FI68418C - Foerfarande foer framstaellning av maltoheptaos-derivat - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av maltoheptaos-derivat Download PDFInfo
- Publication number
- FI68418C FI68418C FI820586A FI820586A FI68418C FI 68418 C FI68418 C FI 68418C FI 820586 A FI820586 A FI 820586A FI 820586 A FI820586 A FI 820586A FI 68418 C FI68418 C FI 68418C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- derivatives
- amylase
- maltoheptaos
- framework
- nitrophenyl
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
6841 8
Menetelmä maltoheptaoosi-johdannaisten valmistamiseksi
Keksintö koskee menetelmää maltoheptaoosi-johdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava
CH„OH | CHo0H
J-0 /-% OH OH 5 jossa R on fenyyliglukosidi-, mononitrofenyyliglukosidi- tai dinitrofenyyliglukosidiryhmä.
Seerumin a-amylaasitason määrittäminen on tärkeä kliininen haiman toimintaa selvittävä parametri. Kaupan olevat a-amy-laasin määrittämiseen tarkoitetut reagenssit perustuvat pääasiallisesti systeemiin, jossa a-amylaasi pilkkoo tärkkelystä ja muodostuneet pilkkoutuneet osat määritetään näkyvällä alueella tai UV-alueella siitä riippuen, onko kokeessa käytetty amylaasisubstraattina värjättyä tärkkelystä vai luonnon tärkkelystä. Tämän menetelmän tai reagenssien oleellisena varjopuolena on se, että makromolekyylinä olevaa tärkkelystä ei voida riittävän hyvin karakterisoida ja standardisoida, joten yksityisten erien muuttumisnopeudet muodostuvat hyvin erilaisiksi ja mittauksissa on aina käytettävä standardikoet-ta. Parempien tulosten saavuttamiseksi tarvittaisiin yhtenäisempää substraattia, joka antaisi pilkottaessa luotettavia tuloksia.
Kantahakemuksessa 782789 (FI-C 61916) on kuvattu menetelmä a-amylaasin määrittämiseksi ruumiinnesteistä pilkkomalla entsymaattisesti edellä esitetyn kaavan I mukaista maltoheptaoosi— johdannaista ja määrittämällä sen jälkeen pilkkoutumistuotteet sinänsä tunnetulla tavalla.
2 6841 8
Pilkkoutumistuotteiden määritys suoritetaan edullisesti α-glu-kosidaasin avulla. Tällöin lohkeaa molempien entsyymien, ct-amy-laasi ja α-glukosidaasi, vaikutuksesta fenyyliryhmä, mononitro-fenyyliryhmä tai dinitrofenyyliryhmä, joka on helposti määritettävissä. Fenyyliryhmät voivat olla a- tai 3-asemassa. Jos kysymyksessä on α-asema, a-amylaasin ja α-glukosidaasin vaikutuksesta tapahtuu vain näiden lohkeaminen ja lohjenneet substi-tuoidut tai substituoimattomat fenolit ovat helposti määritettävissä tunnetuin värireaktioin. Voidaan kuitenkin myös käyttää β-asemassa olevia substituentteja. Viimeksi mainitussa tapauksessa α-glukosidaasin ohella käytetään lisäksi myös 3-glukosi-daasia.
Kun kyseessä ovat dinitrof enyyliryhmätkummatkin nitroryhmät voivat olla halutussa asemassa, esimerkiksi 2,4-, 2,6- tai 3,5-substituentteina.
Nitroryhmän sisältävän substituentin lohkaisun yhteydessä vapautuva nitrofenoli tai dinitrofenoli on itse värillinen yhdiste, joka on ilman muuta optisesti määritettävissä. Jos tällöin lohkeaa itse fenolia, tämä on määritettävissä tunnetuin menetelmin, esimerkiksi antamalla sen reagoida nukleofiilisen aineen kuten 3-metyyli-6-sulf onyyli-bentstiatsoloni-hydratsoni- (2) (HSK):n kanssa monofenolioksidaasin läsnäollessa. Tässä reaktiossa muodostuu punaista väriainetta, joka on mitattavissa.
Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on aikaansaada menetelmä edellä esitetyn kaavan I mukaisten maltoheptaoosi-johdannaisten valmistamiseksi ja tämä onkin toteutettu menetelmällä, jolle on tunnusomaista se, että kyseisen fenyyliqlukosidin tai nit-ratun fenyyliglukosidin annetaan reagoida a-syklodekstriinin kanssa syklomaltodekstriini glukanotransferaasin läsnäollessa.
Tässä entsymaattisessa valmistusmenetelmässä suoritetaan siis fenyyliglukosidin tai vastaavien nitrattujen fenyyliglukosidien transglukosidointi 6841 8 α-syklodekstriinillä tunnetun syklonaltodekstriini glukanotrans-feraasin läsnäollessa (tästä entsyymistä käytetään myöskin nimitystä Bacillus macerans-amylaasi E.C.2.4.1.19. DSM 24; eristäminen: J.A. de Pinto, L.L. Campbell, Biochemistry (1968) 114; transfer-reaktio: Methods in Carbohydr. Chemistry, Voi. II 347), jolla hydrolyyttisen ja syklisoivan vaikutuksensa ohella on ilmeisesti myös glukosyyliä transferoiva vaikutus.
Seuraava esimerkki valaisee keksintöä.
Esimerkki p-nitrofenyyli-a-maltoheptaosidin valmistus syntetisoimalla entsymaattisesti syklomaltodekstriini glukanotransferaasia (Bacillus macerans-amylaasia E.C.2.4.1.19 Bac. mac. DSM 24:stä) käyttäen.
Bacillus macerans-amyPaasilla on hydrolyyttisen ja syklisoivan vaikutuksen ohella myös glykosyyliä transferoivia ominaisuuksia, joita voidaan käyttää hyväksi syntetisoitaessa oligosakkarideja ja niiden johdannaisia (Methods in Carbohydrate Chemistry II, 347). p-nitrofenyyli-oligosakkaridien synteesiä varten tämä menetelmä optimoitiin seuraavanlaiseksi: 680 mg Bacillus macerans-amylaasia E.C.2.4.1.19 Bac. mac. DSM 24:stä) (lyofilisaattia) (0,46 yks/mg punnittua erää, proteiinipitoisuus punnitussa erässä 28,5 %, ei p-nitrofenyyli-ot-D-glukosidia pilkkovaa aktiivisuutta), 400 mg α-D-p-nitrofenyyliglukosidia, 3,5 g α-syklodekstriiniä, ja 70 ml Soerensen'in fosfaattipuskuria, pH 6,2; 0,01 moolia, sekoitetaan keskenään. Erää inkuboidaan 24 tuntia 37°C:ssa. Puhdistusta varten erotetaan sitten a- ja syntynyt 8-syklo-dekstriini ensin tetrakloorietyleeni-sulkeumayhdisteen välityksellä. ' Ristisidotulla dekstraanilla (Sephadex LH20) suoritetun kromatografoinniri jälkeen saadaan 50 mg amylaasi-testissä erittäin aktiiviseksi osoittautunutta p-nitrofenyyli-maltoheptaosidi-lyofilisaattia.
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2741192A DE2741192C2 (de) | 1977-09-13 | 1977-09-13 | Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase |
| DE2741192 | 1977-09-13 | ||
| DE19772755803 DE2755803A1 (de) | 1977-12-14 | 1977-12-14 | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha-amylase |
| DE2755803 | 1977-12-14 | ||
| FI782789A FI61916C (fi) | 1977-09-13 | 1978-09-12 | Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas |
| FI782789 | 1978-09-12 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI820586L FI820586L (fi) | 1982-02-23 |
| FI68418B FI68418B (fi) | 1985-05-31 |
| FI68418C true FI68418C (fi) | 1985-09-10 |
Family
ID=27187306
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI820586A FI68418C (fi) | 1977-09-13 | 1982-02-23 | Foerfarande foer framstaellning av maltoheptaos-derivat |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FI (1) | FI68418C (fi) |
-
1982
- 1982-02-23 FI FI820586A patent/FI68418C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI820586L (fi) | 1982-02-23 |
| FI68418B (fi) | 1985-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0045220B1 (en) | Method and test composition for determination of hydrogen peroxide | |
| FI61916C (fi) | Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas | |
| US4681841A (en) | Enzymatic assay method | |
| CN107602643B (zh) | 一种基于萘酰亚胺的β-葡萄糖醛酸苷酶的荧光探针及其应用 | |
| GB1571265A (en) | Amylase determination | |
| Babson et al. | New amylase substrate and assay procedure | |
| US4762917A (en) | Oligosaccharide derivatives and their use as substrate for measuring .alpha. | |
| Brander et al. | Colorimetric LPMO assay with direct implication for cellulolytic activity | |
| Shibata et al. | Rate assay of N-acetyl-β-D-hexosaminidase with 4-nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosaminide as an artificial substrate | |
| Waheed et al. | Chemical characterization and substrate specificity of rabbit liver aryl sulfatase A | |
| FI68418C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maltoheptaos-derivat | |
| EP0252525B1 (en) | Alpha-amylase assay using modified oligosaccharide and process for producing said modified oligosaccharide | |
| US4009079A (en) | Method for quantitatively determining glucoamylase in human urine and body fluids | |
| Larson et al. | Glucosyltransferase activity in a water extract of maize pollen | |
| US5202233A (en) | Process for the detection of substances with hydrolase activity | |
| JPS5913198B2 (ja) | アミラ−ゼ活性測定方法 | |
| US5350678A (en) | Method of differential assay for α-amylase isozymes and a kit for the same | |
| CN110823939B (zh) | 一种检测α-葡萄糖苷酶活性的方法 | |
| Hommalai et al. | Studies on the transglucosylation reactions of cassava and Thai rosewood β-glucosidases using 2-deoxy-2-fluoro-glycosyl-enzyme intermediates | |
| EP0557021B1 (en) | Oligosaccharide derivatives suitable for alpha-amylase determination | |
| Kessler et al. | Substrate and product specificity of Arthrobacter sialophilus neuraminidase. | |
| JPS5931699A (ja) | α−アミラ−ゼ活性の測定法 | |
| Satomura et al. | Kinetics of human pancreatic and salivary α-amylases with carboxymethylamyloses as substrates | |
| Gomez-Moreno et al. | Evidence for an aldehyde intermediate in the catalytic mechanism of thiamine oxidase | |
| US5260428A (en) | Agent for the detection of substances with hydrolase activity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |