FI82263B - Produkter som aer anvaendbar i kosmetiska sammansaettningar och framstaellningen av produkten. - Google Patents

Description

1 82263

Kosmeettisissa koostumuksissa käytettävä tuote ja sen valmistus

Jakamalla erotettu patenttihakemuksesta nro 802690 5

Keksintö koskee kosmettisissa koostumuksissa käytettävää tuotetta ja menetelmää sen valmistamiseksi.

Keksinnön mukaiselle tuotteelle on tunnusomaista, että sen ainoana aineosana tai pääaineosana on uuden kan-10 nan eli Trichosporon kashiwayama -kannan [tallennettu talletuslaitokseen Fermentation Research Institute (FRI), 1-3, Higashi 1-chome, Yatabe-machi, Tsukuba-gun, Ibaraki-ken 305, Japan, tallennenumerolla FERM 4821, joka talletus on muutettu Budapestin sopimuksen mukaiseksi talle-15 tukseksi FERM BP-333], joka on tunnistettavissa sukuun

Geotricum tai Endomycopsis kuuluvaksi kannaksi, viljely-tuote tai viljelyneste, mainitun viljelytuotteen tai vil-jelynesteen steriili neste, steriili suodos tai steriili supernatantti, joista solut on poistettu, tai niiden kon-20 sentraatti tai kuivatuote.

Keksinnön mukaista uutta tuotetta käytetään tehoaineena kosmeettisissa koostumuksissa, jolloin se sekoitetaan kantajaan, kuten tavanomaiseen ihovoiteeseen tai voideperusaineeseen.

25 Käsiteltävänä olevassa keksinnössä käytetty mikro- organismi eli Trichosporon kashiwayama katsotaan kuuluvaksi hiivoihin, mutta joskus tämä kanta luokitellaan fungi imperfectiksi. Näkemys, että kanta on tunnistettavissa sukuun Geotricum tai Endomycopsis kuuluvaksi kan-30 naksi, perustuu alan asiantuntijoiden tieteelliseen käsi tykseen.

Keksinnössä käytettävä kanta tunnetaan siitä, että kannan fermentointituotteella, so. kannan viljelynesteen supernatantilla on sellaisenaan erinomainen vaikutus ih-35 misen ihoon. Vaikutuksen omaavaa tehoainetta ei toistaiseksi tunneta. Mutta käytettäessä ihoon kannan viljely-nesteen steriiliä supernatanttia tai konsentraattia tai kuivatuotetta sellaisenaan tai sekoitettuna asianomaiseen 2 82263 kantajaan ihmisen iholle sopivan valmisteen, kuten voiteen muodossa, mm. seuraavat vaikutukset ovat saavutettavissa.

1. Fermentointineste on lievästi hapan (pH-arvo 5 4,5-5,0) ja myrkytön iholle sekä edistää rasvakelmun ihoa suojaavaa vaikutusta.

2. Keratiinin liiallinen kuoriutuminen sarveisker-roksesta estyy ja samalla sarveiskerroksen vesipitoisuus säilyy normaalina. Siten ihon luontaiset ominaisuudet, 10 kuten kosteus ja kimmoisuus säilyvät hyvinä.

Kuten oheisista piirustuksissa ilmenee, käsiteltävänä olevassa keksinnössä käytettävä kanta tunnetaan siitä, että sillä on helmimäisiä artrosporeja ja pseudomy-seelejä.

15 Oheisista piirustuksista näkyy käsiteltävänä ole vassa keksinnössä käytettävän Trichosporon kashiwayama -kannan kasvu perunauute-agarielatusaineella viljeltäessä vinopinnalla kolme vuorokautta 25°C:ssa. Kuvio 1 on mik-roskooppivalokuva (suurennus 75 x) ja se esittää artros-20 porien takertumistapaa hyyfisoluihin aerobisissa olosuhteissa. Kuviosta 1 nähdään, että artrosporit eivät takerru konidioforeihin, vaan leviävät sivusuunnassa ketjuina hyyfisolujen väliseinäkohdista. Kuvio 2 on suurennettu mikroskooppivalokuva (suurennus 300 x) ja se esittää art-25 rosporeja. Kuvio 3 on mikroskooppivalokuva (suurennus 300 x) ja esittää soluja ja niiden kuroutumista anaerobisissa olosuhteissa.

Seuraavassa kuvataan käsiteltävänä olevassa keksinnössä käytetyn Trichosporon kashiwayama -kannan (tal-30 lennettu FRI:hin tallennenumerolla 4821) mykologisia ominaisuuksia.

(1) Morfologiset ominaisuudet 1) Muoto ja koko (mallasuute-MY-neste-elatusalus- ta): 35 Kun oli viljelty kolme vuorokautta 25°C:ssa, ha vaittiin soluja, jotka olivat suorakaiteen tai soikion muotoisia ja kooltaan (3-4 pm) x (3-20 pm). Jatkettaessa viljelyä viisi vuorokautta tai enemmän solujen muoto tuli 3 82263 säännöttömäksi ja lopuksi solut tulivat myseelimäisiksi.

2) Pseudomyseelien muodostuminen (vinopintaviljelmä perunauute-agarielatusalustalla):

Solut ovat pseudohyyfisiä tai pseudomyseelisiä ja 5 niissä on tunnusomaisia mutkittelevia artrosporeja, mutta ei konidioita.

3) Ascosporit: Soluissa ei ole ascosporeja.

4) Ballistosporit: Soluissa ei ole ballistosporeja.

(2) Elatusalustojen tunnusomainen ulkonäkö 10 1) Pesäke agaripintalevityselatuslustalla (mallas- uute-MY-agarielatusalusta):

Himmeä, valkoinen, ripsekäs, karhea pinta, hyvin pehmeä, ei koholla, vaan litteä, periferiassa kilioita.

2) Kalvo neste-elastusalustalla (mallasuute-MY-nes-15 te-elatusalusta):

Muodostuu valkoinen, ripsekäs, flokkuloiva ja sitkeä kalvo.

(3) Fysiologiset ominaisuudet 1) Sakkaridi fermentointi: 20 Kanta ei fermentoi glukoosia, galaktoosia, sakka roosia, laktoosia, trehaloosia, raffinoosia tai inuliinia.

2) Sakkaridien käyttö (yhteyttäminen) D-glukoosi+, D-galaktoosi+, maltoosi-, raffinoo- si-, sakkaroosi-, laktoosi-, natriumlaktaatti+, D-ksyloo-25 si+, erytritoli-, D-mannitoli+, L-sorboosi+, inositoli-, trehaloosi-, D-arabinoosi-, L-arabinoosi-, natriumsukki-naatti+, natriumsirtraatti+, natriumasetaatti+, inulii-ni-, liukeneva tärkkelys-, etanolin-, glyserolin-, sellobi-oosi-.

30 Huom. n- - käytetään, - * ei käytetä.

3) Nitraattien käyttö: Ei käytetä.

4) Nitriittien käyttö: Ei käytetä.

5) Etyyliamiinihydrokloridin käyttö: Ei käytetä.

6) Glykosidin (arbutiinin) hajotus: Hajoaa.

35 7) Tärkkelysanalogien mudoostus: Eivät muodostu.

8) Pigmentin muodostus: Ei muodostu.

4 82263 9) Esterien muodostus: Muodostuvat.

10) Lakmus-maitoreaktio: Ei koaguloidu.

11) Vitamiinien tarve: Ei tarvetta.

12) Suolankestävyys: Kriittinen konsentraatio 6-8 5 paino/tilavuus-%.

13) Optimilämpötila: 25°C.

14) Optimaalinen pH-arvo: 5,0.

15) Urean hajotus: Ei hajoa.

16) Kasvu 50 paino/paino-%:11a glukoosi-agari- tai 10 60 paino/paino-%:11a hiivauute-agarielatusalustalla: Ei kasvua.

17) Kasvu 37°C:ssa: Ei kasvua.

18) Hapon muodostus glukoosista: Ei muodostu.

19) Sykloheksamidin kestävyys: Kestää.

15 20) öljyn ja rasvan hajotus: Hajoavat.

(4) Muut mykologiset ominaisuudet 1) Tuoksun muodostus: Käsiteltävänä oleva kanta tunnetaan siitä, että muodostaa tuoksukomponentin. Kaasukromatografisesti todet-20 tiin, että tuoksukomponentti koostui pääasiassa etanolista, etyyliasetaatista, isopropyylialkoholista, isopropyy-liasetaatista, isobutyylialkoholista, isobutyyliasetaatis-ta, isoamyylialkoholista ja isoamyyliasetaatista. Tuoksu on ns. omenantuoksu. Tunnettuihin hiivoihin verrattuna 25 käsiteltävänä oleva kanta tunnetaan siitä, että tuoksun muodostuksessa ei vain korkeimpien alkoholien osuus vaan myös niiden esterien osuus on suuri.

Näiden neutraalien tuoksuaineosien muodostumisen optimiolosuhteet ovat seuraavat: 30 a) Alussa pH-arvo on 4,0 - 5,0 ja matala pH-arvo ylläpidetään fermentoinnin aikana.

b) Elatusalustan kokonaistyppitoisuus on 400-500 mg/1.

Epäorgaanisen typen lähteenä käytetään mieluiten 35 ammoniumsulfaattia, ammoniumnitraatia ja ammoniumkloridia

II

5 82263 ja orgaanisen typen lähteenä käytetään mieluiten hiivauutetta, kasaminohappoa ja peptonia. Lisäksi saavutetaan hyviä tuloksia lisäämällä aminohappoja, kuten leusiinia, isoleusii-nia, valiinia ja fenyylialaniinia.

5 c) Hiililähteiden valinta:

Sopivia ovat glukoosi, galaktoosi, etanoli ja glyseroli. Suositeltavat sakkaridikonsentraatio on 5 %.

d) Solujen ymppäysmäärä on 1-2 %.

e) Viljelylämpötila on 25-30°C.

10 Stationaarinen viljelmä on suositeltava.

2) Orgaanisten happojen muodostus:

Glukoosista muodostuu muurahaishappoa, propionihappoa, n-voihappoa, meripihkahappoa ja sitruunahappoa.

Ihovalmisteen valmistuksessa käytettävän keksinnön 15 mukaisen Trichosporon kashiwayma -kannan viljelyssä voidaan käyttää tavanomaisia hiivaelatusalustoja. Erään suositeltavan toteuttamismuodon mukaan ravistelu- tai stationaarinen viljely suoritetaan 20-30°C:ssa n. 24 tuntia kiinteässä tai nestemäisessä elatusalustassa, jossa on 0,3 paino/tilavuus-% 20 glukoosia, 0,5 paino/tilavuus-% kuorittua maitoa ja 0,05 paino/tilavuus-% hiivauutetta ja jonka pH-arvo on 4,0 - 6,0. Sama elatusalusta ympätään muodostuneella viljelytuotteella ja stationaarinen viljely tai ravisteluviljely suoritetaan 3-7 vuorokautta 20-30°C:ssa.

25 Käyttäen tavanomaisia menetelmiä viljelyneste suoda tetaan ja solut poistetaan esim. membraanisuodattamalla ja soluton supernatantti konsentroidaan esim. vakuumissa kon-sentraatiokertoimen ollessa mieluiten 4-25. Muodostunut kon-sentraatti steriloidaan tavanomaisin menetelmin ja varastoiko daan huoneen lämpötilassa tai jääkaapissa.

Käsiteltävänä olevan keksinnön mukaan valmistetun soluttoman supernatantin näytteellä oli taulukossa 1 esitetyt ominaisuudet: 6 82263

Taulukko 1 Käsiteltävänä olevan kannan viljelytuotteen superna-tantin soluton, puhdistettu suodos sisältää pieniä määriä aminohappoja, sakkarideja ja lipidejä. Suodoksen kvantita-5 tiivisen määrityksen mukaan kokonaistyppipitoisuus on 0,005 - 0,015 % ja kokonaisfosforipitoisuus 0,004 - 0,014 %.

1. Ulkonäkö ja olotila:

Suodos on väritön tai hieman kellertävä, läpinäkyvä neste ja tuoksuu heikosti.

10 2. Toteamiskokeet: 1) Haihdutetaan vesihauteella 20 ml suodosta tilavuuteen n. 5 ml. Sitten konsentraattiin lisätään 1 ml ninhyd-riinireagenssiliuosta. Kuumennettaessa seosta 30 minuuttia, neste värjäytyy violetiksi.

15 2) Konsentraattiin, joka saadaan haihduttamalla sa malla tavoin kuin yllä kohdassa 1), lisätään 5 ml typpihappoa ja seosta keitetään 20 minuuttia. Seoksen jäähdyttämisen jälkeen se neutraloidaan 10 %:lla natriumhydroksidiliuok-sella. Sitten seokseen lisätään 2 ml ammoniummolybdaatti-20 reagenssiliuosta. Seosta kuumennettaessa neste muuttuu kellertäväksi. Lisättäessä nesteeseen 10-%:ista natriumhydrok-sidiliuosta, se muuttuu värittömäksi.

3) Suodokseen lisätään 10 mg indolia ja 2 ml kloori-vetyhappoa ja seosta ravistellaan riittävästi. Kuumennettaes-25 sa sitten seosta 10 minuuttia neste muuttuu punaiseksi.

3. Fysikaaliset ominaisuudet: 1) Tiheys d^: 1 ,000 - 1,015 2) Taitekerroin nj^: 1,330 - 1,340 3) pH 25°C:ssa: 4,5 - 5,5 30 4. Haihdutusjäännös: 0,5 - 2,0 %.

Käsiteltävänä olevan keksinnön mukaisen soluttoman supernatantin konsentraatin (kaksinkertainen konsentraatio) näytteen analyysiarvot ilmenevät taulukosta 2.

7 82263

Taulukko 2

Vesipitoisuus (normaalipaineessa kuivauksen jälkeen): 98,7 % Proteiinipitoisuus (kerroin 6,25): jälkiä Lipidipitoisuus (soxhlet-uuton jälkeen): 0,2 % 5 Kuitupitoisuus: 0 %

Tuhkapitoisuus: 0,1 %

Sokeripitoisuus 1,0 %

Kokonaiskiintoainepitoisuus*: 1,3 %

Aminomuotoisen typen pitoisuus: 10 mg-% 10 Titrattu happamuus**: 0,6

Haihtuvan emäksen muotoisen typen pitoisuus: 1 mg-% Arseenipitoisuus (As20:na): ei todettu (toteamisraja 0,1 ppm) Raskasmetallipitoisuus (Pb:nä): ei todettu (toteamisraja 1 ppm) 15 Kokonaiselohopeapitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 ppm) Kadmiumpitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 ppm) Kalsiumpitoisuus: 14,7 mg-%

Fosforipitoisuus: 9,8 mg-%

Muurahaishappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,1 %) 20 Etikkahappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 %) Voihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 %) : Maitohappopitoisuus: 0,06 %

Sitruunahappopitoisuus: 0,02 %

Elävien solujen määrä: alle 30 solua/ml 25 E.coli: (-)

Staphylococcus aureus: (-)

Sienien määrä: (-)/ml

Hiivojen määrä: (-)/ml

Propionihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,02 g/kg) 30 Sorbiinihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,005 g/kg) Bentsoehappopitoisuus: 0,42 g/kg p-hydroksibentsoehappoesteripitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,005 g/kg)

Bj-vitamiinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 mg-%) 35 B2-vitamiinipitoisuus: 0,02 mg-% β 82263 C-vitamiinin kokonaispitoisuus: ei todettu (toteamisraja 2 mg-%)

Bg-vitamiinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 5 ^ug-%) 2-vitarniinipitoisuus · ei todettu (toteamisra ja 0,05 ^ug-%) 5 Pantoteenihappopitoisuus: 0,09 mg-%

Koliinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,03 %) Foolihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 1 ^,ug-%) Niasiinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,03 mg-%) Kokonaiskaroteenipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,02 mg-%) 10 pH-arvo: 4,9

Aminohappokoostumus***:

Arginiini: alle 0,01 Lysiini: alle 0,01 Histidiini: alle 0,01 15 Fenyy1ialaniini: alle 0,01 Tyrosiini: alle 0,01 Leusiini: alle 0,01 Isoleusiini: alle 0,01 Metioniini: alle 0,01 20 Väliini: alle 0,01 Alaniini: alle 0,01 Glysiini: alle 0,01 Proliini: alle 0,01 Glutamiinihappo: 0,01 25 Seriini: alle 0,01 Treoniini: alle 0,01 Asparagiinihappo: alle 0,01 Tryptofaani: alle 0,01 Kystiini: alle 0,01 30 Huom.

* = prosenttiarvo laskettu vedestä ** = ml 1-n alkaliliuosta neutraloitaessa titraamalla 100 g näytettä *** = g aminohappoa/100 g näytettä (kystiini: permuurahais-35 happo-hapetusmenetelmä, tryptofaani: mikro-organismi- määritys) 9 82263

Solutonta, steriiliä supernatanttia voidaan tietenkin konsentroimattomanakin käyttää kosmeettisena tuotteena, kuten ihovalmisteena. Mutta varastoinnin ym. kannalta on suositeltavaa konsentroida soluton, steriili supernatantti. Li-5 säksi voidaan käyttää voimakkaasti väkevöityä (yli 25-ker-tainen konsentraatio) konsentraattia tai kuivatuotetta. Tällaista konsentraattia, voimakkaasti väkevöityä konsentraattia tai kuivatuotetta voidaan käyttää sellaisenaan ihoval-misteina. Lisäksi voidaan valmistaa käsiteltävänä olevan 10 keksinnön mukainen ihovalmiste sekoittamalla konsentraattia, voimakkaasti väkevöityä konsentraattia tai kuivatuotetta sekä voidetta, voideperusainetta tai muuta kantajaa.

Analysoitaessa konsentraattia, joka on saatu konsentroimalla nelinkertaisesti yllä kuvattua solutonta, ste-15 riiliä supernatanttia, voidaan havaita sen sisältävän erilaisia aminohappoja ja vitamiineja. Mutta koska analyysi on yleisluonteinen on helposti ymmärrettävissä, että sekoittamalla ko. komponentit saatujen analyysiarvojen perusteella ei voida valmistaa käsiteltävänä olevan keksinnön 20 mukaista tuotetta. Toisin sanoen uskotaan, että käsiteltävänä olevan keksinnön mukaisen tuotteen teho johtuu analyy-: sin ulkopuolelle jäävistä tuntemattomista komponenteista.

Tulokset kananpojan sikiöllä suoritetusta myrkylli-syyskokeesta osoittavat, että yllä mainittu soluton sterii-25 li konsentraatti (nelinkertainen konsentraatio) ja myrkytön. Lisäksi tulokset ihmiskehon laastarikokeesta ja ihmisihon jatkuvasta ärsytyskokeesta osoittavat, että konsentraatti ei vähimmässäkään määrin ole myrkyllinen ihmisen iholle. Lisäksi tulokset kanin silmän ärsytyskokeesta osoittavat, että 30 konsentraatti ei vähimmässäkään määrin ärsytä. Ja lopuksi tulokset antibioottikokeesta osoittavat, että konsentraatti ei sisällä antibioottista ainetta.

Esimerkki 1 1 000 litran ilmastettuun ja sekoitettuun fermentoin-35 titankkiin panostettiin 800 1 elastusalustaa, jonka koostumus 10 82263 on kuvattu yllä, ja lämpösteriloinnin ja itsestään jäähtymisen jälkeen tämä elatusalusta ympättiin viljelmällä, joka oli aikaisemmin saatu viljelemällä 28°C:ssa n. 30 tuntia 10 litrassa samaa elatusalustaa pienessä ilmastetussa ja 5 sekoitetussa fermentointitankissa. Fermentoinnin päätyttyä viljelyneste valutettiin suodatuskoneen malli MP 293-16, valmistaja Naigai Shokuhin Kogyo Kabushiki Kaisha (suodatinpaperi GL-90, 0,5 pm, valmistaja Toyo Roshi) läpi ja suodatuskoneen malli MP 293-4, valmistaja sama yhtiö (mem-10 braanisuodatin TM-2, 0,45 pm, valmistaja Toyo Roshi) läpi kiintohiukkasten ja solujen poistamiseksi. Saatu suodos konsentroitiin käänteisosmoosimembraanimenetelmän mukaan käyttäen käänteisosmoosilaitetta malli RO-T10, valmistaja Bioengineering Co, jolloin tilavuus väheni 200 litraksi.

15 Saatu konsentraatti steriloitiin levylämmönvaihtimessa (valmistaja Iwai Kikai Kogyo Kabushiki Kaisha) pakattiin sterii-listi lasiastioihin ja varastoitiin jääkaapissa (5°C).

Esimerkki 2

Esimerkissä 1 saatu steriloitu konsentraatti pakkas-20 kuivattiin ja saatu jauhe sekoitettiin steriiliin voideperus-aineeseen ihovoiteen saamiseksi.

Esimerkki_3

Valmistettiin kosmeettinen tuote sekoittamalla 1 g esimerkissä 1 saatua steriloitua konsentraattia kosmeetti-25 seen voideperusaineeseen, jossa oli 1 g steariinihappoa, 7 g mehiläisvahaa, 4 g itsestään emulgoituvaa glyserolimono-stearaattia, 30 g nestemäistä parafiinia, 0,1 g vesipitoista lanoliinia ja 40 g puhdistettua vettä ja vatkaamalla seos tavanomaisin menetelmin. Koostumus kaadettiin ja pakat-30 tiin ampulleihin ja pakatut ampullit markkinoitiin.

Esimerkki 4 :: Valmistettiin ihonhoitovalmiste sekoittamalla 0,001 - 1 g pyridoksiinihydrokloridia, 0,001 - 1 g Y-orytsanolia, 0,001 - 1 g ailantoi inia, 0,01 - 1 g Dl-OC-tokoferolia (E-vi-y’ 35 tamiinia) ja 0,01 - 1 g minkkiöljyä 100 g:aan esimerkissä : 3 valmistettua koostumusta.

Claims (5)

11 82263

1. Ulkonäkö ja olotila: Suodos on väritön tai hieman kellertävä, läpinäky-25 vä neste ja tuoksuu heikosti;

1. Kosmeettisissa koostumuksissa käytettävä tuote, tunnettu siitä, että sen ainoana aineosana tai 5 pääaineosana on uuden kannan eli Trichosporon kashiwayama -kannan (tallennettu FRIrhin tallennenumerolla FERM 4821), joka on tunnistettavissa sukuun Geotricum tai En-domycopsis kuuluvaksi kannaksi, viljelytuote tai viljely-neste, mainitun viljelytuotteen tai viljelynesteen ste-10 riili neste, steriili suodos tai steriili supernatantti, joista solut on poistettu, tai niiden konsentraatti tai kuivatuote.

2. Toteamiskokeet: (1) Haihdutetaan vesihauteella 20 ml suodosta tilavuuteen n. 5 ml. Sitten konsentraattiin lisätään 1 ml ninhydriinireagenssiliuosta. Kuumennettaessa seosta 30 30 minuuttia, neste värjäytyy violetiksi; (2) Konsentraattiin, joka saadaan haihduttamalla samalla tavoin kuin yllä kohdassa 1), lisätään 5 ml typpihappoa ja seosta keitetään 20 minuuttia. Seoksen jäähdyttämisen jälkeen se neutraloidaan 10 %:lla natriumhyd- 35 roksidiliuoksella. Sitten seokseen lisätään 2 ml ammo-niummolybdaattireagenssiliuosta. Seosta kuumennettaessa i2 82263 neste muuttuu kellertäväksi. Lisättäessä nesteeseen 10-%:ista natriumhydroksidiliuosta, se muuttuu värittömäksi;

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen tuote, tunnettu siitä, että sen ainoana aineosana tai pääaine- 15 osana on Trichosporon kashiwayama -kannan FERM 4821 steriili supernatantti, jolla on seuraavat ominaisuudet: Käsiteltävänä olevan kannan viljelytuotteen super-natantin soluton, puhdistettu suodos sisältää pieniä määriä aminohappoja, sakkarideja ja lipidejä; Suodoksen 20 kvantitatiivisen määrityksen mukaan kokonaistyppipitoi suus on 0,005 - 0,015 % ja kokonaisfosforipitoisuus 0,004 - 0,014 %;

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen tuote, tunnettu siitä, että sen ainoana aineosana tai pääaine-15 osana on Trichospron kashiwayama -kannan FERM 4821 kon- sentraatti, jolla on seuraavat analyysiarvot, kun kon-sentraatti muodostetaan konsentroimalla kaksinkertaisesti: Vesipitoisuus (normaalipaineessa kuivauksen jälkeen): 20 98,7 % Proteiinipitoisuus (kerroin 6,25): jälkiä Lipidipitoisuus (soxhlet-uuton jälkeen): 0,2 % Kuitupitoisuus: 0 % Tuhkapitoisuus: 0,1 %

25 Sokeripitoisuus 1,0 % Kokonaiskiintoainepitoisuus*: 1,3 % Aminomuotoisen typen pitoisuus: 10 mg-% Titrattu happamuus**: 0,6 Haihtuvan emäksen muotoisen typen pitoisuus: 1 mg-%

30 Arseenipitoisuus (As20:na): ei todettu (toteamisraja 0,1 ppm) Raskasmetallipitoisuus (Pb:nä): ei todettu (toteamisraja 1 ppm) Kokonaiselohopeapitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 35 ppm) Kadmiumpitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 ppm) i3 82263 Kalsiumpitoisuus: 14,7 mg-% Fosforipitoisuus: 9,8 mg-% Muurahaishappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,1 %) Etikkahappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 %)

5 Voihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 %) Maitohappopitoisuus: 0,06 % Sitruunahappopitoisuus: 0,02 % Elävien solujen määrä: alle 30 solua/ml E.coli: (-)

10 Staphylococcus aureus: (-) Sienien määrä: (-)/ml Hiivojen määrä: (-)/ml Propionihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,02 g/kg)

15 Sorbiinihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,005 g/kg) Bentsoehappopitoisuus: 0,42 g/kg p-hydroksibentsoehappoesteripitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,005 g/kg)

20 B1-vitamiinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,01 mg- %) B2-vitamiinipitoisuus: 0,02 mg-% C-vitamiinin kokonaispitoisuus: ei todettu (toteamisraja 2 mg-%)

25 B6-vitamiinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 5 pg-%) B12-vitamiinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,05 pg-%) Pantoteenihappopitoisuus: 0,09 mg-% Koliinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,03 %)

30 Foolihappopitoisuus: ei todettu (toteamisraja 1 pg-%) Niasiinipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,03 mg-%) Kokonaiskaroteenipitoisuus: ei todettu (toteamisraja 0,02 mg-%) pH-arvo: 4,9

35 Aminohappokoostumus***: Arginiini: alle 0,01 14 82263 Lysiini: alle 0,01 Histidiini: alle 0,01 Fenyylialaniini: alle 0,01 Tyrosilni: alle 0,01 5 Leusiini: alle 0,01 Isoleusiini: alle 0,01 Metioniini: alle 0,01 Vallini: alle 0,01 Alaniini: alle 0,01 10 Glysiini: alle 0,01 Proliini: alle 0,01 Glutamiinihappo: 0,01 Seriini: alle 0,01 Treoniini: alle 0,01 15 Asparagiinihappo: alle 0,01 Tryptofaani: alle 0,01 Kystiini: alle 0,01 jolloin huomautuksilla on seuraavat mekritykset: * : prosenttiarvo laskettu vedestä 20 ** : ml 1-n alkaliliuosta neutraloitaessa titraamalla 100. näytettä *** : g aminohappoa/100 g näytettä (kystiini: permuura-haishappo-hapetusmenetelmä, tryptofaani: mikro-organismi määritys).

3. Fysikaaliset ominaisuudet: (1) Tiheys d^: 1,000 - 1,015 (2) Taitekerroin n*5: 1,330 - 1,340 10 (3) pH 25°C: ssa: 4,5 - 5,5

3. Suodokseen lisätään 10 mg indolia ja 2 ml kloo-rivetyhappoa ja seosta ravistellaan riittävästi. Ruumen-5 nettaessa sitten seosta 10 minuuttia neste muuttuu punaiseksi .

4. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 mukaisen tuot teen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että sen ainoa aineosa tai pääaineosa saadaan viljelemällä Tricho-sporon kashiwayama -kannan FERM 4821 elatusalustan pinnalla tai elatusalustassa pH-arvossa 4,0-6,0 ja lämpöti-30 lassa 20-30°C viljelytuotteen tai viljelynesteen saamiseksi, valinnaisesti poistetaan solut mainitusta viljely-nesteestä soluttoman, steriilin nesteen, steriilin suo-doksen tai steriilin supernatantin saamiseksi ja valinnaisesti konsentroidaan tai kuivataan mainittu steriili 35 neste, steriili suodos tai steriili supernatantti, joista solut on poistettu. i5 82263

4. Haihdutusjäännös: 0,5 - 2,0 %.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että elatusalusta muodostuu glukoosista, kuoritusta maidosta ja hiivauutteesta ja että kantaa viljellään aerobisissa olosuhteissa. 5 16 82263