FI81914C - Lipidvesikel innehaollande detekterbart maerkningsaemne och dess anvaendning vid analys. - Google Patents
Lipidvesikel innehaollande detekterbart maerkningsaemne och dess anvaendning vid analys. Download PDFInfo
- Publication number
- FI81914C FI81914C FI860395A FI860395A FI81914C FI 81914 C FI81914 C FI 81914C FI 860395 A FI860395 A FI 860395A FI 860395 A FI860395 A FI 860395A FI 81914 C FI81914 C FI 81914C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- analyte
- dye
- bag
- sulforhodamine
- indicator
- Prior art date
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 13
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 47
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 25
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 25
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical group C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 10
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 40
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 33
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 25
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 23
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 19
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 7
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 7
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 alkyl phosphates Chemical class 0.000 description 6
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 6
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 6
- LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QZKRHPLGUJDVAR-UHFFFAOYSA-K EDTA trisodium salt Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O QZKRHPLGUJDVAR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 3
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- HGUFODBRKLSHSI-UHFFFAOYSA-N 2,3,7,8-tetrachloro-dibenzo-p-dioxin Chemical compound O1C2=CC(Cl)=C(Cl)C=C2OC2=C1C=C(Cl)C(Cl)=C2 HGUFODBRKLSHSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027324 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 101001009252 Homo sapiens 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Proteins 0.000 description 2
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 2
- NQYKSVOHDVVDOR-UHFFFAOYSA-N n-hexadecylhexadecan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCNCCCCCCCCCCCCCCCC NQYKSVOHDVVDOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-LHHVKLHASA-N quinidine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@H]2[C@@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-LHHVKLHASA-N 0.000 description 2
- 239000001022 rhodamine dye Substances 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N (5alpha)-cholestan-3beta-ol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N 0.000 description 1
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POWMMMXVDBMFMP-IYGQVCONSA-N 3-[(5r,10s,12r,13s,14s,17r)-12,14-dihydroxy-10,13-dimethyl-3-oxo-2,4,5,6,7,8,9,11,12,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2h-furan-5-one Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)C2C([C@@]4(C)CCC(=O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 POWMMMXVDBMFMP-IYGQVCONSA-N 0.000 description 1
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N PG(18:0/18:0) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- CKWSVTLNFBGMKR-UHFFFAOYSA-N [4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl] butanoate Chemical compound C1=CC(OC(=O)CCC)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O CKWSVTLNFBGMKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLLNINGEDIOQGQ-UHFFFAOYSA-N [acetyloxy(hydroxy)phosphoryl] acetate Chemical compound CC(=O)OP(O)(=O)OC(C)=O XLLNINGEDIOQGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N alpha-cholestanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000003416 antiarrhythmic agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 239000004121 copper complexes of chlorophylls and chlorophyllins Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N dimethyl(dioctadecyl)azanium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 1
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- XTAZYLNFDRKIHJ-UHFFFAOYSA-N n,n-dioctyloctan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCN(CCCCCCCC)CCCCCCCC XTAZYLNFDRKIHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N phenobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002695 phenobarbital Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229960001404 quinidine Drugs 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- RSPCKAHMRANGJZ-UHFFFAOYSA-N thiohydroxylamine Chemical compound SN RSPCKAHMRANGJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 229960000707 tobramycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/80—Fluorescent dyes, e.g. rhodamine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/829—Liposomes, e.g. encapsulation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
1 81914
Todettavissa olevaa merkkiainetta sisältävä lipidirakkula ja sen käyttö analyysissä Tämä keksintö kohdistuu immuunianalyysissa käytet-5 tävään yhdistelmään ja menetelmään immuunianalyysin suorittamiseksi .
Lipidirakkuloita, jotka sisältävät todettavissa olevaa merkkiainetta, on käytetty ligandin (analyytin) analysoimiseksi. Tyypillisessä analyysissä määritettävä 10 ligandi (analyytti) ja indikaattori sisältyvät todettavissa olevaa merkkiainetta käsittävään pussiin, joka merkkiaine on herkistetty analyytillä tai sen sopivalla analogilla ja joka on käyttökelpoinen kilpailemaan analyytin sideaineessa olevien sidoskohtien rajoitetun lukumäärän 15 kanssa. Indikaattorin määrä, joka sitoutuu sideaineeseen, on kääntäen verrannollinen näytteessä olevan analyytin määrään. Sidottujen ja vapaiden indikaattorikomponenttien erottamisen jälkeen sidottujen ja/tai vapaiden indikaattorien määrä havaitaan määräämällä todettavissa oleva 20 merkkiaine näytteen sidotusta ja/tai vapaasta indikaat-toriosuudesta, mikä määrittää näytteessä, olevan analyytin.
Useissa tapauksissa kuitenkin todettavissa olevaa merkkiainetta sisältävät pussit eivät ole riittävän sta-25 biileja, vaan merkkiaine "vuotaa" pusseista ennen analyysiä tai sen aikana, mikä rajoittaa näiden pussien käyttökelpoisuutta analyysissä. Termillä "vuotaa" tässä käytettynä tarkoitetaan joko että materiaalia poistuu ehjästä pussista tai että materiaalia poistuu pussin rikkoutumisen 30 tuloksena.
Pyrittäessä käyttämään absorboivia väriaineita pussissa sen vaikeuden lisäksi, joka aiheutuu väriaineen vuotamisesta tai pussin rikkoutumisesta, eivät absorboivat väriaineet muodosta riittävää signaalia, joka voitaisiin 35 lukea yksinkertaisena laitteiston avulla riittävällä tark kuudella ja varmuudella.
2 81914 Tämän tuloksena esiintyy tarve saada parannettuja pusseja, jotka sisältävät todettavissa olevaa merkkiainetta.
Esillä oleva keksintö koskee yhdistelmää, jolle on 5 tunnusomaista, että se käsittää lipidirakkulan, joka sisältää absorboivana väriaineena sulforodamiinia, jonka ekstinktiokerroin on vähintään 100 000 ja jonka liukoisuus veteen on vähintään 0,1 M.
Väriaine, jota sisältyy ilmastaistavana merkkiai-10 neena pussiin, on myös nettovarauksen omaava väriaine, joko negatiivisen tai positiivisen nettovarauksen, edullisesti negatiivisen nettovarauksen omaava väriaine. Väriaineen varaus on edullisesti sama kuin pussin muodostavan materiaalin, koska tällaiset identtiset varaukset avus-15 tavat pussista tapahtuvan vuodon estämisessä. Lisäksi väriaine on edullisesti sellainen, joka ionisoituu täydellisesti pH-arvossa 5-9.
Nyt on havaittu, että absorboiva väriaine, joka omaa nämä ominaisuudet, aiheuttaa parantuneen stabiiliuden 20 sikäli, että väriaine ei pyri vuotamaan pussin sisäosasta. Lisäksi käytettynä analyytin analyysissä tällaista väriainetta sisältävä pussi parantaa analyysin herkkyyttä.
Erikoisen edullisen toteutuksen mukaan absorboiva väriaine, jota on lisätty pussin sisälle, on sulforoda-25 miini B väriaine ja erikoisesti sulforodamiini joko vapaana happona tai suolana, esimerkiksi natrium-, litium-, kalium-, ammonium-suolana jne.
Yleensä väriainetta lisätään pussiin vähintään 0,001 M ja edullisesti vähintään 0,05 M olevana pitoisuu-30 tena. Väriaineen pitoisuus pussissa ei ylitä väriaineen liukoisuutta veteen.
Esillä olevan keksinnön seuraavan kohdan mukaan pussi, joka sisältää edellä esitettyä tyypiä olevaa väriainetta, on herkistetty ligandilla, joka on joko antigee-35 ni, hapteeni tai vasta-aine.
3 81914
Esillä olevan keksinnön vielä erään suoritusmuodon mukaan pussia, joka sisältää absorboivaa väriainetta, kuten edellä on esitetty, käytetään analyytin analyysissä. Absorboivaa väriainetta sisältävää pussia voidaan käyttää 5 herkistetyllä ligandilla tai ilman herkistystä riippuen kulloisestakin analyysimenettelystä.
Pussi, jonka sisällä on absorboivaa väriainetta, voi olla jokin lukuisista pusseista, jotka ovat alalla yleisesti tunnettuja, mukaanluettuina polymeerimikrokapse-10 lit (esimerkiksi valmistettuina yhteiskasvatus- tai raja-pintapolymeroinnin avulla) tai rakkulamaisia pusseja, joita voidaan valmistaa lukuisista materiaaleista,edullisesti lipideistä. Jos rakkulamainen pussi koostuu lipidistä, sitä kutsutaan usein liposomiksi; kuitenkin kuten alalla 15 tiedetään, rakkuloita voidaan valmistaa amfifiilisistä komponenteistä, jotka eivät ole lipidejä. Kuten alalla tiedetään, liposomeja voidaan valmistaa lukuisista lipideistä, mukaanluettuina fosfolipidit, glykolipidit, steroidit, verrattain potkäketjuiset alkyyliesterit, esimer-20 kiksi alkyylifosfaatit, rasvahappoesterit, esimerkiksi lesitiini, rasva-amiinit ja vastaavat aineet. Rasvamate-riaalien seoksia voidaan käyttää kuten neutraalin steroidin, varatun amfifiilin ja fosfolipidin yhdistelmänä. Esimerkkeinä fosfolipideistä voidaan mainita sfingomyeliini, 25 dipalmitolyyli, lesitiini ja vastaavat aineet. Tyypillisinä steroideina voidaan mainita kolesteroli, kolestanoli, lanosteroli ja vastaavat aineet. Tyypillisinä esimerkkeinä varatuista amfifiiliyhdisteistä, jotka yleensä sisältävät 12 - 30 hiiliatomia, voidaan mainita mono- tai dialkyyli-30 fosfaattiesterit, kvaternääriset ammoniumsuolat tai alkyy-liamiini, esimerkiksi disetyylifosfaatti, distearyyliamii-ni, diheksadesyyliamiini, dilauryylifosfaatti, dioktade-syylisulfonaatti, didodekyyli-dioktyyliammoniumformamidi ja vastaavat aineet.
35 Rakkuloita voidaan valmistaa useilla menetelmillä.
a 81914 Täten esimerkiksi liposomi voidaan valmistaa käänteisen emulsiomenetelmän avulla, kuten US-patentissa no 4 235 871 on esitetty, jolloin muodostetaan vesi-öljyssä-emulsio, joka sisältää materiaaleja rakkulan muodostamiseksi 5 (yleensä fosfolipidejä) sekä rakkulaan kapseloitavaa väri ainetta, minkä jälkeen liuotin poistetaan haihduttamalla geelimäisen seoksen muodostamiseksi, joka muutetaan rakkulaksi joko sekoittamalla tai lisäämällä geelimäistä seosta veteen.
10 Toinen menettely pussin valmistamiseksi, joka si sältää kapseloitua materiaalia, on esitetty US-patenttiha-kemuksessa 650 200, päivätty 13. syyskuuta 1984 ja tätä menettelyä voidaan käyttää myös pussin valmistamiseen, joka sisältää absorboivan väriainetta keksinnön mukaises-15 ti.
Muita menetelmiä kapseloituja merkintäaineita sisältävien pussien valmistamiseksi on esitetty myös US-patentissa 4 343 826 ja PTC-julkaisussa W080/01515 ja näitä menetelmiä voidaan soveltaa esillä olevassa keksinnössä. 20 Polymeerimikrokapseleita valmistetaan alalla tunne tun menetelmän avulla paitsi, että liuos, jossa mikrokap-selit muodostetaan, sisältää myös väriainetta, jolloin väriaine on polymeerimikrokapseleiden sisällä. Näiden mik-rokapselien valmistus on esitetty esimerkiksi julkaisussa 25 "Microencapsulation Process and Applications", toimittanut
Jan. E. Vandegger, (Plenum Press 1974).
Kuten edellä mainittu, pussit, jotka sisältävät edellä esitettyä tyyppiä olevaa absorboivaa väriainetta, voidaan herkistää ligandilla. Ligandi on yleensä joko an-30 tigeeni, vasta-aine tai hapteeni ja herkistettyinä näitä pusseja voidaan käyttää analyytin analyysissä. Esimerkiksi pussit voidaan herkistää ligndilla kytkemällä ligandi pussiin useiden menettelyjen avulla, joihin kuuluvat kova-lenttikytkentä, derivatisointi, aktivointi ja vastaavat 35 menettelyt.
5 81914
Pussit voidaan kytkeä ligandiin käyttäen sopivaa kytkentä- tai erotusyhdistettä (joka ei tuhoa ligandin immunoreaktivisuutta). Kuten alalla tiedetään kytkinyhdis-teessä on kaksi reaktiivista funktionaalista ryhmää, 5 joista yksi funktionaalinen ryhmä pystyy reagoimaan tai liittymään inkikaattorin ligandiosan funktionaaliseen ryhmään ja toinen ryhmä pystyy reagoimaan tai liittymään pussin funktionaaliseen ryhmään. Esimerkiksi erotin- tai kyt-kentäyhdiste, joka sisältää vähintään kaksi reaktiivista 10 subtituenttiryhmää, voi sisältää joko karboksyyli-, isosyanaatti-, isotiosynaatti-, aminotioli-, hydroksi-, sul-fonyyli- tai karbonyylisubstituenttiryhmän jne, joka, kuten on ilmeistä, on riippuvainen toisiinsa kytkettävien ligandin ja pussien funktioaalisesta ryhmästä.
15 Vaihtoehtoisesti pussit voidaan kytkeä suoraan li gandiin. Täten esimerkiksi, jos indikaattorin ligandiosas-sa on aminosubstituoitu ryhmä ja indikaattorin pussiosassa on karbonyyli- tai karboksyylisubstituenttiryhmä, niin ligandi ja pussit voidaan liittää suoraan toisiinsa alalla 20 tunnetun menetelmän, esimerkiksi aktiivisen esterimenet-telyn avulla.
Pussit voidaan herkistää ligandilla joko kytkemällä ligandi yhteen niistä materiaaleista, joita käytetään pussien muodostamisessa tai kytkemällä ligandi pusseihin nii-25 den muodostamisen jälkeen. Tällaiset menettelyt ovat alalla yleensä tunnettuja eikä yksityiskohtien esittelyä edelleen pidetä tarpeellisena tässä suhteessa keksinnön täydellistä ymmärtämistä varten.
Kuten edellä on esitetty, pussia, joka sisältää 30 edellä esitettyä tyyppiä olevaa absorboivaa väriainetta, voidaan käyttää analyysissä analyytin määräämiseksi näytteestä. Pussi voi olla ligandista johdettu tai johtamaton.
Tapauksessa, jolloin pussi on johdettu ligandista analyytin määräämiseksi näytteestä, kutsutaan derivatisoi-35 tua pussia alalla yleensä "indikaattoriksi". Ligandi, jota 6 81914 käytetään pussin derivatisoimiseksi, on riippuvainen määrättävästä analyytistä. Täten esimerkiksi jos analyysi on kilpaileva analyysi antigeenin tai hapteenin määräämiseksi, indikaattoria muodostettaessa käytetty ligandi on 5 joko analyytti tai sen sopiva analogi (termillä "sopiva analogi" tarkoitetaan, että analyytin analogi on sidottu analyytin sideaineella).
Jos analyysi on "kerros"-tyyppinen analyysi, niin ligandi, jota käytetään indikaattoria valmistettaessa, voi 10 olla ligandi, joka on spesifinen analysoitavan analyytin suhteen; esimerkiksi vasta-aine, joka on muodostunut vasteena vasta-aineelle tai antigeenille, jota analysoidaan.
Täten, kuten on ilmeistä, ligandi, jota käytetään indikaattorin muodostamiseksi, voi olla joko antigeeni, 15 hapteeni tai vasta-aine.
Analyysissä käytetty sitova aine riippuu myös analyytistä. Täten esimerkiksi, jos analyytti on antigeeni tai hapteeni, sitova aine voi olla vasta-aine tai luonnossa esiintyvä aine, joka on analyytille spesifinen. Jos 20 analyytti on vasta-aine, sitova aine voi olla joko vasta-aine, antigeeni tai luonnossa esiintyvä aine, joka on analyytille spesifinen.
Analyysissä käytettyä sitova aine voidaan käyttää tuetussa tai tukemattomassa muodossa. Sitova aine voidaan 25 tukea useiden materiaalien avulla, jotka yleisesti tiedetään sopiviksi sitovan aineen tukiaineiksi analyysissä. Tyypillisinä esimerkkeinä näistä materiaaleista voidaan mainita polymeerit, lasiosaset, bakteerisolut, jne. Kiinteä tuki voi olla lukuisina muotoina mukaanluettuina levy-30 muoto, putkimuoto, kortti, testiliuska jne.
Täten esillä olevan keksinnön kohteena on myös menetelmä näytteessä olevan analyytin analysoimiseksi käyttämällä todettavissa olevaa merkkiainetta sisältävää lipi-dirakkulaa analyytin mittaamiseen. Analyysimenetelmässä 35 käytetty lipidirakkula, joka sisältää edellä esitettyä 7 81914 tyyppiä olevaa absorboivaa sideainetta, on todettavissa olevan merkkiaineen lähde analyysissä.
Tyypillisen analyysin mukaan näyte, joka sisältää tai jonka oletetaan sisältävän analyyttiä, inkuboidaan 5 indikaattorin kanssa, joka on analyytti tai sen sopiva analogi kytkettynä lipidirakkulaan, joka sisältää absorboivaa väriainetta ilmaistavana merkkiaineena, erikoisesti sulforodamiini B:tä tai sen suolaa ja sideainetta (spesifinen sekä analyytin että indikaattorin suhteen), joka 10 sideaine on edullisesti tuettu kiinteälle alustalle. Inku-boinnin tuloksena on kilpailu indikaattorin ja analyytin kesken sideaineen sidoskohdista, jolloin indikaattorin määrä, joka on sidottu sideaineeseen on kääntäen verrannollinen analyytin määrään näytteessä.
15 Inkubointi suoritetaan olosuhteissa, jotka estävät pussin ennenaikaisen rikkoutumisen. Tämä analyysin inku-bointiosa suoritetaan yleensä asianmukaisesti puskuroidussa vesipitoisessaväliaineessa, joka on isotoninen pussien osmolaarisuuden kanssa. Täten olosuhteita lämpötilan, pH-20 arvon ja ionipitoisuuden suhteen säädetään pussien ennenaikaisen rikkoitumisen estämiseksi. Tällöin esimerkiksi käytetään puskuroitua vesipitoista väliainetta, joka on isotoninen pussien osmolaarisuuden suhteen. Yleensä puskuri antaa suuruusluokkaa 5-9 olevan pH-arvon.
25 Sidotun ja vapaan indikaattorijakeiden eroittamisen jälkeen väriaine voidaan vapauttaa joko sidotusta ja/tai vapaasta jakeesta uuttamalla pussia alalla tunnettujen menettelyjen mukaan; esimerkiksi käyttäen detergenttiä tai entsymaattista uutosainetta rakkuloiden uuttamiseksi. Va-30 pautuneen absorboivan väriaineen määrä voidaan sitten mitata analyytin määrittämiseksi näytteestä. Täten, kuten alalla yleensä käytetään, analyysissä saatua arvoa verrataan arvoihin, jotka on saatu käyttäen identtistä menettelyä, jossa käytetään tunnettuja määriä analyyttiä (tunne-35 tut pitoisuudet omaavia standardianalyyttejä) normaalikäy- 8 81914 rän muodostamista varten, jota voidaan käyttää analyytin tuntemattomien määrien määrittämiseksi näytteestä.
Indikaattoria, joka on muodostettu pussista, johon sisältyy edellä esitettyä tyyppiä olevaa absorboivaa vä-5 riainetta, joka on herkistetty ligandilla, voidaan myös käyttää analyytin määrittämiseksi näytteestä ilman pussin uuttamista väriaineen vapauttamiseksi. Tällainen analyysi on esitetty US-patenttihakemuksessa 579 667, päivätty 14. helmikuuta 1984. Tämän menettelyn mukaan joko analyytin 10 tai indikaattorin sideainetta kinnitetään testialueelle, joka sijaitsee kiinteän alustan pinnalla, jolloin sideainetta on kiinnitetty kiinteän alustan testialueelle sellaisena pitoisuutena, että analyysissä käytetty indikaattori sidottuna sideaineeseen tai sideaineeseen sidottuun 15 alalyyttiin voidaan analyysiolosuhteissa havaita alustalla ilman muuta käsittelyä. Kuten tässä selityksessä on esitetty, suositeltava kiinteä tukialusta on selluloosaeste-riä ja nitroselluloosaa, jolloin saadaan poikkeuksellisen hyviä tuloksia.
20 Kuten täsää selityksessä on esitetty, sideaine, jota on kiinnitetty kiinteälle tukialustalle, on analyytin ja indikaattorin sideaine tai vain joko analyytin tai indikaattorin sideaine, jolloin käytettävä sideainetyyppi riippuu analyysistä, jota käytetään analyytin määrittämi-25 seen.
Eräässä tällaisessa menettelyssä sideaine, joka on kiinnitetty kiinteälle tukialustalle asianmukaisena pitoisuutena, saatettiin kosketukseen sellaisen indikaattorin kanssa, joka on edellä esitettyä tyyppiä olevaa absorboi-30 vaa väriainetta (erikoisesti sulforodamiini B:tä tai sen suolaa) sisältävä pussi, jolloin pussi oli herkistetty analyytin vasta-aineella. Indikaattorin määrä, joka on sidottu kiinteällä tukialustalle olevaan sideaineeseen analayytin välityksellä, on suoraan verrannollinen analyy-35 tin määrään näytteessä ja analyytin läsnäolo ja/tai määrä li 9 81914 näytteessä voidaan määrittää indikaattorin läsnäolon ja/-tai määrän perusteella, joka sitoutuu alustaan analyytin välityksellä. Tämän menettelyn mukaan on mahdollista määrittää visuaalisesti indikaattorin määrä tai indikaattorin 5 läsnäolo uuttamatta pussia.
Eräissä tapauksissa voi olla mahdollista käyttää pussia, joka sisältää edellä esitettyä tyyppiä olevaa absorboivaa värianetta, ilman pussin derivatisoimista; täten esimerkiksi eräässä analyysityypissä näytteessä olevaa 10 analyyttiä inkuiboidaan analyytin sideaineen kanssa, joka on tuettu kiinteälle tukialustalle ja indikaattorin kanssa, joka on analyytti tai sen sopiva analogi, joka on de-rivatisoitu entsyymiuutosaineella. Indikaattori ja analyytti kilpailevat keskenään sideaineen sidoskohdista ja 15 sidotun ja vapaan osan erottamisen jälkeen sidotun ja/tai vapaan osan voidaan antaa koskettaa rakkulaa, joka sisältää edellä esitettyä tyyppiä olevaa absorboivaa väriainetta, jolloin merkkiaineen vapautumisnopeus pussista ja/tai pussista vapautuneen merkkiaineen määrä riippuu indikaat-20 torin määrästä sidotussa ja/tai vapaassa jakeessa. Kuten . . alalla yleensä menetellään, voidaan valmistaa standardi- käyrä toistamalla analyysi analyytin tunnettujen määrien kanssa.
Siten on ilmeistä, että pussia, joka sisältää 25 edellä esitettyä tyyppiä olevaa väriainetta, voidaan käyttää lukuisissa analyyseissä ja tällaista pussia voidaan käyttää lukuisissa analyyseissä ja tällaista pussia voidaan käyttää analyysissä derivatisoimalla ligandilla tai ilman derivatisointia.
30 Analyysit voidaan suorittaa lukuisista erilaisista näytteistä. Useimmissa tapauksissa analyysi suoritetaan kehonnesteiden näytteistä, kuten seerumista, virtsasta, . . syljestä jne.
Analyysiä voidaan käyttää lukuisten analyyttien 35 määräämiseksi. Tyypillisinä esimerkkeinä analyyttityy- 10 81914 peistä mainittakoon lääkkeet mukaanluettuina terapeuttiset lääkkeet ja väärin käytetyt lääkkeet; hormoonit; vitamiinit; proteiinit mukaanluettuina kaiken tyyppiset vasta-aineet; peptidit; steroidit; bakteerit; sienet; virukset; 5 loiset; bakteerien, sienten, virusten tai loisten osat tai tuotteet; kaikentyyppiset allergiaa aiheuttavat aineet; % normaalien tai pahanlaatuisten solujen tuotteet tai osat jne. Erikoisina esimerkkeinä mainittakoon T4; R3; digoksii-ni; hCG; insuliini; teofylliini; antibiootit, kuten genta-10 misiini ja tobramysiini; kouristuksia estävät aineet kuten fenobarbitaali, karbametsapiini, valoproiinihappo; ärryt-mian estoaineet, kuten lidokaiini, kinidiini; jne.
Täten esillä olevan keksinnön mukaan saadaan lipi-dirakkula eli liposomi, joka sisältää määrätyt ominaisuu-15 det omaavaa absorboivaa väriainetta, jolloin absorboiva väriaine on edullisesti sulforodamiini B tai sen suola, ja tämä rakkula voi olla derivatisomaton tai derivatisoitu; ligandin erikoisesti antigeenin, hapteenin tai vasta-aineen kanssa. Ligandin kanssa derivatisoitu pussi on eri-20 koisen käyttökelpoinen indikaattorina analyytin analysoimiseksi näytteestä.
Vaikka pussissa käytetty väriaine on absorboiva väriaine, näillä väriaineilla on myös fluoresoivia ominaisuuksia. Täten nämä väriaineet voidaan todeta fluoresoi-25 vian ominaisuuksien avulla absorboivien ominaisuuksien asemasta.
Esillä olevaa keksintöä esitellään edelleen seuraa-vien esimerkkien avulla.
Esimerkki 1 30 Liposomin valmistus 1. 100 ml pyöreäpohjaiseen kiertohaihdutuspulloon lisätään seuraavat aineet; a. 48 mg kolesterolia, Sigma, CH-S, b. 104 mg distearoyylifosfatidyylikoliinia (DSPC), 35 Acanti Polar Lipids 850365 (20 ml/ml CHCl3:ssa),
II
n 81914 c. 3,75 mg silloitusalnetta (distearoyylifosfati-dyylietanoliamiini-(p-maleimidofenyyli)-butyraatti (DSPE-MPB), valmistettu laboratoriossa, 2 mg/ml CHCl3:ssa, kuten esimerkissä IA on esitetty), 5 d. 6,0 ml isopropyylieetteriä, Fisher E-141, e. 1,0 ml metanolia, Aldrich 15, 490-3.
2. Sekoitetaan pyörittämällä.
3. Lisätään 5,0 ml 0,1 M sulforodamiini B:tä, Estman 14321, valmistettu 1,0 M natriumasetaatti/0,1 M
10 NaCl-seokseen, pH-arvo 4,5 puskuri.
4. Sekoitetaan pyörittämällä.
5. Astia huuhdellaan typellä.
6. Suoritetaan ultraäänikäsittely huoneenlämpötilassa, vesihaude-ultraäänilaitteessa 10 minuuttia näytteen 15 emulgoimiseksi.
7. Kiertohaihduttimeen asetetaan seuraavat arvot: vesikylvyn lämpötila 44 °C.
Pyörimisnopeus - 4.
8. Tyhjöä suurennetaan hitaasti, kunnes vaahtoami- 20 nen lakkaa (noin 30 - 40 min.).
9. Painetta alennetaan ja liposomia lämpökäsitel-lään 44 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia.
10. Astiaan lisätään 10 ml lämmintä (50 - 52 °C) 0,1-molaarista sulforodamiini B:tä ja sekoitetaan.
25 11. Lämmin liposomivalmiste puristetaan 0,4 pm, sitten 0,2 pm Bio-Rad Unipore polykarbonaattimembraanin lävitse (Bio-Rad 313-0059 ja 313-5059 vastaavasti).
12. Liposomi laimennetaan noin 80 ml:n kokonaistilavuuteen 90 ml:n ultrasentrifugiputkessa käyttäen nat- 30 riumasetaatti/ruokasuolaliuospuskuri-seosta, pH-arvo 4,5.
13. Lingotaan arvolla 75 000 Xg 30 minuutin ajan.
14. Pelletoidut liposomit suspendoidaan uudestaan 80 ml:aan natriumasetaatti/ruokasuolaliuospuskuriseosta, pH-arvo 4,5.
35 15. Vaiheet 13 ja 14 toistetaan ja sen jälkeen vie lä vaihe 13.
12 81914 16. Pelletoidut liposomit suspendoidaan uudestaan 10 ml:aan Trispuskuria, pH-arvo 8,0 (50 mM Tris, 100 mM NaCl, ImM EDTA. 310 mOs/kg).
17. Pidetään 4 °C:n lämpötilassa proteiinireaktioon 5 asti.
Esimerkki IA
Esimerkissä 1 käytetyn distearoyylifosfatidyylieta-noliamiini-maleimidofenyylibutyraatin valmistus.
Distearoyylifosfatidyylietanoliamiinia (119,2 mg, 10 0,1593 mmol, Avanti Polar Lipid) suspendoitiin 30 ml:aan kloroformia ja keitettiin palauttaen typpiatmosfäärissä, kunnes kaikki kiinteä aine oli liuennut. Liuoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan, minkä jälkeen lisättiin trietyyliamiinia (22,2 μΐ, 0,1593 mmol, Aldrich) ja sukki-15 nimidyyli-4(p-maleimidofenyyli)-butyraattia (79,45 mg, 0,2230 mmol, Pierce). Reaktioseosta sekoitettiin yön ylitse huoneenlämpötilassa typpiatmosfäärissä. Seos väkevöi-tiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin vaaleankeltaista, vahamaista kiinteää ainetta (270,7 mg), joka ilme-20 ni yhtenä päätäplänä ja useina pienempinä täplinä ohutker- roskromatografisessa analyysissä (piidioksidi, 62:25:4 CH2C12:CH30H;H20). Täplä visualisoitiin UV-valon avulla ja käyttäen molybneenisinistä ruiskutus reagenssia (Sigma, Rf, Rf = 0,5).
25 Raa'alle tuotteelle suoritettiin kromatograafinen käsittely neljälle silikageeliä olevalla, preparatiivisel-la paksukerroslevyllä (E. Merck, 2,0 mm) kehittämällä CH2Cl2:CH30H:H20-seoksella (65:25:4). Kahden molybdeeni sinisen aktiivinauhan ylempi nauha eristettiin ja tuote uutet-30 tiin 50-prosenttisella CH2Cl2/C2H5OH-seoksella. Liuotin poi stettiin haihduttamalla, jolloin tuote saatiin valkoisena kiinteänä aineena (65,75 mg).
IR (puhdas): 2910(s), 2845(s), 1734(s), 1715(s), 1510( m), 1460( m), 1390(m), 1370(mw), 1242(m), 1230(m), 35 110(m), 1060( m), 905(m), 820(m), 685 cm’^m).
li 13 81914 Tällä tavalla valmistetut liposomit sisältävät rodamiini-väriainetta ja ne voidaan herkistää ligandilla alalla tunnetun menetelmän avulla esillä olevassa keksinnössä käytettävän indikaattorin muodostamiseksi.
5 Liposomin (esimerkki 1) herkistäminen vasta-aineel la indikaattorin valmistamiseksi
Esimerkki 2 1,8 mg:aan puhdistettua proteiini A:n vasta-ainetta lisätään 0,4 ml IM ditiotreitolia natriumasetaatti/ruoka- 10 suolaliuos-puskurissa, pH-arvo 4,5.
2. Sekoitetaan ja annetaan reagoida 30 minuuttia huoneenlämpötilassa pimeässä.
3. Ditiotreitoli poistetaan johtamalla reaktioseos Sephadex G-25 medium pylvään lävitse, joka on tasapainoi- 15 tettu Tris-puskurilla pH-arvoon 8 (50 mM Tris, 100 mM suolaliuosta, 1 mM EDTA, 310 mOs/kg).
4. Mitataan absorbanssi ja 280 nm fraktiota käsitellään seuraavassa vaiheessa.
5. Tähän liuokseen lisätään 10 ml juuri valmistet- 20 tuja liposomeja.
6. Huuhdellaan typellä ja astia suljetaan tiiviis- ti.
7. Reaktion annetaan edetä yön yli huoneenlämpötilassa.
25 8. Nämä proteiinilla merkityt liposomit pestään kahdesti linkoamalla standardi Tris-puskuria käyttäen.
9. Pelletit suspendoidaan viimeisen pesun jälkeen uudelleen 40 ml:aan Tris-puskuria.
10. Pelletit varastoidaan 4 °C:n lämpötilassa.
30 Esimerkki 3
Nitroselluloosalevyimmunoanalyysi HCG:tä varten (raskaustesti) ·; Reagenssit 1. Adsorptiopuskuri 5: BD, Catalog 614335.
35 2. hcG:n alfaketjun HOG-vasta-aine.
14 81914 3. Nitroselluloosapaperi: Schleicher & Schuill, 30 ME 25, huokoisuus 0,45 pm.
4. Naudan seerumialbumiini: Sigma, Catalog II A- 7906.
5 5. Virtsan tarkkailuaineet: BDI, Catalog 255815.
6. Indikaattori: liposomi valmistettu esimerkin 1 35 mukaan ja herkistetty gcG-ketjun vasta-aineella esimerkin 2 mukaisella menetelmällä.
Menettely 10 1. Leikataan 1 cm:n läpimittainen levy nitrosel- luloosapaperia.
2. Pipetoidaan 3 1 HCG-vasta-ainetta 1:50 laimennuksena (laimennus AB5:n avulla) levyn keskustaan.
3. Annetaan kuivua huoneen lämpötilassa 15 minuut- 15 tia.
4. Pipetoidaan 300 μΐ 5-prosenttista BSA:ta AB5:ssä-(suodatettuna 0,45 pm suodattimen lävitse ennen käyttöä) jokaiselle levylle.
5. Levyä inkuboidaan 1 tunti 36 °C lämpötilassa.
20 6. Neste dekantoidaan.
7. Pipetoidaan 200 pl virtsan vertailuainetta tai virtsaa.
8. Inkuboidaan 1 tunti huoneenlämpötilassa.
9. Vertailuaine tai virtsa dekantoidaan.
25 10. Levy pestään kahdesti 1,5 pl:lla AB5.
11. 300 pl indikaattoria 1:12 laimennuksena (laimennus tehty AB5:een) pipetoidaan jokaiselle levylle (va-rastoliposomit sisältävät noin 1 pmol lipidiä/ml).
12. Inkuboidaan 1 tunti huoneenlämpötilassa.
30 13. Indikaattori dekantoidaan.
14. Pestään kahdesti 1,5 ml:11a AB5.
15. Näkyvä täplä on positiivinen merkki raskauden suhteen.
is 81914
Virtsan kvalitatiiviset IRA tulokset verrattuna nitroselluloosalevytestintuloksiin
Virtsanäyte- Raskauden RIA Täplä- numero kesto tulokset testi 51 11 viikkoa positiivinen positiivinen 2 10 viikkoa positiivinen positiivinen 3 7½ viikkoa positiivinen positiivinen 4 8½ viikkoa positiivinen positiivinen 5 11½ viikkoa positiivinen positiivinen 10 6 11½ viikkoa positiivinen positiivinen 7 9 viikkoa positiivinen positiivinen 8 8½ viikkoa positiivinen positiivinen 9 10 viikkoa positiivinen positiivinen 10 8½ - 12 15 viikkoa positiivinen positiivinen 11 ei raja-arvo negatiivinen 12 ei negatiivinen negatiivinen 13 ei negatiivinen negatiivinen 14 ei negatiivinen negatiivinen 20 RIA tehty BD HCG I125 testipakkauksen avulla.
Esimerkki 4
Distearoyyllfosfatldyylletanollamllnl-digoksigenii-nin valmistus 25 Distearoyylifosfatidyylietanoliamiinia (400 mg, 0,5346 mmol, Avanti Polar Lipid) suspendoidaan 50 ml:aan CHCI3/CH3OH-seosta (9:1) ja refluksoidaan typpiatmosfääris-sä, kunnes kaikki kiinteä aine on liuennut. Liuoksen annetaan jäähtyä, minkä jälkeen lisätään 3-ketodigoksigeniiniä 30 (207,7 mg, 0,5346 mmol) ja 2,0 g 4A suodatusainetta (Sig ma). Reaktioseosta sekoitetaan 60 eC:n lämpötilassa 3 tuntia typpiatmosfäärissä, jona aikana lisätään natriumsyaa-niboorihydridiä (36,95 mg, 0,5881 mmol, Sigma). Seosta sekoitetaan sitten huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktio-35 seos suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa, 16 81914 jolloin saadaan valkoista vaahtoa (579,6 mg), joka esintyy yhtenä päätäplänä ja useina pienempinä täplinä ohutkerros-kromatografisessa analyysissä (piidioksidi, 20-prosentti-nen CH3OH:CH2Cl2-seos). Täplä saadaan näkyväksi fosfomolyb-5 neenihappoa olevan ruiskutusreagentin (sigma) avulla, Rf = 0,3.
Raakatuote puhdistetaan matalapaineisen pylväskro-matografisen menetelmän avulla (silikageeli, 10-prosentti-nen CH3OH/CH2Cl-seos), jolloin saadaan tuote valkoisena 10 kiinteänä aineena (185,3 mg). Tuote todetaan muuttuvan aallonpituuden omaavan UV-ilmaisimen avulla, joka asetetaan kohtaan 230 nm.
Esimerkki 5
Liposomin valmistus, joka sisältää sulforodamiini 15 B;tä herkistettynä digokslgenlinln (Indikaattori) avulla.
Fosfatidyylikoliinia, dipalmitoyyliä (dppc)kolesterolia (chol), fosfatidyylietanoliamiinia, distearoyyli-digoksigeniiniä (dspe-dig) (esimerkki 4) ja fosfatidyyli-glyserolia sekä dipalmitoyyliä (dppG) liuotetaan klorofor-20 mimetanoli-seokseen (20:1) suhteessa 50 mol-% chol, 40 mol-% dppc, 10 mol-% dppg ja lisätään pieni määrä (esimerkiksi 200 pg) dspe-dig. Lipidit kuivataan pyöreäpohjäisessä pullossa alennetussa paineessa kierto haihduttimessa ja pannaan sitten lyofilisointilaitteeseen yön yli jäännös-25 liuottimen kaikkien tähteiden poistamiseksi. Liuos, joka sisältää 0,1 M sulforodamiini B:tä vedessä, lisätään pullon (10 ml) ja pulloa ravistellaan voimakkaasti tai haluttaessa suoritetaan lyhyt ultraäänikäsittely. Tämä menettely suoritetaan 60 °C:n lämpötilassa. Liposomit muodostuvat 30 spontaanisesti näissä olosuhteissa, kuten alalla tiedetään ja ne sisältävät noin 0,1 M rodamiiniväriainetta kapseloi-' tuna. Ilmaistavaa digoksideniiniä pannaan liposomien pin- : nalle. Liposomeja pestään useita kertoja puskuriliuoksel la, jonka osmolaarisuus on sama kuin kapseloidun väri-35 aineen (noin 310 mOs/kg osmoottisen uuttautumisen estämi-
II
17 81914 seksi). Valmiste suodatetaan 0,4 tai 0,2 μη suodattimen lävitse suurten liposomien poistamiseksi. Liposomit laimennetaan puskuriliuoksella siten, että ne sisältävät 1 pmol fosfolipidiä/ml puskuriliuosta.
5 Esimerkki 6
Digoksiinimenettely
Paperltäplämenettely 1. Nitroselluloosapaperin (ME-25) pisteitä räplite-tään 5 piillä kanin antidigoksiini-vasta-aineita Tris-pus- 10 kurissa, joka sisältää 0,1 % BSA, (6,005 g Tris-emästä, 0,358 g trinatrium-EDTA, 6,83 g NaCl, 0,2 g NaN3, 1 g BSA, yhteen litraan HPLC-vedellä, pH-arvo 8,0 HClillä). Säädetään arvoon 310 m0s/kg käyttäen 4 M NaCl-liuosta eri pitoisuuksilla, jotka osoittavat eston. Kuivataan ilmassa 30 15 minuuttia.
2. Nitroselluloosapaperin täplät peitetään 300 piillä 3-prosenttista BSAitä Tris-puskurissa (6,055 g Tris-emästä, 0,358 g trinatrium-EDTA, 6,83 NaCl, 0,2 g, NaN3, 30 g BSAita, lisätään yhteen litraan HPCL-vedellä, 20 pH-arvo säädetään 8,0iksi HClin avulla). Säädetään arvoon 310 mOs/kg käyttäen 4 M NaCl-liuosta. Pisteiden annetaan imeytyä BSAissa 30 minuutista 1 tuntiin tai kunnes piste on täysin kyllästynyt. Kyllästymisen jälkeen BSA poistetaan joko dekantoimalla tai imemällä.
25 Analyysimenettely 1. Esikäsittelyt täplät peitetään digoksiinistan-dardilla (0 ng/ml; 0,5 ng/ml; 1,0 ng/ml; 2,5 ng/ml) ja/tai potilaan seerumilla. Täplän annetaan imeytyä standardissa ja/tai seerumissa 10 minuuttia. Standardi ja/tai potilaan 30 seerumi poistetaan joko dekantoimalla tai imemällä. Standardin ja/tai potilaan seerumin poiston jälkeen täplät pestään kahdesti Tris-puskurilla (6,005 g Tris-emästä, 0,358 g trinatrium-EDTA, 6,83 g NaCl, 0,2 g Nan3, lisätään yhteen litraan HPLC-yettä, pH-säädetään arvoon 8,0 HC1-35 liuoksen avulla). Säädetään arvoon 310 mOs/kg käyttäen NaCl-liuosta.
ie 81914 2. Täplät peitetään 500 piillä herkistettyjä liposome ja (sisältävät 100-400 pg esimerkin 6 PE-digoksigee-nia, joka on laimennettu Tris-puskuriin (6,055 g Tris-emästä, 0,358 g trisnatrium-EDTA, 6,83 g NaCl, 0,2 g NaN3, 5 laimennetaan yhteen litraan HPLC-vedellä, pH säädetään arvoon 8,0 HCL:n avulla). Säädetään arvoon 310 mOs/kg käyttäen 4 M NaCl-liuosta laimennuksena, joka osoittaa eston. Täplän annetaan imeytyä liposomeissa 15 minuuttia. Liposomit poistetaan joko dekantoimalla tai imemällä. Li-10 posomien poiston jälkeen täplät pestään kahdesti Tris-pus-kurilla (6,055 h Tris-emästä, 0,358 g trinatrium-EDTA, 6,83 g NaCl, 0,2 g NaN3, laimennetaan yhteen litraan HPCL-vedellä, pH säädetään arvoon 8,0 HClin avulla). Säädetään arvoon 310 m0s/kg käyttäen 4 M NaCl-liuoksen avulla.
15 Analyysin tulkinta 1. Tämän tutkimuksen tarkoituksia varten käytettiin laimennuksia 1:200, 1:1200 ja 1:2200. Nämä laimennukset voivat vaihdella. Tulokset olivat seuraavat:
Laimennuksella 1:200 havaittiin vaaleanpunaiset 20 täplät kaikilla standardipitoisuuksilla. Tätä laimennusta käytettiin vain vertailuun.
Laimennuksella 1:1200 havaittiin valeanpunaiset täplät 0 ng/ml, 0,5 ng/ml ja 1,0 ng/ml olevilla standardi-pitoisuuksilla. Standardipitoisuudella 2,5 ng/ml ei ha-25 vaittu vaaleanpunaista täplää, mikä osoittaa, että jos digoksiinia on 2,5 ng/ml tai enemmän, väri ei ole näkyvä.
Laimennuksella 1:2200 havaittiin vaaleapunaiset täplät standardipitoisuuksilla 0 ng/ml ja 0,5 ng/ml. Vaaleanpunaisia täpliä ei havaittu standarsipitoisuuksilla, 30 1,0 ng/ml ja 2,5 ng/ml, mikä osoittaa, että jos käytetään 1,0 ng/ml tai enemmän digoksiinia, väri ei ole näkyvä. Potilaan seerumimääritykset . Muodostettiin 10 potilaan seerumia, kuten edellä on esitetty ja tuloksia verrattiin seuraavasti: li 19 81914
C H C H
o e o e •HO) -HO)
EC EC
3 3
H in HO
0) * 0) ' O) CM 0) <h CO (0 c c
*0 C -H C -H
•H 10 3 (0 3
H <0 Ai (0 X
*0 H tH
^ Ή μ Ή Ή •μα μα •η ο ε ο Ε ω α φ α φ Η Η (0 3 (0 3 0 3 0 3 η (0 η ω C H C Η O E Ο Ε \ s •HO) Ή O)
EC EC
3 3
H in HO
- - φ Φ -
Φ (M 0) »H
mm H c c >i C -H C Ή μ (0 3 (0 3 C (0 Ai <0 Ai
•H H H
μ -H μ μ μ co μ α μ α φ ο ε ο Ε α φ α φ
- μ C C
Η (0 φ C0 Φ so ο μ ο μ > τ-> α ό α ο ο ο
ο CM
(Μ (Μ ·* Μ ιΗ ιΗ m m 3 3 s g φ φ
EE
μ μ (0 (0 tJ )-3 20 81 91 4 Tätä menettelyä käyttäen määrättiin tarkoin yhdeksän kymmenestä potilaan seerumin alueesta (s.o. suurempi kuin 2,5 ng/ml, alueella 1,0 - 2,5 ng/ml; tai pienempi kuin 1,0 ng/ml).
5 Esimerkki 7 132 pmol kolesterolia, 113 pmol distearoyylifos-fatidyylikoliinia, 13,2 pmol distearoyylifosfatidyyligly-serolia ja 200 pg distearoyylifosfatidyylietanoliamiini/-digoksigeniinikonjugaattia liuotetaan 20 pl:aan klorofor-10 mi/metanoli-seosta (9:1 tilavuuden mukaan). Seos kuivataan 250 ml pyöreäpohjäisessä pullossa kierto haihdutus-laitetta käyttäen 37 °C:n lämpötilassa. Kuivattua lipidi-kalvoa kuivataan edelleen tyhjössä 25 QC:n lämpötilassa 16 tuntia ja paisutetaan 2,7-prosenttisessa (paino/tilavuus) 15 glyseroliliuoksessa, joka sisältää 1 mM EDTA ja 0,02 % NaN3, pH-arvossa 6,7. Paisuminen saavutetaan sekoittamalla varovasti 60 °C:n lämpötilassa 3 minuuttia. Sameaa lipo-somisuspensiota pyöritetään nopeudella 2000 rpm suurten, monikerroksisten rakkuloiden laskeuttamiseksi ja yläpuoli-20 nen neste otetaan talteen ja sitä pyöritetään nopeudella 30 000 rpm 30 minuuttia suurten yksikerroksisten rakkuloiden laskeuttamiseksi. Rakkuloiden täyttö väriaineella suoritetaan suspendoimalla tyhjät liposomipelletit udelleen 20 plraan sulforodamiini B:n 0,1 M liuokseen pH-arvossa 25 6,7 ja puristamalla suspensio peräkkäin 1,0, 0,4 ja 0,2 pm huokoskoon omaavien polykarbonaattimembraanien lävitse. Lisätään 30 ml puskuria, joka sisältää 20 mM Tris, 20 mM Edta, 2 % (paino/tilavuus) glyserolia, 0,05 % DMSO ja 0,02 % NaN3 ja liposomeja pyöritetään 30 minuuttia nopeudella 30 30 000 rpm. Pelletit suspendoidaan uudelleen ja pestään kah desti samassa puskurissa kapseloitumattoman väriaineen poistamiseksi ja pestyt, täytetyt liposomit laimennetaan samalla puskurilla pitoisuuteen 1 pmol fosfolipidifosfo-ria/ml.
35 Liposomien tehokkuus ei-isotooppisina indikaatto-
II
2i 81914 reina immunianalyysissä digoksiinin suhteen testataan päällystämällä kooltaan 12 x 75 mm olevia polypropyliini-putkia lampaan anti-digoksiini-antlseerumin 1:2000 laimennuksella. Putket täytetään 50 ym:lla liposomeja, 100 μΐ:-5 11a seerumia, joka sisältää tunnetun määrän digoksiinia kliinisenä näytteenä ja 850 pl:lla Tris/suolaliuos-pusku-ria, jonka pH-arvo on 8,0 ja joka sisältää myös 0,1 % naudan seerumialbumiinia ImM EDTA ja 0,02 % natriumatsidia. 30 minuutin inkuboinnin jälkeen 37 eC lämpötilassa putket 10 tyhjennetään imun avulla ja pestään Tris/ruokasuolaliuos-puskurilla, lisätään 1 ml 5-prosenttista Triton X-100 putken seinään kiintyneiden liposomien uuttamiseksi ja absor-banssi mitataan aallonpituudella 565 nm spektrometrin avulla. Absorbanssa nolla ng:lla digoksiinia on 0,080 O.D. 15 ja dioksiinin standardikäyrä on lineaarinen log-log-esi-tyksen mukaan liposomin sitoutumisen siirtymän ollessa 50 % annoksella 2 ng dioksiinia/ml seerumia. Kliiniset näytteet antoivat tasoja, jotka vastasivat hyvin radioimmuno-analyysin avulla määrättyjä tasoja.
20 Esillä oleva keksintö on erikoisen edullinen sikä li, että sen mukaan saadaan pussi, joka sisältää absorboivaa väriainetta, jolloin analyysi voidaan suorittaa yksinkertaisessa laitteessa kuten kolorimetrissä tai halvan i spektrometrin avulla. Nyt on yllättävästi havaittu, että 25 absorboivalla värillä täytyy olla määrättyjä ominaisuuksia tarvittavan stabiiliuden saamiseksi. Erikoisesti on testattu muita väriaineita kuten fluoreseiinia ja sen johdannaisia ja on havaittu, että nämä väriaineet lisättyinä pusseihin eivät anna vaadittavaa stabiiliutta; s.o. väri-30 aineet vuotavat pusseista varastoinnin aikana eivätkä ne ole riittävän herkkiä määritystä varten käytettäessä yksinkertaista laiteista.
Rakkuloiden stabiilius on erinomainen ja värin vuotamisen on havaittu olevan pienen pitkän, kuusi kuukautta 35 kestävän huoneen lämpötilassa suoritetun varastoinnin aikana.
22 81 91 4
Vahvistuminen, joka saavutetaan esillä olevan keksinnön mukaan valmistetuilla indikaattoreilla (rakkulat, jotka sisältävät sulforodamiini B:tä herkistettynä ligand-illa) on alueella 1000 - 10 000 kertainen verrattuna sii-5 hen mikä voidaan saavuttaa yhdellä merkki-aineryhmällä, joka on liittynyt jokaiseen indikaattorimolekyyliin. Analyysi voidaan suorittaa tehokkaasti kolorimetrisesti tai yksinkertaisen spektrofotometrin avulla. Virheettömyys ja tarkkuus ovat hyvin verrattavissa radioimmunologiseen ana-10 lyysiin ja sen tulokset ovat huomattavasti paremmat kuin mitä käsin suoritetulla entsyymi-immunoanalyysillä saadaan.
Nämä ja muut edut ovat ilmeisiä alan asiantuntijoille edelläolevan esityksen perusteella.
15 Esillä olevan keksinnön lukuiset muunnokset ja mo- difikaattiot ovat mahdollisia edelläolevan esityksen mukaan; siten, mukaanliitettyjen patenttivaatimusten puitteissa voidaan keksintöä soveltaa toisin, kuin edellä on erikoisesti esitetty.
Il
Claims (11)
1. Yhdistelmä immunianalyysiä varten, tunnet-t u siitä, että se käsittää lipidirakkulan, joka sisältää 5 absorboivana väriaineena sulforodamiinia, jonka ekstink-tiokerroin on vähintään 100 000 ja jonka liukoisuus veteen on vähintään 0,1 M.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että sulforodamiini on sulforoda- 10 miini B tai sen suola.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että väriaineella on nettovaraus.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että väriaine ionisoituu täydelli- 15 sesti vedessä pH-arvossa 5-9.
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että lipidirakkula sisältää väriainetta vähintään 0,01 M pitoisuutena.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen yhdistelmä, 20 tunnettu siitä, että lipidirakkula sisältää väri ainetta vähintään 0,05 M pitoisuutena.
7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että lipidirakkula on herkistetty ligandilla, joka kuuluu ryhmään antigeenit, vas- 25 ta-aineet ja hapteenit.
8. Menetelmä näytteessä olevan analyytin analysoimiseksi käyttämällä todettavissa olevaa merkkiainetta sisältävää lipidirakkulaa analyytin mittaamiseen, tunnettu siitä, että osoitetaan lipidirakkulassa oleva 30 absorboiva väriaine, joka on sulforodamiini, jonka vähintään 100 000 ja jonka liukoisuus veteen on vähintään 0,1 ::: M*
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lipidirakkulassa oleva ab- 35 sorboiva väriaine osoitetaan sen jälkeen kun se on poistettu lipidirakkulasta. 24 81914
10. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lipidirakkula on herkistetty ligandilla, joka kuuluu ryhmään antigeenit, vasta-aineet ja hapteenit.
11. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sulforodamiini on sulforoda-miini B tai sen suola. Il 25 81 91 4
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US71653385 | 1985-03-27 | ||
| US06/716,533 US4695554A (en) | 1984-02-14 | 1985-03-27 | Sac or liposome containing dye (sulforhodamine) for immunoassay |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI860395A0 FI860395A0 (fi) | 1986-01-28 |
| FI860395A FI860395A (fi) | 1986-09-28 |
| FI81914B FI81914B (fi) | 1990-08-31 |
| FI81914C true FI81914C (fi) | 1990-12-10 |
Family
ID=24878372
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI860395A FI81914C (fi) | 1985-03-27 | 1986-01-28 | Lipidvesikel innehaollande detekterbart maerkningsaemne och dess anvaendning vid analys. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4695554A (fi) |
| EP (1) | EP0196880A3 (fi) |
| JP (1) | JPS61225658A (fi) |
| AU (1) | AU583880B2 (fi) |
| CA (1) | CA1274158A (fi) |
| DK (1) | DK122286A (fi) |
| FI (1) | FI81914C (fi) |
Families Citing this family (67)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5622871A (en) | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
| US4828982A (en) * | 1985-05-28 | 1989-05-09 | Becton, Dickinson & Company | Vesticles and use thereof in an enzyme assay |
| US4962022A (en) * | 1986-09-22 | 1990-10-09 | Becton Dickinson And Company | Storage and use of liposomes |
| GB2200448B (en) * | 1987-01-23 | 1991-01-16 | Univ London | Targetted liposomes and their use in immunoassay |
| US4855090A (en) * | 1987-03-13 | 1989-08-08 | Micro-Pak, Inc. | Method of producing high aqueous volume multilamellar vesicles |
| US5628936A (en) * | 1987-03-13 | 1997-05-13 | Micro-Pak, Inc. | Hybrid paucilamellar lipid vesicles |
| US4911928A (en) * | 1987-03-13 | 1990-03-27 | Micro-Pak, Inc. | Paucilamellar lipid vesicles |
| US5000960A (en) * | 1987-03-13 | 1991-03-19 | Micro-Pak, Inc. | Protein coupling to lipid vesicles |
| US4942038A (en) * | 1987-03-13 | 1990-07-17 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Encapsulated humectant |
| US4917951A (en) * | 1987-07-28 | 1990-04-17 | Micro-Pak, Inc. | Lipid vesicles formed of surfactants and steroids |
| US5023086A (en) * | 1987-03-13 | 1991-06-11 | Micro-Pak, Inc. | Encapsulated ionophore growth factors |
| US5234767A (en) * | 1987-03-13 | 1993-08-10 | Micro-Pak, Inc. | Hybrid paucilamellar lipid vesicles |
| EP0560411B1 (en) | 1987-04-27 | 2000-07-26 | Unilever N.V. | Specific binding assays |
| US4853228A (en) * | 1987-07-28 | 1989-08-01 | Micro-Pak, Inc. | Method of manufacturing unilamellar lipid vesicles |
| CA1305664C (en) * | 1987-08-06 | 1992-07-28 | Stephen James Lovell | System and process for a visible assay for analyte |
| US4978625A (en) * | 1987-10-19 | 1990-12-18 | Becton, Dickinson And Company | Fluorescence immunoassay using water insoluble dyes |
| US5160669A (en) * | 1988-03-03 | 1992-11-03 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Method of making oil filled paucilamellar lipid vesicles |
| US5019392A (en) * | 1988-03-03 | 1991-05-28 | Micro-Pak, Inc. | Encapsulation of parasiticides |
| US5104736A (en) * | 1988-03-03 | 1992-04-14 | Micro-Pak, Inc. | Reinforced paucilamellar lipid vesicles |
| US5032457A (en) * | 1988-03-03 | 1991-07-16 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Paucilamellar lipid vesicles using charge-localized, single chain, nonphospholipid surfactants |
| US5019174A (en) * | 1988-03-03 | 1991-05-28 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Removing oil from surfaces with liposomal cleaner |
| US5948441A (en) * | 1988-03-07 | 1999-09-07 | The Liposome Company, Inc. | Method for size separation of particles |
| EP0341391B1 (en) * | 1988-03-11 | 1993-06-30 | The Nisshin Oil Mills, Ltd. | Agent and device for the determination of an antigen or antibody |
| US5227489A (en) * | 1988-08-01 | 1993-07-13 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Stable hydrophilic acridinium esters suitable for liposome encapsulation |
| US5241070A (en) * | 1988-09-26 | 1993-08-31 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium esters and uses thereof |
| US5663074A (en) * | 1988-09-26 | 1997-09-02 | Chiron Diagnostics Corporation | Nucleophilic polysubstituted aryl acridinium ester conjugates and syntheses thereof |
| US5139803A (en) * | 1989-02-09 | 1992-08-18 | Nabisco, Inc. | Method and liposome composition for the stabilization of oxidizable substances |
| US5015483A (en) * | 1989-02-09 | 1991-05-14 | Nabisco Brands, Inc. | Liposome composition for the stabilization of oxidizable substances |
| US6352862B1 (en) | 1989-02-17 | 2002-03-05 | Unilever Patent Holdings B.V. | Analytical test device for imuno assays and methods of using same |
| US5213805A (en) * | 1991-07-25 | 1993-05-25 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Lipid vesicles having n,n-dimethylamide derivatives as their primary lipid |
| US5405615A (en) * | 1991-09-17 | 1995-04-11 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Sucrose distearate lipid vesicles |
| US5439967A (en) * | 1991-09-17 | 1995-08-08 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Propylene glycol stearate vesicles |
| US5643600A (en) * | 1991-09-17 | 1997-07-01 | Micro-Pak, Inc. | Lipid vesicles containing avocado oil unsaponifiables |
| US5260065A (en) * | 1991-09-17 | 1993-11-09 | Micro Vesicular Systems, Inc. | Blended lipid vesicles |
| US7524456B1 (en) | 1992-05-21 | 2009-04-28 | Biosite Incorporated | Diagnostic devices for the controlled movement of reagents without membranes |
| US6143576A (en) * | 1992-05-21 | 2000-11-07 | Biosite Diagnostics, Inc. | Non-porous diagnostic devices for the controlled movement of reagents |
| US6767510B1 (en) * | 1992-05-21 | 2004-07-27 | Biosite, Inc. | Diagnostic devices and apparatus for the controlled movement of reagents without membranes |
| US6905882B2 (en) * | 1992-05-21 | 2005-06-14 | Biosite, Inc. | Diagnostic devices and apparatus for the controlled movement of reagents without membranes |
| US5369036A (en) * | 1992-07-02 | 1994-11-29 | Becton, Dickinson And Company | Enhancement of signal in immunoassays using microparticles which contain different detectable substances |
| AU659754B2 (en) * | 1992-09-04 | 1995-05-25 | Becton Dickinson & Company | Chromatographic antigen sandwich test for detection of specific antibody and device therefor |
| AU670108B2 (en) | 1992-09-11 | 1996-07-04 | Becton Dickinson & Company | Improved antibodies to plasmodium falciparum |
| US6267722B1 (en) | 1998-02-03 | 2001-07-31 | Adeza Biomedical Corporation | Point of care diagnostic systems |
| US6394952B1 (en) | 1998-02-03 | 2002-05-28 | Adeza Biomedical Corporation | Point of care diagnostic systems |
| AU762944B2 (en) * | 1999-06-23 | 2003-07-10 | Cornell Research Foundation Inc. | Dehydration/rehydration of marked liposomes on a test device |
| US6576460B1 (en) | 1999-10-28 | 2003-06-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Filtration-detection device and method of use |
| US6855561B2 (en) * | 2001-09-10 | 2005-02-15 | Quidel Corporation | Method for adding an apparent non-signal line to a lateral flow assay |
| US20030157162A1 (en) * | 2002-01-22 | 2003-08-21 | Krugner-Higby Lisa A. | Liposome-encapsulated opioid analgesics |
| DE60318435T2 (de) | 2002-05-31 | 2008-12-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Universeller biosensor und verfahren zur verwendung |
| JP4933258B2 (ja) | 2003-09-22 | 2012-05-16 | クイデル コーポレーション | 試料中の複数分析物の検出装置 |
| EP1733232A1 (en) * | 2004-03-23 | 2006-12-20 | Quidel Corporation | Hybrid phase lateral flow assay |
| US7794656B2 (en) | 2006-01-23 | 2010-09-14 | Quidel Corporation | Device for handling and analysis of a biological sample |
| US7871568B2 (en) | 2006-01-23 | 2011-01-18 | Quidel Corporation | Rapid test apparatus |
| EP2716656B1 (en) | 2007-06-15 | 2016-10-12 | Xiamen University | Monoclonal antibodies binding to avian influenza virus subtype H5 haemagglutinin and uses thereof |
| US20090196852A1 (en) * | 2008-02-04 | 2009-08-06 | Watkinson D Tobin | Compositions and methods for diagnosing and treating immune disorders |
| DE102009010563A1 (de) | 2009-02-16 | 2010-08-26 | Matthias W. Engel | Vorrichtung zum Nachweis von Analyten in Körperflüssigkeiten |
| US8956859B1 (en) | 2010-08-13 | 2015-02-17 | Aviex Technologies Llc | Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines |
| US8486717B2 (en) | 2011-01-18 | 2013-07-16 | Symbolics, Llc | Lateral flow assays using two dimensional features |
| US9651549B2 (en) | 2012-07-13 | 2017-05-16 | Genisphere, Llc | Lateral flow assays using DNA dendrimers |
| US9874556B2 (en) | 2012-07-18 | 2018-01-23 | Symbolics, Llc | Lateral flow assays using two dimensional features |
| US20140072959A1 (en) | 2012-09-12 | 2014-03-13 | Force Diagnostics, Inc. | Rapid tests for insurance underwriting |
| US8968677B2 (en) | 2013-01-22 | 2015-03-03 | Quantum Design International, Inc. | Frazil ice conjugate assay device and method |
| CA2902484C (en) | 2013-02-26 | 2021-05-18 | Astute Medical, Inc. | Lateral flow assay with test strip retainer |
| CN108051590B (zh) | 2013-09-13 | 2020-12-11 | Symbolics有限责任公司 | 运用二维试验和对照信号读出模式的侧向层析检测 |
| US9626495B2 (en) | 2014-11-17 | 2017-04-18 | International Business Machines Corporation | Authenticating a device based on availability of other authentication methods |
| CN107667290A (zh) | 2015-04-06 | 2018-02-06 | Blu诊断有限公司 | 用于检测唾液样品中的分析物的检测装置及使用方法 |
| CA2994209A1 (en) | 2015-08-06 | 2017-02-09 | Lia Diagnostics, Inc. | Water dispersible assays |
| EP3504551A1 (en) | 2016-08-23 | 2019-07-03 | Qoolabs, Inc. | Lateral flow assay for assessing recombinant protein expression or reporter gene expression |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3859229A (en) * | 1971-07-02 | 1975-01-07 | Ncr Co | Production of pressure-rupturable hydrophilic-walled microcapsules having water-soluble color-forming reactant material in solution in the core |
| US4372745A (en) * | 1979-12-19 | 1983-02-08 | Electro-Nucleonics, Inc. | Chemical luminescence amplification substrate system for immunochemistry involving microencapsulated fluorescer |
| WO1981001883A1 (en) * | 1979-12-19 | 1981-07-09 | Electro Nucleonics | Chemical luminescence amplification substrate system for immunochemistry |
| DE3100062A1 (de) * | 1981-01-02 | 1982-08-05 | Hans A. Dipl.-Chem. Dr. 8000 München Thoma | Homogenes verfahren zur bestimmung von liganden |
| DE3100061A1 (de) * | 1981-01-02 | 1982-08-05 | Hans A. Dipl.-Chem. Dr. 8000 München Thoma | Verfahren zur bestimmung von liganden mittels kompetitionsreaktion |
| US4605630A (en) * | 1983-07-27 | 1986-08-12 | Cooper Lipotech Inc. | Large-liposome agglutination reagent and method |
| US4703017C1 (en) * | 1984-02-14 | 2001-12-04 | Becton Dickinson Co | Solid phase assay with visual readout |
| US4752572A (en) * | 1985-08-30 | 1988-06-21 | Eastman Kodak Company | Lipid vesicles containing labeled species and their analytical uses |
-
1985
- 1985-03-27 US US06/716,533 patent/US4695554A/en not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-01-02 CA CA000498871A patent/CA1274158A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-01-15 AU AU52265/86A patent/AU583880B2/en not_active Ceased
- 1986-01-28 FI FI860395A patent/FI81914C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-03-07 JP JP61050261A patent/JPS61225658A/ja active Granted
- 1986-03-17 DK DK122286A patent/DK122286A/da unknown
- 1986-03-26 EP EP86302268A patent/EP0196880A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61225658A (ja) | 1986-10-07 |
| FI81914B (fi) | 1990-08-31 |
| EP0196880A3 (en) | 1988-05-18 |
| US4695554A (en) | 1987-09-22 |
| FI860395A (fi) | 1986-09-28 |
| DK122286A (da) | 1986-09-28 |
| EP0196880A2 (en) | 1986-10-08 |
| CA1274158A (en) | 1990-09-18 |
| DK122286D0 (da) | 1986-03-17 |
| AU5226586A (en) | 1986-10-02 |
| JPH055307B2 (fi) | 1993-01-22 |
| FI860395A0 (fi) | 1986-01-28 |
| AU583880B2 (en) | 1989-05-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI81914C (fi) | Lipidvesikel innehaollande detekterbart maerkningsaemne och dess anvaendning vid analys. | |
| US4703017A (en) | Solid phase assay with visual readout | |
| US4743560A (en) | Solid phase assay | |
| CA2099433C (en) | Enhancement of signal in immunoassays using microparticles which contain different detectable substances | |
| US4814270A (en) | Production of loaded vesicles | |
| US4704355A (en) | Assay utilizing ATP encapsulated within liposome particles | |
| US4193983A (en) | Labeled liposome particle compositions and immunoassays therewith | |
| US4605630A (en) | Large-liposome agglutination reagent and method | |
| AU551950B2 (en) | Immunoassay products and methods | |
| US4874710A (en) | Assay and product in which binder and liposomes are supported on a solid support | |
| EP0215027A1 (en) | Liposome immunoassay reagent and method | |
| EP0185738A1 (en) | Immunoliposome assay - methods and products | |
| O'Connell et al. | A highly sensitive immunoassay system involving antibody-coated tubes and liposome-entrapped dye. | |
| US4707453A (en) | Vesicle including a metal marker for use in an assay | |
| EP0144084A2 (en) | Reagent for immunoassay and analytical method using the same | |
| EP0138685A2 (en) | Immunoassay methods and compositions | |
| US4656129A (en) | Assay for a ligand by use of supported binder and sac lysing agent | |
| US4698263A (en) | Sac having a marker linked thereto | |
| US5080833A (en) | Immobilization of bioactive substance on lipid composition containing modified lipid compound | |
| US4717676A (en) | Vesicles and use thereof in an assay | |
| US4888288A (en) | Vesicles resistant to enzyme lysis and use thereof in an enzyme assay | |
| JPH0544626B2 (fi) | ||
| US5045478A (en) | Vesicles and use thereof in an assay | |
| IL98473A (en) | Liposome immunoassays for detection of antigens antibodies and haptens | |
| JP4250704B2 (ja) | 乾式免疫測定試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BECTON DICKINSON AND COMPANY |