FI83784C - Radioaktiva steroider och deras mellanprodukter, foerfarande foer framstaellning av dessa och deras laemplighet foer paovisande av glukokortikoidreceptorer och bestaemmande av antalet bindningsstaellen. - Google Patents
Radioaktiva steroider och deras mellanprodukter, foerfarande foer framstaellning av dessa och deras laemplighet foer paovisande av glukokortikoidreceptorer och bestaemmande av antalet bindningsstaellen. Download PDFInfo
- Publication number
- FI83784C FI83784C FI842397A FI842397A FI83784C FI 83784 C FI83784 C FI 83784C FI 842397 A FI842397 A FI 842397A FI 842397 A FI842397 A FI 842397A FI 83784 C FI83784 C FI 83784C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- compound
- general formula
- methyl
- agent
- androsta
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0003—Androstane derivatives
- C07J1/0033—Androstane derivatives substituted in position 17 alfa and 17 beta
- C07J1/004—Androstane derivatives substituted in position 17 alfa and 17 beta the substituent in position 17 alfa being an unsaturated hydrocarbon group
- C07J1/0048—Alkynyl derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0003—Androstane derivatives
- C07J1/0011—Androstane derivatives substituted in position 17 by a keto group
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/743—Steroid hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
1 83784
Radioaktiivisia steroideja, niiden välituotteita, menetelmä niiden valmistamiseksi sekä niiden soveltaminen glukokortikoidireseptorien osoittamiseen ja sitoutumiskohtien lukumäärän määrittämiseen.
5 Tämä keksintö koskee uusia radioaktiivisia steroideja menetelmää niiden valmistamiseksi, niiden välituotteita sekä niiden soveltamista glukokortikoidireseptorien osoittamiseen ja sitoutumiskohtien lukumäärän mää-10 rittämiseen.
Erityisesti sen kohteena ovat tritiumilla leimatut radioaktiiviset steroidit, joiden yleinen kaava on (I): rVs_/Ri 15 X Π 'C^C-CH,
fXT
<Ä3 1 20 Dossa H esittää tritiumia, R ja R^ ovat erilaisia tai samanlaisia ja esittävät vetyä, 1-6 hiiliatomia käsittävää alkyylirvhmää tai 1-10 hiiliatomia käsittävää asyyliryhmää.
R:n ja R^:n esittämistä ryhmistä voidaan mainita: 25 (a) metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, sek-butyyli-, tert-butyyli, pentyyli-, isopentyyli-, sek-pentyyli-, tert-pentyyli-, neopentyyli-, heksyyli-, isoheksyyli-, sek-heksyyli-, tert-heksyyliryhmät; (b) formyyli-, asetyyli-, propionyyli-, butyryyli-, iso-30 butyryyli-, valeryyli-, kapryyli-, bentsoyyli-, kaprylyy-li-, metoksikarbonyyli- tai etoksikarbonyyliryhmät; : ·. Yleisen kaavan (I) mukaisista yhdisteistä mainitaan etenkin : 11/3,17 /.1-dihydroksi-6-metyyli-^H^-l7 (1-propy-nyyli) androsta-1,4,6-trien-3-oni.
2 83784
Keksinnön kohteena on myös menetelmä yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on yleinen kaava (I).
Tälle menetelmälle on tunnusomaista, että yleisen kaavan (II) mukainen yhdiste: vt/ 10 jossa R merkitsee samaa kuin edellä ja R2 esittää 1-6 hiiliatomia käsittävää alkoksiryhmää, 2-12 hiiliatomia käsittävää asyylioksiryhmää tai R2 esittää syklistä 15 sekundäärisen amiinin tähdettä, tämä yhdiste saatetaan reagoimaan metyloivan, halogeeniä sisältävän aineen kanssa, jolloin saadaan yleisen kaavan (III) mukainen yhdiste: 20 κογχΐ_γ·° r: (III) :- · cx2 ·;*: 25 jossa X esittää halogeeniä; yhdiste pelkistetään antamalla tritiumin reagoida katalysaattorin läsnäollessa; syntyneen yleisen kaavan (IV) mukaisen yhdisteen 3-ase-massa oleva ketoniryhmä estetään happamassa ympäristös-30 sä: 35 C1H3 , * li 3 83784 O-alkyloivan aineen avulla, jonka kaava on H-CiOR^)^, jossa R^ esittää 1-6 hiiliatomia käsittävää alkyyliryh-mää, jolloin saadaan yleisen kaavan (V) mukainen yhdiste: CD H, 10 jossa R ja R^ merkitsevät samaa kuin edellä; jälkimmäinen saatetaan reagoimaan propynyloivan aineen kanssa; dehydro-genoiva aine saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (VI) mukaisen yhdisteen kanssa: RVs—/” c=c"ch3 (VI) 20 R3° C\ jolloin saadaan yleisen kaavan (I) mukainen yhdiste, : jossa R^ esittää vetyatomia, joka haluttaessa, jos R ei . ole vetyatomi, eetteröidään tai esteröidään 17o(-asemassa ·: 25 olevasta hydroksyyliryhmästään; ja jos R esittää vetyato- mia, eetteröidään tai esteröidään selektiivisesti jompikumpi hydroksyyliryhmä 11,-3- tai Πfi -asemasta tai eetteröidään tai esteröidään molemmat hydroksyyliryhmät 11/3-ja 17 /^-asemissa.
30 Yllä mainituissa yleisen kaavan (II) mukaisissa symboleissa R2, joka merkitsee syklistä sekundääristä amiinitähdettä, tarkoittaa esimerkiksi pyrrolidino-, morfolino- tai piperidinoryhmää.
Keksinnön parhaissa toteuttamistavoissa menetel-.V 35 mälle ovat luonteenomaisia seuraavat kohdat: 4 83784 - halogeeniä sisältävä metyloiva aine on hiilitetra-bromidi ja reaktio suoritetaan inertissä atmosfäärissä dioksaanissa pyridiinin läsnäollessa huoneen lämpötilassa ja sitten reaktioseoksen kiehumislämpötilassa pysty- 5 jäähdyttejän alla; - katalysaattori, jonka läsnäollessa tritiumin annetaan reagoida, on palladiumhydroksidi ja reaktio suoritetaan dioksaanissa trietyyliamiinin läsnäollessa; - O-alkyloiva aine, joka kohdistuu yleisen kaavan (IV) 10 mukaisen yhdisteen ketoniryhmään 3-asemassa, on etyylior-toformaatti ja reaktio suoritetaan inertissä atmosfäärissä happamassa ympäristössä; - propynyloiva aine, joka saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa, on magnesiumpro- 15 pyn-l-yylibromidi ja reaktio suoritetaan inertissä atmosfäärissä tetrahydrofuraanissa; - dehydrogenoiva aine, joka saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (VI) mukaisen yhdisteen kanssa, on dikloorisyano-kinoni ja reaktio suoritetaan inertissä atmosfäärissä aro- 20 maattisessa tai klooratussa liuottimessa kuten bentsee-nissä tai metyleenikloridissä.
Yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden eette-röinti ja/tai esteröinti voidaan suorittaa tavanomaisilla -·· menetelmillä.
25 Eetteröinti voidaan suorittaa esimerkiksi eetteröi- vällä aineella kuten alkyyli- tai aryylihalogenidilla tai dialkyylisulfaatilla.
Esteröinti voidaan suorittaa esimerkiksi esteröi-vällä aineella kuten hapon funktionaalisella johdannai-30 sella kuten happokloridilla tai anhydridillä.
Keksinnön menetelmän toteuttamistavoille on kuvaavaa, että kun halogeeniä sisältävä metyloiva aine on reagoinut kaavan (II) mukaisen yhdisteen kanssa, tapahtuu kondensointi mainitun aineen ja steroidin välillä huo-35 neen lämpötilassa ja sen jälkeen lämmön vaikutuksesta li 5 83784 in situ muodostuneen molekyylin dehalohydraatio.
Keksinnön kohteena on myös yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden soveltaminen ja etenkin 11$ ,17/3 -dihydroksi-6-metyyli-^H2~17o( -(1-propynyyli)-androsta-5 1,4,6-trien-3-onin glukokortikoidireseptorien olemassa olon todistamiseen ja glukokortikoidireseptorien sitou-tumispaikkojen lukumäärän määrittämiseen ihmis- ja eläin-kudoksissa .
Keksinnön kohteena ovat myös keinot, joilla todis- 10 tetaan glukokortikoidireseptorien olemassaolo ja sitoutumiskohtien lukumäärä glukokortikoideille, jotka sisältävät yleisen kaavan (I) mukaista yhdistettä ja etenkin 11 /3, 17$ -dihydroksi-6-metyyli- ^-17 0( - (1-propynyyli) -androsta-1,4,6-trien-3-onia.
15 Keksinnön kohteena ovat myös uusina teollisina yh disteinä ja etenkin keksinnön mukaisen menetelmän toteuttamisessa tarvittavina välituotteina seuraavat yhdisteet: - 11/? -hydroksi-6-dibromimetyleeniandrost-4-en-3,17-dioni, f·. - 11$ -hydroksi-6-metyyli- H-.-androst-4-en-3,17-dioni, ."· 20 ~ 3-etoksi-ll$-hydroksi-6-metyyli- H.j-androsta-3,5-dien- 17-oni, - 3-etoksi-ll/9,17$-dihydroksi-6-metyyli-^H.j-17n/-(1-propynyyli)-androsta-3,5-dieeni.
·;·; Yleisen kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä ja eten- "·'· 25 kin 11$ , 17/?-dihydroksi-6-metyyli-^H.j-17 (1-propynyy- li)-androsta-1,4,6-trien-3-oneilla on mahdollista, kuten edellä jo on mainittu, todistaa glukokortikoidireseptorien olemassaolo ja määrittää glukokortikoidien sitoutu- -- miskohtien lukumäärä.
30 On jo tunnettua, että ei-radioaktiivinen 11/3,17/3- dihydroksi-e-metyyli-l?^ -(1-propynyyli)-androsta-1,4,6-trien-3-oni sitoutuu selektiivisesti glukokortikoidi-reseptoreihin (G. Teutsch, R. Deraedt et ai. Steroids, ;Y Voi. 38, N 6, s. 651-665, 1981).
35 Sitä vastoin muut tämäntyyppisissä kokeissa käy tettävät luonnolliset tai synteettiset kortikoidit si- 6 83784 toutuvat muihin steroidireseptoreihin ja etenkin mine-ralokortikoidireseptoreihin.
Sitä paitsi kun tehdään sellaisia kokeita, joissa käytetään ei-radioaktiivistä 11/3,17/¾ -dihydroksi-6-5 metyyli-17o( -(1-propynyyli)androsta-1,4,6-trien-3-onia ja erityisesti kun tutkittavien elinten kudoksissa on samanaikaisesti glukokortikoidireseptoreita ja mineralo-kortikoidireseptoreita, on usein pakko käyttää pitkiä, monimutkaisia menetelmiä.
10 Näin ollen kuten juuri on todettu, yleisen kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä ja etenkin radioaktiivisella 11/¾ , ll^-dihydroksi-6-metyyli-3H3-17 cA- (1-propynyyli) -androsta-1,5,6-trien-3-onilla, jotka ovat keksinnön kohteena, on sama selektiivinen reaktiivisuus glukokorti-15 koidireseptorien suhteen kuin ei-radioaktiivisilla analogisilla yhdisteillä.
Yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden radioaktiivisuuden avulla on paljon helpompi todistaa gluko-• '* kortikoidireseptorien olemassaolo elinten kudoksissa, : : 20 kun mineralokortikoidireseptoreita on myös läsnä, sovel- :** tamalla tavanomaisia sitoutumismittausmenetelmiä, joissa käytetään radioaktiivisia yhdisteitä.
Lisäksi esimerkiksi glukokortikoidireseptorien .· · sitoutumiskohtien lukumäärän määrittäminen, joka ei olisi 25 mahdollista ilman radioaktiivista yhdistettä, tulee mahdolliseksi käyttämällä kaavan (I) mukaisia yhdisteitä.
Voidaan myös ottaa huomioon, että kun käytetään in vivo yleisen kaavan (I) mukaisia yhdisteitä ja etenkin Λ 11 //, 17 /3-dihydroksi- JH3-17<=£-(1-propynyyli) androsta-30 1,4,6-trien-3-onia, niiden radioaktiivisuuden perusteella voidaan helposti määrittää tarkkaan syrjäytyminen gluko- >· kortikoidien sitoutumiskohdista.
'I'. Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan siis käyt- tää erityisen mielenkiintoisella tavalla glukokortikoidi-*·/* 35 reseptorien olemassaolon todistamiseen ja sitoutumiskoh- 7 83784 tien lukumäärään määrittämiseen esimerkiksi elinten kudoksissa, joissa on glukokortikoidi- ja mineralo-kortikoidireseptoreita, kuten hippocampuksessa ja muissa aivojen rakenteissa, munuaisissa, paksussasuolessa, 5 aivolisäkkeessä ja muissa perifeerisissä kudoksissa.
Yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet eivät meta-boloidu kokeissa käytetyissä olosuhteissa in vitro eivätkä tietyissä kudoksissa sellaisissa inkubaatio-olo-suhteissa, joissa esimerkiksi kortikosteroni tai korti-10 soli metaboloituvat tietyissä kudoksissa.
Käytetyt tekniikat steroidireseptorien olemassaolon todistamiseksi ja sitoutumiskohtien lukumäärän määrittämiseksi ovat yleisesti alalla käytettyjä: - Raynaud J.P., Philibert D. et ai., J. of Steroid Bio-15 chem., 6 (1975), 615-622; - Moguilevski et ai., J. of Steroid Biochem, 12, (1980), s. 309-314.
11 β , 17/’i-dihydroksi-6-metyyli-'^H2-17o^- (1-propy-nyyli)-androsta-1,4,6-trien-3-onilla (yhdiste A) suorite-2Q tut kokeet ovat osoittaneet, että ne täyttävät kaikki tarvittavat vaatimukset glukokortikoidireseptorien olemassaolon todistamiseksi ja sitoutumiskohtien määrittämiseksi. Näin on siis todistettu, että (a) yhdiste A:han ei sitoudu spesifisesti mitään ihmisen 25 eikä eläimen plasman proteiineja, jotka yleensä kohtami- noivat kaikki kudosreseptorivalmisteet; O * v Q — 2.
(b) 0 C:ssa yhdiste A:n assosiaatiovakio (K = 10 M ) rotan kateenkorvan sytosolin kortikosteroidireseptoreihin, joka on määritetty hiili-dekstraanin tapahtuvan adsorption ·.’ 3Q avulla, on noin kaksi kertaa suurempi kuin deksametaso-nilla; (c) yhdiste A: 11a on kohonnut assosiaationopeus (K .= "... e —1 —1 + ·*· 10 M min ) ja alhainen dissosioitumisnopeus kateen- korvan glukokortikoidireseptorien suhteen (t^y2= ^H) ‘ 35 ja hippocampuksen glukokortikoidiresentorien suhteen i 8 83784 (tjy2=24h)· Näissä kahdessa kudoksessa se dissosioi- tuu käyrän mukaisesti, jossa on yksi laskeva suora, 3 3 kun taas H-deksametasoni ja H-kortikosteroni hippo-campuksen sytosolissa dissosioituvat käyrän mukaisesti, 5 jossa on kaksi laskevaa suoraa, mikä on tunnusomaista sitoutumiselle ainakin kahteen kohtaan glukokortikoidi-ja mineralokortikoidien sitoutumispaikoissa; (d) 0°C:ssa ja 15°C:ssa yhdiste A muodostaa kateenkorvan glukokortikoidireseptorien kanssa komplekseja, jotka 10 ovat stabiileita ainakin 24 tuntia.
Näissä olosuhteissa mainitusta yhdiste A:sta ei irtoa tritiumia; se ei metaboloidu eikä sillä ole kuin heikkoa epäspesifistä sitoutumista; (e) kun yhdistettä inkugoidaan 15°C:ssa 24 tuntia, se 15 korvaa täysin ei-radioaktiivisen kortikosteronin ja kortisolin, jotka ovat sitoutuneet glukokortikoidiresepto-reihin. Tästä syystä on mahdollista määrittää glukokorti-koidreseptorien kokonaismäärä eri fysiologisissa olo-• ' suhteissa.
20 Seuraava esimerkki valaisee keksintöä.
: Esimerkki 11 ,3,17/? -dihydroksi-6-metyyli — 17- (1-propy- : nyyli) androsta-1,4,6-trien-3-oni
:V Vaihe A
25 11/3 -hydroksi-6-dibromimetyleeniandrost-4-en-3,17- dioni
Valmistetaan reaktioseos, jossa on 3,7 g 3-etoksi-11 λ·ϊ-hydroksiandrosta-3,5-dien-17-onia , 20 ml dioksaania, 1 ml pyridiiniä ja 4 g hiilitetrabromidia, sekoitetaan '·' _ 30 inertissä atmosfäärissä noin 24 tuntia, sakka erotetaan, pestään useassa erässä dioksaanissa, orgaaniset suodok-set yhdistetään ja kuumennetaan pystyjäähdyttäjän alla noin 4 tuntia. Kun liuos on jäähtynyt, lisätään 50 ml · 2N kloorivetyhappoa, sekoitetaan noin kymmenen minuuttia, ‘ 35 uutetaan etyyliasetaatilla, orgaaniset faasit pestään pe-
II
9 83784 räkkäin vedellä ja natriumkloridilla kyllästetyllä vedellä, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin ja halutun yhdisteen annetaan kiteytyä -20°C:ssa. Yhdiste puhdistetaan kiteyttämällä 5 uudestaan etyyliasetaatista, jolloin saadaan 0,6 g haluttua yhdistettä, joka sulaa 256°C:ssa.
UV-spektri (EtOH); maksimi-252 nm; käännepiste -284 nm.
Puhtaus voidaan tarkistaa silikageeliohutkerros-kromatografiällä eluoimalla sykloheksaani/etyyliasetaat-10 tiseoksella (1.1), Rf=0,2.
Yleisen kaavan (II) mukaisista lähtöaineista 11/^ -hydroksi-3-etoksiandrosta-3,5-dien-17-onia on kuvattu JP-patentissa 9577/71.
Muita tätä kaavaa vastaavia yhdisteitä voidaan 15 valmistaa sinänsä tunnetuilla tavoilla.
Vaihe B
11/^ -hydroksi-6-metyyli-^H2-androst-4-en-3,17- dioni Jäähdytetään nestetypessä reaktioseosta, jossa on 20 80 mg edellisessä vaiheessa valmistettua dibromattua yh distettä, 2 ml dioksaania, 20 mg 2 %:sti palladioidulla hiilellä päällystettyä talkkia ja 120^ul trietyyliamiinia.
Pannaan vakuumiin 15,5 ml tritiumia, jonka spesifinen aktiivisuus on 58 Ci/mmol. Reaktioseoksen annetaan 25 lämmetä huoneen lämpötilaan, lämmitetään sitten noin 40°C:een ja sekoitetaan tritiumissa, kunnes adsorptio on täydellinen. Ylimäärä tritiumia otetaan talteen, suoda-. .. tetaan, lisätään 1 ml 2N HCl:a, annetaan seistä huoneen lämpötilassa noin tunnin ajan, uutetaan etyyliasetaatilla, . 30 pestään vedellä, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin, jol- loin saadaan 60 mg raakatuotetta, joka käytetään sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
UV-spektri (EtOH); max 240 nm.
Yhdisteen puhtaus voidaan tarkistaa silikageeli-35 ohutkerroskromatografiällä käyttämällä eluanttina syklo- i 1» 83784 heksaani/etyyliasetaatti-seosta (1-1), Rf=0,17.
Vaihe C
S-etoksi-ll/^-hydroksi-ö-metyyli-^H^-androsta- 3,5-dien-17-oni 5 Inertissä atmosfäärissä lisätään sekoittamalla edellisessä kohdassa saatuun tritioituun yhdisteeseen 120^-ul etyyliortoformaattia ja 20^ul 1 % etyyliortofor-maattia asetyylikloridissa, lisätään sitten 400^ul etanolia. Sekoitusta jatketaan huoneen lämpötilassa noin 10 10 minuutin ajan, sitten lisätään 100 ^,ul trietyyliamii- nia, sitten reaktioseos konsentroidaan kuiviin alennetussa paineessa, jolloin saadaan 58 mg haluttua raaka-tuotetta, joka käytetään sellaisenaan seuraavaan vaiheeseen.
15 Yhdisteen puhtaus voidaan tarkistaa silikageeli- ohutkerroskromatografiällä käyttämällä eluanttina syklo-heksaani/etyyliasetaatin seosta (1-1), Rf=0,5.
Vaihe D
3-etoksi-ll·/3,17/3-dihydroksi-6-metyy1i-^H^-17^~ 20 (1-propynyyli) androsta-3,5-dieeni : ‘ Edellisessä vaiheessa saatu yhdiste lisätään se- koittaen inertissä atmosfäärissä 100^,ul:aan tetrahydro-·: furaania, lisätään 2 ml IM magnesium-l-propynyylibromidi- liuosta tetrahydrofuraanissa, reaktioseosta sekoitetaan 25 huoneen lämpötilassa noin puoli tuntia, sitten lisätään 5 ml 10 % ammoniumkloridin vesiliuosta, uutetaan etyyliasetaatilla, uutos pestään vedellä, kuivataan ja konsentroidaan kuiviin. Näin saadaan 60 mg yhdistettä, jonka aktiivisuus on 7 Ci. Yhdistettä käytetään sellaisenaan 30 seuraavaan vaiheeseen.
Yhdisteen puhtaus voidaan tarkistaa silikageeli-,··· ohutkerroskromatografiällä käyttämällä eluanttina syklo- heksaani/etyyliasetaatin seosta (1.1), Rf=0,4.
:.:. Vaihe E
35 llv3 ,17 ,','-dihydroksi-6-metyyli-^H2-17 (1-propy nyyli) androsta-1,4,6-trien-3-oni
II
11 83784
Lisätään edellisessä kohdassa saatuun yhdisteeseen, joka on liuotettu 0,5 mlraan bentseeniä, 15 minuutin aikana sekoittaen inertissä atmosfäärissä liuos, jossa on 90 mg diklooridisyanokinonia. Sekoitusta jatketaan noin 5 puoli tuntia, lisätään sitten 0,5 ml asetonia, lOO^ul natriumbisulfiittia (vesiliuos, jonka d=l,32) ja 1 ml 10 % natriumbikarbonaattiliuosta. Uutetaan sitten etyyliasetaatilla, uutos pestään 10 % natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja korkeapainenestekromatografiän jälkeen 10 silikageelipylväässä käyttämällä eluanttina 5 % klorofor-mi/metanolin seosta vedessä (99/1), saadaan 50,3 mg haluttua yhdistettä, jonka spesifinen aktiivisuus on 37 Ci/-mmol.
Silikageeliohutkerroskromatografiällä käyttämällä 15 eluanttina sykloheksaani/etyyliasetaatin seosta (1-1) saadaan yhdiste, jonka Rf=0,15.
Claims (15)
1. Radioaktiiviset steroidit, joiden yleinen kaava on (I) 5 /0R1 RO X 0liiC=C-CU3 10 3 c h3 jossa 3H on tritium, R ja Rx, jotka voivat olla samoja 15 tai erilaisia, tarkoittavat vetyä, 1-6 hiiliatomia sisältävää alkyyliryhmää tai 1-10 hiiliatomia sisältävää asyy-liryhmää.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen steroidi, tunnettu siitä, että se on 11β,17B-dihydroksi-6- 20 metyyli-3H3-17a-(1-propynyyli)androsta-l,4,6-trien-3- oni.
3. Menetelmä patenttivaatimusten 1 ja 2 mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että yhdiste, jonka yleinen kaava on (II) 25 RO T~f° di) ·Λ -· jossa R tarkoittaa samaa kuin patenttivaatimuksessa 1 ja 35 R2 on 1-6 hiiliatomia sisältävä alkoksiryhmä, 2-12 hiili- i3 83784 atomia sisältävä asyylioksiryhmä, syklinen sekundäärinen amiinitähde, saatetaan reagoimaan halogeenia sisältävän metylointiaineen kanssa yleisen kaavan (lii) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R on vetyatomi, 5 RC) . .0 ^ (III) 10 CX2 jossa X on halogeeni, että näin saatu yhdiste pelkiste-15 tään tritiumilla katalysaattorin läsnäollessa yhdisteen saamiseksi, jonka yleinen kaava on (IV) RO n ^ - c3h., 25 että yhdisteen 3-asemassa oleva ketoniryhmä suojataan O-alkyloivan aineen avulla, jonka kaava on H-C(OR3)3, jossa R3 on 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä yhdisteen saamiseksi, jonka yleinen kaava on (V) 30 RO . .0 Y^-f (V) R3° T Λ3 35 i4 83784 joissa kaavoissa R ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, ja että yhdiste (V) saatetaan reagoimaan propynylointiai-neen kanssa yhdisteen saamiseksi, jonka kaava on (VI)
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että halogeeniä sisältävä mety-lointiaine on hiilitetrabromidi ja reaktio suoritetaan inertissä atmosfäärissä dioksaanissa pyridiinin läsnäollessa huoneen lämpötilassa ja sitten reaktioseoksen ref- 25 luksointilämpötilassa.
5. Patenttivaatimuksen 3 tai 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että katalysaattori, jonka läsnäollessa tritium saatetaan reagoimaan, on palladiumhydrok-sidi ja että reaktio suoritetaan dioksaanissa trietyyli- 30 amiinin läsnäollessa.
5 RO OH /,C=C-CH3 Ju. JL\ J <vd 10 3 C H3 ja joka saatetaan reagoimaan dehydrogenointiaineen kanssa kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Rx on ve- 15 tyatomi, ja että jos R ei ole vety, 178-asemassa oleva hydroksyyliryhmä haluttaessa eetteröidään tai esteröi-dään, ja että jos R on vetyatomi, jompikumpi tai molemmat 118-, 178-asemassa olevista hydroksyyliryhmistä haluttaessa eetteröidään tai esteröidään.
6. Jonkin patenttivaatimuksen 3-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että yleisen kaavan (IV) mukaisen yhdisteen 3-asemassa olevan ketoniryhmän 0-alky-lointiaine on etyyliortoformiaatti ja että reaktio suori- 35 tetaan inertissä atmosfäärissä happamessa väliaineessa. il is 83784
7. Jonkin patenttivaatimuksen 3-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että propynylointiaine, joka saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa, on magnesium-l-propynyylibromidi ja että 5 reaktio suoritetaan inertissä atmosfäärissä tetrahydrofu-raanissa.
8. Jonkin patenttivaatimuksen 3-7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että dehydrogenointiaine, joka saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (VI) mukaisen 10 yhdisteen kanssa, on diklooridisyanokinoni ja että reaktio suoritetaan inertissä atmosfäärissä aromaattisessa tai klooratussa liuottimessa kuten bentseenissä tai mety-leenikloridissä.
9. Patenttivaatimuksessa 1 määriteltyjen yleisen 15 kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ja etenkin 118,178-di- hydroksi-6-metyyli-3H3-17a-(1-propynyyli)androsta-l,4,6-trien-3-onin soveltaminen glukokortikoidireseptorien osoittamiseen ja glukokortikoidien sitoutumiskohtien lukumäärän määrittämiseen.
10. Tapa osoittaa glukokortikoidireseptorien ole massaolo ja glukokortikoidien sitoutumiskohtien lukumäärä, tunnettu siitä, että käytetään yleisen kaavan (I) mukaista yhdistettä ja etenkin 118,173-dihydroksi-6-metyyli-3H3-17a-(1-propynyyli)androsta-l,4,6-trien-3-25 onia.
11. Kaavan (I) mukaisten steroidien valmistuksessa käyttökelpoiset välituotteet: - 113-hydroksi-6-dibromimetyleeniandrost-4-en-3,17-dioni, - llS-hydroksi-6-metyyli-3H3-androst-4-en-3,17-dioni, 30 - 3-etoksi-113-hydroksi-6-metyyli-3H3-androsta-3,5-dien- 17-oni, - 3-etoksi-llB, 178-dihydroksi-6-metyyli-3H3-17a-( 1-propynyyli)-androsta-3, 5-dieeni. i6 83 784
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR8309811A FR2547587B1 (fr) | 1983-06-14 | 1983-06-14 | Steroides radioactifs, leur procede de preparation, leur application a la mise en evidence des recepteurs de glucocorticoides et au dosage du nombre de sites de fixation |
FR8309811 | 1983-06-14 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI842397A0 FI842397A0 (fi) | 1984-06-13 |
FI842397A FI842397A (fi) | 1984-12-15 |
FI83784B FI83784B (fi) | 1991-05-15 |
FI83784C true FI83784C (fi) | 1991-08-26 |
Family
ID=9289758
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI842397A FI83784C (fi) | 1983-06-14 | 1984-06-13 | Radioaktiva steroider och deras mellanprodukter, foerfarande foer framstaellning av dessa och deras laemplighet foer paovisande av glukokortikoidreceptorer och bestaemmande av antalet bindningsstaellen. |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US4664850A (fi) |
EP (1) | EP0128839B1 (fi) |
JP (1) | JPS6034987A (fi) |
AT (1) | ATE43132T1 (fi) |
CA (2) | CA1222743A (fi) |
DE (1) | DE3478225D1 (fi) |
FI (1) | FI83784C (fi) |
FR (1) | FR2547587B1 (fi) |
NO (1) | NO162193C (fi) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2592047B1 (fr) * | 1985-12-19 | 1988-03-04 | Roussel Uclaf | Complexes organometalliques de produits steroides ayant une affinite pour les recepteurs progestogene et gluco-corticoide et leur application au dosage des recepteurs hormonaux |
EP1079859B1 (en) | 1998-05-22 | 2010-07-14 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Bifunctional molecules and therapies based thereon |
AU2006239221C1 (en) | 2005-04-28 | 2012-08-16 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Pharma-informatics system |
WO2007035716A2 (en) | 2005-09-16 | 2007-03-29 | Raptor Pharmaceutical Inc. | Compositions comprising receptor-associated protein (rap) variants specific for cr-containing proteins and uses thereof |
ES2728225T3 (es) | 2009-02-20 | 2019-10-23 | 2 Bbb Medicines B V | Sistema de administración de fármacos a base de glutatión |
KR101741629B1 (ko) | 2009-05-06 | 2017-05-31 | 라보라토리 스킨 케어, 인크. | 활성제-칼슘 포스페이트 입자 복합체를 포함하는 피부 전달 조성물 및 이들을 이용하는 방법 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR1465484A (fr) * | 1965-10-27 | 1967-01-13 | Composés stéroïdes du type cétonique | |
JPS511712A (ja) * | 1974-06-27 | 1976-01-08 | Mitsubishi Rayon Co | Kosokushitsushikiboshihoho |
FR2398077A1 (fr) * | 1977-07-19 | 1979-02-16 | Roussel Uclaf | Steroides marques au tritium, leur procede de preparation et leur application pour le dosage et la localisation des recepteurs tissulaires hormonaux des steroides |
FR2398076A1 (fr) * | 1977-07-19 | 1979-02-16 | Roussel Uclaf | Steroides marques au tritium, leur procede de preparation et leur application pour le dosage et la localisation des recepteurs tissulaires hormonaux des steroides |
FR2430952A1 (fr) * | 1978-07-13 | 1980-02-08 | Roussel Uclaf | Nouveaux derives acetyleniques de l'androst 4-ene, leur procede de preparation et leur application comme medicament |
-
1983
- 1983-06-14 FR FR8309811A patent/FR2547587B1/fr not_active Expired
-
1984
- 1984-05-04 NO NO841797A patent/NO162193C/no unknown
- 1984-06-13 CA CA000456494A patent/CA1222743A/fr not_active Expired
- 1984-06-13 EP EP84401202A patent/EP0128839B1/fr not_active Expired
- 1984-06-13 FI FI842397A patent/FI83784C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-06-13 AT AT84401202T patent/ATE43132T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-06-13 DE DE8484401202T patent/DE3478225D1/de not_active Expired
- 1984-06-14 JP JP59120899A patent/JPS6034987A/ja active Granted
- 1984-06-14 US US06/620,457 patent/US4664850A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-12-19 US US06/797,140 patent/US4865767A/en not_active Expired - Fee Related
-
1987
- 1987-02-17 CA CA000529937A patent/CA1242696A/fr not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0128839B1 (fr) | 1989-05-17 |
EP0128839A3 (en) | 1985-09-18 |
CA1222743A (fr) | 1987-06-09 |
FR2547587B1 (fr) | 1985-10-25 |
FI842397A0 (fi) | 1984-06-13 |
US4865767A (en) | 1989-09-12 |
US4664850A (en) | 1987-05-12 |
FR2547587A1 (fr) | 1984-12-21 |
CA1242696A (fr) | 1988-10-04 |
JPS6034987A (ja) | 1985-02-22 |
NO841797L (no) | 1984-12-17 |
FI83784B (fi) | 1991-05-15 |
ATE43132T1 (de) | 1989-06-15 |
NO162193B (no) | 1989-08-14 |
JPH0460479B2 (fi) | 1992-09-28 |
FI842397A (fi) | 1984-12-15 |
DE3478225D1 (en) | 1989-06-22 |
NO162193C (no) | 1989-11-22 |
EP0128839A2 (fr) | 1984-12-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU1715205A3 (ru) | Способ получени стероидов, замещенных спирановым циклом | |
HU211080B (en) | Process for producing 9(11)-dehydro steroid derivatives | |
FR2528434A1 (fr) | Nouveaux 19-nor steroides substitues en 11b et eventuellement en 2, leur procede de preparation et leur application comme medicament | |
FI95711C (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 4-substituoitujen 17 -(syklopropyylioksi)androst-5-eenijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat hyödyllisiä C17-20-lyaasi-inhibiittoreina | |
FI83784C (fi) | Radioaktiva steroider och deras mellanprodukter, foerfarande foer framstaellning av dessa och deras laemplighet foer paovisande av glukokortikoidreceptorer och bestaemmande av antalet bindningsstaellen. | |
HRP20100102T1 (hr) | 17alfa-CIJANOMETIL-17beta-HIDROKSI-ESTRA-4,9-DIEN-3-ON VISOKE ČISTOĆE I POSTUPAK NJEGOVE SINTEZE | |
Marwah et al. | Microwave induced selective enolization of steroidal ketones and efficient acetylation of sterols in semisolid state | |
Gower et al. | Studies on the biosynthesis of 16-dehydro steroids: The metabolism of [4-14C] pregnenolone by boar adrenal and testis tissue in vitro | |
Shimizu | Formation of 5-[17beta-2H] androstene-3beta, 17alpha-diol from 3beta-hydroxy-5-[17, 21, 21, 21-2H] pregnen-20-one by the microsomal fraction of boar testis. | |
Toshio et al. | Preparation of specific antiserum to estrone sulfate | |
Bovicelli et al. | Regio-and stereoselective epoxidation of steroidal 1, 4-diene 3-ones by dimethyldioxirane: a new access to a-norsteroids and to a class of estrogen synthetase inhibitors | |
Miyairi et al. | 3-Methylene-substituted androgens as novel aromatization inhibitors. Evidence of a requirement for C-3 oxygen in C-19 hydroxylations. | |
GB1565680A (en) | Method for the preparation of carboxylic acid esters | |
FI83785C (fi) | Med tritium staemplade radioaktivt estradienderivat och foerfarande foer framstaellning av detta och dess mellanprodukter samt dess tillaempning foer radioimmunolog bestaemning av steroider och undersoekning av biologiska vaetskor. | |
US8673968B2 (en) | Progesterone antagonists | |
Dygos et al. | Steroidal ethers. Analogs of 7-ketocholesterol | |
Hirschmann et al. | A SYNTHESIS OF 16α-HYDROXY-20-KETOSTEROIDS AND THEIR CORRELATION WITH OTHER RING D SUBSTITUTED STEROIDS. THE CONFIGURATION OF THE SAPOGENIN SIDE CHAIN1, 2 | |
HOSODA et al. | Synthesis of corticosteroid haptens possessing the bridge at the C-4 position | |
Nakashima et al. | An improved gas-liquid chromatographic method using silicon AN-600 column for separation of bile acids: its application on analysis of bile acids in rat bile | |
EP1032584A1 (fr) | Nouveaux 19-nor stero des substitues en position 11beta, procede et intermediaires de preparation, application comme medicaments et compositions pharmaceutiques les renfermant | |
HU191199B (en) | Process for preparing new 17-/nitro-methylene/-androstenes | |
Shimada et al. | Preparation of specific antisera to digoxin using hapten-[C-17]-and [C-12]-bovine serum albumin conjugates | |
US4221725A (en) | Steroid derivatives and their use in radioimmunoassays | |
Kazutake et al. | Preparation of specific antiserum to estradiol 3-glucuronide | |
US4488995A (en) | Androstene-17β-alkylthiomethyl ethers |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: HOECHST MARION ROUSSEL |
|
MM | Patent lapsed |
Owner name: HOECHST MARION ROUSSEL |