FI60568B - Foerfarande foer framstaellning av ett konjugat foer blockering av allergiska reaktioner - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av ett konjugat foer blockering av allergiska reaktioner Download PDFInfo
- Publication number
- FI60568B FI60568B FI800292A FI800292A FI60568B FI 60568 B FI60568 B FI 60568B FI 800292 A FI800292 A FI 800292A FI 800292 A FI800292 A FI 800292A FI 60568 B FI60568 B FI 60568B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- glutathione
- quercitin
- peptide
- protein
- conjugate
- Prior art date
Links
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 31
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 26
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 14
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims description 10
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N silver oxide Chemical compound [O-2].[Ag+].[Ag+] NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 229910001923 silver oxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 10
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 10
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 10
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 6
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 4
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 4
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 244000186140 Asperula odorata Species 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 235000008526 Galium odoratum Nutrition 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N lysine Chemical compound NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- XQDQRCRASHAZBA-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-thiocyanatobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(SC#N)C([N+]([O-])=O)=C1 XQDQRCRASHAZBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- ZZIFPJZQHRJERU-WDSKDSINSA-N Glu-Cys-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O ZZIFPJZQHRJERU-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229940046528 grass pollen Drugs 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 101150000548 laf1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
R5R M (H^UULUTUSJULKAISU 605 6 8
l J 1 ' UTLÄGGNINGSSKRIFT
C .._ Patentti myönnetty 10 02 1932 *1^^ ” Patent aeddelat ^ (51) Kv.lk.3/lnt.CI.3 C 07 G 7/001 A 61 K 31/35, 37/02 SUOMI-FINLAND (21) Pttenttlhtkemu* — PatunttniBknlnf 800292 (22) H«keml»p*M — Ameknlncsd·! 31.01.80
^ ' (23) Alkupllv»—Glltl|het*d»| 06.10.TT
(41) Tullut |ulklMksl — Bllvit offtmllg 31.01.8θ
Patentti* ja rekisterihallitus .... M... .. , . . ,, ,. .
_ _ . . (44) Nlhtivlkslpanon ja kuuUulkalsun pvm. —
Patent· och registarstyrelsen ' Ansdlun uttagd oeh utUkrlft.n publtcarad 30.10.8l (32)(33)(31) Pyydetty atuolkau*—Bagird prioritat 12.10. T6
USA(US) T31U1U
(Tl) Research Corporation, 1+05 Lexington Avenue, New York, N.Y., USA(US) (T2) Arthur Malley, Portland,Oregon, USA(US) (Tl*) Ruska & Co (5l+) Menetelmä konjugaatin valmistamiseksi allergiareaktioiden estämistä varten - Förfarande för framställning av ett konjugat för blockering av allergiska reaktioner (62) Jakamalla erotettu hakemuksesta TT29**5 (patentti 58501) -Avdelad fran ansökan TT29**5 (patent 58501) Tämä keksintö koskee menetelmää konjugaatin valmistamiseksi allergia-reaktioiden estämistä varten, jolla konjugaatilla on seuraava rakenne x 11· · U^A^^OH giutatiora tai sama rakenne kovalenttisesti sidottuna proteiiniin tai peptidiin peptidisidoksen avulla glutationiosan välityksellä.
Menetelmät allergioiden ja allergisten reaktioiden käsittelemiseksi ovat tähän saakka käsittäneet sen, että henkilölle annetaan antigeeniä, joka aloittaa vasta-aineiden muodostuksen, jotka kilpailevat niiden vasta-aineiden kanssa, joiden muodostumisen herkiste aiheuttaa, jolloin hillitään tai vähennetään allergiareaktiota.
Tähän saakka tavallinen tapa ailergiapotilaiden käsittelyssä käsittää allergiaa aiheuttavan aineen raa'an uutteen valmistuksen vesipitoisessa puskuriliuoksessa. Sitten potilaita käsitellään raa'an uutteen ensin pienillä ja sen jälkeen kasvavilla annoksilla pitkänä aikana. Tavallisesti kolmen tai useamman vuoden käsittely on välttämätön, ennen kuin 2 60568 todetaan huomattavaa pysyvää paranemista. Käsittelyn edistyessä potilaalle annettavan raa'an uutteen määrää lisätään vähitellen. Lisätyn annoksen määrä jaannostelun tiheys riippuu potilaan yksi] eilisestä herkkyydestä ja reaktioasteesta aikaisempiin annoksiin.
Koko raa'an herkisteuutteen ruiskutus pitkien aikajaksojen aikana saa aikaan estävien tai kilpailevien vasta-aineiden muodostumisen. On esitetty teorioita,että estävät vasta-aineet kilpailevat allergiavasta-aineen kanssa antigeenistä ja antavat suojan allergiapotilaalle.
Kalliiseen ja aikaa vievään menetelmään herkkyyden poistamiseksi potilaalta liittyy monia selviä epäkohtia. Hyvin usein raa'an uutteen antamisesta on seurauksena vakava allergiareaktio, jos annokset eivät ole olleet huolellisesti valvottuja ja annosteltuja. Edelleen kilpailevien vasta-aineiden muodostuminen allergiapotilaassa aiheuttaa hyvin usein sivuvaikutuksia, jotka voivat olla potilaalle vahingollisempia kuin itse allergiareaktio.
Erittäin merkityksellistä on se, että tähän saakka käytetty aikaisemmin tunnettu menetelmä herkkyyden poistamiseksi potilaalta ei ole ollut kokonaisuudessaan menestyksellinen. Monissa tapauksissa aikaa vievästä herkkyyden poistomenetelmästä ei ole tuloksena riittävää suojaa potilaalle, joka vielä jatkuvasti kärsii allergiasta joutuessaan antigeenin vaikutuksen alaiseksi.
* Tämän keksinnön tarkoituksena on aikaansaada tuote, joka soveltuu annettavaksi allergiapotilaalle ja joka neutraloi olemassa olevat vasta-aineet sekä täydellisesti estää sellaisten vasta-aineiden muodostuksen,jotka joko kilpailevat allergeenisen antigeenin kanssa tai ovat sille ominaisia .
Valmistettaessa tällaisia tuotteita, jotka estävät allergisen reaktion, on aikaansaatu menetelmä allergisten henkilöiden käsittelemiseksi allergiareaktioiden estämistä varten. Kysymyksessä oleva tuote voidaan valmistaa ruiskutettavaksi valmisteeksi sen antamiseksi allergiapotilaalle allergiareaktioiden estämistä varten.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on pääasiallisesti tunnusomaista se, että kversitiiniä, jolla on kaava 3
Hcy^n 6 0 5 6 8 saatetaan reagoimaan glutationin kanssa hapettavan aineen, esimerkiksi hopeaoksidin läsnäollessa, minkä jälkeen muodostuneelle aineelle haluttaessa suoritetaan glutationiosan karhoksyyliryhmien aktivointi esimerkiksi Woodwardin reagenssilla tai karbodi-imidillä, ja sen jälkeen konjugoidaan se glutamiinihappo- tai glysiiniosan välityksellä proteiinilla tai peptidillä, kuten humaanilla seerumialbumiinilla tai lysiinin ja glutamiinihapon d-aminohappokopolymeerillä, jolloin kversitiini-glutationi-konjugaatin ja peptidin tai proteiinin moolisuhde on sopivammin 2-30 moolia konjugaattia peptidi- tai proteiinimoolia kohti.
Termillä "konjugaatti" tarkoitetaan konventionaalista kemiallista yhdistettä, missä kyseiset reagenssit ovat kemiallisesti sitoutuneet toisiinsa - vastakohtana kompleksille, missä reagenssit ovat sitoutuneet vain löysästi toisiinsa vetysidoksien ym. avulla.
Niinpä näitä konjugaatteja voidaan antaa allergiapotilaalle allergiareaktion täydelliseksi estämiseksi tarvitsematta pitkää ja aikaavievää sekä kallista, edellä esitettyä herkkyyden poistomenetelmää. Koska konjugaat-tien antaminen estää täydellisesti allergiavasta-aineiden muodostumisen, estetään itse allergiareaktio samoin kuin mitkä tahansa sivuvaikutukset, jotka aiheutuvat niiden kilpailevien vasta-aineiden muodostumisesta, j oita muodostuu tavallisen herkkyyden poistomenetelmän mukaan.
Tuloksia on saatu konjugaatilla, jonka rakenne on
.OH
ΥΎ°Ί—<J-0H
s"glutationi tai konjugaatilla, joka sisältää ainakin yhtä kversitiini-glutationi-konjugaattia kovalenttisesti sidottuna proteiiniin tai peptidiin peptidisidoksen avulla glutationiosan välityksellä. Näiden konjugaat-tien antaminen aikaansaa allergiavasta-aineiden muodostumisen täydellisen eston, olkoon kysymyksessä antigeeni tai kilpailevat vasta-aineet, ja allergiareaktion eston.
Edellä esitetyt kversitiini-glutationi- ja kversitiini-glutationi-proteiini-konjugaatit ovat siis tehokkaita allergiareaktion estonincita.
Kversit i ini-glutat ioni-konjugaatti muodostetaan hapetus-addit ioreak- 4 60568 tiolla käyttäen AgOrta tai muuta sopivaa hapetinta:
/_/0H
χχνϋ- - OH o + glutamyyli-kysteinyyli-glysiini κ (glutationi)
OH
I \l 0H ] OH O glutamyyli-kysteiini-glysiini
Sen jälkeen saatu konjugaatti voidaan konjugoida peptidin tai proteiinin kanssa aktivoimalla glutationiosan karboksyylirymät esimerkiksi Woodwardin reagenssilla, karbodi-imideillä tai sentapaisilla aineilla, mitä seuraa konjugaatio proteiini- tai peptidimolekyylin kanssa. Kversitiini-glutationi sidotaan proteiiniin peptidisidoksen avulla glutationiosan joko glutamiinihappo- tai glysiiniosan välityksellä .
Peptidinä tai proteiinina, joka on konjugoitu kversitiini-glutationi-konjugaattLin, voi olla mikä tahansa peptidi tai proteiini, joka soveltuu annettavaksi allergi.apot ilaaLLe. Edullisia proteiineja ja pent Idejä /•/st Ihmis n seerumalbuml ini tai lysiiriln ja gLutami inihapon d-amir.o- 5 60568 happokopolymeeri (d-GL).
On selvää, että kversitilni-glutationimole- kyyli voidaan liittää proteiini- tai peptidimolekyylin eri kohtiin. Tavallisesti on edullista sitoa noin 2,0 - 30 moolia, sopivimmin 5-20 moolia kversitiini-glutationi-yh- distettä 1 mooliin proteiinia tai peptidiä. Moolisuhdetta voidaan vaihdella vaihtelemalla reagoivien aineiden moolisuhdetta valmistusmenetelmässä. ·
Edellä selostetut antigeeni-proteiinikompleksit voidaan sisällyttää niihin tahansa sopivaan väliaineeseen, kuten puskuroituun suolaliuokseen allergiapotilaalle antamista varten.
Tavallisia lisäaineita, apuaineita ja muita aineita voidaan lisätä valmisteeseen ruiskutusta varten. Kuitenkin on ymmärrettävää, että ne eivät ole välttämättömiä.
Tavallisesti valmisteet ruiskutetaan ihonalaisesti, lihaksensisäisesti tai laskimonsisäisesti.
Tavallisesti ruiskutettavat annokset, jotka sisältävät tuotetta noin 0,01 - 0,25 mg, sopivimmin 0,025 - 0,1 mg/kg kehon paino, ovat riittäviä aikaansaamaan allergiareaktion estokyvyn hyväksyttävän tason.
On ymmärrettävää, että annoksen suuruuden määräävät eri tekijät, kuten kompleksin kestoaika verenkierrossa, hoidossa olevan potilaan vasta-ainetiitteri, potilaan vastustuskyvyn tila ja IgE-vasteen hillinnän kestoaika.
Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut tuotteet ovat käyttökelpoisia käsiteltäessä ruoholle herkkiä potilaita allergiaoireiden vähentämiseksi. Ne ehkäisevät allergiavasta-aineiden muodostumisen ruo hon siitepölyantigeeneja vastaan ja neutraloivat lisäksi potilaan elimistössä olemassa olevat vasta-aineet. On ymmärrettävää, että keksintö on käyttökelpoinen estettäessä ei ainoastaan timotein aiheuttamia allergiareaktioita, vaan myöskin pyörtänölu3teen ja muiden ruohojen siitepölyjen, jotka ristireagolvat, aiheuttamia allergiareaktioita.
6 60568
Seuraavat esimerkit 1 ja 2 havainnollistavat keksinnön mukaisia valmistusmenetelmiä.
Esimerkki 1
Kversitiini-glutationin valmistus 1,5 g AgCl sekoitettiin 10 ml:n kanssa 4N NaOH 20 minuuttia. AgO-sakka suodatettiin Buchnerin suppilossa.
0,2 g glutationia liuotettiin 4 ml:an 0,25N NaOH ja sijoitettiin jää-hauteeseen. 0,2 g kversitiiniä liuotettiin 8 ml:an 0,25N NaOH. 1,2 g juuri valmistettua AgO lisättiin viimeksi mainittuun ja seosta sekoitettiin 15 - 20 minuuttia jäähauteessa.
Sitten lisättiin glutationiliuos ja seosta sekoitettiin yksi tunti jäähauteessa. Ylimäärä AgO poistettiin suodattamalla. Saadun liuoksen pH säädettiin arvoon 1 - 2,5 HClrllä ja liuosta sekoitettiin 30 minuuttia .
Liuos suodatettiin vapaan kversitiinin poistamiseksi ja pH säädettiin arvoon 7 NaOH:11a. Vapaa glutationi määrättiin DNTB-menetelmällä (Anal. Biochem. 48, 1557, 1972).
Esimerkki 2
Kversitiini-glutationi-proteiinikonjugaatin valmistus 40 mg kversitiini-glutationia lisättiin 100 mg:an Woodwardin reagens-sia ja sekoitettiin 10 minuuttia huoneen lämpötilassa. pH säädettiin arvoon 6,2 0,3 M kokodylaattipuskurilla (ph 6,8).
Sitten lisättiin 100 mg ihmisen seerumalbumiinia (HSA) samalla pitäen pH arvon 6,2 yläpuolella. Seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 10 - 15 minuuttia ja sen jälkeen yön yli 4°C:ssa. Liuos väkevöitiin alipaineessa. Dialyysin avulla poistettiin vapaa kversitiini-glutationi sen konjugaatista proteiinin kanssa.
7 60568
Seuraavat kokeet havainnollistavat keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen tuotteiden esto-ominaisuuksia allergiareaktioita vastaan .
Biologisia kokeita Koe 1
Histamiinin vapautuminen apinan keuhkokudoksesta, joka oli passiivisesti herkistetty allergiapotilaiden seerumilla, määrättiin menetelmän mukaan, jonka Malley et ai on esittänyt julkaisussa J. Immunol, ion, 915 (1968). Verihera, jota käytettiin herkistämään apinan keuhkokudosta, oli saatu 20:n timoteille herkän potilaan ryhmästä, joiden potilaiden keskimääräinen allerginen vasta-ainetiitteri oli 1:750. Sitten .apinan keuhkokudosta inkuboitiin kaksi tuntia 57°C:ssa seerumin kanssa. Ennen herkisteellä vaikuttamista kudosta inkuboitiin 10 minuuttia 37°C:ssa estoaineen kanssa. Antigeeninen vaikutus aikaansaatiin inku-boimalla raa'an siitepölyuutteen (WST) optimiväkevyydellä 15 minuuttia 37°C:ssa.
Tulokset on esitetty taulukossa 1, jossa: WST tarkoittaa koko timoteisiitepölyn vesiuutetta, joka on dialysoitu pienen molekyylipainon omaavien fragmenttien poistamiseksi; HSA tarkoittaa ihmisen seerumalbumiinia.
Kuten taulukossa 1 esitetyistä tuloksista käy selville, keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut konjugaatit ovat tehokkaasti vaikuttavia estoaineita allergiareaktioita vastaan.
8 60568 0 4-1 01 00 00 »O O -3 oo -M I 00 O ir\ σ\ r- ir\ rt
• > -H
E rt c :o -p φ
p p o P 3 bQ
•H ϋ ·Η - - CV Ό t'- OO
P P P bQ 1^- O 00 CV O Γ- P
•rt rt c 3» * — ·· — ·» «· «> > > rt'-' cv o o i-i o o ή c
P
c rt rt b0 P · ^ H p x ω m c sd i o o o o o oo >* rt >—' -sf -rt· -3 -3 -a· -a· -rt· c
P
P
rt rt bo bo bO bo
iia !>0 E E f*0 EE
=> E B
Ό * 1Λ N O O
C ϋ in i'· rt vo oo -3 O Md — — -· — » »
M > I H O O Ή OO
H t
•H
O P
a c a -h
3 O
P bfl 3 3 0 rt ‘TO i—I r-l £-* C Δ
0 3 P O
« «η i cv
*H M
£ . rt rt C
C JO Ό t-3 P P
•H E · fl n οή mo <no U <n
M® 3p 3PCCÖC
3P PP P P rt ä rt o ® op opp*0b0 cc ftO p.x)POrt o® rt Ό rtTlPO® »E »sirt κ rt <n :s e . p *!h *
CP CP
PC PC
® PO PO
p p p p p oi p p p p p en rt m rt E Cp Cp p f-« rt 3 rt 3 ·< rt en > H > p en > 3: bo « bo * 9
Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen tuotteiden passiivista siirtoihoreaktiivisuutta verrattiin niihin antigeeneihin, jotka ovat läsnä timotein siitepölyssä.
6 05 6 8
Koe 2 0,1 ml veriheraa, joka sisältää vasta-aineita (20:n timoteille herkän potilaan ryhmän herasta keskimääräisen P-K tiitterin ollessa 750) ruiskutettiin ihonsisäisesti ei-allergisen vapaaehtoisen ihoon.
48 tuntia myöhemmin jokaista kohtaa, joka aikaisemmin oli herkistetty ko. veriheralla, käsiteltiin erilaisilla konjugaateilla.
Annetussa veriherassa olevat allergiavasta-aineet reagoivat aller-geenisten antigeeniaineiden kanssa paikallisena allergiareaktiona.
Sllei antigeeniaine aloittanut allergiareaktioita, mitään paikallista reaktiota ei todettu.
Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetuilla tuotteilla sekä timotein siitepölyssä olevalla antigeeniaineella suoritettujen eri kokeiden tulokset on esitetty taulukossa 2, jossa dGL tarkoittaa gluta-miinihapon ja lysiinin d-aminohappokopolymeeriä, jonka molekyylipaino on noin 40 000.
10 ¢0568
0 •H
P
.¾
Cd Φ ...
U + b0 bO hO
Φ Φ Φ c c c P-c λ; :cd > M ω 60 60
•H 3- E 3. E
c Φ H tn o vri ω - o « 60 )—| (—( j—|
•H
P
C
< Φ Ό x: s to
•H
P
c
•H
O
M
3 i—Ϊ i—li—I
C I rH CM O
O i—I CM
X
*3 Ή ·Η E w m 1-1 o co w
<D -H C C
-P P φ φ a) -h ω ω C Ό cd cd Φ Ό Φ Φ E cd £r o
•H
: Cd C C
C ·Γ-3 ·Η ·Η •H Ό Ό P CO ^ Jh 60 3 cd cd 3 p S 3 •'"s Φ T3 Ό
C O. O O
O I cd O O
k s s C-3 <
O CO
Ό K
•H ·Η I Ή I
°j C ·Η C ·Η C ·Η
·Η C ·Η C ·Η C
o <U ·Η O Ή O *H O
» -P p -H P ·Η P ·Η
-¾ W -H P -H P -H P
p *H cocdcocdeocd
h E OP.ShPOP
p H E-· Φ3Φ3Φ3 cd cd co > f—f i—i h E-< > 2: « bO !«! M MM) 4 11 60568
Taulukossa 2 esitetyt tulokset osoittavat, että keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut tuotteet eivät aloita allergiareaktioita.
Seuraava koe havainnollistaa keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen tuotteiden kykyä ehkäistä allergiavasta-aineiden muodostumista.
Koe 3
Alustavat tutkimukset osoittivat, että LAF^ hiiret kehittivät hyvän IgE:n(allergiavasta-aineet) timotein siitepölyä vastaan.
Eläimiin ruiskutettiin vatsakalvon sisäisesti 10 yg WST:ä alunassa ja kolmen viikon kuluttua ne saivat toisen vatsakalvon sisäisen ruiskeen 10 pg WST:ä alunassa. IgE tiitterit kohosivat alkuimmunoinnin jälkeen arvoihin välillä 1/100 ja 1/200 mitattuna PCA:na. IgE tiitterit antigeenin toisen ruiskeen jälkeen kohosivat arvoihin välillä 1/600 ja 1/800 mitattuna PCA:na.
Passiivinen ihon anafylaksia (PCA) mitattiin ruiskuttamalla 0,025 ml laimennettua seerumia hiiren tai rotan kylkeen. 72 tuntia (hiiri) tai 3 tuntia (rotta) myöhemmin ruiskutettiin eläimiin laskimonsisäisesti WST:tä Evansin sinisessä väriaineessa.
Kiertävän antigeenin ja kudoksen kiinnittyneen IgE:n välinen reaktio aikaansai paikallisen allergiareaktion ja tämä kohta tuli näkyväksi sinisen värin tihkumisena reagoivaan alueeseen. IgE tiitteri määrättiin alimpana laimennuksena, joka antaa positiivisen PCA-reaktion.
Se keksinnön mukainen tuote, joka valittiin koetarkoituksia varten, oli:
Kversitiini-glutationi-dGL (Q-G-dGL): valmistettu konjugoimalla kversitiini-glutationi dGL:ään keskimäärin 12 - 20 Q-G ryhmää/mooli dGL.
Q-G-dGL annettiin vatsakalvon sisäisesti 3 päivää ennen WST:n toista immunisointia.
12 60568 päivä 0 l8 21 28 ruiske · WST Q-G-dGL WST tihkuminen alunassa alunassa
Tulokset: Kontrollieläimillä, jotka saivat suolaliuosta 18 päivänä, on seuraava IgE tiitteri-600; keskimääräinen reaktio l8 eläimessä.
Q-G-dGL:llä käsitellyt eläimet: PCA tiitteri Eläinryhmä
Pieni annos (0,24 mg kversitiiniä) 600 6
Keskikokoinen annos (1,8 mg kversitiiniä) 300 6
Suuri annos (3S6 mg kversitiiniä) 100 6 Nämä arvot osoittavat, että konjugaatti alentaa huomattavasti IgE-tasoa, kun antaminen tapahtuu 3 päivää ennen toista antigeeni-ruisketta, mikä osoittaa vasta-aineen neutralointia ja häviämistä. Samanlaiset kokeet ovat osoittaneet, että antaminen vieläpä 7 päivää ennen toista antigeeniruisketta antaa pääasiallisesti samat tulokset.
Claims (1)
- 60568 13 Patent t i vaat imus Menetelmä konjugaatin valmistamiseksi allergiareaktioiden estämistä varten, jolla konjugaatilla on seuraava rakenne ΥΎ1—Q~oh -glutationi tai sama rakenne kovalenttisesti sidottuna proteiiniin tai peptidiin peptidisidoksen avulla glutationiosan välityksellä, tunnettu siitä, että kversitiini, jolla on kaava saatetaan reagoimaan glutationin kanssa hapettavan aineen, esimerkiksi hopeaoksidin läsnäollessa, minkä, jälkeen muodostuneelle aineelle haluttaessa suoritetaan glutationiosan karBofcsyyliryhmien aktivointi esimerkiksi Woodwardin reagenssilla tai karbodi-imidillä, ja sen jälkeen konjugoidaan se glutamiinihappo- tai glysiiniosan välityksellä proteiinilla tai peptidillä, kuten humaanilla seerumialbumiinilla tai lysiinin ja glutamiinihapon d-aminohappokopolymeerillä, jolloin kversitiini-glutationi-konjugaatin ja peptidin tai proteiinin moolisuhde on sopivimmin 2 - 3Q moolia konjugaattia peptidi- tai proteiinimoolia kohti.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73141476 | 1976-10-12 | ||
| US05/731,414 US4140679A (en) | 1976-10-12 | 1976-10-12 | Antigen-protein complex for blocking allergic reactions |
| FI772945A FI58501C (fi) | 1976-10-12 | 1977-10-06 | Foerfarande foer framstaellning av ett antigenkomplex foer blockering av allergiska reaktioner |
| FI772945 | 1977-10-06 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI800292A7 FI800292A7 (fi) | 1980-01-31 |
| FI60568B true FI60568B (fi) | 1981-10-30 |
| FI60568C FI60568C (fi) | 1982-02-10 |
Family
ID=26156894
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI800292A FI60568C (fi) | 1976-10-12 | 1980-01-31 | Foerfarande foer framstaellning av ett konjugat foer blockering av allergiska reaktioner |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FI (1) | FI60568C (fi) |
-
1980
- 1980-01-31 FI FI800292A patent/FI60568C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI800292A7 (fi) | 1980-01-31 |
| FI60568C (fi) | 1982-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI58501B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett antigenkomplex foer blockering av allergiska reaktioner | |
| Tomasi et al. | Structure and function of immunoglobulin A | |
| US8318171B2 (en) | Neurotoxic oligomers | |
| EP0073371B1 (en) | Intravenously injectable immune serum globulin and method of preparing same | |
| EP0180564B1 (en) | Immunogenic complex, a method for producing the same, and the use thereof as an immune stimulant, vaccines and reagents | |
| US4415553A (en) | Compositions, processes for their preparation and method for treatment of neoplasms | |
| JP2005097320A (ja) | 増強循環エフェクター組成物および方法 | |
| CA2067205C (en) | Vaccine and immune serum against drugs of abuse | |
| JPH03506030A (ja) | インスリン様成長因子（ｉｇｆ）結合蛋白複合体の酸不安定サブユニット（ａｌｓ） | |
| AU2001268828A1 (en) | Neurotoxic oligomers | |
| Daha et al. | Further evidence for the antibody nature of C3 nephritic factor (C3NeF) | |
| Patterson et al. | Comparison of immune reactivity to polyvalent monomeric and polymeric ragweed antigens | |
| JP2002528516A (ja) | 固相コンジュゲートワクチンの調製方法 | |
| FI60568B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett konjugat foer blockering av allergiska reaktioner | |
| Latif et al. | The effect of surface-coupled antigen of liposomes in immunopotentiation | |
| Colino et al. | Autologous albumin enhances the humoral immune response to capsular polysaccharide covalently coattached to bacteria‐sized latex beads | |
| Roy et al. | [24] Induction of rabbit immunoglobulin G antibodies against synthetic sialylated neoglycoproteins | |
| JPS6118699B2 (fi) | ||
| WO2001032207A1 (en) | Methods for conferring active/passive immunotherapy | |
| TWI409080B (zh) | 供腫瘤治療用之均質性疫苗組成物及其製備方法 | |
| Fairchild et al. | Induction of mouse homocytotropic antibodies to timothy pollen antigens | |
| CN108633278B (zh) | 淀粉样蛋白缀合物及其用途和方法 | |
| Maurer et al. | Immunological studies with plasma expanders derived from human plasma | |
| HayGlass et al. | Antigen-and IgE class-specific suppression mediated by T suppressor cells of mice treated with glutaraldehyde-polymerized ovalbumin | |
| Hoffman et al. | Model Systems for the Study of Drug Hypersensitivity: II. Studies on the Acetylation Mechanism for Aspirin Intolerance |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: RESEARCH CORPORATION |