palautus jäähdyttäen ja sekoitetaan 8 tuntia 6N HCltssä. Sit-15 ten se suodatetaan ja pestään kuten edellä. Kiinnitys kapasiteetti vaihtelee, aminohapon luonteen mukaisesti, välillä 0,3 ja 0,5 mmol/g. b) Peptidin valmistus Käytetty laite mahdollistaa 25 ml: n pyrexputken 20 mekaanisen sekoittamisen, jonka keskimmäinen osa sisältää hartsia (2 g). Putken päissä olevista huokoslasisuodatti- mista on tarkoitus lisätä ja poistaa reagensseja (noin 15 V ml).
Aminohappojen kytkentä käsittää seuraavat vaiheet: '25 Sykli 32
Kytkentä: 2 g hartsia (kiinnityskapasiteetti 0,5 mmol/g) sekoitetaan (10 min) CH2C12, (CH3)2NCH0 (DMF)-väliaineessa (1:1, v/v) Boc-L-proliinin läsnäollessa (2 mM, 0,43 g).
30 DCCI (4 mmol) ja 1-hydroksibentsotr iät solia (HOBT) (4 mmol) lisätään ja sekoittamista jatketaan 2 tuntia. Hartsi pestään peräkkäin CH2Cl2:lla (1 x,2 min), CH30H:lla, abs. (3 x,2 min), ja CH2Cl2:lla (3 x, 2 min). Ninhydriinireak-tio suoritetaan hartsinäytteelle: se on negatiivinen.
Μ 07795
Aininoryhmän vapautus:
Hartsi käsitellään seoksella CF3COOH-CH2Cl2 (1:1, v/v) 1 min; seos suodatetaan ja suoritus toistetaan antaen kosketuksen kestää 15 min. Hartsi pestään CH2Cl2:lla (3 x.
5 1 min). CF3COOH poistetaan käsittelemällä hartsi kahdesti
Et3N/CH2Cl2-seoksella (12,5:87,5 v/v) (kosketusaika 1 min, sitten 5 min). Se pestään CH2Cl2:lla (8 x, 1 min). L-pro-liinihartsi titrataan: se sisältää 0,5 mmol/g proliinia.
Sykli 31 10 Kytkentä: L-prolyylihartsia (1 mmol) sekoitetaan (10 min) 4 mmol:n kanssa Boc-O-bentsyyli-L-treoniinia (1,23 g) CH2-C12-DMF:ssä (1:1, v/v) (10 ml). DCCI (4 mmol) ja HOBT (4 mmol) lisätään ja sekoitusta jatketaan (2 h). Hartsi pes- 15 tään peräkkäin: CH2C12 (1 x, 2 min), CH30H abs. (3 x, 2 min), CH2C12 (3 x, 2 min). Ninhydriinireaktio on negatiivinen.
Aminoryhmän vapautus - katso sykli 32
Syklit 30 - 25 20 Käytetään edellä olevia kytkentä- ja vapautusmene- telmiä seuraaviin reaktioihin: ' . Sykli 30 4 mmol Boc-glysiiniä (0,71 g) . Sykli 29 4 mmol Boc-L-ala (0,76 g) . Sykli 28 4 mmol Boc-glysiiniä (0,71 g) ' :25 . Sykli 27 4 mmol Boc-L-valiinia (0,87 g) : .. . Sykli 26 4 mmol Boc-L-asparagiim hapon B-bentsyy- liesteriä (1,29 g)
Sykli 25 4 mmol Boc-O-bentsyyli-L-treoniinia : (1,24 g) .'./30 Sykli 24
Kytkentä:
Syklin 25 hartsipeptidiä, joka aikaisemmin pestiin —: DMFrllä (2 x), sekoitetaan (10 min) 4 mmol:n kanssa Boc- N- Y-tosyyli-L-arginiinia (1,41 g) DMF-liuoksessa ja sen ... 35 jälkeen prosessi on sama, joka kuvattiin syklille 31.
12 37795
Sykli 23 Kytkentä:
Syklin 24 peptidihartsia sekoitetaan (10 min) 4 mmol:n kanssa Boc-L-proliinia (0,88 g CH2Cl2-väliaineessa) 5 (10 ml). DCCI/HOBT-seosta lisätään, kuten syklille 32 ku vattiin. Reaktio jakson lopussa ninhydriinireaktio on negatiivinen.
Vapautus - katso sykli 32 Syklit 22 - 21 10 Syklissä 23 käytettyjä kytkentä- ja vapautusproses- seja käytetään seuraaviin reaktioihin: . Sykli 22 4 mmol Boc-O-bentsyyli-L-tyrosiinia (1,49 g) . Sykli 21 4 mmol Boc-O-bentsyyli-L-reoniinia (1,24 g). Sykli 20 15 Kytkentä:
Syklin 21 hartsipeptidiä, joka aikaisemmin pestiin DMF:llä (2 x), sekoitetaan 4 mmol:n kanssa Boc-L-glutamii-ni-p-nitrofenyyliesteriä (1,5 g) ja 10 ml:n kanssa DMF, johon on lisätty 1 % etikkahappoa. DCCI (4 mmol) ja HOBT 20 (4 mmol) lisätään ja seosta sekoitetaan 48 tuntia. Hartsi pestään DMF:llä, CH2Cl2:lla, CH30H:lla, CH2Cl2:lla (2 x). Vapautus - katso sykli 32 Syklit 19 - 15 Käytetään prosessia syklille 31 seuraaviin reakti- : 25 oihin: "· . Sykli 19 4 mmol Boc-L-leusiini (1,0 g)
Sykli 18 4 mmol Boc- -karbobentsyylioksi-L-lysiini d,52g) . Sykli 17 4 mmol Boc-dinitro-2,4-fenyyli(im)L-histidiini .. 30 (1,23 g) . Sykli 16 4 mmol Boc-L-leusiini (1,0 g) . Sykli 15 4 mmol Boc-L-glutamiinihapon -bentsyyliesteri (1,3 g)
Sykli 14 35 Prosessi on sama kuin syklille 20 is 87795
Sykli 13
Prosessi on kuin syklille 31, käyttäen 4 mmol Boc-O-bentsyyli-L-seriiniä (1,0 g).
Syklit 12-9 5 Prosessi on sama kuin syklille 31 seuraaviin reak tioihin: . Sykli 12: syklissä 19 käytetty johdannainen.
. Sykli 11: syklissä 18 käytetty johdannainen.
. Sykli 10: syklissä 30 käytetty johdannainen.
10 . Sykli 9: syklissä 19 käytetty johdannainen.
. Sykli 8: syklissä 27 käytetty johdannainen.
Sykli 7 Käytetään syklin 31 menetelmää saattamaan 4 mmol Boc-L-kysteiinin S-p-metoksibentsyylieetteriä (1,13 g) 15 reagoimaan.
Syklit 6-3 . Sykli 6: identtinen syklin 31 kanssa.
. Sykli 5: identtinen syklin 13 kanssa.
. Sykli 4: identtinen syklin 19 kanssa.
20 . Sykli 3: identtinen syklin 13 kanssa.
Sykli 2 '· Kytkentä: : ." Peptidihartsia syklistä 3, joka aikaisemmin on pes- ty DMF:llä (2 x), sekoitetaan (48 h) 4 mmol:n kanssa Boc-: ' ·25 L-asparagiinin p-nitrofenyyliesteriä (1,45 g) DMF-väliai- neessa HOBT:n läsnäollessa (4 mmol). Hartsi pestään peräk-käin DMF:llä, CH2Cl2:llä, CH30H:lla, CH2Cl2:lla. Ninhydrii-nireaktio on negatiivinen.
; Vapautus 30 Prosessi on sama kuin kuvattiin syklille 32.
- Sykli 1 3 mmol Boc-L-kysteiinin S-p-metoksibentsyylieette-riä (1,13 g) saatetaan reagoimaan syklin 31 olosuhteissa.
: II - Histidiinin dinitrofenyyliryhmän eliminointi ... 35 2 ml merkaptoetanolia lisätään 15 ml: aan dimetyy- 14 37795 liformamidia (DMF), ja pH säädetään arvoon 8 trietyyli-amiinilla. Tämä reagenssi viedään laitteeseen ja seosta sekoitetaan 14 tuntia. Hartsi suodatetaan ja pestään vuorotellen metyleenikloridilla (3 x) ja metanolilla (3 x).
5 Vakuumissa kuivatuksen jälkeen hartsin paino on 2,85 g.
III. Peptidin irrotus hartsista ja suojaryhmien eliminointi 15 ml vetyfluoridihappoa tiputetaan seokseen, jossa on 1,5 g hartsipeptidiä ja 1,5 ml anisolia. Seosta sekoili) tetaan 1 h °C:ssa ja 30 min ympäristön lämpötilassa. Happo erotetaan vakuumissa ja jäännös siirretään jälleen 3 kertaa 5 ml:aan etikkahappoa ja seostetaan etyylieetterillä vapaaksi peroksidista. Sakka sentrifugoidaan kylmänä, pestään useita kertoja eetterillä, ja kuivataan vakuumissa. 15 Sakka siirretään jälleen vedellä ja liukenematon jäännös poistetaan sentrifugoimalla. Lyofilisoitu liuos antaa 800 mg tuotetta.
IV - Peptidin puhdistus 200 mg epäpuhdasta peptidiä pannaan Biogel P6-pyl-20 vään yläpäähän (halkaisija 2,5 cm, pituus 90 cm) (50 - 100 meshiä), ja eluoidaan 0,1 M etikkahapolla ja kerätään 12 ’· ml:n fraktioita seuraamalla eluointia 280 nm:n rekiste- röintilaitteella. Puhdistettu peptidi kerätään fraktioista 23 - 28.
• 25 V- Syklisointi
Puhdistettua peptidiä sisältävät fraktiot lyofili-soidaan ja jäännös siirretään jälleen 500 ml:aan IM ammo-niumvetykarbonaattipuskuria, pH 8, ja siihen kohdistetaan . : ilmaporeilu huokoisen levyn läpi 24 tunniksi. Liuos lyofi- : 30 lisoidaan ja jäännös puhdistetaan CMC 52 Whatman-pylväällä ammoniumasetaattigradientilla 0,6 mho-7 mho, pH 4, LKB Ultrograd 11300-laitteella. Happohydrolyysin jälkeen ami-nohappokoostumus on seuraava, viitaten proliiniin = 2 (teoreettiset numerot suluissa): 15 87795
Ala (1) 1,05; Arg (1) 0,83; Asp (2) 2,10; Cys (2) 1,80; Glu (3) 3,10; Gly (3) 3,30; His (1) 0,80; Leu (5) 5,2; Lys (2) 1,90; Pro (2) 2,0; Ser (3) 3,10; Thr (4) 4,15;
Tyr (1) 0,85; Vai (2) 2,1.
5
Esimerkki 2
Seuraavan kaavan (IB) mukaisen peptidin saaminen: (CH2)5 10 CO-Asn-Ser-Leu-Ser-Thr5-NH-CH-CO-Val-Leu-Gly-Lys10-Leu-
Ser-Gln-Glu-Leu15-His-Lys-Leu-Gln-Thr20-Tyr-Pro-Arg- (IB) Thr-Asp25-Val-Gly-Ala-Thr30-proamidi t-Boc-aminohapot, joissa on lateraalisia ryhmiä, 15 saadaan kuten esimerkissä 1 on esitetty.
Samalla tavalla suoritetaan puhdistetun peptidin hydrolyysi suljetussa putkessa vakuumissa 6N HCl-väliai-neessa (110 °C, 24 tuntia).
Peptidin sekvenssin 10 - 31 synteesi 20 la) Hartsin valmistus (P. Rivaille, A. Robinson, M. Kamen ja G. Milhaud, Helv., 1971, 54, 2772) .
Bentsyyliketohartsi 2 l:n kolmikaulapullossa, joka on varustettu sekoittajalla, annetaan 50 g:n polystyreeniä, jossa on mu-: 25 kana 1 % divinyylibentseeniä Bio-rad SXx (200 - 400 meshiä), turvota 350 ml:ssa nitrobentseeniä. Toisessa pullossa liuotetaan 66 g AlCl3;a 300 ml:aan nitrobentseeniä, johon on lisätty 80 ml bentsoyylikloridia. Seos kaadetaan ; ensimmäiseen pulloon hyvin sekoittaen ja pidetään kaksi I.. 30 tuntia ympäristön lämpötilassa. Jos hartsi turpoaa liikaa, lisätään nitrobentseeniä (noin 100 ml). Seos suodatetaan, pestään dioksaanilla (3 x), etikkahapolla (3 x), metano-*:*: lilla (3 x) ja lopuksi vuorotellen CH2Cl2:lla ja CH30H:lla tarkoituksena saada hartsi turpoamaan ja supistumaan kul-35 loinkin jättäen kosketusajan riittäväksi. Seos kuivataan oka i kaa l.tor I aua vakuuiuiaaa koko yön (saanto 75 g).
16 87795
Bentshydryyliamiinihartsi 1 litran pullossa, joka on varustettu "Dean Star-killa" ja sekoittajalla, kuumennetaan 500 g ammoniumformi-aattia lämpötilaan 120 - 130 °C 1 - 2 tunniksi. Hartsi (50 5 g) lisätään kerrallaan ja lämpötilan annetaan nousta 160 -165 °C:seen puoleksi tunniksi tehokkaasti sekoittaen, ja annetaan olla 6 tuntia. Seos suodatetaan, pestään vedellä, sitten käsitellään kuin edellä bentsyyliketohartsin tapauksessa. Vakuumissa kuivattua hartsia kuumennetaan pa-10 lautusjäähdyttäen 8 tuntia 6N HCl:ssä. Sitten se suodatetaan ja pestään kuten aikaisemmin. Kiinnityskapasiteetti vaihtelee aminohapon luonteen mukaisesti välillä 0,3 ja 0,5 mmol/g.
Ib) Peptidin sekvenssin 10 - 31 valmistus 15 Käytetyssä laitteessa on mahdollista sekoittaa mekaanisesti 25 ml:n pyrexputkea, jonka keskiosa sisältää hartsia (2 g). Putken päissä olevista 2 huokoslasisuodattimes-ta on tarkoitus lisätä ja sitten poistaa reagenssit (noin 15 ml).
20 Sykli 31
Kytkentä: 2 g:aa hartsia (kiinnityskapasiteetti 0,5 mmol/g) sekoitetaan (10 min) väliaineessa CH2C12' (CH3)2NCHO (DMF) (1:1, v/v) Boc-L-pro] iinin läsnäollessa ( ?. mmol, 0,43 g).
.25 DCCl (4 mmol) ja 1 hydroksiben t soti i a tso.L ia (HOBT) (4 ; ·.. mmol) lisätään ja sekoitusta jatketaan 2 tuntia. Hartsi pestään peräkkäin CH30H:lla (1 x, 2 min), CH30H:lla, abs. (3 x, 2 min), CH2Cl2:lla (3 x, 2 min). Ninhydriinireaktio .·. : suoritetaan hartsinäytteelle: se on negatiivinen.
-.30 Aminoryhmän vapautus:
Hartsi käsitellään seoksella CF3COOH-CH2Cl2 (1:1, ..." v/v) 1 min; seos suodatetaan ja tapahtuma toistetaan anta en kosketuksen kestää 15 min. Hartsi pestään CH2Cl2:lla (3 ...: x, 1 min). CF3C00H poistetaan käsittelemällä hartsia kah- ... 35 desti Et3N/CH2Cl2 seoksella (12,5:87,5 v/v) (kosketusaika 17 87795 1 min, sitten 5 min). Seos pestään CH2Cl2:lla (8 x, 1 min). Hartsi-L-proliini titrataan: se sisältää 0,5 mmol/g pro-liinia.
Sykli 30 5 Kytkentä:
Hartsi-L-prolyyliä (1 mmol) sekoitetaan 4 mmol:n kanssa Boc-O-bentsyyli-L-treoniinia (1,23 g) CH2C12-DMF: ssä (1:1 v/v) (10 ml). DCCI (4 mmol) ja HOBT (4 mmol) lisätään ja sekoittamista jatketaan (2 h). Hartsi pestään 10 peräkkäin: CH2C12 ( 1 x, 2 min), CU ,0H abs. (3 x, 2 min), CH2C12 (3 x, 2 min). Ninhydriinireaktio on negatiivinen.
Aminoryhmän vapautus - katso sykli 31
Syklit 29 - 24 Käytetään ylläolevia kytkentä- ja vapautusprosesse-15 ja seuraavien aineiden reagoimiseen: . Sykli 29 4 mmol Boc-glysiiniä (0,71 g) . Sykli 28 4 mmol Boc-L-ala (0,76 g) . Sykli 27 4 mmol Boc-glysiiniä (0,71 g) . Sykli 26 4 mmol Boc-L-valiinia (0,87 g) 20 . Sykli 25 4 mmol Boc-L-asparagiinihapon B-bentsyylieste- . . riä (1,29 g) • . Sykli 24 4 mmol Boc-O-bentsyyli-L-treoniinia (1,24 g).
Sykli 23
Kytkentä: ‘ : 25 Syklin 24 hartsipeptidiä, joka aikaisemmin on pesty DMFrllä (2 x), sekoitetaan (10 min) 4 mmol: n kanssa Boc-N- γ -tosyyli-L-arginiinia (1,41 g) DMF-liuoksessa ja seu-raava prosessi on sama kuin syklille 30 kuvattiin.
· Sykli 22 ... 30 Kytkentä:
Syklin 23 hartsipeptidiä sekoitetaan (10 min) 4 ..." mmolrn kanssa Boc-L-proliinia (0,88 g) väliaineessa CH2C12 (10 ml). DCCI/HOBT lisätään kuten syklille 31 kuvattiin. Reaktiojakson lopussa ninhydriinireaktio oli negatiivinen. ... 35 Vapautus - katso sykli 31 is f 37795 .: 4;' \ .. -
Syklit 21 - 20 Käytetään syklissä 22 käytettyjä kytkentä- ja va-pautusprosesseja seuraavien aineiden reagoimiseen: . Sykli 21 4 mmol Boc-O-bentsyyli-L-tyrosiinia (1,49 g) 5 . Sykli 20 4 mmol Boc-O-bentsyyli-L-treoniinia (1,24 g)
Sykli 19 Kytkentä:
Syklin 20 hartsipeptidiä, joka aikaisemmin on pesty DMF:llä (2 x), sekoitetaan (10 min) 4 mmol:n kanssa Boc-10 L-glutamiini-p-nitrofenyyliesteriä (1,5 g) ja 10 ml:n kanssa DMF; johon on lisätty 1 % etikkahappoa. DCCI (4-mmol) ja HOBT (4 mmol) lisätään ja seosta sekoitetaan 48 tuntia. Hartsi pestään DMF:llä, CH2Cl2:lla, CH30H:lla, CH2C12:11a (2 x).
15 Vapautus - katso sykli 31
Sykljt 18_-_14
Sykliin 30 käytettyä prosessia käytetään seuraavien aineiden reagoimiseen: . Sykli 18 4 mmol Boc-L-leusiinia (1,0 g) 20 . Sykli 17 4 mmol Boc- t--karbobentsyylioksi-L-lysiiniä (1,52 g) . Sykli 16 4 mmol Boc-dinitro-2,4-fenyyli(im)L-histidii-niä (1,23 g) . Sykli 15 4 mmol Boc-L-leusiinia (1,0 g) 25 . Sykli 14 4 mmol Boc-L-glutamiinihapon γ-bentsyylieste- riä (1,3 g)
Sykli 13
Prosessi on sama kuin syklille 19.
Sykli 12 30 Prosessi on sama kuin syklille 30 käyttäen 4 mmol
Boc-O-bentsyyli-L-seriiniä (1,0 g).
Syklit 11 ja 10
Prosessi on sama kuin syklille 30 seuraavien ai-. .· neiden reagoimiseksi: 35 . Sykli 11: syklissä 18 käytetty johdannainen.
. Sykli 10: syklissä 17 käytetty johdannainen.
19 87795 2. Peptidin sekvenssin 1-9 synteesi 2a) Osittainen sekvenssi Boc-L-Thr (Bzl)-Asu OMe (A) Z-Asu OMe (11,2 g) viedään seokseen MeOH-H20 (2:1, v/v) ja seosta hydrataan palladiumhiilen läsnäollessa (14 h).
5 Katalyytin poistamisen jälkeen seos konsentroidaan vakuu-missa. Dioksaania (40 ml) lisätään, sitten lisätään tri-etyyliamiinia (4,2 ml), samalla jäähdyttäen, sitten lisätään Boc-L-Thr (Bzl) OSu (16 g). Sekoittamisen (72 h) jälkeen sekoitetaan joukkoon N,N-dimetyyliamino-1,3-propani-10 didiamiinia, ja seosta sekoitetaan (4 h) ja konsentroidaan sitten kolmasosaan tilavuudestaan. Se uutetaan etyyliasetaatilla (AcOEt), sitten AcOEt pestään HClrllä (IN), sitten H20:lla; sitten tislataan vakuumissa. Öljyinen jäännös siirretään.eetteriin, uutetaan NaHC03:lla (5 %), uutetaan 15 uudelleen AcOEtrllä ja pestään peräkkäin H20:lla, HClillä (IN),·, H20:lla. Uutteet kuivataan vedettömällä natriumsul-faatilla ja AcOEt erotetaan. A saadaan öljymäisen tuotteen muodossa (10 g).
2b) Osittainen sekvenssi Boc-L-Ser-(Bzl)-L-Thr-(Bzl) Asu όμθ.οηα (b).
Tuote A (5 g) liuotetaan jäähdyttäen TFA:han (15 ml). Ympäristön lämpötilassa TFA erotetaan vakuumissa ja jäännös kuivataan vakuumissa, liuotetaan sitten DMF:ään (10 ;.il) ja pH asetetaan arvoon 6 trietyyliamiinilla (4 ml) 25 äähdyttäen. Sitten lisätään HOBT (5 g) ja Boc-L-Ser (Bzl) OSu sekoittaen (3 päivää) ympäristön lämpötilassa ja pH:-Lsa 6. Lisätään N,N-dimetyyliamino-1,3-propaanidiamiinis sekoittaen (1 h), lisätään H20, ja uutetaan sen jälkeen.
: AcOEt:llä kuten edellä kuvattiin. Sykloheksyyliamiinia 30 (CHA) lisätään kuivaan AcOEt:hen ja tislataan alipaineessa. Saadaan öljymäinen tuote B (4 g).
2c) Osittainen sekvenssi Boc-L-Asn-Ser( Bzl) ‘-L-Leu-NH-Ni-'!2 (C).
... · 3 g Boc-L-Asn-L-Ser-(Bzl)-L-Leu OEt:tä liuotetaan 20 ial.: .· ·. 35 aan C-.20h, lisätään 10 ml 80 % NH2NH2H20, ja seos jätetään 20 37 79 5 14 tunniksi ympäristön lämpötilaan. Sitten se seostetaan etyylieetterillä, sakka pestään etyylieetterillä ja uudelleenko teytetään seoksesta CH3OH-AcOEt-etyylieetteri. Saadaan 2,5 g odotettua tuotetta (C).
5 2d) Osittainen sekvenssi Boc-L-Asn-L-Ser (Bzl)-L-Leu-L-
Ser (Bzl)-L-Thr (Bzl)-Asu OMe (D).
Tuote B (2 g) lisätään AcOEt:hen HCl:n (IN) läsnäollessa; seos kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroidaan vakuumissa. TFA (6 ml) lisätään kylmänä se-10 koittaen ympäristön lämpötilassa (0,5 h), sitten TFA poistetaan vakuumissa ja jäännös kuivataan vakuumissa. Jäännös liuotetaan DMFrään (2 ml) ja trietyyliamiinilla neutraloinnin jälkeen lisätään hitaasti -40 °C:ssa liuokseen, jossa on C:tä Boc-L-Asn-L-Ser(Bzl)-L-Leu-NH-NH2 (1,7 g) 15 DMF:ssä (6 ml), johon on aikaisemmin lisätty dioksaania-(2,8 ml), HCl:n (IN) ja isoamyylinitriitin (0,6 ml) läsnäollessa. pH säädetään arvoon 7 trietyyliamiinilla, ja reaktio tapahtuu 5 °C:ssa (72 h) .
Reaktioseos viedään hitaasti -5 °C:ssa 0,5N HClrään 20 (60 ml). Sakka pestään H20:lla. Uuttaminen suoritetaan . . CHCl3:lla (100 ml), ja uutteet pestään peräkkäin HCltn ve siliuoksella (IN), NaCl:llä. CHC13 poistetaan.
Tuote D seostetaan seoksella CHCl3-n-heksaani (2 g). (2e) -L-Asn-L-Ser (Bzl)-L-Leu-L-Ser (Bzl)-L-Thr (Bzl) Asu^-NH-’25 NH2: n (E) syklisointi
Tuote D (1,6 g) liuotetaan vedettömään pyridiiniin (15 ml). Lisätään TFA-ONP (2,5 g), sekoittaen 45 °C:ssa (3 h), konsentroidaan sen jälkeen vakuumissa, saostetaan etyyli-eetterillä, käsitellään TFA:11a kuten edellä, ja sitten ..'f. 30 syklisoidaan vedettömässä pyridiinissä 50 °C:ssa 5 tuntia.
Uuttaminen suoritetaan CHCl,:lla ja uutteet pestään kuten edellä, konsentroidaan vakuumissa, ja saostetaan n-heksaa-nilla.
Sakka (2 g) liuotetaan DMF:ään (5 ml) ja CH30H: ,*··. 35 hon (25 ml). 15 ml hydratsiinia (80 %) lisätään, seosta 21 87795 sekoitetaan ympäristön lämpötilassa (14 h) ja lisätään H20. Sakka suodatetaan ja pestään H20:lla. CH3OH (50 ml) lisätään ja seos kuumennetaan palautusjäähdyttäen; tuote E saostuu (0,8 g).
5 2f) Sekvenssin 1-9 valmistus: -L-Asn-L-Ser (Bzl)-L-Leu- L-Ser-(Bzl)-L-Thr (Bzl )-Asul,7-L-Val-L-Leu-Gly OH (F)
Tuote E (1 g) suspendoidaan DMF:ään (4 ml), lisätään dioksaania ja 4N HC1 (1,7 ml) -5 °C:ssa. Isoamyyli-nitriittiä (0,3 ml) lisätään -10 °C:ssa sekoittaen. L-H-10 Val-L-Leu-Gly (0,9 g) lisätään -5 eC:ssa pH:n ollessa säädetty arvoon 7 trietyyliamiinilla. Seosta sekoitetaan jäähauteessa (48 h, sitten tuote F (1 g) seostetaan 0,5N HClillä (150 ml).
3. Peptidin valmistus
15 3a) HOBT (111 mg) ja DCCL (150 mg) lisätään tuotteeseen F
(500 mg) liuotettuna DMFiään (2 ml). Sekoitetaan 72 tuntia peptidyylihartsin 10 - 31 (300 mg) läsnäollessa Lys10:n t-Boc:n poistamisen jälkeen.
3b) Peptidin lohkaisu Tam et ai.:n mukaan JACS (1983), 20 105, 6442.
Määrät viittaavat 1 g:aan peptidyylihartsia.
1) HF (2,5 ml) tiputetaan hartsipeptidin (1 g), dimetyy-lisulfidin (6,5 ml) ja p-kresolin (250 mg) seokseen, sekoittaen (1 h) 0 °C:ssa. Happo ja dimetyylisulfidi erote- .25 taan vakuumissa ja jäännös siirretään 3 kertaa 5 ml:11a ; AsOEt.
2) Kuivattu peptidyylihartsi suspendoituna dimetyylisulfi-diin (1 ml) käsitellään nestemäisellä HF:llä (10 ml) 0 °C- ;’· ssa (1 h). HF:n ja dimetyylisulfidin vakuumissa tapahtu- . 30 neen poistamisen jälkeen hartsi pestään eetterillä (3 ker taa 10 ml); peptidi siirretään etikkahappoon, saostetaan etyylieetterillä, sentrifugoidaan kylmänä, pestään useita - kertoja eetterillä, ja kuivataan vakuumissa. Sakka siir- —: retään jälleen veteen ja liukenematon jäännös poistetaan 35 sentrifugoimalla. Lyofilisoimalla liuoksesta saadaan 500 mg tuotetta.
22 87795 3c) Peptidin puhdistus 200 g epäpuhdasta peptidiä pannaan 50 - 100 meshin Biogel P6-pylvään (halkaisija 2,5 cm, pituus 90 cm) yläpäähän. Se eluoidaan 0,1M etikkahapolla ja kerätään 12 ml: n fraktioi-5 ta seuraten eluoitumista 280 nm:n rekisteröintilaitteella. Puhdistettu peptidi kerätään fraktioissa 23 - 28. Nämä fraktiot lyofilisoidaan ja jäännös puhdistetaan Whatman CMC 32 pylväällä ammoniumasetaattigradientilla 0,6 mho - 7 mho, pH 4, LKB Ultrograd 11300-laitteella.
10 Happohydrolyysin jälkeen aminohappokoostumus on seuraava, viitaten proliiniin = 2 (teoreettiset numerot suluissa):
Ala (1) 1,15; Arg (1) 0,85; Asp (2) 2,15; Glu (3) 3,10; Gly (3) 2,9; His (1) 0,83; Leu (5) 5,3; Lys (2) 1,95; 15 Pro (2) 2,0; Ser (3) 3,20; Thr (4) 4,10; Tyr (1) 0,80;
Vai (2) 2,1; Asu (1) 0,93.
Lyhenteet:
AcOEt = etyyliasetaatti
Asu = a-aminokorkkihappo 20 Bzl = bentsyyli CHA = sykloheksyyliamiini DCHA = disykloheksyyliamiini • ONP = p-nitrofenyyliesteri ·- OSu = N-hydroksisukkiini-imidiesteri '25 Z = bentsyylioksikarbonyyli
Claims (5)
1. Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten polypeptidien valmistamiseksi, joilla on kaava (IA): 5 Cys-Asn-Aj-Leu-Ser-Thr-Cys-Ag-Leu-Gly-A11-Ai2-A13-Gln-A15-A16-A17-Lys-Aig-A2o- ( 1A) Thr-A22-Pro-A24-Thr-A26-A27-Gly-A29-Gl'y-A31-Pro-NH2 10 jossa A3 = Ser, Gly tai Ala Αθ = Vai tai Leu An = Lys tai Thr A12 = Leu tai Tyr
15 Aj= Ser tai Thr A15 = Glu tai Asp A16 = Leu tai Phe A17 = His tai Asn A19 = Leu tai Phe
20 A20 = Gin tai His . A22 = Tyr tai Phe A24 = Arg tai Gin • ; A26 = Asp, Asn tai Ala A27 = Vai, Thr tai Ile • .'25 A29 = Ala, Ser tai Vai i '· A31 = Thr, Vai tai Ala tai kaava (IB): .-:-.30 |-(CH2)5 -1 ,; CO-Asn-A ' 2-Leu-Ser-Thr-NHCHCO-A ' 7-Leu-Gly- A' 10-A ' n - A ' 12-Gln-A' 14 - A ' 15-A ' 16 - Lys-A ' 18- ( IB ) "" A' 19-Thr-A ' 21 -Pro-A ' 23-Thr-A ' /s-A ' X(i-Gly-A ' 28- *:·! Gly-A 130-Pro-NH2 35 87795 jossa A'2 = Ser, Gly tai Ala A'7 = Vai tai Leu A'10 = Lys tai Thr A'n = Leu tai Tyr
5 A'12 = Ser tai Thr A114 = Glu tai Asp A'15 = Leu tai Phe A' 16 = His tai Asn A' 18 = Leu tai Phe
10 A11? = Gin tai His A1= Tyr tai Phe A'23 = Arg tai Gin A',,, = Asp, Asn tai Ala A' 2l, = Vai, Thr tai Ile
15 A12β = Ala, Ser tai Vai A' 30 = Thr, Vai tai Ala jolloin kaavan (IB) mukaiset yhdisteet sisältävät a-amino-korkkihappoa (Asu), jossa ω-karboksyyli on liittynyt 20 Asn:n aminoryhmään, tunnettu siitä, että tarvit- . . tavat aminohapot, peptidit tai niiden yhdistelmät konden- soidaan kaavojen (IA) ja (IB) mukaisten aminohapposekvens-; sien järjestyksessä, ja valmistettaessa kaavan (IB) mukai sia tuotteita, yhdistetään kiinteäfaasimenetelmä sekvens-- 25 sin 10 - 31 saamiseksi ja klassinen nestefaasimenetelmä sekvenssin 1-9 saamiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (IÄ) mu-"kainen polypeptidi, jossa symboli A8 on väliini.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (IB) mukainen polypeptidi, jossa symboli A'7 on väliini.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan tuote, jolla on 35 kaava (IA): 25 87795 Cys-Asn-Ser-Leu-Ser5-Thr-Cys-Val-Leu-Gly10-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu15-Leu-His-Lys-Leu-Gln20- (IA) Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr2ii-Asp-Val-Gly-Ala-Gly30-5 Thr-proamidi
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan tuote, jolla on kaava (IB): 10 ,-(CH2)5--1 CO-Asn-Ser-Leu-Ser-Thr5-NH-CH-CO-Val-Leu-Gly-Lys10-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu15-His-Lys-Leu- (IB) Gln-Thr20-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp2,-Val - Gly-Ala-15 Gly-Thr30-proamidi 26 87795
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8519113A FR2592049B1 (fr) | 1985-12-24 | 1985-12-24 | Nouveaux analogues de composes polypeptidiques hypocalcemiants epargnant le calcium de l'organisme, leur preparation et les medicaments contenant ces principes actifs |
| FR8519113 | 1985-12-24 | ||
| FR8600440 | 1986-12-19 | ||
| PCT/FR1986/000440 WO1987003884A1 (fr) | 1985-12-24 | 1986-12-19 | Nouveaux analogues de composes polypeptidiques hypocalcemiants epargnant le calcium de l'organisme, leur preparation, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI873632L FI873632L (fi) | 1987-08-21 |
| FI873632A0 FI873632A0 (fi) | 1987-08-21 |
| FI87795B FI87795B (fi) | 1992-11-13 |
| FI87795C true FI87795C (fi) | 1993-02-25 |
Family
ID=9326119
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI873632A FI87795C (fi) | 1985-12-24 | 1987-08-21 | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara polypeptider |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0232650B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0813838B2 (fi) |
| AT (1) | ATE48616T1 (fi) |
| CA (1) | CA1273750A (fi) |
| DE (1) | DE3667472D1 (fi) |
| DK (1) | DK436187A (fi) |
| ES (1) | ES2012456B3 (fi) |
| FI (1) | FI87795C (fi) |
| FR (1) | FR2592049B1 (fi) |
| GR (1) | GR3000279T3 (fi) |
| IE (1) | IE59489B1 (fi) |
| PT (1) | PT84011B (fi) |
| WO (1) | WO1987003884A1 (fi) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0452514T3 (da) * | 1989-11-08 | 1995-08-21 | Daicel Chem | Peptid og fremgangsmåde til fremstilling af cyclisk peptid |
| US5364840A (en) * | 1989-12-05 | 1994-11-15 | Vical, Inc. | Synthetic calcitonin peptides |
| ES2055665B1 (es) * | 1993-02-03 | 1995-03-01 | Lipotec Sa | Procedimiento para la obtencion de carbocalcitonina. |
| US5962270A (en) | 1996-02-06 | 1999-10-05 | Bionebraska, Inc. | Recombinant preparation of calcitonin fragments and use thereof in the preparation of calcitonin and related analogs |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS51128993A (en) * | 1975-05-01 | 1976-11-10 | Tanpakushitsu Kenkyu Shiyoureikai | Process for preparing new polypeptides |
| US4401593A (en) * | 1982-02-12 | 1983-08-30 | Armour Pharmaceutical Company | Glycine - 8 calcitonin |
| US4537716A (en) * | 1983-12-05 | 1985-08-27 | Armour Pharmaceutical Co. | Des-serine2 or des-glycine2 -leucine22 calcitonin |
| JPS60123500A (ja) * | 1983-12-08 | 1985-07-02 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 新規カルシトニン及びその採取法 |
| US4528132A (en) * | 1984-01-13 | 1985-07-09 | Armour Pharmaceutical Company | [16-Alanine]calcitonin |
| JPS61112099A (ja) * | 1984-11-06 | 1986-05-30 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 新規ポリペプチド及びその製造法 |
-
1985
- 1985-12-24 FR FR8519113A patent/FR2592049B1/fr not_active Expired
-
1986
- 1986-12-19 EP EP86402871A patent/EP0232650B1/fr not_active Expired
- 1986-12-19 AT AT86402871T patent/ATE48616T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-12-19 DE DE8686402871T patent/DE3667472D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-12-19 JP JP62500164A patent/JPH0813838B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-12-19 ES ES86402871T patent/ES2012456B3/es not_active Expired - Lifetime
- 1986-12-19 WO PCT/FR1986/000440 patent/WO1987003884A1/fr not_active Ceased
- 1986-12-23 IE IE338686A patent/IE59489B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-12-23 PT PT84011A patent/PT84011B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-12-24 CA CA000526299A patent/CA1273750A/fr not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-08-21 FI FI873632A patent/FI87795C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-08-21 DK DK436187A patent/DK436187A/da not_active Application Discontinuation
-
1990
- 1990-01-19 GR GR89400311T patent/GR3000279T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI87795B (fi) | 1992-11-13 |
| JPS63502343A (ja) | 1988-09-08 |
| FR2592049B1 (fr) | 1988-02-12 |
| DK436187A (da) | 1987-10-23 |
| ATE48616T1 (de) | 1989-12-15 |
| PT84011B (pt) | 1989-07-31 |
| GR3000279T3 (en) | 1991-03-15 |
| PT84011A (fr) | 1987-01-01 |
| JPH0813838B2 (ja) | 1996-02-14 |
| EP0232650B1 (fr) | 1989-12-13 |
| FI873632L (fi) | 1987-08-21 |
| IE59489B1 (en) | 1994-03-09 |
| CA1273750A (fr) | 1990-09-04 |
| IE863386L (en) | 1987-06-24 |
| FR2592049A1 (fr) | 1987-06-26 |
| EP0232650A1 (fr) | 1987-08-19 |
| DE3667472D1 (de) | 1990-01-18 |
| DK436187D0 (da) | 1987-08-21 |
| WO1987003884A1 (fr) | 1987-07-02 |
| FI873632A0 (fi) | 1987-08-21 |
| ES2012456B3 (es) | 1990-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4935491A (en) | Effective antagonists of the luteinizing hormone releasing hormone which release negligible histamine | |
| US4401593A (en) | Glycine - 8 calcitonin | |
| US5106834A (en) | Linear free-sulfhydryl-containing oligopeptide derivatives as antihypertensive agents | |
| US4537716A (en) | Des-serine2 or des-glycine2 -leucine22 calcitonin | |
| FI87795C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara polypeptider | |
| EP0173557A2 (en) | Peptides | |
| US4622386A (en) | [1,7-di-alanine]calcitonin | |
| EP0606816A1 (en) | Procedure for preparing salmon calcitonin | |
| EP0246795A2 (en) | Synthetic natriuretic peptides | |
| US4659804A (en) | (Bis-1,7-S-acetamidomethyl-L-cysteine)salmon calcitonin | |
| US4639510A (en) | (1-S-acetamidomethyl cysteine, 7-alanine)calcitonin | |
| EP0181121A2 (en) | Novel polypeptide and process for producing the same | |
| EP0053029A1 (en) | Non enkephalin-like peptides, their production, compositions containing them, and their medical and veterinary use | |
| US4820804A (en) | Analogs of [1,7-di-alanine, des-19-leucine]calcitonin | |
| US4764590A (en) | Des-19-leucine, 20-glutamine, 21-threonine-calcitonin | |
| US4451395A (en) | Des-serine2 -des-tyrosine22 calcitonin | |
| US5656723A (en) | Analogues of hypocalcemiant polypeptide compounds sparing the calcium of the organism, their preparation, their use as medicaments and the compositions containing them | |
| US4764591A (en) | Des-19-leucine, 20-glutamine, 21-threonine, 22-tyrosine-calcitonin | |
| EP0204788B1 (fr) | Nouveaux polypeptides hypocalcemiants, leur preparation et les medicaments contenant ces principes actifs | |
| US4391747A (en) | Des asparagine-3-calcitonin | |
| US4746728A (en) | 8-glycine, des-19-leucine-calcitonin | |
| US4639509A (en) | [16,19-Di-alanine] calcitonin | |
| US4497732A (en) | 1A-Endo-glycine-calcitonin | |
| EP0343577A2 (en) | Des-17-histidine calcitonin | |
| NO171368B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive polypeptider |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: MILHAUD, GERARD |