FI85877B - Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. - Google Patents

Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. Download PDF

Info

Publication number
FI85877B
FI85877B FI864816A FI864816A FI85877B FI 85877 B FI85877 B FI 85877B FI 864816 A FI864816 A FI 864816A FI 864816 A FI864816 A FI 864816A FI 85877 B FI85877 B FI 85877B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
solution
peroxide
tetraalkylbenzidine
peroxidase
tmb
Prior art date
Application number
FI864816A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI85877C (fi
FI864816A (fi
FI864816A0 (fi
Inventor
Hans Erwin Pauly
Herbert Schwarz
Original Assignee
Behringwerke Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Behringwerke Ag filed Critical Behringwerke Ag
Publication of FI864816A0 publication Critical patent/FI864816A0/fi
Publication of FI864816A publication Critical patent/FI864816A/fi
Publication of FI85877B publication Critical patent/FI85877B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI85877C publication Critical patent/FI85877C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/721—Haemoglobin
    • G01N33/725—Haemoglobin using peroxidative activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
    • C12Q2326/10—Benzidines
    • C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Electrophonic Musical Instruments (AREA)
  • Measuring Pulse, Heart Rate, Blood Pressure Or Blood Flow (AREA)
  • Electrical Discharge Machining, Electrochemical Machining, And Combined Machining (AREA)
  • Paper (AREA)

Description

1 85877
Aine peroksidaasi-aktiviteetin määrittämiseksi, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
Esillä oleva keksintö koskee ainetta peroksidaasi-5 aktiviteetin määrittämiseksi värireäktion avulla samoin kuin menetelmää aineen valmistamiseksi ja sen käyttöä.
Oleellisena edellytyksenä entsyymi-immunokokeiden suorittamiseksi, jotka kokeet olivat toteamisherkkyytensä osalta samanveroisia radioimmunologisten menetelmien kansio sa, oli stabiilien tunnusmerkkientsyymien ja vastaavien erittäin herkkien värinmuodostusreagenssien käytettävyys, joiden avulla näiden tunnusmerkkientsyymien katalyyttinen aktiviteetti oli rekisteröitävissä mittausteknillisesti yksinkertaisella tavalla. Erityisen sopiviksi tunnusmerkki-15 entsyymeiksi osoittautuivat tällöin oksidoreduktaasit, glukoosioksidaasi ja peroksidaasi. Peroksidaasi-reaktiot kuuluvat yleisesti useimmin käytettyihin entsymaattisiin toteamisreaktioihin. Kaikki esim. kirjassa "Methods of Enzymatic Analysis", H.U. Bergmeyer, toimittaja, 3. pai-20 nos, voi. 1, sivut 210-221, Verlag Chemie, Weinheim (1983) kuvatut menetelmät perustuvat, kuten glukoosioksidaasin avulla suoritettu glukoosin määritys, vetyperoksidin stö-kiömetriseen syntymiseen. Tämä voidaan sen jälkeen reagoit-taa värittömän substraatin, peroksidaasin katalysoimassa 25 hapetuksessa värilliseksi tuotteeksi, joka voidaan määrit-*’*. tää kvantitatiivisesti yksinkertaisella tavalla spektrofo- tometrisesti.
* · • · · ’·*·' Tähän peroksidaasin katalysoimaan reaktioon sopivia kromogeenisia järjestelmiä on tämän vuoksi lukuisasti tut-30 kittu ja selostettu (katso Bergmeyer'in teosta). Peroksi-: : : daasi-aktiviteetin määrittämiseksi entsyymi-immunokokeissa täyttävät vain harvat menetelmät vaatimukset erityisesti :\j toteamisherkkyyden osalta. Yleisesti tulisi kromogeenisen substraatin sallia suuri reaktionopeus ja johtaa väri- • ^ 35 stabiilin tuotteen muodostumiseen, jolla on korkea molaa- * * rinen ekstinktiokerroin. Lisäksi tulisi suosia sellaisia 2 85877 aineita, joiden käsittelyyn ei kätkeydy mitään terveydellisiä vaaroja. Kaupallisissa koesarjoissa peroksidaasiin pohjautuvia entsyymi-immunokokeitä varten tulevat ennenkaikkea kysymykseen o-fenyleenidiamiini (OPD) ja 2,2'-5 atsinodi-(3-etyleenibentsotiatsoliinisulfonaatti-6) (ABTS).
Sekä OPD että myös ABTS ovat mutageenisia kuten useimmat peroksidaasi-substraatit. Eräs ryhmä usein käytettyjä substraatteja on bentsidiini-tyyppiä olevat, joihin kuuluu myös tetrametyylibentsidiini /TMB). TMB on varma ei-muta-10 geeninen korvike bentsidiinityyppiä oleville, syöpää aiheuttaville peroksidaasi-substraateille, kuten bentsidii-nille, diaminobentsidiinille jne. Lukuisissa tutkimuksissa ei löytynyt mitään viittausta tämän bentsidiinijohdannaisen mutageenisiin ominaisuuksiin (Tetrahedron 30, 3299 (1976); 15 Cancer Lett. 1, 39 (1975); J. Forensic Sei. 21, 816)).
Monet käyttäjät ovat käyttäneet TMB:tä vuodesta 1974 alkaen hemoglobiinin pseudoperoksidaasi-aktiviteetin määrittämiseen tai sytokromia P 450 sekä jo Liem ja muut, Anal. Biochem, 98, 388-393 (1979) peroksidaasi-aktiviteetin to-20 teamiseen immuunikomplekseissa immuuniperoksidaasi-vär-jäystekniikan yhteydessä. Nämä kirjoittajat viittaavat johtopäätöksessään sivulla 392 hyviin värjäysominaisuuk-siin, joskin myös TMB:n vähäiseen liukoisuuteen tavalliseen tapaan käytetyissä puskurijärjestelmissä sekä TMB:n 25 hapettumisesta johtuvaan hajoamiseen.
Käytettäessä TMB:tä entsyymi-immunokokeissa osoittau-*“1· tuu tämän kromogeenin vähäinen vesiliukoisuus koeolo- suhteissa kuitenkin hyvin rajoittavaksi. Toiminimen Akzo ··· hollantilaisessa patenttihakemuksessa 8 001 972 ja . .1. 30 US-patentissa 4 503 143 selostettiin tämän vuoksi liukoi-• · · suutta parantavia toimenpiteitä. Kummassakin julkaisussa • · · saavutetaan parantunut liukoisuus lisäämällä orgaanisia . . liuottimia. Lisäämällä dimetyylisulfoksidia (1 % til/til.
• · · *·.’1 käyttövalmiissa seoksessa) saadaan julkaisussa *·] 1 35 NL 8 001 972 esitettyjen ilmoitusten mukaan TMB-kon • · • · · • · • · • · · • · • · · • · · • · »·· • · » · • · · I: 3 85877 sentraatio 100 mg/1, so. 0,42 mmol/1 tai 43 mg/1, so. 0,18 mmol/1 US-patentissa 4 503 143. Sitävastoin tarjotaan yleensä OPDrtä tai ABTS:ä 50-100-kertaisesti korkeammassa molaarisessa konsentraatiossa entsyymille.
5 Tetra-alkyylibentsidiinin konsentraation vaihtelu entsyy-mikokeessa osoittaa, että maksimaalisen reagoimisnopeuden saavuttamiseen tarvittava peroksidaasin kyllästymistä substraatilla ei saavuteta edellä ilmoitetuissa TMB:n konsentraatioissa.
10 Tämän vuoksi oli olemassa tarve löytää peroksidaa sin määrittämiseen soveltuva, tetra-alkyylibentsidiiniä sisältävä valmiste, jolla ei ollut edellä mainittuja haittoja. Tällainen valmiste, sen valmistaminen ja sen käyttö ovat keksinnön kohteena.
15 Yllättäen huomattiin, että voitiin saada toteamisherk- kyyden osalta oleellisesti parannettu tetra-alkyylibentsi-diinivalmiste siten, että liuos, joka sisältää yhdistettä tai sen jotakin johdannaista, säädetään puskuriaineen vesiliuoksella, joka sisältää sopivan vetyperoksidiväke-20 vyyden, pH-arvoon, joka on välillä 2,5-3,9. Vaikkakin tavallisille peroksidaasisubstraateille, kuten myös TMB:lie on esitetty entsyymiaktiviteetin pH-optimi, joka on välillä pH 5 - pH 6 (US-P 4 503 143; " Methods of Enzymatic Analysis", H.U. Bergemeys, toimittaja, 3. pai-25 nos, voi. III, sivut 286-293, Verlag Chemis, Weinheim (1983)), osoittaa keksinnön mukainen valmista epätavalli-sen alhaisessa pH-arvossa, erityisesti alueella, joka ·//· onvälillä pH 3,1 - 3,6, tähän asti esitettyihin valmistei- *:· siin verrattuna parantunutta toteamisherkkyyttä, kuten ; 30 esimerkeissä 2 ja 3 osoitetaan.
Keksinnön kohteena on nestemäisen valmisteen muodossa oleva aine peroksidaasin osoittamiseksi ja määrittämi-; seksi, joka valmiste sisältää pääasiallisesti vesipitoi- I.." sessa liuoksessa tetra-alkyylibentsidiiniä tai jotain sen 35 suolaa pitoisuuden ollessa 0,6 - 4,0 mmol/1, peroksidia 1 · • · • · 4 85877 substraattina peroksidaasille pitoisuuden ollessa 0,5 - 50 mmol/1 sekä puskuriaineita, jotka säätävät pH-arvon välille 2,5 - 3,9.
Aine voi sisältää myös penisilliiniä tai sen jo-5 tain happaman hydrolyysin kautta syntynyttä hajoamistuotetta, kuten saksalaisessa patenttihakemuksessa P 3 541 979 selostetaan.
Ainetta voidaan valmistaa liuottamalla kiinteä valmiste, esimerkiksi lyofilisaatti, tai tabletti, 10 jolloin nestemäiseen valmisteeseen käytettyihin komponentteihin sisältyy tetra-alkyylibentsidiiniä, penisilliiniä tai sen hajoamistuotteita, peroksideja ja puskuriaineita sellaisissa määräsuhteissa, että liuotettaessa määrättyyn tilavuuteen pääasiallisesti vesipitoista liuotinta kompo-15 nentit ovat mainituissa väkevyyksissä. Kiinteä valmiste voi lisäksi sisältää vielä lisäaineita, kuten voiteluaineita, täyteaineita ja hajoamista edistäviä aineita, esi-melkiksi polyetyleeniglukolia, karbamidia ja bikarbonaat-teja.
20 Tetra-alkyylibentsidiineinä ovat käyttökelpoisia ennenkaikkea sellaiset, jotka sisältävät alkyyliosassa 1-3 hiiliatomia, edullisesti 3,3',5,5'-tetrametyylibentsi- diini (TI1B) tai sen dihydrokloridi. Peroksideina ovat sopivia natriumperboraatti, vetyperoksidi nestemäisessä 25 muodossa tai kiinteänä karbamidiadduktina tai myös vetype- roksidia synnyttävä järjestelmä, joka koostuu D-glukoosista ·:**: ja glukoosioksidaasista, jolloin konsentraatio säädetään :V: välille 0,5 - 10 mmol/1. Puskuriaineiksi suositellaan ... lyotrooppisia aineita, kuten sitraatteja ja asetaatteja.
. .1. 30 Valmistettaessa valmistetta nestemäisessä muodossa liuotetaan tetra-alkyylibentsidiini ensimmäiseen laimean suolahapon tai muurahaishapon happamaan liuokseen, joiden . . pH-arvo on välillä 1,2-2,0. Penisilliiniä tai sen happa- * · · • man hydrolyysin vaikutuksesta syntyneitä hajoamistuotteita • » » *·1 35 lisätään mahdollisesti tähän liuokseen.
• · ··1 • · • · ·»· • ♦ ♦ · ♦ • · · • · i · · • · • · • · · 5 85877
Toinen, vähemmän hapan liuos valmistetaan peroksideja tai niiden käytön ollessa haitallista, vety-peroksidiliuoSta, vetypercksidiliuosta, esimerkiksi etikka-hapon tai mononatrium- tai monokaliumsitraatin liuoksiin, 5 joiden pH-arvo voidaan säätää natriumhydroksidilla välille 3-6.
Sekoittamalla molempia liuoksia keskenään määrätyssä suhteessa saadaan käyttökelpoinen valmiste.
Keksintöä valaistaan seuraavien esimerkkien avulla 10 lähemmin rajoittamatta keksintöä näihin.
1. Käyttökelpoisen TMB-substraattivalmisteen valmistus
Kantaliuos 1: TMB-dihydrokloridia liuotettiin samalla hämmentäen kahdesti tislattuun veteen, niin että konsentraatioksi tuli 5 g/1, so. 16 mmol/1, ja liuoksen 15 pH säädettiin 5-normaalisella suolahapolla arvoon 1,5.
Tähän liuokseen lisättiin penisilliini G:tä samalla hämmentäen, niin että lopulliseksi konsentraatioksi tuli 299 mg/1, so. 0,56 mmol/1.
Kantaliuos 2: 900 ml:aan kahdesti tislattua vettä 20 lisättiin 1,4 ml jääetikkaa, 1,5 ml 1-normaalista NaOH
ja 250 ml so. 3 mmol H2O2 karbamidi-vetyperoksidi-adduktia. Täydellisen liukenemisen jälkeen lisättiin kahdesti tislattua vettä yhden litran lopputilavuuteen asti.
Käyttöliuos: yksi tilavuus kantaliuosta 1 ja 10 ti- 25 lavuutta kantaliuosta 2 sekoitettiin keskenään.
Näin valmistetun käyttöliuoksen pH-arvo oli 3,3.
Sen optinen tiheys osoittautui olevan 0,025 arvolla 650 nm. Senjälkeen kun liuokseen oli lisätty 5-kertainen *: tilavuus 0,5 normaalista rikkihappoa, oli arvoa 450 nm : 30 käyttäen mitattu ekstinktio 0,008.
2. Kineettinen peroksidaasi-aktiviteettikoe
Nakane’n ja Kawaoi'n menetelmän mukaan, J. Histochem. ; Cytochem. 22, 1084-1091 (1974), piparjuuri peroksidaasis- ta (Boehringer, Mannheim, Saksan liittotasavalta) ja kanii-35 ninpoikasen Anti Human-IgE-vasta aineista (Behringwerke, Marburg, Saksan liittotasavalta) valmistettu konjugaatti 6 85877 laimennettiin fosfaatilla puskuroituun keittosuolaliuokseen (PBS = "phosphate buffered saline"), johon oli lisätty 10 mg/ml naudan seerumin albumiinia. Siitä lisättiin 20^ul tilavuuteen esimerkin 1 mukaista käyttöliuosta.
5 Sekoittamisen jälkeen rekisteröitiin ekstinktion muutos ensimmäisen minuutin kuluessa arvolla 650 nm. Samalla tavalla rekisteröitiin NL 8 001 972:n, esimerkin 1 C mukaan valmistetussa käyttöliuoksessa entsyymikonjugaatin aiheuttama ekstinktion muutos minuuttia kohti, joka liuos 10 sisälsi 99 mg/1, so. 0,41 mmol/1 TMB:tä vesiliuoksessa, jossa oli 0,99 % (til/til.) dimetyylisulfoksidia ja 8,73 g/1 trinatriumsitraattixli^O:ta, jonka liuoksen pH oli säädetty fosforihapolla arvoon 6,0. Kaksoismäärityk-sen keskiarvona saatiin esimerkin 1 mukaiselle TMB-käyt- 15 töliuokselle ekstinktion muutokseksi minuuttia kohti 1,318 ja NL 800 1972:n mukaiselle TMB-käyttöliuokselle arvo 0,193.
3. Käyttö entsyymi-immuunikokeessa kokonais-IgE:n määrittämiseksi 20 Polystyreeniä olevat mikrokoelevyt (Nunc, Roskilde,
Tanska, kat.-nro 262670) pinnoitettiin Voller'in ja muiden j_ Bull. World Health-Organ. 53, 55-65 (1976) _7 esittämän menetelmän mukaan. Levyssä inkuboitiin syvennystä kohti 150^ul liuosta, joka sisälsi esimerkissä 3 mainittua 25 Anti IgE-vasta-ainetta konsentraation ollessa 10,ug/ml · \ /
Voller'in ja muiden mainitsemassa pinnoituspuskuriliuok-sessa, 15-20 tuntia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen kun liuos oli imetty pois ja pesu suoritettu liuoksella, joka sisälsi 1 g/1 polyoksietyleeni(20)sorbitaanimonolaureaat- : 30 tia, josta myös käytetään nimitystä Tween^20, PBS:ssa - - (e) : : : (PBS-Tweer^j, pantiin kahdeksaan syvennykseen kuhunkin 100^ul IgE-pitoisen ihmisen seerumin erilaisia laimennuk-.1. : siä PBS:ssa, johon oli lisätty 10 mg/ml naudan seerumi- albumiinia,ja inkuboitiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa.
35 Näissä kokeissa laimentamalla saadut IgE:n konsentraatiot olivat 1000, 500, 100, 25 ja 10 IU/ml. Kahdesti PBS- • · • 1 • · · • · · ti · 7 85877 (R)
Tween0:llä suoritetun pesun jälkeen lisättiin kaikkiin käytettyihin syvennyksiin 100,ul esimerkissä 3 kuvatun konju-gaatin sopivaa laimennusta PBS-Tween0^ssa, johon oli lisätty 10 mg/ml naudan seerumialbumiinia, ja inkuboitiin 5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Kahdesti suoritetun lisäpesun jälkeen pipetoitiin kuhunkin neljään konsentraa-tiovaihetta kohti käytettyyn kahdeksaan syvennykseen kulloinkin 100^ul esimerkissä 1 kuvattua käyttöliuosta ja inkuboitiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Vastaavalla 10 tavalla lisättiin kulloinkin 100^,ul esimerkissä 3 kuvat tua NL 8 001 972:n mukaista TMB-valmistetta jäljellä oleviin neljään syvennykseen. Inkubointivaiheen loputtua lisättiin 100^ul 0,5-normaalista H2SO4 ja sitten keskeytettiin entsyymireaktio. Saatujen väri liuosten ekstinktiot mitat-15 tiin Behring ELISA-prosessorilla (Behringwerke, Marburg,
Saksan liittotasavalta) ja tulokset on esitetty taulukossa.
Taulukko
Ekstinktioarvot sandwich-tyyppisessä entsyymi-immuno-20 kokeessa
Asetelma 1 Asetelma 2 (TMB esimer- (TMB NL kin 1 mukai- 8001972 :n nen) mukainen) . 25 Ihmisen IgE-pi- 10 IU/ml 0,077 0,021 ··’ toisen seerumin 25 IU/ml 0,126 0,038 laimennukset 100 IU/ml 0,332 0,102 (katso esimerk- 500 IU/ml 1,018 0,305 kiä 3) 1000 IU/ml 1,940 0,612

Claims (5)

8 85877
1. Aine peroksidaasi-aktiviteetin toteamiseksi ja määrittämiseksi, joka aine sisältää vesipitoisessa liuok-5 sessa tetra-alkyylibentsidiiniä tai sen suolaa, peroksi-dia tai vetyperoksidia tuottavaa järjestelmää ja puskuri-ainetta, tunnettu siitä, että se sisältää yhtä tai usempaa puskuriainetta, jotka säätävät pH-arvon välille 2,5 - 3,9, eikä sisällä orgaanista liuotinta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen aine, tun nettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiini sisältää 1-3 hiilitatomia alkyyliosassa.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen aine, tunnettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiini on 15 3,3',5,5'-tetrametyylibentsidiini.
4. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen aineen valmistamiseksi peroksidaasiaktiviteetin toteamiseksi ja määrittämiseksi, tunnettu siitä, että tetra-alkyylibentsidiiniä lisätään liuokseen, joka ei sisällä or- 20 gaanista liuotinta ja jonka pH on välillä 1,5 - 2, ja saatu liuos sekoitetaan toisen liuoksen kanssa, joka ei sisällä orgaanista liuotinta mutta sisältää peroksidia ja puskuriaineita, jotka sekoittamisen jälkeen säätävät pH-arvon välille 2,5 - 3,9. : : 25
5. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen aineen käyttö analyyttisissä menetelmissä, joissa todetaan tai määrite-tään peroksidaasi- tai pseudoperoksidaasi-aktiviteetti. 9 85877
FI864816A 1985-11-28 1986-11-26 Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning. FI85877C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19853541978 DE3541978A1 (de) 1985-11-28 1985-11-28 Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet, verfahren zur herstellung und seine verwendung
DE3541978 1985-11-28

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI864816A0 FI864816A0 (fi) 1986-11-26
FI864816A FI864816A (fi) 1987-05-29
FI85877B true FI85877B (fi) 1992-02-28
FI85877C FI85877C (fi) 1992-06-10

Family

ID=6287013

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI864816A FI85877C (fi) 1985-11-28 1986-11-26 Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning.

Country Status (15)

Country Link
US (1) US5610026A (fi)
EP (1) EP0224210B1 (fi)
JP (1) JPH07108237B2 (fi)
AT (1) ATE56097T1 (fi)
AU (1) AU610488B2 (fi)
CA (1) CA1291402C (fi)
DE (2) DE3541978A1 (fi)
DK (1) DK571086A (fi)
ES (1) ES2018153B3 (fi)
FI (1) FI85877C (fi)
GR (1) GR3001134T3 (fi)
MX (1) MX170487B (fi)
NO (1) NO174262C (fi)
PT (1) PT83826B (fi)
ZA (1) ZA868980B (fi)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3541979A1 (de) * 1985-11-28 1987-06-04 Behringwerke Ag Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet mit stabilisator, verfahren zur herstellung und seine verwendung
DE3641830A1 (de) * 1986-12-08 1988-06-09 Fraunhofer Ges Forschung Immunenzymatischer test mit detektion durch farbumschlag im sichtbaren spektralbereich
JPH0740957B2 (ja) * 1987-07-24 1995-05-10 帝人株式会社 ペルオキシダーゼ活性測定用の色原体水溶液
US5532138A (en) * 1990-04-26 1996-07-02 Behringwerke Ag Method and kits for determining peroxidatively active catalysts
DE4037764A1 (de) 1990-11-28 1992-06-04 Behringwerke Ag Waschloesung fuer festphasen-immunometrische verfahren, die stabilisatoren fuer das markierungssystem enthaelt und ihre verwendung
DE4037776A1 (de) * 1990-11-28 1992-06-04 Behringwerke Ag Waschloesung fuer festphasen-immunometrisches verfahren, die einen komplexbildner fuer metallionen enthaelt und ihre verwendung
GB9027131D0 (en) * 1990-12-14 1991-02-06 Rice Evans Catherine Diagnostic test
US5332662A (en) * 1992-07-31 1994-07-26 Syntex (U.S.A.) Inc. Methods for determining peroxidatively active substances

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2460903C3 (de) * 1974-12-21 1981-12-24 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue 3,3',5,5'-Tetraalkylbenzidine
JPS5263794A (en) * 1975-11-21 1977-05-26 Shionogi Seiyaku Kk Test piece for latent blood
JPS5399319A (en) * 1977-02-09 1978-08-30 Hidematsu Hirai Novel qualitative and quantitative detecting method and detecting body for antgenic substance
US4077772A (en) * 1977-05-31 1978-03-07 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Method for the determination of hemoglobin in trace amounts
US4340394A (en) * 1979-11-13 1982-07-20 Miles Laboratories, Inc. Stabilization of benzidine-type indicators with various enhancers
US4503143A (en) * 1982-08-20 1985-03-05 Btc Diagnostics Limited Partnership Enzyme immunoassay with two-part solution of tetramethylbenzidine as chromogen
US4504579A (en) * 1982-11-08 1985-03-12 Abbott Laboratories Stabilized peroxidase compositions
ZA841078B (en) * 1983-03-01 1984-09-26 Warner Lambert Co Peroxidase activity detection composition
US4789630A (en) * 1985-10-04 1988-12-06 Cetus Corporation Ionic compounds containing the cationic meriquinone of a benzidine
DE3541979A1 (de) * 1985-11-28 1987-06-04 Behringwerke Ag Mittel zur bestimmung von peroxidase-aktivitaet mit stabilisator, verfahren zur herstellung und seine verwendung
US5206150A (en) * 1990-10-26 1993-04-27 University Of Kentucky Research Foundation Composition of, method of producing and method of using a stabilized formulation for assaying peroxidase activity

Also Published As

Publication number Publication date
NO174262B (no) 1993-12-27
EP0224210B1 (de) 1990-08-29
DE3673768D1 (de) 1990-10-04
DE3541978A1 (de) 1987-06-04
GR3001134T3 (en) 1992-06-25
NO864776D0 (no) 1986-11-27
NO174262C (no) 1994-04-06
AU6578086A (en) 1987-06-04
FI85877C (fi) 1992-06-10
EP0224210A1 (de) 1987-06-03
ATE56097T1 (de) 1990-09-15
US5610026A (en) 1997-03-11
DK571086D0 (da) 1986-11-27
DK571086A (da) 1987-05-29
ZA868980B (en) 1987-07-29
FI864816A (fi) 1987-05-29
ES2018153B3 (es) 1991-04-01
MX170487B (es) 1993-08-26
FI864816A0 (fi) 1986-11-26
AU610488B2 (en) 1991-05-23
JPS62134100A (ja) 1987-06-17
PT83826A (de) 1986-12-01
JPH07108237B2 (ja) 1995-11-22
PT83826B (pt) 1989-06-30
CA1291402C (en) 1991-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Rodrigues et al. Interactions of imidazole antifungal agents with purified cytochrome P-450 proteins
Snyder et al. Purification and some characteristics of nitrous oxide reductase from Paracoccus denitrificans.
US5094943A (en) Process and reagent for the improved quantitative colorimetic determination of hydrogen peroxide
AU611629B2 (en) An agent for the determination of peroxidase activity, with stabilizer, a process for its preparation and its use
US4615982A (en) Fecal occult blood test
US4521511A (en) Catalyzed colorimetric and fluorometric substrates for peroxidase enzyme determinations
Tynes et al. Tissue-and species-dependent expression of multiple forms of mammalian microsomal flavin-containing monooxygenase.
CA1185883A (en) Method for the quantitative determination of bilirubin in biological fluids
US5043266A (en) Ortho- and para-imidazolyl and benzimidazolyl substituted phenol as enhancers for diagnostic chemiluminescent assays
FI85877B (fi) Medel foer bestaemning av peroxidasaktivitet, foerfarande foer dess framstaellning och dess anvaendning.
EP0214262B1 (en) Improvements relating to assay reagents
EP0391976A1 (en) Fecal occult blood test reagents and methods
WO1986004610A1 (en) Stabilized enzyme substrate solutions
KINOSHITA et al. A fluorophotometric determination of serum creatinine and creatine using a creatinineamidohydrolase-creatineamidinohydrolase-sarcosine oxidase-peroxidase system and diacetyldichlorofluorescin
JPH0670798A (ja) 尿酸測定用試薬組成物
US6852503B1 (en) Compositions and methods for utilizing mixed substrate solutions of luminols and dioxetanes
EP0594709B1 (en) Chromogenic substrates for improving detection in a peroxidase-based assay
Reed et al. Peroxidative oxidation of bilirubin during prostaglandin biosynthesis
CA2068496A1 (en) Stabilization of the enzyme urate oxidase in liquid form
Hozumi Reaction of the carcinogen 4-hydroxyaminoquinoline 1-oxide with sulfhydryl groups of proteins
JPS6233880B2 (fi)
de Jonge et al. Inhibition of Mitochondrial‐Protein Synthesis in Rat Small‐Intestinal Epithelium
US4800169A (en) Test aids and method for the preparation thereof
Clark Jr et al. The effect of alternate substrates and substrate concentration on the antibody-mediated inhibition of horseradish peroxidase
EP0279614A2 (en) Stable peroxide substrate formulation

Legal Events

Date Code Title Description
PC Transfer of assignment of patent

Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH

MM Patent lapsed

Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH