FI69062C - Nya 16-metoxi-16-metyl-prostaglandin-e1-derivat en metod foer deras framstaellning och deras anvaendning som magen skyddande aemnen - Google Patents

Description

KUULUTUSJULKAISU 690 6 2

IKSTa LBJ UTLÄGGNI NGSSKRIFT

r» p- ·» >%-.»*· j t I.? 2 lft i n->5 •gg («) Γα-,Γ^^-,Γ.....

'V> ~^ (51) Kv.lk.*/lnt.CI.4 C 07 C 177/00 ^U0|^|| pl N L A N D (11) Patenttihakemus — PatentansBkning 802998 (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag 24 09 80 (Fl) (23) Alkupäivä —Glltighetsdag 24.09.8 0 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlig Q3 82

Patentti- ja rekisterihallitus /44) Nähtäväksi panon |a kuul.julkaisun pvm.— «o Oc

Patent-och registerstyrelsen ' ' Ansökan utlagd och utl.skriften publieerad 5U.UO.Ö1» (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Begärd prioritet (71) Gruppo Lepetit S.p.A., via Durando 38, 20158 Milano, I tai ia-I taiien(IT) (72) Umberto Guzzi, Milano, Romeo Ciabatti, Novate Milanese (Mi lano) , I tai ia-I ta 1 ien (IT) (74) Munsterhielm Ky Kb (54) Uusia 16 -metoks i - 16-metyy 1 i-prostaglandi i n i - E -j -johdanna isiä, menetelmä niiden valmistamiseksi ja niiden käyttö mahaa suojaavina aineina -Nya 16 -metoxi-16-mety1-prostaglandin-Ei-derivat, en metod för deras framställning och deras användning som magen skyddande ämnen Tämä keksintö koskee uusia l6-metoksi-l6-metyyli-prostaglandiini--E-pjohdannaisia, menetelmää niiden valmistamiseksi ja niiden käyttöä mahaa suojaavina aineina, jolloin sanonnalla "käyttö" tarkoitetaan mainitun käytön kaikkia teollisesti käyttökelpoisia näkökohtia ja toimenpiteitä, mukaan lukien uusien yhdisteiden yhdistäminen farmaseuttisiin koostumuksiin, jotka täten lisäksi ovat tämän keksinnön erityisenä kohteena.

Uudet yhdisteet, jotka ensi sijassa ovat tämän keksinnön kohteena, ovat l6-metoksi-l6-metyyli-prostaglandiini-E^-johdannaisia, joilla on seuraava yleinen kaava

Il ,''CH2\ 6 k CHp 2 C00R

' ^CH,^5 ^CH2/32\c2h /1 4° ?CH3 18 20

NiXja ^xi5/Ki7/CH^i9 / M, HO' I CH3

OH

2 69062 jossa R tarkoittaa (C^^Jalkyyliryhmää tai myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväksyttävää kationia, kuten Na+, K+, ammoniumkationia ja sen orgaanisia johdannaisia.

Edellä esitetyssä kaavassa, katkoviivaa on käytetty tarkoitettaessa, että tietty substituentti on piirretyn molekyylin tason alapuolella (cX-konfiguraatio), kun taas paksua yhtenäistä viivaa on käytetty substituentille, joka on piirretyn molekyylin tason yläpuolella (^A-konfiguraatio).

Edellä esitetyn kaavan mukaiset prostaglandiini-tyyppiset yhdisteet omaavat kaksi kiraalikeskusta alemmassa sivuketjussa, t.s. asemissa C-15 ja C-l6. Tästä johtuen voidaan valmistaa neljä erilaista, kaavan (I) mukaista isomeeriä, joita kuvataan asemien C-15 ja C-l6 konfigurationaalisten merkitsemistapojen seuraavilla kombinaatioilla: U5-R, 16-S), (15-S, l6-R), (15-R, 16-R) ja U5-S, 16-S).

Yhdisteillä, jotka ovat tämän keksinnön kohteena, on huomattava anti-sekretorinen aktiviteetti, erityisesti kun niitä annostetaan oraalisesti, ja niillä on, vieläpä hyvin alhaisissa oraalisissa annoksissa, huomattavat soluja suojaavat (sytoprotektiiviset) vaikutukset.

Prostaglandiinit muodostavat joukon luonnonaineita, joita on tutkittu paljon, koska ne omaavat erilaisia farmakologisia toimintoja (keskeytyslääke, anti-sekretorinen, hypotensiivinen, bronkodilatoori-nen) ja myös, koska ne liittyvät moniin biologisiin menetelmiin (W. Lo-sert et ai., Arzneim. Forsch. Drug Res., 2ί, No 2, sivu 135, 1975).

Tästä johtuen tältä alalta löytyy paljon kirjallisuutta ja on olemassa myös monia patentteja ja patenttihakemuksia, jotka kuuluvat "synteettisten" prostaglandiinien luokkiin, jotka eroavat luonnossa esiintyvistä syklopentaanirenkaan rakenteessa ja/tai yhdessä tai molemmissa sivuketjuissa (katso esimerkiksi GB-patentit 1 *+09 8^-1, 1 506 8l6 ja 1 3*+5 93*+, BE-patentti 827 529 ja US-patentti 029 698).

Samat, kaavan (I) mukaiset prostaglandiinit, jotka ovat tämän keksinnön kohteena, vaikka ovat itsessään täysin uusia, sisältyvät BE-patentin 837 865 ja GB-pa tentin 1 h-95 152 yleiseen kaavaan. Kuitenkin, edellä esitetyssä BE-patentissa ei koskaan kuvata l6-metyyli-l6-metoksi--prostaglandiini-E^-johdannaisia, joilla on tyydytetty sidos (^-asemassa, kun taas GB-pa tentissä 1 ^-95 152 valmistetaan ainoastaan kaksi 16,l6-dimetyyli-prostaglandiini-E-yhdistettä, joissa lisäksi metylee-niryhmä asemassa 17 on korvattu happiatomilla, johon puolestaan on liittynyt propyyli- tai pentyyliryhmä, ja joissa esiintyy aina cis--5-kaksoisidos.

3 69062 Tämän keksinnönraukaiset yhdisteet valmistetaan tunnettujen menetelmien mukaisesti, joita yleisesti käytetään tällä alueella ja jotka on laajasti kuvattu BE-patentissä 837 865. Lähtöaine on syklopentaani-aldehydi, jonka kaava on 0R, r X 1

CH CH2 CH2\^ ^COOR

^ ch2^ ^ch2^ ch2 )-( (II) cho jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja R·^ ja R2 tarkoittavat, toisistaan riippumatta, vetyä tai hydroksifunktion suojaryhmää. Mieluimmin tämän keksinnön piirissä R^ tarkoittaa (C^^Jalifaattista asyyliä ja R2 on vety tai tetrahydro-lH-pyran-2-yyli-radikaali.

Lähtöaineena käytettyä syklopentaanialdehydiä voidaan valmistaa menetelmillä, joita on kuvattu kirjallisuudessa (kts. esimerkiksi BE--patentit 807 l6l ja 837 855).

Tämän keksinnönraukaisten prostaglandiinityppisten yhdisteiden valmistamismenetelraä käsittää ensimmäisenä vaiheena edellä esitetyn kaavan (II) mukaisen aldehydin kondensaation fosfonaattireagenssin kanssa, jolla on seuraava yleinen kaava R3°\? £ch3 / P-CH0-CO-C-CH0-CH0-CH0-CH0 2 1 2 2 2 3 r3o^ ch3 (III) jossa R3 on l-1* hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, välituotteen saamiseksi, jonka kaava on «1

i ,CH CHy ^CH2^ /C00R

y—gh2^ ch2 ch2 / 0CH3 CHo\ CH, />CH^ ^ C ^ I^CH^ 2\CH2/ or2 II ch3 (iv) 2 o 5 690 6 2 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, ja R2 ovat, toisistaan riippumatta, vetyjä tai hydroksifunktioiden suojaryhmiä, ja mieluimmin R^ on (C2_i+)alifaattinen asyyli ja R2 on vety tai tetrahydro-lH-pyran--2-yyli-radikaali.

Kondensaatio suoritetaan pääasiassa samoissa olosuhteissa, joita on kuvattu prostaglandiinien synteesejä koskevassa kemiallisessa kirjallisuudessa, lähdettäessä syklopentaanialdehydi-prekursoreista ja fosforireagensseista. Käytännössä reaktio suoritetaan inertin, orgaanisen liuottimen, kuten esimerkiksi tetrahydrofuraanin, dimetoksietaa-nin, bentseenin, dioksaanina ja vastaavien läsnäollessa, lämpötilassa, joka on välillä 0-80°C.

Kondensaation suorittamiseksi fosfonaattireaktio-osapuoli on muutettava vastaavaksi anioniksi ja tähän tarkoitukseen käytetään noin yhtä ekvimolaarista osaa (laskettu kaavan (III) mukaisesta fosfonaatis-ta) alkalimetallihydridiä. Kaavan (III) mukaisella fosfonaatilla on kiraalinen keskus (joka on merkitty edellä olevassa kaavassa (III) tähdellä) ja sitä voidaan käyttää optisesti aktiivisessa muodossa tai kahden, mahdollisen isomeerin seoksena. Kaavan (II) mukaisen aldehydin ja kaavan (III) mukaisen fosfonaatin kahden isomeerin välinen kondensaatio tuottaa täten seoksen, jossa on kaksi, kaavan (IV) mukaista mahdollista isomeeriä, joilla on vastakkainen, absoluuttinen konfiguraatio (toinen R ja toinen S) asemassa C-l6, kun taas käytettäessä optisesti aktiivisessa muodossa olevaa kaavan (III) mukaista fosfonaat-tia, saadaan kaavan (IV) mukainen yhdiste, jolla on C-l6-asemassa annettu konfiguraatio (R tai S). Jos saadaan seos, jossa on C-l6-aseman kaksi mahdollista isomeeriä, se voidaan erottaa kahdeksi isomeeriseksi muodoksi tunnettujen menetelmien mukaan, esimerkiksi kromatografisilla menetelmillä. Joka tapauksessa, vaikka ei olisi aivan välttämätöntä, on edullista suorittaa erottaminen yksittäisiin isomeereihin, ennen kaavan (IV) mukaisten välituotteiden seuraavia reaktioita. Täten reak-tiokaavion toinen vaihe käsittää 15-keto-yhdisteen pelkistämisen vastaavaksi 15-hydroksi-johdannaiseksi yleisesti käytettyjen pelkistys-aineiden avulla, kuten natriumboorihydridillä, sinkkiboorihydridillä, difenyylitinahydridillä tai litiumtrialkyyliboorihydrideillä.

Olettaen, että C-15-aseman okso-ryhmän pelkistäminen aikaansaa toisen kiraalisen keskuksen syntymisen ja, että kuten edellä osoitettiin, pelkistäminen on edullisempaa suorittaa erikseen kahdelle, kaavan (IV) mukaiselle, mahdolliselle isomeerille, kummastakin C-l6-iso-meerista saadaan seos, jossa on kaksi, kaavan (V) mukaista tuotetta, li 5 69062 joilla on sama konfiguraatio C-l6-asemassa (R tai S) ja vastakkainen konfiguraatio (R ja S) C-15-asemassa.

ORj^

i ,CV iV /CH\ /COOR

\_/ CH. Γ3 /-CH2\ 2 OH CH3 ^ ' Näin saatua, kaavan (V) mukaisen, kahden isomeerin seosta voidaan käyttää sellaisenaan seuraavissa reaktiovaiheissa tai se voidaan erottaa kahdeksi, yksittäiseksi isomeeriksi, joille sen jälkeen suoritetaan, erikseen samat reaktiot. Täten, edellisessä tapauksessa, saadaan kaavan (I) mukaisten lopputuotteiden seos, joka haluttaessa voidaan erottaa komponentteihinsa, kun taas jälkimmäisessä tapauksessa käytettäessä yksittäistä isomeeriä, jolla on annetut absoluuttiset konfiguraatiot asemissa C-15 ja C-16, saadaan ainoastaan yhtä mahdollisista, kaavan (I) mukaisista isomeereistä.

On havaittu, että kun pelkistys suoritetaan kaavan (IV) mukaiselle yhdisteelle, jossa R2 on vety, ja mieluimmin hiiliatomilla asemassa 16 on toinen kahdesta, mahdollisesta, absoluuttisesta konfigu-raatiosta, saadaan kahta C-15-isomeeria aivan erilaisissa määrissä.

Joskus toista C-15-isomeereista, ja yleensä polaarisinta, saadaan hyvin pienissä määrissä. Yllättäen on havaittu, että jos pelkistys suoritetaan kaavan (IV) mukaiselle yhdisteelle, jossa R^ on hydrok-sifunktion suojaryhmä ja mieluimmin tetrahydro-lH-pyran-2-yyli-radikaali, saadaan kahta isomeeriä suurinpiirtein samassa suhteessa. Tässä tapauksessa, jälkeenpäin suoritettava erottaminen tunnettujen menetelmien mukaisesti, kuten esimerkiksi piihappogeeli-pylväskromatografi-sesti tai preparatiivisella ohutkerroskromatografiällä, käyttäen pii-happogeelilevyjä, saadaan kaksi yksittäistä, kaavan (V) mukaista tuotetta, joissa hydroksiryhmä asemassa 11 on suojattu, mieluimmin, tetra-hydro-lH-pyran-2-yyli-eetterinä. Kuitenkin, riippuen konfiguraatiosta asemassa C-l6, voi olla tarpeen, ennen seoksen kromatografista erottamista, palauttaa vapaa hydroksifunktio asemaan 11.

Tämän keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaisesti saatetaan molaarinen määrä kaavan (IV) mukaista yhdistettä, jossa R.^ tarkoittaa 6 69062 hydroksifunktion suojaryhmää, ja mieluimmin, (C2_l+)alifaattista asyy-liä, ja R2 on vety, jolla on annettu, absoluuttinen konfiguraatio asemassa C-l6, reagoimaan noin 2-3 ekvimolaarisen määrän kanssa 2,3-di-hydrofuraania vedettömän, inertin orgaanisen liuottimen, kuten bent-seenin, ja katalyyttisen määrän p-tolueenisulfonihappoa läsnäollessa. Reaktio tapahtuu huoneen lämpötilassa ja kestää noin 5- noin 20 minuuttia. Täten saadaan kaavan (IV) mukainen yhdiste, jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, R^ on hydroksifunktion suojaryhmä ja mieluimmin (C2__l+)alifaattinen asyyliryhmä ja R2 on tetrahydro-lH-pyran-2--yyli-radikaali.

Myöhemmin tapahtuva 15-asemassa olevan okso-ryhmän pelkistäminen vastaavaksi kaavan (V) mukaiseksi yhdisteeksi (kahden mahdollisen 15--aseman isomeerin seoksena), jossa R2 on tetrahydro-lH-pyran-2-yyli--radikaali. Haluttaessa näin saatu seos voidaan erottaa yksittäisiin C-l5-isomeereihin edellä esitettyjen menetelmien mukaisesti. Sen jälkeen seos tai yksittäiset isomeerit edelleen saatetaan reagoimaan kaavan (I) mukaisten lopputuotteiden saamiseksi. Reaktiovaiheet, jotka lähdettäessä kaavan (V) mukaisesta yhdisteestä, johtavat lopulliseen kaavan (I) mukaiseen yhdisteeseen käsittävät edellä esitetyn kaavan (V) mukaisten yhdisteiden asemissa 11 ja 15 olevien hydroksiryhmien suojaamisen reaktiolla sopivan suoja-aineen, mieluimmin 3,^-dihydro--2-pyraanin kanssa, saatu 11,15-suojattu, kaavan (V) mukainen yhdiste hydrolysoidaan lievissä olosuhteissa, esimerkiksi natrium- tai kalium-karbonaatilla, jos R·^ on (C2_lf)alifaattinen asyyliryhmä, vapaan hydrok-siryhmän palauttamiseksi asemassa 9, sen jälkeen hapetetaan mainittu hydroksiryhmä okso-ryhmäksi tavallisilla hapetusmenetelmillä (esimerkiksi Collins-reagenssilla, ts. kompleksilla pyridiini/kromioksidi) ja lopuksi poistetaan ruojaryhmät asemista 11 ja 15.

Kun hydroksifunktioiden suojaryhmät asemissa 11 ja 15 ovat tet-rahydro-lH-pyran-2-yyli-radikaaleja, niiden poistaminen suoritetaan mieluimmin happamella hydrolyysillä, käyttäen seosta etikkahapposvesi: tetrahydrofuraani = 19:11:3 (til./til./til.) lämpötilassa LK)-l+5°C.

Jos nämä reaktiot suoritetaan kaavan (V) mukaisten yhdisteiden, joilla on sama, absoluuttinen konfiguraatio asemassa C l6 ja vastakkaiset konfiguraatiot asemassa C-15, seokselle saadaan kahden kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jotka ovat isomeerejä asemassa C-l5, seos. Haluttaessa mainittu seos voidaan erottaa yksittäisiin isomeereihin edellä esitettyjen, tavallisten kromatografisten menetelmien avulla.

Lähoaineena käytettyjä kaavan (III) mukaisia fosforireagensseja li 7 69062 valmistetaan kondensoimalla metyylifosfonihapon alempialkyyliesteri, jonka kaava on (R-,0) 0 3 \ll ,P-CH3 (VI) (R3or jossa R3 tarkoittaa (C^_1+)alkyy li ryhmää, 'X,-metyyli-^.-metoksi-heksaa-nihapon alempialkyyliesterin kanssa (tai vastaavan asyylikloridin kanssa), jonka kaava (VII) on OCHt ^ 3 xoc-c-ch2-ch2-ch2-ch3 (vii} ch3 jossa X voi tarkoittaa -0R3:a tai -Cl tää.

Tämä menetelmä käsittää ensin kaavan (VI) mukaisen metyylifos-fonaatin muuttamisen vastaavaksi anioniksi lisäämällä butyylilitiumia -78°C:ssa tetrahydrofuraanissa, ja sen jälkeen tämä saatetaan reagoimaan kaavan (VII) mukaisen yhdisteen kanssa noin 1 tunnin ajaksi yhä samassa lämpötilassa. Kun halutaan saada kaavan (III) mukaisen fosfo-naatin optisesti aktiivinen muoto, e<-metyyli-c^-metoksi-heksaanihapon rasemaatti erotetaan ensin kahdeksi antipodiksi tavallisilla menetelmillä, kuten käyttäen optisesti aktiivista emästä, esim. efedriiniä, atropiinia tai amfetamiinia, vastaavien suolojen muodostamiseksi, jotka erotetaan fraktioivalla kiteytyksellä. Erotetut antipodit muutetaan sen jälkeen vastaaviksi, kaavan (VII) mukaisiksi, optisesti aktiivisiksi estereiksi tai happoklorideiksi, jotka puolestaan kondensoidaan kaavan (VI) mukaisen metyylifosfonaatin kanssa.

Tämän keksinnönmukaiset yhdisteet ovat gastrisen erityksen tehokkaita inhibiittoreita myös annostettaessa niitä laboratorioeläi-mil]e oraalisesti. Tämän biologisen aktiviteetin olemassa oloa ei voinut aavistaa ollenkaan tämän alan ammattimies, huomioonottaen, että vastaavat yhdisteet, joilla on asemassa 5 kaksoissidos ja joita on kuvattu BE-patentissa 837 865, annostettaessa per orale ovat ainoastaan vähän aktiivisia. Toisin sanoen on havaittu, että pieni modifikaatio näiden yhdisteiden rakenteessa on aikaansaanut huomattavia ja edullisia muutoksia biologisessa aktiviteetissa. Näiden yhdisteiden gastrisen erityksen estävät ominaisuudet, niitä annostettaessa per orale, arvioitiin niiden tehokkuudesta inhibitoitaessa histamiinilla indusoitua lii- 8 69062 kahappoisuutta koirilla. Histamiinia, joka on happaman gastrisen erityksen tehokas stimulaattori (katso Bertaccini et ai,, Eur. Journ. Pharmacol,, 28, 360, 197^), annostettiin suonensisäisesti jatkuvalla infuusiolla kokeiden aikana.

Kokeessa käytettiin viiden, sekarotuisen koiran ryhmää. Koirille suoritettiin kirurginen operaatio vatsassa menetelmän mukaan, jonka on esittänyt Bertaccini et ai. (katso edellä), jokaisen eläimen varustamiseksi hermotetulla mahaletkulla (an Innervated main stomach) tai gast-risella fistelillä (G,F.) ja hermottomalla mahalla (a denervated stomach) tai Haidenhain-pussilla (H.P.). Mahaletku Ja Haidenhain-pussl olivat kumpikin varustetut kanyylillä, jotta painovoima tyhjentäisi mahanesteet ulos. Sen Jälkeen mainitut mahanesteet titrattiin erikseen 0,IN NaOHslla käyttäen automaattista titraattoria (Radiometer, Kööpenhamina). k - 5 viikon toipumisajan kuluttua, viisi koiraa käsiteltiin ensin pelkästään eritystä aikaansaavalla aineella (histamiini--annoksia lisättiin progressiivisesti joka 30.minuutti minimistä *+0:stä maksimiin 320:een μg/kg/h) happaman gastrisen erityksen stimu-loimiseksi sekä G.F.sssä että H.P.sssä. Joka 30. minuutti hapan tuote sekä G.F.sstä että H.P.sstä kerättiin ja titrattiin edellä esitetyllä tavalla. Näin saatuja arvoja (jokainen viiden koiran keskiarvona) pidettiin "kontrolli-arvoina" tai "kontrolleina". Keksinnönmukaisten yhdisteiden gastrisen eritystä estävän oraalisen aktiviteetin arvioimiseksi, niitä annostettiin letkuruokinnalla mahaletkuun mainittu annos, ilmaistuna jig/kg/h, liuotettuna 1 mlsaan fysiologista liuosta, 60 minuuttia ennen eritystä aikaansaavan aineen annostamista. Gastrisen liikahappoisuuden stimuloiva aine annostettiin suonensisäisesti jatkuvalla infuusiolla edellä esitettyinä annoksina, ja Joka 30. minuutti mahanesteet sekä G.F.sstä että H.P.jstä kerättiin ja titrattiin. Näin toimimalla oli mahdollista arvioida yksinkertaisilla laskutoimituksilla happamen gastrisen erityksen prosentuaalinen inhibiitio histamiinin ja aktiivisen yhdisteen annetuilla annoksilla.

Esimerkin 1F mukaisella yhdisteellä, jonka = -50,3°, saa dut tulokset osoittavat, että hyvin alhaiset annokset, 25-100 ^g/kg/h, estävät histamiiniannoksilla, jotka vaihtelevat ^-0-160 ^g/kg/h, indusoidun gastrisen liikahappoisuuden noin 95 - 35 ^ssesti (laskettu kontrolleihin nähden) G.F.tssä ja noin 60-30 j6;sesti H.P.sssä.

Samoissa kokeellisissa olosuhteissa vastaavat yhdisteet, Joilla on C-5-kaksoisidos, ovat melkein inaktiivisia.

Toinen koe, joka suoritettiin samoissa olosuhteissa kuin edellä esitetty, mutta histamiinia annostettiin kiinteä annos l60 }ig/kg/h 9 69062 lisääntyvien annoksien sijasta, osoitti, että esimerkin 1F mukainen yhdiste, jolla 20 = -50,3°, estää gastrisen happo-erityksen noin 60 $:sesti, kun taas vastaavat yhdisteet, joilla on C-5-asemassa kak-soissidos, ovat inaktiivisia. Tämän keksinnönmukaiset yhdisteet ovat tehokkaita gastrisen liikaerityksen inhibiittoreita myös suonensisäisesti annostettaessa. Tämä on vahvistettu tarkastelemalla histamiinilla indusoiduissa gastrisissa liikaerityksissä vaikutuksia, Jotka on aikaansaatu annostamalla tämän keksinnönmukaisia yhdisteitä yksinkertaisilla suonensisäisillä annoksilla nukutetuille rotille. Kokeet suoritettiin pääasiassa menetelmän mukaan, jonka on esittänyt Ghosh ja Schild, julkaisussa Brit. J. Pharm. (1958), 13» 5*+-6l. Tämän menetelmän mukaan rotta nukutetaan uretaanilla ja sen vatsaa huuhdotaan laimealla natrlumhydroksidiliuoksella (N/^+000 NaOH, nopeudella, joka on noin 1 ml/min) ruokatorven kautta ja mahaportissa olevasta kanyylista tulevan nesteen pH:ta tarkkaillaan jatkuvasti lasi-elektrodin avulla, joka on yhdistetty suoraan lukevaan pH-mittariin ja siitä rekisteröidään laitteeseen. Kulkiessaan vatsan läpi, huuhteluaine kerää riittävästi puskuria toimiakseen suurin piirtein lineaarisena puskurisystee-mlnä sopivassa suhteessa, niin että muutoksesta pH:ssa tulee happamen erityksen mitta.

Kun NAOOO NaOH-liuos kerätään, sen kuljettua stimuloimattoman vatsan läpi, saadaan alkuarvoksi noin 6-6,5 ^»stimuloima ton maha*·

Eritysstimulantti, tässä tapauksessa histamiini, annostetaan sen jälkeen suonensisäisesti Jatkuvalla infuusiolla annoksen ollessa 1,5 mgAg/h, Muutaman minuutin kuluttua pH alkaa laskea ja noin 10-20 minuutin kuluttua eritysvaikutus saavuttaa maksiminsa ja pH on alhaisim-massa arvossaan (pHhlstamllnllla stlmuioltu maha>, 3°·« Johtuen hista- miinin Jatkuvasta infuusiosta, pysyy vakiona. Testattavat yhdisteet annostetaan tämän Jälkeen suonensisäisesti Ja pH:ta rekisteröidään jatkuvasti. Ottamalla korkein, rekisteröity pH-arvo, joka on todisteena testatulla yhdisteellä saavutetusta suurimmasta eritystä estävästä vaikutuksesta (pHM A E ) Ja käyttäen seuraavaa kaavaa pHM.A.E. " pHH.S.S. χ 100 pHU.S. ~ pHH.S.S.

voidaan helposti laskea gastrisen happamen erityksen prosentuaalinen inhlbiitio. 100 #:nen teho tarkoittaa, että testattava yhdiste, testatulla annoksella, palautti histamiinilla stimuloidun mahan pH-arvon 10 69062 stimuloimattoman mahan alkuperäiseen arvoon, kun taas 0-%:nen teho tarkoittaa, että yhdisteen annostaminen ei vaikuttanut histamiinilla indusoituun gastriseen eritykseen.

Edustavissa kokeissa, jotka suoritettiin esimerkin 1F mukaisella yhdisteellä, jonkajj<] ^ = -50,3°, saatiin seuraavat tulokset:

Annos (/i g / k g) Happamen gastrisen erityksen %-inhibiitio 2,5 15 10 63 20 90 50 100 Lähin tunnettu yhdiste US-4 201 865 esimerkin 5 yhdiste, joka on hakemuksemme PGE^-yhdisteiden PGE^-analogi, jolloin erona on kak-soissidos 5-asemassa, kun kysymyksessä on PGE^-analogi.

Osoittaaksemme, että näiden kahden yhdisteen välillä on itse asiassa merkittävä ero, mitä seikkaa ei ennalta tiedossa olevien asioiden perusteella voinut aavistaa, vertailimme mainittua yhdistettä hakemuksemme esimerkin 1F yhdisteeseen gastrisessa eritystestissä ja ripuli testi ssä .

Gastrinen eritys arvioitiin edellä esitetyn nukutetun rotan vatsan 1äpivirtaustesti11ä, jonka ovat esittäneet myös C. Scarpignato, G. Spina, G.C. Signorini ja G. Bertaccini julkaisussa Res.Commun.Chem. Pathol . Pharmacol . 1983 , 3j}, 211.

Gastrinen hypereritys indusoitiin jatkuvalla suonensisäisellä (i.v.) histamiini-infuusioli a (1,5 mg/kg/tunti) ja testattavien yhdisteiden kyky vähentää tätä hypereritystä arvioitiin.

EDgg-arvot vertai1uyhdisteel 1 e ja tämän keksinnön mukaiselle yhdisteelle olivat vastaavasti 7,2\,r/kg ja 4,5'Y7kg i.v. annostuksen jälkeen.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden paremmuuden osoittamiseksi arvioitiin myös ripuiivaikutus hiirillä. Onhan tunnettua, että ripuli on prostaglandiinien eräs useimmiten esiintyvä, ei-toivottu sivuvaikutus.

Ripulivaikutus arvioitiin menetelmällä, jonka ovat esittäneet Randall ja Baruth (L.0. Randall ja M. Baruth, Arch.Int.Pharmacodyn, 1 976 , 220 , 94). Charles Rivers uros CD^-hiiriä, paino 20-22 g, pidettiin paastolla 24 tuntia ennen testiä. Hiirille, 10 eläintä/annos/ryh-mä, annettiin praalisesti logaritmisesti jaetut annokset kulloinkin kysymyksessä olevaa prostaglandiinia. Välittömästi annostuksen jälkeen

II

11 69062 hiiret laitettiin tunnin ajaksi yksittäisiin häkkeihin, joissa oli pohjalla imu-paperit. Ripuli arvioitiin muodostuneiden ulosteiden kosteustahrojen koosta, käyttäen arviointitaulukkoa 0-4, kuten Randall ja Baruth ovat esittäneet.

ED^g-arvot laskettiin menetelmällä, jonka ovat esittäneet Miller ja Tainter (R.C. MiHler ja M.L. Tainter, Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 1944, 57, 261).

ED^g-arvo vertailuyhdisteelle oli 750 V/kg, kun taas ED^g-arvo tämän keksinnön mukaiselle yhdisteelle oli 1350 Y?kg. Erot aktiivisuuksissa ja ei-toivotun sivuvaikutuksen esiintymisessä osoittavat selvästi tämän keksinnön mukaisen yhdisteen paremmuutta.

Suhde ED,-g(antisecretory)/ED5g(diarrhogenic), joka on merkittävä terapeuttinen indeksi, on selvästi paljon parempi tämän keksinnön mukaisella yhdisteellä.

Edellä esitetyn perusteella katsomme tämän hakemuksen mukaisten yhdisteiden olevan uusia ja perustellusti huomattavasti tehokkaampia kuin tunnetut, läheistä sukua olevat prostaglandiinit.

Suoritettiin toisia kokeita, jotka osoittivat, että tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä on myös huomattava solujasuojaava (sytoprotektiivinen) aktiviteetti, joka esiintyy hyvin alhaisilla oraalisilla annoksilla. Erityisesti tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden solujasuojaava vaikutus arvioitiin niiden tehokkuudesta rotilla mahahaavojen, jotka oli aiheutettu annostamalla suuri annos 1-(p-klooribentsoyyli)-metoksi-2-metyyli-2-indolyyli-etikkahappoa (indometasiinia), muodostuksen ja vähenemisen inhibiitiosta oraalisilla annoksilla, jotka ovat paljon alhaisempia kuin ne annokset, jotka aikaansaavat gastrisen happamen erityksen inhibiition. Näissä kokeissa rotille ei annettu ruokaa kokeiden alkamista edeltävänä päivänä, mutta vettä annettiin mielinmäärin. Testattavat yhdisteet annostettiin oraalisesti suspensiona 0,5-%:ssa vesipitoisessa metoselli-1iuoksessa (5 eläintä/annos), kun taas indometasiini annostettiin intraperitoneaalisesti 10,000 mg/kg samassa apuaineessa. Toinen ryhmä rottia (kontrollit) sai ainoastaan uikerogeenisen aineen. Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden soluja suojaavat ominaisuudet ilmoitettiin sen jälkeen "haavojen prosentuaalisena inhibiitiona kontrolleihin verrattuna", joka voidaan helposti laskea seuraavalla suhteella: A*^(kontrol1it) ” ^.U.D.(käsite!lyt eläimet) --X 100 A*U *D*(kontrollit) jossa A.U.D. (|ζ0η^Γοΐ 1 it) on kontrollien mahojen keskimääräinen haavau-tumisaste ja A.U.D. ( kasUe1 ,yt eläfmet) on niiden eläinten, jotka sai-vat sekä indometasiinia että testattavana olevaa yhdistettä, mahojen 12 keskimääräinen haavautumisaste. 69062 A.U.D.jt on laskettu menetelmän mukaan, Jonka ovat esittäneet Thuillier et ai. Julkaisussa Chim. Ther», 3, 53, 1968, tutkimalla laboratorioeläinten mahoista mahdolliset haavat Ja merkitsemällä tulokset ryhmittäin Orsta !+iään, riippuen havaittujen haavojen lukumäärästä Ja vakavuudesta s 0 tarkoittaa, ettei mahaseinämässä ole yhtään haavaa, *+ tarkoittaa haavojen lävistämä. Yksinkertainen haavautumisaste (S.U.D.) lasketaan sen jälkeen jokaiselle yksittäiselle mahalle.

S.U.D,-arvojen summa jaetaan eläinten lukumäärällä, jolloin saadaan jokaisen eläinryhmän mahojen A.U.D.-arvo.

‘Näissä kokeissa esimerkin 1 mukainen yhdiste, jonka s -50,3°, osoittautui hyvin aktiiviseksi, jopa hyvin alhaisilla annoksilla. Itse asiassa annoksella, joka oli 3 }ig/kg (näissä kokeissa alhaisin testattu annos) haavojen prosentuaalinen inhibiitio kontrolleihin nähden oli noin *+3, kun taas ED^q (ts. annos, joka inhiboi haavoja 50 ^ssesti kontrolleihin nähden), laskettuna ekstrapoloimalla, oli 6 /ig/kg.

Sen tähden on selvää, että näiden yhdisteiden suurempi suojaava vaikutus vatsan limakalvoon on yhden tai useamman mekanismin aikaansaama, jotka ovat riippumattomia happamen erityksen inhibiitiosta, koska kuten tämän viimeisen kokeen tuloksista käy selville, tämä yhdiste suojaa soluja annoksilla, jotka ovat aivan liian pienet inhiboimaan happoeritystä huomattavissa määrin.

Edellä esitetyistä tuloksista johtuen ovat tämän keksinnönmukai-set prostaglandiinijohdannaiset hyödyllisiä imettäväisille liiallisen gastrisen happoerityksen vähentämiseksi Ja kontrolloimiseksi ja myös käytettäväksi, jopa hyvin alhaisissa annoksissa, vatsan limakalvon suo-jaavaan vaikutukseen, siten vähentäen ja estäen maha-suoli-haavan muodostumista. Täten tämän keksinnön piiriin kuuluvat edelleen farmaseuttiset tai eläinlääketieteelliset koostumukset, jotka sisältävät aktiivisena aineosana kaavan (I) mukaista prostaglandiiniJohdannaista.

Käytettäessä keksintöä hyväksi annostetaan uusia yhdisteitä, mieluimmin, per os kapseleiden, päällystettyjen tablettien tai siirappien muodossa. Haluttaessa voidaan myös valmistaa parenteraalisestl an-' nettavia annosmuotoja, kuten Injektoitavia ampulleja. Nämä farmaseuttiset annokset muodostetaan tunnetulla tavalla (katso esimerkiksi julkaisua Remington's Pharmaceutical Sciences, 13. painos, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania) ja valmistetaan tavallisilla menetelmillä.

Ne voivat sisältää noin 5-100 μg Ja mieluimmin noin 10-60 }ig aktiivista aineosaa. Lisäksi terapeuttiset kapselit Ja päällystetyt tabletit it 13 69062 voivat sisältää tavallisia, farmaseuttisesti hyväksyttäviä täyteaineita, kuten inerttdjä laimennusaineita, voitelu- ja hajotusaineita. Siirapit voivat sisältää tavallisia suspendoivia, kostuttavia ja puskuroivia aineita, makuaineita ja säilytysaineita. Annostusohje tämän keksinnönmukaisille prostaglandiini-yhdisteille mahaa suojaavan hoidon suhteen riippuu erilaisista tekijöistä, mukaan lukien imettäväisen tyypin, iän ja painon. Hyviä tuloksia voidaan kuitenkin saada annostamalla tämän keksinnön prostaglandiiniyhdisteitä päivittäisenä annoksena, joka on noin 10-300 jjg, mieluimmin jaettuna annoksiin. On kuitenkin selvää, että päivittäistä annosta, joka on edellä esitetyn rajan yläpuolella, voidaan myös käyttää, riippuen hoidettavan kohteen yksilöllisistä olosuhteista.

Seuraavat esimerkit kuvaavat edelleen tätä keksintöä.

Esimerkki 1 11 fX ,l5-dihydroksi-l6-raetoksi-l6-metyyli-9-okso-prosta-13(E )- -eeni-l-hapon metyyliesteri (15-R, 16-R) ja (15-S, 16-R) tai (15-R, l6-S) ja (15-S, 16-S) A) Seokseen, jossa on 770 mg 8l,8 $:sta natriumhydridin suspensiota mineraaliöljyssä (0,026 moolia) ja 30 ml vedetöntä dimetoksietaania, lisätään tipoittain liuos, jossa on 8 g (0,030 moolia) optisesti aktiivista 3-metoksi-3-metyyli-2-okso-heptyylifosfonihapon dimetyyliesteriä, jonka= -+^+1^2° (C = 1 % CHCl^jssa), *+0 ml:ssa dimetoksietaania. Saadun seoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 15 minuuttia, sen jälkeen siihen lisätään vähitellen liuos, jossa on *+,08 g (0,013 moolia) 7- -asetoksi-2^ -formyyli-3 <8-hydroksi-syklopent-l^( -yyli )heptaani-hapon metyyliesteriä 50 mlsssa vedetöntä dimetoksietaania. Seisotetaan huoneen lämpötilassa 6 tuntia, jonka jälkeen reaktioseos kaadetaan NaH^O^illä kyllästettyyn vesipitoiseen liuokseen, joka sen jälkeen uutetaan etyylieetterillä. Orgaaninen uute kuivataan MgSO^jllä ja konsentroidaan kuiviin. Saatu jäännös puhdistetaan piihappogeelipylväs-kromatografisesti, eluointi etyylieetteri/petrolieetterillä 1:1 (til./ til.). Saanto 3,9 g 9<^-asetoksi-llo^-hydroksi-l6-metoksi-l6-metyyli--l5-okso-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesteriä, jolla asemassa C-l6 on absoluuttinen konfiguraatio R tai S. \^\ = + 53,8° (0=0, 8l % CHClyssa). NMR-absorptiopiikit ovat CDClyssa (8 ): 0,89; 1,1-2,1; 1,29; 2,08; 2,30; 2,1+-2,6; 3,21, 3,68; 1+,11; 5,23; 6,87.

B) Valmistetaan 5-10°C:sen lämpötilassa seos, jossa on 5 g (0,0113 moolia) 9 K-asetoksi-llo(-hydroksi-l6-metoksi-l6-metyyli-l5--okso-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesteriä (valmistettu kappalees- 14 69062 sa A) esitetyllä tavalla) liuotettuna 150 ml:aan vedetöntä bentseeniä, 2,6 ml (0,0285 moolia) 2,3-dihydropyraania ja 70 mg p-tolueenisulfoni-happoa 50 ml:ssa vedetöntä bentseeniä, seosta pidetään tämän jälkeen huoneen lämpötilassa noin 10 minuuttia. Reaktioseos pestään ensin natriumbikarbonaatilla kyllästetyllä, vesipitoisella liuoksella ja sen jälkeen vedellä. Haihduttamalla liuotin saadaan jäännös, joka puhdistetaan piihappogeelipylväskromatografisesti, eluoimalla petrolieette-rijetyylieetterillä 7*3 (til./til,). Saanto 5 g 9°{-asetoksi-l6-metoksi--l6-metyyli-l5-okso-ll^ - j(tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi] -prosta--13(E)-eeni-l-hapon metyyliesteriä, jossa hiiliatomilla asemassa 16 on absoluuttinen konfiguraatio R tai S. NMR absorptiopiikit CDClyssa (S): 0,885 l,l-3,0? 1,255 2,06; 3,235 3,3-Μί 3,725 5,20; 6,8-7,1.

C) Liuokseen, jossa on 13,5 g natriumboorihydridiä MDO ml:ssa metanolia, jäähdytettynä - 20°C:seen, lisätään tipoittain liuos, jossa on 5 g (0,0093 moolia) 9'/,-asetoksi-l6-metoksi-l6-metyyli-l5-okso--1L-/ - l(tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi^-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesteriä (valmistettu kappaleessa B) esitetyllä tavalla). Saatua liuosta pidetään -20°C:sessa noin 2 tuntia, sen jälkeen se kaadetaan NaH2P0^:llä kyllästettyyn, vesipitoiseen liuokseen, joka sitten uutetaan etyylieetterillä. Orgaaninen uute kuivataan Na^SO^sllä ja haihduttamalla kuiviin saadaan jäännös, joka on 9°<-asetoksi-15-hydrok-si-l6-metoksi-l6-metyyli-ll<K -^(tetrahydro-lH-pyran-2-yyli )-oksi^ --prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesterin kahden, 15-asemassa olevan mahdollisen isomeerin seos. Mainitut isomeerit erotetaan ensin petro-lieetteri:etyylieetterillä 8:2 (til./til.) raa'an seoksen puhdistamiseksi, ja sen jälkeen eluoidaan petrolieetteri:etyylieetterillä 6:1* (til./til. ).

Ensimmäisellä eluoidulla tuotteella (2,05 g puhdasta tuotetta, vähemmän polaarinen isomeeri) on seuraava NMR-spektri: pääabsorptio-piikit CDCl^jssa esiintyvät seuraavilla taajuuksilla, ilmaistuna S-yksiköissä: o,90; 1,13; 1,1-2,9; 2,07; 3,285 2,5-*+,3; 3,73; ^,67; 5,205 5,7-5,9.

Toisella eluoidulla tuotteella (2,1 g puhdasta tuotetta, polaa-risempi isomeeri) on seuraava NMR-spektri CDClyssa (£*-yksiköt): 0,93; 1,07; 1,1-2,9-, 2,07; 3,28; 3,2-^,2; 3,72; »f,675 5,20; 5,7-5,9.

Näin saadulla kahdella tuotteella on sama absoluuttinen konfiguraatio C-l6-asemassa (R tai S) ja vastakkaiset konfiguraatiot C-15--asemassa. Täten ne edustavat isomeeriparia, jolla on seuraavat absoluuttiset konfiguraatiot C-15- ja C-l6-asemassa: (15-R, l6-R) ja it 69062 15 (15-S, l6-R) tai (15-R, l6-S) ja (15-S, 16-S).

Jälkeenpäin suoritettavat kemialliset modifikaatiot, jotka tuottavat kaavan (I) mukaisia lopputuoteita, eivät muuta stereokeraiaa C-15- ja C-l6-aseraissa.

D) 2,1 g 9öl-asetoksi-l5-hydroksi-l6-metoksi-l6-metyyli-llK--|^(tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksjQ -prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyli-esterin polaarisempaa isomeeriä (valmistettu kappaleessa C) esitetyllä tavalla) liuotetaan 150 mitään vedetöntä bentseeniä. Jäähdytetään, jonka jälkeen lisätään 1,3 ml (0,01^2 moolia) 2,3-dihydropyraania ja liuos, jossa on 75 mg p-tolueenisulfonihappoa *+0 mltssa vedetöntä bentseeniä, 15 minuutin kuluttua liuos kaadetaan vesipitoiseen natriumbikarbonaattiin. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan Na^O^rllä ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös puhdistetaan piihappogeelipylväskro-matografisesti, eluoimalla petrolieetteritetyylieetterillä = 7:3 (til./ til.), jolloin saadaan 2,1 g 9°^-asetoksi-l6-metoksi-l6-metyyli- -11°( ,l5-bis-|(tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi|l -prosta-13(E)-eeni--1-hapon metyyliesteriä, jolla on yksi neljästä mahdollisesta C-15-ja C-l6-asemien absoluuttisesta konfiguraatiokombinaatiosta. NMR--spektri (CDC13)s 0,92; 1,12; 1,15; 1,1-3,0; 2,07; 3,25; 3,32; 3,2-W,2; 3,70; ^,5-5,2; 5,3-5,6 (S-yksiköt).

Näin saatu yhdiste liuotetaan 200 ml saan vedetöntä metanolia ja saatuun liuokseen lisätään 2,1 g vedetöntä kaliumkarbonaattia. Hämmennetään huoneen lämpötilassa 2b tuntia, jonka jälkeen seos kaadetaan NaH.pPO^tllä kyllästettyyn, vesipitoiseen liuokseen, joka sen jälkeen uutetaan etyylieetterillä. Orgaaninen faasi erotetaan, kuivataan Na2S01+:llä ja konsentroidaan kuiviin. Saadaan 1,95 g 9°(-hydroksi-l6--metoksi-16-metyyli-11 «Λ ,15-bis- ^tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi\--prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesteriä (puhdas tuote). NMR-spektri CDClyssa (S): 0,92; 1,0-2,9; 1,10; 1,13; 3,25; 3,32; 3,2-V,**; M" 5,0; 5,^-5,9.

E) Seosta, jossa on 6,38g celiteä, 7,25 g Collins'in reagenssia (Py2.Cr03) ja 1,95 g 9°(-hydroksi-l6-metoksi-l6-metyyli-lW~l5-bis- - ^tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi^-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyli-esteriä l80 ml:ssa metyleenikloridia, hämmennetään huoneen lämpötilassa noin 1 tunti. Reaktioseos kaadetaan 1200 mitään etyylieetteriä ja suodatetaan celiten läpi. Suodoksesta poistetaan väri aktiivihiilellä ja se konsentroidaan kuiviin. Saanto: 1,77 g l6-raetoksi-l6-metyyli--9-okso-llo( ,l5-bis-^(terahydro-lH-pyran-2-yyli )oksi^ -prosta-13(E)--eeni-1-hapon metyyliesteriä. NMR-spektri CDCl^jssa (S-yksiköt): 16 69062 0,93; 1,0-2,9; 1,12; 1,15; 3,l-M; 3,25; 3,32; 3,70; 5,M,8.

F) Näin saatu tuote (1,77 δ) suspendoidaan 100 mitään liuosta, jossa on etlkkahappoatvettättetrahydrofuraania suhteessa 19tllt3 (til./ til./til,), Hämmennetään !f50C:8essa kaksi tuntia, jonka jälkeen seos laimennetaan vedellä ja pH säädetään arvoon 7,2 lisäämällä natriumbikarbonaattia. Seos uutetaan etyylieetterillä, joka sen jälkeen keitetään pois, jolloin saadaan 1,19 g raakatuotetta, joka puhdistetaan piihappogeelipylväskromatografisesti, eluoimalla etyylieetterillä.

Saadaan 780 mg puhdasta 11°(,15-dihydroksi-l6-metoksi-l6-metyyli --9-okso-prosta-13(E)-eenl-l-hapon metyyliesteriä, jossa hiiliatomeilla asemissa 15 ja 16 on yksi absoluuttinen konfiguraation neljästä mahdollisesta kombinaatiosta, ts. (15-R, l6-R) tai(l5-R, 16-S) tai (15-S, l6-R) tai (15-S, 16-S). Yhdisteellä on seuraavat tunnusmerkit: \j^]20 B -50 j 3 ^ Je = 0,96 % (paino/til.) CHC1 3 : s s .

NMR CDClvssa (&): 0,92; 1,1-1,7; 1,11; 1,9-2,8; 2,29; 3,1^3,3; 3,2>+; 3,63; ^,07; 12; 5,69.

Yhdiste on yhtenäinen tuote, todettu differentiaalisella ero-tuskalorimetrialla, ja se sulaa *+0-M}°C.

G) Lähtemällä 9 -asetoksl-l5-hydroksi-l6-metoksi-l6-metyyli- -11 - [(tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi^-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesterin vähemmän polaarisesta isomeeristä, joka valmistetaan kappaleessa C) esitetyllä tavalla, ja työskentelemällä aivan samoin kuin on esitetty kappaleissa D), E) ja F) saadaan 380 mg llo( ,15-dihydroksi -16-metoksi-l6-raetyyll-9-okso-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesteriä, jolla on asemassa C-l6 sama absoluuttinen konfiguraatio kuin yhdisteellä, joka saatiin kappaleessa F), mutta asemassa C-15 vastakkainen, absoluuttinen konfiguraatio. Yhdisteellä on seuraavat tunnusmerkit: = - 79,6° (C = 1 f OHOlj) NMS-spektrl CDCl,issa (S): 0,92) 1,1-1,7) 1,17) 1,9-2,8) 2,29) 3,26) 3,69) >t,10) S17) 5,75.

Esimerkki 2 11 C3( ,15-dihydroksi-l6-metoksl-l6-metyyli-9-okso-prosta-13(E)-—eeni—1—hapon metyyliesteri (15-R, 16-S) ja (15-S, 16-S) tai (15-R, 16-R) ja (15-S, 16-R) Työskentelemällä pääpiirteittäin kuten esimerkissä 1 esitettiin, mutta lähtemällä esimerkin 1 kappaleessa A) käytetyn fosfonaattirea-genssin optisesta antipodista,^ = - Wl,3° (C = 1 % CHCl^issa)!^

Il 17 69062 valmistetaan kaavan (I) mukaisen 11Ά ,15-dihydroksi-l6-metoksi-l6--metyyli-9-okso-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesterin kaksi muuta mahdollista isomeeriä. Näillä kahdella isomeerillä on asemassa C-l6 sama absoluuttinen konfiguraatio, joka on vastakkainen esimerkin 1 kahden isomeerin C-l6-konfiguraatioon verrattuna, ja asemassa C-15 niillä on vastakkaiset konfiguraatiot.

A) Kondensoimalla 5 g (0,0188 moolia) 3-metoksi-3-metyyli-2- -okso-heptyylifosfonihapon dimetyyliesteriä, jolla on = -*+1,3° (C = 1 % CHClyssa), 2,5 g:n kanssa (0,0080 moolia) 7-(5°(-asetoksi--2^3 -formyyli-3 ^-hydroksi-syklopent-l o^-yyiD-heptaanihapon metyyli-esteriä esimerkin 1 kappaleessa A) esitetyllä tavalla ja työskentelemällä saman esimerkin kappaleissa B) ja C) esitetyllä tavalla, saadaan 9 -asetoksi-l5-hydroksi-l6-metoksi-l6-metyyli-ll^ - ^tetrahydro--lH-pyran-2-yyli)oksij-prosts-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesterin kahden, C-15-aseman isomeerin seos (2,65 g raakatuotetta).

NMR-spektri CDClyssa (M: 0,91; 1,0-2,6; 1,06; 1,07; 1,13; 1,1^; 2,06; 2,29; 3,22; 3,2*+; 3,3-M; 3,68; M-,5-^,6; 5,13; 5,5-5,7.

B) Edellä saatu kahden, C-15-aseman isomeerin seos (2,65 g) hydrolysoidaan käsittelemällä 78 ml:11a liuosta, jossa on etikkahappoa:vettä: tetrahydrofuraania suhteessa 19;11;3 (til./til./til.), M-5°C:sessa 90 minuutin ajan. Reaktioseos neutraloidaan natriumbikarbonaatilla ja uutetaan eetterillä. Haihduttamalla orgaaninen uute kuiviin, saadaan 2,55 g raaka tuotetta, joka on 9°( -asetoksi-ll°( ,l5-dihydroksi-l6-metok-si-l6-raetyyli-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesterin kahden C-15--isomeerin seos. Puhtaat isomeerit erotetaan piihappogeelipylväskro-matografisesti eluoimalla etyylieetterillä. Ensimmäinen eluoitu tuote on vähemmän polaarinen isomeeri (860 mg), jolla on seuraavat tunnusmerkit: 1^20 = + 17,3° (C = 0,95 1 CHCI3) NMR-spektri CDClyssa (δ): 0,92; 1,05; 1,1-2,6; 2,07; 2,29; 3,23; 3,68; 3,93; M5; 5,19; 5,63.

Toinen eluoitu tuote on polaarisempi isomeeri (saanto 870 mg), sillä on seuraavat tunnusmerkit: W20 = + ^5,3° (C = °’76 * CHCl3:ssa) NMR-spektri CDClyssa ( <S ): 0,91; 1,07-1,7; 1,13; 2,07; 2,2-3,0; 2,29; 3,25; 3,68; 3,89; »f,15; 5,17? 5,53; 5,71.

C) Seosta, jossa on 870 mg (0,00191 moolia) polaarisempaa iso- 18 69062 meeria, valmistettu kuten kappaleessa B) esitettiin, 130 ml:ssa vedetöntä bentseeniä, 30 mg p-tolueenisulfonihappoa 30 ml:ssa vedetöntä bentseeniä ja 2,5 ml (0,0273 moolia) 2,3-dihydropyraania, pidetään l5°C:sessa 15 minuuttia, sen jälkeen se kaadetaan NaHCOylla kyllästettyyn, vesipitoiseen liuokseen ja orgaaninen faasi erotetaan. Pestään vedellä, jonka jälkeen orgaaninen faasi kuivataan Na^O^tllä ja haihdutetaan kuiviin. Saatu jäännös puhdistetaan kromatografisesti käyttäen piihappogeelipylvästä ja eluoidaan petrolieetterisetyylieet-terillä 7:3. Saanto 1,09 g 9°(-asetoksi-l6-metoksi-l6-metyyli-llo(,l5--bis-y(tetrahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi^-prosta-13(E)-eeni-l-hapon me-tyyliesteriä, jolla on asemassa C-l6 absoluuttinen konfiguraatio, joka on vastakkainen esimerkin 1 kappaleessa E) valmistetun tuotteen konfiguraatioon verrattuna, ja asemassa C-15 toinen kahdesta mahdollisesta konfiguraatiosta.

NMR-spektri CDClyssa ( <$ ): 0,92; 1,0-2,75 1,11? 1,1?; 2,05; 2,29;3,22; 3,29; 3,3-*+, 2; 3,68; >+,6-**,9; 5,13; 5,*+-5,8.

D) Työskentelemällä pääpiirteittäin kuten on esitetty edellä esimerkin 1 kappaleissa D) (viimeinen osa), F) ja G), mutta lähtemällä yhdisteestä, joka saatiin edellä kappaleessa C), saadaan 250 mg 11°<,l5-dihydroksi-l6-raetoksi-l6-metyyli-9-okso-prosta-13(E)-eeni--1-hapon metyyliesteriä. Tällä tuotteella on seuraavat tunnusmerkit: = -51,*+° (c = 0,52 % CHC1 ^:ssa) NMR-spektri CDClyssa (&): 0,91; 1,1-3,2; l,l*f; 2,30; 3,25; 3,68; t+,07; **,l°i 5,6-6,0.

E) Työskentelemällä tämän esimerkin kappaleissa C) ja D) esitetyllä tavalla, mutta lähtemällä vähemmän polaarisesta isomeeristä (860 mg), joka saatiin kappaleessa B), saadaan 320 mg 110^15-dihyd-roksi-l6-metoksi-l6-metyyli-9-okso-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyli-esteriä. Mainitulla yhdisteellä, jolla on asemassa C-l6 sama absoluuttinen konfiguraatio kuin vastaavalla kappaleessa D) valmistetulla isomeerillä, ja asemassa C-15 vastakkainen konfiguraatio, on seuraavat tunnusmerkit: ΙτίΙβ0 = - 82,1+° (C = 0,95# CHcy NMR-spektri: (CDClyssa) (S): 0,9**; 1,1-1,8; 1,06; 2,0-2,9; 2,30; 3,2**; 3,69; **,11; *+,19; 5,6-5,9.

Claims (7)

69062 19

1. Menetelmä farmakologisesti aktiivisten 16-metoksi-16-metyyli--prostagl andi i ni-E-j - johdannai sten valmistamiseksi, joiden yleinen kaava (I) on 0 7 5 3 1 .CH2\6 .CH2\4 /CH2 n* /-COOK CH.^ CH, LH2 /9 Jf 2 2 An 14 0CH_ 18 \ CH . 15 16l 3 CH, . 20 \ll_i2 i3^ \CH_16 1? 2\ig CH '| r CH, CH2 / OH CH0 / O HO (I) jossa R tarkoittaa (C^_4)alkyyliryhmää tai myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväksyttävää kationia, tunnettu siitä, että a) saatetaan syklopentaanialdehydi, jonka kaava (II) on »r. va / CHO or2 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja R^ ja R2 tarkoittavat, toisistaan riippumatta, vetyä tai hydroksifunktion suojaryhmää, reagoimaan raseemisen fosfonaatin kanssa, jonka kaava (III) on (Ro0) 0 OCH.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan optisesti aktiivista 16-metoksi-16-metyyli--prostaglandiini-E^-johdannaista, jossa R tarkoittaa (C^-C^Jalkyyli-ryhmää tai myrkytöntä, farmaseuttisesti hyväksyttävää kationia, ja jonka yhdisteen C^g-aseman kiraalisuus vastaa lähtöaineena käytetyn, kaavan (III) mukaisen, optisesti aktiivisen 3-metoksi-3-metyyli-2--okso-heptyylifosfonihappo-dimetyyliesterin stereoisomeerin, jonka Γ°3£0 = + 41,2° (C = 1% CHClgtssa), C^-aseman kiraalisuutta, ja jonka Cig-aseman kiraalisuus vastaa välituotteena saadun, kaavan (V) mukaisen 9-asetoksi-15-hydroksi-16-metoksi-16-metyyli-ll o^- tetrahydro--lH-pyran-2-yyli)oksi] prosta-13(E)-eeni-l-happo-alkyyliesterin polaari-semman stereoisomeerin kiraalisuutta, joka stereoisomeeri eluoituu toisena tuotteena kromatografoitaessa stereoisomeerien seos piihappo- II 21 69062 geelillä, eluointiaineena peräkkäin petrolieetteri/etyylieetteri, 8:2 (til./til.) ja petrolieetteri/etyylieetteri, 6:4 (til./til.).

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan llo<. ,15-dihydroksi-16-metoksi-16-metyy li-9--okso-prosta-13(E)-eeni-l-happo-metyyliesteriä, jonka C^g-aseman ki-raalisuus vastaa lähtöaineena käytetyn kaavan (III) mukaisen 3-metok-si-3-metyyli-2-okso-heptyyli-fosfonihappo-dimetyyliesterin stereoiso-meerin, jonka = + 41,2° (c = 1%, CHClg), C^-aseman kiraalisuut- ta, ja jonka C,c-aseman kiraalisuus vastaa välituotteena saadun kaavan (V) mukaisen 9-asetoksi-15-hydroksi-16-metoksi-16-metyyli-ll°(- j_(tet-rahydro-lH-pyran-2-yyli)oksi]-prosta-13(E)-eeni-l-happo-metyyliesterin polaarisemman stereoisomeerin kiraalisuutta, joka stereoisomeeri eluoi-tuu toisena tuotteena kromatografoitaessa stereoisomeerien seos pii-happogeelillä, eluointiaineena peräkkäin petrolieetteri/etyylieetteri, 8:2 (til./til.) ja petrolieetteri/etyylieetteri, 6:4 (til./til.).

3. Il I 3 ^ P-CH2-CO-C-CH2-CH2-CH2-CH3 (III) (r3°) CH3 jossa R3 on (C^_4)alkyyliryhmä, tai jonkin sen optisen antipodin kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (IV) on OR. 17 5 3 1

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 15R,16R-ll°(,15-dihydroksi-16-metoksi-16--metyyli-9-okso-prosta-13(E)-eeni-l-hapon metyyliesteri.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jossa R^ on mieluimmin (C2_1+)alifaattinen asyyli ja R2 on vety tai tetrahydro-lH--pyran-2-yyli-radikaali.

5 A» /C00R f- CH CH A NC1X \ n r 3“ 1R?CH3 18 20 X3^CH\1S 36C\17 CH 19 .CH N CH^ XC ^ | XCH2^ ^ch2^ 0R2 jj CH3 (IV) 20 69062 jossa R, ja R£ tarkoittavat samaa kuin edellä, b) pelkistetään 15-oksoryhmä 15-hydroksidiksi käsittelemällä kaavan (IV) mukainen yhdiste sekametallihydridillä, joka on natrium-boorihydridi, sinkkiboorihydridi, difenyylitinahydridi tai litiumtri-alkyyliboorihydridi, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (V) on 0R1 17 5 3 1 .CH- 6 CH- 4 CH- 2 COOR /0^f" CH/ \ ,J 14 OCH 16' rl7 CH / ^CH ^ — C—CH2\ 18 /CH2\ 20 / I ' CH. CH- 0^2 0H CH3 2 3 (V) jossa R, R^ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, c) suojataan hydroksiryhmä C-15-asemassa hydroksifunktion sopivalla suoja-aineella, d) vapautetaan hydroksifunktio C-9-asemassa poistamalla suoja-ryhmä R^, e) hapetetaan hydroksiryhmä C-9-asemassa oksoksi, ja lopuksi f) poistetaan hydroksifunktiot C-ll- ja C-15-asemista lievällä hydrolyysillä, mainitulle menetelmälle on edelleen luonteenomaista, että kun saadaan isomeerien seos, se voidaan mahdollisesti erottaa yksittäisiin isomeereihin tavanomaisten menetelmien avulla.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jossa 15-oksoryh-män pelkistäminen 15-hydroksiksi suoritetaan kaavan (V) mukaiselle yhdisteelle, jossa R2 on hydroksifunktion suojaryhmä.

7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, jossa R2 on tet-rahydro-lH-pyran-2-yyli-radikaali. 22 PATENTKRAV 69062