FI63494B - Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod - Google Patents
Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod Download PDFInfo
- Publication number
- FI63494B FI63494B FI763446A FI763446A FI63494B FI 63494 B FI63494 B FI 63494B FI 763446 A FI763446 A FI 763446A FI 763446 A FI763446 A FI 763446A FI 63494 B FI63494 B FI 63494B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- factor
- activity
- sulphate
- polysaccharide
- xal
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, e.g. Konjac gum, Locust bean gum, Guar gum
- G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
rBl .^.KUULUTUSjULKAISU £3494 «rv tBJ (11) UTLÄGGNINGSSKRIFT D ° H n c (4$) Patentti ray Ennetty 10 06 1903
Patent, taeddolat ^ ^ (51) K».lk.3/lnc.CL3 G 01 N 33/86 SUOMI—FINLAND (21) Pi*«»ttlh«lMmu·—PttMtmOMnf 763M6 (22) HakMhplM—AMMnitafMfav 30.11.76 (23) AUuipUvt—GlWciMttdag 30.11.76 (41) Tullut JulMsakal — Kllvlc off«rtli| 02.06.77 f^tantti· jft rekisterihallitut (44) Nlhtivilulpanon |t kuuMulkalwn pvm.— „Q ΛΛ _
Patent och registerstyrelsen An*ek*nutta*dodi utUkria·» put>lic*r*d 2o.02.o3 (32)(33)(31) Pr/datty Muoikw»—t««trd prtorfuc 01.12.75
Ruotsi-Sverige(SE) 7513^95-7 (71) Pharmacia AB, Box 60U, S-751 25 Uppsala 1, Ruotsi-Sverige(SE) (72) Ee Thye Yin, St. Louis, Missouri, USA(US),
Oddvar Tangen, Uppsala, Ruotsi-Sverige(SE) (7*0 Berggren Oy Ab (5*0 Menetelmä tekijän Xa inhibiittorin in vitro määrittämiseksi veressä -Förfarande för in vitro-bestämning av faktor Xa-inhibitor i blod Tämän keksinnön tarkoituksena on aktivoidun tekijän X plasmain-hibiittorin Xal in vitro määrittäminen veressä, joka inhibiittori on o^-globuliini.
Tällä hetkellä ei ole olemassa tyydyttävää tekniikkaa, jonka avulla voitaisiin laatia ihmisen tai eläimen alkavan tromboottisen tilan varhaismääritys. Tromboemboliset sairaudet ovat yhä useammin syynä invaliditeettiin ja kuolemaan, sillä kirurgian alalla tapahtuva kehitys tekee yhä laajemmat kirurgiset toimenpiteet mahdollisiksi ja estrogeenipitoisia yhdisteitä käytetään yhä lisääntyvissä määrin suun kautta nautittavina ehkäisyaineina.
Viime vuosina on kirjallisuudessa esitetty paljon kokeellisia tietoja sekä in vitro että in vivo joiden perusteella esitetään, että Xal:n teho luonnonmukaisesti esiintyvänä antikoagulaattina veren hyytymisessä lähinnä johtuisi siitä, että se estää aluksi syntyneen tekijä Xa:n toiminnan täten estäen trombiinin muodostuksen eikä siitä, 2 63494 että se estäisi trombiinia hyökkäämästä fibronogeeniin. Tätä väitettä tukee erityisesti se raportti, jonka mukaan äärimmäisen pienet määrät hepariinia voisivat huomattavissa määrin edesauttaa tekijän Xa inhi-biitiota Xal:n avulla.
Useatkin todistusaiheet puhuvat voimakkaasti sen puolesta, että määrätyissä potilaissa kirurgisten toimenpiteiden aikana ja niiden jälkeen muodostuisi ennen havaitsematon, nk, "hyperkoagulaatiotila". Tällaisessa hyperkoagulaatiotilassa ei kuitenkaan pääse muodostumaan trombooseja niin kauan kuin tekijän Xal tekijään Xa kohdistunut poistamisnopeus ylittää tekijän Xa muodostumisnopeuden. On myös väitetty, että sellaiset naiset, jotka käyttävät suun kautta nautittavia ehkäisyaineita, olisivat enemmän alttiina tromboosille vahingon sattuessa, koska Xal on heidän veressään laskenut.
Nämä tiedot ovat synnyttäneet ajatuksen, että alhaiset määrät XaUtä voisivat heijastaa hyperkoagulaatiotilan. On siis oletettavissa, että plasman Xal-aktiivisuus saattaisi olla osoituksena hyperkoagu-laatiotilasta. Tätä otaksumaa tukevat lisäksi seuraavat havainnot: (a) potilaat, joilla on synnynnäinen antitrombiinin III puute (Xal) ovat trombofiilisiä, (b) sellaisilla naisilla, jotka käyttävät oraalisia ehkäisylääkkeitä ja joiden plasman Xal-aktiivisuus on alhainen, esiintyy ryhmänä tarkasteltuna useammin postoperatiivisia syvälaskimotrombooseja kuin sellaisilla, jotka eivät nauti sanottuja lääkkeitä.
Tämän takia on olemassa suuri sellaisen spesifisen menetelmän tarve, jonka avulla voitaisiin määritellä tekijän Xal biologinen aktiivisuus veriplasmassa.
On olemassa eräitä menetelmiä, joita käyttäen Xal-aktiivisuus pyritään määrittämään. Eniten käytetyt menetelmät rakentuvat immunologiseen määritykseen ja trombiinin estämiseen. Näihin menettelytapoihin liittyy kuitenkin monta varjopuolta. Täten immunologinen menetelmä ei näytä toteen ko. inhibiittorin biologista aktiivisuutta, vaikkakin sillä saadaan antigeeni a2-globuliini osoitetuksi. On väitetty, että eräiden potilaiden verinäytteissä, joilla potilailla synnynnäisesti esiintyy puutetta tämän inhibiittorin biologisesta aktiivisuudesta, ei ole ollut osoitettavissa tällaista puutetta, kun mittaus suoritet- 3 63494 tiin immunomenetelmää hyväksi käyttäen. (Sas et ai, Thromb, Diath. Haemmorh. 32! (1974) p. 105).
Tätä inhibiittoria varten käytetty trombiinimenetelmä ei ole spesifinen, koska sillä samanaikaisesti muidenkin seerumipro-teinaasi-inhibiittorien aktiivisuus tulee mitatuksi. (Whigham et ai, Thromb. Diath. Haemmorh. 34^ (1975) p. 365). Sen lisäksi se on herkkä äärimmäisen pienille määrille hepariinia ja hepa-riininkaltaisille aineille sekä fibrinogeenin hajotustuotteil-le, joita esiintyy veriplasmassa ja joita on hyvin vaikea kontrolloida.
Julkaisussa N Engl J Med 292 (1975) käsitellään sivuilla 146-151 hepariinin vaikutusta erilaisiin tekijöihin koagulaatiosystee-missä. Lähemmin määriteltynä kuvailee mainittu julkaisu hepariinin ja tekijä Xa-inhibiittorin (=XaI=antitrombiini III=hepa-riinikotekijä) välistä yhteisvaikutusta. Hepariini aktivoi Xal:n, joka samalla estää sekä trombiinia että tekijä Xarta, jolloin veren koaguloituminen estetään. Hepariinin lisäksi on myös en-dogeenisia aineita, jotka voivat vaikuttaa Xal:n ja trombiinin tai tekijä Xa:n välisiin vaikutuksiin. Vaikutus trombiiniin ja tekijä Xa:han on tietysti erilainen. Tekijä Xa:n tai trombiinin aktiivisuutta voidaan käyttää mittana Xal:lle kuitenkin vain silloin, kun kaikki reaktioparametrit ovat kontrollissa.
Nyt on yllättäen huomattu, että Xal:n biologinen aktiivisuus veressä voidaan määrittää in vitro ilman yllä mainittuja varjopuolia nyt puheena olevaa menetelmää käyttäen. Menetelmän avulla on mahdollista vähentää kontrolloimattomien parametrien määrää niin, että tuloksena on koe, joka on spesifisempi Xal:n suhteen. Tämä saavutetaan siis menetelmällä, jolle on tunnusomaista, että veriplasmanäyte inkuboidaan samanaikaisesti a) tekijällä Xa ja b) polysakkaridipolysulfaatilla, johka substituutioaste on 0,10-3,0 sulfaattiryhmää monosakkaridiryhmää kohti ja joka on dekstraanisulfaatti, heparaanisulfaatti tai dermataanisulfaatti, jolloin inkubointi tapahtuu tiettynä ajanjaksona, ja että sen jälkeen määritetään tekijä Xa:n jäljellä oleva aktiviteetti sinänsä tunnetulla tavalla. Reaktio-osuudet valitaan siten, että lisätyt polysakkaridipolysulfaatit vaikuttavat vain hyvin vähäi- 63494 sessä määrin suoraan Xal:hin. Polysakkaridisulfaattien suoraa reaktiota Xaltn kanssa pyritään siis välttämään.
Jäljellä oleva tekijä Xa:n määrä voidaan määritellä käyttämällä fibriininmuodostusta päätepisteenä (hyytymisajan mittaus) tässä tekniikassa jo hyvin tunnettua menetelmää käyttäen. Ko. määrä voidaan myös näyttää toteen mittaamalla este-raasi- tai amidolyyttistä aktiivisuutta muita sopivia substraatteja käyttäen.
Polysakkaridipolysulfaatti voi sisältää 0,10-3,0, esim. 0,45- 3.0 sulfaattiryhmää jokaista monosakkaridiyksikköä kohti.
Kun dekstraanisulfaattia käytetään polysakkaridipolysulfaat-tina on sulfaattiryhmien korvausaste 0,10-3,0, lähinnä 0,90- 3.0 jokaista monosakkaridiyksikköä kohti. Dermataanisulfaat-tia tai heparaanisulfaattia käytettäessä on sulfaattiryhmien korvausaste 0,45-n. 2,0 jokaista monosakkaridiyksikköä kohti.
Polysakkaridipolysulfaatin keskimääräinen molekyylipaino ei ole ratkaiseva. Täten voidaan käyttää vesiliukoista polysak-karidipolysulfaatteja, joiden molekyylipaino vaihtelee n.
1000 - ainakin 10 000 000. On myös mahdollista käyttää vesiliukoisia ja veteen liukenemattomia ristisidottuja polysakka-ridipolysulfaatteja.
5 63494
Haluttaessa voidaan polysakkaridipolysulfaatti kytkeä veteen liukenemattomaan kantajaan ristisidottuna dekstraanina. On myös mahdollista liittää polysakkaridipolysulfaatti vastaavaan ei korvattuun polysakkaridiin. Tässä tapauksessa sulfaattiryhmien korvausaste lasketaan käyttäen perustana tällaisen tuotteen korvattua osaa.
Kun menetellään keksinnön edellyttämällä tavalla on suotavaa, että näyte laimennetaan fysiologisella keittosuolaliuoksella tai puskurilla. Sopivan laimennussuhteen tulee tällöin ylittää 1/10, ja mieluiten 1/30. Täten pystytään tehokkaasti välttymään sellaisten aineiden häiritsevältä vaikutukselta, joiden tiedetään vaikuttavan negatiivisesti koagulaatiojärjestelmään.
Inkubaatioaika on riippuvainen inkubaatioliuoksessa esiintyvien reagenttien konsentraatiosta ja myös inkubaatiolämpötilasta. Asiantuntijan on helppo määrätä kussakin tapauksessa ihanteellinen aika. Inkubaatiolämpötila voi vaihdella n. 20°C - jopa n. 37°C.
Ko. menetelmälle sopiva pH on n. 7,0 - 8,0. Polysakkaridipolysul-faatin ja aktivoidun tekijän X (Xa) määrät eivät ole ratkaisevia.
On siis mahdollista käyttää polysakkaridipolysulfaattimääriä, jotka vaihtelevat 1-2000 ^ug/ml ja Xa/ml:sta 1-10 yksikköä. Asiantuntijalle optimaalisten pitoisuuksien määritteleminen kussakin tapauksessa ei tuota vaikeuksia.
Tämän keksinnön parissa työskenneltäessä olemme havainneet, että polysakkaridipolysulfaateillä saattaa olla veren hyytymistä silmällä pitäen kolme tärkeätä ominaisuutta, (a) ne pystyvät torjumaan ihmisplasmakomponentin estävän vaikutuksen neutraloitaessa Xa-inhibiittorilla Xa:ta, (b) niillä saattaa olla heikko hepariinintapainen aktiivisuus, (c) niillä voi olla synergistinen vaikutus pienien hepariinimää-rien antikoagulanttitehoon.
Kun tässä esitetyn keksinnön mukaisesti lähdetään määrittämään Xa-inhibiittori, saattaa polysakkaridipolysulfaatilla esiintyvän hepa-riinin kaltaisen vaikutuksen neutralointi olla paikallaan. Tämä tehdään lisäämällä sopivia määriä hepariinia neutraloivaa ainetta, kuten heksadimetriinibromidia (Polybren^^ , Abbott Laboratories, 6 6 3 4 9 4 USA) tai protamiinisuoloja substraattiplasmaan. Muussa tapauksessa saostumisajat venyvät turhan pitkiksi. Esimerkkejä polysakkaridipoly-sulfaateista, joilla on haluttu tasapaino ominaisuuksien a)-c) välillä Xal:n ja tekijä Xa:n välisessä reaktiossa ovat dekstraanisulfaatti, heparaanisulfaatti ja dermataanisulfaatti. Hepariini on vähemmän sopiva kohdan b) voimakkaan efektinsä takia.
Käyttämällä hyväksi yllä mainittujen polysakkaridipolysulfaattien synergistinen vaikutus pienten hepariinimäärien antikoagulanttivai-kutukseen voidaan tämän keksinnön mukainen menetelmä käyttää äärimmäisen herkän hepariinikokeen suorittamiseksi. Lisäämällä pieni määrä sellaista polysakkaridipolysulfaattia testiplasmaan kohoaa hepariinin antikoagulanttinen vaikutus moninkertaisesti siitäkin huolimatta, ettei sanotussa määrässä mittaamalla voida osoittaa hepariininkal-taista antikoagulanttivaikutusta.
Keksintö selostetaan alla tarkemmin ja viittaamme tässä suhteessa esitettyihin esimerkkeihin, jotka eivät kuitenkaan rajoita keksinnön laajuutta patenttivaatimuksessa esitettyjen määritysten mukaiseksi.
Esimerkki 1
Tarkoituksella määritellä Xal:n biologista aktiivisuutta veriplasmassa valmistettiin seuraavat reagenssit.
a) Aktivoitu tekijä X (tekijä Xa) naudan plasmasta
Reagenssia voidaan valmistaa minkä tahansa kirjallisuudessa selostetun menetelmän mukaisesti. Fraktio, joka sisältää runsaasti tekijää X, valmistettiin naudan plasmasta, jota tunnetaan BaSO^-eluaattina, minkä jälkeen sitä käsitelllään joko Russels'in käärmemyrkyllä tai trypsii-nillä, jolloin kalsiumkloridia on läsnä. Tekijä X aktivoidaan sen jälkeen tekijäksi Xa. Aktivoitu seos kromatografoidaan anioninvaihta-jakolonnilla (esim. DEAE-selluloosa) Yin et ai, J. Biol.Chem. 243 (1968) p. 112, mukaisesti, tarkoituksella eristää tekijä Xa muista aineista, eritoten käärmemyrkystä. Eristetty tekijä Xa stabiloidaan sen jälkeen kiteytettyyn naudan seerumialbumiiniin Yin et ai. J. Lab. Clin. Med 8. (1973) p. 298 (Ref. 1) mukaisesti.
b) Naudan plasma vailla antikoagulantteja (AFBP), valmistettu Yin et ai (Ref. 1) mukaisesti, johon on sekoitettu kefaliinia (nisäkäs-aivoista, tai soijapapufosfatideja). Tästä seoksesta käytetään jatkossa nimitystä AFBF-kefaliini.
c) Puskuri-monotriisi(hydroksimetyyli)-aminometaanimaleaatti. Kokeessa käytetty konsentraatio = 0,02 M, pH 7,5.
7 63494 0,5 ml laimennettua ihmissitraattiplasmaa (joka oli laimennettu fysiologisella keittosuolaliuoksella (0,9 % NaCl) suhteeseen 1:50) kaadettiin koeputkeen jossa oli 0,4 ml liuosta deksatraani-sulfaatin (M = 20 000 korvausaste = 1,15 sulfaattiryhmää monosakka-
W
ridiyksikköä kohti) natriumsuolasta puskurissa. Dekstraanisulfaatin konsentraatio oli 50^ug/ml tästä inkubaatioseoksesta. Liuos kuumennettiin yhden minuutin ajan 37°C vesihauteessa, minkä jälkeen siihen lisättiin 0,1 ml tekijää Xa ja ensimmäinen sekuntikello käynnistettiin.
Xhdeksänkymmentä sekuntia Xa:n lisäämisen jälkeen siirrettiin inku-baatioliuoksesta 0,1 ml toiseen puhtaaseen koeputkeen, jota oli kuumennettu mainitussa 37-asteisessa vesihauteessa. Ensimmäisen sekuntikellon käytyä 110 sekuntia lisättiin 0,03 M CaCl2:sta 0,1 ml toiseen koeputkeen. Ensimmäisen sekuntikellon käytyä täsmälleen 120 sekuntia puhallettiin AFBP-kefaliiniseoksesta 0,2 ml voimakkaasti toiseen koeputkeen samalla kuin toinen sekuntikello käynnistettiin. Se aika (sek.), joka kului kunnes kiinteätä koageelia muodostui merkittiin muistiin. Xal-aktiivisuudesta tehtiin kalibrointikäyrä valmistamalla sarja kaksinkertaisia plasmanäytteen laimennuksia, johon alkuperäistä laimennusta 1:50 käytettiin 100 %:sena aktiivisuutena. (Taulukko 1).
Vastaavasti aikaansaatiin toinen Xal-aktiivisuuden kalibrointikäyrä käyttämällä toista alkuperäistä plasmalaimennusta sekä dekstraanisulfaatin konsentraatiota. (Taulukko 1).
Taulukko 1
Plasmalaimennus % Xal- Koagulointiaika 100 %:sena aktiivisuus (sek.)
Xal-aktii visuutena __________ ________________ 1 100 79,5 50 käyttämällä 50^ug dekstraanisulfaattia 50 53,0 jokaista millilitraa 25 38,5 inkubaatioseosta kohti 12,5 31,0 6,25 27,0 0 24,5 8 63494
Taulukko 1 (jatkoa)
Plasmalaimennus % Xal- Koagulointiaika 100 %:sena aktiivisuus (sek.)
Xal-akt±ivisuutena _____________ 1 100 58 100 käyttämällä 50/ug dekstraanisulfaattia 50 39 jokaista millilitraa 25 32 inkubaatioseosta kohti 12,5 27,5 0 24 Tämä taulukko osoittaa selvästi, että entsyymi-inhibiittori-(Xa-Xal)-vuorovaikutus tulee suurella herkkyydellä mitatuksi.
Esimerkki 2
Meneteltiin kuten esitetty esimerkissä 1 käyttäen natriumsuolaliuos- ta dermataanisulfaatista M. = 30 000 - 50 000 korvausaste =1,0 w sulfaattiryhmää jokaista disakkaridiyksikköä kohti dekstraanisul-faatin sijasta. Tulokset olivat seuraavat:
Taulukko 2
Plasmalaimennus % Xal- Koagulointiaika 100 %:sena aktiivisuus (sek.)
Xal-aktiivisuutena _ __ _____ 1 100 57,5
Too käyttämällä ISyUg dermataanisulfaattia 50 40,0 jokaista millilitraa 25 27,5 inkubaatioseosta kohti 12,5 23,0 0 17,4 Tämä taulukko osoittaa selvästi, että entsyymi-inhibiittori-(Xa-Xal)-vuorovaikutus tulee suurella herkkyydellä mitatuksi.
Esimerkki 3
Niiden mahdollisuuksien havainnollistamiseksi, joiden avulla voidaan määrittää alhaisia hepariinikonsentraatioita tässä keksinnössä selostettua menetelmää käyttäen, toistettiin esimerkissä 1 tehty koe seuraavin poikkeuksin: 63494 a) Inkubaatioseokseen käytettiin laimentamatonta plasmaa, b) plasma sisälsi hepariinia, jonka konsentraatio tiedettiin; 0,006 yksikköä/ml.
Lisäämällä dekstraanisulfaatin natriumsuolaa (ϊ^ = 20 000, korvaus-aste 1,15 sulfaattiryhmää jokaista monosakkaridiyksikköä kohti) kunnes lopullinen konsentraatio oli 10^ug/ml inkubaatioliuoksessa, ilmeni hepariininkaltaista aktiivisuutta joka vastasi 0,05 yksikköä/ml. Tämä näyttää toteen, että hepariinitestin herkkyyttä näitä periaatteita noudattaen voitaisiin lisätä suunnilleen yhdellä tekijällä kymmenestä. 10yug:lla dekstraanisulfaattia ei sinänsä tässä koestus-järjestelmässä ole mitattavissa olevaa hepariininkaltaista vaikutusta .
Claims (7)
10 63494
1. Menetelmä, jonka avulla in vitro määritetään tekijän Xa inhibiittorin (Xal) biologinen aktiivisuus veressä, tunnettu siitä, että veriplasmanäyte inkuboidaan samanaikaisesti a) tekijällä Xa ja b) polysakkaridipolysulfaatilla, jonka substituutioaste on 0,10-3,0 sulfaattiryhmää monosakkaridiryhmää kohti ja joka on dekstraani-sulfaatti, heparaanisulfaatti tai dermataanisul- faatti, jolloin inkubointi tapahtuu tiettynä ajanjaksona, ja että sen jälkeen määritetään tekijä Xa:n jäljellä oleva aktiviteetti sinänsä tunnetulla tavalla.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että jäljelle jäävä tekijän Xa aktiivisuus määritetään käyttämällä päätepisteenä fibriinin muodostusta.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että jäljellä oleva tekijän Xa aktiivisuus määritetään mittaamalla sen esteraasi- tai amidolyyttinen aktiivisuus.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polysakkaridipolysulfaatti on dermataanisulfaatti tai heparaanisulfaatti, jossa on 0,45-2,0 sulfaattiryhmää jokaista monosakkaridiyksikköä kohti.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polysakkaridipolysulfaatti on kytketty veteen liukenemattomaan kantajaan.
1. Förfarande för in vitro-bestämning av den biologiska akti-viteten hos faktor Xa-inhibitor (Xal) i blod, känneteck-n a t av att ett blodplasmaprov samtidigt inkuberas med: a) faktor Xa, och b) ett polysackaridpolysulfat med substitutionsgraden 0,10-3,0 sulfatgrupper per monosackaridgrupp och som är dextransulfat, heparansulfat eller dermatansulfat, varvid inkuberingen sker under en bestämd tidsperiod, och att man därefter bestämmer den äterstäende mängden av faktor Xa-aktivitet pä i och för sig känt sätt.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7513495A SE419871B (sv) | 1975-12-01 | 1975-12-01 | Sett att bestemma aktiviteten hos faktor xa-inhibitor i blod |
| SE7513495 | 1975-12-01 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI763446A FI763446A (fi) | 1977-06-02 |
| FI63494B true FI63494B (fi) | 1983-02-28 |
| FI63494C FI63494C (fi) | 1983-06-10 |
Family
ID=20326201
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI763446A FI63494C (fi) | 1975-12-01 | 1976-11-30 | Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4139415A (fi) |
| JP (1) | JPS5915640B2 (fi) |
| AT (1) | AT348687B (fi) |
| AU (1) | AU508343B2 (fi) |
| BE (1) | BE848932A (fi) |
| CA (1) | CA1060324A (fi) |
| CH (1) | CH625052A5 (fi) |
| DE (1) | DE2654189C3 (fi) |
| DK (1) | DK537676A (fi) |
| FI (1) | FI63494C (fi) |
| FR (1) | FR2334109A1 (fi) |
| GB (1) | GB1562808A (fi) |
| NL (1) | NL7613376A (fi) |
| NO (1) | NO148960C (fi) |
| SE (1) | SE419871B (fi) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2757992A1 (de) * | 1977-12-24 | 1979-06-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur prothrombin-bestimmung |
| US4302538A (en) * | 1978-03-27 | 1981-11-24 | Ortho Diagnostics Inc. | Buffer system in an anti-thrombin III test |
| SE422081B (sv) * | 1979-08-22 | 1982-02-15 | Ird Biomaterial Ab | Sett att pavisa proteolytiska enzymer |
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| JPH0258920B2 (fi) * | 1980-10-09 | 1990-12-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | |
| US4753875A (en) * | 1981-11-02 | 1988-06-28 | Ryan James W | Method for assaying proteases with tagged proteinaceous inhibitors |
| US5221614A (en) * | 1988-03-03 | 1993-06-22 | Nippon Shoji Kabushiki Kaisha | Method and reagent for determining the biological activity of antithrombin III by measuring coagulation time |
| GB9602166D0 (en) * | 1996-02-02 | 1996-04-03 | Zeneca Ltd | Aminoheterocyclic derivatives |
| DE19634312A1 (de) * | 1996-08-24 | 1998-02-26 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung von Faktor V-Mangelplasma und ein so erhaltenes Mangelplasma |
| US6432658B1 (en) | 2000-09-13 | 2002-08-13 | Affinity Biologicals, Inc. | Method for measuring antithrombin activity |
| EP2818871A1 (en) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Roche Diagniostics GmbH | Means and methods for universal calibration of anti-Factor Xa tests |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE380257B (sv) * | 1972-05-02 | 1975-11-03 | Bofors Ab | Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser |
| US3985618A (en) * | 1975-05-02 | 1976-10-12 | Irving Innerfield | Method for detection of thrombosis and prethrombosis |
-
1975
- 1975-12-01 SE SE7513495A patent/SE419871B/xx unknown
-
1976
- 1976-11-23 US US05/744,227 patent/US4139415A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-11-29 AU AU20061/76A patent/AU508343B2/en not_active Expired
- 1976-11-29 GB GB49679/76A patent/GB1562808A/en not_active Expired
- 1976-11-30 FI FI763446A patent/FI63494C/fi not_active IP Right Cessation
- 1976-11-30 DK DK537676A patent/DK537676A/da unknown
- 1976-11-30 CA CA266,874A patent/CA1060324A/en not_active Expired
- 1976-11-30 BE BE172864A patent/BE848932A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-11-30 DE DE2654189A patent/DE2654189C3/de not_active Expired
- 1976-11-30 NO NO764081A patent/NO148960C/no unknown
- 1976-12-01 FR FR7636233A patent/FR2334109A1/fr active Granted
- 1976-12-01 NL NL7613376A patent/NL7613376A/xx unknown
- 1976-12-01 JP JP51143524A patent/JPS5915640B2/ja not_active Expired
- 1976-12-01 CH CH1514576A patent/CH625052A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-12-01 AT AT891076A patent/AT348687B/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE7513495L (sv) | 1977-06-02 |
| DE2654189B2 (de) | 1979-03-08 |
| FR2334109B1 (fi) | 1982-03-12 |
| ATA891076A (de) | 1978-07-15 |
| SE419871B (sv) | 1981-08-31 |
| GB1562808A (en) | 1980-03-19 |
| FI63494C (fi) | 1983-06-10 |
| AU2006176A (en) | 1978-06-08 |
| NO148960B (no) | 1983-10-10 |
| CH625052A5 (fi) | 1981-08-31 |
| DK537676A (da) | 1977-06-02 |
| BE848932A (fr) | 1977-05-31 |
| FR2334109A1 (fr) | 1977-07-01 |
| NO148960C (no) | 1984-01-18 |
| DE2654189A1 (de) | 1977-06-08 |
| AT348687B (de) | 1979-02-26 |
| JPS5915640B2 (ja) | 1984-04-10 |
| FI763446A (fi) | 1977-06-02 |
| NL7613376A (nl) | 1977-06-03 |
| NO764081L (fi) | 1977-06-02 |
| DE2654189C3 (de) | 1985-10-03 |
| JPS5297792A (en) | 1977-08-16 |
| US4139415A (en) | 1979-02-13 |
| CA1060324A (en) | 1979-08-14 |
| AU508343B2 (en) | 1980-03-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Andersson et al. | Molecular weight dependency of the heparin potentiated inhibition of thrombin and activated factor X. Effect of heparin neutralization in plasma | |
| US6756208B2 (en) | Plasma glucosylceramide deficiency as risk factor for thrombosis and modulator of anticoagulant protein C | |
| FI63494B (fi) | Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod | |
| Foulis et al. | Endotoxaemia and complement activation in acute pancreatitis in man. | |
| EP0203509B1 (de) | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Protein C und Aktivatorpräparat zur Durchführung des Verfahrens | |
| AU2003204479A1 (en) | A pharmaceutical preparation for treating blood coagulation disorders | |
| CZ78693A3 (en) | Pharmaceutical preparation for treating prolongated coagulation period | |
| FI64466B (fi) | Foerfarande och reagens foer bestaemning av protrombin | |
| Thomsen et al. | Immunohistochemical detection of C5b-9 (m) in myocardium: an aid in distinguishing infarction-induced ischemic heart muscle necrosis from other forms of lethal myocardial injury | |
| Pabinger-Fasching et al. | High levels of plasma protein C in nephrotic syndrome | |
| Ofosu et al. | The inhibition of the anticoagulant activity of heparin by platelets, brain phospholipids, and tissue factor | |
| EP1230382B1 (en) | Monitoring the activity of factor xa inhibitors | |
| US4882272A (en) | High molecular weight kininogen assay | |
| Sie et al. | Inactivation of heparin cofactor II by polymorphonuclear leukocytes | |
| Fischer et al. | Comparison between the effect of pentosan polysulphate heparin and antithrombin III injections in antithrombin III deficient patients | |
| Wages et al. | Structural characterization and functional effects of a circulating heparan sulfate in a patient with hepatocellular carcinoma | |
| Grau et al. | Plasma and urinary heparin cofactor II levels in patients with nephrotic syndrome | |
| Hemkera | Development of a rapid and sensitive chromogenic heparin assay for clinical use | |
| CS226407B2 (en) | Method of determining mb creatinkinase | |
| Palmer et al. | Inhibition of the cold activation of factor VII and the prothrombin time | |
| Baruch et al. | Inhibition of thrombin-catalyzed reactions in blood coagulation and platelet activation by heparin fractions in the absence of antithrombin III | |
| Nakhleh et al. | Heparin cofactor II assay: elimination of heparin and antithrombin-III effects | |
| Koller | Physiology and Pathology of Blood Coagulation | |
| Koller et al. | Physiology and Pathology of Blood Coagulation A Review of the Literature of 1961 (First Series) | |
| Peyrou et al. | The activity of unfractionated heparin and low molecular weight heparins in rabbit plasma–the need for using absolute anti-factor Xa and antithrombin activities |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: PHARMACIA AB |