FI85877C - Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. - Google Patents
Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. Download PDFInfo
- Publication number
- FI85877C FI85877C FI864816A FI864816A FI85877C FI 85877 C FI85877 C FI 85877C FI 864816 A FI864816 A FI 864816A FI 864816 A FI864816 A FI 864816A FI 85877 C FI85877 C FI 85877C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- solution
- preparation
- tetraalkylbenzidine
- peroxidase
- tmb
- Prior art date
Links
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 title claims abstract description 19
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical group CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 3
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- WOHLSTOWRAOMSG-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1,3-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SCNC2=C1 WOHLSTOWRAOMSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical class OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 108010035289 Glucose Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710132602 Peroxidase 5 Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N [4-(4-azaniumyl-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylphenyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 NYNRGZULARUZCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108010046301 glucose peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- 231100000206 health hazard Toxicity 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000002535 lyotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002444 monopotassium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000015861 monopotassium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002524 monosodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000018342 monosodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- WKZJASQVARUVAW-UHFFFAOYSA-M potassium;hydron;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [K+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC([O-])=O WKZJASQVARUVAW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/10—Benzidines
- C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Electrophonic Musical Instruments (AREA)
- Measuring Pulse, Heart Rate, Blood Pressure Or Blood Flow (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Electrical Discharge Machining, Electrochemical Machining, And Combined Machining (AREA)
- Paper (AREA)
Description
1 85877
Aine peroksidaasi-aktiviteetin määrittämiseksi, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
Esillä oleva keksintö koskee ainetta peroksidaasi-5 aktiviteetin määrittämiseksi värireäktion avulla samoin kuin menetelmää aineen valmistamiseksi ja sen käyttöä.
Oleellisena edellytyksenä entsyymi-immunokokeiden suorittamiseksi, jotka kokeet olivat toteamisherkkyytensä osalta samanveroisia radioimmunologisten menetelmien kansio sa, oli stabiilien tunnusmerkkientsyymien ja vastaavien erittäin herkkien värinmuodostusreagenssien käytettävyys, joiden avulla näiden tunnusmerkkientsyymien katalyyttinen aktiviteetti oli rekisteröitävissä mittausteknillisesti yksinkertaisella tavalla. Erityisen sopiviksi tunnusmerkki-15 entsyymeiksi osoittautuivat tällöin oksidoreduktaasit, glukoosioksidaasi ja peroksidaasi. Peroksidaasi-reaktiot kuuluvat yleisesti useimmin käytettyihin entsymaattisiin toteamisreaktioihin. Kaikki esim. kirjassa "Methods of Enzymatic Analysis", H.U. Bergmeyer, toimittaja, 3. pai-20 nos, voi. 1, sivut 210-221, Verlag Chemie, Weinheim (1983) kuvatut menetelmät perustuvat, kuten glukoosioksidaasin avulla suoritettu glukoosin määritys, vetyperoksidin stö-kiömetriseen syntymiseen. Tämä voidaan sen jälkeen reagoit-taa värittömän substraatin, peroksidaasin katalysoimassa 25 hapetuksessa värilliseksi tuotteeksi, joka voidaan määrit-*’*. tää kvantitatiivisesti yksinkertaisella tavalla spektrofo- tometrisesti.
* · • · · ’·*·' Tähän peroksidaasin katalysoimaan reaktioon sopivia kromogeenisia järjestelmiä on tämän vuoksi lukuisasti tut-30 kittu ja selostettu (katso Bergmeyer'in teosta). Peroksi-: : : daasi-aktiviteetin määrittämiseksi entsyymi-immunokokeissa täyttävät vain harvat menetelmät vaatimukset erityisesti :\j toteamisherkkyyden osalta. Yleisesti tulisi kromogeenisen substraatin sallia suuri reaktionopeus ja johtaa väri- • ^ 35 stabiilin tuotteen muodostumiseen, jolla on korkea molaa- * * rinen ekstinktiokerroin. Lisäksi tulisi suosia sellaisia 2 85877 aineita, joiden käsittelyyn ei kätkeydy mitään terveydellisiä vaaroja. Kaupallisissa koesarjoissa peroksidaasiin pohjautuvia entsyymi-immunokokeitä varten tulevat ennenkaikkea kysymykseen o-fenyleenidiamiini (OPD) ja 2,2'-5 atsinodi-(3-etyleenibentsotiatsoliinisulfonaatti-6) (ABTS).
Sekä OPD että myös ABTS ovat mutageenisia kuten useimmat peroksidaasi-substraatit. Eräs ryhmä usein käytettyjä substraatteja on bentsidiini-tyyppiä olevat, joihin kuuluu myös tetrametyylibentsidiini /TMB). TMB on varma ei-muta-10 geeninen korvike bentsidiinityyppiä oleville, syöpää aiheuttaville peroksidaasi-substraateille, kuten bentsidii-nille, diaminobentsidiinille jne. Lukuisissa tutkimuksissa ei löytynyt mitään viittausta tämän bentsidiinijohdannaisen mutageenisiin ominaisuuksiin (Tetrahedron 30, 3299 (1976); 15 Cancer Lett. 1, 39 (1975); J. Forensic Sei. 21, 816)).
Monet käyttäjät ovat käyttäneet TMB:tä vuodesta 1974 alkaen hemoglobiinin pseudoperoksidaasi-aktiviteetin määrittämiseen tai sytokromia P 450 sekä jo Liem ja muut, Anal. Biochem, 98, 388-393 (1979) peroksidaasi-aktiviteetin to-20 teamiseen immuunikomplekseissa immuuniperoksidaasi-vär-jäystekniikan yhteydessä. Nämä kirjoittajat viittaavat johtopäätöksessään sivulla 392 hyviin värjäysominaisuuk-siin, joskin myös TMB:n vähäiseen liukoisuuteen tavalliseen tapaan käytetyissä puskurijärjestelmissä sekä TMB:n 25 hapettumisesta johtuvaan hajoamiseen.
Käytettäessä TMB:tä entsyymi-immunokokeissa osoittau-*“1· tuu tämän kromogeenin vähäinen vesiliukoisuus koeolo- suhteissa kuitenkin hyvin rajoittavaksi. Toiminimen Akzo ··· hollantilaisessa patenttihakemuksessa 8 001 972 ja . .1. 30 US-patentissa 4 503 143 selostettiin tämän vuoksi liukoi-• · · suutta parantavia toimenpiteitä. Kummassakin julkaisussa • · · saavutetaan parantunut liukoisuus lisäämällä orgaanisia . . liuottimia. Lisäämällä dimetyylisulfoksidia (1 % til/til.
• · · *·.’1 käyttövalmiissa seoksessa) saadaan julkaisussa *·] 1 35 NL 8 001 972 esitettyjen ilmoitusten mukaan TMB-kon • · • · · • · • · • · · • · • · · • · · • · »·· • · » · • · · I: 3 85877 sentraatio 100 mg/1, so. 0,42 mmol/1 tai 43 mg/1, so. 0,18 mmol/1 US-patentissa 4 503 143. Sitävastoin tarjotaan yleensä OPDrtä tai ABTS:ä 50-100-kertaisesti korkeammassa molaarisessa konsentraatiossa entsyymille.
5 Tetra-alkyylibentsidiinin konsentraation vaihtelu entsyy-mikokeessa osoittaa, että maksimaalisen reagoimisnopeuden saavuttamiseen tarvittava peroksidaasin kyllästymistä substraatilla ei saavuteta edellä ilmoitetuissa TMB:n konsentraatioissa.
10 Tämän vuoksi oli olemassa tarve löytää peroksidaa sin määrittämiseen soveltuva, tetra-alkyylibentsidiiniä sisältävä valmiste, jolla ei ollut edellä mainittuja haittoja. Tällainen valmiste, sen valmistaminen ja sen käyttö ovat keksinnön kohteena.
15 Yllättäen huomattiin, että voitiin saada toteamisherk- kyyden osalta oleellisesti parannettu tetra-alkyylibentsi-diinivalmiste siten, että liuos, joka sisältää yhdistettä tai sen jotakin johdannaista, säädetään puskuriaineen vesiliuoksella, joka sisältää sopivan vetyperoksidiväke-20 vyyden, pH-arvoon, joka on välillä 2,5-3,9. Vaikkakin tavallisille peroksidaasisubstraateille, kuten myös TMB:lie on esitetty entsyymiaktiviteetin pH-optimi, joka on välillä pH 5 - pH 6 (US-P 4 503 143; " Methods of Enzymatic Analysis", H.U. Bergemeys, toimittaja, 3. pai-25 nos, voi. III, sivut 286-293, Verlag Chemis, Weinheim (1983)), osoittaa keksinnön mukainen valmista epätavalli-sen alhaisessa pH-arvossa, erityisesti alueella, joka ·//· onvälillä pH 3,1 - 3,6, tähän asti esitettyihin valmistei- *:· siin verrattuna parantunutta toteamisherkkyyttä, kuten ; 30 esimerkeissä 2 ja 3 osoitetaan.
Keksinnön kohteena on nestemäisen valmisteen muodossa oleva aine peroksidaasin osoittamiseksi ja määrittämi-; seksi, joka valmiste sisältää pääasiallisesti vesipitoi- I.." sessa liuoksessa tetra-alkyylibentsidiiniä tai jotain sen 35 suolaa pitoisuuden ollessa 0,6 - 4,0 mmol/1, peroksidia 1 · • · • · 4 85877 substraattina peroksidaasille pitoisuuden ollessa 0,5 - 50 mmol/1 sekä puskuriaineita, jotka säätävät pH-arvon välille 2,5 - 3,9.
Aine voi sisältää myös penisilliiniä tai sen jo-5 tain happaman hydrolyysin kautta syntynyttä hajoamistuotetta, kuten saksalaisessa patenttihakemuksessa P 3 541 979 selostetaan.
Ainetta voidaan valmistaa liuottamalla kiinteä valmiste, esimerkiksi lyofilisaatti, tai tabletti, 10 jolloin nestemäiseen valmisteeseen käytettyihin komponentteihin sisältyy tetra-alkyylibentsidiiniä, penisilliiniä tai sen hajoamistuotteita, peroksideja ja puskuriaineita sellaisissa määräsuhteissa, että liuotettaessa määrättyyn tilavuuteen pääasiallisesti vesipitoista liuotinta kompo-15 nentit ovat mainituissa väkevyyksissä. Kiinteä valmiste voi lisäksi sisältää vielä lisäaineita, kuten voiteluaineita, täyteaineita ja hajoamista edistäviä aineita, esi-melkiksi polyetyleeniglukolia, karbamidia ja bikarbonaat-teja.
20 Tetra-alkyylibentsidiineinä ovat käyttökelpoisia ennenkaikkea sellaiset, jotka sisältävät alkyyliosassa 1-3 hiiliatomia, edullisesti 3,3',5,5'-tetrametyylibentsi- diini (TI1B) tai sen dihydrokloridi. Peroksideina ovat sopivia natriumperboraatti, vetyperoksidi nestemäisessä 25 muodossa tai kiinteänä karbamidiadduktina tai myös vetype- roksidia synnyttävä järjestelmä, joka koostuu D-glukoosista ·:**: ja glukoosioksidaasista, jolloin konsentraatio säädetään :V: välille 0,5 - 10 mmol/1. Puskuriaineiksi suositellaan ... lyotrooppisia aineita, kuten sitraatteja ja asetaatteja.
. .1. 30 Valmistettaessa valmistetta nestemäisessä muodossa liuotetaan tetra-alkyylibentsidiini ensimmäiseen laimean suolahapon tai muurahaishapon happamaan liuokseen, joiden . . pH-arvo on välillä 1,2-2,0. Penisilliiniä tai sen happa- * · · • man hydrolyysin vaikutuksesta syntyneitä hajoamistuotteita • » » *·1 35 lisätään mahdollisesti tähän liuokseen.
• · ··1 • · • · ·»· • ♦ ♦ · ♦ • · · • · i · · • · • · • · · 5 85877
Toinen, vähemmän hapan liuos valmistetaan peroksideja tai niiden käytön ollessa haitallista, vety-peroksidiliuoSta, vetypercksidiliuosta, esimerkiksi etikka-hapon tai mononatrium- tai monokaliumsitraatin liuoksiin, 5 joiden pH-arvo voidaan säätää natriumhydroksidilla välille 3-6.
Sekoittamalla molempia liuoksia keskenään määrätyssä suhteessa saadaan käyttökelpoinen valmiste.
Keksintöä valaistaan seuraavien esimerkkien avulla 10 lähemmin rajoittamatta keksintöä näihin.
1. Käyttökelpoisen TMB-substraattivalmisteen valmistus
Kantaliuos 1: TMB-dihydrokloridia liuotettiin samalla hämmentäen kahdesti tislattuun veteen, niin että konsentraatioksi tuli 5 g/1, so. 16 mmol/1, ja liuoksen 15 pH säädettiin 5-normaalisella suolahapolla arvoon 1,5.
Tähän liuokseen lisättiin penisilliini G:tä samalla hämmentäen, niin että lopulliseksi konsentraatioksi tuli 299 mg/1, so. 0,56 mmol/1.
Kantaliuos 2: 900 ml:aan kahdesti tislattua vettä 20 lisättiin 1,4 ml jääetikkaa, 1,5 ml 1-normaalista NaOH
ja 250 ml so. 3 mmol H2O2 karbamidi-vetyperoksidi-adduktia. Täydellisen liukenemisen jälkeen lisättiin kahdesti tislattua vettä yhden litran lopputilavuuteen asti.
Käyttöliuos: yksi tilavuus kantaliuosta 1 ja 10 ti- 25 lavuutta kantaliuosta 2 sekoitettiin keskenään.
Näin valmistetun käyttöliuoksen pH-arvo oli 3,3.
Sen optinen tiheys osoittautui olevan 0,025 arvolla 650 nm. Senjälkeen kun liuokseen oli lisätty 5-kertainen *: tilavuus 0,5 normaalista rikkihappoa, oli arvoa 450 nm : 30 käyttäen mitattu ekstinktio 0,008.
2. Kineettinen peroksidaasi-aktiviteettikoe
Nakane’n ja Kawaoi'n menetelmän mukaan, J. Histochem. ; Cytochem. 22, 1084-1091 (1974), piparjuuri peroksidaasis- ta (Boehringer, Mannheim, Saksan liittotasavalta) ja kanii-35 ninpoikasen Anti Human-IgE-vasta aineista (Behringwerke, Marburg, Saksan liittotasavalta) valmistettu konjugaatti 6 85877 laimennettiin fosfaatilla puskuroituun keittosuolaliuokseen (PBS = "phosphate buffered saline"), johon oli lisätty 10 mg/ml naudan seerumin albumiinia. Siitä lisättiin 20^ul tilavuuteen esimerkin 1 mukaista käyttöliuosta.
5 Sekoittamisen jälkeen rekisteröitiin ekstinktion muutos ensimmäisen minuutin kuluessa arvolla 650 nm. Samalla tavalla rekisteröitiin NL 8 001 972:n, esimerkin 1 C mukaan valmistetussa käyttöliuoksessa entsyymikonjugaatin aiheuttama ekstinktion muutos minuuttia kohti, joka liuos 10 sisälsi 99 mg/1, so. 0,41 mmol/1 TMB:tä vesiliuoksessa, jossa oli 0,99 % (til/til.) dimetyylisulfoksidia ja 8,73 g/1 trinatriumsitraattixli^O:ta, jonka liuoksen pH oli säädetty fosforihapolla arvoon 6,0. Kaksoismäärityk-sen keskiarvona saatiin esimerkin 1 mukaiselle TMB-käyt- 15 töliuokselle ekstinktion muutokseksi minuuttia kohti 1,318 ja NL 800 1972:n mukaiselle TMB-käyttöliuokselle arvo 0,193.
3. Käyttö entsyymi-immuunikokeessa kokonais-IgE:n määrittämiseksi 20 Polystyreeniä olevat mikrokoelevyt (Nunc, Roskilde,
Tanska, kat.-nro 262670) pinnoitettiin Voller'in ja muiden j_ Bull. World Health-Organ. 53, 55-65 (1976) _7 esittämän menetelmän mukaan. Levyssä inkuboitiin syvennystä kohti 150^ul liuosta, joka sisälsi esimerkissä 3 mainittua 25 Anti IgE-vasta-ainetta konsentraation ollessa 10,ug/ml · \ /
Voller'in ja muiden mainitsemassa pinnoituspuskuriliuok-sessa, 15-20 tuntia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen kun liuos oli imetty pois ja pesu suoritettu liuoksella, joka sisälsi 1 g/1 polyoksietyleeni(20)sorbitaanimonolaureaat- : 30 tia, josta myös käytetään nimitystä Tween^20, PBS:ssa - - (e) : : : (PBS-Tweer^j, pantiin kahdeksaan syvennykseen kuhunkin 100^ul IgE-pitoisen ihmisen seerumin erilaisia laimennuk-.1. : siä PBS:ssa, johon oli lisätty 10 mg/ml naudan seerumi- albumiinia,ja inkuboitiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa.
35 Näissä kokeissa laimentamalla saadut IgE:n konsentraatiot olivat 1000, 500, 100, 25 ja 10 IU/ml. Kahdesti PBS- • · • 1 • · · • · · ti · 7 85877 (R)
Tween0:llä suoritetun pesun jälkeen lisättiin kaikkiin käytettyihin syvennyksiin 100,ul esimerkissä 3 kuvatun konju-gaatin sopivaa laimennusta PBS-Tween0^ssa, johon oli lisätty 10 mg/ml naudan seerumialbumiinia, ja inkuboitiin 5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Kahdesti suoritetun lisäpesun jälkeen pipetoitiin kuhunkin neljään konsentraa-tiovaihetta kohti käytettyyn kahdeksaan syvennykseen kulloinkin 100^ul esimerkissä 1 kuvattua käyttöliuosta ja inkuboitiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Vastaavalla 10 tavalla lisättiin kulloinkin 100^,ul esimerkissä 3 kuvat tua NL 8 001 972:n mukaista TMB-valmistetta jäljellä oleviin neljään syvennykseen. Inkubointivaiheen loputtua lisättiin 100^ul 0,5-normaalista H2SO4 ja sitten keskeytettiin entsyymireaktio. Saatujen väri liuosten ekstinktiot mitat-15 tiin Behring ELISA-prosessorilla (Behringwerke, Marburg,
Saksan liittotasavalta) ja tulokset on esitetty taulukossa.
Taulukko
Ekstinktioarvot sandwich-tyyppisessä entsyymi-immuno-20 kokeessa
Asetelma 1 Asetelma 2 (TMB esimer- (TMB NL kin 1 mukai- 8001972 :n nen) mukainen) . 25 Ihmisen IgE-pi- 10 IU/ml 0,077 0,021 ··’ toisen seerumin 25 IU/ml 0,126 0,038 laimennukset 100 IU/ml 0,332 0,102 (katso esimerk- 500 IU/ml 1,018 0,305 kiä 3) 1000 IU/ml 1,940 0,612
Claims (5)
1. Aine peroksidaasi-aktiviteetin toteamiseksi ja määrittämiseksi, joka aine sisältää vesipitoisessa liuok-5 sessa tetra-alkyylibentsidiiniä tai sen suolaa, peroksi-dia tai vetyperoksidia tuottavaa järjestelmää ja puskuri-ainetta, tunnettu siitä, että se sisältää yhtä tai usempaa puskuriainetta, jotka säätävät pH-arvon välille 2,5 - 3,9, eikä sisällä orgaanista liuotinta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen aine, tun nettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiini sisältää 1-3 hiilitatomia alkyyliosassa.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen aine, tunnettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiini on 15 3,3',5,5'-tetrametyylibentsidiini.
4. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen aineen valmistamiseksi peroksidaasiaktiviteetin toteamiseksi ja määrittämiseksi, tunnettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiiniä lisätään liuokseen, joka ei sisällä or- 20 gaanista liuotinta ja jonka pH on välillä 1,5 - 2, ja saatu liuos sekoitetaan toisen liuoksen kanssa, joka ei sisällä orgaanista liuotinta mutta sisältää peroksidia ja puskuriaineita, jotka sekoittamisen jälkeen säätävät pH-arvon välille 2,5 - 3,9. : : 25
5. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen aineen käyttö analyyttisissä menetelmissä, joissa todetaan tai määrite-tään peroksidaasi- tai pseudoperoksidaasi-aktiviteetti. 9 85877
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853541978 DE3541978A1 (de) | 1985-11-28 | 1985-11-28 | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
| DE3541978 | 1985-11-28 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI864816A0 FI864816A0 (fi) | 1986-11-26 |
| FI864816L FI864816L (fi) | 1987-05-29 |
| FI85877B FI85877B (fi) | 1992-02-28 |
| FI85877C true FI85877C (fi) | 1992-06-10 |
Family
ID=6287013
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI864816A FI85877C (fi) | 1985-11-28 | 1986-11-26 | Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5610026A (fi) |
| EP (1) | EP0224210B1 (fi) |
| JP (1) | JPH07108237B2 (fi) |
| AT (1) | ATE56097T1 (fi) |
| AU (1) | AU610488B2 (fi) |
| CA (1) | CA1291402C (fi) |
| DE (2) | DE3541978A1 (fi) |
| DK (1) | DK571086A (fi) |
| ES (1) | ES2018153B3 (fi) |
| FI (1) | FI85877C (fi) |
| GR (1) | GR3001134T3 (fi) |
| MX (1) | MX170487B (fi) |
| NO (1) | NO174262C (fi) |
| PT (1) | PT83826B (fi) |
| ZA (1) | ZA868980B (fi) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3541979A1 (de) * | 1985-11-28 | 1987-06-04 | Behringwerke Ag | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet mit stabilisator, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
| DE3641830A1 (de) * | 1986-12-08 | 1988-06-09 | Fraunhofer Ges Forschung | Immunenzymatischer test mit detektion durch farbumschlag im sichtbaren spektralbereich |
| JPH0740957B2 (ja) * | 1987-07-24 | 1995-05-10 | 帝人株式会社 | ペルオキシダーゼ活性測定用の色原体水溶液 |
| US5532138A (en) * | 1990-04-26 | 1996-07-02 | Behringwerke Ag | Method and kits for determining peroxidatively active catalysts |
| DE4037764A1 (de) | 1990-11-28 | 1992-06-04 | Behringwerke Ag | Waschloesung fuer festphasen-immunometrische verfahren, die stabilisatoren fuer das markierungssystem enthaelt und ihre verwendung |
| DE4037776A1 (de) * | 1990-11-28 | 1992-06-04 | Behringwerke Ag | Waschloesung fuer festphasen-immunometrisches verfahren, die einen komplexbildner fuer metallionen enthaelt und ihre verwendung |
| GB9027131D0 (en) * | 1990-12-14 | 1991-02-06 | Rice Evans Catherine | Diagnostic test |
| US5332662A (en) * | 1992-07-31 | 1994-07-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Methods for determining peroxidatively active substances |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2460903C3 (de) * | 1974-12-21 | 1981-12-24 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue 3,3',5,5'-Tetraalkylbenzidine |
| JPS5263794A (en) * | 1975-11-21 | 1977-05-26 | Shionogi Seiyaku Kk | Test piece for latent blood |
| JPS5399319A (en) * | 1977-02-09 | 1978-08-30 | Hidematsu Hirai | Novel qualitative and quantitative detecting method and detecting body for antgenic substance |
| US4077772A (en) * | 1977-05-31 | 1978-03-07 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Method for the determination of hemoglobin in trace amounts |
| US4340394A (en) * | 1979-11-13 | 1982-07-20 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilization of benzidine-type indicators with various enhancers |
| US4503143A (en) * | 1982-08-20 | 1985-03-05 | Btc Diagnostics Limited Partnership | Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen |
| US4504579A (en) * | 1982-11-08 | 1985-03-12 | Abbott Laboratories | Stabilized peroxidase compositions |
| ZA841078B (en) * | 1983-03-01 | 1984-09-26 | Warner Lambert Co | Peroxidase activity detection composition |
| US4789630A (en) * | 1985-10-04 | 1988-12-06 | Cetus Corporation | Ionic compounds containing the cationic meriquinone of a benzidine |
| DE3541979A1 (de) * | 1985-11-28 | 1987-06-04 | Behringwerke Ag | Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet mit stabilisator, verfahren zur herstellung und seine verwendung |
| US5206150A (en) * | 1990-10-26 | 1993-04-27 | University Of Kentucky Research Foundation | Composition of, method of producing and method of using a stabilized formulation for assaying peroxidase activity |
-
1985
- 1985-11-28 DE DE19853541978 patent/DE3541978A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-11-21 AT AT86116137T patent/ATE56097T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-11-21 DE DE8686116137T patent/DE3673768D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-21 EP EP86116137A patent/EP0224210B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-21 ES ES86116137T patent/ES2018153B3/es not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-26 FI FI864816A patent/FI85877C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-11-27 DK DK571086A patent/DK571086A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-11-27 AU AU65780/86A patent/AU610488B2/en not_active Ceased
- 1986-11-27 MX MX004449A patent/MX170487B/es unknown
- 1986-11-27 NO NO864776A patent/NO174262C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-11-27 PT PT83826A patent/PT83826B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-11-27 JP JP61280951A patent/JPH07108237B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1986-11-27 ZA ZA868980A patent/ZA868980B/xx unknown
- 1986-11-28 CA CA000524125A patent/CA1291402C/en not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-11-30 GR GR90400759T patent/GR3001134T3/el unknown
-
1994
- 1994-08-08 US US08/291,059 patent/US5610026A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA868980B (en) | 1987-07-29 |
| FI864816L (fi) | 1987-05-29 |
| ES2018153B3 (es) | 1991-04-01 |
| JPH07108237B2 (ja) | 1995-11-22 |
| FI85877B (fi) | 1992-02-28 |
| NO174262B (no) | 1993-12-27 |
| DE3673768D1 (de) | 1990-10-04 |
| FI864816A0 (fi) | 1986-11-26 |
| NO174262C (no) | 1994-04-06 |
| DK571086D0 (da) | 1986-11-27 |
| DE3541978A1 (de) | 1987-06-04 |
| NO864776D0 (no) | 1986-11-27 |
| AU6578086A (en) | 1987-06-04 |
| ATE56097T1 (de) | 1990-09-15 |
| CA1291402C (en) | 1991-10-29 |
| MX170487B (es) | 1993-08-26 |
| US5610026A (en) | 1997-03-11 |
| EP0224210B1 (de) | 1990-08-29 |
| PT83826A (de) | 1986-12-01 |
| PT83826B (pt) | 1989-06-30 |
| EP0224210A1 (de) | 1987-06-03 |
| JPS62134100A (ja) | 1987-06-17 |
| GR3001134T3 (en) | 1992-06-25 |
| AU610488B2 (en) | 1991-05-23 |
| DK571086A (da) | 1987-05-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Snyder et al. | Purification and some characteristics of nitrous oxide reductase from Paracoccus denitrificans. | |
| Rodrigues et al. | Interactions of imidazole antifungal agents with purified cytochrome P-450 proteins | |
| FI85504C (fi) | Medel foer bestaemning av peroxidasaktiviteten tillsammans med en stabilisator, dess framstaellningsfoerfarande och anvaendning. | |
| Koberstein et al. | Studies of Glutamate Dehydrogenase: The Influence of ADP, GTP, and l‐Glutamate on the Binding of the Reduced Coenzyme to Beef‐Liver Glutamate Dehydrogenase | |
| Wharton et al. | [45] Cytochrome oxidase from beef heart mitochondria | |
| Tynes et al. | Tissue-and species-dependent expression of multiple forms of mammalian microsomal flavin-containing monooxygenase. | |
| EP0103784B1 (en) | Catalyzed colorimetric and fluorometric substrates for peroxidase enzyme determinations | |
| Levy et al. | On the structure and catalytic function of mammary glucose 6-phosphate dehydrogenase | |
| US5043266A (en) | Ortho- and para-imidazolyl and benzimidazolyl substituted phenol as enhancers for diagnostic chemiluminescent assays | |
| FI85877C (fi) | Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. | |
| EP0185057A1 (en) | Assay of peroxidase enzyme activity | |
| Fan et al. | Properties of purified kidney microsomal NADPH-cytochrome c reductase | |
| HULTQUIST et al. | Catalysis of methemoglobin reduction | |
| WO1986004610A1 (en) | Stabilized enzyme substrate solutions | |
| KINOSHITA et al. | A fluorophotometric determination of serum creatinine and creatine using a creatinineamidohydrolase-creatineamidinohydrolase-sarcosine oxidase-peroxidase system and diacetyldichlorofluorescin | |
| EP0594709B1 (en) | Chromogenic substrates for improving detection in a peroxidase-based assay | |
| Tsuge et al. | Inactivation of glucose oxidase by the cationic detergent, hexadecyltrimethylammonium bromide | |
| Cappel et al. | The effects of mevinolin on the thiol/disulfide exchange between 3-hydroxy-3-methyglutaryl-coenzyme A reductase and glutathione | |
| de Jonge et al. | Inhibition of Mitochondrial‐Protein Synthesis in Rat Small‐Intestinal Epithelium | |
| Suzuki et al. | The Aconitase of Yeast. IV. Studies on Iron and Sulfur in Yeast Aconitase | |
| Lipka et al. | Methoxyflurane acts at the substrate binding site of cytochrome P450 LM2 to induce a dependence on cytochrome b5 | |
| Clark Jr et al. | The effect of alternate substrates and substrate concentration on the antibody-mediated inhibition of horseradish peroxidase | |
| Domke et al. | Reduction of alloxan by microsomal electron transport proteins | |
| KR100209097B1 (ko) | 퍼옥시다아제의 기질인 티엠비의 안정화된 조성물 | |
| 松村嘉子 et al. | Basic studies on spectrophotometric and chemiluminescent determination of D-aspartate using D-aspartate oxidase from Cryptococcus humicolus UJ1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |
|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |