FI86376C - Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus. - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus. Download PDF

Info

Publication number
FI86376C
FI86376C FI861966A FI861966A FI86376C FI 86376 C FI86376 C FI 86376C FI 861966 A FI861966 A FI 861966A FI 861966 A FI861966 A FI 861966A FI 86376 C FI86376 C FI 86376C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
virus
hepatitis
cloned
fold
chimpanzees
Prior art date
Application number
FI861966A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI861966L (fi
FI861966A0 (fi
FI86376B (fi
Inventor
Robert H Purcell
Stephen M Feinstone
Richard J Daemer
Ian D Gust
Original Assignee
Us Health
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=24615385&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI86376(C) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Us Health filed Critical Us Health
Publication of FI861966L publication Critical patent/FI861966L/fi
Publication of FI861966A0 publication Critical patent/FI861966A0/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI86376B publication Critical patent/FI86376B/fi
Publication of FI86376C publication Critical patent/FI86376C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • C12N7/08—Inactivation or attenuation by serial passage of virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/29—Hepatitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
    • C12N2770/32434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
    • C12N2770/32451—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
    • C12N2770/32461—Methods of inactivation or attenuation
    • C12N2770/32464—Methods of inactivation or attenuation by serial passage
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

1 86376
Menetelmä valmistaa puhdistettu ja kolmasti kloonattu hepa-tiittis-Ä-virus - Förfarande för framställning av renad och tre ginger klonad hepatitis-A-virus
Hepatiittis-A-virus (HAV) on levinnyt yli maailman. Se on vastuussa jopa 100.000 hepatiittis-tapauksesta vuodessa Yhdysvalloissa, jossa, kuten kehittyneen maailman pääosassa, se aiheuttaa ehkä 20 - 25 % kliinisistä hepatiittis-tapauksista. Se on erittäin endeeminen kaikkialla alikehittyneissä maissa ja infektoi näillä alueilla käytännöllisesti katsoen 100 % asukkaista 10 vuoden ikään mennessä. Se on picornavirus, jolla on monia enterovirust.en ominaisuuksia, ja se on tällaiseksi luokiteltukin. Se leviää pääasiallisesti uioste-oraalisen kontaminaation kautta, ja se on ollut syynä moniin taut.iepide-mioihin, jotka levittyvät veden tai elintarvikkeiden kautta.
Se leviää kuitenkin tavallisimmin henkilöiden välisen kosketuksen kautta. Haava-viruksen välittyminen parenteraalisesti on erittäin harvinaista.
US-patentissa 4,165,566 (Provost et ai) on esitetty hepa-tiittis-A-viruksen in vitro kehittäminen soluviljelmissä. Provost et ai on kuitenkin käyttänyt eri HAV-kantaa, jonka on kuljettava vähintään viisi kertaa sub-humaanin kädellisen läpi tuottaakseen HAV-viruksen. Keksijöiden US-patenttihakemuksen 366.165 keksinnön tarkoituksena on osoittaa, että HAV voidaan eristää ja johtaa sarjana primäärien AGMK (African green monkey kidney)-soluvi1jelmien läpi otettuna suoraan ihmisen kliinisistä näytteistä.
Daemer et ai, Infection and Immunity. Voi. 32, No. 1, huhtikuu 1981, s. 388 - 393.
Purcell et ai, "Hepatitis A Virus".
Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kanta on tallennettu ATCC (American Type Culture Col 1 ection)-kokoelmaan patenttisään- 2 86376 nösten alaisuuteen ennen tämän hakemuksen jättämistä. Kanta on näin tallennettu pysyvästi ja on yleisön käytettävissä patentin myöntämisen jälkeen.
Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kannan peruserien (master seed lots) kolminkertainen kloonaus on johtanut ylivoimaiseen rokotteeseen, joka simpansseissa ja muissa kädellisissä, kuten marakateissa, tuottaa vasta-aineita, mutta ei aiheuta tautia. Vi 11ityyppisel1ä virukselle haastettujen simpanssien suojan-saanti on rokotteen merkittävä indiisi.
Soluviljelmä, joka oli adaptoinut humaanin HM-175 hepatiittis-A-viruksen 10 ja 20 kasvusykleillä primaarin AGMK (African green monkey kidney)-soluviljelmissä, havaittiin heikentyneen simpanssien suhteen, mutta aiheuttavan sero-muunnoksia, mistä on osoituksena hepatiittis-A-vasta-aineen indusoituminen ilman biokemiallista osoitusta maksataudista, taulukko 1. Simpanssit, jotka oli edeltäkäsin infektoitu heikennetyllä kannalla ja jotka tuottivat hepatiittis-A-vasta-ainetta, saivat suojan kehittyvää hepatiittista vastaan, kun ne haastettiin infek-tiokykyisellä hepatiittis-A-viruksella, ellei haastaminen tapahtunut toipi1aisuuden alkuvaiheen aikana, jolloin kehittyi primaarinen immuunivaste, talukko 2. Samalla materiaalilla siirrostetut marakatit tosin kehittivät hepatiittiksen, vaikkakin vähemmän voimakkaan kuin villityyppisellä viruksella (taulukko 1 ja kuvio 1). Kudosvi1jelmässä kasvusykeljä läpikäyneen viruksen heikentymisen pysyvyys osoitettiin siirrosta-malla (perkutaanisti, parhaiten intravenöösisti) lisää simpansseja aikaisemmin siirrostettujen eläinten akuutissa vaiheessa olevilla ulosteilla, taulukko 3. Kohde-eläimet eivät . . kehittäneet mitään biokemiallista osoitusta maksataudista, mutta tuottivat hepatiittis-A-vasta-ainetta.
* · Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kannan peruserät on kloonattu ; kolminkertaisesti laimentamalla terminaalisesti kasvusykleillä 10, 20 ja 30 (kuvio 2). Syklejä 20 läpäisseistä klooneista on kahdesta arvioitu heikentyminen simpansseilla. Siirrostetuissa 3 86376 simpansseissa kehittyi minimaalisesti tai ei lainkaan hepa-tiittista näillä kahdella testatulla kloonilla. Kloonilla no 1 vasta-ainetta muodostui kolmessa eläimessä kuudesta ja kloonilla no 2 vasta-ainetta muodostui kolmessa eläimessä neljästä siirrostetusta.
Tässä selityksessä ja vaatimuksessa käytetty termi "kloonattu" tarkoittaa yksittäisen virushiukkasen infektoiman soluviljelmän talteenoton erityisellä sarjalaimennuksel1 a ja käyttämällä sitä tuoreen soluviljelyn innukoloimiseen, joka sitten laimennetaan tiettyyn laimennukseen saakka. Käytetty termi "kolmasti kloonattu" tarkoittaa sitä tuotetta, joka on saatu edellä mainitun kloonimenetelmän kolmen toison jälkeen.
Hepatiittis-A-viruksen HM-175 kannan kolmasti kloonatun virus-materiaalin hyödyksikäyttö havainnollistaa sitä, että se on tehokas rokote simpansseille elävänä HAV-viruksena.
Tätä rokotetta voidaan käyttää hyödyksi nisäkkäillä tai korkeammilla kädellisillä, joihin kuuluvat ihminen, simpanssit ja marakatit. Kolmasti kloonattu virusmateriaali (3X) on yhtenäisesti parempi kuin kahdesti kloonattu (2X) virus rokotteeksi sopivana yhtenäisenä viruspreparaattina. Tässä yhteydessä selvitetty viruksen peruserä valmistetaan kolmasti kloonatusta viruksesta päätelaimentamal1 a kasvusykleillä 10 ja 20 (Cunningham, A Laboratory Guide. Virology. 5. pain., Bugess Pub. Co., 1963, s. 144 - 145). Laimentamisen tarkoituksena on, että korkein positiivinen laimennusputki saadaan yhdestä ainoasta virushiukkasesta, jolloin tuote on biologisesti yhtenäinen.
Viruksen tai rokotteen yhtenäisyyden kannalta optimaalinen kloonauksen päätelaimennus näytti olevan 3X. Tämä valinta 3X vastaa seuraavia kirjallisuusviitteitä: Lennet ja Schmidt, "Diagnostic procedure for Viral and Ricksettial Infections", American Public Helat Association, 5. pain., 1979, sivu 102; ja Dulbecco ja Vogt, "Paluque Formation 4 86376 and Isolation of Pure Lines v/ith Poliomyelitis Viruses", J. Exp. Med., 99: 167-182, 1954.
Humaanin hepatiitti-A-viruksen HM-175 kanta tuotiin tähän maahan, ja se on kuvattu julkaisussa: Infection and Immunity, 32(1), huhtikuu 1981, sivut 388-393.
Esimerkki 1
Virus kloonattiin seuraavasti: Kloonaamaton virus sarja- laimennettiin 10“ - 10” . Jokaisella laimennuksella siirrostettiin 9 putkellista primääristä AGM (African green monkey) soluviljelmää. Solujen annettiin kasvaa, ja soluissa kasvanut virus otettiin talteen 8 viikon kuluttua. Jokaisesta koeputkesta määritettiin tällä hetkellä hepatiitti-A-viruksen antigeeni. Putkien, joissa -8 oli korkeimmat laimennukset, so. 10” , joukossa oli joitakin negatiivisia ja joitakin positiivisia putkia.
Tilastollisen analyysin perusteella positiiviset putket olivat tässä laimennuksessa peräisin yhdestä ainoasta *· viruspartikkelista. Negatiiviset putket eivät sisältäneet *. lainkaan virusta. Positiivisista putkista kerättiin » •# talteen kaksi koeputkea jokaisesta loppulaimennussarjasta.
. Ne vuorostaan vietiin saman kloonaustapahtuman läpi . toisen ja kolmannen kerran. Kolmannessa kloonauksessa \ kerättiin talteen kaksi koeputkea loppulaimennuksesta .* ja siirrostamaton kontrolli. Nämä positiiviset putket, jotka olivat peräisin yhdestä ainoasta viruspartikkelista, kasvatettiin peruseraksi. Sen jälkeen kasvatettiin peruseriä ja käytettiin simparissikokeissa (kuvio 2).
m
Esimerkki 2 ί Perusmateriaalin käyttö. Simpanssit siirrostettiin joko * kolmasti kloonatulla laimentamattomalla perusmateriaalilla : tai saman materiaalin laimennuksilla. Laimentamaton 5 86376 perusv/irus saatiin kolmasti kloonatusta putkesta; tässä materiaalissa lisättiin sen jälkeen viruksen määrää siirrostama1la lisää soluja ja sen jälkeen nämä siirrostetut viljelmät kerättiin talteen, jolloin saatiin suurempi viruserä. Tämä materiaali muodosti kasvatetun perus-viruseran. Tällä materiaalilla siirrostettiin myöhemmin simpanssit käyttämällä joko laimentamatonta materiaalia tai peruserän kymmenenkerta is ia laimennuksia.
Esimerkki 3
Eläinten siirrostaminen. Simpanssit siirrostettiin joko intravenöösisti tai suun kautta. Simpansseista otettiin verta jokainen viikko 4-6 kuukauden ajan ja määritettiin kohonneet maksan entsyymit (ALT, alaniiniaminotrans- feraasi) + an t i - HA\/- v as ta-aine . Kohonneet entsyymi tasot ylittäisivät eläinten hepatiitti-A-sairauteen ja vasta- aineen mukanaolo merkitsisi suojauksen saantia (taulukko 4). Klooni n:o 1 (kudosviljelyjen määrä 20 tai 21) infektoi 15 altistetusta simpanssista, jotka oli siirrostettu , .·. intravenöösisti tai suun kautta, 11 simpanssia ja aiheutti • » · • lievän hepatiitin vain kahdessa näistä. Nämä 11 infektoitua • · * 1“ simpanssia reagoivat suojaavalla vasta-aineella 3 - • « « ** * 8 viikon kuluttua rokottamisesta. Klooni n:o 2 (kudos- viljelyjen määrä 20) siirrostettiin intravenöösisti neljään altistettuun simpanssiin. Vain yhdellä näistä neljästä eläimestä oli hyvin lievä, rajatapauksena pidettävä hepatiitti. Kaikki neljä muodostivat suojaavaa vasta- ainetta. Samoin kahdesta altistetusta simpanssista, jotka oli siirrostettu intravenöösisti kloonilla n:o .•t 4 (kudosvil jely jen määrä 9) simpanssi infektoitui muodos- • · I" tamatta hepatiittia mutta kehittämällä suojaavaa vasta- • · • · *.* ainetta.
• · • » • · · • · · • · · • · • * • * • · « • ·· · • · 6 86376 TAULUKKO 1
HAV HM-175-KANNAN HEIKENTYMINEN: ELÄINTUTKIMUKSET
_Simpanssit_ _Marakatit_
Kudosviljc- ». T
........ ICD
lyjen maara N;0 (Väli) N:o (Väli)
Keskim.maks. Keskim.maks.
0 7 314 (109-419; 10 ' 4777 (1,631-15.980; 10 7 62 (41-75; N.T.
20 5 48 (37-61; 7 3516 (1.062-10.230; 20 ja 21* 10 60 (38-87) 3 2936 (2.263-3,799;
No HAV+ 6 57· (41-81) 4 610 (483-927; *
Kolmasti kloonattu +HAV-viruksen ei-infektoivat laimennokset TAULUKKO 2
·. IMMUNISOITUJEN SIMPANSSIEN REAKTIO HAASTAMISEEN
VILLI TYYPPISELLÄ HAV:LLA
* --------------—-----—T~ * Haastamisen jälkeen *· c.. Esihaastava Haastava ________
Sim-η! il . ,
*. panssi Anti-HAV (P/N) M , A1T Anti-HAV
_____Maks. Ali (Maks.): P/N
• ~ ~ ~ ' ______ A-8 TC P-10 9,5 64 22,8 947 TC P-20 9,1 65 28,3 A-53 TC P-20 11,4 280 28,1 A-54 TC P-20 4,8 57 14,3 A~55 Ei 1,3 402 26.0 t * --- - - - — ---
HM-175 villityyppi 10^ CID
7 86376 TAULUKKO 3
YRITYKSET l/ÄLTTÄÄ HEIKENNETTY HAU ROKOTETUISTA SIMPANSSEISTA
Siirroste Lähde Kohde ALT1" HAU^_
Akuutti Simpanssi 992 Simpanssi A-136 57 uloste (TC P-IO)
Akuutti Simp. 947, A-ll uloste^ A-53, A-54 Simpanssi 992 46 + pooli (TC P-20) TAULUKKO 4
HAU, KANTA HM-175, KQLMASI KLOONATTU, SIMPANSSIN RAKTIO
Maks. Maks. Koh. ents.
Sim- ents. esi- tason aika l.poikk.
panssi Siirrosta TC1D tas0 ents' (uk) (vk) • 993 0*1. P-20 10~‘lV 73 65 • · · /;:* A-6 75 71 a-si [ 192 50 2 A-178 10° IV 42 43 ~ 5 A-47 Cl# 1 P-21 101I.V 57 43 -- 3 A-150 ^ 129 42 1 3 :V: a-19 araali 47 54 A-169 i ^ 50 32 -- 8 A-60 10° IV 72 70 2 6 A-232 40 36 -- 6 : A-67 Cl#2 P-20 10“1IV 78 68 — 5 A-113 38 45 — 6 > · * A-118 44 51 -- 4 : A-218 10° IV 87 36 2 5
(M
A-68 Cl#4 P-9 10“1IV 50 54 — 4 A-52 li 55 51 — • ____ - ···· 1 - ' 1 ' 1 • ·

Claims (6)

  1. 8 86376
  2. 1. Menetelmä valmistaa kolme kertaa kloonattua hepatiittis-A-rokotetta, joka aikaansaa suojaavan vasta-ainereaktion sitä ruiskutettaessa korkeimpiin kädellisiin, tunnettu siitä, että HM-175-kanta kloonataan kolmasti seuraavilla vaihei11a: a) laimennetaan kloonamaton hepatiittis-A-virus, b) primaarisen AGM (African green monkey)-munuaissoluvi1jel-mään siirrostetaan kloonamaton virus, c) annetaan apinan munuaissoluviljelmä kasvaa, d) apinan munuaissoluvi1jelmät otetaan talteen, e) apinan munuaissoluvi1jelmää tutkitaan hepatiittisvirusan-tigeenin läsnäolon toteamiseksi, f) valitaan primaarinen apinan munuaisvi1jemä, jolla on suurin hepatiittis-A-viruslaimennus ja tuottaa viljelmässä hepatiittis-A-viruksen antigeenin, g) toistetaan edellä esitetty kloonausmenetelmä toisen ja kolmannen kerran.
  3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kolmasti kloonatulla HM-175-viruksella on viruksen kasvusyklejä vähintään 10 - 30.
  4. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu ...: siitä, että kolmasti kloonattu HM-175-viruskannan talletusnu- mero on ATCC VR 2097, VR 2098 ja VR 2099.
  5. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kloonamaton hepatiittis-A-virus on HM-175, jonka '· * tai 1 etusnumero on ATCC VR 2093. 1 Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu *·.: siitä, että kolmasti kloonattu hepatiittis-A-rokote tuotetaan *··. elävästä HM-175-viruksesta. 9 86376
  6. 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kolmasti kloonattu hepatiittis-A-rokote tuotetaan heikennetystä HM-175-viruksesta. 10 86376
FI861966A 1984-09-19 1986-05-12 Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus. FI86376C (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US65206784 1984-09-19
US06/652,067 US4620978A (en) 1982-04-07 1984-09-19 Hepatitis A virus purified and triply cloned
US8501769 1985-09-18
PCT/US1985/001769 WO1986001826A1 (en) 1984-09-19 1985-09-18 Hepatitis a virus purified and triply cloned

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI861966L FI861966L (fi) 1986-05-12
FI861966A0 FI861966A0 (fi) 1986-05-12
FI86376B FI86376B (fi) 1992-05-15
FI86376C true FI86376C (fi) 1992-08-25

Family

ID=24615385

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI861966A FI86376C (fi) 1984-09-19 1986-05-12 Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus.

Country Status (16)

Country Link
US (1) US4620978A (fi)
EP (1) EP0196316A4 (fi)
JP (1) JPS62500659A (fi)
KR (1) KR860700263A (fi)
AU (1) AU583306B2 (fi)
CA (1) CA1260392A (fi)
DK (1) DK227786A (fi)
ES (1) ES8701837A1 (fi)
FI (1) FI86376C (fi)
GR (1) GR852293B (fi)
IL (1) IL76417A (fi)
NO (1) NO169601C (fi)
NZ (1) NZ213513A (fi)
PT (1) PT81150B (fi)
WO (1) WO1986001826A1 (fi)
ZA (1) ZA857134B (fi)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4894228A (en) * 1982-04-07 1990-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Vaccine against hepatitis A virus
USRE37381E1 (en) * 1982-04-07 2001-09-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Vaccine against hepatitis A virus
JPH085804B2 (ja) * 1988-04-28 1996-01-24 財団法人化学及血清療法研究所 Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン
US5268292A (en) * 1988-06-27 1993-12-07 Robertson Betty H Reproducible generation of high yields of hepatitis A virus by cell culture
CA2144317C (en) 1992-09-18 2004-08-03 Ann W. Funkhouser Hepatitis a virus vaccines
EP0689454B2 (en) * 1993-03-23 2005-02-23 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a
HRP950097A2 (en) 1994-03-08 1997-06-30 Merck & Co Inc Hepatitis a virus culture process
US5766906A (en) * 1994-07-11 1998-06-16 The University Of North Carolina At Chapel Hill Hepatitis A virus deletion mutants and vaccine formulations containing the same
US10265265B2 (en) * 2007-03-15 2019-04-23 Drug Delivery Solutions Limited Topical composition

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4164566A (en) * 1978-08-17 1979-08-14 Merck & Co., Inc. Hepatitis a virus cell culture in vitro
US4532215A (en) * 1982-04-07 1985-07-30 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Isolation of hepatitis A virus strain HM-175

Also Published As

Publication number Publication date
ZA857134B (en) 1987-05-27
IL76417A (en) 1990-12-23
US4620978A (en) 1986-11-04
PT81150A (en) 1985-10-01
AU583306B2 (en) 1989-04-27
NO169601C (no) 1992-07-15
FI861966L (fi) 1986-05-12
NZ213513A (en) 1989-03-29
ES547115A0 (es) 1986-12-01
DK227786D0 (da) 1986-05-16
GR852293B (fi) 1986-01-21
EP0196316A4 (en) 1987-01-28
CA1260392A (en) 1989-09-26
DK227786A (da) 1986-05-16
PT81150B (pt) 1987-10-20
KR860700263A (ko) 1986-08-01
IL76417A0 (en) 1986-01-31
NO169601B1 (no) 1992-04-06
ES8701837A1 (es) 1986-12-01
AU4862085A (en) 1986-04-08
NO861619A (no) 1986-04-24
FI861966A0 (fi) 1986-05-12
WO1986001826A1 (en) 1986-03-27
JPS62500659A (ja) 1987-03-19
FI86376B (fi) 1992-05-15
EP0196316A1 (en) 1986-10-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA1135621A (en) Hepatitis a virus cell culture in vitro
Jørgensen Egtved virus: temperature‐dependent immune response of trout to infection with low‐virulence virus
FI86376C (fi) Foerfarande foer framstaellning av renad och tre gaonger klonad hepatitis-a-virus.
WO2001038497A1 (fr) Pneumovirus du canard et vaccins correspondants
US4517304A (en) Production of viral antigens
Dorson et al. Infectious pancreatic necrosis virus of salmonids: biological and antigenic features of a pathogenic strain and of a non‐pathogenic variant selected in RTG‐2 cells
Quersin-Thiry Action of Anticellular Sera on Virus Infections: I. Influence on Homologous Tissue Cultures Infected with Various Viruses
US20080193478A1 (en) Inactivated Poliomyelitis Vaccine Derived From Sabin Strain Of Polio Virus
CA1164799A (en) Cell culture of hepatitis a virus
Dixon et al. Inactivation of infectious pancreatic necrosis virus for vaccine use
Olsen et al. Immunization against feline oncornavirus disease using a killed tumor cell vaccine
NZ574776A (en) Proccess for producing poliovirus in culture using a dextran microcarrier for use in an inactivated poliovirus, diptheria, pertussis and tetanus vaccine
Van der Heide et al. Pathogenicity for chickens of a reovirus isolated from turkeys
US5021348A (en) Attenuated hepatitis A virus
Hughes et al. Experimentally induced infectious bovine keratoconjunctivitis: relationship of vaccination schedule to protection against exposure with homologous Moraxella bovis culture
CA2181862A1 (en) Mild newcastle disease virus vaccine
Fritz et al. Strain MC29 avian leukosis virus: immunologic relationships to other avian tumor viruses
CN107653231A (zh) 鸭源性冠状病毒弱毒株ibvdcv35及其应用
IE77508B1 (en) Vaccine
NZ234815A (en) An attenuated canine parvovirus and vaccine containing it
US6416764B1 (en) Vaccine
Kern et al. Identification of enteroviruses by hemagglutination-inhibition
Böttiger et al. Swedish inactivated polio vaccine: laboratory standardization and clinical experience over a 30-year period
EP1543113A1 (en) Chicken astrovirus type 2
El‐Zein et al. Preparation and testing of a goat pox vaccine from a pathogenic field isolate attenuated in cell culture

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed

Owner name: THE UNITED STATES OF AMERICA

MA Patent expired