FI83667C - Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot sporozoiter av eimeria tenella och foerfarande foer framstaellning av e.tenella-vaccin. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot sporozoiter av eimeria tenella och foerfarande foer framstaellning av e.tenella-vaccin. Download PDFInfo
- Publication number
- FI83667C FI83667C FI843142A FI843142A FI83667C FI 83667 C FI83667 C FI 83667C FI 843142 A FI843142 A FI 843142A FI 843142 A FI843142 A FI 843142A FI 83667 C FI83667 C FI 83667C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- atcc
- spore
- clone
- monoclonal antibodies
- hybridoma
- Prior art date
Links
- 241000223932 Eimeria tenella Species 0.000 title claims description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 37
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 37
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 claims description 11
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 101100189058 Mus musculus Slc10a3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims 1
- 210000001742 aqueous humor Anatomy 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims 1
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 description 37
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 12
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 12
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 12
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 12
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 8
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 5
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- CQGRLHBOVUGVEA-UHFFFAOYSA-N OOOOOOOOOOOOOOO Chemical compound OOOOOOOOOOOOOOO CQGRLHBOVUGVEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 210000003936 merozoite Anatomy 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 244000000040 protozoan parasite Species 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 2-(4-octylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(OCCO)C=C1 BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MOMWFXLCFJOAFX-UHFFFAOYSA-N OOOOOOOO Chemical compound OOOOOOOO MOMWFXLCFJOAFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000973 gametocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 206010062261 spinal cord neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003330 sporicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000006557 surface reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/455—Eimeria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
i 83667
Menetelmä monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi Eimeria tenella:n itiöitä vastaan sekä menetelmä E. tenel-la-rokotteen valmistamiseksi 5 Tässä esitetty keksintö koskee menetelmää monokloo- nisten vasta-aineiden valmistamiseksi, jotka ovat erityisen aktiivisia parasiitti Eimeria tenella'n itiöitä vastaan. Esitetään hybridooma viljelmiä, jotka tuottavat vasta-aineita E.tenellaa vastaan. Kyseisiä vasta-aineita saa-10 daan hybridoomatekniikalla. Itiö vasta-aineet todetaan ja tunnistetaan. Kyseiset antigeenit ja eräät määrätyt mono-klooniset vasta-aineet ovat tehokkaita kokkidioosin ennaltaehkäisyssä ja hoidossa. Keksintö koskee myös menetelmää E. tenella-rokotteen valmistamiseksi. Vasta-aineet ovat 15 myös hyödyllisiä rokotteina kokkidioosia vastaan.
Taustatietona mainittakoon, että kokkidioosi on eläimissä esiintyvät sairaus, jonka aiheuttaa joukko alku-eläin parasiitteja. Linnuissa esiintyvä kokkidioosi on tuhoisa siipikarjan tauti, jonka aiheuttaa joukko suvun 20 Eimeria-lajeja. Kyseisellä taudilla on monimutkainen elin- kierto, joka koostuu sekä suvuttomista että suvullisista vaiheista. Kanat saavat alunperin tartunnan tautiin niel-tyään vapaana olevia munarakkuloita, joita yleensä esiintyy ulosteissa. Munarakkulat kehittyvät tauteja levittä-25 viksi suvuttomiksi itiöiksi kanan ruuansulatuskanavassa.
Itiöt tartuttavat epiteelisoluja ja kehittyvät monitumai-siksi rakenteiksi, jotka tunnetaan halkioina. Jokainen halkio kehittyy ja lopulta vapauttaa useita tauteja levittäviä suvuttomia rakenteita, jotka tunnetaan merotsoiit-30 teinä. Kyseiset merotsoiitit poistuvat tartunnan saaneista soluista ja tartuttavat muita epiteelisoluja.
Itiöihin ja merotsoiitteihin liittyvät useat tauteja levittävät suvuttomat vaiheet muodostavat suurelta osin kokkidioosin patologian. Kokkidioosin suvullinen kierto 35 alkaa, kun merotsoiitit erottuvat gametosyyteiksi. Hedel- 2 83667 möityminen tapahtuu ja hedelmöitymistuotteet, jotka tunnetaan munarakkuloina vapautuvat ulosteisiin. Täten parasiitin elinkierto on päättynyt. Kanoissa Eimeria tenella'n elinkierto, joka on tyypillinen laji, on päättynyt noin 5 7:ssä 9:ssä päivässä.
Johtuen valtavista taloudellisista tappioista, joita koituu siipikarjateollisuudelle Eimeria-lajien takia, on rokote parasiittiä vastaan erittäin toivottava. Kuitenkin, johtuen parasiitin elinkierron monimutkaisuudesta ja 10 jokaisessa elinvaiheessa olevien useiden antigeenien luku määrän vaihtelevuudesta, on huomattu, että deaktivoidut tai tapetut parasiitit eivät ole saaneet aikaan jatkuvaa immuniteettiä. Eräs ratkaisu kyseiseen ongelmaan on eristää ja tunnistaa tietyt antigeenit parasiitistä ja antaa 15 niitä riittävässä määrin jotta ne voivat toimia immunoivi-na aineina. Edullisesti kyseiset antigeenit suojaavat kaikkien tärkeitten lajien tartunnoilta. On tunnettua, että Eimeria'n useilla lajeilla, yhtä hyvin kuin saman lajin elinkierron eri vaiheilla on sekä yhteisiä että 20 spesifisiä antigeenejä (Cerna, Z., Folia Parasitologica (Praha) 17:135-140 (1970); Davis et ai., Immunol. 34: 879-888 (1978); Rose, M.E., Immunol. 2:112122 (1959); Rose et ai., Immunol. 5:79-92 (1962); ja Tanelian et ai., Acta Parasitol. Yugosl. 7:79-84 (1976)).
25 On myös tunnettua, että immuniteetin kehittyminen
Eimeriaa vastaan on lajikohtaista ja joissakin kotieläin lintulajeissa on huomattavaa kantakohtaista immuniteettia (Jeffers, T.K.; In Long, P.L. et ai (eds), Avian Coccidio-sis, pp. 57125, Proc. 13th Poultry Sei Symp (1978); Jou-30 ner, L.P., Parasitol. 59:725-732 (1969); Long, P.L., Parasitol. 69:227-347 (1974); ja Long et ai., Parasitol. 79: 451-457 (1979)). Tällä hetkellä Eimeria-lajin immunogeene-jä, jotka voisivat synnyttää suojaavaa immuniteettiä linnuissa tai nisäkkäissä, ei vielä ole eristetty tai todet-35 tu. Kyseisillä Eimeria immunogeeneillä todennäköisesti 1 3 83667 saadaan aikaan onnistunut immunisointi kokkidioosia vastaan.
Lymfosyytti hybridoomatekniikan kehityksellä on saatu keino, jolla voidaan tuottaa suhteellisen suuria 5 määriä määrättyjä vasta-aineita lukuisia Eimeria'n antigeenejä vastaan. Yhdistämällä määrätyt vasta-ainetta tuottavat (pernasolut) solut selkäydinkasvaimesta saaduilla soluilla, on mahdollista valmistaa hybridoomasoluja, jotka erittävät monokloonisia vasta-aineita, jotka on eri-10 tyisesti tarkoitettu alkuperäistä herkistävää antigeeniä vastaan. (Köhler & Milstein, Nature (Lontoo) 256:495-497 (1975). Jos parasiitin vastaisia vasta-aineita saadaan, voi olla mahdollista siirtää kyseiset vasta-aineet tartunnan saaneeseen tai altistuneeseen siipikarjaan ja täten 15 aikaansaada isäntäorganismille määrätty passiivinen immuniteetti . Kun monoklonaalisia vasta-aineita tuottavia hyb-ridoomaviljelmiä on saatu, on mahdollista eri menetelmillä käyttää kyseisiä vasta-aineita eristämään ja toteamaan määrättyjä antigeenejä, joita puolestaan voitaisiin käyt-20 tää rokotteina jotta isäntäorganismille saataisiin aktiivinen immuniteetti. Tunnetaan lukuisia hybridoomaviljel-miin ja monoklonaalisiin vasta-aineisiin liittyviä patenttijulkaisuja (se on US-pat.nrot 4 172 124; 4 196 265; 4 271 145; 4 361 549; 4 631 550; 4 364 932; 4 364 933; 4 364 25 934; 4 364 935; 4 364 936; 4 381 292 ja 4 381 295).
Edellä olleen esityksen valossa kokkidioosin taloudellisista vaikutuksista karjanhoitoon ja erityisemmin siipikarjateollisuuteen, on Eimeria-alkueläin parasiitin hallinta hyvin toivottavaa. Yhtäpitävästi, keksinnön tar-30 koituksena on saada aikaan uusia ja käyttökelpoisia monoklonaalisia vasta-aineita suvun Eimeria-itiöitä vastaan. Lisätarkoituksena on eristää ja todeta määrätyt E.tenella antigeenit, jotka ovat käyttökelpoisia rokotteina linnuissa esiintyvän kokkidioosin hallitsemiseksi. Kyseiset tar-35 koitukset esitetään seuraavassa kuvauksessa ja keksinnön 4 83667 mukaisille menetelmille on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksissa esitetään.
E.tenella'n itiöiden valmistetta käytetään immunisoimaan hiiriä jotta lopuksi saataisiin monoklonaalisia 5 vasta-aineita Köhlerin ja Milsteinin menetelmällä kuten alla on esitetty. Monoklonaalisilla vasta-aineilla todetaan parasiitin antigeenejä. Antigeenit, jotka tuovat esiin monoklonaalisia vasta-aineita, jotka reagoivat iti-öitten kanssa ja hillitsevät parasiitin kasvua, pidetään 10 suojäävinä antigeeneinä. Eimeria'n useissa lajeissa esiin tyviä suojaavia antigeenejä pidetään mahdollisina ehdokkaina linnuissa esiintyvää kokkidioosia vastaan käytettävän rokotteen kehittämiseksi.
Liukoisia antigeenejä saadaan E.tenella'n itiöistä. 15 Kyseiset liukoiset antigeenit erotetaan elektroforeetti-sesti molekyylipainon mukaan ja ne, jotka erityisesti reagoivat keksinnön mukaisesti valmisteltujen monoklonaalis-ten vasta-aineiden kanssa, todetaan. Käyttämällä sopivia standardeja, reaktiiviset antigeenit tunnistetaan molekyy-20 lipainon perusteella.
Jotta voitaisiin arvioida monoklonaalisten vasta-aineiden kykyä tehokkaasti neutraloida kokkidioosi-itiöi-den tartuttamiskykyä, asetetaan kanat alttiiksi E.tenella'n itiöille, joita on aiemmin käsitelty useilla keksin-25 nön mukaisesti valmistetuilla monoklonaalisilla vasta-ai neilla. Kyseinen elävässä elimistössä tapahtuva koesystee-mi osoittaa valikoitujen monoklonaalisten vasta-aineiden suojaavia ominaisuuksia.
Kanojen, jotka saivat liuenneiden itiöantigeenien 30 ruiskeita ja niitä, jotka oli todettu vastaavilla monoklo naalisilla vasta-aineilla, huomattiin olevan suojattuja suun kautta saatavaa tartuntaa vastaan. Kyseinen immunisointimenetelmä osoittaa mahdollisuutta käyttää monoklonaalisilla vasta-aineilla tunnistettavia antigeenejä 35 rokotteina.
Il 5 83667
Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä tarkemmin.
Esimerkki 1
Hybridoomasolulinjojen valmistus
Eimeria tenella'n itiöitä saadaan tyhjentämällä 5 itiöityneet munarakkulat itiöistä tunnetuilla menetelmillä (Doran et ai., Proc. Hemintol. Soc. Wash. 34:59-65 (1967)). Täten saatua E.tenella'n itiövalmistetta käytetään immunisoimaan kahdeksantoista viikkoa vanhoja BALB/c hiiriä vatsakalvonsisäisillä ruiskeilla. Kun on määritet-10 ty, että immunisoitu hiiri tuottaa itiöitä vastustavia vasta-aineita käyttämällä epäsuoraa immunofluorisenssiana-lyysi (IFA)-menetelmää, joka on tunnettu tekniikassa, saadaan pernasoluja hiiristä ja ne yhdistetään hiiren selkäydin solulinjan P3 x 63.Ag8.653 kanssa. Yhdistyminen suo-15 ritetaan 30:sta 35 %:n polyetyleeniglykolin läsnäollessa (950-1050). Menetelmä hybridoomien tuottamiseksi on esitetty aikaisemmin (vrt. Kennett et ai., Monoclonal antibo-dies-Plenum press: 365-371, 1980). Hybridooma yhdistymis-tuotteita viljellään HAT-alustassa (Littlefield, J.W. 20 Sciense, 145:709-710 (1964)), jossa on Iscove'n modifioitua Dulbecco'n alustaa, johon on lisätty 20 % sikiövasikan seerumi lisäainetta. Elatusaineita valvotaan itiöitä tuhoavaa vasta-aine-tuotantoa varten epäsuoralla immunofluo-resenssi-analyysillä (IFA) käyttäen glutaraldehydiin si-25 dottuja E.tenella'n itiöitä antigeenilähteenä. Kaikista koeviljelmistä, 33 maljaa oli positiivisia IFA:11a analysoituna .
Jotta varmistettiin hybridoomaviljelmien monoklo-naalisuus, käytettiin rajoittavaa laimennusmenetelmää. Kun 30 E.tenella'n itiöt oli saatettu alttiiksi tuotetuille monille monoklonaalisille vasta-aineille, huomattiin käsitellyissä itiöissä kolme pää-IFA-reaktiivisuusmallia: 1) Itiöitten koko pinnalla tapahtuva reaktio; 2) paikoitellen itiöissä tapahtuva pintareaktio; 35 3) itiöitten tumakalvon ympärillä tapahtuva sisäinen reaktio.
6 83667
Kyseiset reaktiomallit vahvistettiin ferriitti-mer-kinnällä ja läpäisyelektronimikroskopialla (Speer et ai., J. of Protozoology in press). Kuten IFA:lla oli määritetty, hybridoomaviljelmät tuottavat identtisiä vasta-aineita 5 kloonauksen jälkeen. Klooneja kasvatetaan joko elimistön ulkopuolella tai BALB/c hiirissä vatsakalvokasvaimina ja vasta-aineiden konsentraatio askiites-nesteessä on enimmiltään noin 10 mg/ml.
Esimerkki 2 10 E.tenella'n itiöihin liittyvien antigeenien valmis tus
Juuri munarakkuloista tyhjennettyjä E.tenella'n itiöitä käytetään antigeenin valmistukseen. Itiöitten ulompien kalvojen osat uutetaan detergenteillä (se on 15 0,5 % Nonidet P40, 0,5-2 % CHAPAra tai 0,5-1 % Triton X- 100) 5 mM:ssa natriumfosfaattipuskuriliuosta, jonka pH on 7,8. Puskuriliuos sisältää seuraavat proteaasi inhibiittorit: aprotiniinia (2 trypsiiniyksikköä/ml); antipainia (25 g/ml); leupeptiiniä (25 g/ml), fenyylimetyylisulfonyyli-20 fluoridia (4 mM) (Yoshida et ai., J. Exp, Med., 154:1225-1236 (1981)). Detergentillä liuotettu aine sentrifugoidaan 100 000 x g:ssa 10 minuutin ajan jotta kiintoaines saataisiin poistettua. Kirkkaassa sakan ylle nousseessa nesteessä on E.tenella'n itiöihin liittyviä liukoisia antigeene-25 jä.
Esimerkki 3
Antigeenin tunnistaminen E.tenella'n itiöiden liukoiset antigeenit erotetaan molekyylipainon mukaan käyttämällä SDS polyakryyliamidi-30 geelielektroforeesia (PAGE) (Laemmli, UK, Nature 227:680- 685)). SDS PAGE:11a erotetut proteiinit siirretään elek-troforeettisesti nitroselluloosakalvoille käyttäen Western'in blottausmenetelmää (Towbin et ai., Proc., Natl. Acad. Sei. (USA) 76: 4350 - 4354 (1979)). Nitroselluloosa-35 suodatin saatetaan reagoimaan joko laimennetussa askiites- 1 7 83667 nesteessä tai käytetyssä hybridooma-viljelynesteessä, jossa on vasta-aineita. Sidotut monoklooniset vasta-aineet havaitaan käyttämällä radioimmuno-havaintomenetelmää, jo-125 hon liittyy I-merkittyanti-hiiri IgG vasta-aine (New 5 England Nuclear). Toinen vapaa vasta-aine poistetaan pesemällä ja nitroselluloosa suodattimet kuvataan Kodak röntgenfilmillä XAR-5.
Vaihtoehtoisesti, määrätyt antigeeni-monoklonaali-set vasta-aine-kompleksit todetaan ELISA-tekniikalla käyt-10 täen piparjuuriperoksidaasia, johon on yhdistetty jänis IgG vasta-ainetta (Coppel Lab) hiiri-immunoglobuliinia vastaan (Burnette et ai., Anal. Biochem. 112:195-203 (1981)). Käytetään BioRad immunoblottausanalyysijärjestel-mää.
15 Reaktiivisten itiöantigeenien näennäiset molekyyli- painot määritetään vertaamalla antigeenien elektroforeet-tisia Rf-arvoja tunnetun molekyylipainon omaavien yhdisteiden Rf-arvojen kanssa, joita käytetään standardeina antigeenien kanssa samassa systeemissä. Eri antigeenien 20 kokeelliset mole kyyliarvot on esitetty taulukossa I.
Taulukko I
Eri E.tenella-itiöantigeenien molekyylipainomääritys
Hydridooma- Monoklonaa- Antigeenin näennäismolekyyli- viljelmä linen vasta- paino 25 aine s5E5 sl 110 ± 16, 130 ± 20 kd s4E2 s2 110 ± 16, 130 ± 20 kd slC4 s3 66 ± 9 kd, 55 ± 8 kd, 20 - 30 kd, 18 ± 3 kd, 30 15+2 kd s2G8 s4 55 ± 8 kd s5B9 s5 55 ± 8 kd slA s6 54 ± 8 kd s3Cll s7 50 ± 7 kd 35 s3D3 s8 29 ± 4 kd slE4 s9 58 ± 9 kd, 130 ± 20 kd 8 8 3 667
Esimerkki 4 E.tenella'n itiöiden neutralointi monoklonaalisilla vasta-aineilla käyttäen kanan elävässä elimistössä tapahtuvaa koetta 5 Elävässä elimistössä olevaa systeemiä käytetään arvioimaan hybridoomasolulinjoilla valmistettujen mono-klonaalisten vasta-aineiden kykyä neutraloida E.tenella'n itiöitä. Lintujen umpisuolet ovat alueita, joissa E.tenella'n tartunta tapahtuu ja niihin päästään käsiksi 10 kirurgisesti (Burns et ai., Exp. Parasitol. 68:1117-1123 (1982)). Kanojen umpisuolet otetaan esille kirurgisesti ja käsitellään E.tenella'n itiöitten valmisteilla, jotka on aikaisemmin käsitelty valmistetuilla monoklonaalisilla vasta-aineilla.
15 Juuri munarakkuloista tyhjennettyjä itiöitä inku- boidaan steriileissä olosuhteissa lämpöinaktivoidulla as-kiitesnesteellä, jossa on monokloonisia vasta-aineita, jotka on johdettu hybridoomasolulinjoista. Inkubointiaika on 30:stä 60:een minuuttiin 25:stä 37 °C:seen. 60 minuutin 20 inkubointiaika 37 °C:ssa on edullinen. Käsitellyt itiöt saatetaan kolmen viikon vanhojen kanojen umpisuoliin kirurgisesti. Viisi päivää kestäneen infektioajan lopussa tartutettujen kanojen umpisuolia tarkkaillaan haavautumien havaitsemiseksi. Viisi päiväinen infektioaika on kokkidi-25 oosin tuhoisin vaihe. Kokeen tulokset on esitetty taulukossa II. Huomataan, että monoklonaalisilla vasta-aineilla s3 ja s8 kummallakin saatiin 60 % kokonaissuojaus E.tenella'n itiöiden tartuntaa vastaan. 1 9 83667
G
•H (TN O O O O to Ui OOOOOOOO
CO VOVÖTTLDCN —iin if) (N
:<T3 G ^
$ <#> G
O en ro g 3 +j
μ G -G rH O O O O <TN O OOvOOOOOO
frt Tl -rl 04 r^ 04 i—I rH ·*Τ r-( LO
ra O UI
r· 3 0 S W c 3 | e '2 j ,G o o o o o tn m oor-'-ooooo >- m o 04 o cn r» ooaioinouiinco
3 r-i rH
5 w tn 3 > ooooooo oooooooo G ooooooo oooooooo dj ·|° ooooooo oooooooo jj Gh (N (N (N N (N (N (N mmi— M (U :3 H ^:2
S s I
.2 -H 3
M b HH
M H
0 O 0 m 2 e o M 5 <u e 3 S tn
r-4 e -H -H G
3 ‘3 tn r-i (1) 3 o 3 tu ro tn tn tn E-* qj <u 3 g tn tn tnc-H i co rr i—> <tn + + + 4-> -h 03 ιοοττγοο + + itncn.tntn 3 e ,η i i tn tn tn tn ι αοοαο GQ)^3 1 ‘S® tn tn tn 3 tn o 4J w w 4-1 4J G 3 Λ -H o 3 3 rH S >
Oy Ή 3 3 O j=! :3 G 3 3 <D 3 3 4J > :θ 4-i 4-1 -H C ^ 3 ro 3 <L) ,2 •H -H g 3 2
g 4J O -H O
^ ^ 2 2η 00 TT CO TT
3 o u υ <
ω 2 G CNr-y 04 r-. rH
,^30G3 33 333 •3 ι—I ,Q o JK m oo -y ht mcorr^r 3 rH >,rH 3 |QOUCUJ»i4I iCCJUMHJ^a^
3<U r* V I OI 04 rH <—t I o"l 04 rn rH
;3C I 3 3 3 3 (Ή OH I 3 3 3 3 <—l oi m
> £ £ § g SS CSQ
ίπ 7! e g 33 n tn w W W ££+> 10 83667
Esimerkki 5
Immunisointi E.tenellan itiöiden antigeeneillä
Viikon vanhat kanat immunisoitiin vatsakalvon-sisäisesti liuenneilla E.tenella'n itiöiden antigeeneillä.
5 Ensimmäisissä ruiskeissa oli proteiinipitoista ainetta, joka oli johdettu 1,5 x 107 itiöstä Freund'in täydellisessä lisäaineessa. Kaksi lisäruisketta seurasi kymmenen päivän välein ja kummassakin oli puolet alkuperäisestä immu-noivasta annoksesta Freund'in epätäydellisessä lisäainees-10 sa. Kymmenen päivää viimeisen ruiskeen jälkeen, kanoille annettiin 50 000 munarakkulaa suun kautta. Viisi päivää antamisen jälkeen havaittiin umpisuolissa haavautumia. Kokeen tulokset on esitetty taulukossa III. Huomataan, että liukoiset antigeenit suojaavat huomattavissa määrin 15 suun kautta annettuja munarakkuloita vastaan, kun taas tavalliset kanat eivät ole suojattuja.
Taulukko III
Hoito Suojausprosentti (% koelinnuista) 20 _Ei yhtään Osittain Täysin_
Kontrolli 100 0 0
Immunoitu 0 33 66
Uudet monoklonaaliset vasta-aineet, nro slC4, nro 25 s3D3, nro slE4, nro s5B5, nro slA ja nro s2G8, jotka on eristetty kuten yllä on esitetty ovat talletettuina American Type Culture Collection'issa (ATCC), joka sijaitsee Rockvillessä, Marylandissa ja ne on lisätty sen pysyviin kokoelmiin. Nro:lie slC4 on annettu numero HB8333; nro:lle 30 s3D3 on annettu numero HB8331, nro:lie slE4 on annettu numero HB8332, nro:lie s5B9 on annettu numero HB8402, nro:lie s5E5 on annettu numero HB8403, nro:lie slA on annettu numero HB8404 ja nro:lie s2G8 on annettu numero HB8405. Vasta-aineisiin pääsee tutustumaan patenttihake-35 muksen ollessa käsittelyssä henkilö, josta päättää patent- il li 83667 ti- ja tuotemerkkien tarkastaja, johon hän on oikeutettu 37 C.F.R. 1,14 ja 35 U.S.C. 122 perusteella ja kaikki rajoitukset HB8331, HB8332, HB8403, HB8404 ja HB8405 saatavuuden suhteen yleisölle tullaan peruuttamattomasti pois-5 tamaan, kun patenttihakemukselle on myönnetty patentti.
Nro: t slC4, HB8333, s3D3, HB8331 ja slE4, HB8332 talletettiin ATCCrhen 11 elokuuta 1983. Uudet monoklonaaliset vasta-aineet nro:t s5B9, HB8402, s5E5, HB 8403, slA, HB8404 ja s2G8, HB8405 talletettiin ATCC:hen lokakuun l:nä 10 päivänä 1983.
Claims (3)
1. Menetelmä monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi hybridoomilla, tunnettu siitä, että 5 valmistetaan vasta-aine, joka reagoi spesifisesti Eimeria tenellarn itiöitten antigeenien kanssa, joiden molekyyli-paino on noin 13 - 150 kd, hybridoomilla, jotka on muodostettu yhdistämällä hiiren P3 x 63.Ag8.653 myeloomasoluja ja pernasoluja, jotka on saatu BALB/c hiiristä, jotka on 10 aiemmin immunisoitu E. tenella'n itiöillä, joille hybri-doomille on annettu klooninumero s5E5 (ATCC HB8403); kloo-ninumero s4E2; klooninumero slC4 (ATCC HB8333); klooninumero s2G8 (ATCC HB8405); klooninumero s5B9 (ATCC HB8402); klooninumero slA (ATCC HB8404); klooninumero s3Cll, kloo-15 ninumero s3D3 (ATCC HB8331); tai klooninumero slE4 (ATCC HB8332).
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että viljellään kloonit nro s5E5 (ATCC HB8403), s4E2, slC4 (ATCC HB8333), s2G8 (ATCC
20 HB8405), s5B9 (ATCC HB8402), slA (ATCC HB8404), s3Cll, s3D3 (ATCC HB8331) tai slE4 (ATCC HB8332) sopivassa ela-tusaineessa ja vasta-aine otetaan talteen yllämainitun hybridoomaviljelmän supernatantista; tai hiireen injektoidaan hybridoomaviljelmä, jonka klooninumero on s5E5 (ATCC 25 HB8403), s4E2, slC4 (ATCC HB8333), S2G8 (ATCC HB8405), s5B9 (ATCC HB8402), slA (ATCC HB8404), s3Cll, s3D3 (ATCC HB8331) tai slE4 (ATCC HB8332) ja kyseinen vasta-aine otetaan talteen kyseisen hiiren vesivatsasta tai seerumista.
3. Menetelmä rokotteen valmistamiseksi, joka rokote 30 on liukoinen läsnäolevaan detergenttiä sisältävään puskuriliuokseen ja joka on Eimeria tenella’n itiöiden antigeeni, joka on spesifisesti reaktiivinen hybridoomakloonin s5E5 (ATCC nro HB8403) erittämien itiö-vastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyylipaino on 35 110 ± 16 kd ja 130 ± 20 kd; spesifisesti reaktiivinen hyb- il i3 8 3 6 67 ridoomakloonin s4E2 erittämien itiö-vastaisten monoklonaa-listen vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyylipaino on 110 ± 16 kd ja 130 ± 20 kd; spesifisesti reaktiivinen hyb-ridoomakloonin slC4 (ATCC nro HB8333) erittämien itiövas-5 täisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa ja antigeenin molekyylipaino on 66 ± 9 kd, 55 ± 8 kd, 20 - 30 kd, 18 ± 3 kd, 15 ± 2 kd; spesifisesti reaktiivinen hybridoo-makloonin s2G8 (ATCC nro HB8405) erittämien itiövastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyyli-10 paino on 55 ± 8 kd; spesifisesti reaktiivinen hybridooma-kloonin s5B9 (ATCC nro HB8402) erittämien itiövastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyyli-paino on 55 ± 8 kd; spesifisesti reaktiivinen hybridooma-kloonin slA (ATCC nro HB8404) erittämien itiövastaisten 15 monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyyli-paino on 54 ± 8 kd; spesifisesti reaktiivinen hybridooma-kloonin s3Cll erittämien itiö-vastaisten monokloonaalisten vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyylipaino on 50 ± 7 kd; spesifisesti reaktiivinen hybridoomakloonin s3D3 (ATCC 20 nro HB8331) erittämien itiö-vastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyylipaino on 29 ± 4 kd; tai spesifisesti reaktiivinen hybridoomakloonin slE4 (ATCC nro HB8332) erittämien itiö-vastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa ja jonka molekyylipaino on 58 25 ± 9 kd ja 130 ± 20 kd, tunnettu siitä, että sii hen kuuluu vaiheet, joissa a) uutetaan E. tenella'n itiöantigeenejä ja tehdään ne liukoisiksi; b) erotetaan liuennut aine tavanomaisilla eristys- ja puh-30 distusmenetelmillä puhdistetun antigeenin saamiseksi. n 83667
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US52481983A | 1983-08-19 | 1983-08-19 | |
| US52481983 | 1983-08-19 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI843142A0 FI843142A0 (fi) | 1984-08-09 |
| FI843142A FI843142A (fi) | 1985-02-20 |
| FI83667B FI83667B (fi) | 1991-04-30 |
| FI83667C true FI83667C (fi) | 1991-08-12 |
Family
ID=24090798
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI843142A FI83667C (fi) | 1983-08-19 | 1984-08-09 | Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot sporozoiter av eimeria tenella och foerfarande foer framstaellning av e.tenella-vaccin. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0135712A3 (fi) |
| JP (2) | JPS6067499A (fi) |
| KR (1) | KR850001697A (fi) |
| AU (1) | AU585484B2 (fi) |
| CA (1) | CA1241923A (fi) |
| DK (2) | DK397184A (fi) |
| ES (4) | ES8607025A1 (fi) |
| FI (1) | FI83667C (fi) |
| IL (1) | IL72656A (fi) |
| NO (1) | NO162179C (fi) |
| NZ (1) | NZ209077A (fi) |
| PT (1) | PT79075B (fi) |
| ZA (1) | ZA846433B (fi) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0135073A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozites of eimeria spp. |
| CA1340520C (en) * | 1984-06-05 | 1999-05-04 | Karel Z. Newman Jr. | Antigenic proteins and vaccines containing them and protective antibodies directed to them for prevention of coccidiosis caused by eimeria tenella and eimeria necatrix |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
| US5273901A (en) * | 1984-07-05 | 1993-12-28 | Enzon Corp. | Genetically engineered coccidiosis sporozoite 21.5 Kb antigen, ac-6b |
| EP0190254A4 (en) * | 1984-07-05 | 1987-03-09 | Genex Corp | GENE CLONE AND PROCESS FOR THE PREPARATION AND USE THEREOF. |
| US5279960A (en) * | 1984-07-05 | 1994-01-18 | Enzon Corp. | 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella |
| US4724145A (en) * | 1985-11-18 | 1988-02-09 | Merck & Co., Inc. | Eimeria acervulina immunogens |
| EP0231537B1 (en) | 1985-12-03 | 1992-03-11 | Solvay | Antigenic proteins and vaccines containing them for prevention of coccidiosis |
| EP0241139A3 (en) * | 1986-03-13 | 1989-04-19 | Merck & Co. Inc. | Anti-idiotypic vaccine for coccidiosis |
| CA1340838C (en) | 1986-08-14 | 1999-12-07 | Michael Wallach | Coccidiosis vacine |
| US5496550A (en) * | 1986-08-14 | 1996-03-05 | Chilwalner | Method of reducing the output of Eimeria oocysts from a newborn chick |
| EP0614973A1 (en) * | 1987-03-06 | 1994-09-14 | Amgen Boulder Inc. | Polypeptide useful in diagnosis of coccidia infection and recombinant-DNA methods for manufacturing same |
| ZA893740B (en) * | 1988-06-03 | 1990-02-28 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines |
| ZA902147B (en) * | 1989-03-28 | 1990-12-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
| JPH06504187A (ja) * | 1990-09-12 | 1994-05-19 | ジェネックス・コーポレーション | 遺伝子操作されたコクシジウム症ワクチン |
| US5403581A (en) * | 1991-07-12 | 1995-04-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
| US6008342A (en) * | 1991-07-12 | 1999-12-28 | Roche Vitamins Inc. | DNA encoding eimeria antigen |
| EP0872486A1 (en) * | 1997-04-09 | 1998-10-21 | Akzo Nobel N.V. | Eimeria proteins as vaccines |
| US6680061B1 (en) | 1998-10-07 | 2004-01-20 | Theodorus Cornelis Schaap | Coccidiosis vaccines |
| EP1478654B1 (en) | 2001-07-06 | 2010-01-06 | ABIC Biological Laboratories Ltd. | NUCLEIC ACIDS ENCODING A RECOMBINANT 250 kDa ANTIGEN FROM SPOROZOITES/MEROZOITES OF EIMERIA MAXIMA AND THEIR USES |
| ZA200400479B (en) | 2001-07-06 | 2006-05-31 | Abic Biolog Lab Teva | Nucleic acids encoding recombinant 56 a 82 KDA antigens from gametocytes of Eimeria maxima and their use |
| JP2003088370A (ja) * | 2001-09-03 | 2003-03-25 | Avicore Biotechnology Institute Inc | 鳥類コクシジウム症を誘発するアイメリア種のスポロゾイトの表面抗原に対するｓｃＦｖ組換え抗体 |
| JP6155758B2 (ja) * | 2013-03-29 | 2017-07-05 | 株式会社Ihi | 低温液体タンク |
| CN106046136B (zh) * | 2016-06-03 | 2019-02-22 | 山东农业大学 | 一种鸡柔嫩艾美尔球虫微线蛋-2突变体EtMIC2-2119 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5649323A (en) * | 1979-09-29 | 1981-05-02 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Coccidiostat |
| EP0135073A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozites of eimeria spp. |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
-
1984
- 1984-07-27 EP EP84108925A patent/EP0135712A3/en not_active Ceased
- 1984-07-31 AU AU31332/84A patent/AU585484B2/en not_active Ceased
- 1984-08-01 NZ NZ209077A patent/NZ209077A/xx unknown
- 1984-08-09 FI FI843142A patent/FI83667C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-12 IL IL72656A patent/IL72656A/xx unknown
- 1984-08-13 PT PT79075A patent/PT79075B/pt unknown
- 1984-08-16 ES ES535203A patent/ES8607025A1/es not_active Expired
- 1984-08-17 JP JP59170518A patent/JPS6067499A/ja active Pending
- 1984-08-17 DK DK397184A patent/DK397184A/da not_active Application Discontinuation
- 1984-08-17 ZA ZA846433A patent/ZA846433B/xx unknown
- 1984-08-17 CA CA000461242A patent/CA1241923A/en not_active Expired
- 1984-08-17 NO NO843293A patent/NO162179C/no unknown
- 1984-08-18 KR KR1019840004994A patent/KR850001697A/ko not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-07-26 ES ES545607A patent/ES8606901A1/es not_active Expired
-
1986
- 1986-01-31 ES ES551496A patent/ES8900008A1/es not_active Expired
- 1986-01-31 ES ES551497A patent/ES8802164A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-12-21 DK DK304590A patent/DK162171C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-14 JP JP4208561A patent/JPH05317080A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL72656A (en) | 1989-06-30 |
| FI843142A0 (fi) | 1984-08-09 |
| NO162179C (no) | 1989-11-22 |
| JPS6067499A (ja) | 1985-04-17 |
| AU585484B2 (en) | 1989-06-22 |
| ES535203A0 (es) | 1986-06-01 |
| ES8900008A1 (es) | 1988-11-16 |
| DK304590D0 (da) | 1990-12-21 |
| NO162179B (no) | 1989-08-14 |
| ES8606901A1 (es) | 1986-05-16 |
| DK162171C (da) | 1992-03-16 |
| NO843293L (no) | 1985-02-20 |
| EP0135712A2 (en) | 1985-04-03 |
| PT79075B (en) | 1986-07-22 |
| CA1241923A (en) | 1988-09-13 |
| NZ209077A (en) | 1988-08-30 |
| ES8802164A1 (es) | 1988-04-01 |
| PT79075A (en) | 1984-09-01 |
| ZA846433B (en) | 1985-03-27 |
| EP0135712A3 (en) | 1987-05-27 |
| KR850001697A (ko) | 1985-04-01 |
| FI843142A (fi) | 1985-02-20 |
| DK397184D0 (da) | 1984-08-17 |
| AU3133284A (en) | 1985-02-21 |
| DK304590A (da) | 1990-12-21 |
| CA1261285C (fi) | 1989-09-26 |
| DK162171B (da) | 1991-09-23 |
| ES8607025A1 (es) | 1986-06-01 |
| IL72656A0 (en) | 1984-11-30 |
| DK397184A (da) | 1985-02-20 |
| JPH05317080A (ja) | 1993-12-03 |
| ES551496A0 (es) | 1988-11-16 |
| ES545607A0 (es) | 1986-05-16 |
| ES551497A0 (es) | 1988-04-01 |
| FI83667B (fi) | 1991-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI83667C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot sporozoiter av eimeria tenella och foerfarande foer framstaellning av e.tenella-vaccin. | |
| US4710377A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of Eimeria spp. | |
| US5001225A (en) | Monoclonal antibodies to a pan-malarial antigen | |
| FI84186B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot eimeria spp.-sporozoiter och merozoiter och foerfarande foer framstaellning av en antigen komposition. | |
| DE3586609T2 (de) | Antigenische proteine, dieselben enthaltende vakzine, schuetzende antikoerper dagegen fuer die verhuetung von durch eimeria tenella verursachte coccidiosis. | |
| JPS62224293A (ja) | コクシジウム症予防用抗原性蛋白質およびそれを含有するワクチン | |
| US6110463A (en) | Anti-Cryptosporidium parvum preparations | |
| JPS6118724A (ja) | コクシジウム症ワクチン | |
| US5028694A (en) | Antigenic proteins and vaccines containing them for prevention of coccidiosis caused by eimeria Eimeria necatrix and Eimeria tenella | |
| US5496550A (en) | Method of reducing the output of Eimeria oocysts from a newborn chick | |
| Payares et al. | Antigenicity and immunogenicity of the tegumental outer membrane of adult Schistosoma mansoni | |
| US5677438A (en) | Coccidiosis vaccine | |
| EP0256536B1 (en) | Coccidiosis vaccine | |
| AU656914B2 (en) | New peptides and their use | |
| Gregoire et al. | Protective monoclonal antibodies from mice vaccinated or chronically infected with Schistosoma mansoni that recognize the same antigens. | |
| Hernández-Sánchez et al. | Giardia duodenalis: adhesion-deficient clones have reduced ability to establish infection in Mongolian gerbils | |
| CA1261285A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp | |
| Fruit et al. | Trypanosoma cruzi: location of a specific antigen on the surface of bloodstream trypomastigote and culture epimastigote forms | |
| US4746612A (en) | Aotus interspecies hybridomas and monoclonal receptors produced thereby | |
| Gotanda et al. | Characterization of monoclonal antibodies against the second-generation schizonts of Leucocytozoon caulleryi | |
| CA1261286A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of eimeria spp | |
| World Health Organization | Immunology and parasitic diseases: report of a WHO expert committee, Ibadan, 8-15 December 1964 | |
| SAM-YELLOWE | IDENTIFICATION AND IMMUNOLOGICAL CHARACTERIZATION OF PROTEINS OF PLASMODIUM CHABAUDI MEROZOITES WHICH MEDIATE ERYTHROCYTE BINDING (SURFACE RADIOIODINATION, IMMUNOBLOT, RADIOIMMUNOPRECIPITATION) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: AMERICAN CYANAMID COMPANY |