FI80601C - Foerfarande foer framstaellning av syntetisk picornavirus antigen. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av syntetisk picornavirus antigen. Download PDFInfo
- Publication number
- FI80601C FI80601C FI834590A FI834590A FI80601C FI 80601 C FI80601 C FI 80601C FI 834590 A FI834590 A FI 834590A FI 834590 A FI834590 A FI 834590A FI 80601 C FI80601 C FI 80601C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- peptide
- amino acid
- amino
- group
- synthetic
- Prior art date
Links
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 37
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 36
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 title description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 113
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 44
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 40
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 24
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 claims description 20
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 12
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 8
- -1 Boc group Chemical group 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 claims description 2
- 241001340534 Eido Species 0.000 claims 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 14
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 7
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 7
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 7
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 5
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000274177 Juniperus sabina Species 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 101800004021 PP2-A Proteins 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 108700003740 Poliovirus VP1 Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical class [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000920033 Eugenes Species 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010046016 Peanut Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000538 anti-polioviral effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000006266 etherification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229960001539 poliomyelitis vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000001814 protein method Methods 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32111—Aphthovirus, e.g. footandmouth disease virus
- C12N2770/32122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32611—Poliovirus
- C12N2770/32622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
1 80601
Menetelmä Picornaviruksen synteettisen antigeenin valmistamiseksi
Esillä oleva keksintö kohdistuu rokotteisiin ja antigeeneihin infektiotauteja vastaan ja erityisesti antigeeneihin, jotka ovat käyttökelpoisia heimon Picornavirus virusten aiheuttamien tautien, kuten poliomyelitiksen diagnosoinnissa ja käsi 11elyssä.
Poliomyelitis- (tästedes polio) ja Hepatitis A-virukset kuuluvat Picornavirus-heimoon, te. ne ovat sukua niille. 1950-luvulta lähtien on käytetty tehokkaita rokotteita poliovirusten tyyppejä 1, 2 ja 3 vastaan, kun taas ei tunneta mitään tehokasta rokotetta Hepatitis A:ta vastaan.
Picornavirusten eräs tunnusomainen piirre on, että ne sisältävät neljä kuoriproteiinia. On havaittu, että poliotyyppi l:n VPj:kei kutsuttu kuoriproteiini sisältää antigeenisen determinant tialueen, joka pystyy saamaan aikaan virusta neutraloivien vasta-aineiden tuottamisen, vaikkakaan VP^-kuoren spesifisiä aminohappodeterminanttialueιta ei tähän saakka ole löydetty. Ei ole vielä tunnistettu sellaista Hepatitis A-viruksen spesifistä kuorta, joka saisi aikaan neutraloivien vasta-aineiden tuottamisen.
Polion vastaisissa rokotteissa käytetään tavallisesti inakti-voituja virustyyppejä 1, 2 ja 3. Joissakin tapauksissa kaikki ne. tapetut virukset eivät ole kuolleet tai virushiukkasia ei ole heikennetty riittävästi, jolloin noin yksi rokotus miljoonasta aiheuttaa kliinisen taudin rokotetussa henkilössä.
Näin ollen olisi hyödyllistä jos voitaisiin valmistaa sellainen polion vastainen rokote, joka ei missään tapauksessa sisällä elävää tai edes heikennettyä virusta. Olisi myöskin 2 80601 hyödyllistä jos voitaisiin valmistaa sellainen polion vastainen virus, joka on vapaa solujäännöksistä, bakteeriendotok-siineista ja kasvuväliaineen sivutuotteista, jotka usein esiintyvät jäljempänä kuvatulla yhdistelmä-DNA-tekniikalla valmistetuissa rokotevalmisteissa. Olisi edelleen hyödyllistä, jos läydettäisiin sellaisia rokotteita ja diagnostisia tuotteita, jotka ovat turvallisia ja hyvin tehokkaita.
Aikaisemmin antigeenejä on saatu useilla tavoin, kuten valmistamalla luonnontuotteista, liittämällä hapteeni kantajaan ja yhdistelmä-DNA-tekniikalla. Sela, et ai., Proc. Nat.
Acad. Sei., U.S.A., 68:1450-1455 (heinäkuu, 1971); Science, 166:1365-1374 (joulukuu 1960); Adv. Immun., 5:29-129 (1966) ovat myöskin kuvanneet tiettyjä synteettisiä antigeenejä.
Luonnontuotteista johdettuja antigeenejä edustavat lukemattomat tunnetut luonnossa esiintyvät antigeenit, kuten veriryhmä-antigeenit, HLA-antigeenit, erilaistuneet antigeenit, virus-ja bakteeriantigeenit ja sen kaltaiset. Viime vuosisadan aikana on uhrattu huomattavasti työtä näiden antigeenien tunnistamiseksi ja tutkimiseksi.
Tiettyjä "synteettisiä" antigeenejä on valmistettu liittämällä pieniä molekyylejä kantajiin, kuten esim. naudan seerumial-.bumiiniin, tuottaen näin antigeenejä, jotka saavat aikaan pienen liitetyn molekyylin vasta-aineen tuottamisen. Kantaja-molekyyli on välttämätön, koska eläimen, johon pieni molekyyli injisoidaan, immuunijärjestelmä ei "tunnistaisi" pelkkää pientä molekyyliä. Tätä tekniikkaa on myöskin käytetty yksittäisissä tapauksissa antigeenien valmistamiseksi liittämällä tunnettujen peptidien peptidifragmentteja kantajiin, kuten on kuvattu Sela et ai.:in edellä viitatuissa artikkeleissa.
Vaikkakin tämä haptiini-kantaja-tekniikka on palvellut hyvin tutkimistyötä tutkittaessa immuunireaktion luonnetta, niin siitä ei ole ollut huomattavaa käyttöä sellaisten antigeenien valmistuksessa, joilla olisi merkitystä diagnostiikassa tai 3 80601 terapiassa. Tämän puutteellisuuden syyt ovat monet.
Ensiksi, jotta tällä tekniikalla voitaisiin valita ja rakentaa hyödyllinen antigeeninen determinantti patogeenistä, niin on määritettävä patogeenin koko proteiinisekvenssi, jotta onnistumisen mahdollisuus olisi kohtuullinen. Tämän tehtävän vaikeuksista johtuen se on harvoin, jos koskaan, toteutettu.
Rokotteet valmistetaan klassisesti viemällä tapettuja tai heikennettyjä organismeja isäntään yhdessä sopivien apuaineiden kanssa organismien vastaisen normaalin immuunireaktion alulle panemiseksi, samalla kun toivottavasti vältytään organismin patogeenisiltä vaikutuksilta isännässä. Tämä tapa kärsii hyvin tunnetuista rajoituksista, jotka ilmenevät siinä, että on tuskin mahdollista välttää patogeenistä reagointia rokotteen kompleksisuudesta johtuen, joka rokote ei ainoastaan sisällä kiinnostuksen kohteena olevaa antigeenistä determinanttia vaan useita samantapaisia tai erilaisia vahingollisia aineita, jotka voivat, joissakin tai kaikissa yksilöissä, saada aikaan ei-toivotun reaktion isännässä.
Klassisella tavalla valmistetut rokotteet voivat esimerkiksi sisältää kilpailevia antigeenejä, jotka ovat haitallisia toivotulle immuunireaktiolle, antigeenejä, jotka johtavat erilaisiin immuunireaktioihin, organismista tai viljelystä peräisin olevia nukleiinihappoja, endotoksiineja ja aineosia, joilla on tuntematon koostumus ja alkuperä. Näistä kompleksisista aineista aikaansaaduilla rokotteilla on luonnostaan suhteellisen suuri todennäköisyys synnyttää kilpailevia reaktioita, jopa kiinnos-tuksen kohteena olevasta antigeenistä. Lisäksi tällaiset tunnetut rokotteet FMDV:tä vastaan on pidettävä kylmässä ennen käyttöä ja jäähdyttäminen on yleensä vaikea toteuttaa syrjäisillä alueilla, joissa rokotteita käytetään.
Yhdistelmä-DNA-teknologia on avannut uusia mahdollisuuksia rokotusteknologialle, jonka etuna on, että valmistus lähtee 4 80601 monospesifisestä geenistä, mutta suurin osa tästä edusta menetetään kuitenkin antigeenin varsinaisessa valmistuksessa Escherichia colissa tai muissa mikro-organismeissa. Tämän menetelmän mukaan geenimateriaali viedään plasmidiin, joka sen jälkeen viedään E. coliin, joka tuottaa halutun proteiinin yhdessä muiden aineenvaihduntatuotteiden kanssa, jotka kaikki ovat seoksena ravintoaineen kanssa. Tämä tapa komplisoituu, koska on epävarmaa jos haluttu proteiini ekspres-soituu transformoidussa E. colissa.
Lisäksi vaikkakin haluttua proteiinia saattaa muodostua on epävarmaa voidaanko se saada talteen tai ei ja tuhoutuuko se E. colin kasvuprosessin aikana. On esimerkiksi hyvin tunnettua, että E. coli hajottaa vieraita tai muuttuneita proteiineja. Vaikkakin proteiinia esiintyy riittävä määrä, jotta se olisi mielenkiinnon kohteena, se on kuitenkin vielä erotettava kaikista muista E. colin aineenvaihduntatuotteista, joihin sisältyvät sellaiset vahingolliset aineet kuten ei-toi-votut proteiinit, endotoksiinit, nukleiinihapot, geenit, ja tuntemattomat tai arvaamattomat aineet.
Lopuksi vaikkakin olisi mahdollista tai tulisi kehityksen myötä mahdolliseksi jollakin tekniikalla, joka pakostakin olisi hyvin kallis, erottaa haluttu proteiini E. colin muista aineenvaihduntatuotteista, niin rokote sisältää yhä kokonaisen proteiinin, joka saattaa sisältää ei-haluttuja antigeenisiä determinantteja, joista, kuten on tunnettua, muutamat synnyttävät hyvin merkittäviä, haitallisia reaktioita. On todellakin tunnettua,- 6ttä tietyt proteiinit, joita muuten voitaisiin pitää rokotteina, sisältävät antigeenisen determinantin, joka synnyttää niin vakavia poikkireaktioita tai sivu-reaktioita, ettei näitä aineita voida käyttää rokotteena.
On myöskin mahdollista hybridooma-tekniikkaa käyttäen tuottaa vasta-aineita virusgeenituotteille. Pohjimmiltaan voidaan hybridomitekniikassa lähteä antigeenien kompleksisesta seoksesta ja valmistaa prosessin myöhemmässä vaiheessa monospesif isiä vasta-aineita. Vastakohtana tälle esillä oleva keksintö 5 80601 edustaa päinvastaista prosessia, koska siinä lähdetään korkean puhtauden omaavasta antigeenideterminantista ja näin ollen vältytään välttämättömyydestä puhdistaa haluttua antigeeni-tuotetta .
On tunnettua, että hybridoomavasta-aineilla on alhainen aktiivisuus ja alhainen sitomisvakio ja tämän vuoksi niillä on vähäistä arvoa.
Hybridoomatekniikassa on viime kädessä luotettava pahanlaatuisten solujen tuottamaan vasta-aineeseen kaikkine siihen liittyvine huolineen mitä tulee erottamistekniikkaan, puhtauteen ja varmuuteen.
• ·' Hybridoomatuotanto perustuu kudosviljelyn tai aineen viemi- ' sen hiireen, jonka seurauksena tuotanto on kallista ja esiin tyy myöskin luontaisia variaatioita erästä erään.
Lisäksi on vaikeata valmistaa hybridi sellaisille molekyyleille, jotka muodostavat vain pienen osuuden siitä kompleksisesta seoksesta, josta on lähdettävä.
Aikaisempia tutkimuksia, Arnon et ai., Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A. 68:1450 (1971), Atassi, Immunochemistry 12:423 (1975) ja Vyas et ai., Science 178:1300 (1972) on tulkittu näiden kirjoittajien toimesta osoittaen, että lyhyet lineaariset aminohapposekvenssit ovat epätodennäköisiä synnyttämään vasta-aineita, jotka ovat reaktiivisia luonnon proteiinira-kenteiden kanssa. Ajateltiin, että useimpien molekyylien useimpien alueiden kohdalla, aminohappotähteistä saadut anti-geenideterminantit erottuvat hyvin lineaarisessa sekvenssissä, mutta vasta-aineiden synnyttämiseen käytettyjen peptidien rakenteen uskottiin olevan kriittinen useimmissa tapauksissa, jopa niille antigeeneille, joissa aminohapot ovat lähellä toisiaan sekvenssissä. Lerner et ai., Cell 23;109-110, (1931); Nature 287:801-805 (1980), havaitsivat, että lineaaristen peptidien vasta-aineet reagoivat luonnon molekyylien 6 80601 kanssa. Monimutkaiset biosynteesit tulivat näin ollen tarpeettomiksi, epätaloudellisiksi ja vanhanaikaisiksi.
Kloonattuun virusproteiinirokotteeseen perustuvalla tavalla on useita luontaisia haittapuolia, rajoituksia ja riskejä. Biosynteesisysteemin vaihtelut voivat sinänsä aiheuttaa vaihteluita proteiinien ekspressoitumisesea ja näin vaikuttaa antigeenien puhtauteen, saantoihin, tehoon jne. Lisäksi muiden proteiinien läsnäolo ja vaikeat ja tehottomat erottamiset viittaavat siihen, että kloonatulla virusproteiinimenetelmäl-lä valmistetut rokotteet eivät todennäköisesti ole monospesi-fisiä. Näin ollen tällä tekniikalla valmistettujen tuotteiden päähuolenaiheena on puhtaus, tehokkuus ja varmuus.
Vaikkakin synteettisten antigeenien valmistuksen yleiset periaatteet, lähtien joko tunnetusta peptidisekvenssistä tai ge-nomista, on kuvattu ja vaikkakin sellaisten sopivan pituuden omaavien peptidien valmistus, joita voidaan käyttää antigeenisissä materiaaleissa, on nykyään aika hyvin tunnettu, on olemassa hyvin laaja antigeeni-vasta-aine-teknologian ala,
Jota edelleen on mahdotonta hallita. Vaikkakin tunnetaan joitakin suuntaviivoja ja ehdotuksia koskien mahdollisia anti-Seenieekvenesejä, on tälle alueelle kuitenkin edelleen omimista spekulaatiot, yritykset ja erehdykset. Vaikkakin tie- d i etään, että pitkä sekvenssi saattaa sisältää antigeenisesti A L 1 '-Hvisia aineosia, esiintyy suurta epävarmuutta ja arvailua ®ritä, tarvitaanko koko sekvenssi vai vain osa siitä antigee-ni8Yyden saavuttamiseksi ja siitä onko sekvenssin pienemmällä °8aHa guurempi tai pienempi antigeenisyys.
Se * 1llä oleva keksintö kohdistuu menetelmään spesifisen syn-^ ^ € t f ‘ ll8en, antigeenisen peptidin valmistamiseksi, joka sisällä ä Γ.
noin kahdenkymmenen aminohappotähteen sekvenssin. Tähän ^ ^ 19eeniseen peptidiin sisältyy aminohappotähteen sekvenssi, Joka vastaa antigeenisen Picornaviruksen kuoriproteiinin t f t cYa aluetta. Tämä alue sijaitsee etäisyydellä, joka on 7 80601 noin 60 - noin 75 % antigeenisen kuoriproteiinin aminohappo-jäännössekvenssin koko pituudesta laskettuna sen aminopäät-teestä. Tämä peptidi kykenee, kun se on sidottu avaimenreikä-maljakotilo-hemosyaniinikantajaan konjugaattina ja viety tehokkaana määränä rokotteena isäntäeläimeen, synnyttämään vasta-aineiden tuotannon isäntäeläimessä, jotka vasta-aineet im-muunireagoivat Picornaviruksen kanssa suojaten isäntäeläintä Picornaviruksen aiheuttamalta infektiolta. Peptidillä on edullisesti positiivinen nettoionivaraus, lukuunottamatta päätteinä olevien peptidien amino- ja/tai karbokayy1iryhmien io~ nivaraukset.
Erään suoritusmuodon mukaan tällä keksinnöllä aikaansaadaan synteettisiä, antigeenisiä peptidejä, joista kukin sisältää noin kahdenkymmenen aminohapon sekvenssin, joka vastaa polioviruksen VPj-kuoriproteiinin aminohapposekvenssejä, jotka sijaitsevat asemassa noin 162:sta noin 201:een aminopäätteestä. Jokainen näistä peptideistä kykenee, kun ne on yksitellen sidottu avaimenreikämaljakotilo-hemosyaniinikantajaan konjugaat-tina ja viety tehokkaassa määrässä eri isäntäeläimiin, synnyttämään vasta-aineiden tuotannon, jotka vasta-aineet immuu-nireagoivat polioviruksen kanssa suojaten näitä eläimiä po-lioinfektioilta.
Tämän keksinnön mukaisia synteettisiä antigeenisiä peptidejä voidaan käyttää yhdessä fysiologisesti hyväksyttävien laime-timien, kuten veden ja/tai lisäaineiden kanssa sellaisissa rokotteissa, jotka kykenevät suojaamaan eläimiä Picornaviruk-sen aiheuttamia tauteja vastaan, tai kasvattamaan vasta-aineita, jotka ovat käyttökelpoisia sellaisten antigeenisten proteiinien läsnäolon havaitsemiseksi, jotka liittyvät Picornaviruksen aiheuttamiin tauteihin.
Polion VPj-kuoreen liittyvien synteettisten peptidien erityisen edullinen noin kahdenkymmenen aminohappotähteen sekvenssi vastaa VPj-fcuoren aminohappotähteen alueita, jotka sijaitse- 8 80601 vat asemassa noin 161:stä noin 201:een ammopäatteestä. Näiden sekvenssien aminohappotähteet, kirjoitettuna vasemmalta oikealle ja suunnassa aminopäätteestä karboksipäätettä kohti, on esitetty seuraavassa: ( 181)
SerIlePheTyrThrTyrGlyThr<Ala>AlaProAlaArgI le (201 )
SerValProTyrValGlyIle joissa jokainen suluissa esitetty aminohappotähde sekvenssissä voi itsenäisesti korvata välittömästi sulkujen vasemmalla puolella olevan viereisen aminohappotähteen, ja suluissa olevat numerot määrättyjen aminohappojäännösten yläpuolella yllä olevassa sekvenssissä ilmaisevat poliotyyppi 1-viruksen VP j kuoriproteiinin aminohappotähteen asemat aminopäätteen suhteen. Nämä numerot on esitetty vain vertailumielessä.
Esillä olevalla keksinnöllä saavutetaan huomattavaa hyötyä ja etua, erityisesti kun tämän keksinnön mukaisia peptidejä käytetään rokotteissa Picornaviruksen aiheuttamia tauteja vastaan ja diagnostiikassa, jossa määritetään näiden tautien tai virusten esiintymistä eläimissä, ihminen mukaanluettuna.
Näin ollen yksi huomattava etu on se, että synteettiset peptidit voivat muodostaa osan sellaisesta rokotteesta, joka suojaa eläimiä näiltä taudeilta.
Keksinnöllä saavutettava erityinen hyöty on siinä, ettei rokotteita, jotka on valmistettu käyttäen synteettistä peptidiä, tarvitse tehokkaan rokotuksen aikaansaamiseksi säilyttää kylmässä ennen käyttöä.
Esillä olevan keksinnön eräs toinen etu saavutetaan diagnostiikan alueella, jossa synteettisen peptidin antiseerumissa tuotetut vasta-aineet immuunireagoivat Picornaviruksiin, ku- 9 80601 ten polioon, liittyvien antigeenisten proteiinien ja vasta-aineiden kanssa ja niitä voidaan käyttää näiden läsnäolon havaitsemiseksi .
Lisähyödyt ja -edut ovat alan ammattilaiselle ilmeiset seu-raavan yksityiskohtaisen selityksen, esimerkkien ja patenttivaatimusten perusteella.
Piirustuksessa, joka muodostaa tämän selityksen osan kuvio esittää polion tyyppi 1 Mahoney- ja Sabin-viruskannat ja tyyppi 3 Leon-polioviruekanta, VP^-kuoren aminohappotähdeeekvens-sejä aminohappotähteen asemassa 182-201, käyttäen tavallista kolmekirjainkoodia jokaiselle aminohappotähteelle. Sekvenssit luetaan vasemmalta oikealle ja suunnassa aminopäätteestä kar-boksipäätettä kohti. Numerot 182 ja 201 esittävät aminohappotähteen asemat Mahoney tyyppi 1 polioviruksen VP^-kuoriprote-iinin aminopäätteen suhteen.
Esillä olevan keksinnön mukaan on hyvin odottamattomasta ja hyvin yllätyksellisesti keksitty, että erityinen, suhteellisen lyhyt synteettinen peptidisekvenssi on antigeenisesti erittäin aktiivinen. Synteettinen peptidi sisältää aminohap-potähdesekvenssin, jonka pituus on noin 20 happoa. Peptidin aminohappotähdesekvenssi vastaa ainakin antigeenisen Picorna-viruksen proteiinin sen alueen aminohappotähdesekvenssiä, joka sijaitsee etäisyydellä joka on noin 60 - noin 75 X antigeenisen kuoriproteiinin aminohappotähdesekvenssin kokonaispituudesta, mitattuna sen aminotähteestä. Synteettisellä peptidillä on nettoionivaraus, joka on nolla tai positiivinen, lukuunottamatta ionivarauksia, jotka aiheutuvat amino- ja/tai karboksyy1ipääteryhmien läsnäolosta.
Lisäksi ovat synteettiset antigeenit, jotka sisältävät jäljempänä kuvatut peptidisekvenssit, monospesifisiä Picornavi-rusten tiettyjen serotyyppien, alatyyppien ja kantojen suhteen ja ne ovat myöskin polyspesif isiä, vaikkakin pienemmässä määrin useiden näiden virusten serotyyppien, alatyyppien ja kantojen suhteen.
10 80601
Keksinnön mukaiset synteettiset antigeeniset peptidit kykenevät yksinään euoraketjuisessa tai syklisessä muodossa, polymeerinä, jossa viereiset toistuvat peptidiyksiköt on sidottu yhteen hapotetuilla syeteiinitähteillä, tai kantajaan sidottuna kojugaattina, annettuna tehokkaassa määrässä rokotteena, synnyttämään vasta-aineiden tuotannon lsäntäeläimessä, jotka vasta-aineet immuunireagoivat sen sukuisen Picornaviruksen kanssa suojaten ieäntäeläintä Picornaviruksen aiheuttamalta infektiolta. Tämän keksinnön mukaista peptidiä voidaan kuitenkin 1isämääritellä sen antigeenisiä ominaisuuksia kuvaavalla yksikkökokee1la, joka on riippumaton siitä muodosta, jossa peptidiä lopullisesti käytetään, eli euoraketjuisena, syklisenä renkaana, polymeerinä tai sidottuna konjugaattina. Tämän yksikkökokeen mukaan keksinnön mukainen peptidi kykenee euoraketjuisessa muodossa, kun se on sidottu avaimenreikämal-jakotilo-hemosyaniinikantajaan konjugaattina ja viety tehokkaana määränä rokotteena isäntäeläimeen, synnyttämään vasta-aineiden tuotannon, jotka vasta-aineet immuunireagoivat sen sukuisen Picornaviruksen kanssa suojaten tätä ieäntäeläintä tältä virukselta. Peptidin ja kantajan määrät ja konjugointi-reaktion spesifiset reaktio-olosuhteet ja rokotevalmisteet on esitetty aikakausjulkaisussa Bittle et ai., Nature, 29Θ: 30-33 (heinäkuu, 1982).
Rokotteena esillä oleva keksintö käsittää tehokkaan määrän peptidiantigeeniä, joka saattaa yksinään soveltua rokotteeksi, kun läsnä on fysiologisesti hyväksyttävä laimennin, kuten vesi tai suolaliuos. Rokote voi sisältää kantajan, joka voi olla mikä tahansa useista kantajista, kuten avaimenreikämal-jakotilo-hemosyaniini (KLH), jäykkäkouristustoksoidi, poly-L-(LysiGlu), maapähkinäagglutiniini, ovalbumiini, soijapapuagg-lutiniini, nautaseerumialbumiini (BSA) ja sentapainen, johon monospesifinen, synteettinen determinanttipeptidi on sidottu. Polymeeri, joka on valmistettu sitomalla useita tämän keksin- 11 80601 non mukaisia peptidejä hapetettujen systeiinipääteryhmien päästä-päähän-eidoeten välityksellä, saattaa myös käsittää eksogeenisen, kantajasta vapaan rokotteen yhdessä fysiologisesti hyväksyttävän laimentimen kanssa. Kaikissa tapauksissa tämän keksinnön mukainen peptidi toimii spesifisenä antigeenisenä determinanttina.
Antigeenisen peptidin "tehokas määrä" riippuu useista tekijöistä. Näihin tekijöihin sisältyy suojattavan isäntäeläimen ruumiinpaino ja laji, kantaja, kun sitä käytetään, apuaine, kun sitä käytetään, se lukumäärä rokotuksia, jota halutaan käyttää, ja eläimelle halutun suojan kestoaika. Yksittäiset rokotteet sisältävät yleensä noin 20 mikrogramma - noin 2 milligrammaa synteettistä antigeenistä peptidiä, lukuunottamatta kantajaa, johon peptidi voi olla sidottu.
Kun tämän keksinnön mukainen antigeeninen rokote viedään haluttuun isäntäeläimeen, se panee alulle vasta-aineiden tuotannon isäntäeläimessä edellä mainitulle antigeeniselle peptidille ja sen sukuiselle Picornavirukselle, kuten poliolle. Rokotteet, jotka sisältävät tehokkaita määriä tämän keksinnön mukaisia peptidejä, eivät ainoastaan pane alulle vasta-aineiden tuotantoa isäntäeläimessä, vaan näitä vasta-aineita tuotetaan riittävässä määrässä suojaamaan isäntäeläintä polion tai jonkin toisen Picornaviruksen aiheuttamalta infektiolta. Isäntäeläimen suoja voidaan määrätä kasvatettujen vasta-aineiden neutralointitason avulla ja/tai neutralointi-indeksin avulla, kuten jäljempänä tarkemmin esitetään.
Keksintö käsittää myöskin sellaisia antigeenejä, joissa koko tai osa kokonaisesta kantajasta on antigeeninen. Näin ollen voidaan käyttää, tai olla käyttämättä, erillistä kantajaosaa. Synteettinen antigeeni, joka on valmistettu sitomalla polion monospesifinen, synteettinen, antigeeninen determinanttipep-tidi antigeenikantajaan, sekä myöskin menetelmät tällaisten synteettisten antigeenien valmistamiseksi, ovat esillä olevan keksinnön spesifisiä aspekteja.
12 80601
Yleensä voidaan muodostaa synteettinen antigeeni seuraavilla vaiheilla: valmistetaan Picornavirussukuinen peptidi, joka immunologisesti vastaa tai vastaa olennaisesti polion antigeenisiä determinantteja, ja liitetään synteettinen determinantti farmaseuttisesti hyväksyttävään kantajaan erillisellä synteettisellä vaiheella.
Menetelmä rokotteiden valmistamiseksi käsittää polion mono-spesifisen, synteettisen antigeenisen determinanttipeptidin syntetisoinnin, joka peptidi antigeenisesti on polion VPj-proteiinin tarkoin määrätyn determinanttiosan kaksoiskappale tai olennaisesti sen kaksoiskappale. Synteettinen peptidi voi olla, muttei aina tarvitse olla, sidottu kantajaan, jotta saataisiin antigeeni, jonka antigeenisyys on sama kuin polion monoepesifisen antigeenisen determinanttipeptidin, ja joka vietynä isäntäeläimeen yhdessä fysiologisesti siedettävän laimentunen kanssa, panee alulle vasta-aineiden tuotannon pöpö 1iovirukselle.
Menetelmässä vasta-aineiden valmistamiseksi, edellä kuvattua rokotetta injisoidaan isäntäeläimeen ja proteiiniantigeenia vastaan, isäntäeläimessä kasvatetut vasta-aineet otetaan talteen isäntäeläimen nesteistä, joita vasta-aineita käytetään tavanomaisissa diagnostisissa menetelmissä proteiinin vasta-aineiden esiintymisen osoittamiseksi tai terapeuttisina aineina passiivista immuuniprofylaksiaa varten.
On ymmärrettävä, että vaikkakin keksinnön mukaisten rokotteiden ja vasta-ainevalmisteiden valmistukseen sisältyy useita menetelmävaiheita, kuten jäljempänä esitetään yksityiskohtaisesti, niin keksintö ei ole rajoitettu minkään erityisen vaiheen tai reagenssin tai olosuhteen käyttöön, vaan keksintö on pikemminkin käsitettävä sellaiseksi kuin se on esitetty edellä ja määritelty yksityiskohtaisesti oheisissa patenttivaatimuksissa .
13 80601
Peptidisynteesi Jäljempänä esitetyt peptidit syntetisoitiin käyttäen tunnettuja menetelmiä /ke. esim. Marglin, A, ja Merrifield, R.B., Ann. Rev. Biochem. , ,3£:841-866 (1970)/. Peptidit liitettiin proteiinikantajän KLH systeiinitähteen välityksellä, joka systeiinitähde tavallisesti liitettiin peptidin karboksipäät-teeseen, ellei toisin mainita. Synteettinen sitomisvaihe, jossa peptidi sidottiin proteiinikantajaan, suoritettiin, ellei toisin esitetä, liittämällä eysteiinin rikkiatomi kantajan ja M-maleimidobentsoyyli-N-hydroksi-eukkiini-imidiesterin (MBS) välisen reaktiotuotteen kaksoissidokseen, noudattaen yleistä menetelmää, joka on esitetty aikakausjulkaisussa Liu et ai., Biochemistry, 18:690-697 (1979). Synteesi tapahtuu siten, että a) aikaansaadaan liukenematon hartsi, jossa on suuri määrä kloorimetyyliryhmiä; b) esteröidään hartsiin Boc-(MeoBzl>-Cys-OH; c) poistetaan Boc-ryhmä vapaan aminoryhmän muodostamiseksi Cys-tähteeseen, d) saatetaan vapaa aminoryhmä reagoimaan toisen aminohapon ylimäärän kanssa, jolla toisella aminohapolla on seuraavat ominaisuudet: <i) siinä on vapaa karboksyyliryhmä, (ii> sen aminoryhmä on sidottu Boc-ryhmään ja (iii) siinä on mahdollisesti reaktiivisia sivuryhmiä, jotka on sidottu suojaryhmään ja muodostavat amidiryhmän; e) poistetaan mainitun toisen aminohapon ylimäärä; f) poistetaan viimeksi mainittu Boc-ryhmä vapaan aminoryhmän muodostamiseksi, g) toistetaan vaiheet d), e) ja f) käyttäen aminohappoja sekvenssien (1)-(4) mukaisesti kunnes hartsiin on syntetisoitu vastaava suojattu peptidi; ja h) poistetaan syntetisoitu, suojattu peptidi hartsista ja poistetaan peptidistä mahdolliset suojaryhmät.
14 80601
Esimerkki 1
Peptidin <1) SerIlePheTyrThrTyrGlyThrAlaProAlaArglleSerVal-ProTyrValGlyI le eynteeei
Peptidejä syntetisoitiin Marglinin ja Merrifieldin, jne. (Marglin, A., Merrifield, R.B.A., Rev. Biochem, 39 (1970), 841-866; Houghten, R.A., Chang, W.C., Li, C.H., Int. J. Peptide Protein Res., 16 (19Θ0) 311-320, Sutcliffe, J.G., et ai., Nature, 287 (1980) 801-805) kiinteän faasin menetelmän avulla käyttäen peptidisyntetisaattoria mallia Beckmar Model 990B. Alkuperäinen aminohappohartei valmistettiin eeteröimällä Boc-(MeoBzl)-Cys-OH (2 g sen vedetöntä kesiumsuolaa, 4,3 mil-liekvivalenttia) ja kloorimetyloitua hartsia (polystyreeniä-1 * divinyy1ibentseeniä, bio-helmiä, koko 1200-400 mesh, 0,7 mmol g ) 25 ml:ssa vedetöntä dimetyy1iformamidia (DMF) se- o koittamalla 24 h 50 C:esa. Kolminkertaisen ylimäärän kesium-suolaa aktiiviseen kloridipolymeeriin nähden todettiin antavan melkein täydellisen substituution. Substituution todettiin olevan 0,55 mi 11iekvivaienttia x g pikriinihappokokeen ja aminohappoanalyysin avulla ja sen todettiin olevan 0,53 milliekvivalenttia x g HCl-propionihappohydrolyysm jälkeen. Jokaista synteesiä varten käytettiin 1,0 g (0,53 milliekvivalenttia) Boc-(MeoBzl)-Cys-hartsia. Synteesissä käytettiin eeuraavia sivuketjujen suojaryhmiä; tyrosiinille käytettiin 0-BrZ; treoniinille ja seriinille O-bentsyyli ja arginiinille tosyyli. Suojatut aminohapot (Vega Biochemicalsilta ja Peninsula Laboratoriesilta) kiteytettiin uudelleen sopivasta liuottimesta kunnes niistä saatiin TLC:lla yksittäiset piikit <kloroformi/etikkahappo = 15:1 tai kloroformi/metanoli = 10:1). Kaikki liittymiset suoritettiin kymmenkertaisella ylimäärällä Boc-AA0H:a. Pikriinihappotestin mukaan kaikki liittymisreaktiot saatettiin 99-prosenttisesti päätökseen. Suojatut peptidipolymeerit <500 mg - 2,5 g, 0,12-0,60 milli- ,5 80601 ekvivalenttia) käsiteltiin kaksinkertaisella painomäärällä anisolia ja 40-kertaisella tilavuudella (suhteessa painoon) o vedetöntä fluorivetyä 4 C:ssa 1 tunnin ajan. Sen jälkeen, kun fluorivety oli haihdutettu pois typpivirran avulla, punainen jäännös sekoitettiin vedettömään eetteriin <50 x, paino/ti-lavuus) ja sekoitettiin voimakkaasti 15 minuuttia: tämän eetteriuuton kolminkertaisen toiston jälkeen valkoinen jäännös suodatettiin ja kuivattiin vakuumissa. Tämä kuivattu hartsi-peptidiseos ekstrahoitiin yleensä 5 %:lla etikkahappoa, lyofilieoitiin ja analysoitiin aminohappojen suhteen (tällä tavalla hartsista poistettiin suunnilleen 90 % peptidistä). Mikäli aminohappoanalyysi oli tyydyttävä <+. 5 X teoreetti-tiseeta) edellä kuvatulla tavalla valmistetut peptidit käytettiin suoraan; ellei, ne puhdistettiin toivottuun puhtauteen tarvittaessa CMC-kromatografiän, partitiokromatografiän tai HPLC-kromatograf iän avulla. Saannot olivat välillä 20-60 % riippuen peptidistä ja halutusta puhtausasteesta. Peptidit liitettiin tarvittaessa proteiinikantajaan, KLH, peptidin kysteiinin kautta, jolloin käytettiin N-maleimidobentsoyyli-N-hydroksimeripihkahappoesteriä (MBS) liittämisaineena kuten Liu ’ et ai. (Liu, F., Zinnecker, M., Hamaoka, T., Katz. D.H.,
Biochemistry, 18 (1979) 690-697) ovat kuvanneet.
Synteesistä saatiin peptidi (1), joka mahdollisesti oli liitetty proteiinikantajaan.
Esimerkki 2
Peptidin (2) Ser I lePheTyrThrTyrGlyAlaAlaProAlaArgIleSerVal-ProTyrValGlyI le synteesi
Peptidi (2) syntetisoitiin samalla tavalla kuin peptidi (1) esimerkissä 1 paitsi, että aminohappojen lisäysjärjestys vastasi peptidin (2) aminohappotähdesekvenssiä.
ie 80601
Esimerkit 3 ia 4
Peptidien <3) SerI1ePheTyrThrTyrGlyThrAlaProAlaArgIleSerVal-ProTyrValGlyLeu ja (4) SerIlePheTyrThrTyrGlyAlaAlaProAlaArglleSerValProTyrVal-GlyLeu synteesi suoritettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1 paitsi, että aminohappojen lisäys järjestys vastasi peptidien (3) ja (4> aminohappotähdesekvenssiä.
Poliovirusta koskevat synteettiset peptidit
On valmistettu useita synteettisiä peptidejä, joista jokainen sisältää noin kahdenkymmenen aminohappotähteen sekvenssin. Neljä näistä sekvensseistä vastaa pääasiassa Mahoney'n ja Sa-bin'in tyyppiä 1 olevien ja Leon'in tyyppiä 3 olevan polioviruksen VPj-kuoriproteeiinien aminohapposekvenssiä aminohap-poasemien alueella noin 182;sta noin 201:een. Mahoney'n ja Sabin'in tyyppiä 1 olevien poliovirusten VP^-aminohappotähde-sekvenssit ovat identtisiä esitetyillä alueilla.
Nämä neljä sekvenssiä on esitetty jäljempänä PP2-merkityn tämän keksinnön mukaisen synteettisen peptidin sekvenssinä vasemmalta oikealle ja suunnassa aminopäätteestä karboksipää-tettä kohti seuraavasti: PP2: SerIlePheTryThrTyrGlyThr<Ala>AlaProAlaArgIleSer
ValProTyrValGlyIle<Leu), jossa suluissa esitetyt aminohappotähteet kummassakin edellä esitetyssä sekvenssissä voi riippumattomasti korvata välittömästi sulusta vasemmalla olevan viereisen aminohappotähteen, siis lähempänä aminopäätettä olevan aminohappotähteen. Vertailua varten voidaan nähdä, että PP2-aminohappotähdesekvenssi vastaa pääasiassa tyyppiä 1 ja 3 olevien poliovirusten VPj-kuoren aminohappotähdesekvenssiä alueella noin 162:sta noin 201:een.
Edellä esitetty PP2-aminohappotähdesekvenssi edustaa vähintään neljää keksinnön mukaista peptidiä. Alueen neljällä synteettisellä peptidillä on seuraavassa esitetty aminohapposekvenssi, joka on merkitty PP2a, PP2b, PP2c ja PP2d: n 80601 PP2a: SerilePheTyrThrTyrGlyThrAlaProAlaArgIleSer
ValProTyrValGIyIle PP2b: SerilePheTyrThrTyrGlyAlaAlaProAlaArglleSer
ValProTyrValGIylie PP2c: SerilePheTyrThrTyrGlyThrAlaProAlaArglleSer
ValProTyrValGIyLeu PP2d: SerilePheTyrThrTyrGlyAlaAlaProAlaArgIleSer
ValProTyrValGIyLeu
Koemenetelmät ia rokotukset
Jokainen kuvassa esitetyistä neljästä synteettisestä peptidistä syntetisoitiin, samoin kuin useita muita peptidejä, jotka vastasivat tyyppiä 1 olevan polioviruksen VP^-kuoren muita asemia, käyttämällä edellä esitettyä menetelmää, jotka on selostettu artikkelissa Bittle et.ai., Nature, 298; 30-33 (heinäkuu 1982). Lisättiin karboksi-pääte-Cys-tähteitä kytkentää varten N-maleimidobentsoyyli-N-hydrokeisukkiini-imidiesterin (MBS) ja avaimenreikämaljakotilo-hemosyaniinin välityksellä kantajina konjugaattien muodostamiseksi, käyttä-: mällä edellä esitettyä menetelmää. Konjugaateista, joiden sek venssit vastasivat tyyppi l:n kuoriproteiineja, tehtiin rokotteita käyttäen niitä peptidimääriä annosta kohti ja niitä kolmea apuainejärjestelmää, jotka on esitetty mainitun Bittle et al:in taulukon 1 alla. Rokotettuina isäntäeläiminä käytet-tiin kaneja.
Tehokkuusmäärityksiä tehtiin määrittämällä ne vasta-ainesee-rumin laimennukset, jotka saivat aikaan 50 %:ssa kiinteistä viljelyputkista, jotka sisälsivät yksikerroksisia soluviljelmiä, suojauksen tartunnalta lisättäessä tyyppi 1 poliovirusta. BSC-l-soluja kasvatettiin L-15-väliaineeeea 5 % naudansikiön seerumissa.
Kun viljellyt solukerrokset olivat muodostuneet, istutettiin putkiin ennalta määrätty määrä eläviä Sabin'in tyyppi 1 polio-viruspartikkeleita ja rokotettujen kanien seerumia. Istutettuja ie 80601 viljeltyjä soluja tarkastettiin sopivien vertailujen kanssa 2-8 päivää tämän jälkeen. Polioviruspartikkeleita istutettiin kudosviljelmän tartunta-annoksen (TCID) kerrannaisina, jolloin yksinkertainen annosmäärä on riittävä tartuttamaan ja tappamaan 50 % samanlaisista yksikerroksisista viljellyistä soluista (TCID^q), kuten määritettiin ennen jokaisen määrityssarjän suorittamista.
Näiden määritysten vähimmäis-TCID^Q oli 50, siis istutukseen käytettiin 50 kertaa TCID,-0 polioviruspartikkeleita. Käytettiin kerrannaisia 50, 100, 900 ja lOOO TCID^-q seerumlaimennuksen ollessa 1:16, 1:32, 1:64, 1:128 ja 1:256 vastaseerumin tiitteriar-vojen saamiseksi tavanomaista tekniikkaa käyttämällä.
Kutakin seerumi-virus-laimennusta varten käytettiin ainakin neljää yksikerroksista viljelmää sisältävää astiaa tai putkea.
Yksi tai kaksi kania rokotettiin eri kantajaan kytketyillä peptideillä noudattamalla edellä esitettyä rokotusjärjestystä. Näiden määritysten tulokset on esitetty alla olevassa taulukossa 10.
Taulukko 10
Tyyppi 1 polion vasta-aine-neutralointitiitterit viljellyissä soluissa eri peptideillä KLHL-peptidi Polioviruksen istutus TCID|-Q:n kerrannaisina
Antigeeni1 502 1002 9002 10002 12-40 8 -3 - 61-80 48 27 18 86-103 - 121-140 - 161-180 -, 14 -,- -,- -,- 182-201 40, 32 27, 25 13, 20 11, 13 202-222 -,- -,- -,- 244-264 13,- -,- -,- 265-285 286-301 16, 13 10, 8 -,- 19 80601
Numerot tarkoittavat aminohappotähteiden asemaa aminopäät-teeetä laakien Mahoney-tyyppiä VPj olevassa kuoressa, jota keksinnön mukaisten synteettisten peptidien aminohappotähteiden sekvenssi pääasiassa vastaa.
2
Tiitterit on esitetty seerumin niinä laimennuksina, joita tarvitaan 50 % suojauksen aikaansaamiseksi kullakin TCID^q-kerrannaieella. Tiitteri 8 tarkoittaa täten, että seerumin 1-8 laimennusta sai aikaan halutun suojauksen jne.
Tässä taulukossa tarkoittavat viivat että tiitteri oli alle 1:8. Kaksi tiitteriarvoa osoittaa, että kaksi kania rokotettiin esitettyä peptidiä sisältävällä rokotteella.
Edellä esitetyt arvot osoittavat, että poliotyypin 1 VP^-kuo-ressa on kaksi antigeenideterminanttialuetta. Nämä determi-nanttialueet sijaitsevat aminohappotähdeasemissa noin 61-80 ja asemissa noin 182-201.
Arvot osoittavat myös, että peptidi, joka vastasi pääasiassa asemia noin 182-201, sai aikaan suojauksen suuremmalla virue-konsentraatiolla kuin toinen peptidi.
Picornavirusta kokevat synteettiset peptidit Edellä esitetyt polioviruksen antigeenisillä kuoriproteii-neilla saadut tulokset edustavat laajemman keksinnön kahta spesifistä sovellutusmuotoa, joka keksintö kohdistuu yleisesti Picornavirueten heimoon eikä poliovirukseen. Tämä laajempi keksintö koskee synteettisiä antigeenisiä peptidejä, joista jokainen sisältää noin 20 aminohappotähteen sekvenssin, joka ainakin aminohappotähteiden sekvenssin osalta vastaa Picorna-viruksen anti^eenisen kuoriproteiinin aluetta, joka löytyy noin 60-75 %:n päässä aminohappotähteiden sekvenssin pituu- 20 80601 desta antigeenisen kuoriproteiinin aminopäätteestä . Nämä synteettiset peptidit ovat neutraaleja ja niissä on neutraali tai mieluummin positiivinen nettoionivaraus fysiologisissa pH-arvoissa, lukuunottamatta mahdollista karboksyyli- tai alfa-aminopääteryhmistä johtuvaa varausta. Neutraalin tai positiivisen nettovarauksen olemassaolo voidaan helposti määrittää elektroforeesimääritykse1lä fysiologisissa pH-arvoissa tai tutkimalla aminohappotähdesekvenssiä ja tuntien erillisten aminohappotähteiden pKa~arvot.
Edellä esitettyjä synteettisiä peptidejä voidaan käyttää yksin polymeerinä, jossa peptidiyksiköt on kytketty yhteen hapetetuilla systeiinltähtei1lä, tai kytketty kantajaan konju-gaattina yhdessä fysiologisesti siedettävien laimentimien, kuten veden tai apuaineen kanssa rokotteen muodostamiseksi, joka annettuna isäntäeläimeen tehokkaana määränä kykenee synnyttämään vasta-aineiden tuotannon, jotka reagoivat sen Pi-cornaviruksen kanssa, jonka kuoriproteiinin sekvenssiä peptidi vastaa tai pääasiassa vastaa, suojaten täten isäntää tältä Picornavirukselta. Tätä synteettistä peptidiä, joko yksin polymeerinä tai konjugaattina, voidaan myös käyttää edellä esitetyllä tai jäljempänä esitettävällä tavalla niitä noin 20 aminohappotähdettä sisältäviä peptidejä varten, joiden sekvenssit vastaavat tai pääasiassa vastaavat edellä esitettyä aminohappotähdesekvenssiä.
Tutkittaessa edellä esitetyn tyyppiä 1 olevan polioviruksen arvoja huomataan, että peptidit, joiden sekvenssit vastaavat pääasiassa kuoren aminohappotähdeasemia noin 182:sta noin 201: een aminopäätteestä laskien, ovat huomattavia neutraloivien vasta-aineiden tuottajia tätä virusta vastaan. Synteettinen peptidi määrittelee tällöin tyyppiä 1 olevan polioviruksen neutraloivia vasta-aineita tuottavan determinanttialueen.
21 80601
Tyyppiä 1 olevan polioviruksen antigeeninen kuori sisältää yhteensä 302 aminohappotähdettä sekvenssissään. Tyyppiä 1 olevan polioviruksen neutraloivia vasta-aineita tuottava determinantti sijaitsee täten alueella noin 60-66 % : n etäisyydellä tämän antigeenisen kuoren aminohappotähdesekvenssin aminopäätteestä, laskettuna edellä esitetyllä tavalla.
Kuvassa esitettyjä aminohappotähdesekvenssejä ja helposti saatavia asiaan kuuluvia pKa-arvoja tutkittaessa huomataan, että kunkin sekvenssin niiden tähteiden, joilla on positiivinen ionivaraus fysiologisissa pH-arvoissa (Arg, Lys ja His), lukumäärä on suurempi kuin niiden tähteiden, joilla on negatiivinen ionivaraus näissä pH-arvoissa <Asp ja Glu), lukumäärä kaikissa sekvensseissä paitsi yhdessä.
Tämän keksinnön mukaisilla synteettisillä antigeenisillä peptideillä on tyypillisesti neutraali tai positiivinen nettova-raus, lukuunottamatta amino- ja/tai karboksyy1ipääteryhmien aiheuttamia mahdollisia ionivarauksia. Mieluimmin näillä peptideillä on positiivinen nettoionivaraus. Nämä peptidit ovat myös mieluimmin 22 80 601 vesiliukoisia. Näyttää kuitenkin siltä, että synteettisen antigeenisen peptidin neutraali tai positiivinen nettoionivaraus ei ole yhtä tärkeä peptidin antigeenisyyteen nähden -kuin se seikka, että peptidin aminohappotähdesekvenssi vastaa ainakin neutraloivia vasta-aineita tuottavan antigeenisen kuoren amino-happotähdesekvenssiä, joka sijaitsee alueella noin 60-75 % sekvenssin pituudesta aminopäätteestä.
Diagnostiikka
Keksinnön mukaisia menetelmiä voidaan käyttää diagnoosikokeiden, kuten immuunikokeiden, valmistamiseen, joissa on välttämätöntä, että on käytettävissä löydettävän organismin vasta-aine tai synteettinen antigeeni, joka jäljentää löydettävän organismin determinanttia. Tällainen diagnostiikka käsittää esimerkiksi entsyymi-immuunikokeet, fluoresenssi-immuunikokeet ja muun tekniikan, jossa joko vasta-aine tai antigeeni on merkitty todettavalla merkkiaineella.
Käytettäessä esimerkiksi Voller et ai:in, "Enzyme Immune Assays in Diagnostic Medicine", Bulletin of the World Health Organization, Vol. 53, s. 55-65 (1976), esittämää kaksoisvasta-ainetekniikkaa voidaan käyttää ELISA-koetta diagnoosikokeen aikaansaamiseksi.
Edellä esitetyt vasta-peptidin vasta-ainetiitteriarvot saatiin käyttämällä kaksoisvasta-aine-ELISA:a samoin kuin edellä esitetyn Bittle et ai:in taulukossa 1 esitetyt arvot. Tiedot tästä ELISA:sta on esitetty Bittle et ai:in taulukon 1 alla.
Tämän keksinnön mukainen diagnostinen järjestelmä Picornaviruksen antigeenin läsnäolon toteamiseksi sisältää keksinnön mukaisen ; peptidin avulla muodostettuja vasta-aineita biologisesti aktii visessa muodossa yhdessä välineen kanssa immuunireaktion toteamiseksi. Sekoitettaessa ruumiinkomponenttiin, kuten seerumiin, virtsaan tai kudosuutteeseen, vasta-aineet immuunireagoivat Picornaviruksen antigeenin kanssa muodostaen immuunireaktantin, ja indikaatioväline ilmaisee tämän immuunireaktion.
23 80601
Ruumiinkomponentti voidaan esimerkiksi päällystää ELISA-koe-putkelle ja inkuboida keksinnön mukaisilla vasta-aineilla, kuten kaneissa synnytetyillä, käyttämällä hyvin tunnettua tekniikkaa. Kun kaikki mahdollisesti ei-immuunireagoineet vasta-aineet on puhdistamalla poistettu, lisätään toinen entsyy-misidottu vasta-aine, joka on muodostettu ensin mainittua tyyppiä olevan vasta-aineen avulla, kuten vuohi-vastakani-vasta-aineita, jotka sisältävät sidottua alkaalista fosfataa-sia, ja inkuboidaan ELISA-putkessa. Toisten vasta-aineiden mahdollinen ylimäärä poistetaan puhdistamalla jättäen kaikki ne fosfataasisidotut vuohi-vastakani-vasta-aineet, jotka sitoutuvat keksinnön mukaiseen vasta-aineeseen, ELISA-putkeen. Entsyymisubstraatin, kuten p-nitrofenyylifosfaatin myöhempi sekoittaminen saa aikaan merkin immuunireaktantin muodostumisesta ja täten että ruumiinkomponenttiin sisältyi Picornaviruksen antigeeni.
Keksinnön mukaiseen vasta-aineeseen voidaan sitoa radioaktiivi- 125 nen alkuaine, kuten J, inkubointivälineen muodostamiseksi. Tällöin voidaan esimerkiksi ruumiinkomponentti esipäällystää koeputkelle, minkä jälkeen inkuboidaan radioaktiivisilla vasta-aineilla ja vasta-aineiden ylimäärä poistetaan puhdistamalla putkesta. Putkeen puhdistuksen jälkeen jäävä radioaktiivisuus muodostaa merkin immuunireaktantin syntymisestä.
Tämän keksinnön eräs toinen sovellutusmuoto koskee diagnostista järjestelmää Picornaviruksen antigeenin läsnäolon toteamiseksi edellä esitetyn tapaisessa ruumiinkomponentissa. Tämä järjestelmä on erikoisen edullinen kilpailevissa kokeissa ja se käsittää eri säiliöissä olevan ensimmäisen reagenssin ja toisen reagenssin.
Ensimmäinen reagenssi sisältää keksinnön mukaisen synteettisen antigeenisen peptidin biologisesti aktiivisessa muodossa. Toinen reagenssi sisältää biologisesti aktiivisessa muodossa olevia vasta-aineita, jotka reagoivat tällaisen peptidin kanssa, kuten peptidin avulla muodostettujen vasta-aineiden kanssa. Järjestelmään sisältyy myös väline peptidin ja vasta-aineiden välisen 24 80601 immuunireaktion osoittamiseksi, joko eri säiliössä, kun käytetään fosfataasisidottuja vuohi-vastakani-vasta-aineita ja tämän substraattia, tai yhdessä vasta-aineiden kanssa, kun radioaktiivisia alkuaineita on sidottu vasta-aineisiin.
Ennalta määrättyjen ensimmäisen ja toisen reagenssin määrien sekoittaminen koestettavan ruumiinkomponentin ennalta määrätyn määrän läsnäollessa saa aikaan tietyn laajuisen immuunireaktion, jonka ilmaisuväline osoittaa. Immuunireaktion määrä on erilainen kuin tunnetun immuunireaktion määrä, kun ruumiin komponenttiin sisältyy Picornaviruksen antigeeni.
Tavanomaisessa käytännön suorituksessa ruumiinkomponentti esi-inkuboidaan vasta-aineella ja tämä koostumus inkuboidaan sitten ELISA-putken seinään sidotulla peptidillä. Putken puhdistaminen vasta-aine-Picornavirusantigeenikompleksin poistamiseksi jättää peptidin ja vasta-aineen immuunireaktantin, jonka läsnäolo ja määrä voidaan osoittaa ilmaisuvälineen avulla.
Kokonaisten, koskemattomien, biologisesti aktiivisten vasta-aineiden käyttö ei ole välttämätön monessa diagnostisessa järjestelmässä, kuten edellä esitetyssä kilpailevassa kokeessa. Pikemmin tarvitaan vain vasta-ainemolekyylin biologisesti aktiivista idiotyyppiä sisältävää, antigeeniä sitovaa tunnustus-osaa. Idiotyyppiä sisältäviä vasta-aineosia havainnollistavat Fab:na ja F(ab')2:na tunnetut vasta-aineosat, joita valmistetaan tyypillisesti kokonaisilla vasta-aineilla suoritetuilla hyvin tunnetuilla entsymaattisilla reaktioilla.
Kokonaisia, vahingoittumattomia vasta-aineita, Fab-, F(ab')2~ osia ja sen tapaisia, jotka sisältävät vasta-aineiden idiotyyp-pisiä alueita, kutsutaan tässä idiotyyppiä sisältäviksi polyamideiksi. Sanontaa "idiotyyppiä sisältävä polyamidi" käytetään oheisissa patenttivaatimuksissa kattamaan tällaisten diagnostisissa tuotteissa tai menetelmissä hyödyllisten molekyylien ryhmän. Vaikkakin Fab- tai F(ab')2-vasta-aineosia voidaan käyttää diagnostisen menetelmän tai tuotteen idiotyyppiä sisältä- 25 80601 vässä polyamidissa, käytetään tavallisesti mieluummin kokonaisia, koskemattomia vasta-aineita, senkin takia, että vasta-aineen Fab- tai Ffab'^-osan valmistaminen edellyttää lisäreaktioita ja seerumien puhdistusta.
Menetelmät ja kirjallisuus Tälle keksinnölle ainutlaatuisia menetelmiä ja aineita selostetaan viittaamalla kulloinkin kyseiseen menettelyyn. Yleensä ovat kuitenkin laboratoriotekniikka, menetelmät ja käytetyt aineet samoja kuin molekyylibiologiassa ja biokemiassa yleisesti käytetyt .
Viitataan erityisesti seuraaviin teoksiin METHODS IN ENZYMOLOGY, Colowick, S.P. ja Kaplan, N.O., Editors, Academic Press, New York; METHODS IN IMMUNOLOGY AND IMHUNOCHEMISTRY, Academic Press, HANDBOOK OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, Chemical Rubber Publishing Company, ja CELL BIOLOGY: A COMPREHENSIVE TREATISE, Goldstein ja Prescott, Academic Press, N.Y., N.Y. mielenkiintoa olevien yleisten aineiden ja menetelmien selostamiseen nähden.
Seuraavat julkaisut esittävät erityisiä tunnettuja vaiheita ja menetelmiä samoin kuin tekniikan nykyistä tasoa: 26 80601
Kirjallisuus *1. Baltimore, D., Cold Spring Harbor Symp., Quant. Biol. 39, 1187-1200 (1974).
2. Oskarsson, M.K., Elder, J.H., Gautsch, J.W.,
Lerner, R.A. and Vande Woude, G.F., Proc. Natl. Acad. Sei. , O.S.A. 75, 4694-4698 (1978).
3. Gautsch, J.W., Elder, J.B., Schindler, J. ,
Jensen, F.C., ja Lerner, R.A., Proc. Natl. Acad. Sei., U.S.A. 75, 4170-4174 Π978).
4. Jamjoon, G.A., Naso, R.B. ja Arlinghaus, R.B., Virol. 78, 11-34 (1977).
5·. Famulari, N.C., Buchhagen, D.L., Klenk, H.D., ja Fleissner, E., J. Virol. 20, 501-508 (1976).
6. Witte, O.N., Tsukamoto-Adey, A. ja Weissman, L.L., Virol. 76, 539-553 (1977).
7. Fan, H. and Verma, I.M., J. Virol. 26, 468-478 (1978) .
8. Sutcliffe, J.G., Shinnick, T.M., Lerner, R.A., : : Johnson, P. ja Verma, I.M., Cold Spring Harbor
Symp. Quant. Biol. 44, in press (1979) .
9. Sutcliffe, J.G., Shinnick, T.M., Verma, I.M. ja Lerner, R.A. , Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. in , press (1980).
10. .Marglin, A. ja Merrifield, R.B., Ann. Rev. Biochem. 39, 841-866 (1970).
11. Pederson, F.S. ja Haseltine, W.A., J, Virol. 33, 349-365 (1980).
12. Atlas of Protein Sequence and Structure, Vol. 5, Sup. 3, M.O. Dayhoff, ed., Natl. Biomed, Res. Found., pub. Washington, D.C. (1978).
13. Dayhoff, M.O., Schwartz, R.M. ja Orcutt, B.C., pp. 352, op. cit.
14. Fisher, R.A., The General Theory of Natural Selection, Clarendon Press, Oxfore (1930).
15. Elder, J.H., Gautsch, J.W., Jensen, F.C., Lerner, R.A., Harley, J.W. ja Rowe, W.P., Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 74, 4676-4680 (1977).
27 80601 16. Lerner, R.A., Jensen, F.C., Kennel, S.J., Dixon, F.J., Roches, G.D. ja Francke, U., Proc. Nat. Acad. Sei., U.S.A. 69, 2965-2969 (1972).
17. Niman, H.L. ja Elder, J.H., Proc. Nat. Acad.
Sci., U.S.A., in press (1980).
18. Edwards, S.A. ja Fan, H., J. Virol. 30, 551-563 (1979) .
19. Kitagawa, T. ja Ailawa, T., J. Biochem. (Tokyo) 79, 233 (1976) .
20. Liu, F., Zinnecker, M., Hamaoka, T. ja Katz, D.H. Biochem. 18. 690 (1979).
21. Katz, David H., U.S. Patent No. 4,191,668,
March 4, 1980.
22. J. Exp. Med., 134; 201-203 (1971).
23. J. Exp. Med., 136; 426-438,1404-1429 (1972).
24. J. Exp. Med., 138: 312-317 (1973).
25. J. Exp. Med. , 139; 1446-1463 (1974).
26. Proc. Natl. Acad. Sei., U.S.A., 71: 3111-3114.
27. Proc. Natl. Acad. Sei., U.S.A., 73: 2091-2095 (1976).
28. J. Inununol. 144: 872-876 (1975).
29. J. Immunol. 120: 1824-1827 (1978).
30. J. Exp. Med., 139: 1464-1472 (1974).
31. Humphrey, J.H. ja White, R.G., Immunology for Students of Medicine, Blackwell, Oxford (1970).
32. Katz, David H. and Benacerraf, Baruj,
Immunological Tolerance, Mechanisms and Potential Therapeutic Applications, Academic Press (1974).
33. Newsweek, March 17, 1980, pp. 62-71.
34. Chemical & Engineering News, June 23, 1980, p. 10.
35. Milstein, C., Differentiation 13: 55 (1979).
36. Howard, J.C., Butcher, G.W., Galfre', G.f Milstein, C. ja Milstein, C.P., Immunol. Rev.
47: 139 (1979).
37. Hammerling, G.J., Hammerling, U., ja Lemke, H.,
Immunogenetics 8: 433 (1978).
38. Shulman, M., Wilde, C.D., ja Kohler, G., Nature 276: 269 (1978).
28 80601 39. Kohler, G. ja Milstein, G., Nature 256; 495 (1975).
40. Ledbetter, J.A. ja Herzenberg, L.A., Immunol.
Rev. 47; 63 (1979).
41. Gefter, M.L., Margulies, D.H. ja Scharff, M.D.,
Somatic Cell Genetics 3: 231 (1977) .
42. Kohler, G. ja Milstein, C., Eur. J. Immunol. 6: 511 (1976).
43. J. Biol. Chem., 241; 2491-2495 (1966).
44. J. Biol. Chem., 241: 555-557 (1967).
45. Koprowski, Hilary et ai., U.S. Patent No. 4,196,265, April 1980.
46. Science 209, No. 4463, pp. 1319-1438 (September 1980 - entire numberr).
47. Davis, B.D., Dulbecco, R. Eisen, H.N. , Ginsbert', H.S., Wood, W.B. Jr., ja McCarty, M., Microbiology, Harper & Row, Hagerstown, Md., 1973.
48. Morgan, J. ja Whelan, W.J., Recombinant DNA And Genetic Experimentation, Pergamon Press, New York, 1979.
49. Goldstein, L. ja Prescott, D.M., Cell Biology, A Comprehensive Treatise Vois. 1, 2 & 3, Academic Press, San Francisco.
50. Scott, W.A. ja Werner, R., Molecular Cloning of Recombinant DNA, Academic Press, New York, 1977.
51. Wu, Ray (Ed.), Colowick, Sidney P., ja Kaplan, Nathan 0., Methods in Enzymology, generally and Vol. 68, "Recombinant DNA" in particular.
Academic Press, New York.
52. Cooper, Terrance G., The Tools of'Biochemistry, John Wiley & Sons, New York, 1977.
53. Sela, Michael, Science 166; 1365-1374 (1969).
54. Arnon, R., Elchanan, M., Sela, M. ja Anfinsen, C.B., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 68: 1450 (1971).
29 80601 55. Sela, M., Adv. linnuin. 5i 29-19 (1966).
56. Sela, M., Arnon, R. , ja Chaitchik, S., U.S. Patent No. 4,075,194, February 21, 1978.
57. Cohen, S.N., ja Boyer, H.W., U.S. Patent No. 4,237,224, December 2, 1980.
58. Lerner, R.A., Sutcliffe, J.G. ja Shinnick, T.M.
(1981) Cell 23: 109-110.
59. Wilson, I.A., Skehel, J.J. ja Wiley, D.C.
(1981), Nature 289: 366-373.
60. Sutcliffe, J.G., Shinnick, T.M., Green, N., Liu, F-T, Niman, H.L., ja Lerner, R.A. (1980), Nature 287; 801-805.
61. Kleid, D.G., Yansura, D., Small, B., Dowbenko, D., Moore, D.M., Grubman, M.J., McKercher, P.D., Morgan, D.O., Robertson, B.H., Bachrach, H.L., Science 214; 1125-1129 (1981).
62. CELL BIOLOGY, A COMPREHENSIVE TREATISE,
Goldstein, L., ja Prescott, D.M., Eds., Academic Press, N.Y., 1977 et. seq.
63. MOLECULAR BIOLOGY OF THE GENE, 3rd Ed., Watson, J.D., W.A. Benjamin, Inc., Menlo Park, CA. 1977.
64. Scientific American, "Recombinant DNA" W.H. Freeman and Company, San Francisco 1978.
65. Nofschneider, P., Heinz, S., Kupper, H.A.,
Keller, W., UK Patent Application GB 2 079 288 A, published 20 Jan. 1982.
66. Kupper, H., Keller, W., Kunz, C., Forss, S., Scholler, H., Franze, R., Strohmair, K., Marquardt, O., Zaslovsky, V.G., ja Hofschneider, P.H., "Cloning of cDNA of major antigen of foot and mouth disease virus and expression in E.
Coli.," Nature 289; 555-559 (1981).
67. Walter, G., Scheidtmann, K., Carbone, A.,
Laudano, A.P., Doolittle, R.F., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77; 5197-5200 (1980) .
30 80601 68. Fracastorius, H. DeContagione et Contagiosis morbis et Curatione, Libri iii. (1546) 69. King., A.M.Q., Underwood, B.O., McCahon, D., Newman, J.W.I. and Brown, F. Nature, 293, 479-480 (1981) .
70. Cooper, P.D. et al. Intervi rology lj), 165-180 (1978) .
71. Wild, T.F., Burroughs, J.N. ja Brown, F., J.Gen. Virol. 4, 313-320 (1969) .
72. Laporte, J., Grosclaude, J., Wantyghem, J., ja Rouze, P., C.r. hebd. Acad.Sci.Seanc. Paris, 276, 3399-3401 (1973).
73. Bachrach, H.L., Moore, D.M., McKercher, P.D. ja Polatnick, J., J. Immun. 115, 1636-1641 (1975).
74. Kaaden, O.R., Adam, K-H, ja Strohmaier, K., J.Gen. Virol. 34, 397-400 (1977).
75. Melven, R.H., Rowlands, D.J. ja Brown, F., J.Gen. Virol. 45, 761-763 (1979).
76. Boothroyd, J.C. et al. Nature 290, 800-802 (1981).
77. Boothroyd, J.C., Harris, T.J.R., Rowlands, D.J. ja Lowe, P.A. Gene (in press).
78. Kurz, C., Forss, S., Kupper, H., Strohmaier, K. ja Schaller, H., Nucleic Acids Res. 9, 1919-1931 (1981) .
79. Strohmaier, K., Franze, R. ja Adam, K-H. Proc.
5th Int. Congress Virology, Strasbourg (1981).
80. Houghten, R.A., Chang, W.C. ja Li, C.H.,
Int.J.Pept.Prot-Res . 16, 311-320 (1980).
81. Houghten, R.A. ja Li, C.H., Anal.Biochem. 98, 36-46 (1979) .
31 80601
Teollinen sovellutus Tämän keksinnön mukaisten antigeenien ja niistä tehtyjen rokotteiden ja vaeta-ainepreparaattien soveltamisella diagnostisiin ja terapeuttisiin tarkoituksiin on suuri teollinen ja taloudellinen merkitys. Ihmistä voidaan suojata Picornaviruk— sen aiheuttamilta kulkutaudeilta, kuten poliolta, ja ihmissuku voidaan vapauttaa lamauttavasta taudista.
Edellä esitetty on tarkoitettu havainnoi1ietamaan keksintöä rajoittamatta sitä. Voidaan suorittaa lukuisia muunnelmia poikkeamatta keksinnön ajatuksesta ja puitteista. On ymmärrettävä, että mitään rajoituksia ei ole tarkoitettu tässä esitettyihin spesifisiin peptideihin, vasta-aineisiin, niiden koostumuksiin ja käyttöön nähden eikä eeliai8ia rajoituksia tule soveltaa. Keksintö on määritelty oheisissa patenttivaatimuksissa .
Claims (3)
1. Menetelmä synteettisen terapeuttisesti aktiivisen an tigeenisen peptidin valmistamiseksi, jonka aminohappotähde-sekvenssi vastaa polioviruksen VP^-kuoriproteiinin aminohap-potähdeeekvenssiä noin asemasta 1Θ2 noin asemaan 201 sen ami-päätteestä, mainitun sekvenssin ollessa kirjoitettuna vasemmalta oikealle ja suunnassa aminopäätteestä karboksipäätettä kohti seuraava: ( 1) Ser I lePheTyrThrTyrGlyThrAlaProAlaArgI leSerValProTyrVal-Glylle, (2) SerIlePheTyrThrTyrGlyAlaAlaProAlaArglleSerVaiProTyrVaille, < 3) SerIlePheTyrThrTyrGlyThrAlaProAlaArglleSerValProTyrVal-GlyLeu, tai (4 > SerIlePheTyrThrTyrGlyAlaAlaProAlaArgIleSerValProTyrVal-GlyLeu, tunnettu siitä, että a) aikaansaadaan liukenematon hartsi, jossa on suuri määrä k1oorimetyy1iryhmiä; b> esteröidään hartsiin Boc-(MeoBzl)-Cys-OH; c> poistetaan Boc-ryhmä vapaan aminoryhmän muodostamiseksi Cys-tähteeseen, d) saatetaan vapaa aminoryhmä reagoimaan toisen aminohapon ylimäärän kanssa, jolla toisella aminohapolla on seuraavat ominaisuudet: (i) siinä on vapaa karboksyyliryhmä, <ii) sen aminoryhmä on sidottu Boc-ryhmään ja (iii) siinä on mahdollisesti reaktiivisia eivuryhmiä, jotka on sidottu suojaryhmään ja muodostavat amidiryhmän; e) poistetaan mainitun toisen aminohapon ylimäärä; f> poistetaan viimeksi mainittu Boc-ryhmä vapaan aminoryhmän muodostamiseksi, g) toistetaan vaiheet d>, e) ja f) käyttäen aminohappoja sekvenssien (1)-(4) mukaisesti kunnes hartsiin on syntetisoitu vastaava suojattu peptidi; ja h) poistetaan syntetisoitu, suojattu peptidi hartsista ja poistetaan peptidistä mahdolliset suojaryhmät. 33 80601
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se lisäksi muodostuu vaiheista, joissa: <i) saatetaan vielä ennen vaihetta (h) suojattu Cys-aminohap-potähde, jossa on vapaa karboksyy1iryhmä ja jota on ylimäärin, reagoimaan vaiheen <g> vapaan aminoryhmän kanssa amidisidoksen muodostamiseksi niin, että saadaan suojattu peptidi, jossa on Cys-tähde sekä amino- että karboksipäätteeesä; ja (ii) hapetetaan vaiheen <h> jälkeen syntetisoitu peptidi, kunnes peptidi ei enää sisällä vapaata merkaptaania, jolloin saadaan toistoykeiköitä sisältävä polymeeri, joka muodostuu lukuisista toisiinsa hapettuneilla Cys-tähtei1lä sidotuista peptideistä.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI874930A FI80466C (fi) | 1982-04-14 | 1987-11-06 | Syntetisk picornavirus vaccin och antigen. |
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US36830882A | 1982-04-14 | 1982-04-14 | |
| US36830882 | 1982-04-14 | ||
| US47884783A | 1983-03-25 | 1983-03-25 | |
| US47884783 | 1983-03-25 | ||
| PCT/US1983/000477 WO1983003547A1 (en) | 1982-04-14 | 1983-04-06 | Synthetic picornavirus antigen |
| US8300477 | 1983-04-06 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI834590A FI834590A (fi) | 1983-12-14 |
| FI834590A0 FI834590A0 (fi) | 1983-12-14 |
| FI80601B FI80601B (fi) | 1990-03-30 |
| FI80601C true FI80601C (fi) | 1990-07-10 |
Family
ID=27004134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI834590A FI80601C (fi) | 1982-04-14 | 1983-12-14 | Foerfarande foer framstaellning av syntetisk picornavirus antigen. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0105346B1 (fi) |
| CA (1) | CA1253298A (fi) |
| DE (1) | DE3382459D1 (fi) |
| ES (2) | ES521411A0 (fi) |
| FI (1) | FI80601C (fi) |
| IT (1) | IT1197625B (fi) |
| WO (1) | WO1983003547A1 (fi) |
| ZA (1) | ZA832644B (fi) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA831854B (en) * | 1982-03-26 | 1984-01-25 | Biogen Nv | Small peptides with the specificity of foot and mouth disease viral antigens |
| US4751083A (en) * | 1982-05-06 | 1988-06-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Production of neutralizing antibodies by polypeptide VP1 of enteroviruses and by oligopeptide fragments of polypeptide VP1 |
| US5230888A (en) * | 1982-05-06 | 1993-07-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Production of neutralizing antibodies by polypeptide VP1 of enteroviruses and by oligopeptide fragments of polypeptide VP1 |
| US4694071A (en) * | 1982-10-11 | 1987-09-15 | National Research Development Corporation | Polypeptides useful in vaccination against enteroviruses |
| GB8301928D0 (en) * | 1983-01-24 | 1983-02-23 | Nicholson B H | Process for producing polypeptides |
| US4708871A (en) * | 1983-03-08 | 1987-11-24 | Commonwealth Serum Laboratories Commission | Antigenically active amino acid sequences |
| WO1984003506A1 (en) * | 1983-03-08 | 1984-09-13 | Commw Serum Lab Commission | Antigenically active amino acid sequences |
| AU573574B2 (en) * | 1983-03-08 | 1988-06-16 | Chiron Mimotopes Pty Ltd | Immunogenic deteminants of foot and mouth disease virus |
| EP0119153A3 (en) * | 1983-03-11 | 1985-08-28 | The Research Foundation Of State University Of New York | Synthetic vaccines |
| FR2550094B1 (fr) * | 1983-08-01 | 1986-03-21 | Anvar | Compositions de vaccins conditionnees pour la vaccination de sujets immunitairement non naifs contre un agent pathogene determine et contenant un haptene comportant lui-meme un site antigenique caracteristique dudit agent pathogene ou un oligomere de cet haptene |
| US4743553A (en) * | 1984-07-18 | 1988-05-10 | W. R. Grace & Co. | Synthetic genes for bovine parainfluenza virus |
| GB8508685D0 (en) * | 1985-04-03 | 1985-05-09 | Minor P D | Peptides |
| US4732971A (en) | 1985-06-03 | 1988-03-22 | Eli Lilly And Company | Synthetic vaccines for foot and mouth disease |
| CN1054544C (zh) * | 1993-10-21 | 2000-07-19 | 复旦大学 | 家畜口蹄疫病毒多肽疫苗及其制备方法 |
| DE19638044A1 (de) * | 1996-09-18 | 1998-03-19 | Bayer Ag | Immunogene Peptide von Maul- und Klauenseuchen-Viren |
| US6048538A (en) * | 1997-10-03 | 2000-04-11 | United Biomedical, Inc. | Peptides derived from the non-structural proteins of foot and mouth disease virus as diagnostic reagents |
| US6107021A (en) * | 1998-06-20 | 2000-08-22 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptide vaccines for foot-and-mouth disease |
| KR100531760B1 (ko) * | 2003-04-28 | 2005-11-29 | 대한민국(관리부서 : 농림부 국립수의과학검역원) | 구제역 바이러스의 감염여부를 진단하는 방법 및 이를구현하기 위한 진단키트 |
| US10420832B2 (en) | 2012-11-16 | 2019-09-24 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptide-based emergency vaccine against foot and mouth disease (FMD) |
| CN109799344A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-05-24 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种基于Asia I型口蹄疫病毒样颗粒的竞争ELISA抗体检测试剂盒 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4140763A (en) * | 1976-09-08 | 1979-02-20 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Vaccine for foot and mouth disease |
| GB2079288B (en) * | 1980-05-12 | 1984-05-16 | Biogen Nv | Dna sequences recombinat dna molecules and processes for producing polypeptides with the specificity of foot and mouth disease viral antigens |
| FI83662C (fi) * | 1980-07-17 | 1991-08-12 | Scripps Clinic Res | Diagnostik antikropp och foerfarande foer dess framstaellning. |
| GB2103622B (en) * | 1981-06-16 | 1986-01-15 | Genentech Inc | Production of foot and mouth disease vaccine from microbially expressed antigens |
| ZA831854B (en) * | 1982-03-26 | 1984-01-25 | Biogen Nv | Small peptides with the specificity of foot and mouth disease viral antigens |
| DE3374170D1 (en) * | 1982-05-06 | 1987-12-03 | Massachusetts Inst Technology | Production of enterovirus neutralizing antibodies from vp1 |
| EP0105481A1 (en) * | 1982-09-30 | 1984-04-18 | The Wellcome Foundation Limited | Novel antigens and vaccines containing them |
| DE3381494D1 (de) * | 1982-11-30 | 1990-05-31 | Pasteur Institut | Immunogen-lage des poliovirus enthaltende peptide und dns enthaltend nukleotidfragmente die fuer diese peptide kodieren. |
| EP0268693B1 (en) * | 1986-11-20 | 1989-10-18 | Komori Printing Machinery Co., Ltd. | Sheet conveyance table for sheet press |
-
1983
- 1983-04-06 WO PCT/US1983/000477 patent/WO1983003547A1/en active IP Right Grant
- 1983-04-06 DE DE8383901543T patent/DE3382459D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1983-04-06 EP EP83901543A patent/EP0105346B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-04-13 CA CA000425757A patent/CA1253298A/en not_active Expired
- 1983-04-13 ES ES521411A patent/ES521411A0/es active Granted
- 1983-04-13 IT IT48094/83A patent/IT1197625B/it active
- 1983-04-14 ZA ZA832644A patent/ZA832644B/xx unknown
- 1983-12-14 FI FI834590A patent/FI80601C/fi not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-01-31 ES ES529298A patent/ES8503952A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI834590A (fi) | 1983-12-14 |
| ES529298A0 (es) | 1985-04-16 |
| ES8503952A1 (es) | 1985-04-16 |
| EP0105346B1 (en) | 1991-11-13 |
| FI834590A0 (fi) | 1983-12-14 |
| EP0105346A1 (en) | 1984-04-18 |
| CA1253298A (en) | 1989-04-25 |
| ES8501980A1 (es) | 1984-12-16 |
| FI80601B (fi) | 1990-03-30 |
| DE3382459D1 (de) | 1991-12-19 |
| ZA832644B (en) | 1983-12-28 |
| WO1983003547A1 (en) | 1983-10-27 |
| EP0105346A4 (en) | 1987-11-23 |
| IT1197625B (it) | 1988-12-06 |
| ES521411A0 (es) | 1984-12-16 |
| IT8348094A0 (it) | 1983-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI80601C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av syntetisk picornavirus antigen. | |
| US4544500A (en) | Synthetic foot and mouth disease antigen | |
| Taboga et al. | A large-scale evaluation of peptide vaccines against foot-and-mouth disease: lack of solid protection in cattle and isolation of escape mutants | |
| FI83662B (fi) | Diagnostik antikropp och foerfarande foer dess framstaellning. | |
| Wang et al. | Effective synthetic peptide vaccine for foot-and-mouth disease in swine | |
| DiMarchi et al. | Protection of cattle against foot-and-mouth disease by a synthetic peptide | |
| Martinez et al. | Genetic and immunogenic variations among closely related isolates of foot-and-mouth disease virus | |
| KR20010053042A (ko) | 구제역에 대한 합성 펩티드 백신 | |
| US4769237A (en) | Synthetic picornavirus antigen | |
| Emini et al. | Antigenic analysis of the Epstein-Barr virus major membrane antigen (gp350/220) expressed in yeast and mammalian cells: implications for the development of a subunit vaccine | |
| US6984387B1 (en) | Immunogenic peptides of foot-and-mouth disease viruses | |
| EP0120906B1 (en) | Polypeptides useful in vaccination against enteroviruses | |
| Liew | New aspects of vaccine development. | |
| US5061623A (en) | Peptides comprising an immunogenic site of poliovirus and dnas containing nucleotide sequences coding for these peptides | |
| GB2173504A (en) | Peptides useful in vaccination against enteroviruses | |
| EP0227604A2 (en) | Use of oligopeptides in the treatment of viral infections | |
| FI80466C (fi) | Syntetisk picornavirus vaccin och antigen. | |
| Ijaz et al. | Priming and induction of anti-rotavirus antibody response by synthetic peptides derived from VP7 and VP4 | |
| AU690070B2 (en) | Peptides, analogues and mixtures thereof for detecting and eliciting antibodies to the E1 and E2 protein of rubella virus | |
| KR100637282B1 (ko) | Ｂ형 간염 바이러스 폴리펩티드 | |
| Ada | © VACCINES FOR THE FUTURE? | |
| Wimmer et al. | Peptide priming of a poliovirus neutralizing antibody response | |
| LERNER et al. | THOMAS M. SHINNICK, J. GREGOR SUTCLIFFE, AND | |
| JPS59500719A (ja) | 合成ピコルナビ−ルス抗原 | |
| EP0547681A2 (en) | Synthetic peptides comprising a cyclic HIV principal neutralizing determinant and a lipopeptide |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: SCRIPPS CLINIC AND RESEARCH FOUNDATION |