FI63243C - Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin - Google Patents
Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin Download PDFInfo
- Publication number
- FI63243C FI63243C FI820862A FI820862A FI63243C FI 63243 C FI63243 C FI 63243C FI 820862 A FI820862 A FI 820862A FI 820862 A FI820862 A FI 820862A FI 63243 C FI63243 C FI 63243C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- globin
- hemoglobin
- heme
- aqueous solution
- blodets
- Prior art date
Links
- 102000018146 globin Human genes 0.000 title claims description 26
- 108060003196 globin Proteins 0.000 title claims description 26
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims description 11
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims description 11
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 23
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 claims description 18
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 16
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 14
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 150000002506 iron compounds Chemical class 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- KSFOVUSSGSKXFI-GAQDCDSVSA-N CC1=C/2NC(\C=C3/N=C(/C=C4\N\C(=C/C5=N/C(=C\2)/C(C=C)=C5C)C(C=C)=C4C)C(C)=C3CCC(O)=O)=C1CCC(O)=O Chemical compound CC1=C/2NC(\C=C3/N=C(/C=C4\N\C(=C/C5=N/C(=C\2)/C(C=C)=C5C)C(C=C)=C4C)C(C)=C3CCC(O)=O)=C1CCC(O)=O KSFOVUSSGSKXFI-GAQDCDSVSA-N 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002505 iron Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229950003776 protoporphyrin Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
63243
Tapa erottaa veren hemoglobiini heiniksi ja globiiniksi Sätt att separera blodets hemoglobin till hem ooh globin Tämä keksintö kohdistuu tapaan erottaa veren hemoglobiini hemiksi ja globiiniksi suspendoimalla verestä erotetut verisolut happamaan vesiliuokseen, jossa hemoglobiini hydrolysoituu hemiksi ja globiiniksi, saostamalla hemi ja erottamalla sakka globiinin vesiliuoksesta.
Veri sisältää tunnetusti rautaa ja pääosa tästä raudasta esiintyy rautaprotoporfyriininä hemoglobiinissa. Kun plasma erotetaan verestä, jää verisolufraktioon noin 80 % koko veren sisältämistä proteiineista. Verisolufraktio sisältää noin 38 % raakaproteiinia, jonka kuiva-aineesta hemoglobiini muodostaa noin 80 % naudalla ja sialla noin 87 %. Hemoglobiini sisältää 6 % hemiä, joka edelleen sisältää noin 9 % rautaa ja loput 94 % on globiinia. Kiinnostus orgaaniseen hemi-rautaan on suuresti lisääntynyt, koska sen eräissä tutkimuksissa on todettu absorboituvan suolistossa paremmin kuin epäorgaanisten rautayhdisteiden. Lisäksi monilla epäorgaanisilla rautayhdisteillä on havaittu olevan haittavaikutuksia. Verisolufraktion voimakkaan värin, hajun ja maun sekä huonon säilyvyyden johdosta sen käyttö sellaisenaan rautalääk-keenä ei tule kysymykseen.
Laboratoriomittakaavassa on aikaisemmin hemi erotettu globii-nista kromatograafisesti tai uuttamalla, jolloin liuottimina on käytetty metyyli-etyyliketonia, asetonia ja dimetyyliform-amidia.
Liuotinmenetelmien soveltaminen teknillisessä mittakaavassa aiheuttaa huomattavan korkeat liuotin- ja sen regeneroin-tikustannukset.
Lisäksi käytettävät liuottimet ovat hyvin tulenarkoja ja liuotinjäämien poistaminen lopputuotteista on osoittautunut hankalaksi, mikäli lopputuotteita käytetään rehuna, ravintoaineina tai lääkeaineina.
63243
Ruotsalaisesta kuulutusjulkaisusta 7 407 882-5 tunnetaan menetelmä hemin erottamiseksi globiinista, jossa hapanta hemo-globiiniliuosta jäähdytetään ja siihen lisätään suuri määrä etanolia kahdessa vaiheessa globiinin saostamiseksi ja erottamiseksi sentrifugoimalla. Tämänkin menetelmän epäkohtana on se, että joudutaan käyttämään suuria määriä liuotinta, joka lopuksi on poistettava lopputuotteista. Lisäksi työskentely on suoritettava matalissa lämpötiloissa, joka aiheuttaa huomattavat lisäkustannukset.
Ennestään on myös tunnettua erottaa veren globiini heinistä kromatograafisesti karboksimetyyliselluloosan avulla. Tässä menetelmässä hemolysoitu ja happohydrolysoitu verisolufrak-tio johdetaan karboksimetyyliselluloosalla täytetyn ionin-vaihtokolonnin lävitse, jolloin hemi adsorboituu karboksime-tyyliselluloosaan. Tällä menetelmällä saadaan kuitenkin niin pieniä määriä hemiä erotetuksi globiinista käytettyyn karb-oksimetyyliselluloosamäärään nähden, että tämä menetelmä ei sovellu tekniseen tuotantomittakaavaan.
Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on aikaansaada tapa erottaa veren hemoglobiini hemiksi ja globiiniksi, jossa edellä mainitut epäkohdat on eliminoitu ja jossa lopputuotteena saadaan hemiä sisältävä tuote, joka sellaisenaan soveltuu käytettäväksi raaka-aineena rautalääkkeen valmistuksessa, sekä globiiniproteiinia, jota voidaan käyttää ravintoaineen tai rehun aineosana ilman liuottimista aiheutuvia haittoja.
Keksinnön pääasialliset tunnusmerkit ilmenevät oheisesta patenttivaatimuksesta 1.
Keksinnön mukaan plasmasta erotettu verisolufraktio hemoly-soidaan laimentamalla se vedellä ja happohydrolysoidaan säätämällä sen pH-arvo alle 3:n globiinin ja hemin välisten sidosten katkaisemiseksi. Sen jälkeen hemi saostetaan happamasta vesiliuoksesta lisäämällä siihen karboksimetyyliselluloosan (CMC) vesiliuosta ja edullisesti niin, että painosuhde 63243 CMC/globiini on vähintään 1:10, edullisesti kuitenkin korkeintaan 2:10. Hemin sisältämä rauta muodostaa tällöin todennäköisesti koordinaatiosidoksen CMC:n karboksyyliryhmien kanssa, jotka keksinnössä käytetyllä pH-alueella ovat täysin protonoituneet. Saostunut hemi-CMC-kompleksi erotetaan lopuksi globiiniproteiiniliuoksesta esimerkiksi sentrifugoi-malla.
Keksintöä selostetaan alla lähemmin esimerkkien avulla. Esimerkki 1
Plasmasta erotettu hemoglobiinia sisältävä verisolufraktio laimennetaan vesimäärällä, jonka paino on vähintään kaksinkertainen verisolufraktion painoon nähden ja saadun liuoksen pH säädetään niin alhaiseksi lisäämällä 0,1 M HClrää, että kun tähän liuokseen lisätään CMC-vesiliuosta, vesiliuoksen pH jää alle 3:n. Karboksimetyyliselluloosan vesiliuosta lisätään niin paljon, että karboksimetyyliselluloosan ja glo-biiniproteiinin painosuhde vesiliuoksessa on noin 1:10. Muodostunut sakka erotetaan liuoksesta sentrifugoimalla (8000 g, 15 min). Sakka sisältää 1,8 % rautaa ja vaalea liuos enintään 0,07 % rautaa kuiva-aineen painosta laskettuna.
Esimerkki 2
Veriplasmasta erotetut hemoglobiinia sisältävät verisolut lietetään veteen (painosuhde 1:2). Liuoksen pH säädetään 1 M HCl:llä arvoon 1,5 ja happamaan vesiliuokseen lisätään viisinkertainen tilavuus 0,3 %;sta karboksimetyyliselluloosan vesiliuosta, jolloin CMC:n ja globiiniproteiinin painosuhde vesiliuoksessa on 2:10. Seoksen annetaan seistä 15 min ja erotetaan saostunut hemi-CMC-kompleksi globiiniproteiiniliuoksesta sentrifugoimalla 1/2 h (8000 g). Proteiinifraktio sisältää noin 70 % alkuperäisistä globiiniproteiineista ja sen kuiva-aineista alle 0,05 paino-% on rautaa.
Esimerkki 3
Plasmasta erotetut verisolut laimennetaan vedellä (painosuhde 4 63243 1:3). Liuoksen pH säädetään 1 M HCl:llä. l,5:ksi ja lisä" tään 4 x liuoksen tilavuus 0,3 %:sta karboksimetyylisel-luloosan vesiliuosta, jolloin CMC;n ja globiiniproteiinin painosuhde on 1,9:10. Seoksen annetaan seistä 15 min ja erotetaan saostunut hemi-CMC-kompleksi globiiniproteiiniliuok-sesta sentrifugoimalla 1/2 h (8000 g). Proteiinifraktio sisältää noin 70 paino-% alkuperäisistä globiiniproteiineista ja sen kuiva-aineista alle 0,06 paino-% on rautaa.
Esimerkki 4
Plasmasta erotetut verisolut laimennetaan vedellä (painosuhde 1:4), Liuoksen pH säädetään 1 M suolahapon vesiliuoksella arvoon 1,5 ja lisätään kolminkertainen tilavuus 0,35 %:sta CMC-vesiliuosta, jolloin CMC;n ja globiinin painosuhde on vesiliuoksessa 1,7; 10. Seoksen annetaan seistä 15 min ja erotetaan saostunut hemi-CMC-kompleksi proteiiniliuokses-ta sentrifugoimalla 1/2 h (8000 g). Globiiniproteiinifrak-tio sisältää noin 80 % alkuperäisistä proteiineista ja sen kuiva-aineista ainoastaan noin Q,07 paino-% on rautaa.
Claims (3)
1. Tapa erottaa veren hemoglobiini hemiksi ja globiiniksi suspendoimalla verestä erotetut verisolut happamaan vesiliuokseen , saostamalla hemi ja erottamalla sakka globiinin vesi-liuoksesta, tunnettu siitä, että happamaan vesiliuokseen lisätään karboksimetyyliselluloosaa hemi-CMC-komplek-sin saostamiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen tapa, tunnettu siitä, että happamaan vesiliuokseen lisätään niin paljon karboksimetyyliselluloosan vesiliuosta, että painosuhde CMC/globiini on ainakin 1:10, edullisesti kuitenkin korkeintaan 2:10.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen tapa, tunnet-t u siitä, että happaman vesiliuoksen pH pidetään arvossa korkeintaan noin 3 hemin saostuksen aikana.
Priority Applications (12)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI820862A FI63243C (fi) | 1982-03-12 | 1982-03-12 | Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin |
| FI830589A FI65070C (fi) | 1982-03-12 | 1983-02-22 | Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin |
| EP83900930A EP0116043B1 (en) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | A method for dividing blood hemoglobin into heme and globin |
| DE8383900930T DE3366660D1 (en) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | A method for dividing blood hemoglobin into heme and globin |
| AT83900930T ATE22656T1 (de) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | Verfahren zum verteilen des bluthaemoglobins in haeme und globin. |
| HU831930A HU189692B (en) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | Process for separating haemoglobin of blood into haem and globin part |
| PCT/FI1983/000022 WO1983003198A1 (en) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | A method for dividing blood hemoglobin into heme and globin |
| JP58501018A JPS59500470A (ja) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | 血液ヘモグロビンをヘムとグロビンとに分割する方法 |
| AU13725/83A AU555145B2 (en) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | A method of dividing blood hemoglobin into heme and globin |
| US06/552,032 US4518525A (en) | 1982-03-12 | 1983-03-11 | Method for dividing blood hemoglobin into heme and globin |
| DK490583A DK156113C (da) | 1982-03-12 | 1983-10-25 | Fremgangsmaade til deling af haemoglobin i et haem-complex og globin |
| BE0/216208A BE904147Q (fr) | 1982-03-12 | 1986-01-31 | Procede pour diviser l'hemoglobine en heme et globine. |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI820862A FI63243C (fi) | 1982-03-12 | 1982-03-12 | Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin |
| FI820862 | 1982-03-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI63243B FI63243B (fi) | 1983-01-31 |
| FI63243C true FI63243C (fi) | 1983-05-10 |
Family
ID=8515197
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI820862A FI63243C (fi) | 1982-03-12 | 1982-03-12 | Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FI (1) | FI63243C (fi) |
-
1982
- 1982-03-12 FI FI820862A patent/FI63243C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI63243B (fi) | 1983-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2937359B1 (en) | Chromatographic method for isolating and purifying high-purity recombined human serum albumin | |
| US3876623A (en) | Process for purifying insulin | |
| FI65070B (fi) | Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin | |
| JPH06502848A (ja) | イミドエステル架橋ヘモグロビン組成物 | |
| CN118184734A (zh) | 白乌鱼多肽、制备方法及应用 | |
| CN107619411B (zh) | 一种血红素提取方法 | |
| Barteling | A simple method for the preparation of agarose | |
| EP0056025A1 (en) | HEMEN CONCENTRATE AND PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF. | |
| FI63243C (fi) | Saett att separera blodets hemoglobin till hem och globin | |
| Yoshida et al. | Isolation of nonhistone chromosomal protein from calf thymus | |
| Asakura | [47] Hemoglobin porphyrin modification | |
| Masri et al. | Studies on abnormal hemoglobins. XII. Terminal and free amino groups of various types of human hemoglobin | |
| Eriksson et al. | The occurrence of acetaldehyde binding in rat blood but not in human blood | |
| EP0134729B1 (fr) | Procédé de préparation de globine à partir d'hémoglobine et globine obtenue par ce procédé | |
| JPS6117600A (ja) | テトラピロ−ル化合物により着色された物質の脱色法 | |
| FI60104B (fi) | Saett att ur en blandning erhaollen vid spaltning av hemoglobinet i de roeda blodkropparna separera s k jaernkomponent fraon proteinet | |
| Sakami et al. | Purification of folic acid | |
| FR2473886A1 (fr) | Perfectionnement aux procedes de concentration et de purification du facteur anti-hemophilique (facteur viii) et preparations de facteur viii concentre et purifie obtenues | |
| CN100363381C (zh) | 从心肌中提取纯化高铁肌红蛋白的方法 | |
| CN103613648A (zh) | 一种小球藻叶黄素蛋白复合体的提取与纯化方法 | |
| CN103276039A (zh) | 抗氧化肽及其制备方法 | |
| CN113845525A (zh) | 等电点沉淀血红素提取方法 | |
| JPS6231915B2 (fi) | ||
| RU2096464C1 (ru) | Способ получения цитохрома с | |
| Satterlee | An electrophoretic and chromatographic study concerning the microheterogeneity of bovine muscle myoglobin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: VALTION TEKNILLINEN TUTKIMUSKESKUS |