FI86376B - Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus. Download PDFInfo
- Publication number
- FI86376B FI86376B FI861966A FI861966A FI86376B FI 86376 B FI86376 B FI 86376B FI 861966 A FI861966 A FI 861966A FI 861966 A FI861966 A FI 861966A FI 86376 B FI86376 B FI 86376B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- virus
- hepatitis
- cloned
- fold
- chimpanzees
- Prior art date
Links
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 title claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 24
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 9
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 claims description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 229940124724 hepatitis-A vaccine Drugs 0.000 claims 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 claims 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 18
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 14
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000709573 Human hepatitis A virus Hu/Australia/HM175/1976 Species 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 1
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
- C12N7/08—Inactivation or attenuation by serial passage of virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32451—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32461—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2770/32464—Methods of inactivation or attenuation by serial passage
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1 86376
Menetelmä valmistaa puhdistettu ja kolmasti kloonattu hepa-tiittis-Ä-virus - Förfarande för framställning av renad och tre ginger klonad hepatitis-A-virus
Hepatiittis-A-virus (HAV) on levinnyt yli maailman. Se on vastuussa jopa 100.000 hepatiittis-tapauksesta vuodessa Yhdysvalloissa, jossa, kuten kehittyneen maailman pääosassa, se aiheuttaa ehkä 20 - 25 % kliinisistä hepatiittis-tapauksista. Se on erittäin endeeminen kaikkialla alikehittyneissä maissa ja infektoi näillä alueilla käytännöllisesti katsoen 100 % asukkaista 10 vuoden ikään mennessä. Se on picornavirus, jolla on monia enterovirust.en ominaisuuksia, ja se on tällaiseksi luokiteltukin. Se leviää pääasiallisesti uioste-oraalisen kontaminaation kautta, ja se on ollut syynä moniin taut.iepide-mioihin, jotka levittyvät veden tai elintarvikkeiden kautta.
Se leviää kuitenkin tavallisimmin henkilöiden välisen kosketuksen kautta. Haava-viruksen välittyminen parenteraalisesti on erittäin harvinaista.
US-patentissa 4,165,566 (Provost et ai) on esitetty hepa-tiittis-A-viruksen in vitro kehittäminen soluviljelmissä. Provost et ai on kuitenkin käyttänyt eri HAV-kantaa, jonka on kuljettava vähintään viisi kertaa sub-humaanin kädellisen läpi tuottaakseen HAV-viruksen. Keksijöiden US-patenttihakemuksen 366.165 keksinnön tarkoituksena on osoittaa, että HAV voidaan eristää ja johtaa sarjana primäärien AGMK (African green monkey kidney)-soluvi1jelmien läpi otettuna suoraan ihmisen kliinisistä näytteistä.
Daemer et ai, Infection and Immunity. Voi. 32, No. 1, huhtikuu 1981, s. 388 - 393.
Purcell et ai, "Hepatitis A Virus".
Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kanta on tallennettu ATCC (American Type Culture Col 1 ection)-kokoelmaan patenttisään- 2 86376 nösten alaisuuteen ennen tämän hakemuksen jättämistä. Kanta on näin tallennettu pysyvästi ja on yleisön käytettävissä patentin myöntämisen jälkeen.
Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kannan peruserien (master seed lots) kolminkertainen kloonaus on johtanut ylivoimaiseen rokotteeseen, joka simpansseissa ja muissa kädellisissä, kuten marakateissa, tuottaa vasta-aineita, mutta ei aiheuta tautia. Vi 11ityyppisel1ä virukselle haastettujen simpanssien suojan-saanti on rokotteen merkittävä indiisi.
Soluviljelmä, joka oli adaptoinut humaanin HM-175 hepatiittis-A-viruksen 10 ja 20 kasvusykleillä primaarin AGMK (African green monkey kidney)-soluviljelmissä, havaittiin heikentyneen simpanssien suhteen, mutta aiheuttavan sero-muunnoksia, mistä on osoituksena hepatiittis-A-vasta-aineen indusoituminen ilman biokemiallista osoitusta maksataudista, taulukko 1. Simpanssit, jotka oli edeltäkäsin infektoitu heikennetyllä kannalla ja jotka tuottivat hepatiittis-A-vasta-ainetta, saivat suojan kehittyvää hepatiittista vastaan, kun ne haastettiin infek-tiokykyisellä hepatiittis-A-viruksella, ellei haastaminen tapahtunut toipi1aisuuden alkuvaiheen aikana, jolloin kehittyi primaarinen immuunivaste, talukko 2. Samalla materiaalilla siirrostetut marakatit tosin kehittivät hepatiittiksen, vaikkakin vähemmän voimakkaan kuin villityyppisellä viruksella (taulukko 1 ja kuvio 1). Kudosvi1jelmässä kasvusykeljä läpikäyneen viruksen heikentymisen pysyvyys osoitettiin siirrosta-malla (perkutaanisti, parhaiten intravenöösisti) lisää simpansseja aikaisemmin siirrostettujen eläinten akuutissa vaiheessa olevilla ulosteilla, taulukko 3. Kohde-eläimet eivät . . kehittäneet mitään biokemiallista osoitusta maksataudista, mutta tuottivat hepatiittis-A-vasta-ainetta.
* · Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kannan peruserät on kloonattu ; kolminkertaisesti laimentamalla terminaalisesti kasvusykleillä 10, 20 ja 30 (kuvio 2). Syklejä 20 läpäisseistä klooneista on kahdesta arvioitu heikentyminen simpansseilla. Siirrostetuissa 3 86376 simpansseissa kehittyi minimaalisesti tai ei lainkaan hepa-tiittista näillä kahdella testatulla kloonilla. Kloonilla no 1 vasta-ainetta muodostui kolmessa eläimessä kuudesta ja kloonilla no 2 vasta-ainetta muodostui kolmessa eläimessä neljästä siirrostetusta.
Tässä selityksessä ja vaatimuksessa käytetty termi "kloonattu" tarkoittaa yksittäisen virushiukkasen infektoiman soluviljelmän talteenoton erityisellä sarjalaimennuksel1 a ja käyttämällä sitä tuoreen soluviljelyn innukoloimiseen, joka sitten laimennetaan tiettyyn laimennukseen saakka. Käytetty termi "kolmasti kloonattu" tarkoittaa sitä tuotetta, joka on saatu edellä mainitun kloonimenetelmän kolmen toison jälkeen.
Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kannan kolmasti kloonatun virus-materiaalin hyödyksikäyttö havainnollistaa sitä, että se on tehokas rokote simpansseille elävänä HAV-viruksena.
Tätä rokotetta voidaan käyttää hyödyksi nisäkkäillä tai korkeammilla kädellisillä, joihin kuuluvat ihminen, simpanssit ja marakatit. Kolmasti kloonattu virusmateriaali (3X) on yhtenäisesti parempi kuin kahdesti kloonattu (2X) virus rokotteeksi sopivana yhtenäisenä viruspreparaattina. Tässä yhteydessä selvitetty viruksen peruserä valmistetaan kolmasti kloonatusta viruksesta päätelaimentamal1 a kasvusykleillä 10 ja 20 (Cunningham, A Laboratory Guide. Virology. 5. pain., Bugess Pub. Co., 1963, s. 144 - 145). Laimentamisen tarkoituksena on, että korkein positiivinen laimennusputki saadaan yhdestä ainoasta virushiukkasesta, jolloin tuote on biologisesti yhtenäinen.
Viruksen tai rokotteen yhtenäisyyden kannalta optimaalinen kloonauksen päätelaimennus näytti olevan 3X. Tämä valinta 3X vastaa seuraavia kirjallisuusviitteitä: Lennet ja Schmidt, "Diagnostic procedure for Viral and Ricksettial Infections", American Public Helat Association, 5. pain., 1979, sivu 102; ja Dulbecco ja Vogt, "Paluque Formation 4 86376 and Isolation of Pure Lines v/ith Poliomyelitis Viruses", J. Exp. Med., 99: 167-182, 1954.
Humaanin hepatiitti-A-viruksen HM-175 kanta tuotiin tähän maahan, ja se on kuvattu julkaisussa: Infection and Immunity, 32(1), huhtikuu 1981, sivut 388-393.
Esimerkki 1
Virus kloonattiin seuraavasti: Kloonaamaton virus sarja- laimennettiin 10“ - 10” . Jokaisella laimennuksella siirrostettiin 9 putkellista primääristä AGM (African green monkey) soluviljelmää. Solujen annettiin kasvaa, ja soluissa kasvanut virus otettiin talteen 8 viikon kuluttua. Jokaisesta koeputkesta määritettiin tällä hetkellä hepatiitti-A-viruksen antigeeni. Putkien, joissa -8 oli korkeimmat laimennukset, so. 10” , joukossa oli joitakin negatiivisia ja joitakin positiivisia putkia.
Tilastollisen analyysin perusteella positiiviset putket olivat tässä laimennuksessa peräisin yhdestä ainoasta *· viruspartikkelista. Negatiiviset putket eivät sisältäneet *. lainkaan virusta. Positiivisista putkista kerättiin » •# talteen kaksi koeputkea jokaisesta loppulaimennussarjasta.
. Ne vuorostaan vietiin saman kloonaustapahtuman läpi . toisen ja kolmannen kerran. Kolmannessa kloonauksessa \ kerättiin talteen kaksi koeputkea loppulaimennuksesta .* ja siirrostamaton kontrolli. Nämä positiiviset putket, jotka olivat peräisin yhdestä ainoasta viruspartikkelista, kasvatettiin peruseraksi. Sen jälkeen kasvatettiin peruseriä ja käytettiin simparissikokeissa (kuvio 2).
m
Esimerkki 2 ί Perusmateriaalin käyttö. Simpanssit siirrostettiin joko * kolmasti kloonatulla laimentamattomalla perusmateriaalilla : tai saman materiaalin laimennuksilla. Laimentamaton 5 86376 perusv/irus saatiin kolmasti kloonatusta putkesta; tässä materiaalissa lisättiin sen jälkeen viruksen määrää siirrostama1la lisää soluja ja sen jälkeen nämä siirrostetut viljelmät kerättiin talteen, jolloin saatiin suurempi viruserä. Tämä materiaali muodosti kasvatetun perus-viruseran. Tällä materiaalilla siirrostettiin myöhemmin simpanssit käyttämällä joko laimentamatonta materiaalia tai peruserän kymmenenkerta is ia laimennuksia.
Esimerkki 3
Eläinten siirrostaminen. Simpanssit siirrostettiin joko intravenöösisti tai suun kautta. Simpansseista otettiin verta jokainen viikko 4-6 kuukauden ajan ja määritettiin kohonneet maksan entsyymit (ALT, alaniiniaminotrans- feraasi) + an t i - HA\/- v as ta-aine . Kohonneet entsyymi tasot ylittäisivät eläinten hepatiitti-A-sairauteen ja vasta- aineen mukanaolo merkitsisi suojauksen saantia (taulukko 4). Klooni n:o 1 (kudosviljelyjen määrä 20 tai 21) infektoi 15 altistetusta simpanssista, jotka oli siirrostettu , .·. intravenöösisti tai suun kautta, 11 simpanssia ja aiheutti • » · • lievän hepatiitin vain kahdessa näistä. Nämä 11 infektoitua • · * 1“ simpanssia reagoivat suojaavalla vasta-aineella 3 - • « « ** * 8 viikon kuluttua rokottamisesta. Klooni n:o 2 (kudos- viljelyjen määrä 20) siirrostettiin intravenöösisti neljään altistettuun simpanssiin. Vain yhdellä näistä neljästä eläimestä oli hyvin lievä, rajatapauksena pidettävä hepatiitti. Kaikki neljä muodostivat suojaavaa vasta- ainetta. Samoin kahdesta altistetusta simpanssista, jotka oli siirrostettu intravenöösisti kloonilla n:o .•t 4 (kudosvil jely jen määrä 9) simpanssi infektoitui muodos- • · I" tamatta hepatiittia mutta kehittämällä suojaavaa vasta- • · • · *.* ainetta.
• · • » • · · • · · • · · • · • * • * • · « • ·· · • · 6 86376 TAULUKKO 1
HAV HM-175-KANNAN HEIKENTYMINEN: ELÄINTUTKIMUKSET
_Simpanssit_ _Marakatit_
Kudosviljc- ». T
........ ICD
lyjen maara N;0 (Väli) N:o (Väli)
Keskim.maks. Keskim.maks.
0 7 314 (109-419; 10 ' 4777 (1,631-15.980; 10 7 62 (41-75; N.T.
20 5 48 (37-61; 7 3516 (1.062-10.230; 20 ja 21* 10 60 (38-87) 3 2936 (2.263-3,799;
No HAV+ 6 57· (41-81) 4 610 (483-927; *
Kolmasti kloonattu +HAV-viruksen ei-infektoivat laimennokset TAULUKKO 2
·. IMMUNISOITUJEN SIMPANSSIEN REAKTIO HAASTAMISEEN
VILLI TYYPPISELLÄ HAV:LLA
* --------------—-----—T~ * Haastamisen jälkeen *· c.. Esihaastava Haastava ________
Sim-η! il . ,
*. panssi Anti-HAV (P/N) M , A1T Anti-HAV
_____Maks. Ali (Maks.): P/N
• ~ ~ ~ ' ______ A-8 TC P-10 9,5 64 22,8 947 TC P-20 9,1 65 28,3 A-53 TC P-20 11,4 280 28,1 A-54 TC P-20 4,8 57 14,3 A~55 Ei 1,3 402 26.0 t * --- - - - — ---
HM-175 villityyppi 10^ CID
7 86376 TAULUKKO 3
YRITYKSET l/ÄLTTÄÄ HEIKENNETTY HAU ROKOTETUISTA SIMPANSSEISTA
Siirroste Lähde Kohde ALTS" HAU^_
Akuutti Simpanssi 992 Simpanssi A-136 57 uloste (TC P-IO)
Akuutti Simp. 947, A-ll uloste^ A-53, A-54 Simpanssi 992 46 + pooli (TC P-20) TAULUKKO 4
HAU, KANTA HM-175, KQLMASI KLOONATTU, SIMPANSSIN RAKTIO
Maks. Maks. Koh. ents.
Sim- ents. esi- tason aika l.poikk.
panssi Siirrosta TC1D tas0 ents' (uk) (vk) • 993 0*1. P-20 10~‘lV 73 65 • · · /;:* A-6 75 71 a-si [ 192 50 2 A-178 10° IV 42 43 ~ 5 A-47 Cl# 1 P-21 105I.V 57 43 -- 3 A-150 ^ 129 42 1 3 :V: a-19 araali 47 54 A-169 i ^ 50 32 -- 8 A-60 10° IV 72 70 2 6 A-232 40 36 -- 6 : A-67 Cl#2 P-20 10“1IV 78 68 — 5 A-113 38 45 — 6 > · * A-118 44 51 -- 4 : A-218 10° IV 87 36 2 5
(M
A-68 Cl#4 P-9 10“1IV 50 54 — 4 A-52 li 55 51 — • ____ - ···· 1 - ' 1 ' 1 • ·
Claims (6)
1. Menetelmä valmistaa kolme kertaa kloonattua hepatiittis-A-rokotetta, joka aikaansaa suojaavan vasta-ainereaktion sitä ruiskutettaessa korkeimpiin kädellisiin, tunnettu siitä, että HM-175-kanta kloonataan kolmasti seuraavilla vaihei11a: a) laimennetaan kloonamaton hepatiittis-A-virus, b) primaarisen AGM (African green monkey)-munuaissoluvi1jel-mään siirrostetaan kloonamaton virus, c) annetaan apinan munuaissoluviljelmä kasvaa, d) apinan munuaissoluvi1jelmät otetaan talteen, e) apinan munuaissoluvi1jelmää tutkitaan hepatiittisvirusan-tigeenin läsnäolon toteamiseksi, f) valitaan primaarinen apinan munuaisvi1jemä, jolla on suurin hepatiittis-A-viruslaimennus ja tuottaa viljelmässä hepatiittis-A-viruksen antigeenin, g) toistetaan edellä esitetty kloonausmenetelmä toisen ja kolmannen kerran.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kolmasti kloonatulla HM-175-viruksella on viruksen kasvusyklejä vähintään 10 - 30.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu ...: siitä, että kolmasti kloonattu HM-175-viruskannan talletusnu- mero on ATCC VR 2097, VR 2098 ja VR 2099.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kloonamaton hepatiittis-A-virus on HM-175, jonka '· * tai 1 etusnumero on ATCC VR 2093.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu *·.: siitä, että kolmasti kloonattu hepatiittis-A-rokote tuotetaan *··. elävästä HM-175-viruksesta. 9 86376
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kolmasti kloonattu hepatiittis-A-rokote tuotetaan heikennetystä HM-175-viruksesta. 10 86376
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/652,067 US4620978A (en) | 1982-04-07 | 1984-09-19 | Hepatitis A virus purified and triply cloned |
| US65206784 | 1984-09-19 | ||
| PCT/US1985/001769 WO1986001826A1 (en) | 1984-09-19 | 1985-09-18 | Hepatitis a virus purified and triply cloned |
| US8501769 | 1985-09-18 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI861966A FI861966A (fi) | 1986-05-12 |
| FI861966A0 FI861966A0 (fi) | 1986-05-12 |
| FI86376B true FI86376B (fi) | 1992-05-15 |
| FI86376C FI86376C (fi) | 1992-08-25 |
Family
ID=24615385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI861966A FI86376C (fi) | 1984-09-19 | 1986-05-12 | Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4620978A (fi) |
| EP (1) | EP0196316A4 (fi) |
| JP (1) | JPS62500659A (fi) |
| KR (1) | KR860700263A (fi) |
| AU (1) | AU583306B2 (fi) |
| CA (1) | CA1260392A (fi) |
| DK (1) | DK227786D0 (fi) |
| ES (1) | ES8701837A1 (fi) |
| FI (1) | FI86376C (fi) |
| GR (1) | GR852293B (fi) |
| IL (1) | IL76417A (fi) |
| NO (1) | NO169601C (fi) |
| NZ (1) | NZ213513A (fi) |
| PT (1) | PT81150B (fi) |
| WO (1) | WO1986001826A1 (fi) |
| ZA (1) | ZA857134B (fi) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4894228A (en) * | 1982-04-07 | 1990-01-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against hepatitis A virus |
| USRE37381E1 (en) * | 1982-04-07 | 2001-09-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against hepatitis A virus |
| JPH085804B2 (ja) * | 1988-04-28 | 1996-01-24 | 財団法人化学及血清療法研究所 | Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン |
| US5268292A (en) * | 1988-06-27 | 1993-12-07 | Robertson Betty H | Reproducible generation of high yields of hepatitis A virus by cell culture |
| ES2164074T3 (es) | 1992-09-18 | 2002-02-16 | Smithkline Beecham Biolog | Vacunas de virus de la hepatitis a. |
| DK0812593T4 (da) * | 1993-03-23 | 2008-05-13 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccinepræparater indeholdende 3-O-deacyleret monophosphoryllipid-A |
| HRP950097A2 (en) | 1994-03-08 | 1997-06-30 | Merck & Co Inc | Hepatitis a virus culture process |
| US5766906A (en) * | 1994-07-11 | 1998-06-16 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Hepatitis A virus deletion mutants and vaccine formulations containing the same |
| US10265265B2 (en) * | 2007-03-15 | 2019-04-23 | Drug Delivery Solutions Limited | Topical composition |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4164566A (en) * | 1978-08-17 | 1979-08-14 | Merck & Co., Inc. | Hepatitis a virus cell culture in vitro |
| US4532215A (en) * | 1982-04-07 | 1985-07-30 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Isolation of hepatitis A virus strain HM-175 |
-
1984
- 1984-09-19 US US06/652,067 patent/US4620978A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-09-17 NZ NZ213513A patent/NZ213513A/xx unknown
- 1985-09-17 ZA ZA857134A patent/ZA857134B/xx unknown
- 1985-09-18 CA CA000491066A patent/CA1260392A/en not_active Expired
- 1985-09-18 KR KR860700275A patent/KR860700263A/ko not_active Application Discontinuation
- 1985-09-18 JP JP60504247A patent/JPS62500659A/ja active Pending
- 1985-09-18 AU AU48620/85A patent/AU583306B2/en not_active Expired
- 1985-09-18 EP EP19850904746 patent/EP0196316A4/en not_active Ceased
- 1985-09-18 WO PCT/US1985/001769 patent/WO1986001826A1/en not_active Application Discontinuation
- 1985-09-18 PT PT81150A patent/PT81150B/pt unknown
- 1985-09-19 ES ES547115A patent/ES8701837A1/es not_active Expired
- 1985-09-19 IL IL76417A patent/IL76417A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-09-20 GR GR852293A patent/GR852293B/el unknown
-
1986
- 1986-04-24 NO NO86861619A patent/NO169601C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-05-12 FI FI861966A patent/FI86376C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-05-16 DK DK227786A patent/DK227786D0/da active IP Right Revival
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU583306B2 (en) | 1989-04-27 |
| NO169601C (no) | 1992-07-15 |
| IL76417A (en) | 1990-12-23 |
| EP0196316A1 (en) | 1986-10-08 |
| DK227786A (da) | 1986-05-16 |
| PT81150A (en) | 1985-10-01 |
| US4620978A (en) | 1986-11-04 |
| ES547115A0 (es) | 1986-12-01 |
| GR852293B (fi) | 1986-01-21 |
| KR860700263A (ko) | 1986-08-01 |
| FI86376C (fi) | 1992-08-25 |
| JPS62500659A (ja) | 1987-03-19 |
| EP0196316A4 (en) | 1987-01-28 |
| NO169601B1 (no) | 1992-04-06 |
| NZ213513A (en) | 1989-03-29 |
| ZA857134B (en) | 1987-05-27 |
| PT81150B (pt) | 1987-10-20 |
| CA1260392A (en) | 1989-09-26 |
| FI861966A (fi) | 1986-05-12 |
| FI861966A0 (fi) | 1986-05-12 |
| NO861619A (no) | 1986-04-24 |
| WO1986001826A1 (en) | 1986-03-27 |
| AU4862085A (en) | 1986-04-08 |
| ES8701837A1 (es) | 1986-12-01 |
| DK227786D0 (da) | 1986-05-16 |
| IL76417A0 (en) | 1986-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1135621A (en) | Hepatitis a virus cell culture in vitro | |
| EP1232249B1 (fr) | Pneumovirus du canard et vaccins correspondants | |
| Jørgensen | Egtved virus: temperature‐dependent immune response of trout to infection with low‐virulence virus | |
| FI86376B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus. | |
| US4517304A (en) | Production of viral antigens | |
| Quersin-Thiry | Action of Anticellular Sera on Virus Infections: I. Influence on Homologous Tissue Cultures Infected with Various Viruses | |
| US20080193478A1 (en) | Inactivated Poliomyelitis Vaccine Derived From Sabin Strain Of Polio Virus | |
| CA1164799A (en) | Cell culture of hepatitis a virus | |
| US20100021497A1 (en) | Ipv-dpt vaccine | |
| Olsen et al. | Immunization against feline oncornavirus disease using a killed tumor cell vaccine | |
| Dixon et al. | Inactivation of infectious pancreatic necrosis virus for vaccine use | |
| US5021348A (en) | Attenuated hepatitis A virus | |
| Selvakumar et al. | Intestinal immunity induced by inactivated poliovirus vaccine | |
| Van der Heide et al. | Pathogenicity for chickens of a reovirus isolated from turkeys | |
| CA2181862A1 (en) | Mild newcastle disease virus vaccine | |
| Hossain et al. | Comparative efficacy of the conventional and experimentally developed duck plague vaccine | |
| CN109777786B (zh) | 狐源犬ⅰ型腺病毒强毒株及其应用 | |
| Fritz et al. | Strain MC29 avian leukosis virus: immunologic relationships to other avian tumor viruses | |
| NZ234815A (en) | An attenuated canine parvovirus and vaccine containing it | |
| US6416764B1 (en) | Vaccine | |
| EP1543113A1 (en) | Chicken astrovirus type 2 | |
| Böttiger et al. | Swedish inactivated polio vaccine: laboratory standardization and clinical experience over a 30-year period | |
| IE77508B1 (en) | Vaccine | |
| CN106318913A (zh) | 一种血清4型禽腺病毒悬浮培养扩增方法 | |
| Kern et al. | Identification of enteroviruses by hemagglutination-inhibition |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: THE UNITED STATES OF AMERICA |
|
| MA | Patent expired |