FI63494B - Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod - Google Patents
Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod Download PDFInfo
- Publication number
- FI63494B FI63494B FI763446A FI763446A FI63494B FI 63494 B FI63494 B FI 63494B FI 763446 A FI763446 A FI 763446A FI 763446 A FI763446 A FI 763446A FI 63494 B FI63494 B FI 63494B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- factor
- activity
- sulphate
- polysaccharide
- xal
- Prior art date
Links
- 229940123583 Factor Xa inhibitor Drugs 0.000 title claims description 6
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 title 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 29
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 claims description 25
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 22
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 22
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 13
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 8
- FPJHWYCPAOPVIV-VOZMEZHOSA-N (2R,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5R,6R)-5-acetamido-2-(hydroxymethyl)-6-methoxy-3-sulfooxyoxan-4-yl]oxy-4,5-dihydroxy-3-methoxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H]([C@@H](OC)[C@H](O)[C@H]2O)C(O)=O)[C@H]1NC(C)=O FPJHWYCPAOPVIV-VOZMEZHOSA-N 0.000 claims description 7
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 claims description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 7
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 4
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 claims description 4
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001483 monosaccharide substituent group Chemical group 0.000 claims 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 21
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 15
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 7
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 5
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 5
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 206010020608 Hypercoagulation Diseases 0.000 description 3
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000003027 hypercoagulation Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229940127234 oral contraceptive Drugs 0.000 description 3
- 239000003539 oral contraceptive agent Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUMBUIZXGGMMIM-ODZAUARKSA-N 2-aminoethanol;(z)-but-2-enedioic acid Chemical compound NCCO.OC(=O)\C=C/C(O)=O XUMBUIZXGGMMIM-ODZAUARKSA-N 0.000 description 1
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- 201000005657 Antithrombin III deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101001081567 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100027636 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 240000000968 Parkia biglobosa Species 0.000 description 1
- 235000015754 Parkia biglobosa Nutrition 0.000 description 1
- 108090000778 Platelet factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004211 Platelet factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Chemical class 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 229940019748 antifibrinolytic proteinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 239000000282 fibrinogen degradation product Substances 0.000 description 1
- 208000033666 hereditary antithrombin deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005171 mammalian brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- -1 polysaccharide sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 201000005665 thrombophilia Diseases 0.000 description 1
- 230000003558 thrombophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, Konjac gum, Locust bean gum or Guar gum
- G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
rBl .^.KUULUTUSjULKAISU £3494 «rv tBJ (11) UTLÄGGNINGSSKRIFT D ° H n c (4$) Patentti ray Ennetty 10 06 1903
Patent, taeddolat ^ ^ (51) K».lk.3/lnc.CL3 G 01 N 33/86 SUOMI—FINLAND (21) Pi*«»ttlh«lMmu·—PttMtmOMnf 763M6 (22) HakMhplM—AMMnitafMfav 30.11.76 (23) AUuipUvt—GlWciMttdag 30.11.76 (41) Tullut JulMsakal — Kllvlc off«rtli| 02.06.77 f^tantti· jft rekisterihallitut (44) Nlhtivilulpanon |t kuuMulkalwn pvm.— „Q ΛΛ _
Patent och registerstyrelsen An*ek*nutta*dodi utUkria·» put>lic*r*d 2o.02.o3 (32)(33)(31) Pr/datty Muoikw»—t««trd prtorfuc 01.12.75
Ruotsi-Sverige(SE) 7513^95-7 (71) Pharmacia AB, Box 60U, S-751 25 Uppsala 1, Ruotsi-Sverige(SE) (72) Ee Thye Yin, St. Louis, Missouri, USA(US),
Oddvar Tangen, Uppsala, Ruotsi-Sverige(SE) (7*0 Berggren Oy Ab (5*0 Menetelmä tekijän Xa inhibiittorin in vitro määrittämiseksi veressä -Förfarande för in vitro-bestämning av faktor Xa-inhibitor i blod Tämän keksinnön tarkoituksena on aktivoidun tekijän X plasmain-hibiittorin Xal in vitro määrittäminen veressä, joka inhibiittori on o^-globuliini.
Tällä hetkellä ei ole olemassa tyydyttävää tekniikkaa, jonka avulla voitaisiin laatia ihmisen tai eläimen alkavan tromboottisen tilan varhaismääritys. Tromboemboliset sairaudet ovat yhä useammin syynä invaliditeettiin ja kuolemaan, sillä kirurgian alalla tapahtuva kehitys tekee yhä laajemmat kirurgiset toimenpiteet mahdollisiksi ja estrogeenipitoisia yhdisteitä käytetään yhä lisääntyvissä määrin suun kautta nautittavina ehkäisyaineina.
Viime vuosina on kirjallisuudessa esitetty paljon kokeellisia tietoja sekä in vitro että in vivo joiden perusteella esitetään, että Xal:n teho luonnonmukaisesti esiintyvänä antikoagulaattina veren hyytymisessä lähinnä johtuisi siitä, että se estää aluksi syntyneen tekijä Xa:n toiminnan täten estäen trombiinin muodostuksen eikä siitä, 2 63494 että se estäisi trombiinia hyökkäämästä fibronogeeniin. Tätä väitettä tukee erityisesti se raportti, jonka mukaan äärimmäisen pienet määrät hepariinia voisivat huomattavissa määrin edesauttaa tekijän Xa inhi-biitiota Xal:n avulla.
Useatkin todistusaiheet puhuvat voimakkaasti sen puolesta, että määrätyissä potilaissa kirurgisten toimenpiteiden aikana ja niiden jälkeen muodostuisi ennen havaitsematon, nk, "hyperkoagulaatiotila". Tällaisessa hyperkoagulaatiotilassa ei kuitenkaan pääse muodostumaan trombooseja niin kauan kuin tekijän Xal tekijään Xa kohdistunut poistamisnopeus ylittää tekijän Xa muodostumisnopeuden. On myös väitetty, että sellaiset naiset, jotka käyttävät suun kautta nautittavia ehkäisyaineita, olisivat enemmän alttiina tromboosille vahingon sattuessa, koska Xal on heidän veressään laskenut.
Nämä tiedot ovat synnyttäneet ajatuksen, että alhaiset määrät XaUtä voisivat heijastaa hyperkoagulaatiotilan. On siis oletettavissa, että plasman Xal-aktiivisuus saattaisi olla osoituksena hyperkoagu-laatiotilasta. Tätä otaksumaa tukevat lisäksi seuraavat havainnot: (a) potilaat, joilla on synnynnäinen antitrombiinin III puute (Xal) ovat trombofiilisiä, (b) sellaisilla naisilla, jotka käyttävät oraalisia ehkäisylääkkeitä ja joiden plasman Xal-aktiivisuus on alhainen, esiintyy ryhmänä tarkasteltuna useammin postoperatiivisia syvälaskimotrombooseja kuin sellaisilla, jotka eivät nauti sanottuja lääkkeitä.
Tämän takia on olemassa suuri sellaisen spesifisen menetelmän tarve, jonka avulla voitaisiin määritellä tekijän Xal biologinen aktiivisuus veriplasmassa.
On olemassa eräitä menetelmiä, joita käyttäen Xal-aktiivisuus pyritään määrittämään. Eniten käytetyt menetelmät rakentuvat immunologiseen määritykseen ja trombiinin estämiseen. Näihin menettelytapoihin liittyy kuitenkin monta varjopuolta. Täten immunologinen menetelmä ei näytä toteen ko. inhibiittorin biologista aktiivisuutta, vaikkakin sillä saadaan antigeeni a2-globuliini osoitetuksi. On väitetty, että eräiden potilaiden verinäytteissä, joilla potilailla synnynnäisesti esiintyy puutetta tämän inhibiittorin biologisesta aktiivisuudesta, ei ole ollut osoitettavissa tällaista puutetta, kun mittaus suoritet- 3 63494 tiin immunomenetelmää hyväksi käyttäen. (Sas et ai, Thromb, Diath. Haemmorh. 32! (1974) p. 105).
Tätä inhibiittoria varten käytetty trombiinimenetelmä ei ole spesifinen, koska sillä samanaikaisesti muidenkin seerumipro-teinaasi-inhibiittorien aktiivisuus tulee mitatuksi. (Whigham et ai, Thromb. Diath. Haemmorh. 34^ (1975) p. 365). Sen lisäksi se on herkkä äärimmäisen pienille määrille hepariinia ja hepa-riininkaltaisille aineille sekä fibrinogeenin hajotustuotteil-le, joita esiintyy veriplasmassa ja joita on hyvin vaikea kontrolloida.
Julkaisussa N Engl J Med 292 (1975) käsitellään sivuilla 146-151 hepariinin vaikutusta erilaisiin tekijöihin koagulaatiosystee-missä. Lähemmin määriteltynä kuvailee mainittu julkaisu hepariinin ja tekijä Xa-inhibiittorin (=XaI=antitrombiini III=hepa-riinikotekijä) välistä yhteisvaikutusta. Hepariini aktivoi Xal:n, joka samalla estää sekä trombiinia että tekijä Xarta, jolloin veren koaguloituminen estetään. Hepariinin lisäksi on myös en-dogeenisia aineita, jotka voivat vaikuttaa Xal:n ja trombiinin tai tekijä Xa:n välisiin vaikutuksiin. Vaikutus trombiiniin ja tekijä Xa:han on tietysti erilainen. Tekijä Xa:n tai trombiinin aktiivisuutta voidaan käyttää mittana Xal:lle kuitenkin vain silloin, kun kaikki reaktioparametrit ovat kontrollissa.
Nyt on yllättäen huomattu, että Xal:n biologinen aktiivisuus veressä voidaan määrittää in vitro ilman yllä mainittuja varjopuolia nyt puheena olevaa menetelmää käyttäen. Menetelmän avulla on mahdollista vähentää kontrolloimattomien parametrien määrää niin, että tuloksena on koe, joka on spesifisempi Xal:n suhteen. Tämä saavutetaan siis menetelmällä, jolle on tunnusomaista, että veriplasmanäyte inkuboidaan samanaikaisesti a) tekijällä Xa ja b) polysakkaridipolysulfaatilla, johka substituutioaste on 0,10-3,0 sulfaattiryhmää monosakkaridiryhmää kohti ja joka on dekstraanisulfaatti, heparaanisulfaatti tai dermataanisulfaatti, jolloin inkubointi tapahtuu tiettynä ajanjaksona, ja että sen jälkeen määritetään tekijä Xa:n jäljellä oleva aktiviteetti sinänsä tunnetulla tavalla. Reaktio-osuudet valitaan siten, että lisätyt polysakkaridipolysulfaatit vaikuttavat vain hyvin vähäi- 63494 sessä määrin suoraan Xal:hin. Polysakkaridisulfaattien suoraa reaktiota Xaltn kanssa pyritään siis välttämään.
Jäljellä oleva tekijä Xa:n määrä voidaan määritellä käyttämällä fibriininmuodostusta päätepisteenä (hyytymisajan mittaus) tässä tekniikassa jo hyvin tunnettua menetelmää käyttäen. Ko. määrä voidaan myös näyttää toteen mittaamalla este-raasi- tai amidolyyttistä aktiivisuutta muita sopivia substraatteja käyttäen.
Polysakkaridipolysulfaatti voi sisältää 0,10-3,0, esim. 0,45- 3.0 sulfaattiryhmää jokaista monosakkaridiyksikköä kohti.
Kun dekstraanisulfaattia käytetään polysakkaridipolysulfaat-tina on sulfaattiryhmien korvausaste 0,10-3,0, lähinnä 0,90- 3.0 jokaista monosakkaridiyksikköä kohti. Dermataanisulfaat-tia tai heparaanisulfaattia käytettäessä on sulfaattiryhmien korvausaste 0,45-n. 2,0 jokaista monosakkaridiyksikköä kohti.
Polysakkaridipolysulfaatin keskimääräinen molekyylipaino ei ole ratkaiseva. Täten voidaan käyttää vesiliukoista polysak-karidipolysulfaatteja, joiden molekyylipaino vaihtelee n.
1000 - ainakin 10 000 000. On myös mahdollista käyttää vesiliukoisia ja veteen liukenemattomia ristisidottuja polysakka-ridipolysulfaatteja.
5 63494
Haluttaessa voidaan polysakkaridipolysulfaatti kytkeä veteen liukenemattomaan kantajaan ristisidottuna dekstraanina. On myös mahdollista liittää polysakkaridipolysulfaatti vastaavaan ei korvattuun polysakkaridiin. Tässä tapauksessa sulfaattiryhmien korvausaste lasketaan käyttäen perustana tällaisen tuotteen korvattua osaa.
Kun menetellään keksinnön edellyttämällä tavalla on suotavaa, että näyte laimennetaan fysiologisella keittosuolaliuoksella tai puskurilla. Sopivan laimennussuhteen tulee tällöin ylittää 1/10, ja mieluiten 1/30. Täten pystytään tehokkaasti välttymään sellaisten aineiden häiritsevältä vaikutukselta, joiden tiedetään vaikuttavan negatiivisesti koagulaatiojärjestelmään.
Inkubaatioaika on riippuvainen inkubaatioliuoksessa esiintyvien reagenttien konsentraatiosta ja myös inkubaatiolämpötilasta. Asiantuntijan on helppo määrätä kussakin tapauksessa ihanteellinen aika. Inkubaatiolämpötila voi vaihdella n. 20°C - jopa n. 37°C.
Ko. menetelmälle sopiva pH on n. 7,0 - 8,0. Polysakkaridipolysul-faatin ja aktivoidun tekijän X (Xa) määrät eivät ole ratkaisevia.
On siis mahdollista käyttää polysakkaridipolysulfaattimääriä, jotka vaihtelevat 1-2000 ^ug/ml ja Xa/ml:sta 1-10 yksikköä. Asiantuntijalle optimaalisten pitoisuuksien määritteleminen kussakin tapauksessa ei tuota vaikeuksia.
Tämän keksinnön parissa työskenneltäessä olemme havainneet, että polysakkaridipolysulfaateillä saattaa olla veren hyytymistä silmällä pitäen kolme tärkeätä ominaisuutta, (a) ne pystyvät torjumaan ihmisplasmakomponentin estävän vaikutuksen neutraloitaessa Xa-inhibiittorilla Xa:ta, (b) niillä saattaa olla heikko hepariinintapainen aktiivisuus, (c) niillä voi olla synergistinen vaikutus pienien hepariinimää-rien antikoagulanttitehoon.
Kun tässä esitetyn keksinnön mukaisesti lähdetään määrittämään Xa-inhibiittori, saattaa polysakkaridipolysulfaatilla esiintyvän hepa-riinin kaltaisen vaikutuksen neutralointi olla paikallaan. Tämä tehdään lisäämällä sopivia määriä hepariinia neutraloivaa ainetta, kuten heksadimetriinibromidia (Polybren^^ , Abbott Laboratories, 6 6 3 4 9 4 USA) tai protamiinisuoloja substraattiplasmaan. Muussa tapauksessa saostumisajat venyvät turhan pitkiksi. Esimerkkejä polysakkaridipoly-sulfaateista, joilla on haluttu tasapaino ominaisuuksien a)-c) välillä Xal:n ja tekijä Xa:n välisessä reaktiossa ovat dekstraanisulfaatti, heparaanisulfaatti ja dermataanisulfaatti. Hepariini on vähemmän sopiva kohdan b) voimakkaan efektinsä takia.
Käyttämällä hyväksi yllä mainittujen polysakkaridipolysulfaattien synergistinen vaikutus pienten hepariinimäärien antikoagulanttivai-kutukseen voidaan tämän keksinnön mukainen menetelmä käyttää äärimmäisen herkän hepariinikokeen suorittamiseksi. Lisäämällä pieni määrä sellaista polysakkaridipolysulfaattia testiplasmaan kohoaa hepariinin antikoagulanttinen vaikutus moninkertaisesti siitäkin huolimatta, ettei sanotussa määrässä mittaamalla voida osoittaa hepariininkal-taista antikoagulanttivaikutusta.
Keksintö selostetaan alla tarkemmin ja viittaamme tässä suhteessa esitettyihin esimerkkeihin, jotka eivät kuitenkaan rajoita keksinnön laajuutta patenttivaatimuksessa esitettyjen määritysten mukaiseksi.
Esimerkki 1
Tarkoituksella määritellä Xal:n biologista aktiivisuutta veriplasmassa valmistettiin seuraavat reagenssit.
a) Aktivoitu tekijä X (tekijä Xa) naudan plasmasta
Reagenssia voidaan valmistaa minkä tahansa kirjallisuudessa selostetun menetelmän mukaisesti. Fraktio, joka sisältää runsaasti tekijää X, valmistettiin naudan plasmasta, jota tunnetaan BaSO^-eluaattina, minkä jälkeen sitä käsitelllään joko Russels'in käärmemyrkyllä tai trypsii-nillä, jolloin kalsiumkloridia on läsnä. Tekijä X aktivoidaan sen jälkeen tekijäksi Xa. Aktivoitu seos kromatografoidaan anioninvaihta-jakolonnilla (esim. DEAE-selluloosa) Yin et ai, J. Biol.Chem. 243 (1968) p. 112, mukaisesti, tarkoituksella eristää tekijä Xa muista aineista, eritoten käärmemyrkystä. Eristetty tekijä Xa stabiloidaan sen jälkeen kiteytettyyn naudan seerumialbumiiniin Yin et ai. J. Lab. Clin. Med 8. (1973) p. 298 (Ref. 1) mukaisesti.
b) Naudan plasma vailla antikoagulantteja (AFBP), valmistettu Yin et ai (Ref. 1) mukaisesti, johon on sekoitettu kefaliinia (nisäkäs-aivoista, tai soijapapufosfatideja). Tästä seoksesta käytetään jatkossa nimitystä AFBF-kefaliini.
c) Puskuri-monotriisi(hydroksimetyyli)-aminometaanimaleaatti. Kokeessa käytetty konsentraatio = 0,02 M, pH 7,5.
7 63494 0,5 ml laimennettua ihmissitraattiplasmaa (joka oli laimennettu fysiologisella keittosuolaliuoksella (0,9 % NaCl) suhteeseen 1:50) kaadettiin koeputkeen jossa oli 0,4 ml liuosta deksatraani-sulfaatin (M = 20 000 korvausaste = 1,15 sulfaattiryhmää monosakka-
W
ridiyksikköä kohti) natriumsuolasta puskurissa. Dekstraanisulfaatin konsentraatio oli 50^ug/ml tästä inkubaatioseoksesta. Liuos kuumennettiin yhden minuutin ajan 37°C vesihauteessa, minkä jälkeen siihen lisättiin 0,1 ml tekijää Xa ja ensimmäinen sekuntikello käynnistettiin.
Xhdeksänkymmentä sekuntia Xa:n lisäämisen jälkeen siirrettiin inku-baatioliuoksesta 0,1 ml toiseen puhtaaseen koeputkeen, jota oli kuumennettu mainitussa 37-asteisessa vesihauteessa. Ensimmäisen sekuntikellon käytyä 110 sekuntia lisättiin 0,03 M CaCl2:sta 0,1 ml toiseen koeputkeen. Ensimmäisen sekuntikellon käytyä täsmälleen 120 sekuntia puhallettiin AFBP-kefaliiniseoksesta 0,2 ml voimakkaasti toiseen koeputkeen samalla kuin toinen sekuntikello käynnistettiin. Se aika (sek.), joka kului kunnes kiinteätä koageelia muodostui merkittiin muistiin. Xal-aktiivisuudesta tehtiin kalibrointikäyrä valmistamalla sarja kaksinkertaisia plasmanäytteen laimennuksia, johon alkuperäistä laimennusta 1:50 käytettiin 100 %:sena aktiivisuutena. (Taulukko 1).
Vastaavasti aikaansaatiin toinen Xal-aktiivisuuden kalibrointikäyrä käyttämällä toista alkuperäistä plasmalaimennusta sekä dekstraanisulfaatin konsentraatiota. (Taulukko 1).
Taulukko 1
Plasmalaimennus % Xal- Koagulointiaika 100 %:sena aktiivisuus (sek.)
Xal-aktii visuutena __________ ________________ 1 100 79,5 50 käyttämällä 50^ug dekstraanisulfaattia 50 53,0 jokaista millilitraa 25 38,5 inkubaatioseosta kohti 12,5 31,0 6,25 27,0 0 24,5 8 63494
Taulukko 1 (jatkoa)
Plasmalaimennus % Xal- Koagulointiaika 100 %:sena aktiivisuus (sek.)
Xal-akt±ivisuutena _____________ 1 100 58 100 käyttämällä 50/ug dekstraanisulfaattia 50 39 jokaista millilitraa 25 32 inkubaatioseosta kohti 12,5 27,5 0 24 Tämä taulukko osoittaa selvästi, että entsyymi-inhibiittori-(Xa-Xal)-vuorovaikutus tulee suurella herkkyydellä mitatuksi.
Esimerkki 2
Meneteltiin kuten esitetty esimerkissä 1 käyttäen natriumsuolaliuos- ta dermataanisulfaatista M. = 30 000 - 50 000 korvausaste =1,0 w sulfaattiryhmää jokaista disakkaridiyksikköä kohti dekstraanisul-faatin sijasta. Tulokset olivat seuraavat:
Taulukko 2
Plasmalaimennus % Xal- Koagulointiaika 100 %:sena aktiivisuus (sek.)
Xal-aktiivisuutena _ __ _____ 1 100 57,5
Too käyttämällä ISyUg dermataanisulfaattia 50 40,0 jokaista millilitraa 25 27,5 inkubaatioseosta kohti 12,5 23,0 0 17,4 Tämä taulukko osoittaa selvästi, että entsyymi-inhibiittori-(Xa-Xal)-vuorovaikutus tulee suurella herkkyydellä mitatuksi.
Esimerkki 3
Niiden mahdollisuuksien havainnollistamiseksi, joiden avulla voidaan määrittää alhaisia hepariinikonsentraatioita tässä keksinnössä selostettua menetelmää käyttäen, toistettiin esimerkissä 1 tehty koe seuraavin poikkeuksin: 63494 a) Inkubaatioseokseen käytettiin laimentamatonta plasmaa, b) plasma sisälsi hepariinia, jonka konsentraatio tiedettiin; 0,006 yksikköä/ml.
Lisäämällä dekstraanisulfaatin natriumsuolaa (ϊ^ = 20 000, korvaus-aste 1,15 sulfaattiryhmää jokaista monosakkaridiyksikköä kohti) kunnes lopullinen konsentraatio oli 10^ug/ml inkubaatioliuoksessa, ilmeni hepariininkaltaista aktiivisuutta joka vastasi 0,05 yksikköä/ml. Tämä näyttää toteen, että hepariinitestin herkkyyttä näitä periaatteita noudattaen voitaisiin lisätä suunnilleen yhdellä tekijällä kymmenestä. 10yug:lla dekstraanisulfaattia ei sinänsä tässä koestus-järjestelmässä ole mitattavissa olevaa hepariininkaltaista vaikutusta .
Claims (7)
10 63494
1. Menetelmä, jonka avulla in vitro määritetään tekijän Xa inhibiittorin (Xal) biologinen aktiivisuus veressä, tunnettu siitä, että veriplasmanäyte inkuboidaan samanaikaisesti a) tekijällä Xa ja b) polysakkaridipolysulfaatilla, jonka substituutioaste on 0,10-3,0 sulfaattiryhmää monosakkaridiryhmää kohti ja joka on dekstraani-sulfaatti, heparaanisulfaatti tai dermataanisul- faatti, jolloin inkubointi tapahtuu tiettynä ajanjaksona, ja että sen jälkeen määritetään tekijä Xa:n jäljellä oleva aktiviteetti sinänsä tunnetulla tavalla.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että jäljelle jäävä tekijän Xa aktiivisuus määritetään käyttämällä päätepisteenä fibriinin muodostusta.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että jäljellä oleva tekijän Xa aktiivisuus määritetään mittaamalla sen esteraasi- tai amidolyyttinen aktiivisuus.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polysakkaridipolysulfaatti on dermataanisulfaatti tai heparaanisulfaatti, jossa on 0,45-2,0 sulfaattiryhmää jokaista monosakkaridiyksikköä kohti.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polysakkaridipolysulfaatti on kytketty veteen liukenemattomaan kantajaan.
1. Förfarande för in vitro-bestämning av den biologiska akti-viteten hos faktor Xa-inhibitor (Xal) i blod, känneteck-n a t av att ett blodplasmaprov samtidigt inkuberas med: a) faktor Xa, och b) ett polysackaridpolysulfat med substitutionsgraden 0,10-3,0 sulfatgrupper per monosackaridgrupp och som är dextransulfat, heparansulfat eller dermatansulfat, varvid inkuberingen sker under en bestämd tidsperiod, och att man därefter bestämmer den äterstäende mängden av faktor Xa-aktivitet pä i och för sig känt sätt.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7513495A SE419871B (sv) | 1975-12-01 | 1975-12-01 | Sett att bestemma aktiviteten hos faktor xa-inhibitor i blod |
| SE7513495 | 1975-12-01 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI763446A FI763446A (fi) | 1977-06-02 |
| FI63494B true FI63494B (fi) | 1983-02-28 |
| FI63494C FI63494C (fi) | 1983-06-10 |
Family
ID=20326201
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI763446A FI63494C (fi) | 1975-12-01 | 1976-11-30 | Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4139415A (fi) |
| JP (1) | JPS5915640B2 (fi) |
| AT (1) | AT348687B (fi) |
| AU (1) | AU508343B2 (fi) |
| BE (1) | BE848932A (fi) |
| CA (1) | CA1060324A (fi) |
| CH (1) | CH625052A5 (fi) |
| DE (1) | DE2654189C3 (fi) |
| DK (1) | DK537676A (fi) |
| FI (1) | FI63494C (fi) |
| FR (1) | FR2334109A1 (fi) |
| GB (1) | GB1562808A (fi) |
| NL (1) | NL7613376A (fi) |
| NO (1) | NO148960C (fi) |
| SE (1) | SE419871B (fi) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2757992A1 (de) | 1977-12-24 | 1979-06-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur prothrombin-bestimmung |
| US4302538A (en) * | 1978-03-27 | 1981-11-24 | Ortho Diagnostics Inc. | Buffer system in an anti-thrombin III test |
| SE422081B (sv) * | 1979-08-22 | 1982-02-15 | Ird Biomaterial Ab | Sett att pavisa proteolytiska enzymer |
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| WO1982001377A1 (en) * | 1980-10-09 | 1982-04-29 | Lill Helmut | Method for determining a bm-antithrombin |
| US4753875A (en) * | 1981-11-02 | 1988-06-28 | Ryan James W | Method for assaying proteases with tagged proteinaceous inhibitors |
| US5221614A (en) * | 1988-03-03 | 1993-06-22 | Nippon Shoji Kabushiki Kaisha | Method and reagent for determining the biological activity of antithrombin III by measuring coagulation time |
| GB9602166D0 (en) * | 1996-02-02 | 1996-04-03 | Zeneca Ltd | Aminoheterocyclic derivatives |
| DE19634312A1 (de) * | 1996-08-24 | 1998-02-26 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung von Faktor V-Mangelplasma und ein so erhaltenes Mangelplasma |
| US6432658B1 (en) | 2000-09-13 | 2002-08-13 | Affinity Biologicals, Inc. | Method for measuring antithrombin activity |
| EP2818871A1 (en) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Roche Diagniostics GmbH | Means and methods for universal calibration of anti-Factor Xa tests |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE380257B (sv) * | 1972-05-02 | 1975-11-03 | Bofors Ab | Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser |
| US3985618A (en) * | 1975-05-02 | 1976-10-12 | Irving Innerfield | Method for detection of thrombosis and prethrombosis |
-
1975
- 1975-12-01 SE SE7513495A patent/SE419871B/xx unknown
-
1976
- 1976-11-23 US US05/744,227 patent/US4139415A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-11-29 GB GB49679/76A patent/GB1562808A/en not_active Expired
- 1976-11-29 AU AU20061/76A patent/AU508343B2/en not_active Expired
- 1976-11-30 BE BE172864A patent/BE848932A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-11-30 DK DK537676A patent/DK537676A/da unknown
- 1976-11-30 NO NO764081A patent/NO148960C/no unknown
- 1976-11-30 DE DE2654189A patent/DE2654189C3/de not_active Expired
- 1976-11-30 FI FI763446A patent/FI63494C/fi not_active IP Right Cessation
- 1976-11-30 CA CA266,874A patent/CA1060324A/en not_active Expired
- 1976-12-01 CH CH1514576A patent/CH625052A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-12-01 NL NL7613376A patent/NL7613376A/xx unknown
- 1976-12-01 JP JP51143524A patent/JPS5915640B2/ja not_active Expired
- 1976-12-01 AT AT891076A patent/AT348687B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-12-01 FR FR7636233A patent/FR2334109A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI763446A (fi) | 1977-06-02 |
| SE419871B (sv) | 1981-08-31 |
| CH625052A5 (fi) | 1981-08-31 |
| SE7513495L (sv) | 1977-06-02 |
| FI63494C (fi) | 1983-06-10 |
| AT348687B (de) | 1979-02-26 |
| NL7613376A (nl) | 1977-06-03 |
| AU2006176A (en) | 1978-06-08 |
| NO148960C (no) | 1984-01-18 |
| BE848932A (fr) | 1977-05-31 |
| JPS5297792A (en) | 1977-08-16 |
| DE2654189A1 (de) | 1977-06-08 |
| GB1562808A (en) | 1980-03-19 |
| DK537676A (da) | 1977-06-02 |
| NO148960B (no) | 1983-10-10 |
| ATA891076A (de) | 1978-07-15 |
| DE2654189C3 (de) | 1985-10-03 |
| CA1060324A (en) | 1979-08-14 |
| JPS5915640B2 (ja) | 1984-04-10 |
| FR2334109B1 (fi) | 1982-03-12 |
| US4139415A (en) | 1979-02-13 |
| NO764081L (fi) | 1977-06-02 |
| FR2334109A1 (fr) | 1977-07-01 |
| DE2654189B2 (de) | 1979-03-08 |
| AU508343B2 (en) | 1980-03-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6756208B2 (en) | Plasma glucosylceramide deficiency as risk factor for thrombosis and modulator of anticoagulant protein C | |
| AU763466B2 (en) | A pharmaceutical preparation for treating blood coagulation disorders | |
| FI57421C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett preparat ur maenniskoblodplasma med blodets koagulation befraemjande verkan | |
| FI63494B (fi) | Foerfarande foer in vitro-bestaemning av faktor xa-inhibitor iblod | |
| Ofosu et al. | Increased sulphation improves the anticoagulant activities of heparan sulphate and dermatan sulphate | |
| EP0203509B1 (de) | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Protein C und Aktivatorpräparat zur Durchführung des Verfahrens | |
| CZ78693A3 (en) | Pharmaceutical preparation for treating prolongated coagulation period | |
| Thomsen et al. | Immunohistochemical detection of C5b-9 (m) in myocardium: an aid in distinguishing infarction-induced ischemic heart muscle necrosis from other forms of lethal myocardial injury | |
| FI64466B (fi) | Foerfarande och reagens foer bestaemning av protrombin | |
| Pabinger-Fasching et al. | High levels of plasma protein C in nephrotic syndrome | |
| Schoen et al. | Antithrombin III-dependent anti-prothrombinase activity of heparin and heparin fragments | |
| Cerletti et al. | Interaction between glycosaminoglycans, platelets, and leukocytes | |
| US7220553B2 (en) | Use of Russell's viper venom-induced plasma factor Xa activity to monitor the activity of factor Xa inhibitors | |
| US4882272A (en) | High molecular weight kininogen assay | |
| Sie et al. | Inactivation of heparin cofactor II by polymorphonuclear leukocytes | |
| Fischer et al. | Comparison between the effect of pentosan polysulphate heparin and antithrombin III injections in antithrombin III deficient patients | |
| Wages et al. | Structural characterization and functional effects of a circulating heparan sulfate in a patient with hepatocellular carcinoma | |
| Nigretto et al. | Contributions of negatively charged chemical groups to the surface-dependent activation of human plasma by soluble dextran derivatives | |
| Grau et al. | Plasma and urinary heparin cofactor II levels in patients with nephrotic syndrome | |
| Wagenvoord et al. | Development of a rapid and sensitive chromogenic heparin assay for clinical use | |
| CS226407B2 (en) | Method of determining mb creatinkinase | |
| Baruch et al. | Inhibition of thrombin-catalyzed reactions in blood coagulation and platelet activation by heparin fractions in the absence of antithrombin III | |
| Hill et al. | Acquired heparin‐like anticoagulants: a second case in metastatic breast carcinoma and literature review | |
| Scully | The use of an automated analyzer in the evaluation of antithrombin III and heparin | |
| Nakhleh et al. | Heparin cofactor II assay: elimination of heparin and antithrombin-III effects |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: PHARMACIA AB |